การแสดงออกของอิมมูโนโกลบูลิน G ในเซลล์เยื่อบุผิวท่อใกล้เคียงของมนุษย์

ติดต่อ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 อีเมล:audrey.hu@wecistanche.com

ZHENLING DENG และคณะ

เชิงนามธรรม. ใกล้เคียงท่อเซลล์เยื่อบุผิว (PTECs) มีลักษณะภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติและผลิตปัจจัยกระตุ้นการอักเสบ คีโมไคน์ และส่วนประกอบเสริมที่ขับเคลื่อนการเปลี่ยนแปลงของเยื่อบุผิว-มีเซนไคม์ (EMT) การศึกษาก่อนหน้านี้ของเราเปิดเผยว่าเซลล์ mesangial และ podocytes ของมนุษย์สามารถสังเคราะห์และหลั่ง immunoglobulin (Ig)A และ IgG ได้ตามลำดับ จุดมุ่งหมายของการศึกษาครั้งนี้คือเพื่อประเมินการแสดงออกของ Igs ใน PTECs ประการแรก ตรวจพบ IgG ในไซโตพลาสซึม เยื่อหุ้มเซลล์ และลูเมนของPTECsในเปลือกนอกของไตปกติโดยอิมมูโนฮิสโตเคมี. ประการที่สอง การถอดรหัสยีน Ig และการรวมตัวใหม่ของ V(D)J ถูกตรวจพบใน PTEC เดี่ยวโดยการจัดลำดับ PCR และ Sanger ที่ซ้อนกัน ประการที่สาม Ig , Igκ และ Igλ ถูกตรวจพบอย่างชัดเจนในสาย PTEC ที่เป็นอมตะ (HK‑2) โดยการทำอิมมูโนสเตนและการซับแบบตะวันตก ซึ่งใช้ RP215 (แอนติบอดีที่จับกับ IgG ที่มาจากเซลล์ที่ไม่ใช่บีเป็นหลัก) นอกจากนี้ การถอดรหัสยีน Ig , Igκ และ Igλ การรวมตัวกันของ V(D)J แบบอนุรักษ์นิยมในพื้นที่ตัวแปร Ig ยีนกระตุ้นการรวมตัวกันอีกครั้ง 1/2 และไซติดีนดีอะมิเนสที่กระตุ้นการกระตุ้นทั้งหมดถูกตรวจพบในเซลล์ HK‑2 ข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า PTEC อาจแสดงออก IgG ในลักษณะที่คล้ายคลึงกับเซลล์ B นอกจากนี้ การแสดงออกของ IgG ยังได้รับการควบคุมโดย TGF-1 และอาจเกี่ยวข้องกับ EMT

คำสำคัญ:ใกล้เคียงท่อเซลล์เยื่อบุผิว เซลล์เดียว HK-2, IgG, การเปลี่ยนแปลงของเยื่อบุผิว-มีเซนไคม์

Cistanche tubulosa ป้องกันโรคไต คลิกที่นี่เพื่อรับตัวอย่าง

บทนำ

ใกล้เคียงท่อเซลล์เยื่อบุผิว (PTECs) เป็นเซลล์ที่มีมากที่สุดในไตและมีบทบาทสำคัญในการซ่อมแซมไตและ/หรือความก้าวหน้าของโรคไตเรื้อรัง PTECs ทำหน้าที่ทางภูมิคุ้มกันโดยการแสดง Toll-like receptors (TLR) หลายตัว เช่น TLR 1, 2, 3, 4 และ 9 (1,2) และโมเลกุลที่เกี่ยวข้องกับการทำงานของเซลล์ที่สร้างแอนติเจน ซึ่งรวมถึง MHCII, CD74, CD80 และซีดี86 (3) ลักษณะภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติเหล่านี้ของ PTEC ช่วยให้สามารถทำหน้าที่เป็นตัวตอบสนองทางภูมิคุ้มกันต่อสิ่งเร้าที่หลากหลาย โดยเป็นผลจากการผลิตและการปล่อยสารสื่อกลางที่ออกฤทธิ์ทางชีวภาพ รวมถึง ไซโตไคน์ที่ก่อให้เกิดการอักเสบ คีโมไคน์ และส่วนประกอบเสริม ซึ่งกระตุ้นการอักเสบของสิ่งของคั่นระหว่างหน้าและการเกิดพังผืด (4) PTEC ยังแสดงออกตัวรับ Fc ของทารกแรกเกิดและรักษาความสามารถของการจับที่ขึ้นกับ pH จำเพาะและการทรานส์ไซโตซิสของอิมมูโนโกลบุลิน (Ig)G (5) อย่างไรก็ตาม เท่าที่ทราบ ยังไม่เป็นที่ทราบแน่ชัดว่า PTEC แสดง Igs หรือไม่

ก่อนหน้านี้มีการตั้งสมมติฐานว่า Igs ผลิตโดยเซลล์ B ที่เจริญเต็มที่และเซลล์พลาสมาเท่านั้น และ Igs ทำหน้าที่เป็นแอนติบอดีในการจดจำและต่อต้านเชื้อโรคต่างๆ อย่างไรก็ตาม ทฤษฎีนี้ได้รับการท้าทายในทศวรรษที่ผ่านมา เนื่องจากมีหลักฐานเพิ่มขึ้นรายงานว่า Igs รวมถึง IgA, IgG และ IgM สามารถผลิตและหลั่งโดยเซลล์ที่ไม่ใช่ B เช่น เซลล์มะเร็งเยื่อบุผิวของมนุษย์ (6,7) และ เซลล์ที่ไม่ใช่บีปกติ (8,9) เช่นเดียวกับในบริเวณที่มีภูมิคุ้มกัน เช่น ตา (10) เซลล์ประสาทส่วนกลาง (11,12) รก (13) และอัณฑะและหลอดน้ำอสุจิ (14)

เช่นเดียวกับ Igs ที่ได้จากเซลล์ B (B‑Igs) ที่ไม่ใช่ B-Igs ยังเป็นผลิตภัณฑ์ของการถอดรหัสและการจัดเรียงยีน Ig และแสดงรูปแบบการรวมตัวของ V(D)J แบบคลาสสิกด้วยการเพิ่มนิวคลีโอไทด์ที่ทางแยกและโซมาติกไฮเปอร์มิวเทชัน (7, 11,14). ตรงกันข้ามกับ B‑Igs ผู้ใช้ที่ไม่ใช่ B‑Igs แสดงรูปแบบการรวมตัวของ V(D)J ที่จำกัดและความหลากหลายน้อยลง (7) ตามหน้าที่ สารที่ไม่ใช่ B-Igs ไม่เพียงแต่ออกแรงกิจกรรมของแอนติบอดีตามธรรมชาติในผิวหนังและเยื่อเมือก (8) แต่ยังสามารถทำหน้าที่เป็นปัจจัยการเจริญเติบโตเพื่อส่งเสริมการงอกขยายและการยึดเกาะของเซลล์ และอาจเพิ่มการเริ่มต้นและการแพร่กระจายของมะเร็งโดยการจับกับอินทิกริน ( 15-17) ตัวอย่างเช่น IgG ของมะเร็งที่รู้จัก RP215 ทำหน้าที่สร้างมะเร็งโดยโต้ตอบกับคอมเพล็กซ์ integrin 6 4 และเปิดใช้งานเส้นทาง FAK และ Src (15)

