Cistanche Herba มีฤทธิ์ต้านอาการซึมเศร้าในภาวะเครียดเรื้อรังที่คาดเดาไม่ได้

ติดต่อ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 อีเมล:audrey.hu@wecistanche.com

หยาง ลี่ และคณะ

บทคัดย่อ

Cistanche tubulosa ซึ่งเป็นสายพันธุ์หนึ่งของ Cistanches Herba ได้รับการยืนยันเมื่อเร็ว ๆ นี้ว่ามีประสิทธิภาพในการต้านอาการซึมเศร้าในหนูที่มีความเครียดที่คาดเดาไม่ได้แบบ intronic (CUS) โดยการฟื้นฟูสภาวะสมดุลของจุลินทรีย์ในลำไส้ ในบทความนี้ เรามุ่งที่จะสำรวจรายละเอียดการเผาผลาญของ C. tubulosa ในหนูทดลองที่เป็นโรคซึมเศร้าปกติและที่เกิดจาก CUS ในหลอดทดลองและในร่างกาย โดยใช้ UPLC-Q-TOF-MS ซึ่งเป็นเมแทบอลิซึมของระบบทางเดินอาหารในหลอดทดลองของสารสกัดจาก Cistanche tubulosa(CTE) ได้รับการประเมินทั้งหนูปกติและหนู CUS ในขณะเดียวกัน เมแทบอลิซึมในร่างกายของ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ในหนูปกติและหนูที่หดหู่ใจได้รับการตรวจสอบในปัสสาวะและอุจจาระของหนูด้วย เมแทบอไลต์ทั้งหมด 20 และ 26 ชนิดถูกแสดงลักษณะเฉพาะจาก ในหลอดทดลอง และใน vivometabolism ในหนูปกติและหนู CUS ตามลำดับ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ถูกเผาผลาญเป็น aglycones และผลิตภัณฑ์จากการย่อยสลายของฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ (PhGs) และอิริดอยด์ไกลโคไซด์ไม่ว่าจะโดย microbiota ในลำไส้เล็กปกติหรือในหลอดทดลองในหนูทดลอง เมแทบอไลต์ระยะที่ 2 ของ aglycones และผลิตภัณฑ์จากการย่อยสลายของ PhGs และอิริดอยด์ ไกลโคไซด์คือเมแทบอไลต์หลักในปัสสาวะและอุจจาระของหนู นอกจากนี้ ความสามารถในการเผาผลาญเพื่อสร้าง glycosides และ aglycones รองใน microbiota ในลำไส้เล็กของหนูที่เป็นโรคซึมเศร้านั้นอ่อนแอกว่าใน microbiota ในลำไส้ของหนูปกติมาก ซึ่งเป็นผลมาจาก glycoside hydrolases ที่ไม่เป็นระเบียบซึ่งผลิตโดย microbiota ในลำไส้ในหนูแรท CUS depressed ผลการศึกษานี้ได้วางรากฐานสำหรับการทำความเข้าใจกระบวนการเมตาบอลิซึมและกลไกการรักษาของคุณสมบัติยากล่อมประสาทของ CTE

คีย์เวิร์ด: Cistanche tubulosa, อาการซึมเศร้าเมตาบอลิซึม, ในหลอดทดลอง, ในร่างกาย, จุลินทรีย์ในลำไส้

1. บทนำ

Cistanches Herba ได้รับการบันทึกอย่างเป็นทางการว่าเป็นลำต้นแห้งฉ่ำของ Cistanche deserticola (YC Ma) และ C. tubulosa (Schrenk) ซึ่งใช้รักษาโรคไต ความอ่อนแอ ภาวะมีบุตรยากของสตรี โรคไข้เลือดออก และอาการท้องผูกในวัยชรา [1] การศึกษาทางเภสัชวิทยาสมัยใหม่แสดงให้เห็นว่า Cistanches Herba มีฤทธิ์ทางชีวภาพต่างๆ เช่น การต่อต้านการเสื่อมสภาพของระบบประสาท การควบคุมภูมิคุ้มกัน และการอักเสบ [2,3] การสอบสวนครั้งก่อนของเราได้ยืนยันว่าสารสกัดจาก Cistanche tubulosa(CTE) ซึ่งประกอบด้วยฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ (PhGs) 48.6 เปอร์เซ็นต์) อิริดอยด์ไกลโคไซด์ 6.9 เปอร์เซ็นต์ และแซคคาไรด์รวม 20.0 เปอร์เซ็นต์ สามารถบรรเทาอาการซึมเศร้าของหนูซึมเศร้าที่เกิดจากความเครียดเรื้อรังที่คาดเดาไม่ได้ (CUS) ได้อย่างชัดเจน ฟื้นฟูสภาวะสมดุลของจุลินทรีย์ในลำไส้ [4] การศึกษาล่าสุดระบุว่าการเปลี่ยนแปลงในองค์ประกอบของจุลินทรีย์ในลำไส้สัมพันธ์กับการพัฒนาและความก้าวหน้าของภาวะซึมเศร้า [5,6] ความอุดมสมบูรณ์สัมพัทธ์ของจำพวกจุลินทรีย์ถูกรบกวนอย่างเห็นได้ชัดในหนูทดลองรุ่น CUSdepressive เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมปกติ [7] ในผู้ป่วยที่เป็นโรคซึมเศร้า ความหลากหลายและความสมบูรณ์ของจุลินทรีย์ในลำไส้ก็เปลี่ยนแปลงไปอย่างมีนัยสำคัญเช่นกัน [8] นอกจากนี้ สารประกอบต่างๆ ซึ่งรวมถึงฟีนิลทานอยด์ ไกลโคไซด์ (PhGs) และอิริดอยด์ ไกลโคไซด์ ถือเป็นองค์ประกอบหลักของ Cistanches Herba [2,3] ซึ่งถูกเผาผลาญได้ง่ายในไกลโคไซด์รองและอะไกลโคน รวมทั้งไฮดรอกซีไทโรซอล (HT), 3,4-ไดไฮดรอกซีฟีนิทิล ไกลโคไซด์ กรดเจนิโพซิดิกดีไกลโคซิเลต ฯลฯ โดยไมโครไบโอตาในลำไส้ของมนุษย์ เมแทบอไลต์เหล่านี้ถูกดูดซึมผ่านลำไส้ได้ง่ายขึ้นและออกฤทธิ์ทางชีวภาพที่สอดคล้องกับส่วนประกอบต้นแบบ[9–11] ดังนั้นเราจึงเชื่อว่าในระหว่างการเกิดขึ้นและการพัฒนาของภาวะซึมเศร้าการรบกวนของโครงสร้างจุลินทรีย์ในลำไส้จะส่งผลกระทบต่อการเผาผลาญของยาจีนโบราณ (TCMs) ในทางเดินอาหารอย่างหลีกเลี่ยงไม่ได้นอกเหนือจากการส่งผลกระทบต่อสถานะทางสรีรวิทยาของเจ้าภาพ ข้อมูลเมตาบอลิซึมที่มีอยู่ของ Cistanches Herba ส่วนใหญ่มาจากการศึกษาเมตาบอลิซึมในสัตว์ที่มีสุขภาพดี[12–15] ดังนั้นจึงมีความสำคัญทางคลินิกมากขึ้นในการตรวจสอบรายละเอียดการเผาผลาญของ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ในสภาวะทางพยาธิวิทยาในการอธิบายส่วนประกอบออกฤทธิ์ทางชีวภาพและทำความเข้าใจกลไกการทำงานของประสิทธิภาพในการต้านอาการซึมเศร้า

