การยับยั้งการหลั่ง OCT2 ของไตและการหลั่ง MATE1 ในหลอดทดลองโดยยาต้านการอาเจียน

Blessy George¹, เซี่ยเหวิน¹, เอ็ดการ์ เอ. ไจส์², Melanie S. Joy^3,4,5,†และลอเรน เอ็ม. อเล็กซูเนส

เชิงนามธรรม:ตัวขนส่งไอออนบวกอินทรีย์ 2 (ต.ค.2) และ multidrug and toxin extrusion protein 1(MATE1) ไกล่เกลี่ยการหลั่งของยาในไต การศึกษาล่าสุดชี้ให้เห็นว่า ondansetron ซึ่งเป็น 5-ยา HT3antagonist ที่ใช้ป้องกันอาการคลื่นไส้และอาเจียน สามารถยับยั้งต.ค.2- และ MATE1-เป็นสื่อกลางในการขนส่ง วัตถุประสงค์ของการศึกษาครั้งนี้เพื่อทดสอบความสามารถของ 5-ยา HT3 antagonist จำนวน 5 ชนิดในการยับยั้งต.ค.2และรถขนส่ง MATE1 การขนส่งของซับสเตรตโพรบ OCT2/MATE1 ASP plus ได้รับการประเมินโดยใช้สองแบบจำลอง: (1) HEK293ไตเซลล์แสดงออกเกินมนุษย์ต.ค.2หรือ MATE1 และ (2) เซลล์ MDCK ที่ทรานส์เฟกด้วยมนุษย์ต.ค.2and MATE1. In HEK293 cells, the inhibition ofASP+ uptake by OCT2 listed in order of potency was palonosetron (IC50: 2.6 µM) > ondansetron >granisetron > tropisetron > dolasetron (IC50: 85.4 µM) and the inhibition of ASP+ uptake by MATE1in order of potency was ondansetron (IC50: 0.1 µM) > palonosetron = tropisetron > granisetron >โดลาเซตรอน (IC50: 27.4 ไมโครโมลาร์) Ondansetron (0.5–20 µM) ยับยั้งการขนส่งข้ามเซลล์จากฐานถึงปลายของ ASP บวกได้ถึง 64 เปอร์เซ็นต์ ความเข้มข้นที่สูงขึ้น (10 และ 20 µM) ของพาโลโนเซตรอน, ทรอปิเซตรอน และโดลาเซตรอน ลดการขนส่งข้ามเซลล์ของ ASP plus ในทำนองเดียวกัน ในเซลล์ OCT ที่ทรานส์เฟกสองครั้ง2-MATE1 MDCK เซลล์ ondansetron ที่ความเข้มข้น 0.5 และ 2.5 µM ทำให้เกิดการสะสมของ ASP plus ภายในเซลล์อย่างมีนัยสำคัญ เมื่อนำมารวมกัน ข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า 5-ยาที่เป็นปฏิปักษ์ HT3 อาจยับยั้งการหลั่งของยาที่เป็นประจุบวกของไตโดยการรบกวนการทำงานของ OCT2 และ/หรือ MATE1

คำสำคัญ:ต.ค.2; MATE1; ประจุบวก; 5-ศัตรู HT3;ไต; การหลั่ง; ขนส่ง

ติดต่อ:joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche tubulosa ป้องกันไตโรคคลิกที่นี่เพื่อรับตัวอย่าง

1. บทนำ

การหลั่งของไตทำได้โดยการดูดซึมและการไหลออกของยาที่ประสานกันผ่านเยื่อบุผิวท่อ สำหรับยาและสารพิษที่เป็นไอออนบวกอินทรีย์ การขนส่ง transepithelial ของพวกมันไปยังตัวกรองนั้นเกิดขึ้นได้ก่อนโดยตัวขนส่งไอออนบวกอินทรีย์ 2 (OCT2) บนพื้นผิว basolateral และต่อมาโดยการขนส่ง multidrug และ toxin extrusion 1 (MATE1) บนขอบแปรง เมมเบรน ก่อนที่จะค้นพบยีน OCT2/SLC22A1 และ MATE1/SLC47A1 เป็นที่เข้าใจกันดีว่าการคัดหลั่งของไอออนบวกอินทรีย์สามารถยับยั้งได้ทางเภสัชวิทยา [1] โดยใช้วิธีการทดลองที่หลากหลายในพรีคลินิกชนิดต่างๆ แสดงให้เห็นว่าไอออนบวกอินทรีย์ได้รับการขนส่งและการหลั่งของไต [2–4] นับตั้งแต่การสังเกตการณ์ในช่วงแรกๆ นี้ การวิจัยได้ก้าวหน้าขึ้นเพื่อทำความเข้าใจไม่เพียงแต่กลไกระดับโมเลกุลของการหลั่งไอออนบวกอินทรีย์ แต่ยังรวมถึงศักยภาพสำหรับปฏิกิริยาระหว่างยาที่เกี่ยวข้องทางคลินิกภายหลังการหยุดชะงักของ OCT2 และ MATE1 (ทบทวนใน [5])

คู่อริของเซโรโทนิน 5-ตัวรับ HT3 ได้กลายเป็นยาที่สำคัญสำหรับการจัดการอาการคลื่นไส้และอาเจียน Serotonin ถูกปลดปล่อยโดยเซลล์ enterochromaffin ของลำไส้เล็ก 5-สารคู่อริ HT3 ยับยั้งช่องไอออนที่มีรั้วรอบขอบชิดไอโอโนทรอปิกบนเส้นประสาทส่วนปลายจากเวกัสและป้องกันการสะท้อนของอาการอาเจียน [6] Ondansetron เป็น 5- HT3 antagonist ตัวแรกที่ได้รับการอนุมัติให้ป้องกันอาการคลื่นไส้อาเจียนที่เกิดจากเคมีบำบัด [7,8] ตั้งแต่นั้นมา ยาเพิ่มเติมในกลุ่มนี้ (รวมถึง tropisetron, granisetron, dolasetron และ palonosetron) ได้รับการพัฒนา [9] แม้ว่าตัวบ่งชี้การรักษาเบื้องต้นของ 5-คู่อริ HT3 คือการป้องกันเคมีบำบัดและการอาเจียนที่เกิดจากการฉายรังสี พวกเขายังได้รับการอนุมัติสำหรับการจัดการอาการคลื่นไส้และอาเจียนหลังผ่าตัด และใช้นอกฉลากเพื่อรักษาอาการแพ้ท้อง, hyperemesis gravidarum , อาการเพ้อหลังผ่าตัด และอาการคัน [10–14]

ด้วยลักษณะประจุบวกของคู่อริ 5-HT3 (รูปที่ 1) พวกมันจึงกลายเป็นสารตั้งต้นและสารยับยั้งของตัวขนส่ง OCT และ MATE การศึกษาในหลอดทดลองพบว่า ondansetron และ tropisetron เป็นสารตั้งต้นและตัวยับยั้งของ OCT1 และ OCT2 [15-70] นอกจากนี้ บุคคลที่มีตัวแปรที่สูญเสียการทำงานในยีน OCT1/SLC22A1 ได้แสดงให้เห็นว่ามีการเปลี่ยนแปลงทางเภสัชจลนศาสตร์ของทรอปิเซตรอนและปรับปรุงประสิทธิภาพทางคลินิก [16] ในทำนองเดียวกัน ondansetron สามารถยับยั้งการขนส่ง MATE ทำให้เกิดการสะสมของไตของยา metformin ที่เป็นยาต้านเบาหวาน และความเป็นพิษต่อไตที่เพิ่มขึ้นของยาต้านมะเร็ง cisplatin [19] ในมนุษย์ ondansetron ลดการกวาดล้างไตของเมตฟอร์มิน สันนิษฐานได้โดยการยับยั้ง MATE1 efflux [21] ข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นถึงศักยภาพของคู่อริ HT3 5- ในการยับยั้งการหลั่งของยาผ่านเยื่อบุผิวผ่าน OCT2 และ MATE1 ดังนั้นเราจึงพยายามเปรียบเทียบ 5-HT3 antagonists ห้าตัวอย่างเป็นระบบสำหรับความสามารถในการยับยั้ง OCT2 ของมนุษย์และ MATE1-การขนส่งที่เป็นสื่อกลางของโพรบประจุบวกด้วยทรานส์เฟกเดี่ยวและสองครั้งไตเซลล์. ข้อสังเกต การศึกษาในปัจจุบันมุ่งเน้นไปที่ MATE1 เป็นหลัก โดยเป็นระดับของโปรตีน MATE2-K ในมนุษย์ไตก่อนหน้านี้พบว่าเยื่อหุ้มสมองอยู่ต่ำกว่าขีดจำกัดล่างของการหาปริมาณโดยใช้แมสสเปกโตรเมตรี [22]

