ผลของไกลโคไซด์ทั้งหมดของ Cistanche Deserticola ต่อการเผาผลาญพลังงานของเซลล์ HepG2 ของมนุษย์

เพื่อศึกษาผลการต้านเนื้องอกของ Cistanche Deserticola Y. Ma เซลล์ HepG2 ได้รับการรักษาด้วย 0, 3.5, 10.5, 21, 31.5 และ 42µg/ml ของ Total glycosides (TG) จาก Cistanche Deserticola ตรวจพบอัตราการรอดชีวิตของเซลล์ HepG2 และความเข้มข้นในการยับยั้ง 50 เปอร์เซ็นต์ (IC50) โดยใช้วิธี CCK-8 และตรวจพบระดับของชนิดออกซิเจนที่เกิดปฏิกิริยา (ROS) โดยใช้โพรบเรืองแสง DCFH-DA สุดท้าย เครื่องวิเคราะห์พลังงาน Seahorse XFe24 (Agilent สหรัฐอเมริกา) ถูกนำมาใช้เพื่อตรวจจับความดันเซลล์ไมโตคอนเดรียและความดันไกลโคไลติก ผลการวิจัยพบว่า TG สามารถลดอัตราการรอดชีวิตของเซลล์ HepG2 และระดับ IC50 คือ 35.28µg/ml เมื่อความเข้มข้นของ TG เพิ่มขึ้น ระดับของ ROS มีแนวโน้มสูงขึ้นตามความเข้มข้น การเผาผลาญพลังงานแสดงให้เห็นว่าแต่ละกลุ่มของ TG สามารถลดการทำงานของระบบทางเดินหายใจและไมโตคอนเดรียลและไกลโคไลติกของเซลล์ HepG2 ได้อย่างมีนัยสำคัญ สรุปได้ว่า TG สามารถยับยั้งการหายใจของไมโทคอนเดรียและการทำงานของไกลโคไลซิสของเซลล์ HepG2 อย่างมีนัยสำคัญ เพิ่มระดับของ ROS และยับยั้งการเพิ่มจำนวนเซลล์ ดังนั้น การทดลองนี้ชี้ให้เห็นว่า Cistanche Deserticola สามารถใช้เป็นแหล่งอาหารหรือยาต้านมะเร็งได้ในอนาคต อย่างไรก็ตาม จำเป็นต้องมีการศึกษาเพิ่มเติมเกี่ยวกับกลไกและการใช้งานทางคลินิก

คลิกอาหารเสริม Cistanche เพื่อเพิ่มระบบภูมิคุ้มกัน

1. บทนำ

บน Cistanche Deserticola Y. Ma เป็นยาและสารอาหารที่คล้ายคลึงกัน เป็นพืชกาฝากยืนต้นในวงศ์ Orobanchaceae และเรียกว่า "โสมทะเลทราย" (1) สิ่งสำคัญที่สุดคือ สารอาหาร เช่น ไขมันและโปรตีนที่ได้รับจาก Cistanche สามารถตอบสนองความต้องการการเผาผลาญพลังงานขั้นพื้นฐานของเนื้อเยื่อปกติของมนุษย์ และลดการจัดหาพลังงานของเซลล์เนื้องอก และด้วยเหตุนี้จึงบรรลุวัตถุประสงค์ในการยับยั้งการเจริญเติบโตของเซลล์เนื้องอก นอกจากนี้ Cistanche ยังมีหน้าที่ในการต้านอนุมูลอิสระ ยับยั้งการตอบสนองต่อการอักเสบ และเพิ่มภูมิคุ้มกัน (1, 2) เนื่องจากคณะกรรมการสุขภาพแห่งชาติของสาธารณรัฐประชาชนจีนและหน่วยงานกำกับดูแลตลาดแห่งรัฐประกาศอย่างเป็นทางการเกี่ยวกับการผลิตและการดำเนินงานของ Cistanche Deserticola Y. Ma เป็นยาและอาหารที่คล้ายคลึงกัน โดยนำร่องในปี 2564 และมีการวิจัยเชิงลึกเพิ่มเติมเกี่ยวกับการพัฒนา

มะเร็งตับเป็นเนื้องอกร้ายที่พบได้ทั่วไปในระบบทางเดินอาหาร และมีอัตราการเสียชีวิตอยู่ในอันดับต้น ๆ ของเนื้องอกร้าย (3, 4) ซึ่งสามารถแบ่งได้เป็นมะเร็งระยะแรกและระยะทุติยภูมิ ปัจจุบันยังขาดยารักษาโรคที่ปลอดภัยและมีประสิทธิภาพในคลินิก หากใช้ยาโซราเฟนิบและยารักษาโรคอื่นๆ เป็นเวลานาน พวกเขามีแนวโน้มที่จะดื้อยาและเกิดอาการไม่พึงประสงค์ (5) เนื่องจากอาการของโรคมะเร็งตับในระยะเริ่มต้นนั้นไม่เฉพาะเจาะจง และอาการส่วนใหญ่อยู่ในระยะกลางและระยะสุดท้าย ผู้คนจึงมีความกระตือรือร้นในการรักษามะเร็งตับด้วยการแพทย์แผนจีน ในบรรดาผู้ป่วยที่เป็นเนื้องอกและผู้ป่วยที่มีผลการรักษาที่ไม่น่าพอใจ เช่น การรักษาด้วยเคมีบำบัด การแพทย์แผนจีนได้สะท้อนให้เห็นข้อดีของมัน เช่น สามารถเสริมสร้างภูมิคุ้มกันและเป็นส่วนเสริมในการรักษาเนื้องอกในระยะเริ่มต้นและระยะกลาง

ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา มีรายงานว่า Cistanche มีฤทธิ์ต้านมะเร็ง (6–11) คุณและคณะ (6) พบว่า echinacoside ที่สกัดจาก Cistanches herba (Cistanche salsa) สามารถยับยั้งการเพิ่มจำนวนของเซลล์ HepG2 โดยลดการแสดงออกของ TREM2 และปิดกั้นทางเดินสัญญาณ PI3K/Akt หลี่และคณะ (7) ยังพบว่า echinacoside ออกฤทธิ์ต้านมะเร็งผ่านแกน miR-503-3p/TGF- 1/Smad เพื่อต่อต้านมะเร็งตับ ในขณะเดียวกัน Verbascoside สามารถควบคุมความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันและการตายของเซลล์ HepG2 ผ่าน STAT-3 และมีศักยภาพที่จะพัฒนาเป็นสารป้องกันทางเคมี (8–10) นอกจากนี้ นักวิจัยยังพบว่า phenylethanoid glycoside ยังสามารถยับยั้งการเพิ่มจำนวนของเซลล์ HepG2 (11) นอกจากนี้ เอจินาโคไซด์ยังยับยั้งการแพร่กระจายของมะเร็งไต 786-เซลล์ O และเซลล์มะเร็งลำไส้ใหญ่ SW480 (12, 13) ในการศึกษาอื่น phenylethanoid glycosides จาก Cistanche ได้รับการแสดงเพื่อลดการบาดเจ็บของตับในหนูที่มีเนื้องอก H22 (14, 15) และเพื่อปรับปรุงการทำงานของระบบภูมิคุ้มกันโดยการลดระดับ AFP ซึ่งส่งผลเสียต่อการเจริญเติบโตของเนื้องอก (16) เป็นที่น่าสังเกตว่าเมแทบอลิซึมของพลังงานที่เปลี่ยนแปลงเป็นลักษณะเฉพาะอย่างหนึ่งของเซลล์เนื้องอก ซึ่งแสดงให้เห็นว่าเซลล์เนื้องอกใช้กลูโคสไกลโคไลซิสเป็นวิธีการจ่ายพลังงานโดยไม่คำนึงถึงสภาพแวดล้อมแบบใช้ออกซิเจนหรือไม่ใช้ออกซิเจน และปรากฏการณ์นี้เรียกว่า "ผลวอร์เบิร์ก" ดังนั้นจึงเป็นไปได้ในทางทฤษฎีที่จะคัดเลือกเซลล์เนื้องอกให้อดอาหารเพื่อจำกัดการเติบโตของเซลล์มะเร็งโดยการจำกัดการดูดซึมกลูโคส (17)

