Cistanche ป้องกันโรคตับได้อย่างไร

ติดต่อ:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

เชิงนามธรรม

เพื่อศึกษาลักษณะเบื้องต้น สารต้านอนุมูลอิสระ และกิจกรรมป้องกันตับของพอลิแซ็กคาไรด์จากCistanche Deserticola (ซีดีพี), สามส่วนพอลิแซ็กคาไรด์, CDP-A, CDP-B และ CDP-C, ได้รับมาโดยการกรองเมมเบรนแบบต่อเนื่อง (ไมโครฟิลเทรชัน, อัลตราฟิลเตรชัน และนาโนฟิลเทรชัน) วิเคราะห์น้ำหนักโมเลกุล องค์ประกอบโมโนแซ็กคาไรด์ ความบริสุทธิ์ และสเปกตรัมอินฟราเรดของเศษส่วนทั้งสาม ผลการศึกษาพบว่า CDP-C มีสัดส่วนของกรดกาแลคโตโรนิก (GalUA) ที่สูงกว่า CDP-B และ CDP-A นอกจากนี้ ยังมีการวิเคราะห์ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระและผลการศึกษาพบว่า CDP-C มีฤทธิ์สูงสุด ดังนั้นจึงได้ทำการศึกษากิจกรรมป้องกันตับของ CDP-C เพิ่มเติม การวิจัยในหลอดทดลอง CDP-C ส่งเสริมการมีชีวิตของเซลล์ HepG2 ในการวิจัยในร่างกาย CDP-C ได้แก้ไขการเปลี่ยนแปลงที่เกิดจากแอลกอฮอล์ รวมถึงดัชนีทางซีรั่ม (อะลานีนทรานสอะมิเนส, กรดฟอสฟาเตส, -กลูตามิลทรานสเปปติเดสและไตรกลีเซอไรด์) และตัวชี้วัดตับ (ซูเปอร์ออกไซด์ dismutase, มาลอนไดอัลดีไฮด์, กลูตาไธโอน S-lytransferase) ในแบบจำลองไตร สัตว์. ภาวะไขมันพอกตับขนาดเล็กที่เด่นชัดและเนื้อร้ายที่ไม่รุนแรงในจุลพยาธิวิทยาตับของสัตว์จำลองยังถูกทำให้อ่อนลงโดยการบริหารให้ CDP-C การค้นพบนี้บ่งชี้ว่า CDP-C มีฤทธิ์ป้องกันตับต่อการบาดเจ็บที่ตับเรื้อรังที่เกิดจากแอลกอฮอล์ กลไกพื้นฐานอาจเป็นได้ว่า CDP-C สามารถลดเนื้อหาของ MDA และ TG และปรับกิจกรรมของเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องได้ คุณสมบัตินี้อาจเชื่อมโยงกับ GalUA ใน CDP-C

คำสำคัญ: Cistanche deserticola; โพลีแซ็กคาไรด์; ลักษณะเบื้องต้น; สารต้านอนุมูลอิสระ; กิจกรรมป้องกันตับ

cistanchebienfaitsทะเลทราย

1. บทนำ

Cistanche เป็น holoparasite ยืนต้นและส่วนใหญ่กระจายอยู่ในภูมิภาคทะเลทรายทางตะวันตกเฉียงเหนือของจีน [1, 2] ต้นกำเนิดของสายพันธุ์ Cistanche (Orobanchaceae) ได้รับการบันทึกครั้งแรกใน Chinese Materia Medica ของ Shen Nong Cistanche ถูกใช้เป็นยาสมุนไพรแผนโบราณมานานแล้วสำหรับการรักษาภาวะไตบกพร่อง, ความอ่อนแอ, อาการท้องผูกในวัยชรา, ความรุนแรงและความอ่อนแอของเอวและหัวเข่า และการขาดเลือด [3, 4] การวิจัยทางเภสัชวิทยาเปิดเผยว่า Cistanche มีฤทธิ์ต้านการอักเสบ [5, 6], ฤทธิ์ต้านโรคกระดูกพรุน [7, 8], ยากล่อมประสาท [9], ฤทธิ์ต้านความเมื่อยล้า [10], ฤทธิ์ป้องกันระบบประสาท [11] นอกจากนี้ พอลิแซ็กคาไรด์จาก Cistanche Deserticola (CDPs) มีฤทธิ์ต้านน้ำตาลในเลือดสูงและภาวะไขมันในเลือดต่ำ [12] ฤทธิ์ทางภูมิคุ้มกัน [13] และผลการงอกของลิมโฟไซต์ [14]

แอลกอฮอล์ เครื่องดื่มที่บริโภคทั่วโลก และวัตถุเจือปนอาหารทำให้เกิดการเสียชีวิตเกือบ 2.5 ล้านคนในแต่ละปีในโลก [15, 16] การเสียชีวิตเหล่านี้ส่วนใหญ่เกี่ยวข้องกับโรคตับที่เกิดจากการใช้แอลกอฮอล์ในทางที่ผิด [17, 18] โรคตับที่เกิดจากแอลกอฮอล์เป็นความก้าวหน้าเรื้อรังแบบหลายขั้นตอนที่ซับซ้อน ซึ่งปกติจะพัฒนาจากภาวะไขมันพอกตับจากแอลกอฮอล์เป็นตับอักเสบจากแอลกอฮอล์ และสุดท้ายเป็นตับแข็งจากแอลกอฮอล์ [19] ดังนั้นการระบุผลิตภัณฑ์จากธรรมชาติที่ใช้งานได้สำหรับผู้บริโภคเครื่องดื่มแอลกอฮอล์เหล่านั้นเพื่อป้องกันหรือชะลอการลุกลามของอาการบาดเจ็บที่ตับจากแอลกอฮอล์ในระยะเริ่มแรกจึงเป็นกลยุทธ์การจัดการที่เป็นประโยชน์

