ผลของซาโปนินจากเมล็ดของลิ้นจี่ Chinensis Sonn ต่อ TGF- 1, FN และ SOCS-1 ในเซลล์เยื่อบุผิวท่อไตภายใต้กลูโคสสูง

ติดต่อ:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Hai-Yang Nie, Rui Chen, Hong-Na Zhang, จือผาน

1 มหาวิทยาลัยแพทย์แผนจีนฉางชุน เมืองฉางชุน ประเทศจีน

2 โรงพยาบาลชุนยี โรงพยาบาลแพทย์แผนจีนปักกิ่ง กรุงปักกิ่ง ประเทศจีน

ไฮไลท์

ซาโปนินจากเมล็ดของ Litchi chinensis Sonn ช่วยลดการตายของเซลล์เยื่อบุผิวท่อไตและการหลั่งของ TGF- 1 และ FN

เชิงนามธรรม

วัตถุประสงค์: เพื่อศึกษาผลของซาโปนินจากเมล็ด Litchi chinensis Sonn (SLS) ต่อการเจริญเติบโตและการตายของเซลล์มนุษย์ไตเซลล์เยื่อบุผิว (HKC) ที่เพาะเลี้ยงด้วยน้ำตาลกลูโคสสูง วิธีการ: เพาะเลี้ยง HKC ในอาหารเลี้ยงเชื้อ DMEM/F12 ที่เสริมด้วยกลูโคส 30 มิลลิโมล/ลิตร และบำบัดด้วยหรือไม่มี SLS ในกลุ่มปกติ ตัวกลาง DMEM/F12 ที่มีมิติเท่ากันที่มีกลูโคส 5.5 มิลลิโมล/ลิตรถูกเติม การคัดหลั่งของ TGF- 1 และไฟโบรเนกติน (FN) ถูกตรวจพบโดย ELISA ตรวจพบการตายของเซลล์โดยวิธีการย้อมสีสองครั้งของ Annexin V-FITC/PI Western blot ถูกใช้เพื่อตรวจหาระดับของตัวยับยั้งการส่งสัญญาณไซโตไคน์-1 (SOCS-1)

ผลลัพธ์: ผลลัพธ์ของ ELISA แสดงให้เห็นว่าการหลั่งของ TGF{{0}} และ FN ลดลงในกลุ่ม SLS เมื่อเทียบกับกลุ่มที่ได้รับกลูโคส 30 mmol/L (P < {{="" 9}}.05).="" มีเซลล์อะพอพโทซิสในกลุ่มที่ได้รับกลูโคส="" 30="" มิลลิโมล/ลิตรมากกว่าในกลุ่มปกติ="" (p="">< 0.01)="" เมื่อเทียบกับกลุ่มที่ได้รับกลูโคส="" 30="" มิลลิโมล/ลิตร="" การตายของเซลล์="" hkc="" ลดลงอย่างมีนัยสำคัญในกลุ่ม="" sls="" (p="">< 0.01)="" western="" blot="" แสดงให้เห็นว่าระดับของ="" socs-1="" ในกลุ่มกลูโคสสูงบวก="" sls="" ลดลง="" (p="">< 0.01)="">

สรุป: SLS สามารถลดการหลั่งของ TGF- 1 และ FN ใน HKC ได้โดยการลดการสะสมของเมทริกซ์นอกเซลล์ SLS ยังลดการตายของเซลล์ HKC ลงอย่างมีนัยสำคัญโดยการยับยั้งระดับของ SOCS-1 ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นถึงบทบาทของ SLS ในการป้องกันความก้าวหน้าของเส้นโลหิตตีบไต