แม้ว่าการศึกษาจำนวนมากได้ศึกษาฤทธิ์ต้านมะเร็งของฟีนิลเอทานอยด์ไกลโคไซด์ เช่น Echinacoside และ Verbascoside แต่ฤทธิ์ต้านมะเร็งของ TG (ฟีนิลเอธานอยด์ไกลโคไซด์และไกลโคไซด์อื่นๆ) (18) ไม่ใช่เรื่องปกติ มีการศึกษาเพียงเล็กน้อยว่า TG มีผลต่อการเผาผลาญพลังงานของเซลล์เนื้องอกหรือไม่ ดังนั้น การทดลองนี้จึงวิเคราะห์ความสัมพันธ์ระหว่างเมแทบอลิซึมของพลังงาน ความเสียหายจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน และการอยู่รอดของเซลล์ผ่านความสามารถในการสลายไกลโคไลติกและความดันไมโตคอนเดรีย เพื่อสำรวจกิจกรรมการยับยั้งของ TG บนเซลล์ HepG2

2. วัสดุและวิธีการ

2.1. การเพาะเลี้ยงเซลล์และการรักษา

ซื้อเซลล์ HepG2 จาก Cell Center ของ Institute of Basic Medicine, Peking Union Medical University (ปักกิ่ง, จีน) และอาหารเลี้ยงเชื้อ DMEM ที่มีซีรั่มวัวทารกในครรภ์ 10 เปอร์เซ็นต์ และแอนติบอดี 1 เปอร์เซ็นต์ (เพนิซิลลิน สเตรปโตมัยซิน และ เจนทามิซิน) ถูกใช้ เพาะเลี้ยงเซลล์ในตู้อบความชื้นสัมพัทธ์ CO2 37◦C และ 5 เปอร์เซ็นต์ (19) หลังจากที่เซลล์เติบโตถึงจุดบรรจบกันที่ 80–90 เปอร์เซ็นต์ พวกมันจะถูกย่อยด้วยทริปซิน 0.25 เปอร์เซ็นต์โดยไม่มี EDTA และเพาะเลี้ยงย่อยใน 1:3 หลังจาก 2-3 วันของการเติบโตของเซลล์ เซลล์ในระยะการเจริญเติบโตของลอการิทึมจะถูกนำไปเพาะเลี้ยงย่อยหรือการทดลองที่ตามมา ในการทดลองแต่ละครั้ง เซลล์ HepG2 สัมผัสกับ TG ที่มีความเข้มข้นต่างกัน

ไกลโคไซด์ทั้งหมดของ Cistanche Deserticola จัดหาโดย Inner Mongolia Sankou Technology Co., Ltd (Ordos, มองโกเลียใน, จีน) (20) TG ถูกละลายในอาหารเลี้ยงเชื้อ DMEM จนกระทั่งความเข้มข้นสุดท้ายคือ 0, 3.5, 10.5, 21, 31.5 และ 42 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร

2.2. Eect ของ TG บนสัณฐานวิทยาของเซลล์ HepG2

เซลล์ HepG2 ในเฟสการเจริญเติบโตของลอการิทึมได้รับการฉีดวัคซีนใน 24-เพลตหลุมที่ความเข้มข้น 5×104 /หลุม หลังจากที่เซลล์ติดกับผนังแล้ว TG ถูกเติมจนกระทั่งความเข้มข้นสุดท้ายเป็น 0, 21 และ 42µg/ml และเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 24 ชั่วโมง จากนั้นจึงสังเกตสัณฐานวิทยาของเซลล์ของแต่ละกลุ่มภายใต้กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์

2.3. Eect ของ TG ต่อการเพิ่มจำนวนของ HepG2 cel

ลอการิทึมของระยะการเจริญเติบโตของเซลล์ของเซลล์ HepG2 คิดเป็น 1×104 /หลุม เพาะเชื้อใน 96-จานหลุม และแต่ละหลุมเพาะเชื้อด้วยเชื้อ 100 µl หลังจากที่เซลล์ติดกับผนังแล้ว พวกมันละลายในตัวกลาง DMEM ที่ปราศจากซีรั่มเพื่อให้ความเข้มข้นของยาขั้นสุดท้ายคือ 0, 3.5, 10.5, 21, 31.5 และ 42µg/ml ความเข้มข้นแต่ละความเข้มข้นได้รับการจัดสรร 6 หลุมและจากนั้นบ่มที่อุณหภูมิ 37◦C ต่ำกว่า 5 เปอร์เซ็นต์ CO2 ในตู้ฟักเป็นเวลา 24 ชั่วโมง สุดท้าย เติมอาหารเลี้ยงเชื้อ DMEM 100 ไมโครลิตรที่มีสารละลาย CCK8 10 เปอร์เซ็นต์ในแต่ละหลุม จากนั้นจึงบ่มหลุมในตู้ฟักเป็นเวลา 30 นาทีเพื่อตรวจหาค่าการดูดกลืนแสง (A) ที่ 450 นาโนเมตร

2.4. การวัดระดับ ROS ภายในเซลล์

ระบบขนาด 2 มล. ต่อหลุมที่มีเซลล์ 4 × 105 ถูกวางในจานหลุม 6-และวางไว้ในตู้อบที่อุณหภูมิ 37◦C ต่ำกว่า 5 เปอร์เซ็นต์ของ CO2 หลังจากการรักษา 24 ชั่วโมง วัดระดับ ROS ภายในเซลล์ จากนั้น เติม DCFH-DA (10µM) 1 มล. และบ่มในที่มืดที่อุณหภูมิ 37◦ซ เป็นเวลา 30 นาที จากนั้น เราล้างพวกมันด้วย PBS สามครั้ง และสุดท้าย กิจกรรม ROS ถูกตรวจพบโดยโฟลว์ไซโตเมตรี

2.5. Eect ของ TG ต่อการเผาผลาญพลังงานของ HepG2 ce

s (A) การปรับเงื่อนไขการทดสอบให้เหมาะสม: เซลล์ HepG2 ในช่วงการเจริญเติบโตแบบลอการิทึมได้รับการคัดเลือกและปลูกเชื้อบนจานเพาะเลี้ยงเซลล์ของเครื่องวิเคราะห์พลังงานชีวภาพ Seahorse XFe 24 ที่ 500 µl ต่อหลุม เพื่อให้ จำนวนเซลล์คือ 1, 2, 4 และ 8 (×104 ) ทำสำเนาห้าชุดของแต่ละกลุ่ม ซึ่งมีเพียง A1, B3, C4 และ D6 เท่านั้นที่ถูกเติมด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อ (B) การตรวจจับความดันไมโทคอนเดรีย: ชุดความดันไมโตคอนเดรียถูกนำออกมาล่วงหน้า ซึ่งรวมถึงโอลิโกมัยซิน, คาร์บอนิลไซยาไนด์ไตรฟลูออโรเมทอกซีฟีนิลไฮดราโซน (FCCP) และโรทีโนน/แอนติไมซิน A (Rot/AA) พวกมันถูกเจือจางด้วยตัวกลางสำหรับตรวจจับเพื่อทำให้ความเข้มข้นของพวกมันเป็น 1µM, 0.5µM และ 0.5µM โดยแยกกัน