การศึกษาก่อนหน้านี้ของเราแสดงให้เห็นว่าเซลล์ mesangial (18) และ podocytes (19) สามารถสังเคราะห์และหลั่ง IgA และ IgG และมีส่วนร่วมในการเจริญเติบโตของเซลล์และการยึดเกาะของเซลล์ในหลอดทดลอง การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อประเมินระดับการแสดงออกของ Igs ใน PTEC และตรวจสอบบทบาทที่เป็นไปได้ของการเปลี่ยนแปลงของเยื่อบุผิว-mesenchymal (EMT)

ผลของ cistanche: ประโยชน์ต่อไต

วัสดุและวิธีการ

การเพาะเลี้ยงเซลล์และการรักษาสาย PTEC ที่เป็นอมตะ HK-2 ถูกซื้อจาก American Type Culture Collection เซลล์ HK‑2 ถูกเพาะเลี้ยงใน DMEM/F12 ที่เสริมด้วยเพนิซิลลิน 100 U/ml, สเตรปโตมัยซิน 0.1 มก./มล. (ทั้งหมด Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc.) และซีรัมของโคในครรภ์ 10 เปอร์เซ็นต์ (FBS; แหล่งกำเนิดของออสเตรเลีย Biological Industries USA, Inc.) ที่อุณหภูมิ 37˚C ในบรรยากาศที่มีอากาศ 95 เปอร์เซ็นต์และ CO2 5 เปอร์เซ็นต์ เพื่อหลีกเลี่ยงการแทรกแซงของ Ig ใน FBS สื่อถูกแทนที่ด้วยตัวกลางที่ปราศจากซีรัม 24-48 ชั่วโมงก่อนการเก็บเกี่ยวเซลล์ เซลล์ HK‑2 ได้รับการบำบัดด้วยความเข้มข้นที่แตกต่างกัน (2, 5 และ 10 ng/ml) ของ TGF‑ 1 (Sigma‑Aldrich; Merck KGaA)

การแยก PTEC เดี่ยวและการสังเคราะห์ cDNAตัวอย่างไตของมนุษย์ของเนื้อเยื่อคอร์เทกซ์ปกติที่มีขนาดมหึมานั้นได้มาจากผู้ป่วย (ชาย อายุ 31 ปี) ที่ได้รับการผ่าตัดไตอันเป็นผลมาจากมะเร็งไตโดยไม่มีความผิดปกติของไตอย่างเห็นได้ชัด สารแขวนลอยเซลล์เดียวถูกเตรียมโดยการย่อยเยื่อหุ้มสมองของไตด้วยคอลลาเจนเนส 1 มก./มล. (Sigma‑Aldrich; Merck KGaA) ที่อุณหภูมิ 37˚C เป็นเวลา 20 นาที PTEC ถูกจัดเรียงโดยใช้ phycoerythrin (PE)‑conjugated anti‑CD10 (cat. no. 312203) และ allophycocyanin (APC)‑conjugated anti‑CD13 (cat. no. 301705; both BioLegend, Inc.) โดยการคัดแยกเซลล์ที่กระตุ้นด้วยแสงฟลูออเรสเซนซ์ ( ระบบคำสั่งพิเศษ BD FACSAria II) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (20) แอนติบอดีควบคุมไอโซไทป์ที่สอดคล้องกัน (cat. nos. 400111 และ 400119; ทั้ง BioLegend, Inc.) ถูกใช้เพื่อแยกการย้อมสีที่ไม่จำเพาะ เซลล์ของสิ่งมีชีวิตที่มีฉลากในเชิงบวกสองครั้งถูกแยกออกเป็น PTEC PTEC ตัวเดียวถูกเลือกด้วยตนเองภายใต้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงแบบกลับหัวโดยใช้ปิเปตแบบคาปิลลารี จากนั้นจึงถ่ายโอนไปยังหลอด PCR ผนังบาง 0.2 มล. ที่มีบัฟเฟอร์การสลาย (21) การสกัด PTEC RNA เดี่ยวและการสังเคราะห์ cDNA ได้ดำเนินการตามวิธีการที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้(21) มีการใช้ PTECs เดียวทั้งหมดห้าชนิดเพื่อตรวจหาการถอดรหัสและการจัดเรียงใหม่ของยีน Ig

เครื่องขยายสัญญาณ PCRRNA ทั้งหมดถูกสกัดจากเซลล์ HK‑2 ซึ่งเป็นเซลล์โมโนนิวเคลียร์ในเลือดส่วนปลาย [PBMCs ที่แยกได้จากผู้ให้ที่มีสุขภาพดีเพศหญิงอายุ 31 ปีโดยใช้ Ficoll (หมายเลขแมว 7111011; Dakewe Biotech., Ltd.) ] และเปลือกนอกของไต (จากผู้ป่วยรายเดียวกันที่ใช้ในการแยก PTEC เดี่ยว) โดยใช้รีเอเจนต์ TRIzol® (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.) และประเมินความเข้มข้นของ RNA โดยใช้ NanoDrop spectrophotometer (NanoDrop; Thermo Fisher Scientific, Inc.) . ต่อจากนั้น RNA ทั้งหมด 2 ไมโครกรัมถูกแปลงกลับเป็น cDNA โดยใช้ชุดการสังเคราะห์ cDNA ของ RevertAid First Strand (หมายเลขแมว K1622; Thermo Fisher Scientific, Inc.) PCR ดำเนินการโดยใช้ไพรเมอร์ที่กำหนดเป้าหมายบริเวณคงที่ของ Ig , Igκ, Igλ และ cytidine deaminase (AID) ที่กระตุ้นการกระตุ้น PCR ที่ซ้อนกันถูกดำเนินการเพื่อขยายขอบเขตที่แปรผันได้ของ Ig , โปรตีนที่เกี่ยวข้องกับตัวรับไลโปโปรตีนความหนาแน่นต่ำ 2 (LRP2) และยีนกระตุ้นการรวมตัวใหม่ (RAG)1 และ RAG2 ผลิตภัณฑ์ PCR แยกจากกันโดยอิเล็กโตรโฟรีซิสบนเจลอะกาโรส 1.0 เปอร์เซ็นต์ และแสดงภาพโดยใช้ GelRed (แมวหมายเลข 41003; Biotium, Inc.) ไพรเมอร์ของ AID, RAG1/2 และพื้นที่คงที่ของ Ig , Igκ, Igλ ที่ใช้ในการศึกษานี้อ้างถึงไพรเมอร์ที่ใช้โดย Jing et al (19) ไพรเมอร์ของบริเวณตัวแปร Ig อ้างถึงไพรเมอร์ที่ใช้โดย van Dongen et al (22) ไพรเมอร์อื่นๆ ที่ใช้สำหรับ PCR ได้ระบุไว้ในตาราง SI เงื่อนไขการเทอร์โมไซเคิลแสดงอยู่ในตาราง SII