คำสำคัญ: ซาโปนิน, เมล็ดลิ้นจี่ ชิเนซิส ซอนน์, กลูโคส,ไตเซลล์เยื่อบุผิว, TGF- 1, Fibronectin, Apoptosis

cistancheรักษาได้โรคไตทำให้ดีขึ้นการทำงานของไต

พื้นหลัง

โรคไตจากเบาหวาน (Diabetic nephropathy - DN) เป็นภาวะแทรกซ้อนที่ร้ายแรงที่สุดอย่างหนึ่งของโรคเบาหวาน โดยมีอุบัติการณ์และความเป็นอันตรายถึงชีวิตสูง โดยมีลักษณะเฉพาะคือ glomerular sclerosis และ renal interstitial fibrosis มนุษย์ไตเซลล์เยื่อบุผิว (HKC)เป็นเป้าหมายหลักใน DN และพวกมันหลั่งไซโตไคน์จำนวนมาก เช่น TGF- 1 และไฟโบรเนกติน (FN) ซึ่งนำไปสู่การเกิดขึ้นของ glomerulosclerosis และ renal interstitial fibrosis ในขณะเดียวกัน มีรายงานว่ากลูโคสสูงสามารถเร่งการตายของเซลล์ HKC ได้โดยการเพิ่มระดับของตัวยับยั้งการส่งสัญญาณไซโตไคน์-1(SOCS-1)[1,2] ดังนั้น การยับยั้งระดับของ TGF- 1, FN และ SOCS-1 จึงมีความสำคัญในการป้องกันความก้าวหน้าของเส้นโลหิตตีบของไต เมล็ดพันธุ์ Litchi chinensis Somm(SLS) เป็นสมุนไพรจีนที่จำหน่ายในมณฑลกวางตุ้งเป็นหลัก จังหวัดฝูเจี้ยนและกวางสีของจีนได้รับการบันทึกครั้งแรกใน Bencaogangmu ในราชวงศ์หมิงของจีน (1518 AD-1593 AD) ซาโปนินเป็นสารออกฤทธิ์ของเมล็ด Litchi chinensis Sony จากการศึกษาก่อนหน้านี้ของเรา การศึกษานี้สำรวจผลของ SLS ต่อระดับ TGF- 1 และ FN ใน HKC ที่เพาะเลี้ยงด้วยกลูโคสสูง การตายของเซลล์ HKC และกลไกพื้นฐานในการป้องกันและบำบัดโรคไต 3].

cistancheรักษาได้ภาวะไตวายเฉียบพลัน

วัสดุและวิธีการ วัสดุ

ซื้อ SLS ที่มีความบริสุทธิ์มากกว่า 98 เปอร์เซ็นต์จาก Xianqingle Biological Co., LTD (ซีอาน ประเทศจีน) HKC ซื้อจาก Shanghai Fuxiang Biotechnology Co., Ltd (เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน) DMEM/F12 ตัวกลาง ทารกในครรภ์มาตรฐาน เซรั่มวัวและทริปซินจาก Hyclone (USA) อนุวงศ์ไดเมทิลมาจากซิกมา (สหรัฐอเมริกา) ซื้อชุด ELISA จาก Shanghai Longton Biotechnology Company (เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน) Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit มาจากบริษัท Nanjing Kaiji Biotechnology Co., Ltd (หนานจิง ประเทศจีน)

การเพาะเลี้ยงเซลล์

HKC ถูกคงสภาพไว้ใน DMEM/F12 ด้วยซีรัมของทารกในครรภ์ 10 เปอร์เซ็นต์ และเพาะเลี้ยงที่ 37 องศาในบรรยากาศที่มีความชื้นในอากาศ 95 เปอร์เซ็นต์ และ CO 5 เปอร์เซ็นต์ ถูกย่อยด้วยทริปซิน 0.25 เปอร์เซ็นต์หลังจาก 2-3 วันสำหรับการใช้งาน

เอนไซม์ที่เชื่อมโยงการทดสอบอิมมูโน

HKC ถูกแบ่งออกเป็นหกกลุ่ม รวมถึงกลุ่มควบคุม (DMEM ที่มีน้ำตาลกลูโคส 5.5 มม./ลิตร) กลุ่มที่มีน้ำตาลกลูโคสสูง (DMEM ที่มีน้ำตาลกลูโคส 30 มิลลิโมล/ลิตร) กลุ่มที่มีขนาดยาต่ำของ SLS (5 มก./มล., S1 บวกน้ำตาลกลูโคส 30 มิลลิโมล/ลิตร),SLS กลุ่มที่มีขนาดยาปานกลาง (10 มก./มล., S2 บวก 30 มิลลิโมล/ลิตรกลูโคส), กลุ่มที่มีขนาดยาสูงของ SLS (20 มก./มล., S3 บวก 30 มิลลิโมล/แอลกลูโคส) และกลุ่มโทนสีที่ว่างเปล่า (DMEM ไม่มีเซลล์)

