Gomisin N ยับยั้งการสร้างเม็ดสีโดยการควบคุมเส้นทางการส่งสัญญาณ PI3K/Akt และ MAPK/ERK ใน Melanocytes
Mar 17, 2022
ติดต่อ:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
เชิงนามธรรม: โกมิซิน นูสารลิกแนนที่พบใน Schisandra Chinensis มีฤทธิ์ต้านออกซิเดชัน ต้านเนื้องอก และต้านการอักเสบในการศึกษาต่างๆ ในที่นี้ เรารายงานประสิทธิภาพการต่อต้านการสร้างเม็ดสีของ Gomisin N ในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมเป็นครั้งแรกเป็นครั้งแรก เซลล์เช่นเดียวกับในตัวอ่อนม้าลาย Gomisin N ลดปริมาณเมลานินลงอย่างเห็นได้ชัดโดยไม่เป็นพิษต่อเซลล์ แม้ว่าจะไม่สามารถปรับกิจกรรมการเร่งปฏิกิริยาของเห็ดได้ก็ตามไทโรซิเนสในหลอดทดลองโกมิซิน นูลดระดับการแสดงออกของโปรตีนหลักที่ทำงานในการสร้างเม็ดสี. Gomisin N ตัวรับ melanocortin 1 ที่ปรับลด (MC1R), adenylyl cyclase 2, ปัจจัยการถอดรหัสที่เกี่ยวข้องกับ microphthalmia (MITF), ไทโรซิเนส,ไทโรซิเนสโปรตีนที่เกี่ยวข้อง-1(TRP-1) และโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับไทโรซิเนส-2 (TRP-2) นอกจากนี้ เซลล์ Melan-A ที่บำบัดด้วย Gomisin ยังแสดงระดับ p-Akt และ p-ERK เพิ่มขึ้น ซึ่งหมายความว่าการกระตุ้นเส้นทาง PI3K/Akt และ MAPK/ERK อาจทำหน้าที่ยับยั้งการสร้างเม็ดสี. นอกจากนี้เรายังตรวจสอบด้วยว่า Gomisin Nreduced การผลิตเมลานินโดยการปราบปรามการแสดงออกของ MITFไทโรซิเนส, TRP-1 และ TRP-2ในหนูเมาส์และเซลล์ของมนุษย์ ตลอดจนในการพัฒนาตัวอ่อนของม้าลาย สรุปได้ว่าโกมิซิน นูยับยั้งการสังเคราะห์เมลานินโดยการยับยั้งการแสดงออกของ MITF และ melanogenicenzymes อาจผ่านการปรับเส้นทาง PI3K/Akt และ MAPK/ERK
คำสำคัญ:ชิแซนดรา ชิเนนซิส;โกมิซิน นู; ลิกแนน;การสร้างเม็ดสี; ผิวขาวใส
cistanche มีหน้าที่ทำให้ผิวขาวขึ้น
1. บทนำ
เมลานินเป็นเม็ดสีที่พบในอวัยวะของสัตว์ส่วนใหญ่ รวมทั้งผิวหนัง ผม ตา หูชั้นใน กระดูก หัวใจ และสมอง [1,2]การสร้างเมลาโนเจเนซิสเป็นกระบวนการที่ซับซ้อนซึ่งเกี่ยวข้องกับเส้นทางการส่งสัญญาณหลายทาง ตัวรับเมลาโนคอร์ติน 1 (MC1R) เป็นตัวควบคุมหลักในการสร้างเม็ดสีส่งสัญญาณผ่านลิแกนด์ เช่น ฮอร์โมนกระตุ้นเมลาโนไซต์ (MSH) และฮอร์โมนอะดรีโนคอร์ติโคโทรปิก (ACTH) [3] เมลานินของผิวหนังถูกสังเคราะห์ทางชีวเคมีโดยเมลาโนไซต์ในชั้นหนังกำพร้าแล้วย้ายไปที่ keratinocytes ซึ่งพวกมันมีบทบาทสำคัญในการปกป้องผิวหนังโดยการดูดซับรังสียูวีจากแสงแดดและกำจัดอนุมูลอิสระที่ทำปฏิกิริยา [4,5] การสังเคราะห์และถ่ายโอนเมลานินในผิวหนังและรูขุมขนถูกควบคุมโดยความพร้อมของสารตั้งต้น [6] แอล-ไทโรซีนและแอล-ไดไฮดรอกซีฟีนิลอะลานีน (L-DOPA) ซึ่งเป็นสารตั้งต้นที่สำคัญของเอนไซม์สร้างเม็ดสี ยังทำหน้าที่เป็นสารควบคุมคล้ายฮอร์โมนในการสร้างเม็ดสี [7] ในทางกลับกัน การผลิตเมลานินที่มากเกินไปส่งผลให้เกิดปัญหาผิวที่ไม่พึงประสงค์ เช่น กระและฝ้า [8,9] การสร้างเมลาโนเจเนซิสอาจส่งผลต่อพฤติกรรมปกติและเมลาโนไซต์ที่เป็นมะเร็งโดยการปรับคุณสมบัติยืดหยุ่นของเซลล์ [10] แม้ว่าตัวรับสำหรับเซโรโทนินและเมลาโทนินที่แสดงออกในเซลล์ผิวหนังจะมีบทบาทสำคัญในการรักษาสภาวะสมดุลของเซลล์ แต่การผลิตเมลานินที่มากเกินไปผ่านการเปลี่ยนแปลงของฮอร์โมนที่ไม่สามารถควบคุมได้อาจทำให้เกิดภาวะทางพยาธิวิทยาในผิวหนังได้ [11]
ดังนั้นจึงมีความพยายามอย่างกว้างขวางในการอธิบายกลไกระดับโมเลกุลที่ควบคุมการสร้างเม็ดสีเป็นขั้นตอนหลักสำหรับการรักษาความผิดปกติของผิวหนังที่มีเม็ดสีมากเกินไป นอกจากนี้ประเภทต่างๆของผิวขาวใสสารที่ยับยั้งการสังเคราะห์เมลานินได้รับการระบุจากสารสกัดจากพืชและที่ไม่ใช่พืชและใช้ในเชิงพาณิชย์ในเครื่องสำอาง [12,13] สารฟอกสีฟันที่ใช้กันอย่างแพร่หลาย ได้แก่ ไฮโดรควิโนน เมควินอล อาร์บูติน กรดโคจิก แอสคอร์บิกแอซิด และเรติโนคาซิด [12,14] อย่างไรก็ตาม มีข้อ จำกัด หลายประการในการรักษาอาการที่เกิดจากรอยดำแบบเฉียบพลันหรือเรื้อรังในมนุษย์ ตัวอย่างเช่น ไฮโดรควิโนนแม้ว่าจะมีการใช้สารฟอกสีมาเป็นเวลานานตั้งแต่ทศวรรษ 1960 แต่ก็สามารถทำให้เกิดการระคายเคืองผิวหนังและสัมผัสกับผิวหนังอักเสบได้ [15,16] นอกจากนี้ยังนำไปสู่ความเสียหายของ DNA โดยการเพิ่มการผลิตของชนิดออกซิเจนปฏิกิริยาและการพัฒนาของ ochronosis ภายนอกในเซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม [17,18] อื่นๆ ที่รู้จักกันดีไทโรซิเนสสารยับยั้ง เช่น กรดโคจิกและกรดแอสคอร์บิกไม่เพียงแต่มีการซึมผ่านของผิวหนัง ความเสถียร และประสิทธิภาพในการฟอกสีฟันที่ไม่ดีเท่านั้นแต่ยังสามารถทำให้เกิดพิษต่อเซลล์ ผิวหนังอักเสบ และเกิดผื่นแดงจากการใช้ในระยะยาว [19,20] ในเรื่องนี้ มีความจำเป็นต้องพัฒนาสารฟอกสีฟันที่ปลอดภัยและมีประสิทธิภาพมากขึ้นสำหรับการรักษารอยดำของมนุษย์ สมุนไพรธรรมชาติที่ใช้ในยาแผนโบราณอาจเป็นแหล่งทางเลือกในการระบุสารฟอกสีฟันแบบใหม่ที่ควบคุมขั้นตอนสำคัญในการสร้างเม็ดสีมีผลข้างเคียงน้อยหรือไม่มีเลย [21]