การจัดลำดับ Sanger และการวิเคราะห์ข้อมูลการจัดลำดับผลิตภัณฑ์ PCR ของบริเวณตัวแปร Ig ที่ได้จาก PTEC เดี่ยว เซลล์ HK‑2 และ PBMC ถูกโคลนตามลำดับลงใน pGEM‑T Easy Vector System I (cat. no. A1360; Promega Corporation) ซึ่งถูกแปลงสภาพ เป็นเซลล์ที่มีความสามารถ TOP10 (CB104; Tiangen Biotech Co., Ltd.) โดยย่อ ผลิตภัณฑ์ลิเกชัน 5 ไมโครลิตรถูกเติมลงในเซลล์ที่มีความสามารถ TOP10 30 ไมโครลิตร บ่มบนน้ำแข็งเป็นเวลา 30 นาที ช็อกด้วยความร้อนที่ 42˚C เป็นเวลา 90 วินาที และบ่มบนน้ำแข็งเป็นเวลา 5 นาที จากนั้น เติม LB 500 ไมโครลิตร และปล่อยให้ยืนที่อุณหภูมิ 37˚C เป็นเวลา 40 นาที ก่อนเพาะเชื้อส่วนหนึ่งของของเหลวจากแบคทีเรียบนจานเพาะเชื้อที่เคลือบด้วย IPTG 0.1 มิลลิโมล/ลิตร และ X‑Gal 20 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร จานถูกกลับด้านที่ 37˚C ในชั่วข้ามคืน โดยรวมแล้ว มีการเลือกโคโลนีสีขาว 5-16 ตัวต่อตัวอย่างแบบสุ่มและจัดลำดับโดยใช้เครื่องวิเคราะห์พันธุกรรม ABI 3730XL (Applied Biosystems; Thermo Fisher Scientific, Inc.) ลำดับ V(D)J ที่จัดเรียงใหม่ถูกนำมาเปรียบเทียบกับลำดับในเครื่องมือค้นหาการปรับตำแหน่งเฉพาะที่พื้นฐาน (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/) เพื่อระบุกลุ่มยีนของเจิร์มไลน์ที่ดีที่สุดและทางแยกหลังจากการตัดแต่งไพรเมอร์ .

การวิเคราะห์ blot แบบตะวันตกเซลล์ HK‑2 ถูกสลายในบัฟเฟอร์การสลาย TSD [1 เปอร์เซ็นต์ SDS, 50 mM Tris‑HCl (pH 7.5), 50 mM DTT] ที่มีค็อกเทลตัวยับยั้งโปรตีเอส (Applygen Technologies Inc.) โซนิคที่น้ำเย็นจัดเป็นเวลา 1 นาที ( ทำงาน 5 วินาที พัก 15 วินาที 3 ครั้ง) และละลายเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง ตามการหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 xg เป็นเวลา 10 นาทีที่ 4˚C ความเข้มข้นของโปรตีนของเซลล์ไลเซตถูกกำหนดหาโดยใช้ชุดเครื่องมือ BCA (Applygen Technologies Inc.) ต่อมา บัฟเฟอร์โหลดรีดิวซ์ 5X ถูกเติมไปยังไลเซท ต้มที่ 100˚C เป็นเวลา 10 นาที และตัวอย่างถูกใช้ทันทีสำหรับการวิเคราะห์ western blot ซีรัม ซึ่งใช้เป็นตัวควบคุมเชิงบวกสำหรับ Ig ถูกแยกออกจากผู้ให้ที่มีสุขภาพดี (ผู้ให้เดียวกันกับที่ใช้ใน PBMC) โดยการหมุนเหวี่ยงที่ 2,103 xg เป็นเวลา 10 นาทีที่อุณหภูมิห้อง

ผลของ cistanche: ประโยชน์ต่อไต

การซับแบบตะวันตกดำเนินการตามขั้นตอนมาตรฐาน โดยสรุป โปรตีน 3{{4{0}} ไมโครกรัมถูกแยกโดย SDS‑PAGE บนเจล 10 เปอร์เซ็นต์ และถูกถ่ายโอนไปยังเมมเบรนไนโตรเซลลูโลส ต่อจากนั้น เมมเบรนถูกบล็อกในนมพร่องมันเนย 5 เปอร์เซ็นต์ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง และถูกบ่มด้วยแอนติบอดีปฐมภูมิที่ 4˚C ในชั่วข้ามคืน ซึ่งรวมถึงกระต่ายต้าน Ig ของมนุษย์ (หมายเลขแมว ab109489; 1:1,{8} }), anti‑human Ig 4 ของกระต่าย (หมายเลขแมว ab109493; 1:1,000), anti‑Igκ (หมายเลขแมว ab124727; 1:10,000), anti‑ Igλ (cat. no. ab124719; 1:20,000), rabbit anti‑human ‑actin (cat. no. ab8227; 1:2,000) (ทั้งหมดจาก Abcam) และ RP215 โมโนโคลนัลแอนติบอดี (mAb) (บริจาคโดยศาสตราจารย์ Xiaoyan Qiu, Peking University, Beijing, China; 1:1,000) ซึ่งระบุเฉพาะอีพิโทปที่เกี่ยวข้องกับคาร์โบไฮเดรตบน non-B-Ig จากนั้นจึงฟักไข่ด้วยแอนติบอดีต้านกระต่ายของแพะ (หมายเลขแมว 926‑32211) หรือแอนติบอดีต้านเมาส์ (หมายเลขแมว 926‑32210) IgG‑IRDyeTM680CW แอนติบอดีทุติยภูมิ (ทั้ง 1:10,000 ทั้งคู่ LI‑COR Biosciences) ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ตรวจพบสัญญาณโดยใช้ระบบ Odyssey Imaging และซอฟต์แวร์ Odyssey V3.0 (ทั้ง LI‑COR Biosciences) ซอฟต์แวร์ ImageJ (เวอร์ชัน 1.8.0; National Institutes of Health) ใช้สำหรับการวัดกึ่งปริมาณ

การทำให้บริสุทธิ์ด้วย IgG และแมสสเปกโตรเมตรีหลังจากเซลล์ HK‑2 ได้รับการเพาะเลี้ยงใน DMEM/F12 โดยไม่มี FBS เป็นเวลา 48 ชั่วโมง สารลอยเหนือตะกอนจากการเพาะเลี้ยงถูกรวบรวมหลังจากการปั่นแยกที่ 2,103 xg เป็นเวลา 10 นาทีที่4˚C ส่วนลอยเหนือตะกอนของเซลล์ถูกทำให้บริสุทธิ์ด้วย affinity chromatography โดยใช้โปรตีน G Sepharose ตามคำแนะนำของผู้ผลิต (cat. no. 17‑0618‑02; Thermo Fisher Scientific, Inc.) สารชะถูกกรองเป็นพิเศษเพื่อแทนที่บัฟเฟอร์สำหรับตัวชะ (0.1 โมลาร์ไกลซีน; pH 2.4) ด้วย PBS โปรตีนบริสุทธิ์ถูกแยกโดย SDS‑PAGE บนเจล 10 เปอร์เซ็นต์ ตรวจพบโดย western blotting และวิเคราะห์เพิ่มเติมโดยแมสสเปกโตรเมตรี ซึ่งดำเนินการโดย Beijing Protein Innovation Co., Ltd.

อิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์เซลล์ HK-2 ถูกเพาะเลี้ยงบนแผ่นปิด ซึ่งถูกตรึงในอะซิโตนที่ไม่เจือปนด้วยความเย็นเป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง ต่อจากนั้น สไลด์ถูกล้างสองครั้งใน PBS และปิดกั้นด้วย FBS/PBS 5 เปอร์เซ็นต์ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 20 นาที หลังจากนั้นพวกมันถูกบ่มด้วยแอนติบอดีปฐมภูมิที่ 4˚C ในชั่วข้ามคืน แอนติบอดีเหมือนกันกับที่ใช้กับ Western blotting: Rabbit anti-human Ig (1:150), anti-human Igκ (1:250), anti-human Igλ (1:250) และ RP215 mAb (1:200 ); PBS ถูกใช้เป็นตัวควบคุมเชิงลบ หลังจากล้างใน PBS สไลด์ถูกบ่มด้วยสารต่อต้านกระต่ายที่ติดฉลาก fluorescein isothiocyanate (cat. no. A11008) หรือ Goat anti-mouse (cat. no. A11001) IgG แอนติบอดี (1:1,000; Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.) ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง นิวเคลียสถูกย้อมด้วย DAPI ภาพถูกจับภายใต้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง Leica DFC300 FX (Leica Microsystems GmbH)

การย้อมสีอิมมูโนฮิสโตเคมีเก็บคอร์ติเซชันของไตที่เป็นมะเร็งจากผู้ป่วยชายสี่ราย (อายุ 38-49 ปี) ที่เป็นมะเร็งไต คอร์ติซิสของไต paracancerous ปกติหลังการตัดไตได้รับการแก้ไขด้วยฟอร์มาลิน 10 เปอร์เซ็นต์เป็นเวลา 48 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องแล้วฝังในพาราฟิน ตัวอย่างไตมนุษย์ที่ฝังพาราฟินถูกตัดเป็นส่วน 3 ไมโครเมตร และทำให้ปราศจากพาราฟินและเติมน้ำผ่านชุดของความเข้มข้นของเอทานอลอย่างช้า ๆ ดึงแอนติเจนโดยการต้มใน 0.05 M Tris‑EDTA (pH 9.0) ในหม้อความดันเป็นเวลา 3 นาที จากนั้นนำส่วนต่างๆ ไปบ่มด้วยสารละลาย H2O2 3 เปอร์เซ็นต์ เป็นเวลา 10 นาทีที่อุณหภูมิห้องเพื่อกำจัดเปอร์ออกซิเดสภายในร่างกาย และฟักด้วยเซรั่มของแพะปกติ (หมายเลขแมว ZLI‑9022, ZSGB‑BIO, ประเทศจีน) เป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิห้องเพื่อสกัดกั้นแบบไม่จำเพาะเจาะจง สถานที่จับแอนติบอดีที่อุณหภูมิห้อง ต่อจากนั้น การย้อมสีอิมมูโนฮิสโตเคมีทางอ้อมถูกดำเนินการด้วยแอนติบอดีปฐมภูมิที่ 4˚C ในชั่วข้ามคืน ซึ่งรวมถึง RP215 mAb (1:200; 5 µg/ml), กระต่ายต้าน-human Ig (1:2,000), ต้านมนุษย์ Igκ (1:1,000), ต่อต้านมนุษย์ Igλ (1:1,000) (แอนติบอดีเดียวกันกับที่ใช้ในการพิมพ์แบบตะวันตก) ส่วนที่ไม่มีแอนติบอดีปฐมภูมิถูกใช้เป็นตัวควบคุมเชิงลบ จากนั้นจึงเพาะสไลด์ด้วยแอนติบอดีทุติยภูมิที่ติดฉลากฮอร์สแรดิชเปอร์ออกซิเดสที่ไม่เจือปน (cat. nos. PV‑6001 และ PV‑6002; ทั้ง OriGene Technologies, Inc.) ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที ตรวจพบแอนติบอดีที่ถูกผูกมัดโดยใช้ไดอะมิโนเบนซิดีน ในที่สุด สไลด์ก็ถูกย้อมด้วยฮีมาทอกซิลิน รูปภาพถูกถ่ายโดยใช้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง (กำลังขยาย x200) การวิเคราะห์ทางสถิติ ข้อมูลแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ± ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน และวิเคราะห์โดยใช้ SPSS 20.0 สำหรับ Windows (IBM Corp.) การทดลองทั้งหมดทำซ้ำ 3 ครั้ง วิเคราะห์ความแตกต่างระหว่างกลุ่มต่างๆ โดยใช้ ANOVA ทางเดียวและการทดสอบภายหลังของ Tukey พี<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

ผลของ cistanche: ประโยชน์ต่อไต

ผลลัพธ์

การแสดงออกของ IgG ในเซลล์เยื่อบุผิวท่อไตของเยื่อหุ้มสมองไตเยื่อหุ้มสมองไตปกติซึ่งรวบรวมจากผู้บริจาคที่ได้รับการผ่าตัดไตซึ่งเป็นผลมาจากมะเร็งเซลล์ไตถูกนำมาใช้เพื่อกำหนดการแสดงออกของ IgG ในเซลล์เยื่อบุผิวท่อไตโดยอิมมูโนฮิสโตเคมีโดยใช้แอนติบอดีต่อต้านมนุษย์ Ig , Igκ, Igλ และ RP215 (แอนติบอดีที่โดดเด่น) ผูกมัดกับ non‑B‑IgG) การย้อมสีที่เป็นบวกของสายโซ่หนักและเบาของ IgG ไม่เพียงตรวจพบใน PTECs เท่านั้น แต่ยังตรวจพบในเซลล์เยื่อบุผิวท่อแบบปลายโค้ง ทั้งในไซโตพลาสซึม เยื่อหุ้มเซลล์ หรือลูเมนแบบท่อ (รูปที่ 1)

การถอดความและการรวมตัวของ V(D)J ของ IgG ใน PTEC เดี่ยว เพื่อหลีกเลี่ยงการแทรกแซงของเลือดตกค้าง การผูกมัด และการทรานส์ไซโตซิสของ IgG โดย PTECs ในเยื่อหุ้มสมองของไต และเพื่อให้ได้หลักฐานโดยตรงของการแสดงออกของ IgG ใน PTEC นั้น PTEC เดี่ยวจะถูกจัดเรียงจากเยื่อหุ้มสมองของไตของมนุษย์โดยใช้ CD10 และ CD13 ร่วมกันโดยการไหล ไซโตเมทรี (20) ดังแสดงในรูปที่ 2A CD10/CD13 PTEC ที่เป็นบวกสองเท่าคิดเป็น 4.1 เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ที่มีชีวิตในตัวอย่าง PTEC ที่แยกได้ได้รับการยืนยันเพิ่มเติมโดยใช้ยีนมาร์กเกอร์ LRP2 ที่เฉพาะเจาะจง และการปนเปื้อนบีเซลล์ถูกกำจัดโดย CD19 การถอดเสียงของภูมิภาคตัวแปร Ig ถูกขยายใน PTEC เดี่ยวห้ารายการโดย PCR ที่ซ้อนกัน (รูปที่ 2B และ C) ผลการจัดลำดับของ Sanger เปิดเผยว่า PTEC แสดงการรวมตัวของ VDJ เชิงหน้าที่และอนุรักษ์นิยมของสายหนัก IgG (ตารางที่ 1) ซึ่งบ่งชี้ว่าการแสดงออกของ IgG อาจเกิดขึ้นใน PTEC

