thภาษา
หน้าหลัก / ความรู้ / เนื้อหา

ความรู้

การเปลี่ยนแปลงของเยื่อบุผิวไปเป็น Mesenchymal ที่เกิดจากภาวะขาดออกซิเจนในเซลล์เยื่อบุผิวท่อใกล้เคียงผ่าน MiR-545-3p–TNFSF10

Mar 30, 2022

เหมยชวนกัว 1, Wei-An Chang 2,3et al


เชิงนามธรรม:ภาวะขาดออกซิเจนถือเป็นหนึ่งในกลไกทางพยาธิสรีรวิทยาของการบาดเจ็บที่ไตและความก้าวหน้าต่อไปไตวาย. Epithelial-to-mesenchymal Transition (EMT) ในท่อไตเป็นกระบวนการที่สำคัญของการเกิดพังผืดในไต การศึกษานี้ใช้การวิเคราะห์การถอดรหัสเพื่อตรวจสอบ EMT ที่เกิดจากภาวะขาดออกซิเจนผ่าน EMT ที่มอดูเลต microRNA (miRNA) ในเซลล์เยื่อบุผิวท่อใกล้เคียง (PTECs) การจัดลำดับ RNA เปิดเผยว่า miRNA แปดตัวได้รับการควบคุมและ miRNA สามตัวถูกปรับลดใน PTEC ที่เพาะเลี้ยงภายใต้ภาวะขาดออกซิเจนเมื่อเปรียบเทียบกับนอร์ม็อกเซีย ในบรรดา 11 miRNAs นั้น miR-545-3p มีการแสดงออกสูงสุดใน PTEC ที่สัมผัสกับภาวะขาดออกซิเจน และ miR-545-3p ยับยั้งการแสดงออกของลิแกนด์ที่กระตุ้นการตายของเซลล์ (TRAIL/TNFSF10) ที่เกี่ยวข้องกับปัจจัยการตายของเซลล์ EMT ที่เกิดจากภาวะขาดออกซิเจนใน PTECs ผ่านการมอดูเลต miR-545-3p–TNFSF10 และ TNFSF10-EMT ที่ลดทอนผลลัพธ์จากการขาดออกซิเจนหรือ miR-545-3p การเลียนแบบการถ่ายเลียนแบบ การค้นพบนี้ให้มุมมองใหม่ๆ เกี่ยวกับกฎระเบียบเฉพาะของปฏิสัมพันธ์ miR-545-3p–TNFSF10 และผลการรักษาที่อาจเกิดขึ้นจากการบาดเจ็บของไตที่เกิดจากการขาดออกซิเจน

คีย์เวิร์ด: ขาดออกซิเจน; miR-545-3p; TNFSF10; การเปลี่ยนเยื่อบุผิวไปเป็นเยื่อหุ้มเซลล์ เซลล์เยื่อบุผิวท่อใกล้เคียง การวิเคราะห์การถอดรหัส

ติดต่อ:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

cistanche can improve kidney function

ประโยชน์ของ cistanche ทะเลทราย: ปรับปรุงการทำงานของไตและบรรเทาอาการบาดเจ็บที่ไต

1. บทนำ

โรคไตเป็นปัญหาด้านสุขภาพระดับโลก ซึ่งเพิ่มการเจ็บป่วยและการตาย และทำให้ภาระทางการเงินทั่วโลกแย่ลงไปอีก การเกิดพังผืดในไตเป็นจุดสังเกตของความก้าวหน้าที่ไม่ดีของโรคไตต่างๆ ซึ่งนำไปสู่โรคไตระยะสุดท้าย [1]

ภาวะขาดออกซิเจนมีบทบาทสำคัญในเนื้อเยื่อไต บาดเจ็บและการลุกลามเป็นพังผืดในไต [2] ภาวะขาดออกซิเจนเป็นตัวควบคุมที่มีศักยภาพของกระบวนการหลายเซลล์ รวมถึงเมแทบอลิซึม การเจริญเติบโต และการอยู่รอดของเซลล์ผ่านกลไกการตรวจวัดออกซิเจน [3] การตอบสนองต่อการถอดรหัสต่อการกีดกันออกซิเจนส่วนใหญ่อาศัยปัจจัยที่ทำให้เกิดภาวะขาดออกซิเจน (HIF) ซึ่งทำงานในระหว่างการพัฒนาตามปกติและในกระบวนการทางพยาธิวิทยาที่เกี่ยวข้องกับความพร้อมของออกซิเจนที่ลดลง [4] ภาวะขาดออกซิเจนเรื้อรังสามารถกระตุ้นการตอบสนองต่อความเสียหายของไตและทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงฟีโนไทป์ที่ไม่สามารถย้อนกลับได้ในเซลล์เยื่อบุผิวท่อ ทำให้เกิดพังผืดของไต [5,6] Epithelial-to-mesenchymal Transition (EMT) เป็นกระบวนการที่สำคัญของการเกิดพังผืดในไตโดยที่เซลล์เยื่อบุผิวสูญเสียลักษณะเยื่อบุผิวและได้คุณสมบัติ mesenchymal [7,8] การกระตุ้นการส่งสัญญาณ HIF ในเซลล์เยื่อบุผิวของไตอาจส่งเสริมการสร้างพังผืดโดยการอำนวยความสะดวก EMT [9] การเปลี่ยนแปลงในระดับออกซิเจนและการกระตุ้นการส่งสัญญาณขาดออกซิเจนผ่าน HIF เกิดขึ้นเนื่องจากตัวกระตุ้นและตัวปรับสัญญาณที่สำคัญของ EMT [10] อย่างไรก็ตาม กลไกระดับโมเลกุลที่เป็นสาเหตุของ EMT และการเกิดพังผืดในไตยังไม่เป็นที่เข้าใจอย่างถ่องแท้