2. ผลลัพธ์

2.1. การแสดงคุณลักษณะของ ASP บวกในฐานะสารตั้งต้นเรืองแสงในเซลล์ HEK293 ที่แสดง OCT2 และ MATE1 มากเกินไป

การศึกษาเบื้องต้นได้แสดงลักษณะการดูดซึมของ ASP บวกเข้าไปในเซลล์โดยแสดงเวกเตอร์ว่าง (EV), OCT2 หรือ MATE1 มากเกินไป (รูปที่ 2) ASP บวกแสดงการรับขึ้นอยู่กับเวลา (รูปที่ 2A) และการดูดซึมที่ขึ้นกับความเข้มข้น (รูปที่ 2B) ทั้งในเซลล์ OCT2- และ MATE1-ที่แสดงออกมาและแสดงจลนพลศาสตร์ที่อิ่มตัว (OCT2: Vmax 8.1 nmol/mg/min , กม. 2.9 ไมโครโมลาร์, R2 0.95; MATE1: Vmax 3.4 นาโนโมล/มก./นาที, Km 8.2 ยูโมลาร์, R2 0.96) เซลล์ EV แสดงการสะสมของ ASP plus น้อยที่สุด (Vmax 1.9 nmol/mg/min, Km 37.3 uM, R2 0.92) จากการค้นพบเหล่านี้ ASP บวกการดูดซึมถูกหาปริมาณหลังจาก 1 นาที (ช่วงเชิงเส้นสำหรับการขนส่ง OCT2 และ MATE1) ที่ความเข้มข้น 10 uM ซึ่งให้ความไวเพียงพอสำหรับการตรวจจับเรืองแสงและการตรวจคัดกรองของคู่อริ HT3 5- HT3 เป็นตัวยับยั้ง

เพื่อให้แน่ใจว่าสภาวะเหล่านี้สะท้อนการขนส่งแบบแอ็คทีฟโดยผู้ขนส่งแต่ละราย ค่า IC5{{10}} ของ cimetidine ซึ่งเป็นตัวยับยั้ง OCT2 และ MATE1 ที่จัดตั้งขึ้นอย่างดี ถูกกำหนดหา (รูปที่ 3 และตารางที่ 1) IC50 สำหรับ cimetidine คือ 24.5 土 4.0 uM ใน OCT2-การแสดงออกของเซลล์ และ 0.23 土 0.2 uM ใน MATE1- การแสดงออกของเซลล์ โดยสอดคล้องกับข้อมูลที่เผยแพร่ซึ่งแสดงการยับยั้ง MATE1 ที่ความเข้มข้นต่ำกว่า [18,20]. Cimetidine ไม่มีผลต่อ ASP บวกกับการดูดซึมในเซลล์ EV

2.2. การยับยั้ง OCT2- และ MATE1-การขนส่งแบบสื่อกลางโดยยาต้านการอาเจียนในเซลล์ HEK293

ตัวต้าน HT3 5-HT3 ที่แตกต่างกันห้าตัว (ondansetron, palonosetron, granisetron, tropisetron และ dolasetron) ได้รับการประเมินสำหรับการยับยั้งการขนส่ง OCT2 และ MATE1 ในเซลล์ HEK293 โดยใช้ ASP plus เป็นสารตั้งต้น (รูปที่ 3) การลดลงที่ขึ้นกับความเข้มข้นใน ASP บวกการดูดซึมถูกสังเกตพบใน OCT2- และ MATE1-ซึ่งแสดงออกถึงเซลล์ต่อหน้าของคู่อริ HT3 5-HT3 ทั้งห้าตัวที่ทดสอบในช่วงความเข้มข้นต่างๆ ค่า IC50 สำหรับการยับยั้ง ASP บวกกับการสะสมโดย 5-HT3 antagonists โดยใช้ช่วงความเข้มข้นที่ทดสอบแสดงไว้ในตารางที่ 1 ยกเว้น granisetron อีก 5- HT3 antagonists ยับยั้ง MATE1 อย่างมีศักยภาพมากกว่าที่เคยทำ ต.ค.2 OCT2-การไกล่เกลี่ยถูกยับยั้งได้ถึง ~90 เปอร์เซ็นต์ในขณะที่การขนส่งที่เป็นสื่อกลางของ MATE1- ถูกยับยั้งได้ถึง ~70 เปอร์เซ็นต์ที่ความเข้มข้นที่ทดสอบ

โดยทั่วไป การดูดซึมของ ASP บวกโดยเซลล์ EV ไม่ได้เปลี่ยนแปลงไปมากโดย 5-HT3 คู่อริ อย่างไรก็ตาม มีข้อสังเกตว่าพาโลโนเซตรอนและทรอปิเซตรอนกระตุ้น ASP เพิ่มเติมบวกการดูดซึมในเซลล์ EV และความเข้มข้นสูงสุดของกรานิเซตรอนทำให้ ASP บวกกับการสะสมลดลงเล็กน้อย

2.3. การแสดงคุณลักษณะของการขนส่งข้ามเซลล์และการสะสมภายในเซลล์ของ ASP บวกใน OCT2/MATE1-การแสดงออกของเซลล์ MDCK

เพื่อตรวจสอบการมีส่วนร่วมร่วมกันของ OCT2 และ MATE1 ในการหลั่ง transepithelial การทดลองที่ตามมาได้ดำเนินการในเซลล์ MDCK ที่โพลาไรซ์กับพื้นผิว basolateral (OCT2) และ apical (MATE1) การแสดงออกของโปรตีน OCT2 และ MATE1 ได้รับการยืนยันในเซลล์ MDCK ที่ทรานส์เฟกสองครั้งโดยใช้ Western blotting (รูปที่ 4A) การขนส่งข้ามเซลล์ของซับสเตรตโพรบประจุบวก ASP บวก (25 ไมโครโมลาร์) ถูกทดสอบในเซลล์เหล่านี้โดยใช้ส่วนแทรกของทรานส์เวลล์ การขนส่งจากฐานถึงปลาย (B-to-A) ของ ASP plus นั้นยิ่งใหญ่กว่ามาก (มากถึง 2.8- เท่าที่ 120 นาที) มากกว่าการขนส่งจากปลายสู่ด้านล่าง (A-to-B) ในเซลล์ที่ทรานส์เฟกสองครั้ง OCT2/MATE1 (รูปที่ 4B) อัตราส่วน B-to-A/A-to-B efflux ที่ 120 นาทีถูกประเมินเป็น 2.7 สำหรับเซลล์ OCT2/MATE1 ที่สนับสนุนการหลั่งของ ASP plus ในทางตรงกันข้าม เซลล์ควบคุมแสดง ASP ที่ต่ำกว่ามากบวกการขนส่งในทั้งสองทิศทางเมื่อเปรียบเทียบกับเซลล์ OCT2/MATE1 การขนส่ง B-to-A ของ ASP plus สูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับการขนส่ง A-to-B ในเซลล์ควบคุมที่ 90 (1.3-เท่า) และ 120 นาที (1.7-เท่า ). การสอบวิเคราะห์การยับยั้งเพิ่มเติมทั้งหมดถูกดำเนินการในทิศทาง B-to-A