48 ชั่วโมงต่อมา ส่วนลอยเหนือตะกอนของแต่ละกลุ่มถูกรวบรวม และเนื้อหาของ TGF- 1 และ FN ถูกตรวจพบโดย ELISA การดำเนินการได้ดำเนินการตามคู่มือ ค่า OD ถูกอ่านที่ 450nm โดยเครื่องอ่านไมโครเพลท ความเข้มข้นของ TGF- 1 และ FN ถูกกำหนดหาตามเส้นโค้งมาตรฐาน

แอคทีโอไซด์ในcistancheส่งผลดีต่อไต

โฟลว์ไซโตเมทรี

กลุ่มทดลองเหมือนกับข้างต้น เซลล์อะพอพโทซิสถูกตรวจพบโดยโฟลว์ไซโตเมทรีด้วยการย้อมสีสองครั้งของ Annexin V-FITC/PI ควอแดรนต์ด้านซ้ายบนแทนเปอร์เซ็นต์ของเซลล์ที่มีเนื้อตาย ควอแดรนต์ด้านขวาบนแทนเปอร์เซ็นต์ของเซลล์อะพอพโทซิสตอนปลาย ควอแดรนต์ด้านซ้ายล่างแสดงถึงเปอร์เซ็นต์ของเซลล์ที่มีชีวิต และจตุภาคขวาล่างแสดงถึงเปอร์เซ็นต์ของเซลล์อะพอพโทซิสในระยะแรก

การวิเคราะห์ Western blot

HKC ถูกบำบัดด้วย Angiotension (Ang)Ⅱ 10* โมล/ลิตร, 20 มก./ลอฟ SLS และ 10* โมล/ลิตรของ AngⅡ, DMEM/F12 ตัวกลาง, 20 มก./ลิตรของ SLS และ 25 มิลลิโมล/ลิตรของกลูโคสและ 25 มิลลิโมล/ลิตรของกลูโคส ตามลำดับ

โปรตีนเซลล์ไลเซตได้รับการแก้ไขบนโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต-โพลีอะคริลาไมด์เจลอิเล็กโทรโฟรีซิสและถ่ายโอนไปยังเยื่อ PVDF แต่ละเมมเบรนถูกบ่มด้วยโมโนโคลนัลแอนติบอดี ตามด้วยการฟักตัวด้วยแอนติบอดีทุติยภูมิที่คอนจูเกตเปอร์ออกซิเดสและการตรวจหาสารเคมิลูมิเนสเซนซ์

การวิเคราะห์ทางสถิติ

การวิเคราะห์ทางสถิติทั้งหมดดำเนินการโดยใช้ SPSS เวอร์ชัน 190 ความแตกต่างระหว่างกลุ่มข้อมูลทดลองวิเคราะห์โดย ANOVA ทางเดียว และใช้ความแตกต่างที่มีนัยสำคัญน้อยที่สุดระหว่างกลุ่ม พี<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" statistical="">

ผลลัพธ์

ผลของ SLS ต่อการหลั่งของ TGF-B1 และ FN เมื่อเทียบกับกลุ่มน้ำตาลกลูโคสสูง SLS สามารถยับยั้งระดับ TGF-B1 และ FN ใน HKC (P<0.01 or=""><0.05)(figure 1,="" figure="">