จากนั้น แผ่นโพรบไฮเดรตถูกเอาออกและเพิ่มเข้ากับพอร์ต A, B และ C ตามลำดับ โดยมีปริมาตร 56 µl, 62 µl และ 69 µl วัดค่าอัตราการใช้ออกซิเจน (OCR) ในช่วงเวลาต่างๆ เพื่อสะท้อนถึงระดับของออกซิเดทีฟฟอสโฟรีเลชั่น (C) การตรวจจับความดันไกลโคไลซิส: กลูโคส โอลิโกมัยซิน และ 2- ดีออกซีกลูโคส (2-DG) ถูกเจือจางด้วยตัวกลางในการตรวจจับเพื่อสร้างความเข้มข้น 10 มิลลิโมลาร์ 1 ไมโครโมลาร์ และ 50 มิลลิโมลาร์ ตามลำดับ จากนั้น ถอดแผ่นไฮเดรตโพรบออกและเพิ่มที่พอร์ต A, B และ C ตามลำดับ ด้วยปริมาณที่กล่าวถึงข้างต้น วัดค่าอัตราการเป็นกรดนอกเซลล์ (ECAR) ในช่วงเวลาต่างๆ เพื่อสะท้อนการทำงานของไกลโคไลติกของเซลล์ (21)

2.6. รอยเปื้อนตะวันตก

เซลล์ที่ผ่านการบำบัดถูกชุบด้วย 80 ไมโครลิตรของไลซิสบัฟเฟอร์ (RIPA: PMSF=100:1) ที่ใช้ในการแยกโปรตีน จากนั้นจึงทำการดำเนินการเพื่อแยกโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต-โพลีอะคริลาไมด์เจลอิเล็กโตรโฟรีซิส (SDS-PAGE) ตัวอย่างโปรตีน (ปริมาตรบรรจุ 50 µg ต่อหลุม) ต่อมา การถ่ายโอนโปรตีนไปยังเมมเบรน PVDF สำเร็จโดยใช้อ่างน้ำแข็ง โปรตีนถูกบล็อกโดย BSA เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง และแอนติบอดีหลัก (Bcl-2, Bax, caspase-3) ถูกเพิ่มตามสัดส่วนและบ่มข้ามคืนที่อุณหภูมิ 4◦C หลังจากนั้นเยื่อ PVDF จะถูกบ่มด้วยแอนติบอดีทุติยภูมิที่เจือจางเป็นเวลา 1-2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง -Actin ถูกใช้เป็นโปรตีนอ้างอิงภายใน และเยื่อ PVDF ได้รับการพัฒนาและแก้ไขเพื่อสังเกตการเปลี่ยนแปลงการแสดงออกของโปรตีนเป้าหมาย (22, 23)

2.7. การประมวลผลทางสถิติ

ข้อมูลการทดสอบแสดงเป็น χ ± SD (ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน) และวิเคราะห์โดยการวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว (ANOVA) โดยใช้ SPSS 250 (SPSS, สหรัฐอเมริกา) Flowjo10 และ Graphpad prism 8.0.2 เป็นซอฟต์แวร์ที่ใช้ในการวาดรูป ∗P < 0.05 และ ∗∗P < 0.01

3. ผลลัพธ์

3.1. Eect ของ TG บนสัณฐานวิทยาของเซลล์ HepG2

ในกระบวนการอะพอพโทซิส ขั้นแรก ปริมาตรเซลล์จะค่อยๆ ลดลงและทำให้ผิดรูป จากนั้นเซลล์ที่เติบโตใกล้กับผนังจะค่อยๆ หดตัว กลายเป็นกลม หลุดออก และส่งผลให้เกิดโครโมโซม pyknosis นิวเคลียสบางส่วนจะแตก ขยายขนาด และสร้างถุงอะพอพโทติค จากรูปที่ 1 พบว่าเมื่อรักษาเซลล์ HepG2 ด้วย TG ปริมาตรเซลล์จะค่อยๆ ลดลง สังเกตเห็นโดยสัญชาตญาณว่านิวเคลียสของเซลล์ที่ได้รับ TG 21µg/ml เริ่มหดตัวและปริมาตรมีขนาดเล็กลง ด้วย TG 42µg/ml เซลล์มาพร้อมกับการลอยตัวและการแยกส่วนของเซลล์ เยื่อหุ้มเซลล์แตก แตก เป็นเนื้อตาย มีขอบเขตไม่ชัดเจน อยู่ในสภาพใกล้จะถึงแก่ความตาย

3.2. Eect ของ TG ต่อการเพิ่มจำนวนของ HepG2 cel

เพื่อยืนยันผลต้านเนื้องอกของ TG ในหลอดทดลอง เซลล์ HepG2 ได้รับการรักษาด้วยชุดความเข้มข้นของ TG (0, 3.5, 10.5, 21, 31.5 และ 42µg/ml) เป็นเวลา 24 ชั่วโมง จากนั้นใช้วิธีการทดสอบ CCK8 เพื่อสำรวจผลของ TG ต่อการเพิ่มจำนวนเซลล์ HepG2

สำรวจผลกระทบของ TG ต่อการเพิ่มจำนวนเซลล์ HepG2 รูปที่ 2 แสดงให้เห็นว่าการแพร่กระจายของ HepG2 ได้รับผลกระทบจากระดับที่แตกต่างกันหลังจากการรักษาด้วย TG ที่มีความเข้มข้นต่างกันเป็นเวลา 24 ชั่วโมง เมื่อเปรียบเทียบกับอัตราการรอดชีวิตของเซลล์ของกลุ่มควบคุม อัตราการรอดชีวิตของเซลล์ของกลุ่มที่บำบัดเท่ากับ 96.95 เปอร์เซ็นต์ , 92.59 เปอร์เซ็นต์ , 92.78 เปอร์เซ็นต์ , 77.28 เปอร์เซ็นต์ และ 31.04 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ เมื่อความเข้มข้นเพิ่มขึ้น อัตราการรอดชีวิตของเซลล์มีแนวโน้มลดลง แต่ไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญ (P > 0.05) ในความเข้มข้น 3.5, 10.5 และ 21µg/ml และช่วงการยับยั้งคือ เล็ก. มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างความเข้มข้น 31.5 และ 42µg/ml (P < 0.01) และอัตราการยับยั้งสูงถึง 68.96 เปอร์เซ็นต์ที่ 42µg/ml ดังนั้น การทดลองนี้แสดงให้เห็นว่า TG สามารถยับยั้งการอยู่รอดของเซลล์ HepG2 อย่างมีนัยสำคัญในลักษณะที่ขึ้นกับความเข้มข้น และอาจจำเป็นต้องมีการทดลองเพิ่มเติมเพื่อยืนยันความเป็นพิษต่อเซลล์ของ TG

3.3. การวัดระดับ ROS ภายในเซลล์

ดังที่แสดงในรูปที่ 3 ด้วยการเพิ่มความเข้มข้นของ TG เนื้อหาสัมพัทธ์ที่สูงขึ้นของ ROS ถูกตรวจพบโดยวิธี DCFH-DA fluorescence probe ซึ่งแสดงแนวโน้มของปริมาณรังสี หลังการรักษา TG เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ความเข้มการเรืองแสงสัมพัทธ์ของ DCF เพิ่มขึ้น 0.91 เปอร์เซ็นต์ , 13.64 เปอร์เซ็นต์ , 24.61 เปอร์เซ็นต์ , 45.91 เปอร์เซ็นต์ และ 105.33 เปอร์เซ็นต์ และมีความแตกต่างกันอย่างมากที่ 10.5, 21, 31.5 และ 42µg/ml (P < 0.01) เมื่อความเข้มข้นของ TG คือ 42µg/ml ระดับการสะสม ROS สูงสุดพบว่าสูงกว่าในกลุ่มควบคุมประมาณสองเท่า ดังนั้นเราจึงคาดการณ์ว่ากำลังการผลิต ROS ที่คงที่และสูงอาจเป็นสาเหตุของความเป็นพิษต่อเซลล์ของ TG ที่ดีขึ้น ผลลัพธ์เหล่านี้อาจบ่งบอกถึงความสัมพันธ์ที่ใกล้ชิดระหว่างความสามารถในการผลิต ROS และความเป็นพิษต่อเซลล์ของเซลล์