Schisandra chinensis หรือที่รู้จักในชื่อเบอร์รี่ชั้นดีทางตอนเหนือ พบได้ตามธรรมชาติในภาคตะวันออกเฉียงเหนือของจีน รัสเซียตะวันออกไกล ญี่ปุ่น และเกาหลี [22] พืชชนิดนี้ใช้รักษาโรคตาบอดกลางคืน ผิวหนังไหม้ การอักเสบปลอดเชื้อ และโรคตับในการแพทย์แผนโบราณมานานแล้ว [23,24] สารสกัดจากผล S. chinensis และสารประกอบลิกแนนแสดงให้เห็นว่ามีผลทางเภสัชวิทยาต่างๆ ในเซลล์ของหนู ตัวอย่างเช่น Schisandra A และ C มีฤทธิ์ต้านการเกิดออกซิเดชัน ในขณะที่ Schisandra B มีฤทธิ์ต้านการเกิดพังผืด ต้านการอักเสบ ต่อต้านอนุมูลอิสระ และต่อต้าน apoptoticactivities [25] สารประกอบลิกแนนอีกตัวหนึ่งโกมิซิน นู(รูปที่ 1A) มีรายงานว่ายับยั้งการตายแบบอะพอพโทซิสที่เกิดจากความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันโดยการยับยั้งการปลดปล่อยไซโตโครมซีจากไมโทคอนเดรียไปยังไซโตพลาสซึม ความแตกแยกของแคสเปส 3 และ PARP และการซึมผ่านของไมโตคอนเดรียที่เกิดจาก Ca2 plus ในคาร์ดิโอไมโอไซต์ของหนู H9c2 [7,8] ที่น่าสนใจคือ การศึกษาหลายชิ้นโดยใช้แบบจำลองเมาส์และสายเซลล์ผิวหนังของมนุษย์ได้เปิดเผยศักยภาพในการรักษาของ S. chinensis สำหรับการรักษาโรคผิวหนัง Lee et al. รายงานว่าสารสกัดจากเมทานอลของผล S. chinensis ช่วยบรรเทาอาการผิวหนังอักเสบจากการสัมผัสโดยลดการผลิตไซโตไคน์ที่ก่อให้เกิดการอักเสบ เช่น TNF- และ IFN- เมื่อทาเฉพาะที่ [8,24] คัง et al. แสดงให้เห็นว่าสารสกัดจากน้ำ Schisandra Fructus ยับยั้งการกระตุ้น IκB ดังนั้นจึงยับยั้งการผลิต TNF- , IL-6 และ GM-CSF ในสายเซลล์เสามนุษย์ HMC-1 [26] การค้นพบนี้ทำให้เราตั้งสมมติฐาน ว่า S. chinensis lignans อาจส่งผลต่อการทำงานของเซลล์ผิวหนังในวงกว้างมากขึ้น ในการศึกษานี้ เราพยายามศึกษาบทบาทสมมุติของโกมิซิน นูซึ่งเป็นหนึ่งในสารประกอบลิกแนนที่สำคัญใน S. Chinensis ในการควบคุมการสร้างเม็ดสีจึงประเมินศักยภาพการใช้เป็นสารเสริมความงาม ที่นี่เรารายงานว่าโกมิซิน นูยับยั้งการสังเคราะห์เมลานินโดยปราศจากความเป็นพิษต่อเซลล์ในเซลล์ของมนุษย์และหนู เช่นเดียวกับในตัวอ่อนของม้าลาย
2. ผลลัพธ์
2.1. ผลของ Gomisin N ต่อการสร้างเมลานินและความมีชีวิตของเซลล์
เพื่อตรวจสอบผลกระทบของ Gomisin N ต่อการสร้างเม็ดสี, เรารักษา melanocytes ของเมาส์ด้วยความเข้มข้นที่แตกต่างกันของโกมิซิน นูเป็นเวลา 72 ชั่วโมง แล้วจึงประเมินการเปลี่ยนแปลงของเนื้อหาเมลานิน Gomisin Ntreatment ลดปริมาณเมลานินทั้งในเซลล์ melanocyte ปกติ Melan-A และในเซลล์ B16F10melanoma ในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยาโดยไม่มีความเป็นพิษต่อเซลล์ (รูปที่ 1B, C) เราสังเกตว่า Gomisin N ยับยั้งการผลิตเมลานินที่เกิดจาก MSH ในเซลล์ B16F10 ซึ่งเทียบได้กับผลลัพธ์ที่ได้จากการรักษาด้วย PTU [27] (รูปที่ 1C) เพื่อประเมินว่าการลดลงของเมลานินเมื่อโกมิซิน นูการรักษาเกิดจากกิจกรรมที่ลดลงของไทโรซิเนส เราทำการทดสอบ L-DOPAstaining ในเซลล์เมลาโนไซต์ของผิวหนังชั้นนอก (NHEM) ของมนุษย์ปกติ ดังที่แสดงในรูปที่ 1E NHEMcells ที่ได้รับ Gomisin N มีระดับ L-DOPA ลดลงเมื่อเทียบกับเซลล์ที่ไม่ได้รับการรักษา อย่างไรก็ตาม ผลการยับยั้งของ Gomisin N ต่อการผลิตเมลานินไม่มีนัยสำคัญในเซลล์ humanmelanoma MNT-1 (รูปที่ 1D) .
2.2. ผลของ Gomisin N ต่อกิจกรรม Tyrosinase
เพื่อตรวจสอบว่าโกมิซิน นูยับยั้งไทโรซิเนสกิจกรรมในหลอดทดลอง เราใช้เห็ด tyrosinase และ B16 melanoma cell lysates กรดโคจิกซึ่งเป็นตัวยับยั้งไทโรซิเนสที่รู้จักกันดีถูกใช้เป็นตัวควบคุมเชิงบวก เมื่อรักษาด้วยไทโรซิเนสจากเห็ด ในขณะที่กรดโคจิกลดการทำงานของเอนไซม์อย่างมีนัยสำคัญ Gomisin N ไม่ได้ทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงใดๆ ในการเปลี่ยน L-DOPA เป็นโดปาโครม (รูปที่ 2A) อย่างไรก็ตาม เมื่อรักษาเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 Gomisin N ส่งผลให้ลดลง ในไทโรซิเนสแอคติวิตีของเซลล์ไลเสตในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา (รูปที่ 2B) นอกจากนี้ เมื่อรักษาร่วมกับเซลล์ -MSH inB16โกมิซิน นูย้อนกลับการเพิ่มขึ้นของการสร้างโดปาโครมที่กระตุ้นโดย -MSH (รูปที่ 3C) โดยเฉพาะอย่างยิ่ง Gomisin N ดูเหมือนจะมีประสิทธิภาพมากกว่ากรด Kojic ในการยับยั้งเซลล์กิจกรรมไทโรซิเนสของเซลล์ B16 ตามการกระตุ้น -MSH การค้นพบนี้บ่งชี้ว่าผลการยับยั้งของ GomisinN ต่อการผลิตเมลานินที่สังเกตพบในเซลล์หนูและเซลล์ของมนุษย์ (รูปที่ 1) ไม่ได้เกิดจากการทำหน้าที่ในการยับยั้งกิจกรรมเร่งปฏิกิริยาของไทโรซิเนสโดยตรง อย่างไรก็ตาม ยังคงเป็นไปได้ที่ Gomisin Nregulates การแสดงออกของ tyrosinase หรือโปรตีนอื่น ๆ ที่มีบทบาทสำคัญในการสร้างเม็ดสี.