ในการศึกษาปัจจุบัน เราตั้งเป้าหมายที่จะอธิบายลักษณะโปรไฟล์การเผาผลาญของ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ในหนูทดลองที่มีภาวะซึมเศร้าทั้งที่มีสุขภาพดีและที่เหนี่ยวนำโดย CUS โดยแมสสเปกโตรเมตรีของเหลวโครมาโตกราฟีแบบควอดรูโพลสมรรถนะสูงพิเศษ (UPLC-Q-TOF-MS) มีการใช้น้ำย่อย น้ำย่อยในลำไส้ และจุลินทรีย์ในหนูพยาธิสภาพปกติและโรคซึมเศร้า เพื่อจำลองกระบวนการเมแทบอลิซึมของ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ในทางเดินอาหาร ในหลอดทดลอง อย่างอิสระและตามลำดับ สารเมตาโบไลต์ในร่างกายยังได้รับการอธิบายอย่างชัดเจนหลังจากการบริหารช่องปากของCTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ในหนูปกติและหนู CUS การศึกษานี้ให้ข้อมูลเชิงลึกใหม่เกี่ยวกับเมแทบอลิซึมและสารออกฤทธิ์ของ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)สำหรับภาวะซึมเศร้า

2. วัสดุและวิธีการ

2.1. วัสดุ

เก็บลำต้นแห้งของ C. tubulosa จากมณฑลเหอเทียน (ซินเจียง ประเทศจีน) ตัวอย่างตัวอย่างบัตรกำนัลได้รับการรับรองโดย Prof. Xiaobo Li และนำไปฝากไว้ที่ห้องสมุนไพรของ School of Pharmacy, Shanghai Jiao Tong University (เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน) วิธีการสกัดถูกนำมาใช้ตามที่ระบุไว้ในเอกสารเผยแพร่ก่อนหน้าของเรา [4] ดิสารสกัดจาก Cistanche tubulosaตัวอย่าง (CTE) ถูกเก็บไว้ที่ 4 องศาและละลายอีกครั้งด้วยน้ำปราศจากเชื้อก่อนใช้งาน สารละลายน้ำปราศจากเชื้อของ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)จากนั้นจึงกรองตัวอย่างผ่านเมมเบรน 0.22 ไมโครเมตร และของกรองถูกรวบรวมในหลอดที่ปลอดเชื้อ

Echinacoside ให้บริการโดยห้องปฏิบัติการของ Dr. Pengfei Tu, PekingUniversity (ปักกิ่ง, ประเทศจีน) ซื้อ Acteoside, isoacteoside, 2′-acetylacteoside และ cistanoside A จาก Sichuan Weikeqi BiologicalTechnology Co., Ltd. (เฉิงตู ประเทศจีน) ซื้อ Hydroxytyrosol, caffeic acid, 3,4-dihydroxybenzenepropionic acid, 3-hydroxyphenylpropionic acid,และ 3-phenylpropionic acid จาก Aladdin IndustrialInc (เซียงไฮ้ประเทศจีน). ความบริสุทธิ์ของแต่ละส่วนประกอบถูกกำหนดหา > 95 เปอร์เซ็นต์โดย HPLC-UV ซื้ออะซิโตไนไทรล์เกรด HPLC จากเมอร์ค (ดาร์มสตัดท์ เยอรมนี) เตรียมน้ำปราศจากไอออนจากน้ำกลั่นโดยใช้ระบบทำน้ำให้บริสุทธิ์ Milli-Q (Millipore, Bedford, MA, USA) รีเอเจนต์และสารเคมีอื่นๆ ทั้งหมดเป็นเกรดวิเคราะห์

2.2. การทดลองกับสัตว์

หนู Sprague-Dawley เพศผู้ (200 ± 20 g) ถูกจัดหามาจากบริษัทเทคโนโลยีสัตว์ทดลองแห่งแม่น้ำปักกิ่ง ไวทัล (ปักกิ่ง ประเทศจีน) และเลี้ยงในศูนย์สัตว์ทดลองของมหาวิทยาลัยเซี่ยงไฮ้เจียวทง (เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน) สัตว์เหล่านี้อยู่ในอุณหภูมิห้องที่ควบคุมโดยกลุ่ม (25 ± 2 องศา , 55 ± 10 เปอร์เซ็นต์สัมพัทธ์ความชื้นสัมพัทธ์) โดยมีวัฏจักรแสง-ความมืด 12:12 ชั่วโมง หนูได้รับอนุญาตให้เข้าถึงหนูทดลองปกติและน้ำได้ฟรีเป็นเวลา 1 สัปดาห์ สิ่งอำนวยความสะดวกและระเบียบการเกี่ยวกับสัตว์ได้รับการอนุมัติโดยคณะกรรมการจริยธรรมสัตว์ของมหาวิทยาลัย Shanghai Jiao Tong (เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน)

หลังจากปรับตัวให้เข้ากับสภาพอากาศหนึ่งสัปดาห์ หนูไร้เดียงสาสิบสองตัวถูกสุ่มแบ่งออกเป็นสองกลุ่ม (n=6) กลุ่มควบคุมและกลุ่มความเครียดที่คาดเดาไม่ได้เรื้อรัง (CUS) หนู CUS ได้รับการพัฒนาเช่นเดียวกับรายงานของเราก่อนหน้า [4] ซึ่งได้รับแรงกดดันหลายประการ: ไวท์นอยส์ (100 dB) เป็นเวลา 1 ชั่วโมง, การส่องสว่างแบบสโตรโบสโคปิกความเข้มต่ำในชั่วข้ามคืน (120 กะพริบ/นาที), ขาดน้ำเป็นเวลา 24 ชั่วโมง, ว่างเปล่า ขวดน้ำเป็นเวลา 1 ชั่วโมง (หลังจากขาดน้ำ) อดอาหารเป็นเวลา 24 ชั่วโมง การจำกัดร่างกาย (1–2 ชั่วโมง) บังคับว่ายน้ำ (5 นาที) กรงสกปรกเป็นเวลา 24 ชั่วโมง (น้ำ 200 มล. ในผ้าปูที่นอนขี้เลื่อย 100 กรัม) หยิกหาง ( 1 นาที), การกระแทกเป็นเวลา 30 นาที, การเอียงกรง 45 องศาเป็นเวลา 24 ชั่วโมง และการส่องสว่างข้ามคืน (12 ชั่วโมง) ความเครียดถูกนำไปใช้อย่างต่อเนื่องและสุ่มเป็นเวลา 4 สัปดาห์ รายละเอียดการจัดวางได้อธิบายไว้ในตาราง S1 หลังจาก 4 สัปดาห์ของความเครียด การทดสอบการตั้งค่าซูโครส การทดสอบแบบเปิด และการทดสอบการให้อาหารที่ระงับความแปลกใหม่ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [4] โครงร่างของ CUS และการทดสอบพฤติกรรมแสดงในรูปที่ S1 หลังการทดสอบพฤติกรรม ได้อุจจาระอย่างน้อย 4 ตัวจากหนูแต่ละตัวและนำไปใส่ในหลอดรูปกรวยปลอดเชื้อสำหรับการวิเคราะห์ CTE ในหลอดทดลอง(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)เมแทบอลิซึม

2.3. เมแทบอลิซึมของระบบทางเดินอาหารของ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)โดยหนูปกติและหนู CUS ในหลอดทดลอง