Cistanche deserticola YC Ma และ Cistanche tubulosa (Schrenk) Wight เป็นยาสองชนิดที่บันทึกไว้ในตำรับยาจีน [3] เอกสารหลายฉบับได้อธิบายกิจกรรมป้องกันตับของ C. tubulosa [20-24] และ C. deserticola [25, 26] แต่งานวิจัยเกี่ยวกับการป้องกันตับเหล่านี้มักมุ่งเป้าไปที่การบาดเจ็บที่ตับเฉียบพลันที่เกิดจากคาร์บอนเตตระคลอไรด์ (CCl4) หรือ D-galactosamine และไลโปโพลีแซ็กคาไรด์ แต่ไม่ได้กังวลเกี่ยวกับอาการบาดเจ็บที่ตับเรื้อรังที่เกี่ยวข้องกับการดื่มแอลกอฮอล์ นอกจากนี้ รายงานเหล่านี้มุ่งเน้นไปที่กลไกของฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ (PhG) เป็นหลักมากกว่า CDP ดังนั้นในการศึกษานี้ จึงได้ทำการศึกษาคุณลักษณะเบื้องต้นของ CDP และกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระ (ในหลอดทดลอง) นอกจากนี้ แบบจำลองการบาดเจ็บที่ตับของหนูเมาส์ ICR ที่เกิดจากไวน์สปิริตขาวยังได้รับการจัดตั้งขึ้นเพื่อตรวจสอบกิจกรรมการป้องกันตับของ CDP ต่อการบาดเจ็บที่ตับเรื้อรังที่เกิดจากแอลกอฮอล์

cistanche และ tongkat ali herba extract

2. วัสดุและวิธีการ

2.1. วัสดุ

ลำต้นของ C. deserticola รวบรวมจาก Alashan League มองโกเลียในของจีนและระบุโดย Prof. Xiaodong Wang (Division of Biorefinery Engineering, Institute of Process Engineering, Chinese Academy of Sciences, Beijing, PR China)

ไดเมทิล ซัลฟอกไซด์ (DMSO), 2, 2-อะซิโน-บิส (3-เอทิลเบนไทอะโซลีน-6-กรดซัลโฟนิก) (ABTS), 3-(4, 5-ไดเมทิลไธอะซอล{ {8}}อิล)-2, 5-ไดฟีนิลเตตตราโซเลียม โบรไมด์ (MTT) และ 1, 1-ไดฟีนิล-2-พิคริล-ไฮดราซิล (DPPH) ถูกซื้อมาจาก Sigma Chemical Co. (เซนต์หลุยส์ มิสซูรี สหรัฐอเมริกา). Modified Eagle Medium (DMEM) และ Fetal Bovine Serum (FBS) ของ Dulbecco ถูกซื้อจาก Invitrogen, Inc. Er Guo-tou white spirit ซื้อจาก Beijing Red Star Co., LTD. Bicyclol ซื้อมาจาก Beijing Union Pharmaceutical Factory สารละลายในน้ำถูกเตรียมด้วยน้ำบริสุทธิ์พิเศษจากระบบทำน้ำให้บริสุทธิ์ Milli-Q (Millipore, Bedford, MA, USA) รีเอเจนต์อื่นๆ ทั้งหมดมีระดับการวิเคราะห์

2.2. การสกัด CDP และการกรองเศษส่วน

CDP แบบคร่าวๆ ถูกเตรียมตามวิธีการที่รายงานไว้ก่อนหน้านี้ของกลุ่มของเรา [27] โดยมีการดัดแปลงเล็กน้อย โดยสังเขป ผง (40 เมช) ของ C. deserticola (50 กก.) ถูกสกัดด้วยอัลตราโซนิก (40 kHz และ 6 kW) สกัดด้วยสารละลายเอทานอลที่เป็นน้ำ 1,000 ลิตร (50 เปอร์เซ็นต์ , v/v) ที่ 60 ◦C เป็นเวลา 120 นาที พอลิแซ็กคาไรด์ถูกแยกออกจากสารสกัดด้วยแมโครพอรัสเรซิน (HPD 300) สารละลายโพลีแซ็กคาไรด์ถูกทำให้เข้มข้นภายใต้แรงดันที่ลดลง สลายโปรตีนโดยใช้วิธีการของเซแวก [28] และผลิตภัณฑ์ที่แห้งเยือกแข็งถูกเรียกว่า CDP แบบหยาบ

จากนั้น 50 กรัมของ CDP ที่ยังไม่ผ่านกระบวนการใดๆ ถูกละลายในน้ำบริสุทธิ์พิเศษ 2.5 ลิตร และแยกกันอย่างต่อเนื่องด้วยไมโครฟิลเทรชัน, อัลตราฟิลเตรชัน และนาโนฟิลเตรชัน (การตัดน้ำหนักโมเลกุลเล็กน้อยคือ 300 kDa, 10 kDa และ 200 Da พื้นที่ 0.625 ตร.ม.) สารละลายที่คงอยู่ของไมโครฟิลเตรชันถูกไลโอฟิไลซ์และเรียกว่า CDP-A สารละลายแทรกซึมของไมโครฟิลเตรชันถูกกรองด้วยการกรองแบบพิเศษ ในขณะที่สารละลายที่ถูกกักไว้ถูกไลโอฟิไลซ์และตั้งชื่อว่า CDP-B สารละลายที่แทรกซึมของการกรองแบบพิเศษถูกกรองด้วยนาโนฟิลเทรชัน สารละลายที่ถูกกักไว้ถูกไลโอฟิไลซ์และตั้งชื่อเป็น CDP-C

2.3. ลักษณะเบื้องต้นของ CDPs

ขนาดโมเลกุลของ CDP ได้รับการประเมินตามวิธีการที่รายงานก่อนหน้านี้ของกลุ่มของเรา [29]. วิเคราะห์องค์ประกอบโมโนแซ็กคาไรด์โดยใช้วิธีการที่อธิบายโดย P. Zhang et al [30] กำหนดความบริสุทธิ์ตามวิธีกรดฟีนอล-ซัลฟิวริก [31] ปริมาณโปรตีนถูกกำหนดโดยใช้วิธีการที่ Bradford และ Maja Kozarski กล่าวถึง [32, 33] สเปกตรัม FT-IR ของ CDP ถูกจับด้วย Fourier Transform-Infrared Spectrometer (FT/IR-660 Plus, JASCO) ในช่วง 400~4000 ซม.-1