2.3. ผลของ Gomisin N ต่อการปิดใช้งานเส้นทางส่งสัญญาณ MC1R
เราพยายามอธิบายกลไกเบื้องหลังที่รับผิดชอบต่อผลการยับยั้งของ GomisinN ต่อการผลิตเมลานิน เราให้เหตุผลว่าโกมิซิน นูอาจควบคุมโปรตีนส่งสัญญาณที่เกี่ยวข้องกับการสร้างเม็ดสีและยับยั้งการสังเคราะห์เมลานิน เมลาโนคอร์ติน 1 รีเซพเตอร์ (MC1R) เป็นตัวรับโปรตีนควบคู่อะมีลาโนซิติก จี ซึ่งทำหน้าที่เป็นตัวควบคุมหลักในการสังเคราะห์เมลานิน การกระตุ้น MC1R โดยลิแกนด์ -MSH หรือฮอร์โมน adrenocorticotropic (ACTH) ทำให้เกิด adenylyl cyclase เพิ่มขึ้น ซึ่งจะเพิ่มระดับ cAMP ภายในเซลล์ [2,3] ดังนั้น ระดับการถอดเสียงของ MITF จะเพิ่มขึ้นผ่านทางเส้นทาง Protein kinase-C (PKA)/responsive element-bindingprotein (CREB) [2,28] ในการประเมินผลกระทบด้านกฎระเบียบของ Gomisin N บนเส้นทางการส่งสัญญาณ MC1R เราได้ตรวจสอบระดับการแสดงออกของ MC1R และโมเลกุลการส่งสัญญาณที่ปลายน้ำหลังจากบำบัดเซลล์ Melan-A ด้วย Gomisin N เราสังเกตว่า Gomisin N ลดระดับโปรตีนของทั้ง MC1R และ adenylyl cyclase 2 อย่างมีนัยสำคัญ ในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา (รูปที่ 3A–C)ตามที่คาดไว้โกมิซิน นูเซลล์ที่บำบัดแล้วยังแสดงระดับโปรตีนที่ลดลงของ MITF และที่ทราบเป้าหมายของไทโรซิเนส, TRP-1 และ TRP-2 (รูปที่ 3A, D–G) การค้นพบนี้ชี้ให้เห็นว่า Gomisin N ยับยั้งเอนไซม์ที่ผลิตเมลานินโดยการปิดใช้งาน MITF ผ่านเส้นทางการส่งสัญญาณ MC1R
2.4. ผลของ Gomisin N ต่อฟอสฟอรีเลชันของ Akt และ ERK1/2 ในเซลล์ Melan-A
เป็นที่ทราบกันดีว่าเส้นทาง PI3K/Akt และ MAPK/ERK เกี่ยวข้องกับการสร้างเม็ดสีเมลาโนเจเนซิสโดยการถอดรหัสหรือควบคุม MITF ภายหลังการถอดเสียง เพื่อประเมินว่า GomisinN ส่งผลต่อเส้นทางการส่งสัญญาณเหล่านี้หรือไม่ เราจึงประเมินสถานะฟอสโฟรีเลชันของ Akt และ ERK1/2 โดยการวิเคราะห์ Western blot ดังแสดงในรูปที่ 3H–J การบำบัดด้วยขนาดยาสูง (30 µM) ของโกมิซิน นูphosphorylation ของทั้ง Akt และ ERK อย่างมีนัยสำคัญ ข้อมูลเหล่านี้บ่งชี้ว่าผลการยับยั้งของ Gomisin N onการสร้างเม็ดสีมีแนวโน้มที่จะเชื่อมโยงกับเส้นทาง P13K/Akt และ MAPK/ERK
2.5. Gomisin N ยับยั้งการสร้างเมลาโนเจเนซิสในตัวอ่อนของปลาม้าลาย
ต่อไปเราจะตรวจสอบว่า Gomisin N มีประสิทธิภาพในการยับยั้งหรือไม่การสร้างเม็ดสีในร่างกาย ด้วยเหตุนี้ เราจึงรักษาตัวอ่อนของ zebrafish ด้วย Gomisin N เป็นเวลา 72 ชั่วโมงที่ความเข้มข้น 1, 10, 20 และ 30 µM จากนั้นจึงวัดระดับการแสดงออกของโปรตีนเมลาโนเจน เราสังเกตว่าการรักษาด้วย Gomisin N ยับยั้งการสร้างเมลานินในการพัฒนาตัวอ่อนของม้าลายโกมิซิน นู- เอ็มบริโอที่ได้รับการบำบัดแสดงให้เห็นว่าปริมาณเมลานินลดลงในลักษณะที่ขึ้นกับความเข้มข้นเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมที่ไม่ผ่านการบำบัด (รูปที่ 4) นอกจากนี้เรายังพบว่าระดับโปรตีนของไทโรซิเนส, MITF, TRP-1 และ TRP-2 ลดลงโดยการบำบัดด้วย Gomisin N (รูปที่ 5) ผลลัพธ์เหล่านี้แสดงให้เห็นว่า Gomisin N ยับยั้งการสร้างเม็ดสี ในร่างกาย โดยควบคุมปัจจัยการถอดรหัส MITF และเป้าหมายไทโรซิเนส, TRP-1 และ TRP-2
2.6. Gomisin N ย้อนกลับ Melanogenesis ที่เกิดจาก Rapamycin ใน MNT ของมนุษย์-1
แม้ว่า Gomisin N จะยับยั้งอย่างมีนัยสำคัญการสร้างเม็ดสีในเซลล์ Melan-A และ B16 รวมทั้งตัวอ่อน inzebrafish เราไม่ได้สังเกตผลกระทบของมันต่อเซลล์มะเร็งผิวหนัง MNT-1 ของมนุษย์ เราคาดว่าผลของ Gomisin N อาจตรวจพบได้ในเซลล์ MNT-1 ภายใต้สภาวะที่ควบคุมการสร้างเม็ดสีโดยการกระตุ้นที่เหมาะสม ราพามัยซินสามารถกระตุ้นการสร้างเมลาโนเจเนซิสโดยเพิ่มการทำงานของไทโรซิเนสและระดับโปรตีนของ MITF, ไทโรซิเนส, TRP-1 และ TRP-2 [31] บางส่วนจากการกระตุ้นการย่อยอัตโนมัติ [32] เราตรวจสอบระดับของไทโรซิเนส, MITF,TRP-1 และ TRP-2 ในเซลล์ MNT-1 โดยการวิเคราะห์ Western blot หลังการรักษาร่วมกับ Gomisin N andrapamycin การรักษาด้วยราพามัยซินทำให้เกิดระดับ MITF, TRP-1 และ TRP-2 อย่างมีนัยสำคัญ แต่ไม่มีผลกับไทโรซิเนสระดับ (รูปที่ 6) อย่างไรก็ตาม การรักษาด้วย Gomisin N พลิกกลับผลของราพามัยซินต่อ MITF, TRP-1 และ TRP-2 อย่างมีนัยสำคัญในลักษณะที่ขึ้นกับความเข้มข้น ผลย้อนกลับของโกมิซิน นูต้านราพามัยซินมีแนวโน้มมากกว่าที่ความเข้มข้น 20 และ 30 ไมโครโมลาร์มากกว่า 10 ไมโครโมลาร์ ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า Gomisin N ยับยั้งการสร้างเม็ดสีในเซลล์มะเร็งผิวหนัง MNT-1 ของมนุษย์โดยควบคุมปัจจัยการถอดรหัส MITF และเป้าหมาย TRP-1 และ TRP-2
3. อภิปราย
หน้าที่หลักของเมลานินคือการปกป้องเซลล์ผิวจากรังสียูวี [33–35] รอยดำที่เกิดจากการผลิตเมลานินมากเกินไปในผิวหนัง ทำให้เกิดความกังวลเรื่องเครื่องสำอางที่ไม่พึงประสงค์ และเกี่ยวข้องกับโรคผิวหนังอักเสบและมะเร็งผิวหนัง มีรายงานหลายฉบับแนะนำการสร้างเม็ดสีเป็นเป้าหมายที่สำคัญในการรักษามะเร็งผิวหนังระยะลุกลาม [36,37] ดังนั้นจึงมีความจำเป็นเพิ่มมากขึ้นในการพัฒนาสารต่อต้านการสร้างเม็ดสีที่ควบคุมการสร้างเม็ดสีโดยไม่มีความเป็นพิษต่อเซลล์ [38] มีหลายเส้นทางที่เกี่ยวข้องกับการสร้างเม็ดสีผิว [39,40] เมื่อจับลิแกนด์ MC1R จะเพิ่มการออกฤทธิ์ของอะดีนิลิลไซคเลส ซึ่งต่อมาเพิ่มระดับภายในเซลล์ของแคมป์ [41,42] การกระตุ้นเส้นทาง PKA/CREB ที่ขึ้นกับแคมป์นั้นได้รับรายงานอย่างกว้างขวางเพื่อเพิ่มระดับการถอดรหัสของ MITF ซึ่งจะช่วยเพิ่มการสังเคราะห์เมลานิน [43] MITF ทำหน้าที่เป็นตัวควบคุมหลักของเอนไซม์ไทโรซิเนสที่สร้างเม็ดสีหลักสามชนิด ได้แก่ TRP-1 และ TRP-2ในสัตว์มีกระดูกสันหลัง [3,21,44] เอนไซม์เหล่านี้เป็นโปรตีนเมมเบรนที่อยู่ใน melanosomalmembrane ของ melanocytes ไทโรซิเนสควบคุมขั้นตอนการจำกัดอัตราในการสร้างเม็ดสีโดยการแปลงแอล-ไทโรซิเนสเป็น L-DOPA [23] TRP-1 และ TRP-2 ยังมีบทบาทสำคัญในการสังเคราะห์เมลานิน แม้ว่าฟังก์ชันเหล่านี้จะยังไม่เป็นที่เข้าใจอย่างถ่องแท้