ความสามารถของสารเคมีในการยับยั้ง ASP บวก flux และสะสมในเซลล์ที่ทรานส์เฟกสองครั้ง OCT2/MATE1 ที่สภาวะการทดสอบที่ระบุได้รับการประเมินโดยใช้สารยับยั้งกลุ่มควบคุมเชิงบวกสามตัว (cimetidine 5 และ 50 uM, pyrimethamine 1 uM และ olanzapine 20 uM) Cimetidine เป็นตัวยับยั้งที่รู้จักของ OCT2 และ MATE1 ซึ่งมีประสิทธิภาพมากกว่าสำหรับ MATE1 (ตารางที่ 1) [18] Pyrimethamine เป็นสารยับยั้ง MATE1 จำเพาะ [23] ในขณะที่พบว่า olanzapine สามารถยับยั้ง OCT2 ได้มีประสิทธิภาพมากขึ้น (รูปที่ S1) เสริม [18,20] สารเคมีทั้งสามชนิดยับยั้ง flux ข้ามเซลล์ของ ASP plus (18 เปอร์เซ็นต์ cimetidine 5 uM, 40 เปอร์เซ็นต์ cimetidine 50 uM, 36 เปอร์เซ็นต์ pyrimethamine 1 uM และ 28 เปอร์เซ็นต์ olanzapine 20 uM ที่ 120 นาที)

การสะสมของ ASP บวกภายในเซลล์ยังถูกหาปริมาณในไลเสตที่ 120 นาที Cimetidine และ pyrimethamine เพิ่มการสะสมภายในเซลล์ของ ASP plus 1.8- เท่าและ 1.3-เท่า (เนื่องจากการยับยั้ง MATE1 เป็นหลัก) ตามลำดับ ในขณะที่ olanzapine ลดการสะสมภายในเซลล์ของ ASP plus ลง 51 เปอร์เซ็นต์ (เนื่องจากการยับยั้ง OCT2) ในเซลล์ควบคุม ไม่มีการยับยั้งที่มีนัยสำคัญของการขนส่ง B-to-A ของ ASP plus ที่จุดเวลาใดๆ ในเซลล์ควบคุม ยังไม่มีการเปลี่ยนแปลงที่มีนัยสำคัญในการสะสมภายในเซลล์ของ ASP plus เมื่อเปรียบเทียบกับเซลล์ควบคุมกระสายยา ยกเว้นการลดลงเล็กน้อยใน ASP บวกกับการสะสมในการมีอยู่ของ olanzapine 20 uM

2.4. การยับยั้งการขนส่งข้ามเซลล์ของ ASP plus โดย 5-HT3 แอนทาโกนิสต์ใน OCT2/MATE1-การแสดงเซลล์ MDCK

คู่อริ 5-HT3 ห้าตัว (ondansetron, palonosetron, granisetron, tropisetron และ dolasetron) ได้รับการประเมินความสามารถในการส่งผลต่อการขนส่งข้ามเซลล์และการสะสมภายในเซลล์ของ ASP plus ในเซลล์ที่ทรานส์เฟกสองครั้ง OCT2/MATE1 (รูปที่ 5 และ 6) ซิเมทิดีน (50 ไมโครโมลาร์) ถูกรวมเข้ากับการทดลองแต่ละครั้งในชุดทรานส์เวลล์คู่ขนานในฐานะกลุ่มควบคุมเชิงบวก สิ่งที่น่าสนใจคือ 5-HT3 antagonists ทั้งห้าตัวแสดงระดับการยับยั้งที่แตกต่างกันในการขนส่ง B-to-A ข้ามเซลล์ของ ASP plus (รูปที่ 5) เมื่อเทียบกับเซลล์ที่บำบัดด้วยกระสายยา ondansetron ยับยั้งการขนส่ง B-to-A ของ ASP plus ในลักษณะที่ขึ้นกับความเข้มข้น ด้วยการยับยั้ง 36 เปอร์เซ็นต์ที่ 120 นาทีในความเข้มข้นสูงสุดที่ทดสอบ (20 uM) พาโลโนเซตรอนและทรอปิเซตรอนยังแสดงการยับยั้งที่ขึ้นกับความเข้มข้นของ ASP บวกกับการคัดหลั่ง ซึ่งมีนัยสำคัญที่ 10 และ 20 ไมโครโมลาร์สำหรับจุดเวลาทั้งหมด สังเกตการยับยั้ง ASP บวกกับการคัดหลั่งด้วยพาโลโนเซตรอนและทรอปิเซตรอนที่ 20 ไมโครโมลาร์ Dolasetron ที่ 10 และ 20 uM ยับยั้ง ASP บวกการขนส่งที่ 120 นาทีเท่านั้น สุดท้ายนี้ granisetron ไม่ได้เปลี่ยนแปลงการขนส่ง B-to-A ของ ASP plus ที่ความเข้มข้นใดๆ ที่ทดสอบ เซลล์ควบคุมไม่แสดงการยับยั้งที่มีนัยสำคัญในการขนส่ง B-to-A ของ ASP บวกกับคู่อริ 5-HT3 ใดๆ (ไม่แสดงข้อมูล)

2.5. ASP บวกกับการสะสมภายในเซลล์ใน OCT2/MATE1-การแสดงเซลล์ MDCK ที่ตามมา

การรักษาด้วย 5-HT3 คู่อริ

ความเข้มข้นต่ำ (0.5 และ 2.5 uM) ของ ondansetron ส่งผลให้ ASP ภายในเซลล์เพิ่มขึ้น 1.3-เท่า บวกกับการสะสมใน OCT2/MATE1- ในการแสดงออกของเซลล์ ในขณะที่ไม่มีความแตกต่าง เมื่อเทียบกับกระสายยาที่ความเข้มข้นสูงกว่า (10 และ 20 ไมโครโมลาร์) (รูปที่ 6) อย่างไรก็ตาม ในเซลล์ควบคุม มีการสะสมของ ASP plus ที่ความเข้มข้นสูงของ ondansetron ลดลง (40 เปอร์เซ็นต์ ) (40 เปอร์เซ็นต์ ) ในเซลล์ OCT2/MATE1 ทรอปิเซตรอนและแกรนิเซตรอนเพิ่ม ASP บวกกับการสะสม (1.5 และ 1.3-เท่าตามลำดับ) ที่ความเข้มข้นสูงสุด (20 uM) ไม่พบการเปลี่ยนแปลงที่มีนัยสำคัญใน ASP บวกกับการสะสมด้วยพาโลโนเซตรอนหรือโดลาเซตรอน

