ผลของ Shenkang ต่อการเกิดพังผืดของไตและการกระตุ้นการทำงานของไฟโบรบลาสต์ของไตผ่านเส้นทาง JAK2/STAT3
Feb 27, 2022
พื้นหลัง
โรคไตเรื้อรัง (CKD) เกิดจากโรคต่างๆ ที่ทำลายไตอย่างถาวรและก่อให้เกิดโรคแทรกซ้อนต่างๆ ในผู้ป่วย [1] สำหรับผู้ป่วยที่ได้รับการฟอกไต คุณภาพชีวิตได้รับผลกระทบอย่างมาก และค่ารักษาพยาบาลก็สูงมาก [2] กระบวนการทางพยาธิวิทยาเบื้องต้นของอาการบาดเจ็บที่ไตนำไปสู่ความปกติไตการทำลายเนื้อเยื่อและการสร้างเนื้อเยื่อแผลเป็นแบบก้าวหน้า ซึ่งท้ายที่สุดจะนำไปสู่การเกิดพังผืด ไตพังผืดรวมถึงพังผืดคั่นระหว่างหน้าในท่อและ glomerulosclerosis [3] ซึ่งนำไปสู่การทำลายrเนื้อเยื่ออวัยวะเพศ และสูญเสียการทำงานไตการเกิดพังผืดของ tubulointerstitial เป็นวิถีทั่วไปสำหรับการพัฒนาที่ก้าวหน้าของ CKD เกือบทั้งหมดและเป็นพื้นฐานทางพยาธิวิทยาหลักสำหรับระยะสุดท้ายโรคไตซึ่งมีลักษณะเฉพาะโดยการฝ่อของเซลล์เยื่อบุผิวท่อ การแทรกซึมของเซลล์อักเสบ การกระตุ้นอย่างผิดปกติและการเจริญเติบโตของไตไฟโบรบลาสต์และการสะสมเมทริกซ์นอกเซลล์มากเกินไป (ECM) [4, 5] เซลล์เอฟเฟกต์ - แอกตินของกล้ามเนื้อเรียบ ( -SMA) - myofibroblasts เชิงบวก สังเคราะห์และหลั่ง ECM การกระตุ้นไฟโบรบลาสต์คั่นระหว่างหน้าใน myofibroblasts สามารถช่วยซ่อมแซมเนื้อเยื่อที่เสียหายได้ อย่างไรก็ตาม เมื่อกระบวนการซ่อมแซมนี้ผิดปกติและมี ECM ที่มากเกินไปจะถูกหลั่งออกมา ความเสียหายของไตกลับไม่สามารถย้อนกลับได้ ดังนั้น เส้นทางการส่งสัญญาณที่เป็นสื่อกลางในการกระตุ้นมัยโอไฟโบรบลาสต์อาจเป็นเป้าหมายในการบรรเทากระบวนการของไตพังผืด
CISTANCHE จะปรับปรุงโรคไต/โรคไต
ทรานสดิวเซอร์ Janus kinase/สัญญาณและตัวกระตุ้นของการถอดรหัส (JAK/STAT) วิถีเป็นน้ำตกสัญญาณ pleiotropic สำหรับปัจจัยการเจริญเติบโตและไซโตไคน์หลายตัว [6] ที่ทำหน้าที่เป็นสื่อกลางในการทำงานของเซลล์ที่หลากหลาย รวมถึงการอยู่รอดของเซลล์และการเพิ่มจำนวน [7] STAT3 ถูกกระตุ้นโดยไทโรซีน (Tyr) ฟอสโฟรีเลชั่นที่ Tyr705 ผ่าน Janus kinase เพื่อตอบสนองต่อปัจจัยการเจริญเติบโตและไซโตไคน์ที่หลากหลาย รวมถึงปัจจัยการเจริญเติบโตที่เปลี่ยนแปลง (TGF-) [8] Phosphorylated STAT3 ก่อตัวเป็นไดเมอร์ ซึ่งจากนั้นจะถูกถ่ายโอนไปยังนิวเคลียส โดยที่พวกมันจับกับลำดับดีเอ็นเอโดยตรงและควบคุมการแสดงออกของยีนเป้าหมาย [9] การกระตุ้นของ STAT3 และ JAK2 เพิ่มขึ้นในไฟโบรบลาสต์คั่นระหว่างหน้าที่เกี่ยวกับไฟโบรบิกที่ไตซึ่งเหนี่ยวนำโดยการอุดกั้นท่อไตข้างเดียว (UUO) [10, 11] การเพิ่มขึ้นของฟอสโฟรีเลชัน STAT3 ยังพบได้ในเซลล์ TGF- -ที่ได้รับการบำบัด NRK-49F [12]