ในการศึกษานี้ Gomisin N ซึ่งเป็นสารประกอบลิกแนนของ S. chinensis แสดงฤทธิ์ในการลดเม็ดสีโดยไม่เกิดความเป็นพิษต่อเซลล์ Gomisin N ยับยั้งการสังเคราะห์เมลานินในเซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมที่เพาะเลี้ยง เช่นเดียวกับในตัวอ่อนของ zebrafish Gomisin N ดูเหมือนจะมีประสิทธิภาพมากกว่า PTU กลุ่มควบคุมเชิงบวกที่ยับยั้งการผลิตเมลานินในเซลล์ Melan-A (รูปที่ 1B) Gomisin N ลดปริมาณเมลานินในลักษณะที่ขึ้นกับความเข้มข้น เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุมที่ไม่ได้รับการรักษา 10 µM ของโกมิซิน นูลดปริมาณเมลานินลงได้ประมาณ 40 เปอร์เซ็นต์ โดยไม่เป็นพิษต่อเซลล์ ฤทธิ์ต้านการสร้างเม็ดสีของ10-µM Gomisin N เทียบได้กับการทำงานของ 100-µM PTU ในเซลล์ Melan-A ในทำนองเดียวกัน Gomisin Nappea มีประสิทธิภาพมากกว่า PTU ในเซลล์ B16F10 ที่เปิดใช้งาน -MSH โดยที่ผลของ 5- และ10-µM Gomisin N เทียบได้กับของ 10- และ {{12 }}µM PTU ตามลำดับ (รูปที่ 1C) เซลล์ NHEM ที่รักษาด้วย Gomisin N แสดงระดับ L-DOPA ที่ลดลง ซึ่งแสดงให้เห็นว่า GomisinN ยับยั้งไทโรซิเนสกิจกรรมในเซลล์เพาะเลี้ยง (รูปที่ 1E) การค้นพบนี้ทำให้เราตรวจสอบเพิ่มเติมเกี่ยวกับกลไกเบื้องหลังที่ Gomisin N ยับยั้งการสร้างเม็ดสี
เราตรวจสอบว่าโกมิซิน นูปรับกิจกรรมตัวเร่งปฏิกิริยาของ .โดยตรงไทโรซิเนสในหลอดทดลอง Gomisin N ไม่แสดงผลการยับยั้งการทำงานของไทโรซิเนสของเห็ดซึ่งแตกต่างจากกรดโคจิก (รูปที่ 2A) อย่างไรก็ตาม กิจกรรมของไทโรซิเนสระดับเซลล์ในไลเสตเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 ถูกควบคุมโดย Gomisin N ทั้งที่มีและไม่มีการรักษา -MSH (รูปที่ 2B,C) อย่างมีนัยสำคัญ การยับยั้งการทำงานของเซลล์ไทโรซิเนสของ Gomisin N เมื่อกระตุ้น -MSH พบว่ามีนัยสำคัญมากกว่าการควบคุมเชิงบวกของกรด Kojic (รูปที่ 2C)
เราตั้งสมมติฐานว่าฟังก์ชันต่อต้านการสร้างเม็ดสีของ Gomisin N อาจเกิดขึ้นจากการควบคุมการถอดเสียงหรือหลังการถอดเสียงของโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับไทโรซิเนสและไทโรซิเนส (TRPs) เพื่อตรวจสอบสิ่งนี้ เราวัดระดับการแสดงออกของโมเลกุลการส่งสัญญาณในวิถี MC1R ซึ่งเป็นตัวกำหนดหลักสำหรับ ปริมาณและคุณภาพของการผลิตเมลานินในเมลาโนไซต์ ตามที่คาดไว้ เราสังเกตว่า Gomisin N ลดระดับของ MC1R และ adenylyl cyclases 2 ในเซลล์ Melan-A (รูปที่ 3A–C) นอกจากนี้,โกมิซิน นูปรับลดการแสดงออกของ MITF และโปรตีนเป้าหมายของมันซึ่งรวมถึงไทโรซิเนส, TRP-1 และ TRP-2 (รูปที่ 3A,D–G) ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าระดับเมลานินที่ลดลงเมื่อทำการรักษาด้วย Gomisin N เป็นผลมาจากการปิดใช้งานเส้นทาง MC1R
ในทางกลับกัน เส้นทาง PI3K/Akt และ MAPK/ERK สามารถฟอสโฟรีเลต MITF และด้วยเหตุนี้จึงสามารถปรับเปลี่ยนกิจกรรมหลังการถอดเสียงได้ [45] อย่างไรก็ตาม ผลกระทบโดยรวมของการเปิดใช้งานเส้นทาง PI3K/Akt และ MAPK/ERK ในการสร้างเม็ดสีเป็นที่ถกเถียงกัน ทั้งเส้นทาง PI3K/Akt และ MAPK/ERK ถูกกระตุ้นอย่างเป็นส่วนประกอบในมะเร็งผิวหนังของมนุษย์เนื่องจากการกลายพันธุ์ที่สะสม [46] C2-การเสื่อมสภาพที่อาศัยเซราไมด์ในเซลล์ Mel-Ab เป็นที่ทราบกันดีว่าเกิดขึ้นจากการลดระดับ p-Akt [47] มีสารประกอบธรรมชาติหลายชนิดที่กระตุ้นการสร้างเม็ดสีโดยการควบคุมระดับ p-ERK ในเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 [28] ในทางตรงกันข้าม ยังมีหลักฐานว่าระดับ p-ERK และ p-Akt ที่เพิ่มขึ้นยับยั้งการสังเคราะห์เมลานิน [28,48] การควบคุมความซับซ้อนของการสร้างเมลาโนเจเนซิสบางส่วนสามารถอธิบายได้ด้วยข้อเท็จจริงที่ว่าฟอสโฟรีเลชั่นช่วยเพิ่มกิจกรรมการถอดรหัสของ MITF แต่ในขณะเดียวกันก็ทำให้เกิดการสลายตัวที่ขึ้นกับโปรตีโอโซมที่แพร่หลายของ MITF [26,49–51] ข้อมูลของเราแสดงให้เห็นว่าทั้งระดับ p-Akt และ p-ERK ได้รับการควบคุมในเซลล์ Melan-A ที่บำบัดด้วย Gomisin N (รูปที่ 3H–J) นี่หมายความว่าเส้นทาง PI3K/Akt และ MAPK/ERK อาจมีส่วนช่วยในการยับยั้งการผลิตเมลานิน
เรายังตรวจสอบฤทธิ์ต้านการสร้างเม็ดสีของ Gomisin N ในรูปแบบ zebrafish ในร่างกาย ตัวอ่อนของ zebrafish ที่บำบัดด้วย N ของ Gomisin แสดงให้เห็นว่าการสร้างเม็ดสีเมลานินลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (รูปที่ 4) นอกจากนี้ Gomisin N ยังลดระดับของ .ลงอย่างเห็นได้ชัดไทโรซิเนส, MITF, TRP-1 และ TRP-2 ในการพัฒนาตัวอ่อนของปลาม้าลาย การค้นพบนี้รวมกันชี้ให้เห็นว่าโกมิซิน นูกระตุ้นการสร้างเม็ดสีโดยปรับลดการแสดงออกของ MITF และเอนไซม์สร้างเม็ดสีในร่างกาย ฤทธิ์ต้านการสร้างเม็ดสีของ Gomisin N ได้รับการยืนยันเพิ่มเติมในเซลล์มะเร็งผิวหนัง MNT-1 ที่กระตุ้นโดยราพามัยซิน แม้ว่า Gomisin N จะส่งผลให้เกิดการเปลี่ยนแปลงเพียงเล็กน้อยในเนื้อหาเมลานินในเซลล์ MNT-1 (รูปที่ 1D) แต่ก็มีประสิทธิภาพในการย้อนกลับการควบคุม MITF, TRP-1 และ TRP-2 ที่เกิดจากราพามัยซินใน ลักษณะที่ขึ้นกับความเข้มข้น (รูปที่ 6A,C–E) เมื่อนำมารวมกันแล้วผลการกำกับดูแลของโกมิซิน นูเกี่ยวกับ MITF และเอ็นไซม์เมลาโนเจนถูกพบซ้ำในเซลล์ของหนูเมาส์และมนุษย์เช่นเดียวกับในตัวอ่อนของม้าลาย