MicroRNAs (miRNAs) เป็นปัจจัยควบคุมหลังการถอดเสียง ถือเป็นตัวควบคุมที่ทรงพลังของการแสดงออกของยีนและฟีโนไทป์ของเซลล์ หลักฐานที่สะสมแสดงให้เห็นว่าการขาดออกซิเจนปรับการสร้างชีวภาพและกิจกรรมของ miRNAs [11] การศึกษาบางชิ้นได้รายงานการแสดงออกที่แตกต่างกันของ miRNAs และผลกระทบต่อการพัฒนา EMT และการเกิดพังผืดในไตภายใต้ภาวะขาดออกซิเจน [12–14] Du และคณะ เสนอว่าการปรับลด miR-34 EMT ที่ได้รับการส่งเสริมในเซลล์เยื่อบุผิวแบบท่อ [13] Xie และคณะ บ่งชี้ว่าการปรับเพิ่มของ miR-155 ส่งผลให้เกิดพังผืดในท่อใกล้เคียง [14] อย่างไรก็ตาม ไม่ว่า miRNAs จะเป็นสื่อกลางในเส้นทางการส่งสัญญาณที่ทำให้เกิดโรคของ EMT ที่เกิดจากภาวะขาดออกซิเจนในเซลล์เยื่อบุผิวท่อใกล้เคียง (PTECs) หรือไม่นั้นยังไม่ได้รับการสำรวจอย่างดีโดยใช้การวิเคราะห์การถอดรหัส

ดังนั้น ในการศึกษานี้ เราใช้การวิเคราะห์ลำดับอาร์เอ็นเอขนาดเล็กของ PTECs ภายใต้สภาวะนอร์ม็อกเซียและภาวะขาดออกซิเจน เพื่อตรวจสอบกลไกที่เป็นไปได้ในการควบคุมเส้นทางการส่งสัญญาณที่เกิดจากการขาดออกซิเจนของการบาดเจ็บที่ไต

cistanche is good for choric kidney disease

cistanche tcmดีสำหรับโรคไต choric

2. วัสดุและวิธีการ

2.1. การเพาะเลี้ยงเซลล์และการสังเกตสัณฐานวิทยา

PTEC ของมนุษย์ (ATCC PCS{{0}}) ถูกเพาะเลี้ยงในตัวกลางที่เป็นเบสของเซลล์เยื่อบุผิวของไต (ATCC PCS400030™) บวก 0.5 เปอร์เซ็นต์ของทารกในครรภ์จากวัวในซีรัม (FBS) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต เซลล์ HK-2 ถูกซื้อจาก American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA) เซลล์ HK-2 ถูกเพาะเลี้ยงใน keratinocyte-SFM (GIBCO) โดยเสริม FBS 2 เปอร์เซ็นต์ เซลล์ถูกเพาะเลี้ยงภายใต้สภาวะปกติ (O2, 21 เปอร์เซ็นต์) และภาวะขาดออกซิเจน (O2, 1 เปอร์เซ็นต์)

ลักษณะของ EMT ใน PTEC ของมนุษย์ถูกระบุโดยการสังเกตแบบต่อเนื่องของการเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาของพวกมันโดยใช้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง (Nikon ECLIPSE TE20000-S, Nikon, Tokyo, Japan)

2.2. การวิเคราะห์ Western Blot

โปรตีนทั้งหมดของเซลล์ HK-2 ถูกสกัดโดยใช้ RIPA (การทดสอบด้วยภูมิคุ้มกันทางวิทยุ) ไลซิสบัฟเฟอร์ (EMD Millipore, Burlington, MA, USA) โปรตีนที่แปลงสภาพถูกแยกออกโดยอิเล็กโตรโฟรีซิส SDS-PAGE 9-11 เปอร์เซ็นต์ จากนั้นจึงถ่ายโอนไปยังเมมเบรน PVDF หลังจากการปิดกั้นและการทำให้อิมมูโนบล็อตติงโดยแอนติบอดีปฐมภูมิและทุติยภูมิจำเพาะ

แอนติบอดีต้าน HIF-1 (Catalog #nb100-105, Novus), HIF-2 (Catalog #7096s, Cell Signaling), N-cadherin (Catalog #610921, BD Biosciences), vimentin ( แค็ตตาล็อก #550513, BD Biosciences), E-cadherin (Catalog #610182, BD Biosciences), slug (Catalog #9585s, Cell Signaling) และ GAPDH (Catalog #MAB374, EMD Millipore) ถูกนำมาใช้ สัญญาณของรอยเปื้อนถูกจับโดยใช้ระบบ Proteinsimple plus Fluorchem Q (Alpha Innotech, San Leandro, CA, USA) การวัดความหนาแน่นของ blots คำนวณโดยใช้ซอฟต์แวร์ Image J (Bethesda, MD, USA)

2.3. การจัดลำดับ RNA ขนาดเล็ก

HK-2 cells were cultured under hypoxia or normoxia conditions for 48 h. NGS was performed to examine the miRNA profiles of HK-2 cells. Trizol® Reagent (Invitrogen, Waltham, MA, USA) was utilized to extract total RNA from the harvested cells, which were isolated for further RNA preparation and small RNA-seq by Welgene Biotechnology Company (Welgene, Taipei, Taiwan). The quality of the extracted RNA was evaluated by an RNA integrity number (RIN), which was measured using an Agilent Bioanalyzer (Agilent Technology, Santa Clara, CA, USA). Samples were prepared to manufacture the small RNA library and then to execute deep sequencing by the Illumina sample preparation kit. PCR amplification was performed to ligate total RNA with 30 and 50 adaptors and to reverse￾transcription into cDNA. cDNA constructs were separated using 6% polyacrylamide gel Biomolecules 2021, 11, 1032 3 of 14 electrophoreses, and 18–40 nucleotide RNA fragments (140–155 nucleotide in length with both adapters) were extracted. The sequencing of the libraries was performed using an Illumina GAIIx instrument (50 cycle single read) and then the results were processed by the Illumina software. The differentially expressed miRNAs between HK-2 cells treated with normoxia or hypoxia were defined at >2-fold change and >10 อ่านต่อล้าน

2.4. ความพร้อมใช้งานของข้อมูล

ข้อมูลการจัดลำดับ RNA ที่สร้างขึ้นในเอกสารนี้ได้รับการฝากไว้ใน GEO ภายใต้ภาคยานุวัติ GSE178810

2.5. การแยก RNA การถอดเสียงแบบย้อนกลับ และ PCR แบบเรียลไทม์เชิงปริมาณ (Q-PCR)

