ผลของไกลโคไซด์รวมของ Cistanche Deserticola ต่อการบาดเจ็บจากความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชั่นและการตายของเซลล์ในหนูที่มีภาวะสมองขาดเลือดกลับคืนมา Ⅰ

งดออกเสียงโกรธ

วัตถุประสงค์: เพื่อสำรวจผลกระทบและกลไกที่เป็นไปได้ของCistanche Deserticola ไกลโคไซด์รวม(GCs) ต่อความเสียหายจากความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชั่นและการตายของเซลล์ประสาทในหนูที่มีสมองการบาดเจ็บกลับขาดเลือดขาดเลือด(ซีรี).

วิธีการ: แบบจำลองการอุดตันของหลอดเลือดแดงสมองส่วนกลาง (MCAO) สร้างขึ้นในหนูทดลองโดยใช้วิธี suture embolization หลังจากที่สร้างแบบจำลองสำเร็จแล้ว หนูในกลุ่มยา (GCs) ได้รับ GCs 50 มก./(กก.·d) โดยทางสายยางเป็นเวลา 14 วันติดต่อกัน; หนูในกลุ่มปฏิบัติการเสแสร้ง (เสแสร้ง) และกลุ่มแบบจำลอง (แบบจำลอง) ได้รับน้ำเกลือปกติในปริมาณเท่ากัน การบริหารช่องปาก หลังการให้ยา จะใช้วิธีคะแนน Longa เพื่อประเมินการขาดดุลทางระบบประสาท จากนั้นหนูก็ถูกสังเวยและทำการย้อมสี TTC เพื่อคำนวณเปอร์เซ็นต์ของพื้นที่สมองตาย ใช้วิธีการ ELISA เพื่อตรวจหาซีรั่มมาลอนไดอัลดีไฮด์(ภาคตะวันออกเฉียงเหนือ) เนื้อหาซูเปอร์ออกไซด์ดิสมิวเตส(SOD) และกลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดส (GSH-Px)กิจกรรม; Western blot เพื่อตรวจหาปัจจัยนิวเคลียร์ E2- ที่เกี่ยวข้องกับปัจจัย 2 (Nrf2), heme oxygenase-1 (HO-1) และ B ในเนื้อเยื่อสมองมะเร็งต่อมน้ำเหลือง/มะเร็งเม็ดเลือดขาวในระดับเซลล์-2 (Bcl-2), การแสดงออกของโปรตีน X ที่เกี่ยวข้องกับ Bcl-2- (Bax) และแคสเปส-3 (แคสเปส-3)

ผลลัพธ์: เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม Sham กลุ่มโมเดลมีคะแนนการขาดดุลทางระบบประสาทเพิ่มขึ้น เปอร์เซ็นต์พื้นที่สมองตายเพิ่มขึ้นเพิ่มเนื้อหา MDA ลดกิจกรรม SOD และ GSH-Px และลดระดับการแสดงออกของโปรตีน Nrf 2, H O -1 และ Bc l -2 ระดับการแสดงออกของโปรตีนของ Bax และ Caspase-3 เพิ่มขึ้น- เมื่อเทียบกับกลุ่มแบบจำลอง คะแนนการขาดดุลทางระบบประสาทของหนูในกลุ่ม GCs ลดลง เปอร์เซ็นต์ของพื้นที่สมองตายลดลงเนื้อหา MDA ลดลงกิจกรรมของ SOD และ GS H-Px เพิ่มขึ้น ระดับการแสดงออกของโปรตีนของ Nrf 2, HO -1 และ Bcl - 2 เพิ่มขึ้น และระดับการแสดงออกของโปรตีนของ Bax และ Caspase - 3 ลดลง สรุป: GC สามารถลดการบาดเจ็บจากภาวะขาดเลือดและกลับคืนสู่ภาวะสมองเสื่อมได้อย่างมีประสิทธิภาพ และกลไกของมันอาจเกี่ยวข้องกับการกระตุ้นวิถี Nrf 2 / HO - 1 ซึ่งช่วยลดระดับความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันและยับยั้งการตายของเซลล์เซลล์ประสาท