การรักษาที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในปัจจุบันสำหรับ CKD มักจะมาพร้อมกับผลที่ไม่น่าพอใจ [13] และผลข้างเคียงทั่วไป ดังนั้นจึงมีความสำคัญอย่างยิ่งที่จะต้องตรวจสอบและระบุมาตรการการรักษาที่มีประสิทธิภาพเพื่อป้องกันและควบคุมการเกิดและการพัฒนาของ CKD เพื่อปรับปรุงการพยากรณ์โรคของผู้ป่วย Shenkang (SK) เป็นสูตรสมุนไพรที่ใช้กันทั่วไปที่มีรูบาร์บ (Rheum palmatum L. หรือ R. tanguticum Maxim. ex Balf.), เสจแดง (Salvia miltiorrhiza Bunge), ดอกคำฝอย (Carthamus tinctorius L.) และตาตุ่ม (Astragalus mongholicus) บันจี้จัมพ์). ตั้งแต่ปี 1990 เป็นต้นมา SK ถูกใช้ในจีนเพื่อรักษาโรค CKD และโรคที่เกี่ยวข้อง เช่น โรคไตจากเบาหวาน (DN) เรื้อรังภาวะไตวาย, glomerulonephritis, โรคไตอักเสบเรื้อรัง และไตความไม่เพียงพอ ด้วยผลการรักษาที่ชัดเจนและผลข้างเคียงเพียงเล็กน้อย SK อาจชะลอการลุกลามของไตความผิดปกติใน CKD ในการทดลองทางคลินิก 2,200 คน ประสิทธิภาพของ SK ในการป้องกันอาการเรื้อรังไตความล้มเหลวและอาการที่เกี่ยวข้องกับ CKD หลังการรักษาด้วยยาจีนโบราณเท่ากับ 73.05 และ 98.00 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ นอกจากนี้ อัตราการกวาดล้างของครีเอตินีนและระดับครีเอตินินในเลือด (SCr) ในเลือดยังคงคงที่ ซึ่งแสดงให้เห็นว่า SK มีประสิทธิภาพดีและปลอดภัยสำหรับการรักษาภาวะไตวายเรื้อรัง [14] ได้รับการตรวจสอบแล้วว่า SK สามารถบรรเทา CKD และไตพังผืดโดยบรรเทาการเกิดพังผืด การอักเสบ [15] และการตายของเซลล์ [16] อย่างไรก็ตาม การศึกษาที่มีอยู่ส่วนใหญ่ในเรื่องนี้ยังไม่ครอบคลุมเพียงพอและเน้นที่ TGF- และเส้นทางที่เกี่ยวข้องเป็นหลัก แบบจำลอง UUO ได้รับการยอมรับว่าเป็นแบบจำลองการทดลองสำหรับการตรวจสอบการเกิดพังผืดของไต ในการศึกษานี้ เราศึกษาผลของ SK ต่อการกระตุ้นเซลล์ไฟโบรบลาสต์ NRK-49F และการเกิดพังผืดของไตในหนู UUO เราแสดงให้เห็นเพิ่มเติมว่าผลการรักษาเหล่านี้ของ SK อาจบรรลุได้โดยการกำหนดเป้าหมายเส้นทาง JAK2/STAT3 ในเซลล์ NRK-49F ที่ได้รับการคัดเลือกและแบบจำลองเมาส์ UUO
คำสำคัญ:Shenkang, โรคไตเรื้อรัง, การเกิดพังผืดของไต, UUO, การกระตุ้นไฟโบรบลาสต์ของไต, ทางเดิน JAK2/STAT3