2.4. กิจกรรมต้านอนุมูลอิสระ

ผลการขจัดของ CDP ต่ออนุมูลไฮดรอกซิล ซูเปอร์ออกไซด์ DPPH และ ABTS ได้รับการประเมินตามวิธีการที่อธิบายโดย Sun [34], Wang [35], Yap [36] และ Fatiha [37] ตามลำดับ

cistanche หย่อนสมรรถภาพทางเพศสำหรับไต

2.5. กิจกรรมป้องกันตับของ CDP-C ในหลอดทดลอง

บนพื้นฐานของผลการทดสอบสารต้านอนุมูลอิสระ CDP-C ได้รับการคัดเลือกเพื่อศึกษากิจกรรมการป้องกันตับ เซลล์ HepG2 (ที่ซื้อจาก China Center for Type Culture Collection, ปักกิ่ง, จีน) ได้รับการเพาะเลี้ยงใน DMEM ที่มี FBS ที่ไม่ใช้งานความร้อน (10 เปอร์เซ็นต์ ), สเตรปโตมัยซิน (0.1 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร), เพนิซิลลิน (100 IU/มล.) และกรดอะมิโนที่ไม่จำเป็น เซลล์ถูกบ่มในบรรยากาศที่มีความชื้นเป็น 5 เปอร์เซ็นต์ของ CO2 ที่ 37 องศา เก็บเกี่ยวที่ระยะการเจริญเติบโตแบบเอ็กซ์โพเนนเชียล เพาะเมล็ดลงในเพลต 96-หลุม (4×104 เซลล์ต่อหลุม 100 ไมโครลิตร) และ ฟักตัวเป็นเวลา 24 ชม. เซลล์ของกลุ่มเชิงลบถูกบำบัดด้วยแอลกอฮอล์ (ความเข้มข้นสุดท้ายคือ 3.5 เปอร์เซ็นต์ , v/v) ในขณะที่กลุ่มที่ไร้เดียงสาถูกบำบัดด้วยน้ำ เซลล์ของกลุ่มที่เป็นบวกถูกบำบัดด้วยแอลกอฮอล์และไบไซโคล (ความเข้มข้นสุดท้ายคือ 200ug/mL) เซลล์ของกลุ่มทดสอบสี่กลุ่มถูกบำบัดด้วยแอลกอฮอล์และ CDP-C (ความเข้มข้นสุดท้ายของ CDP-C คือ 0.11, 0.3333, 1.00 และ 3.00 มก./มล.) เซลล์ทั้งหมดถูกเพาะเลี้ยงต่อไปอีก 48 ชั่วโมง

ความมีชีวิตของเซลล์ HepG2 ถูกกำหนดโดยวิธีการทดสอบ MTT ที่ J. Tong et al [38] กล่าวถึงโดยมีการดัดแปลงเล็กน้อย โดยย่อ, MTT (5 มก./มล., 20 ไมโครลิตรต่อหลุม) ถูกเติมลงในเพลต 96-หลุมที่มีเมล็ดเซลล์ และเซลล์ถูกบ่มเป็นเวลา 4 ชั่วโมง สารละลายถูกขจัดออกและ DMSO (150 ไมโครลิตร/หลุม) ถูกเติม การดูดกลืนแสงของแต่ละหลุมถูกวัดที่ 492 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านเพลต 96-หลุม (Thermo Scientific, America) ความมีชีวิตของเซลล์คำนวณโดยใช้สูตรต่อไปนี้:

ความมีชีวิตของเซลล์ ( เปอร์เซ็นต์ )=(ตัวอย่าง- Ablank) ×100/ (A ไร้เดียงสา- Ablank)

โดยที่ ตัวอย่างคือค่าการดูดกลืนแสงของกลุ่มทดลอง ไร้เดียงสาคือค่าการดูดกลืนแสงของกลุ่มควบคุมที่ไม่มีตัวอย่าง ช่องว่างคือค่าการดูดกลืนแสงของอาหารเลี้ยงเชื้อโดยไม่มีตัวอย่างใดๆ และเซลล์ที่เพาะ

2.6. กิจกรรมป้องกันตับของ CDP-C ในร่างกาย

2.6.1. สัตว์

หนู ICR เพศเมียที่โตเต็มวัย (22-25 ก. ซื้อจาก Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co. Ltd. สัตว์หมายเลขใบอนุญาต 11400700128) ถูกนำมาใช้ สัตว์ถูกเลี้ยงไว้ในห้องที่ควบคุมโดยสิ่งแวดล้อมโดยมีอาหารและน้ำตามปริมาณที่ต้องการ (ความชื้นสัมพัทธ์คือ 40-60 เปอร์เซ็นต์ , 22-26 องศา ) การระบายอากาศคือ 12-18 ครั้ง/ชม. และสภาวะการฉายรังสีแสง เป็นวัฏจักรแสง/ความมืด 12 ชั่วโมงที่ 150-300 ลักซ์ หนูถูกปรับให้เข้ากับสภาพห้องของสัตว์เป็นเวลา 7 วันก่อนการทดลอง ขั้นตอนทั้งหมดที่เกี่ยวข้องกับสัตว์ตลอดการทดลองดำเนินการอย่างเคร่งครัดตามกฎสำหรับการใช้สัตว์ทดลองตามที่สถาบันสุขภาพแห่งชาติสหรัฐอเมริการับรองและประกาศใช้

2.6.2. การออกแบบทดลอง

หนูเมาส์ ICR ถูกสุ่มแบ่งออกเป็นหกกลุ่ม (กลุ่มไร้เดียงสา กลุ่มควบคุมเชิงลบ กลุ่มควบคุมเชิงบวก และกลุ่มทดสอบสามกลุ่ม) โดยมีสัตว์ 10 ตัวในแต่ละกลุ่ม กลุ่มที่ไร้เดียงสารับประทานด้วยน้ำกลั่น กลุ่มควบคุมเชิงลบถูกบริหารให้ทางปากด้วยแอลกอฮอล์ (เหล้าขาว Er Guo-tou, 56 เปอร์เซ็นต์, 6 มล./กก.) กลุ่มควบคุมเชิงบวกถูกบริหารให้รับประทานด้วยไบไซโคล (300 มก./กก.) และ 5 ชั่วโมงต่อมาด้วยแอลกอฮอล์ กลุ่มทดสอบสามกลุ่มถูกบริหารให้รับประทานด้วย CDP-C ที่ขนาดยา 200, 600, 1800 มก./กก. และ 5 ชั่วโมงต่อมาด้วยแอลกอฮอล์ หนูเมาส์ทั้งหมดถูกบริหารให้เป็นเวลา 31 วันติดต่อกัน