3. อภิปราย

OCT2 และ MATE1 เป็นตัวขนส่งหลักที่ประสานการหลั่งของไตของไอออนบวกอินทรีย์ พวกเขาใช้สารตั้งต้นที่ทับซ้อนกันจำนวนหนึ่ง ได้แก่ เมตฟอร์มิน ซิสพลาติน ลามิวูดีน และเอนเทคาเวียร์ รวมทั้ง 5-ยาที่เป็นปฏิปักษ์ HT3 [15–20,24] การศึกษาก่อนหน้านี้ได้เสนอแนะว่า 5-คู่อริ HT3 สามารถยับยั้งการขนส่งโดย OCT2 และ MATE1 ได้เช่นกัน ที่โดดเด่นที่สุดคือ ออนแดนเซทรอนสามารถลดการขนส่งซิสพลาตินและเมตฟอร์มินโดย MATE1 [19] การศึกษาปัจจุบันมีวัตถุประสงค์เพื่อขยายงานก่อนหน้านี้เพื่อเปรียบเทียบคู่อริ HT3 5-ห้าตัวสำหรับความสามารถในการยับยั้ง OCT2 และ MATE1 แยกกันเมื่อแสดงออกมากเกินไปในเซลล์ HEK293 และเมื่อแสดงออกร่วมกันในเซลล์ MDCK และเติบโตบนเม็ดมีด Transwell Ondansetron และ palonosetron สามารถยับยั้งการดูดซึมของโพรบเคมีประจุบวก ASP plus เข้าไปในเซลล์ HEK293 ที่แสดง OCT2 หรือ MATE1 โดยเฉพาะอย่างยิ่งที่ความเข้มข้นต่ำถึง 0.1–0.5 uM . ในทำนองเดียวกัน granisetron, tropisetron และ dolasetron ก็สามารถยับยั้งการขนส่งแต่ละตัวได้ (อย่างไรก็ตามที่ความเข้มข้นสูงกว่า) การใช้เซลล์ MDCK ที่ทรานส์เฟกสองครั้ง OCT2/MATE1 ทำให้ ondansetron ยับยั้ง ASP จากเบโซไซด์ถึงปลายยอดบวกกับการหลั่งที่ความเข้มข้นทั้งหมดที่ทดสอบ (0.5–20 uM) ซึ่งสังเกตพบเฉพาะที่ความเข้มข้นที่สูงขึ้นสำหรับพาโลโนเซตรอน, ทรอปิเซตรอน และโดลาเซตรอนเท่านั้น ข้อมูลเหล่านี้ได้รับโดยใช้โพรบ fluorescent ซับสเตรต เสนอแนะศักยภาพสำหรับ OCT2- และ MATE1-อันตรกิริยาระหว่างยากับ 5-HT3 antagonists

ข้อมูลที่สร้างขึ้นในเซลล์ที่ทรานส์เฟกสองครั้ง OCT2/MATE1 ส่วนใหญ่เห็นด้วยกับข้อมูล HEK293 ยกเว้น granisetron Ondansetron, palonosetron และ tropisetron แสดงการยับยั้งการขนส่ง B-to-A ของ ASP บวกกับลำดับของความสามารถในการตอบสนองที่สังเกตได้ด้วยการยับยั้ง MATE1 ที่เห็นในเซลล์ HEK293 น่าแปลกที่ granisetron ไม่ได้แสดงการยับยั้งที่มีนัยสำคัญใดๆ ในเซลล์ MDCK OCT2/MATE1 แม้แต่ที่ความเข้มข้นสูงกว่าความเข้มข้นของ IC50 ถึงห้าเท่าที่พบในเซลล์ HEK293 ซึ่งแสดงออก OCT2 หรือ MATE1 เนื่องจากเซลล์ MDCK มีลักษณะคล้ายกับเซลล์ท่อตามธรรมชาติในระดับที่มากกว่าเซลล์ HEK293 จึงมีความเป็นไปได้ที่การจำหน่าย granisetron จะเปลี่ยนแปลงไปเนื่องจากการแสดงออกของออร์โธล็อกขนย้ายภายในของ OCT2 หรือ MATE1 หรือตัวขนส่งอื่นๆ ที่อาจเป็นไปได้ ตัวอย่างเช่น เซลล์ MDCK แสดงตัวขนส่ง P-glycoprotein ในสุนัข [25] อย่างมาก ซึ่งอาจนำไปสู่ ​​granisetron efflux การสนับสนุนการเก็งกำไรนี้คือความจริงที่ว่าความหลากหลายของนิวคลีโอไทด์เดี่ยวในตัวขนส่ง MDR1/ABCB1 ของมนุษย์ช่วยปรับปรุงประสิทธิภาพทางคลินิกของ granisetron ในการรักษาอาการอาเจียน [26] ข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า granisetron อาจเป็นสารตั้งต้นสำหรับ P-glycoprotein ในสุนัข ทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงในความเข้มข้นภายในเซลล์ที่สัมผัสกับตัวขนส่ง MATE1

แม้ว่าจะมีการทับซ้อนกันมากระหว่างซับสเตรตและสารยับยั้งของตัวขนส่ง OCT และ MATE ความแตกต่างยังคงมีอยู่ ปฏิกิริยาระหว่างยากับยาโดยผู้ขนส่งมักจะขึ้นอยู่กับเอกลักษณ์ของสารตั้งต้นของเหยื่อที่กำลังได้รับการประเมิน ดังที่ได้แสดงให้เห็นสำหรับ OCT2 [27–29] สำหรับ OCT2 การเลือกซับสเตรตประจุบวกมีผลกระทบทั้งเชิงปริมาณและเชิงคุณภาพต่อขอบเขตและประเภทของการยับยั้ง [27,28] ในทางตรงกันข้าม ค่าคงที่ Michaelis ที่ชัดเจนของซับสเตรตที่ขนส่งและค่า IC50 สำหรับการยับยั้ง MATE1 ในพื้นผิวที่แตกต่างกันสี่แบบมีความคล้ายคลึงกัน [30] ข้อมูลเหล่านี้จะแนะนำว่ามีจุดยึดที่ใช้ร่วมกันสำหรับการทำงานร่วมกันของซับสเตรตและสารยับยั้งบนพื้นผิวภายนอกของ hMATE1 ด้วยเหตุนี้ ปฏิกิริยาระหว่างยา 5-ยา HT3 ที่เป็นปฏิปักษ์กับ OCT2 และ MATE1 อาจเกิดขึ้นผ่านกลไกที่แตกต่างกัน แม้ว่าจะมีลักษณะประจุบวกร่วมกันก็ตาม จำเป็นต้องมีการศึกษาในอนาคตเพื่อพัฒนาการศึกษาในปัจจุบันโดยใช้โพรบซับสเตรตและประเมินปฏิสัมพันธ์กับซับสเตรตยาเฉพาะ เช่น ไซเมทิดีน เมตฟอร์มิน และซิสพลาติน

ยาประเภทอื่นๆ นอกเหนือจาก 5-HT3 antagonists ยังใช้เพื่อป้องกันอาการคลื่นไส้และอาเจียน ในการศึกษาเบื้องต้น เราประเมินความสามารถของยาต้านอาการอาเจียนอื่นๆ ในการยับยั้ง OCT2 และ MATE1-การขนส่งที่เป็นสื่อกลางของ ASP plus ในเซลล์ HEK293 สิ่งที่น่าสนใจคือ olanzapine, prochlorperazine และ metoclopramide ยับยั้งการทำงานของ OCT2 ในช่วงความเข้มข้นต่างๆ (รูปที่ S1) เสริม ไม่มียาตัวใดที่ยับยั้งการทำงานของ MATE1 ที่ความเข้มข้น 10 uM (ไม่แสดงข้อมูล) ยาแก้อาเจียนอื่นๆ รวมถึง aprepitant และ dexamethasone ไม่มีผลกระทบต่อ ASP บวกกับการดูดซึมใน OCT2- หรือ MATE1- ซึ่งแสดงออกถึงเซลล์ HEK293 (ไม่แสดงข้อมูล) ด้วยเหตุนี้ อาจมียา antiemetic อื่นๆ (olanzapine, prochlorperazine และ metoclopramide) ที่ใช้ร่วมกับ 5-HT3 antagonists ที่อาจส่งผลต่อการหลั่งของ cation ที่ไต โดยเฉพาะอย่างยิ่งจากความสามารถในการยับยั้งการดูดซึม OCT2