เมื่อเทียบกับกลุ่มกลูโคสสูง: * P<0.05, **=""><0.01. control="" group:="" dmem="" with="" 5.5mmol/l="" glucose,="" high="" glucose="" group:="" dmem="" with="" 30mmol/l="" glucose,="" s1="" group:="" 5mg/ml="" sls+30mmol/l="" glucose,="" s2="" group:="" 10mg/ml="" sls+30mmol/l="" glucose,="" s3="" group:="" 20mg="" l="" sls+30mmol/l="" glucose.="" sls,="" seed="" of="" litchi="" chinensis="">

ผลของ SLS ต่อการตายของเซลล์ HKC ผลของโฟลว์ ไซโตเมทรี แสดงให้เห็นว่าอะพอพโทซิสของกลุ่มกลูโคสสูงมีค่าสูงกว่ากลุ่มปกติอย่างมีนัยสำคัญ (P < {{0}}.01)="" เมื่อเทียบกับกลุ่มกลูโคสสูง="" อัตราการตายของเซลล์ของ="" hkc="" มีความสัมพันธ์เชิงลบกับความเข้มข้นของ="" sls="" (p="">< 0.01)="" (รูปที่="">

ผลของ SLS ต่อระดับของ SOCS{{0}} ระดับของโปรตีน SOCS-1 ในกลุ่ม AngII สูงกว่าในกลุ่มปกติอย่างมีนัยสำคัญ (P < 0{="" {8}}1).="" ระดับของ="" socs-1="" ในกลุ่ม="" angii="" plus="" sls="" นั้นต่ำกว่าในกลุ่ม="" angii="" แต่ก็ยังสูงกว่าในกลุ่มควบคุม="" (p="">< 0.01)="" เมื่อเทียบกับกลุ่มปกติ="" ระดับของโปรตีน="" socs-1="" ในกลุ่มกลูโคสสูงเพิ่มขึ้น="" (p="">< 0.01)="" เมื่อเทียบกับกลุ่มน้ำตาลกลูโคสสูง="" ระดับโปรตีนของกลุ่มน้ำตาลกลูโคสสูงบวกกับ="" sls="" ลดลง="" (p="">< 0.01)="" (รูปที่="">

รูปที่ 4 ผลกระทบของ SLS ต่อการแสดงออกของ SOCS-1 กลุ่ม AngII: 10-6 mol/L การเกิด Angiotension Ⅱ, b. กลุ่ม AngII บวก SLS: 20 มก./ลิตร SLS และ 10-6 โมล/ลิตร AngⅡ, ค. กลุ่มควบคุม: DMEM/F12 medium, d. กลูโคสสูงร่วมกับกลุ่ม SLS: 20 มก./ลิตร SLS บวกน้ำตาลกลูโคส 25 มิลลิโมล/ลิตร เช่น กลุ่มควบคุม: DMEM/F12 medium, f. กลุ่มกลูโคสสูง: กลูโคส 25mmol/L SOCS-1 ตัวยับยั้งการส่งสัญญาณไซโตไคน์-1 SLS เมล็ดพันธุ์ลิ้นจี่ chinensis Sonn.

การอภิปราย

การสะสมของเมทริกซ์นอกเซลล์และการตายของเซลล์เยื่อบุผิวท่อไตเป็นการเปลี่ยนแปลงทางพยาธิวิทยาหลักในการพัฒนา DN ภายใต้สถานการณ์ปกติ สัณฐานวิทยาและจำนวนของ HKC ค่อนข้างคงที่ แต่ในปัจจัยกระตุ้นต่างๆ เช่น การอักเสบ HKC สามารถแพร่ขยายได้อย่างมีนัยสำคัญ [4] กลูโคสสูงนำไปสู่การหลั่ง TGF- 1 และ FN ของ HKC ในปริมาณมาก และเร่งการตายของเซลล์ HKC ซึ่งเป็นปัจจัยโดยตรงในการส่งเสริมการเกิด DN ในการทดลองนี้ ใช้กลูโคสสูงเป็นตัวกระตุ้น พบว่า SLS สามารถยับยั้งการหลั่งของ TGF- 1, FN และลดการตายของเซลล์ HKC โดยการลดระดับของ SOCS-1