3.4. Eect ของ TG ต่อการหายใจแบบใช้ออกซิเจนแบบยลของ Hep2 ce

3.4.1. การกำหนดจำนวนเซลล์

ในการตรวจจับความดันไมโทคอนเดรียและความดันไกลโคไลติก ขั้นแรกจำเป็นต้องกำหนดความหนาแน่นของการเพาะเซลล์ที่เหมาะสม (21) ในการทดลองนี้ ขอแนะนำให้ใช้ค่าอัตราการใช้ออกซิเจนพื้นฐาน (OCR) และอัตราการเป็นกรดนอกเซลล์ (ECAR) เพื่อระบุลักษณะความหนาแน่นของเซลล์ ขั้นแรก การประเมินด้วยสายตาใช้เพื่อประมาณความหนาแน่นของเซลล์ที่เหมาะสมที่สุด: เซลล์ควรกระจายอย่างสม่ำเสมอในแต่ละหลุมด้วยระดับฟิวชันที่ 50–90 เปอร์เซ็นต์ ในแง่หนึ่ง เมื่อใช้เครื่องวิเคราะห์พลังงานชีวภาพในหลุม24-เพื่อระบุค่า OCR ของเซลล์หรือค่า ECAR ความหนาแน่นของการเพาะเลี้ยงเซลล์ควรเป็น 1×104 -8×104 เซลล์/หลุม ในทางกลับกัน ค่า OCR และ ECAR พื้นฐานสามารถใช้เพื่อกำหนดความหนาแน่นของการหว่านเมล็ดที่ดีที่สุดและรับรองความถูกต้องของข้อมูล ตามคำอธิบายผลิตภัณฑ์ของเครื่องวิเคราะห์ Seahorse XFe24 เซลล์ OCR ในสถานะการเจริญเติบโตปกติควรอยู่ใน ช่วง 50–400 pmol/นาที และช่วง ECAR พื้นฐานปกติควรอยู่ในช่วง 20–120 ไมล์ต่อชั่วโมง/นาที ดังนั้นเมื่อรวมทั้งสองด้านแล้ว คงขนาดเซลล์ไว้ที่ 8×104 /หลุม จะเหมาะสมกว่า (ภาพที่ 4)

3.4.2. Eect ของ TG ต่อปฏิกิริยาออกซิเดทีฟฟอสโฟรีเลชันของเซลล์ HepG2

ls การประเมินการทำงานของไมโตคอนเดรียเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการทำความเข้าใจโรคที่เกี่ยวข้องกับการเผาผลาญพลังงานของเซลล์และการพัฒนายาที่เกี่ยวข้อง และ OCR เป็นหนึ่งในดัชนีการประเมินที่สำคัญที่สุด เพื่อศึกษาผลกระทบของ TG ต่อกระบวนการออกซิเดทีฟฟอสโฟรีเลชันของเซลล์ HepG2 เราใช้เครื่องวิเคราะห์ Seahorse XFe24 เพื่อตรวจหาระดับ OCR ของเซลล์ที่รักษาด้วย TG และวิเคราะห์ดัชนีที่เกี่ยวข้อง เมื่อเพิ่มความเข้มข้นของ TG ระดับ OCR จะค่อยๆ ลดลง (รูปที่ 5A, B) และโดยเฉพาะอย่างยิ่ง หลังจากเพิ่ม FCCP ความแตกต่างของค่า OCR ระหว่างกลุ่มที่ใช้ยาและกลุ่มควบคุมจะมีขนาดใหญ่ขึ้น ในขณะเดียวกัน รูปที่ 5C–F และตารางที่ 1 แสดงว่าการหายใจพื้นฐานลดลงทีละน้อย เมื่อเปรียบเทียบกับ 0µg/ml พบว่าลดลง 39.24 เปอร์เซ็นต์ 41.43 เปอร์เซ็นต์ 47.10 เปอร์เซ็นต์ 78.22 เปอร์เซ็นต์ และ 95.26 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับสำหรับแต่ละกลุ่มการให้ยา อัตราการหายใจสูงสุดลดลงร้อยละ 52.95 ร้อยละ 65.06 ร้อยละ 77.76 ร้อยละ 94.48 และ 98.61 ตามลำดับ การใช้ออกซิเจนแบบไม่ใช้ไมโตคอนเดรียลดลงร้อยละ 37.34 ร้อยละ 37.45 ร้อยละ 47.27 ร้อยละ 76.10 และร้อยละ 79.79 ตามลำดับ การผลิตเอทีพีลดลงร้อยละ 42.49 ร้อยละ 47.91 ร้อยละ 57.83 ร้อยละ 87.28 และร้อยละ 98.16 ตามลำดับ

สาเหตุของการลดลงอาจเป็นเพราะเซลล์ที่ได้รับการรักษาด้วย TG อยู่ในสถานะของการตายของเซลล์และระดับของ ROS เพิ่มขึ้น ซึ่งอาจเพิ่มความเสียหายจากปฏิกิริยาออกซิเดชั่นของเซลล์ ลดการทำงานของ mitochondrial respiratory chain complex และส่งผลต่อความสามารถ ของการสังเคราะห์ ATP ของไมโทคอนเดรีย ผลการวิจัยพบว่า TG สามารถยับยั้งระดับโดยรวมของการหายใจแบบใช้ออกซิเจนของเซลล์ไมโตคอนเดรีย และอัตราการรอดชีวิตของเซลล์หลังการรักษาด้วย TG ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ ซึ่งอาจเกี่ยวข้องโดยตรงกับความผิดปกติของการเผาผลาญพลังงานของไมโตคอนเดรีย อย่างไรก็ตาม จำเป็นต้องมีการศึกษากลไกเชิงลึกเพิ่มเติม

3.4.3. Eect ของ TG ต่อความสามารถในการไกลโคลิติกของ HepG2

กระบวนการไกลโคลิซิสนั้นดำเนินไปในเมทริกซ์ของเซลล์ และกรดแลคติกที่ผลิตได้จะปล่อย H บวกออกสู่ภายนอกเซลล์ ยิ่งไปกว่านั้น เครื่องวิเคราะห์ Seahorse XFe24 ยังใช้ในการวิเคราะห์การทำงานของไกลโคไลติกด้วยการตรวจจับค่า ECAR หลังการรักษา TG และพารามิเตอร์การทดสอบที่เกี่ยวข้องเพื่อกำหนดวิธีการเฉพาะที่ TG ส่งผลต่อกระบวนการไกลโคไลติกของเซลล์ HepG2 เมื่อเวลาผ่านไป ด้วยการเติมกลูโคสและโอลิโกมัยซิน ค่า ECAR จะค่อยๆ เพิ่มขึ้นและมีแนวโน้มลดลงเมื่อเพิ่ม 2- DG (รูปที่ 6A) เมื่อความเข้มข้นของ TG เพิ่มขึ้น ระดับ ECAR โดยรวมจะค่อยๆ ลดลง (รูปที่ 6B) ซึ่งสะท้อนให้เห็นจากการลดลงทีละน้อยของความจุไกลโคไลติกและค่าสำรองไกลโคไลติก (รูปที่ 6D, E; ตารางที่ 2) ระดับที่ไม่ใช่ไกลโคซิเลชันส่วนใหญ่ต่ำกว่ากลุ่มควบคุม แต่ไม่มีการพึ่งพาความเข้มข้น (รูปที่ 6C) เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม ความสามารถในการไกลโคไลติกของกลุ่มบำบัด TG ลดลงร้อยละ 1.12 ร้อยละ 9.29 ร้อยละ 34.46 ร้อยละ 92.15 และร้อยละ 100.00 ตามลำดับ ค่าไกลโคลิติกสำรองลดลงร้อยละ 4.78 ร้อยละ 34.17 ร้อยละ 79.50 ร้อยละ 93.39 และร้อยละ 98.63 ตามลำดับ