วิธีการ
สารเคมีและรีเอเจนต์ SK ซื้อมาจาก Shijishenkang Pharmaceutical Company, Ltd. (ซีอาน ประเทศจีน) ยาเม็ดโพแทสเซียม Losartan ถูกซื้อจาก Merck Sharp & Dohme Pharmaceutical Company, Ltd. (หางโจว ประเทศจีน)
การเพาะเลี้ยงเซลล์
สายเซลล์ไฟโบรบลาสต์ไตของหนูแรท (NRK-49F) ได้มาจากคอลเลกชั่นเซลล์ประเภทอเมริกัน (ATCC,Manassas, VA, USA) NRK-49เซลล์ F ถูกเพาะเลี้ยงในตัวกลางที่สมบูรณ์ เช่น Eagle'smedium ดัดแปลงของ Dulbecco (Invitrogen, CA, USA) ที่มีซีรัมวัวในครรภ์ 5 เปอร์เซ็นต์ เพนิซิลลิน 1 เปอร์เซ็นต์ และสเตรปโตมัยซินในบรรยากาศ 5 เปอร์เซ็นต์ CO 2 และ 95 เปอร์เซ็นต์อากาศที่ 37 องศา จากนั้น เซลล์ถูกบำบัดด้วยหรือไม่มี TGF- 1 (10ng/mL) (Novoprotein, Shanghai, China), angiotensin receptor blocker (ARB) (1 มก./มล.) และความเข้มข้นของเกรเดียนต์ของ SK หลังจากการยึดติด และ การประเมินความมีชีวิตของเซลล์
การวิเคราะห์ความมีชีวิตของเซลล์
ความอยู่รอดของเซลล์ NRK-49F ถูกกำหนดหาโดยใช้ชุดตรวจนับเซลล์-8 (โดจินโด คิวชู ประเทศญี่ปุ่น) ตามคำแนะนำของชุดอุปกรณ์ เซลล์ NRK-49F ถูกชุบที่ความหนาแน่น 5 ×10 4 เซลล์ต่อหลุมในจาน 96-หลุม มีการทำซ้ำ 5 ครั้งสำหรับการรักษาแต่ละครั้ง หลังจากการเพาะเลี้ยง 24 ชั่วโมงหรือ 48 ชั่วโมง ตัวกลางในแต่ละหลุมถูกแทนที่ด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อที่ปราศจากซีรัม 100 ไมโครลิตรที่มี CCK-8 (10:1) และเซลล์ถูกบ่มในตู้ฟักเป็นเวลาอีก 2 ชั่วโมง วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ความยาวคลื่น 450 นาโนเมตร ผลของการบำบัดคำนวณเป็นเปอร์เซ็นต์ของเซลล์ที่มีชีวิตเทียบกับเซลล์ควบคุมที่มีชีวิตที่บำบัดด้วยกระสายยาเท่านั้น
สัตว์
ขั้นตอนการทดลองที่ใช้ในการศึกษานี้ได้รับการอนุมัติโดยคณะกรรมการการดูแลสัตว์และจริยธรรมของมหาวิทยาลัยการแพทย์แผนจีนแห่งมหาวิทยาลัยปักกิ่ง (หมายเลข BUCM{{{{30}}}},018,{ {39}}60,419-2023) และสอดคล้องกับหลักการใช้และการดูแลสัตว์ทดลองที่เป็นที่ยอมรับในระดับสากล ซื้อหนู C57BL/6 เพศผู้อายุ 36 8-สัปดาห์จาก Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd. (SYXK (Jing), 2017–0{ {51}}33). หนูถูกวางในห้องปฏิบัติการพิเศษของสัตว์ที่ปราศจากเชื้อโรคในห้องปรับอากาศ (แสง: 12-ชม. รอบแสง/ความมืด; อุณหภูมิห้อง: 25±1 องศา ; ความชื้นสัมพัทธ์: 50± 10 เปอร์เซ็นต์ ) และสุ่มแบ่งออกเป็นหกกลุ่มต่อไปนี้: กลุ่มหลอกลวง กลุ่ม UUO กลุ่ม ARB และกลุ่ม SK สูง ปานกลาง และต่ำ UUO ถูกเหนี่ยวนำในหนูในกลุ่ม UUO, กลุ่ม ARB และกลุ่ม SK ที่ให้ขนาดสูง ปานกลาง และต่ำตามขั้นตอนที่กำหนดไว้ก่อนหน้านี้ ให้ยาสลบด้วยไอโซฟลูเรน 2 เปอร์เซ็นต์และคงสภาพด้วยไอโซฟลูเรน 1.5 เปอร์เซ็นต์ มีการกรีดตามยาว 1- ถึง 2-ซม. ที่หน้าท้องด้านซ้าย และท่อไตด้านซ้ายถูกแยกออกอย่างตรงไปตรงมา ผูกมัดที่สองตำแหน่งแล้วจึงตัดระหว่างรอยต่อทั้งสอง จากนั้นปิดช่องท้องหลังจากนั้นให้ยาแก้ปวดเป็นเวลา 3 วัน หนูในกลุ่มหลอกได้รับการผ่าตัดที่คล้ายคลึงกัน รวมถึงการดมยาสลบก่อนและหลังการผ่าตัด การผ่าตัดเปิดช่องท้อง และการแยกท่อไตแบบทู่ โดยไม่มีการตัดและตัดท่อไต ตั้งแต่วันที่สองหลังจากการอุดตัน ยาโลซาร์แทนถูกบริหารให้ในทางเดินอาหารแก่หนูเมาส์ในกลุ่ม ARB ที่ขนาดยา 0.13 มก./10 กรัม (0.15 มล./10 กรัม) SK ที่ขนาดสูง 0.08g/10g (0.13mL/10g) ปริมาณปานกลาง 0.04g/10g (0.13 mL/10g) หรือขนาดต่ำ 0.02g/10g (0.13mL/10g) หนูในกลุ่ม SK ผ่านทางหลอดเลือดดำส่วนหางเป็นเวลา 14 วันหลังการทำ ligation ของท่อไต น้ำเกลือ (0.13 มล./10 กรัม) ถูกให้ทางหลอดเลือดดำส่วนหางแก่หนูเมาส์ในกลุ่มหลอก, UUO และ ARB และให้น้ำเกลือ (0.15 มล./10 กรัม) ผ่านทางสายน้ำแก่หนูในกลุ่มหลอก, UUO และ SK เพื่อลด อคติ. หลังจาก MRI เลือดถูกเก็บจากหนูทดลองโดยการเจาะหัวใจด้วยการเสียสละภายใต้การดมยาสลบ (ชักนำและคงสภาพด้วยไอโซฟลูเรน 2 เปอร์เซ็นต์) ในวันที่ 14 และเก็บเนื้อเยื่อไต เซรั่มได้จากเลือดครบส่วนโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 1,000 (× g) (4 องศา) เป็นเวลา 10 นาที ระดับยูเรียไนโตรเจนในเลือด (BUN), SCr และ cystatin C (Cys-C) ในซีรัมถูกวัดโดยวิธีคัลเลอริเมตริก ทำการย้อม Hematoxylin และ eosin (HE) และการย้อมสีแดง Sirius เพื่อตรวจหาจุลพยาธิวิทยาและคอลลาเจนในโครงสร้าง stromal ของไตที่ได้รับผลกระทบตามลำดับ สำหรับการย้อมด้วย HE ชิ้นต่างๆ จะถูกแช่ในน้ำกลั่นหลังจากล้างสีออก แช่ในสารละลายย้อมฮีมาทอกซิลิน (Solarbio Science & Technology, ประเทศจีน) ตามด้วยสารละลายแอลกอฮอล์กรดไฮโดรคลอริก 1 เปอร์เซ็นต์สำหรับการแยกสี ล้างด้วยน้ำประปา เปลี่ยนเป็นสีน้ำเงิน และย้อมด้วย สีย้อมอีโอซิน ชิ้นที่เปื้อนถูกล้างด้วยน้ำกลั่น อบแห้ง ล้าง และปิดผนึกด้วยหมากฝรั่งที่เป็นกลาง สำหรับการย้อมสีแดงซิริอุส