การแสดงออกของสายโซ่หนักและเบาของ IgG ในเซลล์ HK‑2 เนื่องจากเป็นการยากที่จะตรวจจับการแสดงออกของโปรตีน IgG ใน PTEC ตัวเดียวและเพื่อให้ได้ PTEC ที่เพียงพอสำหรับ Western blotting เซลล์ HK‑2 ซึ่งประกอบด้วย PTEC ที่เป็นอมตะจึงถูกเลือกเพื่อยืนยันการแสดงออกของโปรตีน IgG เพิ่มเติม การวิเคราะห์อิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์แสดงให้เห็นการย้อมสีที่เป็นบวกของ Ig , Igκ และ Igλ ในไซโตพลาสซึม และการย้อมสีที่เป็นบวกมากขึ้นของ RP215 ส่วนใหญ่ในไซโตพลาสซึมและเยื่อหุ้มเซลล์ (รูปที่ 3A)

ต่อจากนั้น การแสดงออกของสายหนักและสายเบาของ IgG ในเซลล์ HK-2 ถูกตรวจพบโดย Western blotting ภายใต้สภาวะการลด เพื่อกำจัดการรบกวนของ FBS ในอาหารเลี้ยงเชื้อ สื่อที่มี FBS ถูกบล็อตด้วยแอนติบอดีที่สอดคล้องกันและย้อมสีเนกาทีฟ แอนติบอดี IgG เชิงพาณิชย์สามารถตรวจจับ IgG ที่ได้จากซีรั่มแต่ตรวจไม่พบ IgG ที่ได้รับจาก HK-2 ในทางตรงกันข้าม RP215 สามารถตรวจจับ IgG ที่ได้รับจาก HK‑2 ได้ แต่จะตรวจไม่พบ IgG ในซีรัม ทั้งแอนติบอดี IgG เชิงพาณิชย์และ RP215 สามารถตรวจจับ Ig ที่ 55 kDa ตรวจพบแถบ Ig 4 (36 kDa) ในเซลล์ HK‑2 ซึ่งสอดคล้องกับน้ำหนักโมเลกุลที่คาดการณ์ไว้ นอกจากนี้ นิพจน์ Igκ (25 kDa) และ Igλ (50 kDa, dimer) ถูกสังเกตพบในเซลล์ไลเสต (รูปที่ 3B) ต่อจากนั้น IgG ในเซลล์เหนือตะกอนถูกทำให้บริสุทธิ์โดยโปรตีน G ยืนยันโดย Western blotting และจัดลำดับโดยแมสสเปกโตรเมทรี ซึ่งแสดงให้เห็นว่าแถบ 55-kDa มีชิ้นส่วนของบริเวณที่แปรผันของสายโซ่Igκและสายหนักของ Ig ตามข้อมูลของ National Center for ฐานข้อมูลข้อมูลเทคโนโลยีชีวภาพ (NCBI) (รูปที่ 3C‑E) ข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าเซลล์ HK-2 ผลิตและหลั่งโปรตีน IgG

การถอดความและการรวมตัวของ V(D)J ของสายหนักและสายเบาของ IgG ในเซลล์ HK‑2 การถอดรหัสยีน Ig และการรวมตัวของ V(D)J เชิงฟังก์ชันเป็นข้อกำหนดเบื้องต้นสำหรับการแสดงออกของ Ig เพื่อยืนยันการแสดงออกของ IgG ในเซลล์ HK‑2 การถอดเสียง Ig , Igκ และ Igλ ถูกประเมินโดยการขยายขอบเขตคงที่และบริเวณแปรผันในเซลล์ HK‑2 (รูปที่ 4A และ B) การจัดลำดับของผลิตภัณฑ์ PCR คงที่มีความคล้ายคลึงกันสูงกับลำดับที่เผยแพร่ในฐานข้อมูล NCBI การโคลน T‑A และการจัดลำดับ Sanger แสดงให้เห็นว่า Ig ในเซลล์ HK‑2 แสดงการรวมตัวของ V(D)J แบบอนุรักษ์นิยมด้วย VH4‑4/D2‑8/JH5 ในทางตรงกันข้าม ความหลากหลายของการรวมตัวของ V(D)J ถูกสังเกตพบใน PBMC ซึ่งขจัดความลำเอียงของไพรเมอร์ (ตารางที่ II) คล้ายกับเซลล์ B IgG ที่ได้รับจาก HK‑2 แสดงการรวมตัวของ V(D)J ที่มีประสิทธิผลโดยทั่วไปด้วยทางแยก V‑D และ D‑J (รูปที่ 4C) นอกจากนี้ ตรวจพบโซมาติกไฮเปอร์มิวเทชันใน Ig ที่ได้มาจาก HK‑2 (ช่วง 6.8‑8.4 เปอร์เซ็นต์ ) โดยมีจุดสำคัญ 7 ใน 15 จุด (RGYW/WRCY, W=A/T, R= A/G, Y=C/T) นำเสนอด้วยการกลายพันธุ์

นอกจากนี้ การถอดรหัส AID (องค์ประกอบที่จำเป็นสำหรับโซมาติกไฮเปอร์มิวเทชันและการรวมตัวของสวิตช์คลาสในเซลล์ B) และ RAG1 และ RAG2 [ที่จำเป็นสำหรับการรวมตัวใหม่ของ V(D)J] ถูกตรวจพบในเซลล์ HK‑2 (รูปที่ 4B) ซึ่งบ่งชี้ว่า กลไกที่อยู่ภายใต้การสังเคราะห์ Ig ในเซลล์ HK-2 อาจคล้ายกับในเซลล์ B

TGF‑ 1 ควบคุมการแสดงออกของ IgG ในเซลล์ HK‑2 เซลล์ HK‑2 ถูกกระตุ้นด้วยความเข้มข้นต่างๆ ของ TGF‑ 1 เป็นเวลา 48 ชั่วโมง การย้อมด้วยอิมมูโนฟลูออเรสเซนส์เปิดเผยว่า IgG ของไซโทพลาสซึมแสดงการย้อมสีที่เป็นบวกที่ดีเพิ่มขึ้นเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม (รูปที่ 5A) Western blotting ยืนยันว่า IgG ได้รับการควบคุมอย่างมีนัยสำคัญโดย TGF‑ 1 (P<0.05; fig.="" 5b="" and="">

ผลของ cistanche: ประโยชน์ต่อไต

การอภิปราย

การศึกษานี้แสดงให้เห็นว่า PTEC แสดง IgG ด้วยการถอดรหัสยีนและการรวมตัวของ V(D)J แบบอนุรักษ์นิยมเชิงหน้าที่ซึ่งคล้ายกับ non-B-IgG TGF‑ 1 เพิ่มการแสดงออกของ IgG ในเซลล์ HK2