2.6.3. การกำหนดดัชนีทางซีรั่ม

ประมาณ 4 ชั่วโมงหลังจากการบำบัดด้วยแอลกอฮอล์ครั้งสุดท้าย เก็บเลือดจากเบ้าตาและหมุนเหวี่ยงที่ 3000 กรัมเป็นเวลา 15 นาที หลังจากแยกซีรัม กิจกรรมของเอนไซม์ของอะลานีน ทรานสอะมิเนส (ALT), กรดฟอสฟาเตส (ACP), -กลูตามิล ทรานส์เปปติเดส ( -GTP) และไตรกลีเซอไรด์ (TG) ถูกกำหนดหาโดยใช้ชุดตรวจวินิจฉัย
2.6.4. การกำหนดตัวชี้วัดตับ

หลังจากการเก็บเลือด หนูทั้งหมดถูกประหารชีวิต ตับของหนูแต่ละตัวถูกตัดออกทันที ล้างด้วยน้ำเกลือทางสรีรวิทยา เนื้อเยื่อตับถูกแยกออกจากกลีบด้านซ้าย จากนั้นเนื้อเยื่อถูกสับและทำให้เป็นเนื้อเดียวกันด้วยสารละลายโพแทสเซียมคลอไรด์ที่เป็นน้ำ (1.15 เปอร์เซ็นต์ น้ำหนัก/ปริมาตร) ในเครื่องผสมแก้ว (พอตเตอร์ เอลเวห์เจม เทฟลอน) เป็นเวลา 60 วินาทีเพื่อทำให้ตับเป็นเนื้อเดียวกัน (10 เปอร์เซ็นต์โดยน้ำหนัก) กิจกรรมของเอนไซม์ของซูเปอร์ออกไซด์ดิสมิวเตส (SOD), มาลอนไดอัลดีไฮด์ (MDA), กลูตาไธโอนเอส-ทรานสเฟอเรส (GST) และปริมาณไตรกลีเซอไรด์ (TG) ถูกวัดโดยใช้ชุดตรวจวินิจฉัย

2.6.5. การศึกษาทางจุลพยาธิวิทยา

ส่วนที่เหลือของตับได้รับการแก้ไขในตรึงของ Bouin เป็นเวลา 24 ชั่วโมง หลังจากการขจัดน้ำออกโดยใช้สารละลายเอทานอลที่เป็นน้ำ (50-100 เปอร์เซ็นต์ ปริมาตรต่อปริมาตร) เนื้อเยื่อตับจะถูกล้างในไซลีนและฝังในพาราฟิน ส่วนของตับ (5 มม.) ถูกย้อมด้วยสารส้มฮีมาทอกซิลินและอีโอซิน (HE) ภาพของส่วนของตับและการเปลี่ยนแปลงทางจุลพยาธิวิทยาถูกจับด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง (Nikon-DS-L1-5M)

2.7. การวิเคราะห์ทางสถิติ

ข้อมูลถูกแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ± ความคลาดเคลื่อนมาตรฐานของค่าเฉลี่ย (SEM) จากสาม (การวิเคราะห์องค์ประกอบทางเคมีและการทดสอบสารต้านอนุมูลอิสระ) ห้า (ความมีชีวิตของเซลล์) หรือการทดลองอิสระสิบครั้ง (การวิจัยภายในร่างกาย) นัยสำคัญทางสถิติของความแตกต่างระหว่างกลุ่มวิเคราะห์โดยการวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว (ANOVA) ตามด้วยการทดสอบหลายช่วงของ Student-Newman-Keuls โดยใช้ซอฟต์แวร์ SPSS 190 ในการวิเคราะห์ทั้งหมด p<0.05,><0.01, or=""><0.001 indicated="" statistical="">

3. ผลลัพธ์และการอภิปราย

3.1. ลักษณะของ CDPs

ดังแสดงในรูปที่ 1A CDP-A มีสองกลุ่ม น้ำหนักโมเลกุลคือ 4000 kDa และ 3946 kDa น้ำหนักโมเลกุลของ CDP-B และ CDP-C คือ 2400 kDa และ 1300 kDa องค์ประกอบโมโนแซ็กคาไรด์แสดงในรูปที่ 1B CDP-A, CDP-B และ CDP-C ประกอบด้วยโมโนแซ็กคาไรด์ที่จำเป็น 6 ชนิดที่มีสัดส่วนต่างกัน ได้แก่ แมนโนส (ชาย) แรมโนส (Rha) กรดกาแลคโตโรนิก (GalUA) กลูโคส (Glc) กาแลคโตส (Gal) และอาราบิโนส ( อารา). นอกจากโมโนแซ็กคาไรด์หกตัวที่กล่าวถึงข้างต้นแล้ว ไซโลส (Xyl) ยังปรากฏใน CDP-C ด้วย นอกจากนี้ CDP-C ยังมีสัดส่วนของ GalUA ที่มากกว่าเศษส่วนอีกสองส่วน

ความบริสุทธิ์และปริมาณโปรตีนของ CDP แสดงในตารางที่ 1 ตารางที่ 1 แสดงว่า CDP-A มีความบริสุทธิ์สูงสุด ซึ่งอยู่ที่ 75.57 เปอร์เซ็นต์ ในขณะที่ความบริสุทธิ์ของ CDP-B และ CDP-C เท่ากับ 74.72 เปอร์เซ็นต์ และ 68.92 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ ปริมาณโปรตีนของ CDP-A, CDP-B และ CDP-C คือ 1.27 เปอร์เซ็นต์ , 1.24 เปอร์เซ็นต์ และ 1.05 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ

ตารางที่ 1.ความบริสุทธิ์และปริมาณโปรตีนของ CDP ข้อมูลคือค่าเฉลี่ย± SEM ของการทำซ้ำสามครั้ง

สเปกตรัม FT-IR ของคาร์โบไฮเดรตถูกใช้เพื่อกำหนดลักษณะโครงสร้างของพวกมัน และมักจะใช้สำหรับการวิเคราะห์เชิงคุณภาพของกลุ่มฟังก์ชันอินทรีย์ โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับ OH, CO และ C=O [39] สเปกตรัม FT-IR ของ CDP แสดงในรูปที่ 1C แต่ละสเปกตรัมแสดงพีคการยืดที่แรงและกว้างประมาณ 3293 ซม.-1 สำหรับการสั่นสะเทือนแบบยืด OH และค่าสูงสุดในการดูดซับที่อ่อนแอที่ 2939 ซม.-1 สำหรับการสั่นสะเทือนแบบยืด CH แถบดูดกลืนที่ 1650 ซม.-1 เกิดจากการสั่นสะเทือนแบบยืดแบบไม่สมมาตร C=O แถบดูดซับกว้างที่คุณลักษณะ 1418 ซม.-1 ทำให้เกิดการสั่นสะเทือนที่ผิดรูปของพันธะ CH พอลิแซ็กคาไรด์แต่ละชนิดมีแถบเฉพาะในพื้นที่ 1000-1200 cm-1 ซึ่งถูกครอบงำโดยการสั่นสะเทือนของวงแหวนซึ่งซ้อนทับกับการสั่นแบบยืดของกลุ่มด้านข้าง (C-OH) และการสั่นสะเทือนของแถบไกลโคซิดิก (COC) การดูดซึมที่ 1,036 ซม.-1 แสดงว่าเป็นน้ำตาลในรูปแบบไพราโนส การดูดกลืนแสงที่เกือบ 829 ซม.-1 แสดงให้เห็นการเชื่อมโยงของ -ไกลโคไซด์ในโครงสร้างโมเลกุลของ CDP ดังแสดงในรูปที่ 1 C แถบดูดกลืนของ CDP-C ที่ 1650 cm-1 จะแรงกว่า CDP-A และ CDP-B ซึ่งหมายความว่าเนื้อหาของ C=O ใน CDP-C มีค่ามากกว่า ที่อยู่ใน CDP-A และ CDP-B ผลลัพธ์นี้สอดคล้องกับผลลัพธ์ของรูปที่ 1 A ซึ่งเผยให้เห็นสัดส่วนของ GalUA ใน CDP-C ที่มากกว่าใน CDP-A และ CDP-B

3.2. ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของ CDPs

3.2.1. การวิเคราะห์ไฮดรอกซิลเรดิคัล

ในบรรดาชนิดของออกซิเจนที่ทำปฏิกิริยาได้ ไฮดรอกซิลเรดิคัลเป็นชนิดที่มีปฏิกิริยามากที่สุดและก่อให้เกิดความเสียหายอย่างรุนแรงต่อชีวโมเลกุลที่อยู่ติดกัน [40] สำหรับไฮดรอกซิลเรดิคัลนั้นมีกลไกการต้านอนุมูลอิสระสองประเภท: หนึ่งคือการกำจัดไฮดรอกซิลเรดิคัลที่สร้างขึ้นแล้วและอีกประเภทหนึ่งคือการยับยั้งการสร้างไฮดรอกซิลเรดิคัล สำหรับหลังไฮดรอกซิลเรดิคัลถูกสร้างขึ้นโดยปฏิกิริยาของคอมเพล็กซ์ Fe (II) กับไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ กิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระของ CDP อาจเชื่อมโยงกับไอออนของโลหะ ซึ่งไม่ทำปฏิกิริยากับ H2O2 และผลิตไฮดรอกซิลเรดิคัล แต่คีเลตกับ CDP และก่อตัวเป็นสารประกอบเชิงซ้อนของโลหะ สารเชิงซ้อนของโลหะไม่สามารถทำปฏิกิริยาเพิ่มเติมกับ H2O2 เพื่อให้ไฮดรอกซิลเรดิคัล [41-43] ดังนั้น CDP จึงแสดงผลการกำจัดอนุมูลไฮดรอกซิล

รูปที่ 2 A แสดงความสามารถในการกำจัดของ CDP บนไฮดรอกซิลเรดิคัลในลักษณะที่ขึ้นกับความเข้มข้น อัตราการกำจัดของ CDP-A, CDP-B และ CDP-C คือ 29.56 เปอร์เซ็นต์ , 33.44 เปอร์เซ็นต์ และ 38.22 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ CDP-C แสดงกิจกรรมการขับอนุมูลไฮดรอกซิลที่สูงขึ้น เมื่อพิจารณาว่า CDP-C มีสัดส่วนของ GalUA ที่สูงกว่า CDP-A และ CDP-B สารต้านอนุมูลอิสระของ CDP อาจเกี่ยวข้องไม่เพียงแต่กับคุณสมบัติของไอออนของโลหะในการผูกมัดเท่านั้น แต่ยังรวมถึงเนื้อหาของ GalUA, Ara และ Gal [{{15 }}].