RNA ทั้งหมดจากเซลล์ที่เพาะเลี้ยงภายใต้สภาวะปกติหรือสภาวะขาดออกซิเจนหรือบำบัดด้วยตัวยับยั้ง HIF-1 (CAY10585, (3-(2-(4-Adamantane-1-yl-phenoxy )-acetylamino)-4-hydroxybenzoic acid methyl ester) เป็นเวลา 48 ชั่วโมง (10 uM, แคตาล็อก #400092, Calbiochem) แยกได้โดยใช้ TRIzol และ TRIzolLS Reagent (Life Technologies) ตามลำดับ miRNAs ถูกคัดลอกย้อนกลับโดยใช้ Mir-X ™ miRNA First-Strand Synthesis Kit (แค็ตตาล็อก #638313 Takara, Japan) SYBR Green ถูกใช้เพื่อวิเคราะห์ miRNA เชิงปริมาณด้วยระบบ QuantStudio 3Q-PCR (ThermoFisher Scientific, Foster City, CA, USA) ระดับการแสดงออกสัมพัทธ์ของ miRNA และ RNA ในเซลล์ถูกทำให้เป็นมาตรฐานสำหรับการควบคุมภายใน U6 หรือ GAPDH ตามลำดับ นิพจน์สัมพัทธ์ถูกนำเสนอโดยใช้วิธี 2−∆∆Ct ไพรเมอร์ที่ใช้แสดงอยู่ในตารางที่ S1

2.6. เครื่องมือวิเคราะห์ชีวสารสนเทศ

เป้าหมายของ miRNAs ที่เฉพาะเจาะจงได้รับการทำนายโดยใช้เว็บไซต์ชีวสารสนเทศสองแห่งคือฐานข้อมูล miRmap [15] และ TargetScan [16] ซึ่งสามารถให้การคาดการณ์เป้าหมาย miRNA สำหรับสิ่งมีชีวิตที่แตกต่างกัน ทั้งซอฟต์แวร์ miRmap และ TargetScan จำแนกเป้าหมาย miRNA เฉพาะที่อาจเกิดขึ้น และระบุความแรงในการปราบปรามของเป้าหมาย miRNA ตามคะแนน miRmap และเปอร์เซ็นไทล์ของบริบทบวกคะแนนบวก [17]

ฟังก์ชันทางชีววิทยาของเป้าหมาย miRNA ที่เลือกได้รับการวิเคราะห์โดยใช้ซอฟต์แวร์ IPA (Ingenuity Systems, Redwood City, CA, USA) ซึ่งให้ "การวิเคราะห์แกนกลาง" ของยีน/โปรตีน รายการเส้นทาง เครือข่าย และความเป็นพิษที่ได้รับจากการวิเคราะห์หลักสามารถใช้เพื่อระบุการเกิดโรคที่เป็นไปได้ของยีน/โปรตีน [18]

2.7. การเปลี่ยนถ่ายชั่วคราว

miR-545-3p mimic (200 nM) และ miR-negative control ของการเลียนแบบ (miR-NC, 200 nM) (GE Healthcare, USA) ถูกทรานส์เฟกไปในเซลล์โดยใช้รีเอเจนต์การทรานส์เฟกชัน Lipofectamine™ RNAiMAX (แค็ตตาล็อก #13778075 , ThermoFisher Scientific, USA) ปฏิบัติตามโปรโตคอลของผู้ผลิต ลำดับของการเลียนแบบ miR-545-3p ที่ใช้แสดงอยู่ในตารางเสริม S1

2.8. การทดสอบภูมิคุ้มกันที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ (ELISA)

ความเข้มข้น TNFSF10 ของส่วนลอยเหนือตะกอนของเซลล์ HK-2 ที่เพาะเลี้ยงภายใต้สภาวะปกติ ขาดออกซิเจน หรือหลังจากการถ่ายเลือดด้วยการเลียนแบบ miR-545-3p ภายใต้สภาวะขาดออกซิเจนเป็นเวลา 48 ชั่วโมง ถูกวัดด้วยชุด Quantikine1 ELISA ที่มีจำหน่ายทั่วไป ( แค็ตตาล็อก #DTRL00 ระบบ R&D) ตามคำแนะนำของผู้ผลิตดังเดิม

อธิบายไว้

2.9. การวิเคราะห์ทางสถิติ

ตัวแปรต่อเนื่องแสดงเป็นค่าเฉลี่ย±ข้อผิดพลาดมาตรฐานของค่าเฉลี่ย (SEM) หรือค่ามัธยฐาน (เปอร์เซ็นไทล์ที่ 25 และ 75) ตามความเหมาะสม ในขณะที่ตัวแปรหมวดหมู่แสดงเป็นเปอร์เซ็นต์ สหสัมพันธ์ระหว่างตัวแปรต่อเนื่องตรวจสอบโดยสเปียร์แมนสหสัมพันธ์ ความสำคัญของความแตกต่างในตัวแปรต่อเนื่องระหว่างกลุ่มได้รับการทดสอบโดยใช้การทดสอบ t ของนักเรียนหรือการวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว (ANOVA) ตามด้วยการทดสอบหลังเฉพาะกิจที่ปรับด้วยการแก้ไข Tukey ตามความเหมาะสม สถิติชีวโมเลกุล 2021, 11, 1032 4 จาก 14 การวิเคราะห์ดำเนินการโดยใช้ GraphPad Prism 5.0 (GraphPad Software Inc., ซานดิเอโก, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา) นัยสำคัญทางสถิติถูกกำหนดไว้ที่ค่า p สองด้านของ<>

Cistanche has a good repairing effect on renal damage

แป้งคอสแทนเช่ เฮอร์บามีผลการซ่อมแซมที่ดีในความเสียหายของไต

3. ผลลัพธ์

3.1. ภาวะขาดออกซิเจนทำให้เกิด EMT ใน PTECs

มีรายงานว่าภาวะขาดออกซิเจนมีส่วนร่วมในกลไกทางพยาธิสรีรวิทยาของอาการบาดเจ็บที่ไต[9]. เพื่อตรวจสอบการเปลี่ยนแปลงทางฟีโนไทป์ของเซลล์ PTECs ของไตของมนุษย์ (RPTECs) และเซลล์ HK-2 ภายใต้สภาวะขาดออกซิเจน เซลล์ได้รับการเพาะเลี้ยงภายใต้สภาวะปกติ (O2, 21 เปอร์เซ็นต์) และภาวะขาดออกซิเจน (O2, 1 เปอร์เซ็นต์) เป็นเวลา 48 ชั่วโมง เราพบว่าการแสดงออกของ HIF-1 และ HIF-2 เพิ่มขึ้นในเซลล์ RPTEC และ HK-2 ภายใต้สภาวะขาดออกซิเจนเป็นเวลา 6 ชั่วโมง (รูปที่ 1A) สัณฐานวิทยาของเซลล์ถูกสังเกตพบและเปลี่ยนจากรูปทรงกลมไปเป็นฟีโนไทป์ที่ยืดยาวและเคลื่อนที่ได้ภายใต้สภาวะขาดออกซิเจนเมื่อเปรียบเทียบกับสภาวะนอร์ม็อกเซีย (รูปที่ 1B)