2.3.1. เมแทบอลิซึมของ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ในน้ำย่อยและลำไส้จำลอง

CTE . ห้าสิบมิลลิกรัม(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ถูกเติมลงในน้ำย่อยและน้ำย่อยจำลอง 10 มล. ตามลำดับ แล้ว CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ฟักที่ 37 องศาเป็นเวลา 4 ชั่วโมงในน้ำย่อยและ 6 ชั่วโมงในน้ำลำไส้ ของผสมที่เพาะเลี้ยง(1 มล.) ถูกระงับด้วยเอ็น-บิวทานอลที่อิ่มตัวด้วยน้ำ 3 มล. ทันทีที่ 0 และ 4 ชม. ในน้ำย่อย และที่ 0 และ 6 ชม. ในน้ำลำไส้ วิธีการประมวลผลของตัวอย่างที่ใช้เป็นไปตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [9]

2.3.2. เมแทบอลิซึมของ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)โดย microbiota ลำไส้ปกติและ CUS ของหนู

ขั้นแรกให้ผสมตัวอย่างอุจจาระหนูปกติและหนู CUS สดและทำให้เป็นเนื้อเดียวกันด้วยปริมาตรของน้ำซุป GAM 25 เท่า ตะกอนถูกขจัดออกโดยการกรองผ่านผ้าก๊อซสามชิ้น จากนั้น สารแขวนลอยถูกบ่มที่ 37 องศาในตู้อบแบบไม่ใช้ออกซิเจน โดยที่อากาศถูกแทนที่ด้วยส่วนผสมของแก๊ส (H2 5 เปอร์เซ็นต์ , CO2 10 เปอร์เซ็นต์ , N2 85 เปอร์เซ็นต์ ) ห้าสิบมิลลิกรัมของ CTE ถูกเติมไปยัง 5 มล. ปกติและสารแขวนลอยของหนู CUS อย่างแยกจากกัน และสารแขวนลอยถูกบ่มที่ 37 องศาเป็นเวลา 48 ชั่วโมง ของผสมที่เพาะเลี้ยงถูกกำจัดออกและสกัดด้วยเอ็นบิวทานอลที่อิ่มตัวด้วยน้ำที่ 0, 12, 24, และ 48 ชั่วโมง วิธีการประมวลผลตัวอย่างถูกอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [9]

2.3.3. เมแทบอลิซึมตามลำดับของ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)โดยน้ำย่อย น้ำในลำไส้ จุลินทรีย์ในลำไส้ปกติและ CUS หนู

ประการแรก CTE . 100 มก(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ถูกเติมลงในน้ำย่อยจำลอง 1{{10}} มล. และบ่มที่ 37 องศาเป็นเวลา 4 ชั่วโมง ปฏิกิริยาทั้งหมดถูกระงับโดยปริมาตรของ n-butanol ที่อิ่มตัวด้วยน้ำ 3 เท่า และหมุนเหวี่ยงที่ 3000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 15 นาที ตามด้วยการระเหยของส่วนลอยเหนือตะกอนภายใต้กระแสไนโตรเจน แก๊ส 37 องศา ประการที่สอง เรซิดิวถูกละลายอีกครั้งในน้ำปราศจากเชื้อ 0.4 มล. เติมลงในน้ำลำไส้จำลอง 8 มล. และบ่มที่ 37 องศาเป็นเวลา 6 ชม. ตัวอย่างด้วยน้ำย่อยถูกเตรียมในลักษณะเดียวกัน ในที่สุด เรซิดิวถูกละลายอีกครั้งในน้ำปลอดเชื้อ 0.3 มล. เติมลงในสารแขวนลอยอุจจาระหนูปกติและ CUS 6 มล. ตามลำดับ และบ่มที่ 37 องศาเป็นเวลา 48 ชั่วโมงในตู้อบแบบไม่ใช้ออกซิเจน ปฏิกิริยาหนึ่งมิลลิลิตรถูกระงับโดย n-butanol ที่อิ่มตัวด้วยน้ำ 3 มิลลิลิตรทันทีที่ 0 และ 4 ชั่วโมงในน้ำย่อย ที่ 0 และ6 ชั่วโมงในน้ำลำไส้ และที่ 0, 12, 24 และ 48 ชั่วโมงในจุลินทรีย์ในลำไส้ของหนู . ตัวอย่างถูกประมวลผลเหมือนกัน CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ในรูปแบบน้ำย่อยจำลอง

2.4. เมแทบอลิซึมของ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)โดยหนูปกติและ CUS ในร่างกาย

จากนั้นหนูแต่ละตัวในทั้งสองกลุ่มจะอยู่ในกรงเมตาบอลิซึมของแต่ละคน หลังจากการอดอาหารข้ามคืนที่ยอมให้เข้าถึงน้ำได้ฟรีเท่านั้น หนูแรททั้งหมดถูกบริหารให้ทางปากด้วยน้ำ 2 มล. ผ่านทางหลอดอาหาร เก็บตัวอย่างปัสสาวะเปล่าและอุจจาระจากหนูทั้งหมดตั้งแต่ 0 ชั่วโมง ถึง 12 ชั่วโมง นอกจากนี้ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)(400 มก./กก.) ถูกบริหารให้โดยทางสายยาง ตัวอย่างปัสสาวะและอุจจาระถูกเก็บตั้งแต่ 0 ชั่วโมง ถึง 24 ชั่วโมง ตัวอย่างปัสสาวะและอุจจาระทั้งหมดถูกเก็บไว้ที่ −80 องศาทันที

ตัวอย่างปัสสาวะและอุจจาระจากหนูปกติและหนู CUS ได้รับการบำบัดตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [12] ตัวอย่างที่เป็นผลลัพธ์ทั้งหมดถูกวิเคราะห์โดยUPLC-Q-TOF-MS

2.5. วิธีวิเคราะห์

UPLC ดำเนินการบนระบบ Waters ACQUITY UPLC (WatersCorp., Milford, MA, USA) ที่มีคอลัมน์ ACQUITY UPLC BEH C18 (100 มม. × 2.1 มม. id, 1.7 µm, Waters Corp. สหรัฐอเมริกา) โดยเกรเดียนท์เอลูชันโดยใช้ {{10}}.1 เปอร์เซ็นต์ของกรดฟอร์มิกอะซิโตไนไตรล์ (A) และ 0.1 เปอร์เซ็นต์ของกรดฟอร์มิกในน้ำ(B) ที่อัตราการไหล 0.4 มล./นาที . โปรไฟล์การไล่ระดับสีคือ: 0–5 นาที (A:5–20 เปอร์เซ็นต์ ), 5–7.5 นาที (A: 20–30 เปอร์เซ็นต์ ), 7.5–10 นาที (A: 30–70 เปอร์เซ็นต์ ), 10–11 นาที(A : 70–100 เปอร์เซ็นต์ ) และค้างไว้ 1.5 นาที การไล่ระดับสีถูกนำกลับมาใช้ใหม่เป็น 5 เปอร์เซ็นต์ใน 0.5 นาที และค้างไว้ 2.5 นาทีสำหรับการวิ่งครั้งต่อไป ปริมาตรของการฉีดคือ 3 ไมโครลิตร อุณหภูมิของเตาอบแบบเสาตั้งไว้ที่ 35 องศา