3.2.2. การทดสอบอนุมูลอิสระของ superoxide anion

ซูเปอร์ออกไซด์แอนไอออนเรดิคัลเป็นสปีชีส์ที่เป็นพิษที่เกิดจากปฏิกิริยาทางชีวภาพและเคมีเชิงแสงจำนวนมาก และด้วยเหตุนี้จึงทำให้เกิดความเสียหายต่อเนื้อเยื่อ [47] แม้ว่าซูเปอร์ออกไซด์แอนไอออนจะเป็นสารออกซิแดนท์ที่ค่อนข้างอ่อน แต่ก็มีบทบาทสำคัญในการก่อตัวของออกซิเดชันที่มีปฏิกิริยารุนแรงกว่าอื่นๆ เช่น ออกซิเจนเดี่ยวและไฮดรอกซิลเรดิคัล [48] รูปที่ 2 B แสดงความสัมพันธ์ระหว่างความเข้มข้นและความสามารถในการกำจัดของ CDP ต่ออนุมูล superoxide anion เมื่อความเข้มข้นเพิ่มขึ้น CDP-C จะแสดงความสามารถในการกำจัดที่สูงกว่า CDP-B และ CDP-A

3.2.3. DPPH การทดสอบหัวรุนแรง

DPPH ซึ่งเป็นหนึ่งในสารประกอบที่มีไนโตรเจนเป็นศูนย์กลางซึ่งมีอนุมูลอิสระโปรตอนที่มีการดูดซับลักษณะเฉพาะที่ 517 นาโนเมตร ลดลงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อสัมผัสกับสารกำจัดอนุมูลอิสระโปรตอน ดังนั้นจึงใช้กันอย่างแพร่หลายในการประเมินกิจกรรมการขับอนุมูลอิสระของสารต้านอนุมูลอิสระ เป็นที่ยอมรับกันดีว่าอนุมูลอิสระ DPPH ที่ถูกกำจัดโดยสารต้านอนุมูลอิสระนั้นเกิดจากความสามารถในการบริจาคไฮโดรเจน สารต้านอนุมูลอิสระถ่ายโอนอิเล็กตรอนหรืออะตอมของไฮโดรเจนไปยังอนุมูล DPPH และก่อตัวเป็น DPPH-H ซึ่งเป็นการก่อตัวที่ไม่มีอนุมูล [49]

ผลการกำจัด DPPH ทั้งหมดของตัวอย่างทั้งหมดได้รับการทดสอบและผลลัพธ์แสดงในรูปที่ 2 C. ความสามารถในการกำจัดของ CDP ต่อหัวรุนแรง DPPH แสดงลักษณะที่ขึ้นกับความเข้มข้น เมื่อความเข้มข้นเพิ่มขึ้นจาก 1.0 เป็น 5.0 มก./มล. ความสามารถในการกำจัดของ CDP-C เพิ่มขึ้นจาก 52.5 เปอร์เซ็นต์ เป็น 58.7 เปอร์เซ็นต์ สูงกว่า CDP-B (จาก 34.2 เปอร์เซ็นต์ เป็น 56.8 เปอร์เซ็นต์ ) และ CDP-A (จาก 12.5 เปอร์เซ็นต์ เป็น 52.8 เปอร์เซ็นต์ ) ผลการขับ DPPH ของ CDP-C อาจเกี่ยวข้องกับกลุ่มคาร์บอนิลใน GalUA

3.2.4. ABTS การทดสอบหัวรุนแรง

การทดสอบอนุมูลอิสระของ ABTS มักใช้สำหรับวัดกำลังการต้านอนุมูลอิสระทั้งหมดของสารต้านอนุมูลอิสระที่มีศักยภาพของตัวอย่างทดสอบ [50] ผลของการกำจัด ABTS ของตัวอย่างทั้งหมดแสดงในรูปที่ 2 D. ความสามารถในการกำจัดของ CDP ต่ออนุมูล ABTS แสดงลักษณะที่ขึ้นกับปริมาณรังสี IC50 ของ CDP-A, CDP-B และ CDP-C คือประมาณ 4.0 มก./มล., 2.5 มก./มล. และ 1.2 มก./มล. ตามลำดับ ผลการวิจัยพบว่า CDP มีกิจกรรมการไล่ขยะ ABTS

โดยสรุป ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของ CDP-C สูงกว่า CDP-A และ CDP-B มีรายงานว่ากิจกรรมทางเภสัชวิทยาบางอย่างของพอลิแซ็กคาไรด์เกี่ยวข้องกับ GalUA[51] ในการทดลองนี้ สัดส่วนของ GalUA ใน CDP-C มากกว่าใน CDP-A และ CDP-B โดยเลือก CDP-C เพื่อตรวจสอบผลของ hepatoprotective ต่อโรคตับเรื้อรังที่เกิดจากแอลกอฮอล์

3.3. ผลกระทบของ CDP-C ต่อความมีชีวิตของเซลล์ HepG2

การวัดความมีชีวิตของเซลล์เป็นวิธีทั่วไปในการประเมินประสิทธิภาพของยาธรรมชาติ [52] จากผลลัพธ์ที่ CDP-C มีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระสูงสุด ผลของ CDP-C ต่อความมีชีวิตของเซลล์ HepG2 ได้รับการประเมิน ผลลัพธ์แสดงไว้ในรูปที่ 3 การบำบัดด้วยแอลกอฮอล์ทำให้ความสามารถในการมีชีวิตของเซลล์ HepG2 ลดลงอย่างเห็นได้ชัด แต่ CDP-C สามารถปรับปรุงอัตราการรอดชีวิตได้อย่างเห็นได้ชัดเมื่อเทียบกับกลุ่มเชิงลบ ดังที่แสดงไว้ในรูปที่ 3 ความอยู่รอดของเซลล์ไม่แสดงลักษณะที่ขึ้นกับความเข้มข้นอย่างแม่นยำด้วย CDP-C ในทางตรงกันข้าม เมื่อความเข้มข้นของ CDP-C ถึง 3.00 มก./มล. ความมีชีวิตของเซลล์ HepG2 จะลดลงอย่างมาก สาเหตุของความมีชีวิตของเซลล์ลดลงอาจเป็นเพราะความเข้มข้นต่ำของ CDP-C มีประโยชน์ต่อการอยู่รอดของเซลล์ HepG2 อย่างไรก็ตาม เมื่อความเข้มข้นของพอลิแซ็กคาไรด์ในอาหารเลี้ยงเชื้อสูงพอที่จะเปลี่ยนสภาวะแวดล้อมจุลภาคของเซลล์ ความมีชีวิตของเซลล์ HepG2 ถูกยับยั้ง