สิ่งสำคัญคือต้องพิจารณาว่าแบบจำลองในหลอดทดลองจะสรุปคุณลักษณะของการขนส่งภายในร่างกายได้ดีเพียงใดในมนุษย์ไต. ระดับโปรตีน OCT2 และ MATE1 ของมนุษย์ได้รับการหาปริมาณก่อนหน้านี้ในเซลล์ MDCK ที่ทรานส์เฟกสองครั้งโดย LC-MS/MS (hOCT2 และ hMATE1 เป็นโปรตีนเมมเบรน 28.6 และ 6.9 fmol/ug ตามลำดับ) [31] โดยการเปรียบเทียบ การศึกษาที่กำหนดการแสดงออกของโปรตีนในเยื่อหุ้มสมองของไตของมนุษย์และเยื่อหุ้มไตของมนุษย์เผยให้เห็นความแตกต่างเล็กน้อยในการแสดงออกระหว่างผู้ขนส่งทั้งสองหรือการแสดงออกของ MATE1 ที่มากขึ้น (OCT2 7.4 pmol/mg, MATE{{14 }}.1 pmol/mg) [22] และ (OCT2 5 fmol/ug, MATE1 10 fmol/ug) [32] ความแตกต่างระหว่างแบบจำลองในหลอดทดลองและการแสดงออกภายนอกของมนุษย์ของ OCT2 และ MATE1 ควรพิจารณาและพิจารณาปัจจัยร่วมในการพัฒนาแบบจำลองทางเภสัชจลนศาสตร์ตามสรีรวิทยาสำหรับปฏิกิริยาระหว่างยาที่เป็นประจุบวกในไต

การศึกษาในปัจจุบันมุ่งเน้นไปที่การหลั่งของยาประจุบวกในไตเป็นส่วนใหญ่ อย่างไรก็ตาม สิ่งสำคัญคือต้องตระหนักว่าตับยังแสดงออกถึง OCT1 และ MATE1 ซึ่งช่วยให้สามารถกำจัดสารเคมีที่เป็นประจุบวกในทางเดินน้ำดีได้ สิ่งนี้สำคัญเพราะว่าตัวต้าน 5-HT3 ต่างกันในโครงสร้าง เมตาบอลิซึม การจับโปรตีน และเส้นทางการชำระออก โครงสร้าง 5-แอนทาโกนิสต์ของรีเซพเตอร์ HT3 ประกอบด้วยเอมีนพื้นฐาน ระบบวงแหวนอะโรมาติกหรือเฮเทอโรอะโรมาติก และคาร์บอนิล (หรือโครงสร้างที่คล้ายกัน) ที่เป็นระนาบเดียวกับบริเวณอะโรมาติก (รูปที่ 1) [33] อย่างน่าสังเกต โครงสร้างของมอยอิตีของเอมีนแตกต่างกันสำหรับออนดันเซตรอนและรวมถึงอิมิดาโซล ในขณะที่วงแหวนสมาชิก 6-ตัวถูกรวมไว้ในตัวต้าน HT3 อีก 5-HT3 อีกตัวหนึ่ง ความเกี่ยวข้องของความแตกต่างเชิงโครงสร้างเหล่านี้ในการปฏิสัมพันธ์กับ OCT2 และ/หรือ MATE1 จำเป็นต้องมีการตรวจสอบเพิ่มเติม แต่สามารถอธิบายผลกระทบที่มีนัยสำคัญมากขึ้นของออนแดนเซตรอนที่ความเข้มข้นต่ำกว่า นอกจากนี้ 5-HT3 antagonists บางส่วนยังได้รับการกำจัดอย่างกว้างขวางโดยไตเป็นพ่อแม่หรือสารเมตาโบไลต์ (เช่น palonosetron และ tropisetron) ตัวร้าย 5-HT3 จำนวนมาก (รวมถึง ondansetron, tropisetron, palonosetron และ granisetron) ได้รับการเผาผลาญอย่างสูง (48–95 เปอร์เซ็นต์) โดยเอนไซม์ cytochrome P450 ในตับ เมื่อเร็ว ๆ นี้การศึกษาพบว่าสารเมตาโบไลต์อาจมีบทบาทในการมีปฏิสัมพันธ์ระหว่างยากับยามากกว่าที่เคยคิดไว้ [34] การทดสอบเพิ่มเติมของการขนส่ง OCT2 และ MATE1 ด้วยสารเมแทบอไลต์ที่สำคัญของคู่อริ HT3 5-HT3 ที่เกิน 25 เปอร์เซ็นต์ของการได้รับสัมผัสทางระบบของผู้ปกครอง ในทำนองเดียวกัน ในกลุ่มเคมีก็มียาที่มีครึ่งชีวิตสั้น (< 6="" h,="" ondansetron,="" and="" tropisetron),="" moderate="" half-lives="" (8–9="" h,="" granisetron,="" and="" dolasetron),="" and="" a="" long="" half-life="" (40="" h,="" palonosetron).="" these="" factors="" should="" be="" considered="" when="" evaluating="" potential="" drug-drug="" interactions="" using="" in="" vitro="" transporter="">

ตาม 2020 คำแนะนำของ FDA สำหรับการเผาผลาญในหลอดทดลองและการศึกษาปฏิกิริยาระหว่างยากับผู้ขนส่ง [35] ยามีศักยภาพที่จะยับยั้งการขนส่ง ในร่างกาย ถ้า: ค่า Cmax (ไม่ถูกผูกไว้)/IC50 มากกว่าหรือเท่ากับ 0.1 ตามแนวทางเหล่านี้ ค่า MATE1 Cmax/IC50 สำหรับออนแดนเซตรอนบ่งชี้ถึงศักยภาพในปฏิกิริยาระหว่างยา ในร่างกาย โดยใช้ ASP plus เป็นสารตั้งต้นของโพรบ การเปรียบเทียบค่า IC50 สำหรับคู่อริ 5-HT3 อีกตัวหนึ่งกับค่า Cmax ของพวกมัน (ช่วงตั้งแต่ระดับนาโนโมลาร์สูงไปจนถึงไมโครโมลาร์ต่ำ) จะไม่แนะนำความเสี่ยงของการมีอันตรกิริยาระหว่างยา อย่างน้อยกับ ASP บวกในฐานะสารตั้งต้นของเหยื่อ ในทำนองเดียวกัน ขณะนี้เราไม่ทราบความเข้มข้นของสารออกฤทธิ์ในไตของ 5-HT3 antagonists ซึ่งจะมีความสำคัญสำหรับการประเมินปฏิกิริยาระหว่างยา MATE1 ที่อาจเกิดขึ้น มีข้อมูลทางคลินิกที่จำกัดในการประเมินปฏิกิริยาระหว่างยาที่เกี่ยวกับออนแดนเซตรอนกับซับสเตรต OCT/MATE ตัวอย่างเช่น ระดับของครีเอตินีนและเมตฟอร์มินจะเพิ่มขึ้นในอาสาสมัครที่มีสุขภาพดีโดยออนแดนเซตรอนเนื่องจากการยับยั้งการขนส่งไต [21,36] ที่น่าสนใจคือ ondansetron ไม่เพียงแต่ลดการกวาดล้างไตของเมตฟอร์มินเท่านั้น แต่ยังปรับปรุงมาตรการความทนทานต่อกลูโคสอีกด้วย [21] ในการศึกษาทางคลินิกอื่น ๆ มีรายงานว่า ondansetron เพิ่มความเป็นพิษต่อไตของยาซับสเตรตโดยอาจเปลี่ยนแปลงการหลั่งที่สื่อกลางโดยการขนส่งภายในไต[37–39]. ข้อมูลเหล่านี้ร่วมกันรับประกันการตรวจสอบเพิ่มเติมเกี่ยวกับปฏิกิริยาระหว่างยา ondansetron ผ่านการยับยั้งการขนส่ง OCT และ MATE