แมสสเปกโตรเมตรีดำเนินการโดยใช้เครื่องวัดมวลสาร Waters Vion IMS (Waters Corp., Milford, MA, USA) ไอออนไนซ์ถูกดำเนินการในโหมดสเปรย์ไฟฟ้าเชิงลบ (ESI−) พารามิเตอร์ MS มีดังนี้: แรงดันเส้นเลือดฝอย −2.0 kV; แรงดันกรวย 20 V; อุณหภูมิแหล่งที่มา 120 องศา ; อุณหภูมิการละลาย 500 องศา ; การไหลของก๊าซของการแตกตัวของกรวยและการละลาย 50 และ 1,000 L/h ตามลำดับ สำหรับการวัดมวลที่แม่นยำ ลิวซีน-เอนเคฟาลินถูกใช้เป็นมวลล็อคเพื่อสร้างไอออน [M–H]− (m/z 554.2615) การทดลอง MSE (Mass SpectrometryElevatedEnergy) ในฟังก์ชันการสแกนสองฟังก์ชันได้ดำเนินการดังนี้: ฟังก์ชัน 1 (พลังงานต่ำ): m/z 50–1000, เวลาในการสแกน 0.25 วินาที, ความล่าช้าระหว่างการสแกน 0.02 วินาที, พลังงานการชนกัน 6 eV; ฟังก์ชัน 2 (พลังงานสูง): m/z50–1000, เวลาสแกน 0.25 วินาที, หน่วงเวลาการสแกนระหว่าง 0.02 วินาที, เพิ่มพลังงานการชน 20–45 eV

2.6. การประมวลผลข้อมูล

ข้อมูลได้รับการประมวลผลโดยใช้ซอฟต์แวร์ UNIFI 1.8.1 (Waters Corp.,Milford, MA, USA) สำหรับการระบุเมแทบอไลต์ภายในข้อมูลดิบการสแกนแบบเต็มมวลที่แม่นยำที่รวบรวมผ่าน MSE สารประกอบถูกระบุโดยอิงจากมวลที่แม่นยำ ชิ้นส่วนในแมสสเปกโตรเมทรีพลังงานสูง เกณฑ์ความเข้มถูกกำหนดเป็น 100.0 จำนวนนับ การระบุเป้าหมาย ความทนทานต่อการจับคู่ส่วนย่อย และพารามิเตอร์อื่นๆ ถูกตั้งค่าโดยอัตโนมัติ

3. ผลลัพธ์

3.1. การเปลี่ยนแปลงพฤติกรรมในหนูที่เป็นโรคซึมเศร้าที่เกิดจาก CUS

หนูที่มีอาการซึมเศร้าที่เกิดจาก CUS ได้รับการประเมินโดยการทดสอบพฤติกรรมรวมถึงการทดสอบความพึงพอใจของซูโครส การทดสอบในสนาม และการทดสอบการให้อาหารที่ระงับความแปลกใหม่ การทดสอบ t ของนักเรียนพบว่า sucrosepreference ในการทดสอบ sucrose preference (p < .001)="" ระยะทางรวมในการทดสอบแบบ="" open-field="" (p="">< .001)="" และความหน่วงแฝงในการกินในการทดสอบการกินอาหารแบบระงับความแปลกใหม่="" (p="">< .01)="" มีนัยสำคัญ="" แตกต่างไปจากกลุ่มควบคุมหลังการรักษาด้วย="" cus="" 4-สัปดาห์="" (รูปที่="" 1)="">

3.2. การหาลักษณะเฉพาะขององค์ประกอบทางเคมีของ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)

การวิเคราะห์ส่วนประกอบต้นแบบของ CTE . อย่างครอบคลุม(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ดำเนินการโดย UPLC-Q-TOF-MS รวม 27 องค์ประกอบจาก CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ตรวจพบและแสดงลักษณะเฉพาะเบื้องต้น ซึ่งรวมถึง 20 PhGs, 5 อิริดอยด์และไอริดอยด์ ไกลโคไซด์ และโอลิโกแซ็กคาไรด์ 2 ตัว ข้อมูลโดยละเอียดรวมถึงเวลาการกักเก็บ MS ที่แม่นยำ และชิ้นส่วนของ MS/MS จะแสดงอยู่ในข้อมูลสนับสนุน (ตารางที่ S2) เพื่อให้ข้อมูลเชิงลึกเกี่ยวกับโครงสร้างขององค์ประกอบทางเคมีเหล่านี้ UPLC-Q-TOF-MS ไอออนโครมาโตแกรมทั้งหมด (TIC) ของ CTE ถูกแสดงไว้ในรูปที่ S2

3.3. เมแทบอลิซึมของระบบทางเดินอาหารของ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)โดยหนูปกติและหนู CUS ในหลอดทดลอง

ในการศึกษานี้ เมแทบอไลต์ที่เป็นไปได้ของ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)โดยปกติและ CUSrats ในหลอดทดลองถูกตรวจพบจาก TIC และระบุด้วยการรวมกันขององค์ประกอบองค์ประกอบและสเปกตรัมมวลชิ้นส่วน MS/MS ที่เปรียบเทียบกับตัวอย่างกลุ่มควบคุม เมแทบอไลต์ทั้งหมดจาก CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ในการจำลองน้ำย่อยของกระเพาะอาหารและลำไส้ จุลินทรีย์ในลำไส้ปกติและ CUS ของหนูจะแสดงรายการในตารางที่ 1

3.3.1. เมแทบอลิซึมของ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ในน้ำย่อยและลำไส้จำลอง

สาร 7 ชนิดของ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ในน้ำย่อยจำลองถูกระบุเบื้องต้นโดยมวลที่แม่นยำและข้อมูลชิ้นส่วน MSE: M1 (m/z315.1074, C14H20O8, 1.66 นาที), M4 (m/z 459.1501, C20H28O12,2.36 นาที), M5 (m/z 445.1715, C20H30O11, 2.60 นาที), M7 (m/z179.0338, C9H8O4, 2.85 นาที), M12 (m/z 785.2481, C35H46O20,4.77 นาที), M16 (m/z 827.2580, C37H48O21, 5.73 นาที) และ M18 (m/z623 .1968, C29H36O15, 5.81 นาที) ดีไกลโคซิเลชัน, ดีไฮดรอกซีเลชัน, ดีไฮโดรจีเนชัน และไอโซเมอไรเซชันถือเป็นวิถีทางเมแทบอลิซึมหลักของ CTE ในน้ำย่อย พบว่า M4 และ M5 มีน้ำหนักโมเลกุล 2 Da และ 16 Da ต่ำกว่าส่วนประกอบต้นแบบ decaffeoylacteoside และด้วยเหตุนี้จึงระบุว่าเป็นผลิตภัณฑ์ดีไฮโดรจิเนตและดีไฮดรอกซีเลตตามลำดับ M12 ถูกระบุว่าเป็นไอโซเมอร์ของอิชินาโคไซด์ ซึ่งผลิตไอออนเดียวกันกับอิชินาโคไซด์ที่ m/z 623.2178, 477.1601, 315.1055, 161.0237

ตรวจพบเมแทบอไลต์ชนิดเดียวกันหลังจาก CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)การฟักตัวในน้ำในลำไส้ เป็นที่น่าสังเกตว่ากลุ่ม caffeoyl ที่ตำแหน่ง C-6′ ในPhGs ถูกเผาผลาญได้ง่ายโดยเอนไซม์ย่อยอาหารในน้ำลำไส้เพื่อผลิตสารเมตาบอไลต์ของ decaffeyl และกรดคาเฟอีน