3.4. ผลทางเภสัชวิทยาของ CDP-C

3.4.1. ผลกระทบของ CDP-C ต่อดัชนีทางซีรัมวิทยา

การใช้แอลกอฮอล์ในทางที่ผิดมีสัดส่วนเกือบ 4 เปอร์เซ็นต์ของอัตราการเสียชีวิตทั้งหมด ซึ่งได้กลายเป็นปัญหาสังคมที่ร้ายแรงในโลก ในร่างกายมนุษย์ แอลกอฮอล์จะถูกเผาผลาญในตับหลังจากที่ถูกดูดซึมผ่านเยื่อบุกระเพาะอาหารและลำไส้เล็ก [53-55] โรคตับจากแอลกอฮอล์มักเกิดขึ้นหลังจากดื่มแอลกอฮอล์เป็นเวลาหลายปี [56] ภาวะทางพยาธิสภาพทั่วไป เช่น ไขมันพอกตับ ตับอักเสบ พังผืด และโรคตับแข็ง [57] หรือแม้แต่โรคมะเร็ง เช่น มะเร็งตับและมะเร็งลำไส้ [58] พบได้ในความผิดปกติของตับที่เชื่อมโยงกับแอลกอฮอล์ ดังนั้นแอลกอฮอล์จึงเป็นพิษต่อตับโดยทั่วไปและมีการใช้กันอย่างแพร่หลายในฐานะตัวกระตุ้นให้เกิดการบาดเจ็บที่ตับในการวิจัยทางวิทยาศาสตร์ [59] เมื่อพิจารณาว่าโรคตับที่เกิดจากแอลกอฮอล์มักเกิดจากเครื่องดื่มแอลกอฮอล์และวัตถุเจือปนอาหารมากกว่าเอธานอลในอุตสาหกรรม ดังนั้นจิตวิญญาณสีขาว Er Guo-tou จึงถูกใช้เพื่อสร้างแบบจำลองการบาดเจ็บที่ตับในหนูทดลอง ICR ในการศึกษานี้ ไบไซโคลเป็นยาสามัญที่ใช้รักษาอาการบาดเจ็บที่ตับเรื้อรัง ดังนั้นจึงใช้เพื่อกำหนดรูปแบบการควบคุมเชิงบวก

เซลล์ตับมีความเข้มข้นของ ALT ในไซโตพลาสซึมและไมโตคอนเดรียสูงกว่า เนื่องจากความเสียหายของเซลล์ตับต่างๆ การรั่วของไซโตซอลจะทำให้ ALT ในซีรัมเพิ่มขึ้น ดังนั้นการส่งเสริม ALT จึงเป็นตัวบ่งชี้ถึงการรั่วไหลของเซลล์และความผิดปกติในการทำงานของตับ [60] ดังนั้น ระดับ ALT ในซีรัมจึงมักถูกกำหนดเป็นตัวบ่งชี้เพื่อประเมินสุขภาพตับ [61] ด้วยเหตุผลที่คล้ายคลึงกัน -GTP, ACP และ TG ถูกใช้เป็นตัวชี้วัดเพื่อประเมินภาวะสุขภาพของตับ [62]

ในการศึกษานี้ กิจกรรมป้องกันตับของ CDP-C ได้รับการประเมินโดยการกำหนดระดับของ ALT, ACP, -GTP และ TG ผลลัพธ์แสดงในรูปที่ 4 A, B, C และ D ตัวบ่งชี้ซีรั่ม 4 ตัวได้รับการส่งเสริมอย่างมากโดยการบำบัดด้วยแอลกอฮอล์ในกลุ่มเชิงลบ แต่ CDP-C สามารถลดทอนการเปลี่ยนแปลงเหล่านี้ที่เกิดจากการบริหารแอลกอฮอล์ได้ อย่างไรก็ตาม ดัชนีทางซีรั่มบางชนิดไม่แสดงลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยากับ CDP-C ในรูปที่ 4 A และ B CDP-C ที่ความเข้มข้นต่ำมีผลอย่างมากต่อการฟื้นฟู ALT และ ACP แต่ผลของ CDP-C ที่ความเข้มข้นสูงสุดไม่มีนัยสำคัญ อันที่จริง ผลิตภัณฑ์จากธรรมชาติหลายชนิดมีประโยชน์ต่อสุขภาพในขนาดต่ำ แต่เป็นอันตรายต่อสุขภาพหากใช้ในปริมาณมาก [60] สาเหตุอาจเป็นเพราะการกินพอลิแซ็กคาไรด์มากเกินไปจะส่งผลต่อการเผาผลาญอาหารตามปกติของสิ่งมีชีวิต เช่นที่จะส่งผลเสียต่อสุขภาพร่างกาย อย่างไรก็ตาม ต้องมีการวิจัยกลไกโดยละเอียดเพิ่มเติม

3.4.2. ผลกระทบของ CDP-C ต่อตัวบ่งชี้ตับ

สิ่งมีชีวิตที่อยู่ภายใต้ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันมักจะพัฒนากลไกการป้องกันสารต้านอนุมูลอิสระ และ SOD เป็นระบบต้านอนุมูลอิสระที่ใช้เอนไซม์โดยทั่วไป [63] SOD เร่งการเปลี่ยนรูปของ superoxide anion เป็น O2 และ H2O2 [64] GST ซึ่งเป็นโปรตีนที่ละลายน้ำได้ใน cytosol ก็มีบทบาทสำคัญในการล้างพิษของตับเช่นกัน ด้วยเหตุผลที่กล่าวมาข้างต้น SOD และ GST จึงเป็นตัวบ่งชี้ถึงความเป็นพิษต่อตับที่เกิดจากแอลกอฮอล์ MDA และ TG ในตับยังใช้เป็นตัวบ่งชี้ความเป็นพิษต่อตับ [65]