ผลการวิจัยพบว่า TG สามารถยับยั้งการเพิ่มจำนวนและการเติบโตของเซลล์ HepG2 โดยลดการทำงานของไกลโคไลติกของ HepG2 และสร้างความเป็นพิษต่อเซลล์ โปรดทราบว่าระดับความเสียหายของการทำงานของไกลโคไลติกที่ปริมาณต่ำนั้นต่ำกว่าระดับการลดลงของพารามิเตอร์ต่างๆ ของเซลล์ออกซิเดทีฟฟอสโฟรีเลชั่น ในขณะที่การทำงานของไกลโคไลติกและเซลล์ออกซิเดทีฟฟอสโฟรีเลชั่นลดลงอย่างมีนัยสำคัญที่ปริมาณสูง ดังนั้นจึงมีข้อเสนอแนะว่า TG ทำลายการทำงานของไมโทคอนเดรียเป็นส่วนใหญ่ในปริมาณต่ำ ขณะที่ในปริมาณสูง ทำลายทั้งการทำงานของไมโทคอนเดรียและไกลโคไลติกในเวลาเดียวกัน เพื่อเร่งระดับการตายของเซลล์และเนื้อร้ายของเซลล์เนื้องอกและยับยั้งการเพิ่มจำนวนเซลล์

3.5. การแสดงออกของโปรตีนในเซลล์ HepG2 หลังการรักษา TG

รูปที่ 7 แสดงให้เห็นว่า หลังการรักษาด้วย TG ที่มีความเข้มข้นต่างกันเป็นเวลา 24 ชั่วโมง ระดับการแสดงออกของโปรตีนของ HepG2 คือ 001. เปลี่ยนแปลงควบคู่กันไป เมื่อความเข้มข้นของ TG เพิ่มขึ้น ระดับการแสดงออกของโปรอะพอพโททิกแฟกเตอร์ Bax และ Caspase-3 เพิ่มขึ้น และการแสดงออกของโปรตีนสัมพัทธ์จะสูงที่สุดเมื่อความเข้มข้นเป็น 31.5µg/ml และ 10.5µg/ml ตามลำดับ นอกจากนี้ เมื่อความเข้มข้นต่ำ (0, 3.5, 10.5 และ 21µg/ml TG) การแสดงออกสัมพัทธ์ของปัจจัยต้านเซลล์มะเร็ง Bcl-2 เพิ่มขึ้น เมื่อความเข้มข้นของ TG คือ 31.5µg/ml และ 42µg/ml แสดงว่ามีแนวโน้มลดลงอย่างมีนัยสำคัญ ดังนั้นเราจึงสรุปได้ว่า TG อาจส่งเสริมการตายของเซลล์ HepG2

4. อภิปรายและสรุปผล

การศึกษาพิสูจน์ว่า Cistanche Deserticola และส่วนประกอบที่มีประสิทธิภาพมีสารต้านอนุมูลอิสระ ต่อต้านความเมื่อยล้า ต่อต้านริ้วรอย ต้านเนื้องอก เนื้องอก และคุณสมบัติในการปรับปรุงหน่วยความจำ และส่งเสริมการสร้างกระดูก (11, 12) ปัจจุบันการรักษามะเร็งตับยังขาดการรักษาที่มีประสิทธิภาพ มักขึ้นอยู่กับการรักษาที่ครอบคลุม เช่น การผ่าตัด การฉายแสง และเคมีบำบัด ยาเคมีบำบัดมีพิษและผลข้างเคียงมาก และง่ายต่อการเกิดการดื้อยา ยาแผนจีนมีความเป็นพิษต่อเนื้องอกและผลข้างเคียงที่มีประสิทธิภาพน้อยกว่า ในขณะเดียวกันก็สามารถเสริมสร้างภูมิคุ้มกันอินทรีย์และป้องกันมะเร็ง(24)

.01. ของเซลล์ HepG2 ในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยาด้วยการเพิ่มขึ้นของความเข้มข้นของมะเร็ง ตอบสนองความต้องการการสังเคราะห์ทางชีวภาพและรีดอกซ์ของเซลล์เนื้องอกโดยการเปลี่ยนเมแทบอลิซึม การตั้งโปรแกรมเซลล์เนื้องอกใหม่ การได้มาซึ่งสารอาหาร ). ดังนั้น การจำกัดการเพิ่มจำนวนของเซลล์เนื้องอกด้วยวิธีข้างต้นจึงเป็นจุดเน้นของการทดลองที่ตามมาของเรา พบว่าความเข้มข้นของ TG ในระดับหนึ่งสามารถยับยั้งการเจริญเติบโตและการแพร่กระจายอย่างมีนัยสำคัญ 0.01 ของเซลล์ HepG2 ในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยาด้วยความเข้มข้นที่เพิ่มขึ้น

ไอออน. ภายใต้สถานการณ์ปกติ ระดับ ROS ที่เพิ่มขึ้นเล็กน้อยสามารถส่งเสริมการเพิ่มจำนวนเซลล์ปกติได้ อย่างไรก็ตาม การเพิ่มระดับ ROS อย่างมีนัยสำคัญในเซลล์มะเร็งสามารถกระตุ้นให้เซลล์ตายได้ (26) ปริมาณ ROS ที่สูงอาจทำให้เกิดการยับยั้งการเติบโตของเซลล์ การบาดเจ็บ การตายของเซลล์ และแม้กระทั่งความตาย ซึ่งสอดคล้องกับผลยับยั้งของ TG ต่อการเพิ่มจำนวนของเซลล์ HepG2 นอกจากนี้ยังมีหลักฐานว่าการผลิต ROS มักจะยับยั้งการแพร่กระจายของเซลล์มะเร็ง (27) การอยู่รอดหรือการตายของเซลล์ส่วนใหญ่ขึ้นอยู่กับสถานะการทำงานของไมโทคอนเดรีย (28) ROS เป็นผลิตภัณฑ์ที่หลีกเลี่ยงไม่ได้ในกระบวนการเมแทบอลิซึมของเซลล์เนื่องจากทำหน้าที่ในไมโตคอนเดรีย และเป็นหนึ่งในวิธีหลักในการทำให้ไมโตคอนเดรียเสียหาย หน้าที่หลักของไมโตคอนเดรียในเซลล์คือการให้พลังงานสำหรับเมแทบอลิซึมของเซลล์และการสังเคราะห์ทางชีวภาพโดยการผลิตATP ซึ่งมีความสำคัญมากต่อการอยู่รอดของเซลล์ปกติและเซลล์เนื้องอก (29) หากระดับ ROS เพิ่มขึ้นในร่างกายและไม่ถูกย่อยสลายโดยเซลล์ ROS จะส่งผลต่อการทำงานของ mitochondrial respiratory chain complex (30) และส่งผลต่อ oxidative phosphorylation ของ mitochondria และลดการสังเคราะห์ ATP ในเซลล์ (31) ส่งผลให้ ในความไม่สมดุลของระบบรีดอกซ์ภายในเซลล์และการยับยั้งการเพิ่มจำนวนของเซลล์เนื้องอก (32) อันที่จริง สารเคมีป้องกันสามารถเพิ่มระดับของ ROS ให้ถึงเกณฑ์ความเป็นพิษและส่งเสริมการตายของเซลล์มะเร็งโดยมีความเป็นพิษน้อยที่สุดต่อเซลล์ปกติ (33) ผลลัพธ์ยังยืนยันด้วยว่าการเพิ่มเนื้อหาสัมพัทธ์ของ ROS สามารถลดอัตราการรอดชีวิตของเซลล์ HepG2 ได้อย่างมาก