3.3.2. เมแทบอลิซึมของ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)โดย microbiota ลำไส้ปกติและ CUS ของหนู

รวม 20 เมแทบอไลต์ที่เปลี่ยนรูปทางชีวภาพจาก CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ตรวจพบและระบุจุลินทรีย์ในลำไส้ปกติ (รูปที่ 2) จากผลลัพธ์พบว่า PhGs ถูกย่อยสลายเป็น aglycone hydroxytyrosol (HT) M2 (m/z 153.0550, C8H10O3, 1.78 นาที) และกรด caffeic(CA) M7 (m/z 179.0338, C9H8O4, 2.85 นาที) จากนั้นจึง ถูกเผาผลาญเพิ่มเติมเป็น M3 (m/z 163.0390, C9H8O3, 2.02 นาที), M6 (m/z181.0501, C9H10O4, 2.76 นาที), M10 (m/z 195.0655, C10H12O4,4.35 นาที) และ M11 (m/z 165.0552 , C9H10O3, 4.36 นาที) โดยผ่านการดีไฮดรอกซิเลชัน, รีดักชัน และเมทิลเลชัน นอกจากนี้ วิถีเมแทบอลิซึมส่วนกลางที่ผลิตเมแทบอไลต์โดยตรงของสารประกอบต้นแบบ PhG จาก CTE ในไมโครไบโอตาในลำไส้ของหนูปกติ ได้แก่ การรีดักชัน เมทอกซิเลชัน ดีไกลโคซิเลชัน decaffeoyl ดีไฮโดรจีเนชัน และไอโซเมอไรเซชัน

หลังจากการฟักตัวใน microbiota ในลำไส้ของหนูที่เป็นโรคซึมเศร้าที่เกิดจาก CUS, CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ถูกแปลงเป็น 20 เมแทบอไลต์ผ่านเมแทบอลิซึมเดียวกับหนูปกติ

3.3.3. เมแทบอลิซึมของ CTE ตามลำดับโดยน้ำย่อย น้ำในลำไส้ จุลินทรีย์ในลำไส้ปกติและ CUS หนู

หลังจากการฟักไข่ตามลำดับในน้ำย่อย น้ำในลำไส้ จุลินทรีย์ในลำไส้ปกติและ CUS หนู หนู CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ถูกเผาผลาญเป็น 14 เมแทบอไลต์ (รวมถึง 8 ตัวด้วยน้ำย่อย, 7 ตัวด้วยน้ำลำไส้, 11 ตัวโดยปกติ, และ 10 ตัวด้วยไมโครไบโอตาในลำไส้ของหนูแรท CUS) ในกลุ่มเหล่านี้ M2(HT) และ M11 (3-hydroxyphenylpropionic acid, 3-HPP) เป็นสารเมแทบอไลต์ขั้นสุดท้ายของ PhGs หลังจากการบ่ม CTE ตามลำดับ(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ในน้ำย่อย น้ำลำไส้ และจุลินทรีย์ในลำไส้ ไม่มีความแตกต่างที่มีนัยสำคัญในเมแทบอไลต์ระหว่างหนูปกติและหนู CUS

M8, M9, M14, M17, M19 และ M20 ตรวจพบเฉพาะในเมแทบอลิซึมที่ขึ้นกับ CTE โดย microbiota ลำไส้ปกติและ CUS ของหนู เมแทบอไลต์เหล่านี้ส่วนใหญ่เป็นตัวกลางเมแทบอลิซึมที่ได้รับการเผาผลาญอย่างสมบูรณ์ไปจนถึงเมแทบอไลต์ขั้นสุดท้ายในการศึกษาเมแทบอลิซึมตามลำดับของ CTE และดังนั้นจึงตรวจพบได้ยาก

3.3.4. ความแตกต่างระหว่างอัตราการเผาผลาญของ CTE โดยปกติและจุลินทรีย์ในลำไส้ CUS

เพื่อชี้แจงความแตกต่างระหว่างอัตราการเผาผลาญของ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)โดยปกติและไมโครไบโอตาในลำไส้ของหนู CUS เนื้อหาสัมพัทธ์ของสารประกอบต้นแบบ 27 ชนิดและสารเมตาโบไลต์ 20 ชนิดหลังจากการฟักไข่ด้วยน้ำย่อย น้ำในลำไส้ จุลินทรีย์ในลำไส้ปกติและ CUS ของหนู ถูกกำหนดแยกกันและตามลำดับ (ตารางที่ S3 และ S4) ผลลัพธ์ระบุว่าแม้ว่า CTE . จะไม่พบความแตกต่างที่มีนัยสำคัญ(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)สารเมแทบอไลต์ของหนูปกติและหนูที่เป็นโรคซึมเศร้า มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญในอัตราการเผาผลาญ ตัวอย่างเช่น C2 และ C5 ถูกระบุว่าเป็น 8-กรดเอพิโลกานิกหรือไอโซเมอร์ของมัน พวกมันถูกเผาผลาญอย่างสมบูรณ์ในตัวอย่างปกติภายใน 12 ชั่วโมงของการฟักตัว อย่างไรก็ตาม ในจุลินทรีย์ในลำไส้ของหนูที่มีภาวะซึมเศร้าทางพยาธิวิทยา พวกมันถูกเผาผลาญอย่างทั่วถึงหลังจากการฟักตัว 48 ชั่วโมง เห็นได้ชัดว่าอัตราการเผาผลาญในหนูปกตินั้นเร็วกว่าอัตราในหนู CUS ผลลัพธ์ที่คล้ายกันถูกค้นพบจาก C18 (ไอโซแอคทีโอไซด์) นอกจากนี้ เป็นที่น่าสังเกตว่าพื้นที่พีคของ M12 (ไอโซเมอไรเซชันของอิไคนาโคไซด์) และ M16 (ไอโซเมอไรเซชันของทูบูโลไซด์ A) ในตัวอย่างปกตินั้นใหญ่กว่าในตัวอย่าง CUS มาก ซึ่งบ่งชี้ว่าปฏิกิริยาไอโซเมอไรเซชันของ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)พบได้บ่อยในจุลินทรีย์ในลำไส้ของหนูปกติในโรคซึมเศร้าในจุลินทรีย์ในลำไส้ของหนู

3.4. เมแทบอลิซึมของ CTE โดยปกติและหนู CUS ในร่างกาย

โดยการเปรียบเทียบตัวอย่างทางชีววิทยาของกลุ่มที่บำบัดด้วย CTE กับตัวอย่างชีวภาพที่ว่างเปล่า สารเมตาโบไลต์ทั้งหมด 26 รายการ (สารประกอบ 1-26) ของ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ตรวจพบหนูที่ไม่ปกติและ CUS (ตารางที่ 2) โครมาโตแกรม UPLC ทั่วไปของตัวอย่างปัสสาวะหนูปกติและ CUS แสดงไว้ในรูปที่ 3