Western blotting ใช้ในการประเมิน EMT ใน PTECs ภายใต้สภาวะปกติหรือภาวะขาดออกซิเจน ภาวะขาดออกซิเจนยกระดับการแสดงออกของ N-cadherin และ vimentin และลดการแสดงออกของ E-cadherin ในเซลล์ PTEC ของมนุษย์ (รูปที่ 1C) และ HK-2 (รูปที่ 1D) หลังจากระยะเวลาฟักตัว 48-h ดังนั้นการขาดออกซิเจนจึงทำให้เกิด EMT ใน PTECs

Figure 1. Hypoxia induces EMT in PTECs. (A) HIF-1α and HIF-2α expression were assessed in RPTECs and HK-2 cells were incubated under normoxia (O2, 21%) and hypoxia (O2, 1%) conditions for 6 h using Western blotting. (B) The effect of hypoxia on morphological changes in RPTECs and HK-2 cells under normoxia and hypoxia conditions for 48 h. EMT markers (E-cadherin, N-cadherin, and vimentin) were examined in human RPTECs (C) and HK-2 cells (D) treated with normoxia and hypoxia for 48 h using Western blotting. The bar graph represents the mean ± SEM of at least three independent experiments. * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0.001 by Student's t-test. Figure 1. Hypoxia induces EMT in PTECs. (A) HIF-1α and HIF-2α expression were assessed in RPTECs and HK-2 cells were incubated under normoxia (O2 , 21%) and hypoxia (O2 , 1%) conditions for 6 h using Western blotting. (B) The effect of hypoxia on morphological changes in RPTECs and HK-2 cells under normoxia and hypoxia conditions for 48 h. EMT markers (E-cadherin, N-cadherin, and vimentin) were examined in human RPTECs (C) and HK-2 cells (D) treated with normoxia and hypoxia for 48 h using Western blotting. The bar graph represents the mean ± SEM of at least three independent experiments. * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0.001 by Student's t-test.

3.2. การระบุ miR-545-3p ที่เข้าร่วมใน EMT ที่ชักนำให้เกิดภาวะขาดออกซิเจนใน PTEC

แผนผังลำดับงานของการสำรวจ miRNA ที่อาจเกิดขึ้นซึ่งเหนี่ยวนำโดยการขาดออกซิเจนแสดงไว้ในรูปที่ 2A โปรไฟล์ของ RNA ขนาดเล็กจากเซลล์ HK-2 ที่เพาะเลี้ยงภายใต้สภาวะปกติหรือขาดออกซิเจนเป็นเวลา 24 ชั่วโมง ถูกทำโปรไฟล์โดย NGS miRNA ยี่สิบเอ็ดตัวที่มีการเปลี่ยนแปลง 2-เท่าที่มีนัยสำคัญพบในเซลล์ HK-2 ที่สัมผัสกับภาวะขาดออกซิเจนเมื่อเปรียบเทียบกับเซลล์ที่เพาะเลี้ยงภายใต้สภาวะปกติ

จาก 21 miRNAs, 10 miRNAs ได้รับการควบคุมและ 11 miRNAs ลดลง หลังจากไม่รวม miRNAs ที่มีจำนวนการอ่านข้อมูลดิบน้อยกว่าหรือเท่ากับ 10 miRNA ที่มีนัยสำคัญ 11 ตัว (8 ควบคุมและ 3 ปรับลดภายใต้สภาวะขาดออกซิเจน) ถูกแสดงโดยการทำแผนที่ความร้อน (รูปที่ 2B และตาราง S1) เราใช้ RT-Q-PCR เพื่อตรวจสอบการแสดงออกของ miRNA เหล่านี้ในแบบจำลองในหลอดทดลองสองแบบ รวมถึง RPTEC ของมนุษย์และเซลล์ HK-2 ภายใต้สภาวะปกติและภาวะขาดออกซิเจน ในบรรดา 11 miRNAs qT-PCR ไม่สามารถตรวจพบ miR-190a-3p และ miR-1277-3p และการแสดงออกที่ไม่สอดคล้องกันของ miR-1269a, miR{ พบ {18}}p, miR- 33b-5p, miR-33a-5p และ miR-219a-5p ในเซลล์ PTEC ของมนุษย์และเซลล์ HK-2 หลังการรักษาด้วยภาวะขาดออกซิเจน (รูปที่ 2C–G) ระดับ miR-1266-5p, miR-4474-3p และ miR-5579-3p ลดลงทั้งในเซลล์ PTEC ของมนุษย์และ HK-2 ภายใต้สภาวะขาดออกซิเจน (รูปที่ 2H–J) การแสดงออก miR-545-3p ไม่เพียงแต่สูงที่สุดในบรรดา 11 miRNAs ใน HK-2 เซลล์ที่สัมผัสกับภาวะขาดออกซิเจนเมื่อเปรียบเทียบกับเซลล์ที่รักษาด้วย normoxia แต่ยังเพิ่มสูงขึ้นใน PTEC ของมนุษย์ภายใต้สภาวะขาดออกซิเจน (รูปที่ 2K) เราตรวจสอบเพิ่มเติมว่า HIF-1 เกี่ยวข้องกับการควบคุมการแสดงออกของ miR-545-3p (รูปที่ S1) หรือไม่ และพบว่าตัวยับยั้ง HIF-1 ยับยั้งการยกระดับ miR-545-3p ใน HK -2 เซลล์ที่เกิดจากการขาดออกซิเจน (รูปที่ 2L) ผลการวิจัยข้างต้นระบุว่า HIF-1 ควบคุมการแสดงออกของ miR-545-3p ในท่อใกล้เคียงภายใต้สภาวะขาดออกซิเจน

Figure 2. Identification of miR-545-3p participating in hypoxia-induced EMT in PTECs. (A) Flowchart of the identification of potential miRNAs associated with hypoxia-induced EMT in HK-2 cells.