Litchi chinensis Sonn มีจำหน่ายในมณฑลกวางตุ้ง ฝูเจี้ยน และกวางสีของจีน มีรายงานว่า SLS มี antihyperglycemic, antihyperlipidemic, antiplatelet และ antiviral activity [5] ตามบันทึกของ Bencaogangmu ในราชวงศ์หมิงของจีน (ค.ศ. 1518 - 1593 AD) SLS สามารถ "บรรเทาความกระหายน้ำ" ได้ ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา นักวิชาการหลายคนได้ทำการวิจัยเกี่ยวกับผลทางเภสัชวิทยาและองค์ประกอบทางเคมีเป็นจำนวนมาก ส่วนประกอบทางเคมีหลักของ SLS คือสารประกอบ เช่น ซาโปนินลิ้นจี่ ฟลาโวนอยด์ โพลีฟีนอล สิ่ว กรดอะมิโน กรดไขมัน และส่วนประกอบระเหยง่าย SLS เป็นสารออกฤทธิ์หลัก SLS ใช้กันอย่างแพร่หลายในโรคเบาหวานและโรคไตจากเบาหวาน โดยมีภาวะน้ำตาลในเลือดต่ำ ภาวะไขมันในเลือดต่ำ การยับยั้งการอักเสบของภูมิคุ้มกัน [6] การศึกษาทดลองสมัยใหม่ยังยืนยันว่า SLS มีฤทธิ์ลดน้ำตาลในเลือด [7] อย่างไรก็ตาม กลไกของผลกระทบนี้ไม่ชัดเจน

ในการศึกษานี้ ระดับของ TGF- 1 และ FN ใน HKC เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญหลังจากการกระตุ้นด้วยน้ำตาลกลูโคสสูง และระดับของ TGF- 1 และ FN ลดลงอย่างมีนัยสำคัญหลังการรักษาด้วย SLS ในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา . ระดับโปรตีนของ SOCS-1 ลดลงอย่างมีนัยสำคัญหลังการบำบัดด้วย SLS การศึกษานี้เป็นพื้นฐานทางทฤษฎีสำหรับการประยุกต์ใช้ SLS ทางคลินิก

Cistancheบรรเทาได้โรคไต

อ้างอิง

1 Zhang AH, Huang SM, Ding GX และอื่น ๆ JNK-c-Jun/AP-1 เส้นทางสัญญาณที่ถูกควบคุมโดยการเพิ่มจำนวนเซลล์ Mesangial ของมนุษย์ที่เหนี่ยวนำโดย AngiotensinⅡ Acta Nanjing Med Univ 2004, 24(1): 4-8.

2. นิชิโมโตะ เอ็น, คิชิโมโตะ ที, โยชิซากิก. การรักษาแอนติบอดีต่อตัวรับ interleukin6 ในโรคไขข้อ Ann Rheum Dis 2000, 59(เสริม1): 121.

3. Lou ZM, Tian XJ, Wang WX และอื่น ๆ ผลของสารสกัดซาโปนินรวมจากแกนลิ้นจี่ต่อระดับน้ำตาลในเลือดของหนูที่เป็นเบาหวาน เจ้อเจียง Med J 2007, 29(6): 548-550.

4. Kolset SO, Reinholt FP, Jensen T. โรคไตจากเบาหวานและเมทริกซ์นอกเซลล์ J Histochem Cytochem 2012, 60(12): 976-986.

5. หลี่ เจดับบลิว. พจนานุกรมการแพทย์แผนจีน (ฉบับที่ 2) ปักกิ่ง: People's Med Publishing House 2013, 1184 6. Zhang YJ, Zhang C. ความคืบหน้าของเมล็ดลิ้นจี่เกี่ยวกับสารออกฤทธิ์หลักและผลทางเภสัชวิทยา J Guangdong Pharm Univ 2014, 30(6):792-797. 7. Jiang ZG, Ren K, Lin Z, และคณะ การศึกษาส่วนที่มีประสิทธิภาพของ Litchi chinensis ลดน้ำตาลในเลือด J Changchun Univ Tradit Chin Med 2011, 27(1):14-16.