3.4.1. การหาลักษณะพิเศษของสารเมแทบอไลต์ของ CTE ในราทูรีนปกติและ CUS

รวม 18 เมแทบอไลต์ในร่างกายของ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ในตัวอย่างปัสสาวะของหนูปกติถูกระบุอย่างไม่แน่นอน เมแทบอไลต์สำหรับการเสื่อมสภาพของ PhG ซึ่งรวมถึงHT และ CA และซัลเฟตเพิ่มเติมของพวกมัน (สารประกอบ 1, 2, 3, 5, 8 และ 16), เมทิลเลชัน (6, 21, 22 และ 24) และเมทอกซิเลชัน (13 และ 14) เมทาโบไลต์คือ สารหลักในปัสสาวะของหนูปกติ อิริดอยด์ ไกลโคไซด์ถูกเผาผลาญอย่างรวดเร็วไปยังแอกไลโคน (23, 25 และ 26) ผ่านดีไกลโคซิเลชัน เป็นที่น่าสังเกตว่าไม่มีส่วนประกอบต้นแบบใดตรวจพบในตัวอย่างปัสสาวะของหนูปกติ

ในตัวอย่างปัสสาวะของหนูที่เป็นโรคซึมเศร้า พบสาร CTE . 22 ชนิด(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ถูกตรวจพบและมีลักษณะเฉพาะ สารประกอบต้นแบบหนึ่งชนิด 8-กรดเอพิโลกานิก ถูกตรวจพบในปัสสาวะของหนูที่เป็นพยาธิวิทยา สารเมตาโบไลต์อื่นๆ เป็นไปตามที่พบในปัสสาวะของหนูปกติ ซึ่งรวมถึงสารที่มีซัลเฟต (1, 2, 3, 8, 10, และ 16), เมทิลเลตเมแทบอไลต์ (6, 11, 19, และ22), เมทอกซิเลตเมตาโบไลต์ (13 และ 14) ของ HT และ CA และ theaglycones ของ iridoid glycosides (25 และ 26)

3.4.2. ลักษณะของสารเมตาบอไลต์ของ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ในอุจจาระปกติและ CUS ratfeces

ในการศึกษานี้ เมแทบอไลต์เพียงตัวเดียว (สารประกอบ 20, 3-HPP) ของ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)พบในอุจจาระของหนูปกติ PhGs ส่วนใหญ่ถูกลดระดับลงใน CA ก่อน จากนั้นจึงผ่านเมแทบอลิซึมเพิ่มเติมไปเป็นจุลินทรีย์เมตาบอไลต์หลัก 3-HPP ในตัวอย่างอุจจาระจากหนูแรท CUS เมแทบอไลต์ 3 ตัวถูกแสดงลักษณะเฉพาะ ซึ่งรวมถึงซัลเฟต 3-HPP (สารประกอบ 16) และซัลเฟต HT (สารประกอบ 2 และ 3)

3.4.3. ความแตกต่างระหว่าง metabolites ในร่างกายของ CTE ในปกติและ CUSrats

หลังการให้ CTE . ทางปาก(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)การเผาผลาญในร่างกายแสดงให้เห็นความแตกต่างที่ชัดเจนในหนูทดลองที่มีสุขภาพดีและเป็นโรคซึมเศร้า ตรวจพบสารเมแทบอไลต์ 21 ชนิด (สารประกอบ 1–3, 5, 6, 8–14, 16, 17 และ 19–26) ทั้งในตัวอย่างหนูที่มีสุขภาพดีและ CUS สารประกอบ 23 (กรดดีไกลโคซิเลตเจนิโพซิดิก) ถูกระบุเฉพาะในตัวอย่างหนูที่มีสุขภาพดีเท่านั้น ในขณะที่สารประกอบ 4 (HT), 7 (8-กรดเอพิโลกานิก), 15 (3, 4-กรดไดไฮดรอกซีเบนซีนโพรพิโอนิก) และ 18 ({{ 19}}การคอนจูเกต HPP กลูคูโรไนด์) ตรวจพบในตัวอย่างหนูทดลอง CUS เท่านั้น โดยสรุป องค์ประกอบต้นแบบถูกตรวจพบในหนู CUS เท่านั้น ในขณะที่มีการค้นพบสารเมตาโบไลต์ในเฟส II มากขึ้นในหนูปกติ

4. การอภิปราย

ในการศึกษานี้ มีการใช้แบบจำลองการฟักไข่ในหลอดทดลอง 3 แบบ ได้แก่ น้ำย่อย น้ำในลำไส้ จุลินทรีย์ในลำไส้ปกติและ CUS ของหนูแรท อย่างอิสระและต่อเนื่องกันเพื่อตรวจสอบรายละเอียดการเผาผลาญในทางเดินอาหารของ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ในหลอดทดลอง พบว่า PhGsand iridoid glycosides ใน CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ถูกเผาผลาญอย่างรวดเร็วไปยังไกลโคไซด์รองและอะไกลโคนของพวกมันโดยไมโครไบโอตาในลำไส้ของหนูที่เป็นโรคซึมเศร้าที่เหนี่ยวนำโดย CUS หลังจากนั้นการเผาผลาญในร่างกายของ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ในหนูปกติและหนู CUS ก็ได้รับการยืนยันเช่นกัน เส้นทางการเผาผลาญที่เสนอสำหรับ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ในหนูที่เป็นโรคซึมเศร้าที่มีสุขภาพดีและเกิดจาก CUS แสดงไว้ในรูปที่ 4 PhGs เช่น echinacoside และ acteoside ถูกเผาผลาญเป็น HT และ CA และ CA ได้รับการเผาผลาญเพิ่มเติมไปยังเมแทบอไลต์ของจุลินทรีย์ที่สำคัญ 3-HPP จากนั้น HT, CA และ 3-HPP ถูกเผาผลาญไปยังเมแทบอไลต์ที่มีซัลเฟต เมทิล และเมทอกซีเลตของพวกมัน ไกลโคไซด์อิริดอยด์ซึ่งรวมถึงกรดเจนิโพซิดิก, แคนคาโนไซด์ A และแคนคาโนไซด์ N ถูกเผาผลาญเป็นอะไกลโคนของพวกมันผ่านการดีไกลโคซิเลชัน สิ่งเหล่านี้แสดงให้เห็นเพิ่มเติมว่า PhGs และอิริดอยด์ ไกลโคไซด์ใน CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ถูกเผาผลาญอย่างรวดเร็วไปยังไกลโคไซด์รองและอะไกลโคนในหนูแรท CUS เมแทบอไลต์เหล่านี้โดยปกติจะแสดงการดูดซึมของลำไส้ที่ดีขึ้นและการดูดซึมเพื่อให้ดูดซึมเข้าสู่กระแสเลือดต่อไปเพื่อออกแรงทางชีวภาพ [16–18] เป็นที่น่าสังเกตว่าไอโซเมอไรเซชันเป็นที่แพร่หลายสำหรับ PhGs ในทางเดินอาหาร มีการระบุเมแทบอไลต์ที่เกี่ยวข้องหลังจากถูกเปรียบเทียบกับเวลาการคงอยู่ของ UPLC ของสารประกอบต้นแบบของพวกมันโดยอิงตามโปรไฟล์การไล่ระดับสี UPLC ในอุดมคติที่ได้รับการปรับแต่ง