[คำสำคัญ]Cistanche Deserticola ไกลโคไซด์รวม; อาการบาดเจ็บที่สมองขาดเลือด-การกลับคืนสู่สภาพเดิม; ความเครียดออกซิเดชัน- การตายของเซลล์

สารสกัดจากกระเจี๊ยบออร์แกนิกธรรมชาติ

คลิกเพื่อดูรายละเอียดเพิ่มเติม

บริการสนับสนุนของ Wecistanche - ผู้ส่งออก cistanche ที่ใหญ่ที่สุดในประเทศจีน:

อีเมล:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/โทรศัพท์:+86 15292862950

เลือกซื้อรายละเอียดข้อมูลจำเพาะเพิ่มเติม:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-ร้านค้า

ภาวะขาดเลือดในสมอง-การกลับคืนสู่สภาพเดิม,

CIS เป็นโรคร้ายแรงมากการเจ็บป่วยสูง, ความพิการและอัตราการเสียชีวิต- เซลล์สมองมีความไวอย่างยิ่งต่อภาวะขาดเลือดขาดเลือดและภาวะขาดออกซิเจน ดังนั้นการปรับหลอดเลือดสมองใหม่โดยเร็วที่สุดจึงเป็นวิธีที่มีประสิทธิภาพสูงสุดในการจัดการกับโรคหลอดเลือดสมองตีบเฉียบพลัน การฉีดลิ่มเลือดอุดตันทางหลอดเลือดดำและการผ่าตัดลิ่มเลือดอุดตันทางหลอดเลือดดำเป็นวิธีการที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในปัจจุบัน แต่เนื่องจากค่อนข้างจะ

เนื่องจากกรอบเวลาที่แคบและปัจจัยอื่นๆ ที่ควบคุมไม่ได้เท่านั้น<10% of stroke patients can achieve vascular recanalization within an effective time. ภาวะสมองขาดเลือดกลับคืนสู่ปกติ, CIRI เป็นการฟื้นตัวของหลอดเลือดสมองประเภทหนึ่งจากการตีบตันซึ่งเป็นความเสียหายทางพยาธิวิทยาที่ซ้อนทับซึ่งเกิดขึ้นระหว่างการไหลเวียนของเลือด ปัจจุบันเชื่อกันว่ากลไกทางพยาธิวิทยาของมันอาจเกี่ยวข้องกับความเป็นพิษของกรดอะมิโนที่ถูกกระตุ้น ปริมาณแคลเซียมที่มากเกินไป การปลดปล่อยปัจจัยการอักเสบ และการสะสมของอนุมูลอิสระที่เกิดจากความเสียหายของไมโตคอนเดรีย [1] ซึ่งท้ายที่สุดนำไปสู่การทำลายอุปสรรคในเลือดและสมอง ความผิดปกติของจุลภาค การตายของเซลล์เซลล์ประสาท และเนื้อร้าย [1] 2] และปฏิกิริยาต่างๆ มากมาย ส่งผลให้การขาดดุลทางระบบประสาทรุนแรงขึ้นอีก

Cistanche Deserticola Total Glycosides (Glycosides of cistanche, GCs) มาจากยาจีนโบราณ Herba Cistanche สารออกฤทธิ์หลักสกัดจากลำต้นและรากนิ้ว) การศึกษาก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่า GC สามารถยับยั้งการเกิดออกซิเดชันของไขมันได้อย่างมีประสิทธิภาพ ปรับปรุงการทำงานของไมโตคอนเดรีย กำจัดอนุมูลอิสระที่มากเกินไป ยับยั้งการปล่อยไซโตไคน์ที่มีการอักเสบ ลดความเป็นพิษต่อเซลล์ ต่อต้านการรวมตัวของเกล็ดเลือด ยับยั้งการเพิ่มจำนวนเซลล์ ยับยั้งการตายของเซลล์ประสาท และลดระดับฮอร์โมน จึงมีการต่อต้านวัย ต่อต้านเนื้องอก ต่อต้านภาวะซึมเศร้า เสริมสร้างภูมิคุ้มกัน ปรับปรุงโรคหลอดเลือดหัวใจและหลอดเลือดขาดเลือด ปรับปรุงความสามารถในการเรียนรู้และความจำและการทำงานของการรับรู้ และปรับปรุงการสืบพันธุ์ [3]