ตามการแสดงออกสูงสุดของ miR-545-3p ในบรรดา 11 miRNAs ใน HK-2 เซลล์ที่สัมผัสกับภาวะขาดออกซิเจน ฟังก์ชันทางพยาธิสรีรวิทยาของเป้าหมายที่เป็นไปได้ตาม miR-545-3p ด้วยคะแนน miRmap > 90 ตามฐานข้อมูล miRmap วิเคราะห์โดยใช้การวิเคราะห์หลักของฐานข้อมูล IPA สิบอันดับแรกของวิถีทางบัญญัติของการวิเคราะห์ IPA เปิดเผยว่าฟังก์ชันทางพยาธิสรีรวิทยาของ miR-545-3p รวมการควบคุม EMT โดยปัจจัยการเจริญเติบโต (รูปที่ 3A) การวิเคราะห์รายการท็อกซ์ระบุว่า miR-545-3p มีความสัมพันธ์กับอาการบาดเจ็บที่ไตและการตอบสนองต่อความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน (รูปที่ 3B) จากผลการวิเคราะห์ทางชีวสารสนเทศ การขาดออกซิเจนอาจกระตุ้น EMT ใน PTEC ผ่านการมอดูเลต miR-545-3p

Figure 3. TNFSF10 as a direct target of miR-545-3p. (A) Top ten canonical pathways of the potential genes targeted by miR-545-3p using IPA analysis.



นอกจากนี้ การวิเคราะห์เครือข่ายของเป้าหมายที่เป็นไปได้ของ miR-545-3p แสดงว่า miR-545-3p และ TNFSF10 เป็นเป้าหมายที่ควบคุมโดย miR-545-3p มีส่วนเกี่ยวข้องกับการเพิ่มจำนวนเซลล์และเซลล์ รอบ (ตารางที่ 3)

Table 1. Canonical pathway of the predicted target genes of miR-545-3p according to the IPA database.

miRmap และ TargetScan (เวอร์ชัน 7.1) ถูกใช้เพื่อทำการคาดการณ์ทางชีวสารสนเทศ ซึ่งบ่งชี้ว่า 3/ UTR ของ TNFSF10 มีลำดับเมล็ดพันธุ์เป้าหมายสำหรับการจับของ miR-545-3p คะแนน mipmap ความน่าจะเป็นบ่งชี้ความน่าจะเป็นของยีนเป้าหมายที่คาดการณ์ไว้ของ miR-545-3p (รูปที่ 3C) ลำดับเมล็ดพันธุ์ miR-545-3p ที่อนุรักษ์สปีชีส์ใน 3/ UTR ของ TRAIL แสดงไว้ในรูปที่ 3D การบำบัดภาวะขาดออกซิเจนทำให้ระดับ TNFSF10 mRNA ของ PTEC ของมนุษย์ลดลง (รูปที่ 3E) และเซลล์ HK-2 (รูปที่ 3F) นอกจากนี้ ยังพบระดับ TNFSF10 mRNA ที่ลดลงใน supernatant ที่ได้มาจากเซลล์ HK-2 ภายใต้ภาวะขาดออกซิเจนเมื่อเปรียบเทียบกับนอร์ม็อกเซีย (รูปที่ 3G) นอกจากนี้ การทรานส์เฟกชันของ miR-545-3p ที่เลียนแบบลดการแสดงออกของ TNFSF10 mRNA ใน supernatant ของเซลล์ HK-2 (รูปที่ 3H) ตัวยับยั้ง HIF-1 ย้อนกลับการแสดงออกของ TNFSF10 mRNA ที่ลดลงในเซลล์ HK-2 ที่เกิดจากการขาดออกซิเจน (รูปที่ 3I) ดังนั้น การขาดออกซิเจนจึงควบคุมการแสดงออกของ miR-545 ซึ่งต่อมาลดการแสดงออกของ TNFSF10 และ HIF-1 อาจปรับเส้นทาง miR-545-3p–TNFSF10

Table 2. Tox list of the predicted target genes of miR-545-3p according to the IPA database.


3.4. ภาวะขาดออกซิเจนทำให้เกิด EMT ในเซลล์ HK โดยการมอดูเลต miR-545-3p–TNFSF10

เพื่อประเมินว่า miR-545-3p มอดูเลต EMT ที่กระตุ้นการขาดออกซิเจนในท่อใกล้เคียงหรือไม่ เราประเมินผลทางชีววิทยาของ miR-545-3p และ TNFSF10 ในเซลล์ HK-2 ประการแรก การบำบัดด้วย TNFSF10 (20 ng/mL) ไม่ส่งผลต่อความมีชีวิตของเซลล์ของเซลล์ HK-2 (รูปที่ 4A) เราตรวจสอบการแสดงออกของกระสุนเพิ่มเติม ซึ่งเป็นหนึ่งในปัจจัยการถอดรหัสสำหรับการควบคุม EMT การแสดงออกของกระสุนเพิ่มขึ้นในเซลล์ HK-2 หลังจากการทรานส์เฟกชันด้วย miR-545-3p (รูปที่ 4B) และถูกระงับในเซลล์ HK-2 ที่บำบัดด้วย TNFSF10 (รูปที่ 4C) ภายใต้สภาวะนอร์ม็อกเซีย หลังจากการถ่ายยีน miR-545-3p เลียนแบบ การแสดงออกของ E-cadherin ถูกควบคุมลง และการแสดงออกของ N-cadherin และ vimentin ถูกควบคุมในเซลล์ HK-2 ภายใต้สภาวะนอร์ม็อกเซีย (รูปที่ 4D) อย่างไรก็ตาม TNFSF10 ย้อนกลับผลของ miR-545-3p ในการเหนี่ยวนำ EMT ในเซลล์ HK-2 นอกจากนี้ การรักษาด้วย TNFSF10 (20 ng/mL) ป้องกันการปรับลด E-cadherin และยับยั้งการปรับขึ้น N-cadherin และ vimentin และย้อนกลับ EMT ในเซลล์ HK-2 ที่เกิดจากการขาดออกซิเจนในเซลล์ HK-2 (รูปที่ 4E). การค้นพบนี้หมายความว่าการขาดออกซิเจนมีส่วนทำให้เกิด EMT ใน PTECs ผ่านการมอดูเลตเส้นทาง miR-545-3p– TNFSF10 และ TNFSF10 สามารถลด EMT ใน PTEC ที่เกิดจากการขาดออกซิเจนและ miR-545-3p

Figure 4. Hypoxia induces EMT in HK-cells by miR-545-3p–TNFSF10 modulation. (A) Cell viability activity was examined in HK-2 cells treated with normal control or TNFSF10 (20 ng/mL) for 48 h using the WST-1 assay.