กรดคาเฟอีนเป็นผลิตภัณฑ์ย่อยสลายเบื้องต้นของ CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)โดยจุลินทรีย์ในลำไส้ของหนูพยาธิวิทยาซึมเศร้า สิ่งพิมพ์ก่อนหน้านี้รายงานว่ากรดคาเฟอีนก่อให้เกิดอาการซึมเศร้าในการทดสอบการว่ายน้ำในหนูทดลอง ทั้งระดับ mRNA ที่มาจากสมองจากปัจจัย neurotrophic (BDNF) ในเยื่อหุ้มสมองส่วนหน้าและระดับ TrkB mRNA ใน theamygdala ลดลงอย่างมีนัยสำคัญหลังจากการทดสอบว่ายน้ำแบบบังคับ และการลดลงก่อนหน้านี้ถูกยับยั้งอย่างมีนัยสำคัญโดยกรด caffeic [19] Hydroxytyrosol เป็น aglycone ของ PhGs ซึ่งปกป้อง neurogenesis และองค์ความรู้โดยการป้องกันการลดลงของโปรตีนประสาท BDNF [20] ที่เกิดจากความเครียด ดังนั้นจึงจำเป็นต้องให้ความสนใจมากขึ้นกับสารออกฤทธิ์ทางชีวภาพบางชนิด (เช่น HT และ CA) ที่เปลี่ยนแปลงโดยจุลินทรีย์ในลำไส้หลังการให้ยาทางปาก

นอกจากนี้ การค้นพบนี้ให้หลักฐานว่าในจุลินทรีย์ในลำไส้ที่เป็นโรคซึมเศร้า ความสามารถในการเผาผลาญเพื่อสร้างไกลโคไซด์รองและ aglycones นั้นอ่อนแอกว่าจุลินทรีย์ในลำไส้ของหนูที่ไม่ปกติอย่างเห็นได้ชัด สาเหตุน่าจะมาจากการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างที่เกิดจากภาวะซึมเศร้าของจุลินทรีย์ในลำไส้ ซึ่งนำไปสู่กิจกรรมที่ลดลงของเอ็นไซม์เมแทบอลิซึมที่ผลิตโดยจุลินทรีย์ในลำไส้ [21] ที่น่าสนใจจากการศึกษาก่อนหน้านี้พบว่าไฟลัมแบคเทอรอยเดสเข้ารหัสยีน lyase ไกลโคไซด์และโพลีแซคคาไรด์ lyase ที่อุดมสมบูรณ์ที่สุดสำหรับการไฮโดรไลซิสของไกลโคไซด์และความแตกแยกของคาร์โบไฮเดรตเชิงซ้อนด้วยกลไกการกำจัด [22] โดยเฉพาะ Bacteroides spp. รวมทั้ง B. caccae, B. dorei, B. finegoldii, B. fragilis, B.ลำไส้เล็ก, B. ovatus, B. thetaiotaomicron, B. uniformis และB. xylanisolvens แสดงจำนวนยีนที่เข้ารหัส GHs และ PLs ที่โดดเด่น Parabacteroides distasonis ก็มีลักษณะเช่นเดียวกัน [22] การศึกษาก่อนหน้านี้ของเรายืนยันว่า 28-วันเรื้อรังกระตุ้นความเครียดที่คาดเดาไม่ได้ลดความอุดมสมบูรณ์สัมพัทธ์ของจำพวก Bacteroides, Parabacteroides, Butyricimonas และ Weissella ในขณะที่ Ruminococcus และ Deinococcus เพิ่มขึ้นในหนู [4] เป็นที่น่าสังเกตว่า Bacteroides และ Parabacteroides เป็นแท็กซ่าของจุลินทรีย์ที่อุดมสมบูรณ์ที่สุดสองชนิดซึ่งคิดเป็นสัดส่วนประมาณ 20 เปอร์เซ็นต์ในหนูปกติ หลังการรักษา CUS ความอุดมสมบูรณ์สัมพัทธ์ของแบคเทอรอยเดสและพาราแบคเทอรอยเดสลดลงอย่างรวดเร็วเหลือประมาณ 5 เปอร์เซ็นต์ในหนูทดลองที่เป็นโรคซึมเศร้า ดังนั้น สิ่งนี้จะนำไปสู่การลดจำนวนเอนไซม์ GH และ PL ทั้งหมดในหนู CUS อย่างหลีกเลี่ยงไม่ได้ และจะรบกวนปฏิกิริยา deglycosylated โดย CUS depressive microbiota ในลำไส้ภายหลังการให้ CTE ทางปาก(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ในหนูรุ่น

5. สรุป

ในการศึกษานี้ เทคนิค UPLC-Q-TOF-MS ได้ถูกจัดตั้งขึ้นและประยุกต์ใช้ในการคัดกรองและระบุเมตาบอไลต์ของสารสกัดจาก Cistanche tubulosaในหนูที่เป็นโรคซึมเศร้าปกติและ CUS ในหลอดทดลองและในร่างกาย ผลการวิจัยพบว่า CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)ถูกเผาผลาญเป็น aglycones และผลิตภัณฑ์จากการเสื่อมสภาพของ PhGs และอิริดอยด์ ไกลโคไซด์ โดยจุลินทรีย์ในลำไส้ที่มีสุขภาพดีและเป็นโรคซึมเศร้า หลังการให้ CTE . ทางปาก(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa), เฟส II metabolites ของ aglycones และผลิตภัณฑ์จากการย่อยสลายของ PhGs และ iridoidglycosides ส่วนใหญ่พบในปัสสาวะของหนู ความสามารถในการเผาผลาญเพื่อสร้าง glycosides และ aglycones ทุติยภูมิใน microbiota ของลำไส้เล็กที่เป็นโรคซึมเศร้านั้นอ่อนแอกว่าใน microbiota ในลำไส้ของหนูปกติมาก ซึ่งเป็นผลมาจาก glycosidehydrolases ที่ไม่เป็นระเบียบซึ่งผลิตโดย microbiota ในลำไส้ในหนูที่หดหู่ CUS การศึกษานี้ให้มุมมองใหม่สำหรับในภายหลัง การพัฒนา CTE(สารสกัดจาก Cistanche tubulosa)เป็นยากล่อมประสาทที่อาจเกิดขึ้น

รับทราบ

งานนี้ได้รับการสนับสนุนโดยทุนจากโครงการวิจัยและพัฒนาหลักแห่งชาติของจีน (2017YFC1702400)

ภาคผนวก ก. ข้อมูลเสริม

สามารถดูข้อมูลเพิ่มเติมของบทความนี้ได้ทางออนไลน์ที่ HTTPS://doi.org/10.1016/j.jchromb.2019.121728

จาก: ' ในหลอดทดลองและการเผาผลาญในร่างกายของสารสกัดจาก Cistanche tubulosaในหนูที่เป็นโรคซึมเศร้าที่เกิดจากความเครียดปกติและเรื้อรังที่คาดไม่ถึงโดยหยาง ลี่ และคณะ