การศึกษาพบว่า GC สามารถลดความเสียหายต่อเซลล์และรักษาความสมบูรณ์ของอุปสรรคในเลือดและสมองได้

[4]; GCs สามารถปรับปรุงความมีชีวิตของเซลล์ได้อย่างมีประสิทธิภาพและป้องกันการอักเสบและการตายของเซลล์ที่เกิดจากการขาดเลือดกลับคืนมา [5]; Nrf 2 มีบทบาทสำคัญในกระบวนการต้านการอักเสบและสารต้านอนุมูลอิสระ [6] จากพื้นฐานข้างต้น บทความนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาเพิ่มเติมผลกระทบและวิถีทางที่เป็นไปได้ของ GCs ต่อความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชั่นและการตายของเซลล์หลังจาก CIRI โดยการจำลองแบบจำลอง CIRI

1 วัสดุและวิธีการ

1. 1 ยาและรีเอเจนต์ GCs (SN-5692 ความบริสุทธิ์ 98% ตะวันตก

Anshenong Biotechnology Co., Ltd.), สารละลายสีย้อม triphenyltetrazolium คลอไรด์ (TTC) 2% (Beijing Solebao Technology Co., Ltd.), ชุด ELISA (Beijing Boosen Co., Ltd.), ชุดวิเคราะห์เชิงปริมาณโปรตีน BCA (การส่งสัญญาณเซลล์ของสหรัฐอเมริกา) บริษัทเทคโนโลยี), แอนติบอดีต้านหนูเมาส์ Bcl-2, Bax, แอนติบอดีแคสปาส เช่น e-3, Nrf 2, HO-1 และแอนติบอดีทุติยภูมิต้านกระต่ายของแพะถูกซื้อมาจาก บริษัท Proteintech ของสหรัฐอเมริกา

1. 2 เครื่องดนตรี

เครื่องหมุนเหวี่ยง (รุ่น: TDL-40B, โรงงานเครื่องมือวิทยาศาสตร์ Shanghai Anheng), เครื่องอ่านไมโครเพลท (รุ่น: Max-M5, American Molecular Devices Company), เครื่องอิเล็กโทรโฟเรซิส SDS- PAGE (รุ่น: DYY-7C, บริษัท Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd.), เครื่องสแกนเจล (รุ่น: 4466611, บริษัท US BIO-RAD)

1. สัตว์ 3 ตัว

หนูวิสตาร์เพศผู้ [SCXK (ปักกิ่ง) 2019-0010] เกรดสะอาด อายุ 8 สัปดาห์ น้ำหนักตัว 250-280 กรัม

1. 3 วิธี

1. 3. 1 การจัดกลุ่มและการสร้างแบบจำลอง

หนูถูกแบ่งออกเป็นกลุ่มเสแสร้ง (เสแสร้ง) กลุ่มแบบจำลอง (แบบจำลอง) และกลุ่มยา (GCs) โดยใช้วิธีการสุ่มแบบง่าย แต่ละกลุ่มมีหนู 15 ตัว พวกเขาได้รับการเลี้ยงดูแบบปรับตัวเป็นเวลา 1 สัปดาห์ จากนั้นจึงสร้างแบบจำลอง การอดอาหารและอดอาหารอย่างเคร่งครัด 12 ชั่วโมงก่อนการผ่าตัด กลุ่มโมเดลและกลุ่ม GCs ใช้วิธีการเย็บ embolization [7] เพื่อสร้างการอุดตันของหลอดเลือดแดงสมองส่วนกลาง (middle cerebral artery occlusion) การบดเคี้ยว, MCAO) แบบจำลองหนู, การกำจัด embolus ดำเนินการหลังจากขาดเลือด 2 ชั่วโมงเพื่อให้ได้รับเลือดกลับคืน , บันทึกเวลาเริ่มต้นของการกลับคืนสู่สภาพปกติ เย็บบาดแผล ผิวหนังถูกฆ่าเชื้อด้วยไอโอโดฟอร์ และสัตว์ก็ถูกส่งกลับเข้าไปในกรงและเลี้ยงดู จากนั้นจึงทำให้สมบูรณ์เป็นเวลา 24 ชั่วโมง การดำเนินการสำหรับหนูในกลุ่ม Sham นั้นเหมือนกับการดำเนินการสำหรับหนูจำลอง แต่ไม่มีการเสียบปลั๊ก ในที่สุด หนู 10 ตัวในแต่ละกลุ่มจะถูกเก็บไว้สำหรับการทดลองครั้งต่อไป