เพื่อตรวจสอบว่า PTEC แสดง IgG หรือไม่ IgG ถูกตรวจพบครั้งแรกในไซโตพลาสซึม เยื่อหุ้มเซลล์ และลูเมนของ PTEC ในเยื่อหุ้มสมองไตของมนุษย์ปกติโดยอิมมูโนฮิสโตเคมี ผลการวิจัยพบว่า PTECs ผลิตและหลั่ง IgG ซึ่งตรงกันข้ามกับการตรวจทางพยาธิวิทยาตามปกติของเรา ซึ่งไม่พบ IgG ที่ชัดเจนใน PTEC อาจเป็นเพราะการย้อมสี PTEC ที่อ่อนแอมาก ซึ่งต่ำเกินไปที่จะตรวจพบได้ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในโรคไตที่เกี่ยวข้องกับภูมิคุ้มกัน ซึ่ง Igs มีผลบวกอย่างมากในโกลเมอรูลี และการย้อมสี PTEC อาจหายไปโดยไม่ได้ตั้งใจแต่โดยธรรมชาติ ทรานส์ไซโทซิส IgG จากการไหลเวียนโดย PTECs ผ่านทางตัวรับ Fc ถูกตัดออกบางส่วน เนื่องจากการย้อมที่ชัดเจนของ IgG โดย RP215 ถูกสังเกตพบในเยื่อหุ้มเซลล์และไซโทพลาสซึม การค้นพบนี้ชี้ให้เห็นว่า IgG ที่ได้มาจาก PTEC นั้นคล้ายคลึงกับ non-B‑IgG อื่น ๆ และอาจมี glycosylated epitopes ที่เป็นเอกลักษณ์ ซึ่งสามารถรับรู้อย่างจำเพาะโดย RP215 แทนที่จะเป็นแอนติบอดีต้าน IgG เชิงพาณิชย์ (15) การค้นพบว่าเพียงส่วนหนึ่งของเซลล์เยื่อบุผิวแบบท่อแสดง IgG อาจอธิบายได้โดยการแสดงออกแบบไดนามิกที่วัฏจักรของเซลล์ที่ต่างกัน ซึ่งคล้ายกับรูปแบบการแสดงออกของ IgA ที่ได้จากเซลล์มีเซนเชียล (18) การย้อมสีร่วมของ IgG ด้วยเครื่องหมายแบบท่อ (เช่น aquaporin 1 และ aquaporin 3) จะเป็นประโยชน์สำหรับการศึกษาเพิ่มเติมเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการค้นพบของการศึกษานี้

การจัดลำดับ RNA แบบเซลล์เดียวสามารถแสดงการถอดรหัสของยีนที่เฉพาะเจาะจงในเซลล์ที่กำหนดได้อย่างชัดเจน ตรวจพบการถอดเสียงของสาย Ig และการรวมตัวของ V(D)J ใน PTEC เดี่ยว แม้ว่าจะใช้ PTEC เพียงห้าตัวเท่านั้น แต่กระบวนการนี้ก็เข้มงวดเพราะเก็บเยื่อหุ้มสมองไตไว้ไกลจากเนื้องอก และทุกเซลล์ถูกจัดเรียงโดยโฟลว์ไซโตเมทรีด้วยยีนมาร์กเกอร์จำเพาะ PTEC สองตัว ยืนยันอีกครั้งโดยใช้ยีนมาร์กเกอร์จำเพาะตัวที่สาม (LRP2) และกำจัดการปนเปื้อนของบีเซลล์ ผลการวิจัยพบว่า PTECs ไม่ได้มีเพียงการถอดรหัสยีน IgG เท่านั้น แต่ยังมีการรวมตัวของ V(D)J แบบคลาสสิกในบริเวณตัวแปรเป็นเซลล์บี เช่น การรวมตัวของ V(D)J ที่มีประสิทธิผลกับ V-D และ D-J ทางแยก (รูปที่ 4) ซึ่งบ่งชี้ว่า PTECs มีศักยภาพในการผลิต IgG นอกจากนี้ การรวมตัวใหม่ของ V(D)J ที่อนุรักษ์นิยมมากขึ้นแสดงให้เห็นว่า PTEC มีการถอดรหัสยีน IgG และการรวมตัวใหม่ของ V(D)J ที่คล้ายกับเซลล์ที่ไม่ใช่ B อื่นๆ

HK‑2 ซึ่งเป็นสายผลิตภัณฑ์ PTEC ที่เป็นอมตะนั้นง่ายต่อการเพาะเลี้ยงในปริมาณมาก การศึกษานี้ยืนยันการแสดงออกของโปรตีน IgG ในเซลล์ HK-2 ที่เพาะเลี้ยง; ตรวจพบ IgG ในเซลล์ HK-2 โดยทั้ง immunofluorescence และ western blotting Ig 4 ซึ่งเป็นคลาสย่อยของ Ig ยังตรวจพบที่ขนาดแถบที่สอดคล้องกับน้ำหนักโมเลกุลที่คาดการณ์ไว้ แมสสเปกโตรเมทรีเปิดเผยว่าโปรตีนที่ถูกทำให้บริสุทธิ์จากส่วนลอยเหนือเซลล์โดยใช้โปรตีน G มีชิ้นส่วนของบริเวณแปรผันของสายหนัก Ig และสาย Igκ ซึ่งเป็นหลักฐานสำหรับการหลั่ง IgG โดย PTECs การถอดรหัส IgG ในเซลล์ HK‑2 รองรับการแสดงออกของ IgG ใน PTEC เพิ่มเติม และการรวมตัวของ V(D)J แบบอนุรักษ์นิยมด้วย IGHV4‑4/IGHD2‑8/IGHJ5 ในเซลล์ HK‑2 รองรับการมีอยู่ของ IgG ในเซลล์ HK‑2 ที่คล้ายกันเพิ่มเติม ไปยังเซลล์อื่นๆ ที่ไม่ใช่ B

การศึกษานี้ยังได้ตรวจสอบกลไกพื้นฐานของการผลิต IgG ใน PTECs โดยการตรวจสอบการถอดรหัสของ RAG1, RAG2 และ AID ในเซลล์ HK‑2 มันถูกเปิดเผยว่า RAG1, RAG2 และ AID ถูกคัดลอกในเซลล์ HK‑2 นอกจากนี้ การถอดรหัส RAG1, RAG2 หรือ AID ยังเคยตรวจพบในเซลล์ที่ไม่ใช่ B อื่นๆ จำนวนมาก เช่น โพโดไซต์ (19) และเซลล์มะเร็งหลายเซลล์ (23) ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าเซลล์ที่ไม่ใช่ B รวมถึง PTEC อาจมีกลไกการสังเคราะห์ Ig ที่คล้ายคลึงกันกับเซลล์ B อย่างไรก็ตาม ไม่ว่า AID และ/หรือ RAG1/2 เป็นยีนที่จำเป็นสำหรับ IgG ที่ได้รับจาก PTEC หรือไม่ จำเป็นต้องมีการตรวจสอบเพิ่มเติม นอกจากนี้ เซลล์ CD4 T ผู้ช่วยฟอลลิเคิลยังมีความสำคัญในการควบคุมการสร้างความแตกต่างของเซลล์บีเซลล์ของศูนย์เชื้อโรคในเซลล์พลาสมาและสนับสนุนการผลิต Igs (24) ข้อมูลที่ไม่ได้เผยแพร่ของเราเปิดเผยว่ายังคงตรวจพบ non-B‑Igs ในหนู NOD‑SCID ที่ขาดเซลล์ T และ B ซึ่งบ่งชี้ว่าไม่ใช่-B‑Igs ไม่ได้ขึ้นอยู่กับเซลล์ตัวช่วย T ทั้งหมด ไม่ว่าเซลล์ตัวช่วย T จำเป็นสำหรับ PTEC ในการแสดง IgG หรือไม่ จำเป็นต้องมีการวิจัยเพิ่มเติม