ในการปรับตัวให้เข้ากับสภาพแวดล้อมภายนอกที่เปลี่ยนแปลงไป สิ่งมีชีวิตจะต้องปรับกิจกรรมทางชีวภาพของเซลล์ได้ตลอดเวลา ตามลําดับ การควบคุมกิจกรรมทางชีวภาพของเซลล์โดยสิ่งมีชีวิตนั้นขึ้นอยู่กับระเบียบของเครือข่ายเมตาบอลิซึมของเซลล์ ดังนั้น สถานะพลังงานของเซลล์จึงถูกควบคุมและคงไว้เสมอในช่วงสมดุลไดนามิกภายใต้สภาวะทางสรีรวิทยาปกติ ซึ่งเป็นสภาวะที่คงที่ของการเผาผลาญพลังงานของเซลล์ (34) นอกจากนี้ไมโตคอนเดรียยังถือเป็นหนึ่งในเป้าหมายหลักของการบาดเจ็บของเซลล์ตับที่เกิดจากยา (35) ในขณะเดียวกัน นักวิจัยเชื่อว่าความต้องการพลังงานของเซลล์สามารถได้รับผ่านกระบวนการไกลโคไลซิสและออกซิเดทีฟฟอสโฟรีเลชัน (OXPHOS) เมื่อ OXPHOS ไม่สามารถใช้งานได้อีกต่อไป ตัวอย่างเช่น เนื่องจากภาวะขาดออกซิเจนหรือความเสียหายของไมโตคอนเดรีย เซลล์เหล่านี้สามารถเปลี่ยนไปใช้ไกลโคไลซิสเพื่อผลิต ATP ที่เพียงพอสำหรับการอยู่รอดต่อไป (36)

Otto Warburg (37, 38) สังเกตว่า เมื่อมีออกซิเจน เซลล์เนื้องอกจะแสดงลักษณะที่ผิดปกติในการดูดซับกลูโคสและหมักเป็นกรดแลคติค ลักษณะเฉพาะของไกลโคไลซิสแบบใช้ออกซิเจนนี้บ่งชี้ว่าเมื่อมีออกซิเจนเพียงพอ เซลล์เนื้องอกต้องการใช้ไกลโคไลซิสสำหรับการเผาผลาญกลูโคสแทนไมโทคอนเดรียออกซิเดทีฟฟอสโฟรีเลชั่นเพื่อผลิต ATP มากขึ้น สิ่งนี้จะช่วยให้เซลล์เนื้องอกผลิตพลังงานได้อย่างรวดเร็วเพียงพอสำหรับการเติบโตอย่างรวดเร็ว ปล่อยกรดแลคติคมากขึ้น รักษาสภาพแวดล้อมที่เป็นกรดขนาดเล็ก หลบหนีการเฝ้าระวังทางภูมิคุ้มกัน และแพร่กระจายได้ง่าย (39, 40) ดังนั้น Warburg จึงเสนอว่าความบกพร่องของระบบทางเดินหายใจแบบยลเป็นพื้นฐานที่เป็นไปได้สำหรับ glycolysis แบบใช้ออกซิเจนและมะเร็ง (37, 38) ในการศึกษานี้ ความเข้มข้นทั้งหมดของ TG ยับยั้งระดับการหายใจแบบใช้ออกซิเจนโดยรวมของไมโทคอนเดรียอย่างมีนัยสำคัญ และจำกัดการทำงานของไกลโคไลติก ซึ่งอาจเกี่ยวข้องโดยตรงกับความผิดปกติของการเผาผลาญพลังงานของไมโตคอนเดรีย อย่างไรก็ตาม จำเป็นต้องมีการศึกษากลไกเชิงลึกเพิ่มเติม

Bax เป็นตัวควบคุมหลักของกิจกรรม Bcl-2 และระดับการแสดงออกของมันเกี่ยวข้องโดยตรงกับการควบคุมการตายของเซลล์ โดยการแสดงออกของ Bax ที่เพิ่มขึ้นบ่งชี้ถึงการส่งเสริมการตายของเซลล์ด้วยยา และ Bcl ที่เพิ่มขึ้น-2 บ่งชี้ถึงการยับยั้งการตายของเซลล์ (41 ). นอกจากนี้โปรตีเอสของ caspase มีอิทธิพลอย่างมากต่อการตายของเซลล์และการเปิดใช้งานนั้นแสดงถึงความก้าวหน้าของเซลล์ในระยะ apoptosis ที่ไม่สามารถย้อนกลับได้ (42) ดังนั้น ในเซลล์ HepG2 ที่ได้รับการรักษาด้วย TG ขอบเขตของการกระตุ้น caspase-3 จึงเพิ่มขึ้น ซึ่งบ่งชี้ว่า TG อาจทำให้เกิดการตายของเซลล์ที่ไม่สามารถย้อนกลับได้และป้องกันการเพิ่มจำนวนเซลล์

โดยสรุป การศึกษานี้มีการอ้างอิงที่สำคัญถึงการวิจัยเชิงลึกเกี่ยวกับกลไกการต่อต้านเนื้องอกของ Cistanche Deserticola มีศักยภาพในการเป็นวัตถุดิบของยาสำหรับการรักษามะเร็งตับและป้องกันเนื้องอกได้อย่างมีประสิทธิภาพด้วยการบริโภคในอาหารประจำวัน

คำชี้แจงความพร้อมใช้งานของข้อมูล

ชุดข้อมูลที่นำเสนอในการศึกษานี้สามารถพบได้ในที่เก็บออนไลน์ ชื่อของที่เก็บ/ที่เก็บและหมายเลขภาคยานุวัติสามารถพบได้ในบทความ/เอกสารเพิ่มเติม

ผลงานผู้เขียน

DF: การสืบสวน การเขียนร่างต้นฉบับ และการวิเคราะห์โครงเรื่อง S-qZ และ Y-xZ: การวิเคราะห์อย่างเป็นทางการและการแสดงภาพ Y-jJ: การสืบสวน Q-dS, WS และ Q-qC: การสนับสนุนทรัพยากรและวัสดุ W-jY: การเขียนรีวิวและการแก้ไข การดูแลโครงการ และการจัดหาเงินทุน JW: การเขียนรีวิว การแก้ไข และการตรวจสอบความถูกต้อง ผู้เขียนทั้งหมดอนุมัติฉบับสุดท้ายของต้นฉบับ

เงินทุน

งานนี้ได้รับการสนับสนุนโดย National Natural Science Foundation of China (32172244) และโครงการวิจัยทางวิชาการของ Beijing Union University (JB202101)

ขัดผลประโยชน์

Y-jJ ได้รับการว่าจ้างจาก Inner Mongolia Sankou Biotechnology Co., Ltd.