4. การอภิปราย

ภาวะขาดออกซิเจนทำให้เกิดความผิดปกติทางสัณฐานวิทยาและพยาธิสรีรวิทยาของไตนำไปสู่การลดลงอย่างรวดเร็วในการทำงานของไต[16]. การศึกษานี้ใช้การวิเคราะห์การถอดรหัสเพื่อตรวจสอบศักยภาพของ miRNAs ที่เข้าร่วมในกระบวนการ EMT ที่เกิดจากภาวะขาดออกซิเจนใน PTEC และแสดงให้เห็นว่า miR-545-3p ได้รับการควบคุมใน PTEC ที่รักษาด้วยการขาดออกซิเจน และ HIF-1 ที่มอดูเลต miR{{ 4}}p และนิพจน์ TNFSF10 การควบคุม miR-545-3p ทำให้เกิด EMT ใน PTECs ภายใต้ภาวะขาดออกซิเจน นอกจากนี้ TNFSF10 ยังปรับปรุง EMT ใน PTEC ที่รักษาด้วยการขาดออกซิเจน ดังนั้นเราจึงได้รับการรับรู้ใหม่โดยตระหนักถึงกฎระเบียบเฉพาะของ miR-545-3p–TNFSF10 ซึ่งเราสามารถตีความการลุกลามของโรคไตได้ (รูปที่ 5)

Figure 5. Illustration of the mechanism by which hypoxia induced EMT in PTECs through miR-545-3p–TNFSF10.

การค้นพบของเราแสดงให้เห็นการแสดงออกของ miR-545-3p ที่ควบคุมภาวะขาดออกซิเจนในท่อใกล้เคียง เป็นที่ทราบกันดีว่า miRNAs มีบทบาทสำคัญในการปรับการแสดงออกของยีนหรือกิจกรรมและควบคุมกลไกทางพยาธิสรีรวิทยาของการเริ่มมีอาการหรือความก้าวหน้าของโรค [19] การศึกษาก่อนหน้านี้เปิดเผยว่า miR-545 ทำหน้าที่เป็นโปรโมเตอร์เนื้องอก ซึ่งควบคุมการเพิ่มจำนวน การบุกรุก และการย้ายถิ่นของเซลล์ ส่งผลให้เกิดมะเร็งตับ [20,21] miR-545 ทำให้เกิดกระบวนการ inflammation และมีส่วนทำให้เกิดโรคตับแข็งในตับอักเสบบีผ่านการกำหนดเป้าหมาย Tim-3 [22] ในทางกลับกัน miR-545-3p ปิดกั้น lncRNA XIST บางส่วน และเพิ่มการตายของเซลล์ myoblasts ของหัวใจที่เกิดจากการขาดออกซิเจน/การเกิดออกซิเจนใหม่ [23] อย่างไรก็ตาม ยังไม่มีการสำรวจว่า miR-545 มีส่วนร่วมในการเกิดโรคของโรคไตหรือไม่ การศึกษาสองสามชิ้นแสดงให้เห็นว่า miR-545-3p มีส่วนร่วมในการบาดเจ็บที่ไตเฉียบพลันที่เกี่ยวข้องกับภาวะติดเชื้อ [24,25] ตันและคณะ รายงานว่า circ_0091702 ทำหน้าที่เป็นฟองน้ำ miR-545-3p เพื่อยับยั้งการตายของเซลล์ HK-2 ที่เกิดจาก lipopolysaccharide (LPS) ผ่านการควบคุม thrombospondin 2 [24] Hu และคณะ พบว่า Cancer Susceptibility 2 ที่ไม่มีการเข้ารหัสเป็นเวลานานช่วยบรรเทาการตายแบบอะพอพโทซิสที่เกิดจาก LPS ในเซลล์ HK-2 ผ่านการควบคุม miR-545-3p/peroxisome proliferator-activated receptor-axis [25] ชิและคณะ บ่งชี้ว่า circPRKCI ช่วยชีวิตการบาดเจ็บของช่องปากที่เกิดจาก LPS ในเซลล์ HK-2 โดยการกด miR-545/zinc finger E-box-binding homeobox 2 [26] การศึกษาในปัจจุบันนี้ชี้ให้เห็นถึงผลกระทบของ miR-545-3p ต่อ EMT ที่เกิดจากภาวะขาดออกซิเจนในไตก่อน ภาวะขาดออกซิเจนเพิ่มระดับ miR-545-3p และ HIF-1 ควบคุมการแสดงออกของ miR-545-3p ใน PTEC miR-545-3p เหนี่ยวนำให้เกิดระดับความสูงของกระสุนและส่งเสริม EMT เพิ่มเติม รวมถึงการปราบปรามการแสดงออกของ E-cadherin ของ miR-545-3p และการปรับปรุงการแสดงออกของ N-cadherin และ vimentin ใน PTEC เราสาธิตเส้นทางสัญญาณแบบใหม่ของการปรับกระบวนการ EMT ในท่อใกล้เคียงภายใต้ภาวะขาดออกซิเจน

มีรายงานภาวะขาดออกซิเจนเพื่อปรับการแสดงออกของ TNFSF10 และกระบวนการทางสรีรวิทยา [27,28] ฝางและคณะ เสนอแนะว่า HIF-1 เพิ่ม TNFSF10-การตายแบบอะพอพโทซิสโดยการเพิ่มการแสดงออกของตัวรับ TNFSF10 1 (DcR1) ในการบาดเจ็บที่สมอง [27] ฮาราชิมาและคณะ บ่งชี้ว่า HIF-2 เพิ่มความอ่อนแอของเซลล์มะเร็งตับอ่อนเป็น TNFSF10 ภายใต้สภาวะขาดออกซิเจน [28] อย่างไรก็ตาม ยังไม่ชัดเจนว่าจะควบคุม TNFSF10 ผ่านการถอดเสียงของ miRNAs ได้อย่างไร โดยเฉพาะอย่างยิ่งในอาการบาดเจ็บที่ไตที่เกิดจากการขาดออกซิเจน การค้นพบของเราให้ข้อมูลเชิงลึกใหม่เกี่ยวกับการขาดออกซิเจนนั้นปรับการแสดงออกของ TNFSF10 ในท่อใกล้เคียงผ่าน miR-545-3p ภาวะขาดออกซิเจนเพิ่มระดับ miR-545-3p และในทางกลับกัน ยับยั้งการแสดงออกของ TNFSF10 ใน PTEC และส่วนเหนือตะกอนของพวกมันเพื่อกระตุ้นกระบวนการ EMT นอกจากนี้ เรายังพบว่าการขาดออกซิเจนปรับเส้นทาง miR-545-3p–TNFSF10 ในท่อใกล้เคียงผ่าน HIF-1 อย่างไรก็ตาม ไม่ว่า HIF-2 จะควบคุมเส้นทางนี้ในไตภายใต้สภาวะขาดออกซิเจนหรือไม่ก็ตามไม่ชัดเจน จำเป็นต้องมีการศึกษาเพิ่มเติมเพื่อสำรวจผลกระทบของชนิดย่อยของปัจจัยการถอดรหัส HIF ต่อกฎระเบียบ miR-545-3p–TNFSF10 ในการบาดเจ็บที่ไต