TGF-1 มีบทบาทสำคัญในการสร้างภูมิคุ้มกันในการผลิต Ig ตัวอย่างเช่น TGF‑ 1 เหนี่ยวนำการสลับคลาส IgA และการคัดหลั่งในเซลล์ B ที่ถูกกระตุ้นในม้ามของเมาส์ (25) และเซลล์ต่อมทอนซิล B ของมนุษย์ (26) McIntyre et al (27) แสดงให้เห็นว่า TGF-1 กระตุ้นการเลือกคัดหลั่ง IgG2b โดยเซลล์ B ที่กระตุ้นด้วยไลโปโพลีแซคคาไรด์ มีแนวโน้มมากที่สุดโดยการกระตุ้นสวิตช์คลาส IgM เป็น IgG2b Duan et al (28) แสดงให้เห็นว่า TGF‑ 1 เพิ่มการแสดงออกของ IgA โดยเพิ่มการควบคุมปัจจัยการถอดรหัส Ets‑1 ในเซลล์มะเร็งเยื่อบุผิว การศึกษานี้แสดงให้เห็นว่า TGF‑ 1 ควบคุมการแสดงออกของ IgG ในเซลล์ HK‑2 เนื่องจากตรวจพบเฉพาะ IgG ในเซลล์ HK‑2 จึงมีการตั้งสมมติฐานว่า TGF‑ 1 เหนี่ยวนำการแสดงออกของ IgG ที่ไม่ขึ้นกับการเปลี่ยนคลาส Ig กลไกการกำกับดูแลการผลิต IgG โดย TGF‑ 1 จำเป็นต้องมีการตรวจสอบเพิ่มเติม

PTECs มีบทบาทสำคัญในการพังผืดคั่นระหว่างหน้าแบบท่อผ่าน EMT และ TGF-1 ทำหน้าที่เป็นตัวกลางไกล่เกลี่ย profibrotic ในการศึกษานี้ การเพิ่ม TGF-1 ลงในเซลล์ HK-2 ที่เพาะเลี้ยงเพิ่มการแสดงออกของ IgG ซึ่งบ่งชี้ว่า IgG ที่ได้รับจาก HK-2 อาจมีความเกี่ยวข้องในทางบวกกับ EMT การศึกษาก่อนหน้านี้รายงานว่า Cancer-IgG เกี่ยวข้องกับการแพร่กระจายและส่งเสริม EMT โดยการลด E-cadherin ในมะเร็งต่อมน้ำเหลืองชนิด adenoid cystic carcinoma (29) และมะเร็งปอด (30) ควรพิจารณาว่า IgG ที่ได้รับจาก PTEC อาจมีบทบาทใน EMT ของท่อไตและการเกิดพังผืดของคั่นระหว่างหน้าภายใต้สภาวะของโรค เช่น การบาดเจ็บจากการขาดเลือด/การกลับเป็นเลือด หรือโรคไตเรื้อรัง.

โดยสรุป ตามความรู้ที่ดีที่สุดของเรา การศึกษานี้เป็นครั้งแรกที่แสดงให้เห็นว่า PTEC สามารถแสดงออกและหลั่ง IgG และ TGF‑ 1 สามารถเพิ่มการแสดงออกของ IgG ในเซลล์ HK‑2 อย่างไรก็ตาม บทบาทที่เป็นไปได้ของ IgG ที่ได้รับจาก PTEC ในการเกิดพังผืดของ tubulointerstitial จำเป็นต้องมีการตรวจสอบเพิ่มเติม

ผลของ cistanche: ประโยชน์ต่อไต

เงินทุน

การศึกษานี้ได้รับการสนับสนุนโดยทุนจากมูลนิธิวิทยาศาสตร์ธรรมชาติแห่งชาติของจีน (หมายเลข 82070736, 91642109 และ 81870488) มูลนิธิวิทยาศาสตร์ธรรมชาติไห่หนาน (หมายเลข 819QN355) มูลนิธิการเพาะปลูกเพื่อการวิจัยทางวิทยาศาสตร์ของมหาวิทยาลัยการแพทย์ไห่หนาน HYPY201926) และโครงการสนับสนุนที่สำคัญของโครงการวิจัยหลักของมูลนิธิวิทยาศาสตร์ธรรมชาติแห่งชาติ (หมายเลข 91642206)

ความพร้อมใช้งานของข้อมูลและวัสดุ

ชุดข้อมูลที่ใช้และ/หรือวิเคราะห์ระหว่างการศึกษาปัจจุบันมีให้จากผู้เขียนที่เกี่ยวข้องตามคำขอที่สมเหตุสมผล

ผลงานของผู้เขียน

ในฐานะผู้เขียนที่เกี่ยวข้อง YW และ XQ ได้คิดและออกแบบการศึกษานี้ ZD เข้าร่วมในการออกแบบการวิจัย ทำการทดลองทางเนื้อเยื่อวิทยาและเซลล์เดียว เตรียมตัวอย่างสำหรับแมสสเปกโตรเมตรี วิเคราะห์ข้อมูล และเขียนต้นฉบับ ZJ เข้าร่วมในการออกแบบการวิจัย การทดลองส่วนใหญ่เกี่ยวกับการแสดงออกของ IgG ในเซลล์ HK‑2 และการวิเคราะห์ข้อมูลที่เกี่ยวข้อง YG, JM, HD และ YL ทำการทดลองในสายเซลล์บางส่วน ZC และ YP เลือกกรณีที่เหมาะสมสำหรับการทดลองเซลล์เดียวตามลักษณะทางคลินิก HY และ ZS เข้าร่วมในการทดลองเซลล์เดียว SW มีส่วนร่วมในการย้อมสีอิมมูโนฮิสโตเคมี วิเคราะห์ข้อมูลการย้อมสีเนื้อเยื่อ และร่างและแก้ไขต้นฉบับ YW, ZD และ ZJ ยืนยันความถูกต้องของข้อมูลดิบทั้งหมด ผู้เขียนทั้งหมดตรวจสอบต้นฉบับและแก้ไขข้อมูล ผู้เขียนทั้งหมดอ่านและได้รับการอนุมัติต้นฉบับสุดท้าย.

การอนุมัติจริยธรรมและการยินยอมให้เข้าร่วม

การศึกษานี้สอดคล้องกับหลักการของปฏิญญาเฮลซิงกิ และได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการจริยธรรมทางการแพทย์ของโรงพยาบาลแห่งมหาวิทยาลัยปักกิ่งแห่งที่สาม (อนุมัติหมายเลข S2020121) และดำเนินการตามระเบียบการ ผู้บริจาคทั้งหมดบริจาคเปลือกไตโดยสมัครใจและให้ความยินยอมเป็นลายลักษณ์อักษรก่อนที่จะบริจาคเปลือกไตให้กับการศึกษา วิธีการทั้งหมดได้ดำเนินการตามแนวทางและข้อบังคับที่เกี่ยวข้อง ตัวอย่างเหล่านี้ไม่เปิดเผยชื่ออย่างเคร่งครัด ซีรั่มของมนุษย์และ PBMC ที่ใช้เป็นตัวควบคุมเชิงบวกใน Western blotting หรือ reverse transcription-PCR ในการศึกษานี้ ได้มาจากเลือดของอาสาสมัครที่มีสุขภาพดี ซึ่งให้ความยินยอมเป็นลายลักษณ์อักษรสำหรับการสุ่มตัวอย่าง

ผลของ cistanche: ประโยชน์ต่อไต

อ้างอิง

1. Schlondorff DO: ภาพรวมของปัจจัยที่เอื้อต่อพยาธิสรีรวิทยาของโรคไตวายเรื้อรัง ไต Int 74: 860‑866, 2008

2. Donadio ME, Loiacono E, Peruzzi L, Amore A, Camilla R, Chile F, Vergano L, Boido A, Corrieri M, Bianciotto M,et อัล: ตัวรับที่เหมือนโทร, อิมมูโนโปรทีโซมและทีเซลล์ควบคุมในเด็กที่เป็นโรคไต Henoch‑Schonlein purpura และโรคไตจาก IgA ปฐมภูมิ Pediatr Nephrol 29: 1545-1551, 2014.