สรุปผลงานชิ้นนี้ชี้ให้เห็นว่า Gomisin N อาจมีศักยภาพสูงเป็นนวนิยายผิว-ไวท์เทนนิ่งตัวแทน. Gomisin N ดูเหมือนจะยับยั้งการสร้างเม็ดสีโดยยับยั้งการแสดงออกของ MITF ผ่านวิถี MC1R แทนการปรับกิจกรรมตัวเร่งปฏิกิริยาของไทโรซิเนสและ TRP แม้ว่ากลไกโดยละเอียดยังคงต้องอธิบายให้ชัดเจน แต่การลอกคราบที่เกิดจาก Gomisin N นั้นน่าจะเกี่ยวข้องกับการเปิดใช้งานเส้นทาง PI3K/Akt และ MAPK/ERK (รูปที่ 7)
4. วัสดุและวิธีการ
4.1. วัสดุ
RPMI1640 ซื้อมาจาก Gibco-BRL (เมืองเกนเธอร์สเบิร์ก รัฐแมริแลนด์ สหรัฐอเมริกา) Dulbecco's modifiedEagle's medium (DMEM), fetal bovine serum (FBS) และ penicillin-streptomycin (PS) ของ Dulbecco ถูกซื้อจาก Hyclone (Carlsbad, CA, USA) ซื้อสื่อการเจริญเติบโตของ Melanocyte จาก PromoCell (ไฮเดลเบิร์ก ประเทศเยอรมนี) ฟีนิลเมทิลซัลโฟนิลฟลูออไรด์ (PMSF), 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate(TPA), Kojic acid, 1-phenyl-2-thiourea (PTU), ไทโรซิเนสจากเห็ด, 3,{{ 9}}dihydroxy-l-phenylalanine(L-DOPA), -MSH, dimethyl sulfoxide (DMSO) และ paraformaldehyde ซื้อมาจาก SigmaChemical Co. (St. Louis, MO, USA)โกมิซิน นูสารประกอบนี้จัดทำโดย Chul Young Kim (มหาวิทยาลัยฮันยาง, อันซัน, เกาหลี) Rapamycin ซื้อมาจาก Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA)
4.2. การเพาะเลี้ยงเซลล์
เซลล์เมลาโนมาของหนูเมาส์ B16F10 ได้มาจาก Korean Cell Line Bank (โซล, เกาหลี) Murine melanocyte Melan-A cells [52] เป็นของขวัญมากมายจาก Dr. Byeong Gon Lee (SkinResearch Institute, Amore Pacific Co., Yongin) -si, เกาหลี). MNT ของมนุษย์-1 เซลล์มะเร็งผิวหนังได้รับการจัดเตรียมโดย Aeyeong Lee (Collage of Medicine ในมหาวิทยาลัย Dongguk เมือง Goyang-si ประเทศเกาหลี) ซื้อเมลาโนไซต์ผิวหนังชั้นนอกปกติของมนุษย์ (NHEM) จาก PromoCell (ไฮเดลเบิร์ก เยอรมนี) เซลล์ Melan-A เติบโตในตัวกลาง RPMI 1640 (Gibco, Carlsbad, CA, USA) ที่เสริมด้วย FBS 10 เปอร์เซ็นต์, PS 1 เปอร์เซ็นต์ และ TPA 200 นาโนโมลาร์ DMEM ที่เสริมด้วย FBS 10 เปอร์เซ็นต์และ PS 1 เปอร์เซ็นต์ถูกใช้เพื่อรักษาเซลล์ Melan-A และเซลล์ NHEM เซลล์ทั้งหมดถูกบ่มที่ 37 ◦C ในตู้บ่ม CO2 5 เปอร์เซ็นต์
4.3. การวัดปริมาณเมลานิน
เซลล์ Melan-A ถูกเพาะในจาน 24-หลุม (1 × 105 เซลล์/หลุม) ที่บำบัดด้วยโกมิซิน นูแล้วฟักเป็นเวลา 72 ชม. หลังจาก 72 ชม. ปริมาณเมลานินถูกวัดตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [53] โดยสังเขป หลังจากนำอาหารเลี้ยงเชื้อออก เซลล์ถูกล้างสามครั้งด้วย PBS หลังจากนั้น สารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ (1 มล., 1 นิวตัน) ถูกเติมในแต่ละหลุมเพื่อละลายเมลานิน วัดค่าการดูดกลืนแสง 405 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลท การทดสอบนี้ทำซ้ำกับเซลล์ B16F10 (2 × 104 เซลล์/หลุม) และเซลล์ MNT-1 ตามวิธีเดียวกัน
4.4. การวิเคราะห์ Western Blot
เซลล์ Melan-A ถูกเพาะในจาน 100 มม. (1 × 106 เซลล์/จาน) และบำบัดด้วย 1, 5 หรือ 10 µMโกมิซิน นูเป็นเวลาสามวันที่ 37 ◦C เซลล์ถูกล้างด้วย PBS และจากนั้นเก็บเกี่ยวโดยใช้เครื่องขูด เซลล์ที่ถูกแยกออกถูกใส่ใน 1 มิลลิลิตรของ PBS และหมุนเหวี่ยงที่ 7500 รอบต่อนาที เป็นเวลา 5 นาที หลังจากขจัดสารละลายด้านบนออก เม็ดเซลล์ถูกสลายด้วยบัฟเฟอร์การสลาย (50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 0.1 เปอร์เซ็นต์ SDS, 150 mM NaCl, 1 เปอร์เซ็นต์ NP-40, โซเดียม เอไซด์ 0.02 เปอร์เซ็นต์, โซเดียม ดีออกซีโคเลต 0.5 เปอร์เซ็นต์, PMSF 100 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร, อะโพรตินิน 1 กรัม/มิลลิลิตร) เป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่ 4 ◦C โปรตีนทั้งหมดถูกสกัดโดยใช้อัลตราเซ็นตริฟิวจ์ที่ 12,000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 30 นาทีที่4◦ซ ปริมาณโปรตีนถูกวัดโดยใช้การทดสอบแบรดฟอร์ด แยกโปรตีน (30 ไมโครกรัม) โดยใช้เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสแบบเจลโซเดียม โดเดซิลซัลเฟต-โพลีอะคริลาไมด์ 10 เปอร์เซ็นต์ และถ่ายโอนไปยังเมมเบรนแอนโตรเซลลูโลส เมมเบรนถูกปิดกั้นเป็นเวลา 1 ชั่วโมงด้วยนมพร่องมันเนย 5 เปอร์เซ็นต์ในน้ำเกลือทริสบัฟเฟอร์กับ Tween-20 (TBST) แล้วบ่มเป็นเวลา 12 ชั่วโมงที่ 4 ◦C ด้วยแอนติบอดีหลักที่กำหนดเป้าหมาย -tubulin (ซานตาครูซ แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา ), MITF (การส่งสัญญาณของเซลล์, เดนเวอร์, แมสซาชูเซตส์, สหรัฐอเมริกา), ไทโรซิเนส (การส่งสัญญาณของเซลล์), ERK (การส่งสัญญาณของเซลล์), ฟอสโฟ-ERK (การส่งสัญญาณของเซลล์), AKT (การส่งสัญญาณของเซลล์), ฟอสโฟ-AKT (การส่งสัญญาณของเซลล์), MC1R ( ซานตาครูซ), อะดีนิลลิล ไซคลอส 2 (ซานตาครูซ), TRP-1 (ซานตาครูซ) และ TRP-2 (ซานตาครูซ) หลังจากกำจัดแอนติบอดีปฐมภูมิ เยื่อหุ้มถูกล้างสามครั้งด้วย TBST และฟักด้วยทุติยภูมิ แอนติบอดี (IgG-HRP ที่ต่อต้านกระต่ายของกระต่าย, HRP ที่ต้านกระต่ายของเมาส์, ซานตาครูซ) เป็นเวลา 1 ชั่วโมง เยื่อหุ้มเซลล์ได้รับการบำบัดด้วยรีเอเจนต์เคมีลูมิเนสเซนส์ที่ปรับปรุงใหม่โดยใช้ ChemiDoc XRS บวกกับระบบการสร้างภาพ (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) การวิเคราะห์ความหนาแน่นของวงดนตรีได้ดำเนินการโดยใช้ซอฟต์แวร์ Image MasterTM 2D Elite (เวอร์ชัน 3.1, GE Healthcare, Chicago, IL, USA)