---Journal of Chromatography B 1125 (2019) 121728

อ้างอิง

[1] Chinese Pharmacopoeia Commission, The Pharmacopeia of the People's Republic of China, 2015 ed., China Medical Science Press, ปักกิ่ง, จีน, 2015, p. 135 ส่วนที่ 1
[2] Y. Jiang, P.-F. Tu, การวิเคราะห์องค์ประกอบทางเคมีในสายพันธุ์ Cistanche, J. Chromatogr 1216 (2552) 2513-2522
[3] Z. Fu, X. Fan, X. Wang, X. Gao, Cistanches Herba: ภาพรวมของคุณสมบัติทางเคมี เภสัชวิทยา และเภสัชจลนศาสตร์ J. Ethnopharmacol (2017), https://doi.org/10.1016/j.jep.2017.10.015.
[4] Y. Li, Y. Peng, P. Ma, H. Yang, H. Xiong, M. Wang, C. Peng, P. Tu, X. Li, ฤทธิ์คล้ายยากล่อมประสาทของสารสกัดจาก Cistanche tubulosaในหนูที่มีความเครียดเรื้อรังที่คาดเดาไม่ได้ผ่านการฟื้นฟูสภาวะสมดุลของจุลินทรีย์ในลำไส้ด้านหน้า ฟา. (2018), https://doi.org/10.3389/fphar.2018.0967.
[5] JA Foster, MV Neufeld, Gut-brain axis: microbiome มีอิทธิพลต่อความวิตกกังวลและภาวะซึมเศร้าอย่างไร Trends Neurosci 36 (2013) 305–312.
[6] E. Sherwin, TG Dinan, JF Cryan, พัฒนาการล่าสุดในการทำความเข้าใจบทบาทของจุลินทรีย์ในลำไส้ในสุขภาพและโรคของสมอง, แอน นิวยอร์ก อเคด วิทย์. 12 (2017) e0177977
[7] Y. Meng, H. Jia, Z. Chao, Y. Yong, Z. Yang, M. Yang, Z. Zou, การเปลี่ยนแปลงในจุลินทรีย์ในลำไส้และฟีโนไทป์การเผาผลาญของอุจจาระที่เกี่ยวข้องกับภาวะซึมเศร้าโดยการจัดลำดับยีน 16S rRNA และ LC/ เมแทบอลิซึมที่ใช้ MS, J. Pharm ไบโอเมด ก้น 138 (2017) 231–239.

[8] JR Kelly, Y. Borre, BC O', E. Patterson, AS El, J. Deane, PJ Kennedy, S. Beers, K. Scott, G. Moloney, การถ่ายโอนบลูส์: จุลินทรีย์ในลำไส้ที่เกี่ยวข้องกับภาวะซึมเศร้าก่อให้เกิด การเปลี่ยนแปลงทางระบบประสาทในหนู เจ. จิตเวช. ความละเอียด.. 82 (2016) 109–118.
[9] L. Yang, P. Ying, M. Wang, P. Tu, X. Li, เมแทบอลิซึมในทางเดินอาหารของมนุษย์ของสารสกัดจากน้ำ Cistanches Herba ในหลอดทดลอง: การอธิบายรายละเอียดการเผาผลาญตามการระบุเมตาบอไลต์ที่ครอบคลุมในน้ำย่อย, ลำไส้ น้ำผลไม้, แบคทีเรียในลำไส้ของมนุษย์, และไมโครโซมในลำไส้, J. Agric. เคมีอาหาร. 65 (2017) 7447–7456
[10] Y. Li, G. Zhou, S. Xing, P. Tu, X. Li, การระบุสารเมตาโบไลต์ของ echinacoside ที่ผลิตโดยแบคทีเรียในลำไส้ของมนุษย์โดยใช้โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงพิเศษ/quadrupole time-of-flight mass spectrometry, J. เกษตร เคมีอาหาร. 63 (2015) 6764–6771.
[11] Y. Li, G. Zhou, Y. Peng, P. Tu, X. Li, การคัดกรองและการระบุสารเมตาโบไลต์ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ทั่วไปสามชนิดจาก Cistanches Herba โดยแบคทีเรียในลำไส้ของมนุษย์โดยใช้ UPLC/Q-TOF-MS, J. เภสัช. ไบโอเมด ก้น 118 (2016) 167–176.
[12] L. Yang, P. Ying, M. Wang, G. Zhou, Y. Zhang, X. Li, การตรวจคัดกรองอย่างรวดเร็วและการระบุความแตกต่างระหว่าง metabolites ของ Cistanche deserticola และ C. tubulosa water extract ในหนูโดย UPLC- การวิเคราะห์การจดจำรูปแบบรวม Q-TOF-MS, J. Pharm ไบโอเมด ก้น 131 (2016) 364–372.
[13] C. Q, P. Y, B. X, Z. W, C. L, L. X, แสดงลักษณะเฉพาะของสารเมตาบอไลต์ของ echinacoside และ acteoside จาก Cistanche tubulosa ในพลาสมาของหนู น้ำดี ปัสสาวะ และอุจจาระอย่างเป็นระบบ UPLC-ESI-Q-TOF-MS, ไบโอเมด โครมาโตก. 30 (2016) 1406–1415.
[14] Y. Wang, H. Hao, G. Wang, P. Tu, Y. Jiang, Y. Liang, L. Dai, H. Yang, L. Lai, C. Zheng, วิธีการระบุเมตาบอไลต์ตามลำดับของ phenylethanoid glycoside ทั่วไป, echinacoside, ขึ้นอยู่กับเวลาดักจับโครมาโตกราฟีของเหลวของ
การวิเคราะห์มวลสารการบิน Talanta 80 (2009) 572–580
[15] C. Jia, H. Shi, W. Jin, K. Zhang, Y. Jiang, M. Zhao, P. Tu, เมแทบอลิซึมของ echinacoside สารต้านอนุมูลอิสระที่ดีในหนู: การแยกและการระบุสารเมตาบอลิซึมของน้ำดี ยาเมตาบ. จำหน่าย 37 (2009) 431–438.
[16] J. Xu, HB Chen, SL Li, การทำความเข้าใจกลไกระดับโมเลกุลของการทำงานร่วมกันระหว่างยาสมุนไพรและจุลินทรีย์ในลำไส้, Med. ความละเอียด รายได้ 37 (2017) 1140-1185
[17] H. Liu, J. Yang, F. Du, X. Gao, X. Ma, Y. Huang, F. Xu, W. Niu, F. Wang, Y. Mao, การดูดซึมและการจัดการของ ginsenosides หลังช่องปาก การให้สารสกัด Panax notoginseng แก่หนู, Drug Metab. จำหน่าย 37 (2009) 2290–2298.
[18] JM Laparra, Y. Sanz, S. Schaffer, F. Visioli, ปฏิกิริยาของจุลินทรีย์ในลำไส้กับส่วนประกอบอาหารที่ใช้งานได้และอาหารเสริม, Pharmacol ความละเอียด 61 (2010) 219–225.
[19] H. Takeda, M. Tsuji, T. Yamada, J. Masuya, K. Matsushita, M. Tahara, M. Iimori, T. Matsumiya, กรด Caffeic ลดทอนการลดลงของการแสดงออกของเยื่อหุ้มสมอง BDNF mRNA ที่เกิดจากการสัมผัสกับการบังคับ ความเครียดว่ายน้ำในหนู Eur. เจ. ฟาร์มาคอล. 534 (2549) 115–121.
[20] A. Zheng, L. Hao, C. Ke, X. Jie, Z. Xuan, L. Yuan, C. Cong, J. Liu, Z. Feng, การบริหาร hydroxytyrosol ของมารดาช่วยเพิ่มการสร้างเซลล์ประสาทและการทำงานขององค์ความรู้ในภาวะเครียดก่อนคลอด ลูกหลาน, เจ. นุ. ไบโอเคมี. 26 (2015) 190–199.
[21] H. Li, J. He, W. Jia, อิทธิพลของ microbiota ในลำไส้ต่อเมแทบอลิซึมของยาและความเป็นพิษ, Expert Opin. ยาเมตาบ. ท็อกซิคอล 12 (2016) 31.
[22] KA El, F. Armougom, JI Gordon, D. Raoult, B. Henrissat, ความอุดมสมบูรณ์และความหลากหลายของเอนไซม์ที่ทำงานด้วยคาร์โบไฮเดรตใน microbiota ในลำไส้ของมนุษย์, Nat. รายได้ไมโครไบโอล 11 (2013) 497–504.