โดยสรุป ข้อมูลในหลอดทดลองเหล่านี้บ่งชี้ว่าตัวต้าน HT3 จำนวนมากของ 5-HT3 มีศักยภาพที่มากขึ้นต่อการยับยั้ง MATE1 ซึ่งเพิ่มศักยภาพในการเพิ่มความเข้มข้นของยาที่เป็นประจุบวกในหลอดทดลอง นอกจากนี้ ออนแดนเซทรอนยังมีศักยภาพเพียงพอที่จะเพิ่มความเข้มข้นภายในเซลล์ของซับสเตรตโพรบ, ASP บวกที่ความเข้มข้นใกล้กับ Cmax ที่เกี่ยวข้องทางคลินิก ข้อมูลเหล่านี้สอดคล้องกับการศึกษาในร่างกายก่อนหน้านี้ในหนูทดลองที่พบว่ามีความเป็นพิษต่อไตที่เกิดจากซิสพลาตินเพิ่มขึ้นเมื่อใช้ ondansetron [19] จากเกณฑ์ปัจจุบันสำหรับการประเมินศักยภาพการมีปฏิสัมพันธ์ระหว่างยากับยาทางคลินิก ตัวต้าน HT3 อีกตัวหนึ่ง 5- รวมถึงยาแก้อาเจียนที่ทดสอบในการศึกษาของเรา มีแนวโน้มน้อยกว่าที่จะเกิดปฏิกิริยาระหว่างยาที่เกี่ยวข้องทางคลินิกเนื่องจากการรักษาที่ต่ำกว่ามาก ความเข้มข้นในพลาสมาและค่าคงที่การยับยั้งที่สูงขึ้น

4. วัสดุและวิธีการ

4.1. เคมีภัณฑ์

4-(4-(Dimethylamino)styryl)-N-methyl pyridinium iodide (ASP plus ) ซื้อมาจาก Life Technologies (แกรนด์ไอแลนด์, นิวยอร์ก, สหรัฐอเมริกา) Tropisetron ซื้อมาจาก Abcam (Cambridge, MA, USA) สารเคมีอื่นๆ ทั้งหมดมาจาก Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA)

4.2. เส้นเซลล์และการเพาะเลี้ยงเซลล์

การควบคุม Vector (EV) ที่ว่างเปล่า (pcDNA5-ทรานส์เฟก) และ Flp-In ไตของตัวอ่อนมนุษย์ (HEK) 293 เซลล์ที่เซลล์เซลล์ MATE1 และ OCT2 แสดงออกได้อย่างเสถียรโดย Dr. Kathy Giacomini แห่งมหาวิทยาลัยแคลิฟอร์เนีย ซาน ฟรานซิสโก. เซลล์ HEK293 ถูกเพาะเลี้ยงในตัวกลาง Modifified Eagle (DMEM) ของ Dulbecco ที่เสริมด้วยซีรัมของทารกในครรภ์ 10 เปอร์เซ็นต์, L-glutamine 2 มิลลิโมลาร์, เพนิซิลลิน 100 U/mL, สเตรปโตมัยซิน 100 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร และ hygromycin B. Vector 200 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร (pcDNA3 1 plus และ pcDNA3.1/Hygro( plus )) และเซลล์เซลล์ Madin–Darby canine kidney (MDCK) ที่ถ่ายสองครั้งของมนุษย์ OCT2/MATE1 ได้รับการจัดเตรียมอย่างไม่เห็นแก่ตัวโดย Dr. Joanne Wang แห่งมหาวิทยาลัยวอชิงตัน ซีแอตเทิล รัฐวอชิงตัน เซลล์ MDCK ถูกคงรักษาไว้ในอาหารเลี้ยงเชื้อที่จำเป็นขั้นต่ำ (MEM) ที่เสริมด้วยซีรัมของตัวอ่อนในครรภ์ 10 เปอร์เซ็นต์, G418 500 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร และไฮโกรมัยซิน บี 200 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร สายพันธุ์ของเซลล์ทั้งหมดถูกเพาะเลี้ยงในตู้อบความชื้นที่ 37oC โดยมี CO2 5 เปอร์เซ็นต์

4.3. การสอบวิเคราะห์การดูดซึมและการยับยั้ง Efflux ในเซลล์ HEK293

OCT2- และ MATE1-การแสดงออกของเซลล์ HEK293 มากเกินไปถูกเพาะในแผ่นหลุมเคลือบ 24-หลุมเคลือบโพลี-ดี-ไลซีนที่ชัดเจน (Fisher Scientific, Hanover Park, IL, USA) และเติบโตเป็นเวลา 24 ชั่วโมง จนถึงประมาณร้อยละ 90 confluent. หลังจากการล้างหนึ่งครั้งด้วยสารละลาย Buffered Saline Solution (HBSS) ของ Hank ที่อุ่นไว้ล่วงหน้าแล้ว เซลล์ถูกบ่มล่วงหน้าเป็นเวลา 30 นาทีที่ 37oC ด้วยตัวต้าน HT3 5-HT3 ต่างๆ สำหรับเซลล์ OCT2 หรือในสารละลาย NH4Cl 30 mM ใน HBSS ที่ pH 6.5 สำหรับเซลล์ MATE1 สำหรับเซลล์ภายในเซลล์ การทำให้เป็นกรด การนำเข้าสู่เซลล์ OCT2 เริ่มต้นผ่านการสัมผัสกับ 10 uM ของซับสเตรตฟลูออเรสเซนต์ ASP บวกโดยตรงในตัวกลางในการฟักไข่ การดูดซึมเข้าสู่เซลล์ MATE1 เริ่มต้นโดยการใช้ HBSS ที่ pH 7.4 ซึ่งประกอบด้วยตัวต้าน HT3 5-HT3 และ 10 uM ของซับสเตรตฟลูออเรสเซนต์ ASP บวก หลังจากการฟักไข่เป็นเวลา 1 นาทีที่ 37oC บนเชคเกอร์ การดูดซึมซับสเตรตถูกหยุดโดยการเพิ่ม HBSS ที่เย็นด้วยน้ำแข็งที่มีไซเมทิดีน 500 ไมโครโมลาร์ สื่อถูกนำออกและล้างสี่ครั้งด้วย HBSS เย็นจัด เซลล์ถูกสลายด้วย 1 เปอร์เซ็นต์ Triton X-100 ตรวจพบการเรืองแสงโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลท Spectramax (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA) ที่ความยาวคลื่นต่อไปนี้ (Excitation 485 nm/Emission 495 nm) การเรืองแสงภายในเซลล์ถูกทำให้เป็นมาตรฐานจนถึงความเข้มข้นของโปรตีนทั้งหมดของเซลล์ไลเซทจากแต่ละหลุมโดยใช้การทดสอบกรดบิซินโชนินิก (BCA) (Pierce Biotechnology, Rockford, IL, USA) การทดลองทำซ้ำสามครั้งโดยแบ่งเป็นสามถึงสี่ครั้งในการทดสอบแต่ละครั้ง