4.5. การทดสอบกิจกรรมไทโรซิเนส
เพื่อประเมินผลการยับยั้ง Gomisin N ต่อเห็ดไทโรซิเนสกิจกรรม ไทโรซิเนสถูกบ่มด้วย 1, 5 หรือ 10 µMโกมิซิน นูหรือกรดโคจิกควบคุมเชิงบวก ตัวอย่างแต่ละตัวอย่างคือเมทานอลที่ละลายในน้ำ L-DOPA (8.3 มิลลิโมลาร์) และไทโรซิเนสจากเห็ด (125 U) ถูกเจือจางใน 80 มิลลิโมลาร์ ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.8) 40 ไมโครลิตรของแต่ละตัวอย่างและ 120 ไมโครลิตรของ L-DOPA ถูกผสมในจานหลุม 96-หลุม ตามด้วยการเติมไทโรซิเนสเห็ดเจือจาง 40 ไมโครลิตร จากนั้นเพลตถูกบ่มเป็นเวลา 15 นาทีและวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 490 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลท
ไทโรซิเนสกิจกรรมในไลเสตเซลล์เมลาโนมา B16 ถูกวัดโดยมีหรือไม่มีการรักษาด้วย -MSH ตามที่ Ohguchi et al อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [54] โดยมีการดัดแปลงเล็กน้อย เซลล์ไลเสตถูกเตรียมขึ้นตามที่อธิบายไว้ข้างต้นในส่วนการวิเคราะห์ Western Blot โปรตีนทั้งหมดในสารเหนือตะกอนถูกวัดโดยการทดสอบแบรดฟอร์ดโดยใช้ Bovine Serum Albumin เป็นมาตรฐาน [55] โปรตีนในปริมาณที่เท่ากันถูกเจือจางและใช้สำหรับการทดสอบกิจกรรมของไทโรซิเนส
ยับยั้งการทำงานของไทโรซิเนส
4.6. การย้อมสี L-DOPA ในเซลล์ NHEM
เซลล์ NHEM ถูกเพาะในจานหลุม {{0}}หลุมและบ่มเป็นเวลา 72 ชั่วโมงด้วย Gomisin N Cells ถูกตรึงด้วยพาราฟอร์มัลดีไฮด์ 4 เปอร์เซ็นต์เป็นเวลา 40 นาที ตามด้วยการบำบัดด้วยไทรทัน X{ 0.1 เปอร์เซ็นต์{ {6}} เป็นเวลา 2 นาที L-DOPA (0.1 เปอร์เซ็นต์ ) ถูกเติมในแต่ละหลุม ตามด้วยการฟักตัวเป็นเวลา 2 ชั่วโมง หลังจากนำสารละลายออก เซลล์ถูกล้างสองครั้งด้วย PBS รูปภาพถูกถ่ายด้วยกล้องจุลทรรศน์
4.7. การทดลองปลาม้าลาย
เอ็มบริโอ Zebrafish ได้มาจากธนาคารทรัพยากร Zebrafish (แดกู, เกาหลี) เอ็มบริโอได้รับการรักษาด้วย Gomisin N เป็นเวลา 72 ชั่วโมง ผลกระทบจากการทำให้คล้ำของโกมิซิน นูบนตัวอ่อนของ zebrafish ถูกสังเกตภายใต้ stereomicroscope สำหรับการวิเคราะห์ Western blot ตัวอ่อนที่ได้รับ Gomisin N-treated lysed โดยใช้ lysis buffer ซึ่งเตรียมโปรตีนทั้งหมดตามที่กล่าวไว้ข้างต้น
5. สรุปผลการวิจัย
ผลลัพธ์ของเราสนับสนุนมุมมองที่ว่า Gomisin N มีศักยภาพสูงในการใช้เป็นอาหารที่มีประโยชน์และผิว-ไวท์เทนนิ่งตัวแทน.โกมิซิน นูเป็นหนึ่งในสารประกอบลิกแนนที่สำคัญใน S. Chinensis ในความเป็นจริง S. Chinensis เป็นยาสมุนไพรที่ใช้รักษาโรคของมนุษย์หลายชนิด อย่างไรก็ตาม จำเป็นต้องมีการศึกษาทางระบาดวิทยาเพิ่มเติมเพื่อพิสูจน์ความปลอดภัยของ Gomisin N บนผิวหนัง ดังนั้นการศึกษาในร่างกายและการทดลองทางคลินิกจะสามารถแสดงให้เห็นอย่างชัดเจนยิ่งขึ้นถึงประสิทธิภาพของ GomisinN สรุปได้ว่าการศึกษาครั้งนี้ชี้ให้เห็นว่าโกมิซิน นูอาจเป็นสารลดเม็ดสีและธรรมชาติผิว-ไวท์เทนนิ่งผู้สมัครสำหรับอุตสาหกรรมเครื่องสำอาง
cistanche ปรับปรุงไวท์เทนนิ่ง
อ้างอิง
1. Alaluf, S.; แอตกินส์, D.; บาร์เร็ตต์, K.; โบลท์, ม.; คาร์เตอร์, N.; Heath, A. ผลกระทบของเมลานินของผิวหนังที่มีต่อการวัดสีผิวของมนุษย์ ความละเอียดเซลล์รงควัตถุ 2002, 15, 119–126. [CrossRef] [PubMed]
2. ดีเมลโล SA; ฟินเลย์, จีเจ; Baguley, BC; Askarian-Amiri, ME เส้นทางการส่งสัญญาณในการเกิดเมลาโนเจเนซิส อินเตอร์ เจ.มอล. วิทย์. 2016, 17, 1144. [CrossRef] [PubMed]
3. สโลมินสกี้, A.; โทบิน ดีเจ; ชิบาฮาระ เอส.; Wortsman, J. Melanin pigmentation ในผิวหนังของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมและการควบคุมของฮอร์โมน ฟิสิออล รายได้ 2004, 84, 1155–1228. [CrossRef] [PubMed]
4. Herrling, T.; จุง, เค.; Fuchs, J. บทบาทของเมลานินในฐานะตัวป้องกันอนุมูลอิสระในผิวหนังและบทบาทของมันเป็นตัวบ่งชี้อิสระในเส้นผม Spectrochim Acta A โมล ไบโอมอล สเปกตรัม 2551, 69, 1429–1435. [CrossRef] [PubMed]
5. โบรซีนา เอเอ; Jozwicki, ว. วชิร; Roszkowski, K.; Filipiak, เจ.; Slominski, AT ปริมาณเมลานินในเมลาโนมาเมทาเทสส่งผลต่อผลลัพธ์ของการฉายรังสี Oncotarget 2016, 7, 17844–17853. [CrossRef] [PubMed]
6. Slominski, A.; Wortsman, เจ.; พลกา PM; Schallreuter, KU; พอส, อาร์.; โทบิน ดีเจ แฮร์ฟอลลิเคิล pigmentation.J. สำรวจ เดอร์มาทอล 2548, 124, 13–21. [CrossRef] [PubMed]
7. สโลมินสกี้, ก.; Zmijewski, แมสซาชูเซตส์; Pawelek, J. L-tyrosine และ L-dihydroxyphenylalanine เป็นตัวควบคุมฮอร์โมนของการทำงานของเมลาโนไซต์ รงควัตถุเมลาโนมา Res. 2555, 25, 14–27. [CrossRef] [PubMed]
8. Lee, AY ความคืบหน้าล่าสุดในการเกิดโรคฝ้า รงควัตถุเมลาโนมา Res. 2015, 28, 648–660. [ข้ามอ้างอิง][PubMed]9. Speekaert, ร.; แวน Gele, M.; Speekaert, MM; แลมเบิร์ต เจ.; van Geel, N. ชีววิทยาของการเกิดรอยดำ รงควัตถุเมลาโนมา Res. 2014, 27, 512–524. [CrossRef] [PubMed]
10. สโลมินสกี้ RM; Zmijewski, แมสซาชูเซตส์; Slominski, AT บทบาทของเม็ดสีเมลานินในมะเร็งผิวหนัง ประสบการณ์ Dermatol.2015, 24, 258–259. [CrossRef] [PubMed]11. สโลมินสกี้, A.; Wortsman, เจ.; Tobin, DJ ระบบ serotoninergic/melatoninergic ทางผิวหนัง: การรักษาความปลอดภัยในสถานที่ใต้แสงแดด FASEB J. 2005, 19, 176–194. [CrossRef] [PubMed]
12. ซาร์การ์ อาร์.; อโรรา พี.; Garg, KV Cosmeceuticals for Hyperpigmentation: มีจำหน่ายอะไรบ้าง? เจ. ผิวหนังความงาม. เซอร์. 2013, 6, 4–11. [CrossRef] [PubMed]