ผู้เขียนที่เหลือประกาศว่าการวิจัยดำเนินการโดยไม่มีความสัมพันธ์ทางการค้าหรือการเงินที่อาจตีความได้ว่าเป็นผลประโยชน์ทับซ้อนที่อาจเกิดขึ้น

หมายเหตุของสำนักพิมพ์

การอ้างสิทธิ์ทั้งหมดที่แสดงในบทความนี้เป็นของผู้เขียนแต่เพียงผู้เดียว และไม่จำเป็นต้องเป็นตัวแทนขององค์กรในเครือ หรือของผู้พิมพ์ บรรณาธิการ และผู้วิจารณ์

ผลิตภัณฑ์ใดๆ ที่อาจได้รับการประเมินในบทความนี้ หรือการอ้างสิทธิ์ที่ผู้ผลิตอาจทำขึ้น จะไม่รับประกันหรือรับรองโดยผู้จัดพิมพ์

อ้างอิง

1. Feng D, He Y, Jiang YJ, Wang YJ, Yan WJ ความก้าวหน้าของงานวิจัยเกี่ยวกับการต่อต้านความชราของ Cistanches เจ ฟู้ด เซฟ ควอลิตี้ (2021) 12:4429–37. ดอย: 10.19812/j.cnki.jfsq11- 5956/ts.2021.11.018

2. Feng D, Duan H, Lv YN, Jiang YJ, Wang YJ, Yan WJ การประยุกต์ใช้ Cistanche Deserticola Ma ในอาหารเพื่อสุขภาพในประเทศจีน สาขาวิชาวิทยาศาสตร์การอาหาร. (2021) 46:76– 81. ดอย: 10.13684/j.cnki.spkj.2021.12.012

3. หม่า GZ, Chen JR, Wei TT, Wang J, Chen WS ยับยั้งบทบาทของ FOXA2 ในการย้ายเซลล์มะเร็งตับและการบุกรุกโดยการยับยั้ง microRNA103a3p และการเปิดใช้งานแกน GREM2/LATS2/YAP ไซโตเทคโนโลยี. (2021) 73:523– 37. ดอย: 10.1007/วินาที10616-021-00475-2

4. Zheng RS, Zhang SW, Zeng HM, Wang SM, Sun KX, Chen R และอื่นๆ อุบัติการณ์และการเสียชีวิตด้วยโรคมะเร็งในประเทศจีน พ.ศ. 2559 ศูนย์มะเร็ง J Natl (2022) 2:1– 9. ดอย: 10.1016/j.jncc.2022.02.002

5. Sun Y, Song YY, Zhang C, Lu YZ, Zheng GH, Tian XX และอื่นๆ ผลกระทบและกลไกของเซลาสทรอลต่อการเพิ่มจำนวนเซลล์มะเร็งตับชนิด HepG2 โดยการกระตุ้นทางเดินสัญญาณ AMPK เภสัชกรจีน. (2564). 24:1961– 6. ดอย: 10.19962/j.cnki.issn1008-049X.2021.11.001

6. Ye Y, Song Y, Zhuang J, Wang G, Ni J, Xia W. ฤทธิ์ต้านมะเร็งของ echinacoside ในรูปแบบเมาส์เซลล์มะเร็งตับและเซลล์ HepG2 เจ เซลล์ ฟิสิออล (2019) 234:1880– 8. ดอย: 10.1002/jcp.27063

7. Li W, Zhou J, Zhang Y, Zhang J, Li X, Yan Q และอื่นๆ Echinacoside ออกฤทธิ์ต้านเนื้องอกผ่านแกน miR-503-3p/TGF- 1/Smad ในมะเร็งตับ เซลล์มะเร็งภายใน (2564) 21:304. ดอย: 10.1186/วินาที12935-021-01890-3

8. Zhang Y, Zhu BL, Yang XJ, Hui J, Ma Q, Yu XH ความก้าวหน้าของงานวิจัยเกี่ยวกับการยับยั้งเนื้องอกมะเร็งของเวอร์บาสโคไซด์ เรส แพรคท์ ชิน เมด (2019) 33:78– 82. ดอย: 10.13728/ญ.1673-6427.2019.06.018

9. Alipieva K, Korkina L, Orhan IE, Georgiev MI Verbascoside—การทบทวนการเกิดขึ้น การสังเคราะห์ (ชีวภาพ) และความสำคัญทางเภสัชวิทยา เทคโนโลยีชีวภาพ Adv. (2014) 32:1065–76. ดอย: 10.1016/j.biotechadv.2014.07.001

10. Peerzada KJ, Faridi AH, Sharma L, Bhardwaj SC, Satti NK, Shashi B และอื่นๆ แอกทีโอไซด์เป็นสื่อกลางในการป้องกันการเกิดมะเร็งตับด้วยเคมีทดลองผ่านความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันและอะพอพโทซิสที่ควบคุมโดย STAT-3 สารพิษจากสิ่งแวดล้อม (2559) 31:782– 98. ดอย: 10.1002/tox.22089

11. Qi XX, You SP, He ZX, Zhao J, Liu T. ผลของ Cistanche Deserticola phenylethanoid glycoside ต่อการเพิ่มจำนวนและการตายของเซลล์ HepG2 ในหลอดทดลอง J มหาวิทยาลัยแพทย์ซินเจียง (2021) 44:1041–7.

12. เซีย YT ผลของ Echinacoside ต่อ 786-O Cells Apoptosis และกลไกอุปนัยในหลอดทดลอง นิวยอร์ก: วิทยาลัยครู Baotou (2020).

13. Han YM, Jin WM, Zeng H, Wang C, Zhang H. ผลของ echinacoside ต่อการเพิ่มจำนวน การบุกรุก และการแพร่กระจายของเซลล์มะเร็งลำไส้ใหญ่ SW480 ในหลอดทดลองและในร่างกาย J กว่างโจว ม. ตราด Chin Med. (2020) 37:1542– 9. ดอย: 10.13359/j.cnki.gzxbtcm.2020.08.024
14. Hou XT, Liu T, Su DQ ฤทธิ์ต้านเนื้องอกของฟีนิลเอทานอยด์ไกลโคไซด์จาก Cistanche Deserticola ต่อหนูที่มีเนื้องอก H22 เจ ท็อกซิคอล. (2021) 35:231– 40. ดอย: 10.16421/j.cnki.1002-3127.2021.03.010

15. Hou XT, Su DQ, Qi XX, Liu T. ผลของ phenylethanoid glycosides จาก Cistanche Deserticola ต่อ autophagy ของเซลล์เนื้องอกในหนูที่มีเนื้องอก H22 เจ ท็อกซิคอล. (2022) 36:137–41. ดอย: 10.1155/2022/3993445

16. Hu Q, You SP, Liu T, Wang B, Liu X, Jiang YD การตรวจสอบฤทธิ์ต้านมะเร็งตับของ Cistanche สารก่อมะเร็ง Teratog Mutag. (2018) 30:194–9.

17. Kamalian L, Douglas O, Jolly CE, Snoeys J, Simic D, Monshouwer M และอื่น ๆ ประโยชน์ของเซลล์ HepaRG สำหรับการตรวจสอบพลังงานชีวภาพและการตรวจหาความเป็นพิษต่อไมโทคอนเดรียที่เกิดจากยา สารพิษในหลอดทดลอง (2018) 53:136–47. ดอย: 10.1016/j.tiv.2018. 08.001

18. Wang FJ, Li RY, Tu PF, Chen JP, Zeng KW, Jiang Y. ไกลโคไซด์ทั้งหมดของ Cistanche Deserticola ส่งเสริมการฟื้นฟูการทำงานของระบบประสาทโดยกระตุ้นการสร้างเซลล์ประสาทใหม่ผ่าน Nrf-2/Keap-1 pathway ใน MCAO /R หนู (2020) 11:236. ดอย: 10.3389/fphar.2020.00236

19. Wang J, Zhang XX, Ni ZJ, Elam E. Thakur Kiran, Li KX และคณะ กลไกต้านมะเร็งของ Licochalcone A บนเซลล์ตับของมนุษย์ HepG2 โดยอาศัย miRNA omics Food Sci อืม. (2023) 12:1136–48. ดอย: 10.1016/j.fshw.2022.10.039

20. Feng D, Chang X, Jiang YJ, Guo Y, Zhao J, Zhao JY และคณะ การเพิ่มประสิทธิภาพของเทคโนโลยีการเตรียมการสกัดด้วยน้ำของ Cistanche Deserticola โดยวิธีพื้นผิวตอบสนองและการวิจัยกิจกรรม Sci Technol Food Ind. (2023) 5:1– 16. doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2022050033