4.4. การศึกษาของ Transwell ในเซลล์ MDCK-OCT2/MATE1

Control and OCT2/MATE1-expressing MDCK cells were evaluated for protein expression of OCT2 and MATE1 using SDS-PAGE and western blotting with specific primary antibodies (OCT2, sc292622 1:500 and MATE1, sc133390 1:250, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA), followed by an antirabbit HRP-conjugated secondary antibody (1:1000, Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA) and Super Signal Western Dura Extended Duration Substrate (Pierce Biotechnology, Rockford, IL, USA). Detection was performed with a FluorChem imager (ProteinSimple, Santa Clara, CA, USA). Both MDCK cell lines were seeded on 0.4 um transwell inserts (VWR, Radnor, PA, USA) at a density of 2 × 105 cells/cm2. Transport experiments were performed 3 to 5 days after seeding. The integrity of MDCK monolayers was verified by measuring transepithelial electrical resistance (TEER) >150 o*cm2 โดยใช้โอห์มมิเตอร์แบบเยื่อบุผิว EVOM2 (World Precision Instruments, Sarasota, FL) การก่อตัวที่เหมาะสมของรอยต่อแน่นยังถูกตรวจสอบโดยการวัดความสามารถในการซึมผ่านแฝงของลูซิเฟอร์เยลโลว์ในทิศทางจากฐานถึงปลาย (B-to-A) ลูซิเฟอร์สีเหลือง (20 uM) ถูกนำไปใช้กับห้องเบสโซไซด์เป็นเวลา 1 ชั่วโมงและสื่อถูกรวบรวมจากห้องปลาย แสงเรืองแสงสีเหลืองของลูซิเฟอร์ถูกอ่านที่ความยาวคลื่นกระตุ้นที่ 430 นาโนเมตรและความยาวคลื่นการปล่อย 538 นาโนเมตร ค่า passive permeability (Papp) เฉลี่ยคือ 7 × 10-7 cm/s ซึ่งสอดคล้องกับค่าวรรณกรรม [40]

หลังจากล้างเซลล์หนึ่งครั้งด้วยสารละลายบัฟเฟอร์น้ำเกลือ (HBSS) pH 7.4 ของแฮงค์ การศึกษาการขนส่งได้เริ่มต้นขึ้นหลังจากดูดบัฟเฟอร์ล้างจากทั้งช่องปลายยอดและช่องฐาน เซลล์ถูกบ่มด้วย 5-HT3 แอนทาโกนิสต์ในห้องปลายใน HBSS pH 6.0 และ 5-HT3 แอนทาโกนิสต์ที่มี ASP บวก (25 uM) ในห้องเบสโซเลเทอรัลใน HBSS pH 7.4 และบ่ม ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 120 นาที เพื่อวัดการขนส่งทรานส์เซลที่ขึ้นกับเวลา ส่วนต่างของตัวกลางในการฟักตัว (100 uL) จากห้องปลาย (ห้องรับ) ถูกรวบรวมที่ 40, 60, 90 และ 120 นาทีและแทนที่ด้วยปริมาตรที่เท่ากันของบัฟเฟอร์สดที่มี {{ 19}}ศัตรู HT3 หรือสารเคมีควบคุมเชิงบวกที่ความเข้มข้นเดิม หลังจากผ่านไป 120 นาที ตัวกลางสำหรับการบำบัดจะถูกลบออกและทรานส์เวลล์ถูกล้างสามครั้งด้วย HBSS ที่เย็นจัด เซลล์ถูกสลายด้วย 1 เปอร์เซ็นต์ Triton X-100 ตรวจพบการเรืองแสงโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลท Spectramax ที่ความยาวคลื่นต่อไปนี้ (การกระตุ้น 485 นาโนเมตร/การปล่อย 495 นาโนเมตร) การเรืองแสงภายในเซลล์ถูกทำให้เป็นมาตรฐานจนถึงความเข้มข้นของโปรตีนทั้งหมดของเซลล์ไลเซตจากทรานส์เวลล์แต่ละตัวโดยใช้การสอบวิเคราะห์ BCA ทำการทดลองในเม็ดมีด Transwell สามชิ้น

4.5. การวิเคราะห์ทางสถิติ

GraphPad Prism v6 (ซอฟต์แวร์ GraphPad, La Jolla, CA, USA) ใช้สำหรับการวิเคราะห์ทางสถิติ Km และ Vmax คำนวณโดยใช้การถดถอยแบบไม่เชิงเส้น (สมการจลนพลศาสตร์ของเอนไซม์ Michaelis–Menten (Y=Vmax × X/(Km บวก X) ที่พอดีสำหรับกำลังสองน้อยที่สุด) วิเคราะห์ข้อมูลที่มีสองตัวแปรโดยใช้สอง- วิธี ANOVA ตามด้วย ANOVA ทางเดียวและ/หรือการทดสอบ posthoc ของ Dunnett สำหรับการเปรียบเทียบหลายรายการ ค่า IC50 คำนวณผ่านการถดถอยแบบไม่เชิงเส้นเพื่อให้ได้กำลังสองน้อยที่สุด ส่วนต่างถูกพิจารณาว่ามีนัยสำคัญทางสถิติที่ p <>

วัสดุเสริม:ข้อมูลต่อไปนี้สามารถดูได้ทางออนไลน์ที่ https://www.mdpi.com/article/10 .3390/ijms22126439/s1

ผลงานของผู้เขียน:แนวความคิด BG, MSJ, LMA; ระเบียบวิธี BG, XW; การวิเคราะห์อย่างเป็นทางการ BG, LMA; ทรัพยากร LMA; การเขียน—การเตรียมร่างต้นฉบับ BG, LMA; การเขียน— ทบทวนและแก้ไข, MSJ, LMA; การบริหารโครงการ LMA; การจัดหาเงินทุน, MSJ, EAJ, LMA ผู้เขียนทุกคนได้อ่านและตกลงที่จะเผยแพร่ต้นฉบับของต้นฉบับ

เงินทุน:งานวิจัยนี้ได้รับทุนจากสถาบันวิทยาศาสตร์การแพทย์ทั่วไปแห่งชาติ (Grant GM123330) และสถาบันวิทยาศาสตร์สุขภาพสิ่งแวดล้อมแห่งชาติ (ทุน ES005022, ES007148) สถาบันมะเร็งแห่งชาติ (ทุน CA072720, CA046934, CA008748) และสถาบันโรคเบาหวานแห่งชาติและ โรคทางเดินอาหารและไต (Grant DK093903) ส่วนประกอบของสถาบันสุขภาพแห่งชาติ

คำชี้แจงของคณะกรรมการพิจารณาสถาบัน: ไม่เกี่ยวข้อง

คำชี้แจงความยินยอมที่ได้รับแจ้ง:ไม่สามารถใช้ได้.

คำชี้แจงความพร้อมใช้งานของข้อมูล:ไม่สามารถใช้ได้.

รับทราบ:เราซาบซึ้งเป็นอย่างยิ่งกับสายเซลล์ขนย้าย HEK293 จาก Kathy Giacomini และสายเซลล์ MDCK ที่ทรานส์เฟกจาก Joanne Wang

ผลประโยชน์ทับซ้อน:ผู้เขียนประกาศไม่มีความขัดแย้งทางผลประโยชน์

อ้างอิง

1. อัครา, ม.; Rennick, B. ผลกระทบแบบสองเฟสของไอออนบวกอินทรีย์ต่อการขับถ่ายของไอออนบวกอินทรีย์อื่นๆ เจ. ฟาร์มาคอล. ประสบการณ์ เธอ. 2519, 199, 32–40. [ผับเมด]

2. โฮโลฮาน พีดี; Ross, CR กลไกของการขนส่งไอออนบวกอินทรีย์ในถุงน้ำเยื่อหุ้มปอดในพลาสมาไต: 1. การศึกษาการต่อต้านการขนส่ง เจ. ฟาร์มาคอล. ประสบการณ์ เธอ. 1980, 215, 191–197.

3. คินเซลลา เจแอล; โฮโลฮาน พีดี; Pessah, NI; Ross, CR การขนส่งของไอออนอินทรีย์ในถุงน้ำเยื่อหุ้มสมองและเยื่อหุ้มแอนติลูมินัลของเยื่อหุ้มสมองของไต เจ. ฟาร์มาคอล. ประสบการณ์ เธอ. 2522, 209, 443–450.