หลักฐานที่สะสมแสดงให้เห็นว่าสมาชิกในตระกูล TNF superfamily มีส่วนเกี่ยวข้องอย่างมากในพยาธิสรีรวิทยาของการพัฒนาและความก้าวหน้าของโรคไต [29] สมาชิกซูเปอร์แฟมิลี TNF ควบคุมประสิทธิภาพของเซลล์ เช่น ความแตกต่าง การเพิ่มจำนวน เนื้อร้าย อะพอพโทซิส หรือการเกิดพังผืด ขึ้นอยู่กับระยะต่างๆ ของความเสียหายของไต [30,31] TNFSF10 ในฐานะที่เป็นสารต้านมะเร็งที่มีศักยภาพ สามารถยับยั้งการเติบโตของเซลล์และเพิ่มการตายของเซลล์โดยการผูกมัดกับตัวรับความตายของเมมเบรนชนิดที่ 1 จำเพาะ ซึ่งจะช่วยในประสิทธิภาพของการบำบัดด้วยเคมีบำบัดสำหรับมะเร็งชนิดต่างๆ [29,32] การศึกษาล่าสุดพบความสัมพันธ์เชิงลบระหว่าง TNFSF10 ในซีรัมกับผลลัพธ์ทางคลินิกในโรคที่ไม่ใช่มะเร็ง [33,34] อย่างไรก็ตาม บทบาทของ TNFSF10 ในโรคไตยังไม่ได้รับการสำรวจอย่างเต็มที่ พบการแสดงออกที่เพิ่มขึ้นของ TRAIL หมุนเวียนในผู้ป่วยโรคไตบางชนิด เช่น โรคไตจากเบาหวาน และโรคที่มีการเปลี่ยนแปลงเล็กน้อย [35,36] การยับยั้ง TNFSF10 ลดทอนความเสียหายในรูปแบบ in vivo ของไตขาดเลือด-reperfusion [37] ในทางกลับกัน การไหลเวียนของ TNFSF10 ลดลงในผู้ป่วยโรคไต polycystic ที่โดดเด่น autosomal เมื่อเทียบกับบุคคลปกติ [38] มิฉะนั้น ยังมีรายงานผลกระทบที่ไม่สอดคล้องกันของ TNFSF10 ต่อโรคไตอีกด้วย ตรงกันข้ามกับผล apoptotic ต่อ PTEC ในโรคไตจากเบาหวาน[30], Nguyen et al. รายงานว่า TNFSF10 มีปฏิกิริยาตอบสนองและการเพิ่มจำนวนเซลล์ในโรคไตอักเสบลูปัส [39] ข้อความที่ขัดแย้งเหล่านี้อาจเกี่ยวข้องกับกฎระเบียบต่างๆ ของ TNFSF10 ในโรคไตประเภทต่างๆ และระยะต่างๆ จนถึงปัจจุบัน ยังคงเป็นเรื่องยากที่จะสรุปเกี่ยวกับบทบาทที่แท้จริงของ TNFSF10 ในการพัฒนาและความก้าวหน้าของโรคไต การศึกษาในปัจจุบันนี้พบว่า TNFSF10 ไม่ส่งผลต่อความมีชีวิตของ PTEC ซึ่งบ่งชี้ว่าไม่ก่อให้เกิดการตายของเซลล์ในเซลล์ประเภทนี้ การแสดงออกของ TNFSF10 ที่มากเกินไปอาจทำให้ EMT ดีขึ้นซึ่งเกิดจากการขาดออกซิเจนในท่อใกล้เคียง ซึ่งชี้ให้เห็นถึงผลการรักษาที่เป็นไปได้ของ miR-545-3p–TNFSF10 ในการบาดเจ็บที่ไตที่เกี่ยวข้องกับภาวะขาดออกซิเจน


5. สรุปผลการวิจัย

การศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าการขาดออกซิเจนมีส่วนทำให้เกิด EMT ผ่านการมอดูเลต miR-545-3p– TNFSF10 และการยับยั้ง miR-545-3p และ TNFSF10 กลับ EMT ที่เกิดจากภาวะขาดออกซิเจนใน PTEC ดังนั้น การค้นพบเหล่านี้จึงให้ข้อมูลเชิงลึกใหม่เกี่ยวกับกฎระเบียบเฉพาะของ miR-545-3p–TNFSF10 และผลการรักษาที่อาจเกิดขึ้นในการบาดเจ็บของไตที่เกิดจากการขาดออกซิเจน

Cistanche can regulate chronic kidney disease, click here to learn more

ซิสตานช์สามารถควบคุมเรื้อรังได้โรคไต, คลิกที่นี่เพื่อเรียนรู้เพิ่มเติม

อ้างอิง

1. หลิว, ม.; หลิวแอล.; ใบ, ม.; จางแอล.; หม่า, เอฟ.; ยาง X.; Sun, S. การกระตุ้นที่เกิดจากภาวะขาดออกซิเจนของแกน Twist/miR-214/E-cadherin ส่งเสริมการเปลี่ยนแปลงของเยื่อหุ้มเซลล์เยื่อบุผิวในท่อไตและการเกิดพังผืดของไต ไบโอเคมี. ชีวฟิสิกส์ ความละเอียด คอมมูนิตี้ 2018, 495, 2324–2330.

2. เฮย์แมน SN; Khamaisi, ม.; โรเซน, เอส.; Rosenberger, C. ภาวะขาดออกซิเจนในเนื้อเยื่อของไต, การตอบสนองของภาวะขาดออกซิเจนและความก้าวหน้าของโรคไตเรื้อรัง เป็น. เจ. เนฟรอล. 2008, 28, 998–1006.