3. Breda PC, Wiech T, Meyer‑Schwesinger C, Grahammer F, Huber T, Panzer U, Tiegs G และ Neumann K: เซลล์เยื่อบุผิวท่อใกล้เคียงของไตทำหน้าที่กระตุ้นภูมิคุ้มกันโดยการขับ CD4 เข้าไปในเซลล์ CD4 บวกกับการตอบสนองของ T เซลล์ Am J Physiol Renal Physiol 317: F77‑F89, 2019.

4. Liu BC, Tang TT, Lv LL และ Lan HY: การบาดเจ็บของท่อไต: แรงผลักดันสู่โรคไตเรื้อรัง ไต Int 93: 568‑579, 2018.

5. Kobayashi N, Suzuki Y, Tsuge T, Okumura K, Ra C และ Tomino Y: FcRn-mediated transcytosis ของอิมมูโนโกลบูลิน G ในเซลล์เยื่อบุผิวท่อใกล้เคียงไตของมนุษย์ Am J Physiol Renal Physiol 282: F358‑F365, 2002

6. Qiu X, Zhu X, Zhang L, Mao Y, Zhang J, Hao P, Li G, Lv P, Li Z, Sun X,et อัล: มะเร็งเยื่อบุผิวของมนุษย์จะหลั่งอิมมูโนโกลบูลินโดยไม่ทราบความจำเพาะเพื่อส่งเสริมการเจริญเติบโตและการอยู่รอดของเซลล์เนื้องอก ความละเอียดของมะเร็ง 63: 6488‑6495, 2003

7. Zheng J, Huang J, Mao Y, Liu S, Sun X, Zhu X, Ma T, Zhang L, Ji J, Zhang Y,et อัล: การถอดรหัสยีนอิมมูโนโกลบูลินมีลักษณะการรวมตัวของ VHDJH ที่ชัดเจนในเซลล์มะเร็งเยื่อบุผิวของมนุษย์ เจ ไบโอล เคม 284: 13610‑13619, 2552.

8. Jiang D, Ge J, Liao Q, Ma J, Liu Y, Huang J, Wang C, Xu W, Zheng J, Shao W,et อัล: IgG และ IgA ที่มีศักยภาพในการจับกับจุลินทรีย์จะแสดงออกมาโดยเซลล์ผิวหนังชั้นนอกของมนุษย์ปกติ Int J Mol Sci 16: 2574-2590, 2015.

9. Zhu Z, Zhang M, Shao W, Wang P, Gong X, Ma J, Qiu X และ Wang B: Immunoglobulin M ซึ่งเป็นโมเลกุลใหม่ของเซลล์กล้ามเนื้อหัวใจของหนู Int J Biochem Cell Biol 88: 172‑180, 2017.

10. Niu N, Zhang J, Sun Y, Wang S, Sun Y, Korteweg C, Gao W และ Gu J: การแสดงออกและการกระจายของอิมมูโนโกลบูลิน G และตัวรับในบริเวณที่มีภูมิคุ้มกัน: ตา Cell Mol Life Sci 68: 2481-2492, 2011.

11. Huang J, Sun X, Mao Y, Zhu X, Zhang P, Zhang L, Du J และ Qiu XY: การแสดงออกของยีนอิมมูโนโกลบูลินที่มีการจัดเรียง V-(D)-J แบบคลาสสิกในเซลล์ประสาทสมองของเมาส์ Int J Biochem Cell Biol 40: 1604-1615, 2008

12. Niu N, Zhang J, Guo Y, Zhao Y, Korteweg C และ Gu J: การแสดงออกและการกระจายของอิมมูโนโกลบูลิน G และตัวรับในระบบประสาทของมนุษย์ Int J Biochem Cell Biol 43: 556‑563, 2011.

13. Li J, Korteweg C, Qiu Y, Luo J, Chen Z, Huang G, Li W และ Gu J: รูปแบบการกระจายโครงสร้างพื้นฐานสองแบบของอิมมูโนโกลบูลิน G ในรกของมนุษย์และความหมายเชิงหน้าที่ จิตเวช ทำซ้ำ 91: 128, 2014.

14. Huang J, Zhang L, Ma T, Zhang P และ Qiu X: การแสดงออกของยีนอิมมูโนโกลบูลินด้วยการจัดเรียง V-(D)-J แบบคลาสสิกในอัณฑะของเมาส์และหลอดน้ำอสุจิ J Histochem Cytochem 57: 339‑349, 2009.

15. Tang J, Zhang J, Liu Y, Liao Q, Huang J, Geng Z, Xu W, Sheng Z, Lee G, Zhang Y,et อัล: เซลล์มะเร็งในเซลล์มะเร็งปอด squamous แสดงออก IgG ไกลโคซิเลตแบบ non-canonically ซึ่งกระตุ้นการส่งสัญญาณของ integrin‑FAK มะเร็ง Lett 430: 148‑159, 2018

16. Cui M, You L, Zheng B, Huang X, Liu QF, Huang J, Pan B, Qiu X, Liao Q และ Zhao Y: การแสดงออกของไกลโคซิเลตอิมมูโนโกลบูลิน G ที่ได้จากมะเร็งในระดับสูงทำนายการพยากรณ์โรคที่ไม่ดีในมะเร็งท่อน้ำดีในตับอ่อน เจ แคนเซอร์ 11: 2213-2221, 2020

17. Cui M, Hu Y, Zheng B, Zhang S, Zhang X, Wang M, Qiu XY, Liao Q และ Zhao YP: อิมมูโนโกลบูลินที่มาจากมะเร็ง G: เครื่องหมายใหม่สำหรับการวินิจฉัยแยกโรคและการทำนายการกำเริบของโรคในมะเร็งต่อมไทรอยด์ คลินิก Endocrinol (Oxf) 92: 461‑467, 2020.

18. Deng H, Ma J, Jing Z, Deng Z, Liang Y, AL, Liu Y, Qiu X และ Wang Y: การแสดงออกของ immunoglobulin A ในเซลล์ mesangial ของมนุษย์และผลกระทบต่อการตายของเซลล์และการยึดเกาะ Mol Med Rep 17: 5272‑5282, 2018.

19. Jing Z, Deng H, Ma J, Guo Y, Liang Y, Wu R, AL, Geng Z, Qiu X และ Wang Y: การแสดงออกของ immunoglobulin G ใน podocytes ของมนุษย์และบทบาทในการมีชีวิตและการยึดเกาะของเซลล์ Int J Mol Med 41: 3296‑3306, 2018.

20. Van der Hauwaert C, Savary G, Gnemmi V, Glowacki F, Pottier N, Bouillez A, Maboudou P, Zini L, Leroy X, Cauffiez C,et อัล: การแยกตัวและการกำหนดลักษณะเฉพาะของแบบจำลองเซลล์เยื่อบุผิวที่มีท่อใกล้เคียงปฐมภูมิจากไตของมนุษย์โดยการติดฉลากคู่ CD10/CD13 โปรดหนึ่ง 8: e66750, 2013