4. โวลด์ เจเอส; Miller, BL การยับยั้ง efflux ของไอออนอินทรีย์จากชิ้นเปลือกนอกของไต ประสบการณ์ 1978, 34, 630–631. [CrossRef] [PubMed]

5. Gessner, A.; König, J.; Fromm, MF ลักษณะทางคลินิกของปฏิกิริยาระหว่างยากับยาขนส่ง คลินิก ฟา. เธอ. 2019, 105, 1386–1394. [ข้ามอ้างอิง]

6. สมิธ เอช.เอส.; ค็อกซ์, แอลอาร์; Smith, EJ 5-ตัวรับ HT3 คู่อริสำหรับการรักษาอาการคลื่นไส้/อาเจียน แอน. พัลเลียต. เมดิ. 2555, 1, 115–120. [CrossRef] [PubMed]

7. Costall, B.; กันนิง, เอสเจ; เนย์เลอร์, อาร์เจ; Tyers, MB ผลกระทบของ GR38032F, 5-HT3- ตัวรับศัตรูตัวรับใหม่ต่อการถ่ายอุจจาระในหนูตะเภา บรา เจ. ฟาร์มาคอล. 2530, 91, 263–264. [ข้ามอ้างอิง]

8. คริส MG; กราลล่า, อาร์เจ; คลาร์ก RA; Tyson, LB Dose-range การประเมินผลของ serotonin antagonist GR-C507/75 (GR38032F) เมื่อใช้เป็นยา antiemetic ในผู้ป่วยที่ได้รับเคมีบำบัดต้านมะเร็ง เจ. คลิน. ออนคอล 2531, 6, 659–662. [ข้ามอ้างอิง]

9. ทริกโก้ เอซี; สีบลอนด์ E.; เวโรนิก้า เอเอ; ซูเบียห์, C.; วาเฟย, อ.; งาช้าง, เจ.; Strifler, L.; คาร์โดโซ, อาร์.; Reynen, อี.; นิซิค, วี.; และคณะ ความปลอดภัยเปรียบเทียบและประสิทธิผลของตัวรับ serotonin receptor antagonists ในผู้ป่วยที่ได้รับเคมีบำบัด: การทบทวนอย่างเป็นระบบและการวิเคราะห์เมตาของเครือข่าย บมจ. 2016, 14, 216. [ข้ามอ้างอิง]

10. โบลิก อาร์ซี; บาร์ตัน เอสเจ; แซคโคน, จี.; เคลลี่ เอเจ; เอ็ดเวิร์ด เอสเจ; Berghella, V. การแทรกแซงในการรักษาภาวะ hyperemesis gravidarum: การทบทวนอย่างเป็นระบบของ Cochrane และการวิเคราะห์อภิมาน เจ. มาแตร์น. แพทย์ทารกแรกเกิดของทารกในครรภ์ 2561, 31, 2492–2505. [ข้ามอ้างอิง]

11. Haque, N.; นาควี, RM; Dasgupta, M. ประสิทธิภาพของ Ondansetron ในการป้องกันหรือรักษาอาการเพ้อหลังผ่าตัด - การทบทวนอย่างเป็นระบบ สามารถ. เจอเรียต. จ. 2019, 22, 1–6. [CrossRef] [PubMed]

12. แมคพาร์ลิน ซี.; โอดอนเนลล์ เอ.; ร็อบสัน เซาท์แคโรไลนา; เบเยอร์, ​​เอฟ.; โมโลนีย์ อี.; ไบรอันท์, เอ.; แบรดลีย์ เจ.; มัวร์เฮด CR; เนลสัน-เพียร์ซี, C.; Newbury-Birch, D.; และคณะ การรักษา Hyperemesis Gravidarum และคลื่นไส้และอาเจียนในการตั้งครรภ์: การทบทวนอย่างเป็นระบบ JAMA 2016, 316, 1392–1401. [CrossRef] [PubMed]

13. วัง W.; โจวแอล.; Sun, L. Ondansetron สำหรับอาการคันที่เกิดจากมอร์ฟีนจากระบบประสาท: การวิเคราะห์อภิมานของการทดลองแบบสุ่มที่มีกลุ่มควบคุม เจ. คลิน. เภสัช. เธอ. 2017, 42, 383–393. [ข้ามอ้างอิง]

14. Yokoi, A.; มิฮาระ ต.; คะ,เค.; Goto, T. ประสิทธิภาพเปรียบเทียบของ ramosetron และ ondansetron ในการป้องกันอาการคลื่นไส้อาเจียนหลังผ่าตัด: การทบทวนอย่างเป็นระบบและการวิเคราะห์เมตาที่มีการวิเคราะห์ตามลำดับการทดลอง โปรดหนึ่ง 2017, 12, e0186006. [ข้ามอ้างอิง]

15. มอร์ส บีแอล; โคลูร์, A.; ฮัดสัน, แอลอาร์; โฮแกน AT; เฉิน LH; แบร็คแมน อาร์เอ็ม; ซาวาดะ จอร์เจีย; ฟอลลอน เจเค; สมิ ธ พีซี; Hillgren, KM Pharmackinetics of Organic Cation Transporter 1 (OCT1) Substrates ในหนูทดลองที่น่าพิศวง 1/2 ต.ค. และความแตกต่างของสปีชีส์ในตับ OCT1-สื่อกลางการดูดซึม ยาเมตาบ. จำหน่าย 2020, 48, 93–105. [CrossRef] [PubMed]

16. ซเวตคอฟ เอ็มวี; ซาดาทมันด์ AR; Bokelmann, K.; Meineke, ฉัน.; ไกเซอร์, อาร์.; Brockmoller, J. ผลกระทบของความหลากหลาย OCT1 ต่อการดูดซึมของเซลล์ ความเข้มข้นในพลาสมา และประสิทธิภาพของ 5-HT(3) antagonists tropisetron และ ondansetron เภสัชพันธุศาสตร์ จ. 2012, 12, 22–29. [CrossRef] [PubMed]

17. จู้, พี.; ใช่ Z .; Guo, D.; Xiong, Z .; หวาง, S.; กัว เจ.; จาง W.; Polli, เจ; โจว, เอช.; หลี่ Q.; และคณะ Irinotecan เปลี่ยนแปลงการจำหน่ายมอร์ฟีนผ่านการยับยั้ง Organic Cation Transporter 1 (OCT1) และ 2 (OCT2) เภสัช. ความละเอียด 2018, 35, 243. [ข้ามอ้างอิง]

18. Kido, Y.; แมตส์สัน, พี.; Giacomini, KM Profiling ของห้องสมุดยาที่ต้องสั่งโดยแพทย์สำหรับปฏิกิริยาระหว่างยาและยาในไตที่อาจเกิดขึ้นซึ่งอาศัยสื่อกลางโดยผู้ขนส่งไอออนบวกอินทรีย์ 2. J. Med. เคมี. 2554, 54, 4548–4558. [CrossRef] [PubMed]

19. หลี่ คิว; Guo, D.; ดง Z.; จาง W.; จางแอล.; หวาง เอสเอ็ม; Polli, เจ; Shu, Y. Ondansetron สามารถเพิ่มความเป็นพิษต่อไตที่เกิดจากซิสพลาตินผ่านการยับยั้งสารพิษหลายชนิดและโปรตีนการอัดรีด (MATEs) ท็อกซิคอล แอปพลิเค ฟา. 2556, 273, 100–109. [ข้ามอ้างอิง]

20. วิตต์เวอร์ MB; ซูร์, AA; คุริ, น.; Kido, วาย.; โคซากะ, อ.; จาง X.; มอร์ริสซี, KM; สาลี่, ก.; หวาง, Y.; Giacomini, KM Discovery ของสารยับยั้งการลำเลียงสารยับยั้งการอัดรีดสารพิษและสารยับยั้งการอัดรีดสารพิษ 1 (MATE1, SLC47A1) ที่มีศักยภาพและคัดเลือกโดยผ่านการทำโปรไฟล์ยาที่ต้องสั่งโดยแพทย์และการสร้างแบบจำลองทางคอมพิวเตอร์ เจ เมด เคมี. 2013, 56, 781–795. [CrossRef] [PubMed]