13. มิยามูระ วาย.; โคเอลโฮ, SG; Wolber, R.; มิลเลอร์, เซาท์แคโรไลนา; วากามัตสึ, K.; Zmudzka, BZ; อิโตะ เอส.; Smuda, C.;Passeron, T.; ชอย, ว.; และคณะ การควบคุมการสร้างเม็ดสีผิวของมนุษย์และการตอบสนองต่อรังสีอัลตราไวโอเลตPigment Cell Res. 2550, 20, 2–13. [CrossRef] [PubMed]
14. เดวิส อีซี; Callender, VD รอยดำหลังการอักเสบ: การทบทวนระบาดวิทยา ลักษณะทางคลินิก และตัวเลือกการรักษาสีผิว เจ. คลิน. สุนทรียะ เดอร์มาทอล 2010, 3, 20–31. [ผับเมด]
15. Sales-Campos, H.; ซูซ่า พีอาร์; Peghini, BC; ดา ซิลวา เจเอส; Cardoso, CR ภาพรวมของการปรับผลของกรดโอเลอิกต่อสุขภาพและโรค มินิ. รายได้แพทย์ เคมี. 2013, 13, 201–210. [CrossRef] [PubMed]
16. Parvez, S.; คัง, ม.; ชุง HS; โช, ค.; หง, เอ็มซี; ชิน เอ็มเค; Bae, H. การสำรวจและกลไกของสารปรับสภาพผิวและสารลดน้ำหนัก ไฟโตเธอร์. ความละเอียด 2549, 20, 921–934. [CrossRef] [PubMed]
17. หลัว แอล.; เจียงแอล.; เกิง, ซี.; เฉา เจ.; Zhong, L. ความเป็นพิษต่อยีนที่เกิดจากไฮโดรควิโนนและการทำลาย DNA ที่เกิดจากออกซิเดชันในเซลล์ HepG2 เคมี. ไบโอล. มีปฏิสัมพันธ์. 2551, 173, 1–8. [CrossRef] [PubMed]
18. Enguita, เอฟเจ; Leitao, AL Hydroquinone: มลภาวะต่อสิ่งแวดล้อม ความเป็นพิษ และคำตอบของจุลินทรีย์ BioMed Res. อินเตอร์ 2556 2556 542168 [ข้ามอ้างอิง] [PubMed]
19. Draelos, ZD Skin lightening preparations และการโต้เถียงกันของไฮโดรควิโนน เดอร์มาทอล เธอ. 2550, 20,308–313. [CrossRef] [PubMed]
20. คู เจเอช; ลี, ฉัน.; หยุน เอสเค; คิม ฮู; พาร์ค, BH; Park, JW Saponified Evening Primrose oil ช่วยลดการสร้างเม็ดสีในเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 และลดการสร้างเม็ดสีผิวที่เกิดจากรังสียูวีในมนุษย์ ไขมัน 2010,45, 401–407. [CrossRef] [PubMed]
21. คอร์เดลล์ จอร์เจีย; Colvard, MD ผลิตภัณฑ์จากธรรมชาติและยาแผนโบราณ: เปิดกระบวนทัศน์ เจ. แนท. Prod.2012, 75, 514–525. [CrossRef] [PubMed]
22. Panossian, A.; Wikman, G. Pharmacology of Schisandra Chinensis Bail: ภาพรวมของการวิจัยของรัสเซียและการใช้ยา เจ. เอธโนฟาร์มาคอล. 2551, 118, 183–212. [CrossRef] [PubMed]
23. เฉิน, ป.; ปาง, ส.; ยาง N.; เม้ง, เอช.; หลิว เจ.; โจว N.; จางม.; Xu, Z .; เกา, ว.; เฉิน, บี.; และคณะ ผลประโยชน์ของ Schisandrin B ต่อการทำงานของหัวใจในแบบจำลองของกล้ามเนื้อหัวใจตายในหนู โปรดหนึ่ง 2013, 8,e79418. [CrossRef] [PubMed]
24. ลี เอชเจ; โจเอส.; ริว เจ.; จอง, HS; ลี, จี.; ริว MH; จุง MH; คิม, เอช.; Kim, BJ ผลกระทบของ SchisandraChinensis Turcz ผลไม้เมื่อสัมผัสผิวหนังอักเสบที่เกิดจากไดไนโตรฟลูออโรเบนซีนในหนู มล. เมดิ. รายงาน 2558,12, 2135–2139. [CrossRef] [PubMed]
25. ชุน เจเอ็น; โช, ม.; ดังนั้น ฉัน; Jeon, JH ผลการป้องกันของสารสกัดจากผลไม้ Schisandra Chinensis และสารลิกแนนต่อโรคหัวใจและหลอดเลือด: การทบทวนกลไกระดับโมเลกุล Fitoterapia 2014, 97, 224–233.[CrossRef] [PubMed]
26. คัง โอไฮโอ; แช, HS; ชอย เจเอช; ชอย, เอชเจ; ปาร์ค, พีเอส; โช, ช; ลี GH; ดังนั้น HY; ชู, YK;Kweon, OH; และคณะ ผลของสารสกัดจากน้ำ Schisandra Fructus ต่อการปลดปล่อยไซโตไคน์จากสายเซลล์มนุษย์ เจ เมด อาหาร 2549, 9, 480–486. [CrossRef] [PubMed]
27. Poma, A.; Bianchini, S.; Miranda, M. การยับยั้งการผลิตไมโครนิวเคลียสที่เกิดจาก L-tyrosine byphenylthiourea ในเซลล์มะเร็งผิวหนังของมนุษย์ มุตตา. ความละเอียด 2542, 446, 143–148. [ข้ามอ้างอิง]
28. คิม เอชเจ; คิม ไอเอส; ดง, วาย.; ลี ไอเอส; คิม เจเอส; คิม เจเอส; วู เจที; Cha, BY Melanogenesis-inducingผลของ cirsimaritin ผ่านการเพิ่มขึ้นของปัจจัยการถอดรหัสที่เกี่ยวข้องกับ microphthalmia และ tyrosinaseexpression อินเตอร์ เจ โมล. วิทย์. 2015, 16, 8772–8788. [CrossRef] [PubMed]
29. Busca, R.; Abbe, P.; ม็องตูซ์, เอฟ; อเบอร์ดัม อี.; Peyssonnaux, C.; Eychene, A.; ออร์ตัน เจพี; Ballotti, R. Rasmediates การกระตุ้นที่ขึ้นกับ cAMP ของไคเนสที่ควบคุมสัญญาณนอกเซลล์ (ERKs) ในเมลาโนไซต์ EMBO J. 2000, 19, 2900–2910 [CrossRef] [PubMed]
30. Busca, R.; Ballotti, R. Cyclic AMP ผู้ส่งสารหลักในการควบคุมการสร้างเม็ดสีผิว Pigment Cell Res.2000, 13, 60–69. [CrossRef] [PubMed]
31. ห๊ะ YS; โช, HY; ลิม, TY; พาร์ค, ดีเอช.; คิม HM; ยุน, เจ.; คิม เจจี; คิม, CY; Yoon, TJ Induction of melanogenesis โดย rapamycin ในเซลล์ MNT-1 melanoma ของมนุษย์ แอน. เดอร์มาทอล 2555, 24, 151–157. [ข้ามอ้างอิง][PubMed]
32. หยุน WJ; คิม อีวาย; พาร์ค เจ; โจ SY; ปัง SH; ช้าง อีเจ; Chang, SE Microtubule-associated proteinlight chain 3 เกี่ยวข้องกับการสร้างเมลาโนเจเนซิสผ่านการควบคุมการแสดงออกของ MITF ในเมลาโนไซต์ วิทย์. Report.2016, 6, 19914. [CrossRef] [PubMed]
33. Spritz, RA; การได้ยิน, VJ, Jr. ความผิดปกติทางพันธุกรรมของผิวคล้ำ โฆษณา ฮึ่ม ยีนต์. 1994, 22, 1–45. [ผับเมด]
34. คาเดคาโร อลาบาม่า; เฉินเจ .; หยาง เจ.; เฉิน, เอส.; เจมสัน เจ.; Swope, VB; เฉิง ต.; คาดาเกีย, ม.; Abdel-Malek, Z. -ฮอร์โมนกระตุ้นเมลาโนไซต์ยับยั้งความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันผ่าน53-เส้นทางการส่งสัญญาณที่เป็นสื่อกลางในเมลาโนไซต์ของมนุษย์ มล. มะเร็ง Res. 2012, 10, 778–786. [CrossRef] [PubMed]
35. Wasmeier, C.; ฮูม, AN; โบลาสโก, จี.; Seabra, MC Melanosomes ได้อย่างรวดเร็ว เจเซลล์วิทย์. 2551, 121,3995–3999. [CrossRef] [PubMed]