1. 3. 2. วิธีการบริหาร

นำผง GCs และเติมน้ำบริสุทธิ์เพื่อเตรียมสารละลาย 15 มก./มล. การศึกษาเบื้องต้นแสดงให้เห็นว่าขนาดยา 50 มก./(กก.·d) ดีกว่ากลุ่มขนาดยาอื่นๆ [8] ดังนั้นขนาดยาที่เลือกสำหรับการทดลองนี้จึงเท่าเดิม หนูในกลุ่ม GCs ได้รับ GCs โดยสายยางหลัง 24 ชั่วโมงของภาวะขาดเลือดและการกลับคืนสู่ปกติ และหนูในกลุ่ม Sham และกลุ่มแบบจำลองได้รับน้ำเกลือปกติในปริมาณที่เท่ากันโดยสายยางเป็นเวลา 14 วัน

1. 3. 3 คะแนนการขาดดุลทางระบบประสาท

วิธีการให้คะแนนของ Longa [7] ใช้ในการให้คะแนน 24 ชั่วโมงหลังการผ่าตัด และหนูทดลองที่มีคะแนน 1 ถึง 3 จะถูกเก็บไว้สำหรับการทดลองครั้งต่อไป คะแนนหลังจากโดสสุดท้าย 0 คะแนน: ไม่มี

อาการทางระบบประสาท; 1 จุด: การขาดดุลทางระบบประสาทเล็กน้อย แขนขาหน้าด้านตรงข้ามจะงอและยกขึ้นเมื่อยกหาง และไหล่ adducts 2 คะแนน: การขาดดุลทางระบบประสาทปานกลาง, แขนขาหน้าตรงกันข้ามจะงอและยกขึ้นเมื่อยกหาง, ไหล่ adduction, หมุนเป็นวงกลมไปทางด้านตรงข้ามของรอยโรคเมื่อเดิน; 3 คะแนน: การขาดดุลทางระบบประสาทอย่างรุนแรง, เอนตัวไปด้านตรงข้ามของรอยโรคเมื่อเดิน; 4 คะแนน: กิจกรรมหมดสติและเป็นอิสระ

1. 3. 4 การหาเปอร์เซ็นต์ของพื้นที่สมองตาย

หลังจากการบริหารครั้งล่าสุด หนู 4 ตัวจากแต่ละกลุ่มจะถูกสุ่มเลือก ดมยาสลบ ตัดหัว และสมองของพวกมันถูกเอาออกอย่างรวดเร็ว

การแช่แข็งเนื้อเยื่อสมองอย่างรวดเร็วในตู้เย็น -20 องศาเป็นเวลา 20 นาที หลังจากที่เนื้อเยื่อสมองยึดติดดีแล้ว ให้นำออก เริ่มต้นจากจุดตัดของขั้วหน้าของสมองถึงจุดตัดประสาทตา และจากหน้าผากถึงท้ายทอย ให้ตัดสมองของหนูตามแนวระนาบโคโรนาล หั่นเป็นชิ้นสมอง 5 ชิ้นหนา 2 มม. แช่ในสารละลาย TTC 2% แล้วนำไปแช่ในอ่างน้ำอุณหภูมิ 37 องศาเพื่อย้อมเป็นเวลา 15 นาที พลิกกลับด้านแล้วย้อมต่ออีก 15 นาที ในที่สุด ชิ้นสมองก็ถูกแช่ในสารละลายพาราฟอร์มัลดีไฮด์ 4% และตรึงไว้เป็นเวลา 12 ชั่วโมงก่อนจะถูกถ่ายภาพ เนื้อเยื่อสมองปกติแสดงเป็นสีแดง และเนื้อเยื่อสมองตายแสดงเป็นสีขาว ใช้ซอฟต์แวร์รูปภาพเพื่อวิเคราะห์และคำนวณอัตราการตายของสมองแต่ละชิ้น อัตราการตาย=พื้นที่กล้ามเนื้อหัวใจตาย/พื้นที่รวมของชิ้นสมอง × 100%