3. Giaccia, AJ; ไซม่อน เอ็มซี; Johnson, R. ชีววิทยาของการขาดออกซิเจน: บทบาทของการตรวจวัดออกซิเจนในการพัฒนา การทำงานปกติ และโรค ยีนส์เดฟ 2547, 18, 2183–2194.

4. Movafagh, S.; ครุก, เอส.; Vo, K. Regulation of hypoxia-inducible factor-1a by reactive oxygen species: พัฒนาการใหม่ในการอภิปรายเก่า เจ เซลล์ ไบโอเคม. 2015, 116, 696–703.

5. มโนธรรม, ก.; ทานากะ ต.; มัตสึโมโตะ, ม.; Ohse, ต.; Inagi, ร.; มิยาตะ, ต.; คุโรคาวะ, K.; ฟูจิตะ, ต.; อิงเกลฟิงเกอร์, เจอาร์; Nangaku, M. การเปลี่ยนแปลงของเซลล์ท่อที่เพาะเลี้ยงที่เกิดจากการขาดออกซิเจน ไตอินเตอร์ 2547, 65, 871–880.

6. สบายดี แอลจี; Bandyopadhyay, D.; Norman, JT มีกลไกทั่วไปสำหรับความก้าวหน้าของโรคไตประเภทต่าง ๆ นอกเหนือจากโปรตีนในปัสสาวะหรือไม่? มุ่งสู่ประเด็นภาวะขาดออกซิเจนเรื้อรังที่รวมกันเป็นหนึ่ง ไตอินเตอร์ เสริม 2000, 75, S22–S26.

7. หลี่ วาย.; คัง วายเอส; ได, C.; จูบ LP; เหวิน X .; Liu, Y. การเปลี่ยนแปลงของเยื่อบุผิวเป็นมีเซนไคม์เป็นเส้นทางที่อาจนำไปสู่ความผิดปกติของ podocyte และโปรตีนในปัสสาวะ เป็น. เจ. ปทุม. 2551, 172, 299–308.

8. ยามากุจิ วาย.; อิวาโนะ, ม.; ซูซูกิ, ดี.; นาคาทานิ, K.; Kimura, K.; ฮาราดะ, K.; คูโบ, A.; อาคาอิ, วาย.; โตโยดะ, ม.; คาวากุจิ, ม.; และคณะ การเปลี่ยนแปลงของเยื่อบุผิว-มีเซนไคม์เป็นคำอธิบายที่เป็นไปได้สำหรับการลดลงของ podocyte ในโรคไตจากเบาหวาน เป็น. เจ. โรคไต. 2552, 54, 653–664.

9. ฮิกกินส์, DF; Kimura, K.; แบร์นฮาร์ด, WM; Shrimanker, N.; อาคาอิ, วาย.; โฮเฮนสไตน์, บี.; ไซโตะ วาย.; จอห์นสัน อาร์เอส; เครทซ์เลอร์, ม.; โคเฮน ซีดี; และคณะ ภาวะขาดออกซิเจนส่งเสริมการเกิดพังผืดในร่างกายผ่านการกระตุ้น HIF-1 ของการเปลี่ยนแปลงของเยื่อบุผิวเป็นมีเซนไคม์ เจ. คลิน. สำรวจ 2550, 117, 3810–3820.

10. Haase, VH Oxygen ควบคุมการเปลี่ยนแปลงของเยื่อบุผิวไปเป็น mesenchymal: ข้อมูลเชิงลึกเกี่ยวกับกลไกระดับโมเลกุลและความเกี่ยวข้องกับโรค ไตอินเตอร์ 2552, 76, 492–499.

11. นัลแลมเชตตี เอส.; ชาน, SY; Loscalzo, J. Hypoxia: ตัวควบคุมหลักของ microRNA biogenesis และกิจกรรม ฟรี Radic ไบโอล. เมดิ. 2556, 64, 20–30.

12. เซลล์, เอส.; ชมิตต์, อาร์.; วิทติ้ง, เอส.; เครป, HH; ฮุสเซน K.; Becker, JU Hypoxia กระตุ้นการแสดงออกของยีน Mesenchymal ในเซลล์เยื่อบุผิวของท่อไต: แบบจำลองในหลอดทดลองของ Kidney Transplant Fibrosis Nephron Extra 2013, 3, 50–58.

13. Du, R.; ซัน, ว.; เซีย, L.; จ้าว A.; ยู, วาย.; จ้าว L.; วัง H.; หวาง, C.; Sun, S. การควบคุมการลดลงของ microRNA-34a ที่เกิดจาก Hypoxia ส่งเสริม EMT โดยการกำหนดเป้าหมายเส้นทางการส่งสัญญาณ Notch ในเซลล์เยื่อบุผิวแบบท่อ โปรดหนึ่ง 2012, 7, e30771

14. Xie, S.; เฉิน H.; หลี่เอฟ.; วังเอส.; Guo, J. microRNA ที่เกิดจากภาวะขาดออกซิเจน-155 ส่งเสริมการเกิดพังผืดในเซลล์ท่อใกล้เคียง มล. เมดิ. ตัวแทน. 2015, 11, 4555–4560.

15. พร้อมใช้งานออนไลน์:

16. พร้อมใช้งานออนไลน์:

17. ไช่ วายซี; คูโอ เอ็มซี; ฮุง WW; วู LY; วู, PH; ช้าง, วอชิงตัน; คูโอ PL; Hsu, YL กลูโคสสูงทำให้เกิดการตายของเซลล์ Mesangial ผ่าน miR-15b-5p และส่งเสริมโรคไตจากเบาหวานโดยการนำส่งผ่านถุงน้ำนอกเซลล์ มล. เธอ. 2020, 28, 963–974.

18. ลูวิงตัน เอเจ; เซอร์ดา เจ.; Mehta, RL การสร้างความตระหนักเกี่ยวกับการบาดเจ็บที่ไตเฉียบพลัน: มุมมองระดับโลกของฆาตกรเงียบ ไตอินเตอร์ 2013, 84, 457–467.

19. ชิทวูด ดีเอช.; Timmermans, MC Target เลียนแบบการปรับ miRNAs แนท. ยีนต์. 2550, 39, 935–936.

20. ชางจุน, แอล.; เฟยโจว, H.; Dezhen, P.; จ้าว L.; แกน Xianhai, M. MiR-545-3p/MT1M ควบคุมการเพิ่มจำนวนเซลล์ การบุกรุก และการย้ายถิ่นในมะเร็งตับ ไบโอเมด เภสัช. 2018, 108, 347–354.


คุณอาจชอบ