ในการศึกษานี้ ผลของ CDP-C ต่อการทำงานของตับแสดงในรูปที่ 5 รูปภาพ A, B, C และ D แสดงผลของ CDP-C ต่อ SOD, MDA, GST และ TG ตามลำดับ สี่ภาพเหล่านี้แสดงให้เห็นว่าหนูที่ได้รับการบำบัดด้วยแอลกอฮอล์จะลดระดับ SOD และ GST ลงอย่างเห็นได้ชัด และเพิ่มระดับ MDA และ TG แต่ CDP-C สามารถลดทอนการเปลี่ยนแปลงนี้ได้อย่างเห็นได้ชัด คล้ายกับปรากฏการณ์ที่แสดงไว้ในส่วนที่ 3.4.1 ตัวบ่งชี้ตับยังไม่ในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยากับ CDP-C เหตุผลนี้อาจคล้ายกับกลไกที่แสดงไว้ในหัวข้อ 3.4.1 การศึกษาก่อนหน้านี้รายงานว่าผลของพอลิแซ็กคาไรด์ต่อ SOD และ catalase อาจเกี่ยวข้องกับการกระตุ้นการแสดงออกของยีนของ SOD และ catalase [66] อย่างไรก็ตาม จำเป็นต้องมีการศึกษาเพิ่มเติมเพื่ออธิบายกลไกตับของ CDP-C และความสัมพันธ์ระหว่างโครงสร้างและหน้าที่ของมัน

3.5. ผลทางจุลพยาธิวิทยาของ CDP-C ต่อหนูที่เกิดจากแอลกอฮอล์

บนพื้นฐานของการสังเกตทางจุลพยาธิวิทยาในส่วนของตับ กลุ่มที่ไร้เดียงสาแสดงโครงสร้างเซลล์ปกติที่มีเซลล์ตับที่ชัดเจนและไม่มีความผิดปกติทางเนื้อเยื่อ (รูปที่ 6 A) ในการเปรียบเทียบการบริหารแอลกอฮอล์ทำให้ตับถูกทำลายอย่างรุนแรงในหนูในกลุ่มเชิงลบ ส่วนของตับแสดงให้เห็นการสะสมของไขมันในตับ, เนื้อร้ายของตับและการบวม, การก่อตัวของแวคิวโอลในเซลล์ และขอบเขตของเซลล์ก็หายไปเช่นกัน (รูปที่ 6 B) ส่วนตับของหนูที่ได้รับยาไบไซโคล (รูปที่ 6 C) โดยมีปริมาณ CDP-C ที่แตกต่างกัน (รูปที่ 6 DF) แสดงให้เห็นการฟื้นฟูของการบิดเบือนที่ปรากฏในกลุ่มควบคุมเชิงลบอย่างเห็นได้ชัด ผลลัพธ์เหล่านี้ยืนยันว่าแอลกอฮอล์ทำให้เกิดการบิดเบือนในระดับหนึ่งในเซลล์ตับของกลุ่มควบคุมเชิงลบ อย่างไรก็ตาม CDP-C ได้กู้คืนการเปลี่ยนแปลงเหล่านี้

เป็นที่ยอมรับกันดีว่าฤทธิ์ป้องกันตับของพอลิแซ็กคาไรด์มีความสัมพันธ์กับฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ [67, 68] ปริมาณกรดยูริกสูงได้รับการพิสูจน์แล้วว่าเป็นประโยชน์ต่อฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของพอลิแซ็กคาไรด์ [44, 45] โพลีแซ็กคาไรด์ที่อุดมไปด้วย Gal และ Ara ยังได้รับการตรวจสอบว่ามีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระสูงกว่า [46] อย่างไรก็ตาม เป็นเรื่องยากสำหรับพอลิแซ็กคาไรด์ระดับโมเลกุลขนาดใหญ่ที่จะเข้าสู่เซลล์เยื่อบุผิวในลำไส้โดยตรง สำหรับ CDP-C (ที่มีน้ำหนักโมเลกุล 1300kDa) การเข้าสู่ร่างกายโดยตรงและมีบทบาทในการป้องกันตับไม่ใช่เรื่องง่าย รายงานที่ตีพิมพ์เปิดเผยว่าน้ำหนักโมเลกุลของพอลิแซ็กคาไรด์ลดลงหลังจากการย่อยอาหารในกระเพาะอาหารและลำไส้ [69] ดังนั้นเราจึงสันนิษฐานว่า CDP-C อาจถูกย่อยสลายเป็นพอลิแซ็กคาไรด์ที่มีน้ำหนักโมเลกุลต่ำและดูดซึมโดยเซลล์เยื่อบุผิวในลำไส้ การลดปลายของพอลิแซ็กคาไรด์สามารถเพิ่มขึ้นได้เนื่องจากการแตกตัวของพันธะไกลโคซิดิก [69, 70] ตามองค์ประกอบโมโนแซ็กคาไรด์ของ CDP-C พอลิแซ็กคาไรด์ที่ย่อยสลายแล้วที่มีน้ำหนักโมเลกุลต่ำควรมี GalUA, Ara และ Gal ดังนั้นโพลีแซ็กคาไรด์ที่มีน้ำหนักโมเลกุลต่ำเหล่านี้ซึ่งมีปลายรีดิวซ์และมี GalUA, Ara และ Gal อาจมีบทบาทในการปกป้องตับในร่างกาย อย่างไรก็ตาม ต้องมีการวิจัยกลไกโดยละเอียดเพิ่มเติม

4. บทสรุป

จากการวิเคราะห์องค์ประกอบโมโนแซ็กคาไรด์และสเปกตรัม FT-IR เศษส่วนของ CDP ทั้งสามประกอบด้วย Man, Rha, GalUA, Glc, Gal และ Ara CDP-C มี GalUA จำนวนมาก CDP-C มีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระสูงสุด ผลการวิจัยทั้งในหลอดทดลองและ Vivo แสดงให้เห็นว่า CDP-C มีฤทธิ์ปกป้องตับต่อการบาดเจ็บที่ตับเรื้อรังที่เกิดจากแอลกอฮอล์ กลไกเบื้องหลังเกี่ยวข้องกับการปรับกิจกรรมของเอนไซม์สัมพันธ์ ลด MDA และ TG ในตับ กิจกรรมทางสรีรวิทยาของ CDP-C อาจเชื่อมโยงกับ GalUA การค้นพบนี้ให้ข้อมูลเชิงลึกใหม่เกี่ยวกับเป้าหมายทางเภสัชวิทยาของ C. deserticola ในการป้องกันโรคตับจากแอลกอฮอล์

Cistanche herbaปกป้องตับและเสริมภูมิต้านทาน.

สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม กรุณาคลิกที่นี่