1. 3. 5 การตรวจหาตัวบ่งชี้ที่เกี่ยวข้องกับความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน

วางยาสลบหนู นำเลือดเอออร์ตาในช่องท้อง 4 มล. แบ่งส่วนลงในหลอด EP ที่สะอาด และนำไปแช่ในตู้เย็นที่มีอุณหภูมิ 4 องศาเป็นเวลา 0 ปั่นแยกที่ 3 500 รอบ/นาที เป็นเวลา 5 ชั่วโมงที่ 4 องศาเป็นเวลา 15 นาที นำส่วนลอยเหนือตะกอน และเก็บซีรัมของหนู 3 ตัวไว้ในแต่ละกลุ่มในที่สุด ปริมาณของมาลอนไดอัลดีไฮด์ (MDA) และซูเปอร์ออกไซด์ดิสมิวเตส (ซูเปอร์ออกไซด์ดิสมิวเตส) ถูกกำหนดตามวิธีการทำงานของชุด ELISA e dismutase,

SOD), ฤทธิ์ของกลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดส (กลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดส, GSH-Px)

1. 3. 6 การตรวจจับ Western blot

วัดความเครียดออกซิเดชันและโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับการตายของเซลล์เพื่อวัดการแสดงออกของโปรตีน Nrf 2, H O -1, Bcl -2, Bax และ Caspase -3 ในเนื้อเยื่อสมอง หนูสามตัวถูกเลือกจากแต่ละกลุ่ม และนำเปลือกสมองจากบริเวณที่เป็นโรคในปริมาณที่เหมาะสม เติมสารละลายสลายเข้าไป และคำนวณความเข้มข้นของโปรตีนหลังจากการสกัดโปรตีน หลังจากโปรตีนเจลอิเล็กโตรโฟรีซิส ถ่ายโอนไปยังเมมเบรน ปิดกั้นด้วยสารละลายปิดกั้นเป็นเวลา 2 ชั่วโมง ล้าง จากนั้นบ่มด้วยแอนติบอดีปฐมภูมิที่ 4 องศาข้ามคืน ในวันถัดไป TBST จะถูกเอาออก ล้าง และแอนติบอดีทุติยภูมิถูกเพิ่มสำหรับการฟักตัวเป็นเวลา 2 ชม. วางแถบเป้าหมายบนเครื่องวิเคราะห์ภาพเพื่อวิเคราะห์ค่าสีเทา คำนวณค่าสีเทาของแถบสัมพัทธ์ ค่าสีเทาของแถบสัมพัทธ์=ค่าสีเทาของแถบเป้าหมาย / ค่าสีเทาของแถบอ้างอิงภายใน

1. 4 วิธีวิเคราะห์ทางสถิติ

แอปพลิเคชันข้อมูล SPSS 25. 0 ซอฟต์แวร์สำหรับการวิเคราะห์ข้อมูล และกราฟทางสถิติในบทความนี้วาดด้วยซอฟต์แวร์ GraphPad Prism 8 ผลลัพธ์ข้อมูลที่สอดคล้องกับการแจกแจงแบบปกติจะแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ± ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน การวิเคราะห์ความแปรปรวนแบบปัจจัยเดียวใช้สำหรับการเปรียบเทียบระหว่างตัวอย่างหลายตัวอย่าง และใช้ LSD-t สำหรับการเปรียบเทียบระหว่างตัวอย่างอิสระสองตัวอย่าง ทดสอบด้วย P < 0 05 บ่งชี้ว่าความแตกต่างมีนัยสำคัญทางสถิติ