21. Ji XJ, Wang J, Ma AJ, Feng D, He Y, Yan WJ ผลของโปรตีนดักแด้ไหมต่อการตายของเซลล์และการเผาผลาญพลังงานในเซลล์ DLD ของมะเร็งลำไส้ใหญ่ของมนุษย์-1 Food Sci อืม. (2565). 2022:1171–6. ดอย: 10.1016/j.fshw.2022.04.011

22 Zhang ZG, Wang ML, Xing S, Zhang C. สารฟลาโวนอยด์ของ Rosa rugosa Thunbin ยับยั้งการแพร่กระจายของเนื้องอกและการแพร่กระจายในเซลล์มะเร็งตับของมนุษย์ HepG2 Food Sci Hum Well (2022) 11:374–82. ดอย: 10.1016/j.fshw.2021.11.016

23. Liu X, Jiang N, Xu X, Liu C, Liu Z, Zhang Y และอื่นๆ การตรวจหาสารต้านมะเร็งตับโดยวิธีความสัมพันธ์ของสเปกตรัมเอฟเฟ็กต์ การน็อคเอาต์ของส่วนประกอบ และ UPLC-MS2 ใน Scheflera heptaphylla (L) จากอันตรายและกลไกของมัน ฟร้อนท์ฟาร์มาคอล. (2020) 11:1342. ดอย: 10.3389/fphar.2020.01342

24. Liu XQ, Wang SY, Cui LL, Zhou HH, Liu YH, Meng LJ และอื่นๆ ดอกไม้: ทรัพยากรอาหารและยาอันล้ำค่า Food Sci อืม. (2023) 12:1020– 52. doi: 10.1016/j.fshw.2022.10.022

25 Yin XZ, Liu ZJ, Guo Y. การประเมินผลกระทบของ tetrahydropalmatine ต่อเซลล์มะเร็งเซลล์ตับของมนุษย์โดยการวิเคราะห์การเผาผลาญพลังงานของเซลล์ ชิน เจ อิมมูนอล (2021) 37:426–30.

26. Liu GY, Sun YZ, Zhou N, Du XM, Yang J, Guo SJ. เคอร์คูมิน 3,3'-OH ทำให้เกิดการตายแบบอะพอพโทซิสในเซลล์ HepG2 ผ่านทาง ROS-mediated เออร์ เจ เมด เคม. (2559) 112:157–63. ดอย: 10.1016/j.ejmech.2016.02.019

27. Pal LC, Prateeksha, Singh BN, Pande V, Rao CV. เศษส่วนที่อุดมด้วยฟีนอลของ Pterospermum lanceifolium Roxb. ย้อนกลับของมะเร็งเซลล์ตับในหนู HCC ที่เกิดจาก NDEA ได้อย่างมีประสิทธิภาพ มะเร็งโภชนาการ (2022) 74:1106–21. ดอย: 10.1080/01635581.2021.1922716

28. Bras M, Queenan B, Susin SA โปรแกรมการตายของเซลล์ผ่านไมโทคอนเดรีย: โหมดต่างๆ ของการตาย ชีวเคมี (มอช). (2548). 70:231–9. ดอย: 10.1007/วินาที10541-005-0105-4

29 Galber C, Acosta MJ, Minervini G, Giorgio V. บทบาทของ mitochondrial ATP synthase ในมะเร็ง ไบโอล เคม. (2020) 401:1199–214. ดอย: 10.1515/hsz-2020-0157

30. Piantadosi CA, Zhang J. การสร้างไมโทคอนเดรียของออกซิเจนชนิดปฏิกิริยาหลังจากสมองขาดเลือดในหนู จังหวะ. (2539) 27:327–31. ดอย: 10.1161/01.STR.27.2.327

31. เอเวอรี่ เอสวี เป้าหมายระดับโมเลกุลของความเครียดออกซิเดชัน Biochem J. (2011) 434:201– 10. ดอย: 10.1042/BJ20101695

32. Cui Z, Li S, Wang HJ, Ma J, Qin TT, Shi H และอื่น ๆ ผลของไดไฮโดรอาร์เทมิซินินต่อความเสียหายจากปฏิกิริยาออกซิเดชันและการเผาผลาญพลังงานของเซลล์ HepG2 และผลเสริมฤทธิ์กันกับ Sorafenib Chin J Exp Trad Med สูตร (2021) 27:24–32. ดอย: 10.13422/j.cnki.syfjx.20211202

33. Hail N Jr, Cortes M, Drake EN, Spallholz JE. การป้องกันมะเร็งด้วยเคมี: มุมมองที่รุนแรง ฟรี Radic Biol Med (2551) 45:97–110. ดอย: 10.1016/j.freeradbiomed.2008.04.004

34. Jiang B, Zhao WT, Ouyang C, Wang HH, Zhang FQ, Zhao GH และอื่นๆ ระเบียบเครือข่ายเมแทบอลิซึมของเซลล์ ม.เจเซียะเหมิน(ม.ธรรมศาสตร์). (2022) 61:346–64.

35. Dragovic S, Vermeulen NP, Gerets HH, Hewitt PG, Ingelman-Sundberg M, Park BK และอื่นๆ การเลือกสารประกอบการฝึกอบรมตามหลักฐานเพื่อใช้ในการทำนายแบบบูรณาการตามกลไกของการบาดเจ็บของตับที่เกิดจากยาในมนุษย์ อาร์คท็อกซิคอล. (2559) 90:2979–3003. ดอย: 10.1007/วินาที00204-016-1845-1

36 Diaz-Ruiz R, Rigoulet M, Devin A. ผลกระทบของ Warburg และ Crabtree: ต่อต้นกำเนิดของการเผาผลาญพลังงานของเซลล์มะเร็งและการกดน้ำตาลกลูโคสของยีสต์ Biochim Biophys แอคต้า (2554) 1807:568–76. ดอย: 10.1016/j.bbabio.2010.08.010

37. Warburg O. เกี่ยวกับความบกพร่องทางการหายใจในเซลล์มะเร็ง ศาสตร์. (2499) 124:269– 70. doi: 10.1126/science.124.3215.269

38. Warburg O. เกี่ยวกับต้นกำเนิดของเซลล์มะเร็ง ศาสตร์. (2499) 123:309– 14. ดอย: 10.1126/science.123.3191.309

39. Zhang X, Fryknäs M, Hernlund E, Fayad W, De Milito A, Olofsson MH และอื่นๆ การเหนี่ยวนำให้เกิดความผิดปกติของไมโทคอนเดรียเป็นกลยุทธ์ในการกำหนดเป้าหมายเซลล์มะเร็งในสภาพแวดล้อมจุลภาคที่ถูกบุกรุกทางเมแทบอลิซึม นัทคอมมูน. (2557) 5:3295. ดอย: 10.1038/คอม 4295

40. Rios Garcia M, Steinbauer B, Srivastava K, Singhal M, Mattijssen F, Maida A และอื่น ๆ Acetyl-CoA carboxylase 1-ขึ้นอยู่กับโปรตีน acetylation ควบคุมการแพร่กระจายของมะเร็งเต้านมและการกลับเป็นซ้ำ เซลล์ Metab (2017) 26:842–55.e5. ดอย: 10.1016/j.cmet.2017.09.018

41. Yang E, Zha J, Jocker J, Boise LH, Thompson CB, Korsmeyer SJ. Bad ผู้เป็น heterodimeric papartneror หรือ Bcl-XL และ Bcl-2 แทนที่ Bax และส่งเสริมการตายของเซลล์ เซลล์ (2538) 80:285–91. ดอย: 10.1016/0092-8674(95)90411-5

42. เหลียง เค, เฉา BZ. ความคืบหน้าเกี่ยวกับการตายของเซลล์ของการควบคุมไมโตคอนเดรีย Biomed Eng Clin Med. (2557) 18:501–5. ดอย: 10.13339/j.cnki. sc.2014.05.049

For more information:1950477648nn@gmail.com