36. โบรซีนา เอเอ; Jozwicki, ว. วชิร; คาร์ลสัน เจเอ; Slominski, AT Melanogenesis ส่งผลต่อการรอดชีวิตโดยรวมและการปราศจากโรคในผู้ป่วยมะเร็งผิวหนังระยะที่ 3 และ IV ฮึ่ม ปทุม. 2013, 44, 2071–2074. [CrossRef] [PubMed]
37. Slominski, A.; คิม ทีเค; โบรซีนา เอเอ; Janjetovic, Z.; บรูคส์ ดีแอล; Schwab, LP; Skobowiat, C.; Jozwicki, W.;Seagroves, TN บทบาทของ melanogenesis ในการควบคุมพฤติกรรม melanoma: Melanogenesis นำไปสู่การกระตุ้นการแสดงออกของ HIF-1 และเส้นทางผู้ดูแลที่ขึ้นกับ HIF โค้ง. ไบโอเคมี. ชีวฟิสิกส์ 2014, 563,79–93. [CrossRef] [PubMed]
38. คิม, เอชเจ; ลี เจเอช; ชิน เอ็มเค; ฮยอน ลีม, K.; คิม, วายเจ; Lee, MH Inhibitory effect of Gastrodia elata extracton melanogenesis ในเซลล์มะเร็งผิวหนัง HM3KO เจ. คอสเมท. วิทย์. 2013, 64, 89–98. [ผับเมด]
39. เฮเมสาธ ทีเจ; ราคา ER; ทาเคโมโตะ ซี.; Badalian, ต.; ฟิชเชอร์, DE MAP kinase เชื่อมโยงปัจจัยการถอดรหัส Microphthalmia กับการส่งสัญญาณ c-Kit ในเมลาโนไซต์ ธรรมชาติ 1998, 391, 298–301. [ผับเมด]
40. ราคา เอ่อ; ติง, HF; Badalian, ต.; Bhattacharya, S.; ทาเคโมโตะ ซี.; ยาว TP; เฮเมสาธ ทีเจ; ฟิชเชอร์ การส่งสัญญาณเฉพาะของ DELineage ในเมลาโนไซต์ การกระตุ้นด้วย C-kit ชักชวน p300/CBP ไปที่ microphthalmia.J. ไบโอล. เคมี. 1998, 273, 17983–17986. [CrossRef] [PubMed]
41. Bertolotto, C.; Abbe, P.; เฮเมสาธ ทีเจ; บิล, เค.; ฟิชเชอร์ DE; ออร์ตัน เจพี; Ballotti, R. Microphthalmiagene product เป็นเครื่องแปลงสัญญาณสัญญาณในการสร้างความแตกต่างของ melanocytes ที่เกิดจาก cAMP เจ. เซลล์ ไบโอล. 1998, 142,827–835. [CrossRef] [PubMed]
42. Pogenberg, V.; อ็อกมุนด์สดอตติร์ MH; Bergsteinsdottir, K.; Schepsky, A.; พุง, บ.; Deineko, V.; Milewski, M.;Steingrimsson, E.; Wilmanns, M. จำกัด ลิวซีนซิป dimerization และความจำเพาะของการรับรู้ดีเอ็นเอของตัวควบคุมหลักของ melanocyte MITF ยีนส์เดฟ 2012, 26, 2647–2658. [CrossRef] [PubMed]
43. อวดดี KT; Hodi, FS; Fisher, DE จากยีนสู่ยา: กลยุทธ์ที่กำหนดเป้าหมายสำหรับเนื้องอก แนท. รายได้ Cancer2012, 12, 349–361. [CrossRef] [PubMed]
44. ลี TH; ซอ โจ; แบก, SH; Kim, SY ผลการยับยั้งของ resveratrol ต่อการสังเคราะห์เมลานินในเม็ดสีที่เกิดจากรังสีอัลตราไวโอเลตบีในหนังหมูกินี ไบโอมอล เธอ. 2014, 22, 35–40. [CrossRef] [PubMed]
45. ซู TR; หลิน เจเจ; ไจ่ซีซี; หวง TK; หยาง จี; วู มิสซูรี; เจิ้ง, YQ; ซู ซีซี; Wu, YJ การยับยั้งการสร้างเม็ดสีโดยกรดแกลลิก: การมีส่วนร่วมที่เป็นไปได้ของวิถีทาง PI3K/Akt, MEK/ERK และ Wnt/ -cateninsignaling ในเซลล์ B16F10 อินเตอร์ เจ โมล. วิทย์. 2013, 14, 20443–20458. [CrossRef] [PubMed]
46. ยาจิมะ, I.; คุมาซากะ, MY; ทัง ND; โกโตะ, วาย.; ทาเคดะ เค.; ยามาชิตะ โอ.; อีดะ, ม.; Ohgami, N.;Tamura, H.; คาวาโมโตะ วาย.; และคณะ การส่งสัญญาณ RAS/RAF/MEK/ERK และ PI3K/PTEN/AKT ในความก้าวหน้าและการรักษามะเร็งเมลาโนมา เดอร์มาทอล ความละเอียด ปฏิบัติ 2555, 2555, 354191 [CrossRef] [PubMed]
47. คิม, DS; คิม, SY; มูน, เอสเจ; ชุง เจเอช; คิม KH; โช, เคเอช; Park, KC Ceramide ยับยั้งการเพิ่มจำนวนเซลล์ผ่านการยับยั้ง AKT/PKB และลดการสังเคราะห์เมลานินในเซลล์ Mel-Ab Pigment Cell Res 2001, 14, 110–115. [CrossRef] [PubMed]
48. คิม เจเอช; แบก, SH; คิมดีเอช; ชอย, TY; ยุน ทีเจ; ฮวัง เจเอส; คิม นาย; ควอน, เอชเจ; ลี CHDการควบคุมการสังเคราะห์เมลานินโดยมี A และการประยุกต์ใช้กับแบบจำลองฟ้าผ่าในร่างกาย เจ. อินเวสติก. เดอร์มาทอล 2551, 128, 1227–1235. [CrossRef] [PubMed]
49. ฮาร์ทแมน มลรัฐแมสซาชูเซตส์; Czyz, M. MITF ในเนื้องอก: กลไกเบื้องหลังการแสดงออกและกิจกรรม เซลล์ Mol.Life วิทย์. 2015, 72, 1249–1260. [CrossRef] [PubMed]
50. คิม ดีเอส; ฮวาง อีเอส; ลี เจ; คิม, SY; ควอน, เอสบี; Park, KC Sphingosine-1-ฟอสเฟตลดการสังเคราะห์เมลานินผ่านการกระตุ้น ERK อย่างต่อเนื่องและการย่อยสลาย MITF ที่ตามมา เจเซลล์วิทย์. 2546, 116,1699–1706. [CrossRef] [PubMed]
51. Xu, W.; ฆ้อง L.; Haddad, MM; บิชอฟ, โอ.; กัมปิซี เจ.; เย้ ET; Medrano, EE Regulation of microphthalmia-associated transcription factor MITF ระดับโปรตีนโดยเชื่อมโยงกับเอนไซม์ theubiquitin-conjugating hUBC9 ประสบการณ์ ความละเอียดของเซลล์ 2000, 255, 135–143. [CrossRef] [PubMed]
52. เบนเน็ตต์ ดี.ซี.; คูเปอร์, พีเจ; Hart, IR กลุ่มผลิตภัณฑ์เมลาโนไซต์ของเมาส์ที่ไม่ก่อเนื้องอก, ซินจีนิกกับมะเร็งผิวหนัง B16 และต้องการโปรโมเตอร์เนื้องอกเพื่อการเจริญเติบโต อินเตอร์ เจ. แคนเซอร์ 1987, 39, 414–418. [ข้ามอ้างอิง][PubMed]
53. ไมร่า วศ.บ.; ไฮน์ริช, TA; คาเดนา, เอสเอ็ม; Martinez, GR Melanogenesis ยับยั้งการหายใจในเซลล์ B16-F10melanoma ในขณะที่เพิ่มเนื้อหาของเซลล์ไมโตคอนเดรีย ประสบการณ์ ความละเอียดของเซลล์ 2017, 350, 62–72. [ข้ามอ้างอิง][PubMed]
54. โอกุจิ เค; ทานากะ ต.; อิลิยา ฉัน.; อิโตะ ต.; อินุมะ, ม.; มัตสึโมโตะ, K.; อาคาโอะ, วาย.; Nozawa, Y. Gnetol เป็นตัวยับยั้ง ชีวะ. เทคโนโลยีชีวภาพ ไบโอเคมี. 2546, 67, 663–665. [CrossRef] [PubMed]
55. อุชิดะ ร.; อิชิกาว่า S.; Tomoda, H. การยับยั้งการทำงานของไทโรซิเนสและการสร้างเม็ดสีเมลานีนโดย2-ไฮดรอกซีไทโรซอล แอคต้า ฟาร์มา. ซินิกา บี 2014, 4, 141–145. [CrossRef] [PubMed]