ชิ้นจะถูกล้างออก ย้อมด้วยแฮร์ริสฮีมาทอกซิลิน ล้าง ย้อมด้วยสีแดงซิเรียส (Solarbio Science & Technology ประเทศจีน) แยกโดยตรงและอบแห้งด้วยเอทานอลสัมบูรณ์ ล้างด้วยไซลีน และปิดผนึก ห้าเขตข้อมูลภาพของไตcortex และ proximal tubule area ถูกสุ่มเลือกสำหรับหนูแต่ละตัว ซอฟต์แวร์ ImageJ ใช้ในการคำนวณพื้นที่สีแดง และคำนวณพื้นที่สีแดงเฉลี่ยเพื่อกำหนดพื้นที่ย้อมสีแดงซิเรียส
In vivo MRI เพื่อประเมินระดับของการเกิดพังผืดของไตหนูได้รับ MRI ในวันที่ 13 หลังจากการบริหาร SK ด้วยระบบ MRI สัตว์ขนาดเล็ก 7T (ระบบ Agilent 7T MRI) และขดลวดของร่างกาย ให้ยาสลบด้วยไอโซฟลูเรน 2 เปอร์เซ็นต์และคงสภาพด้วยไอโซฟลูเรน 1.5 เปอร์เซ็นต์ หนูถูกวางไว้ในตำแหน่งคว่ำโดยให้หน้าท้องอยู่ตรงกลางสัมพันธ์กับศูนย์กลางของคอยล์ความถี่วิทยุและเชื่อมต่อกับเซ็นเซอร์ช่วยหายใจเพื่อติดตามการหายใจ RAPID Rat Head System ใช้สำหรับการกระตุ้นคลื่นความถี่วิทยุและการตรวจจับสัญญาณ การสแกนทั้งหมดดำเนินการภายใต้การหายใจอย่างอิสระ ได้ภาพมาโดยใช้ลำดับการสร้างภาพเทนเซอร์แบบกระจาย (DTI) และพารามิเตอร์มีดังต่อไปนี้: ทิศทาง=30 (b=1004.7s/mm 2 ) บวก null (b=0s/mm 2 ), Δ=4มิลลิวินาที และ δ=16มิลลิวินาที พารามิเตอร์การรับภาพมีดังนี้: TR/TE=3000ms/50.73ms, =60 องศา , เมทริกซ์=128×128, FOV=2x2 ซม. และความหนาของชิ้นภาพ =1มม. ระยะเวลาทั้งหมดสำหรับการเตรียมการแพร่คือ 4 มิลลิวินาที การสแกนล่าช้า 16ms ระหว่างการสแกน และการสแกน b=0s/mm 2 สองครั้งถูกรวมเข้าด้วยกันเพื่อจำกัดผลกระทบของการคลายตัวของ T1 เวลาในการสแกนทั้งหมดประมาณ 1 ชม. เนื่องจากภาวะไฮโดรเนฟโฟรซิสไต sความผิดปกติของโครงสร้างที่เกิดจากการอุดตันของท่อไต มีเพียงเปลือกนอกและไขกระดูกชั้นนอกของเนื้อเยื่อไตของหนูที่ได้รับการประเมินสำหรับการวิเคราะห์ด้วยภาพ แผนที่ Fractional anisotropy (FA) ได้รับและคำนวณโดยใช้ซอฟต์แวร์ VNMRJ4.0 เพื่อวัดความเข้มของสัญญาณ MRI อย่างแม่นยำและกำหนดระดับของการเกิดพังผืดระหว่างกลุ่มต่างๆ ได้ เลือกระนาบการสแกนห้าชุดสำหรับตัวอย่างไตแต่ละตัวอย่าง และสุ่มเลือกบริเวณเล็กๆ ที่น่าสนใจสามบริเวณสำหรับระนาบการสแกนแต่ละระนาบ
CISTANCHE จะปรับปรุงการทำงานของไต/ไต
การวิเคราะห์ Western blotสกัดโปรตีนทั้งหมดออกจากเซลล์โดยใช้บัฟเฟอร์สลายโปรตีน RIPA 500ไมโครลิตร (Solarbio, Beijing, China) หลังจากการปั่นแยกที่ 10000 (× g) เป็นเวลา 10 นาที ชุดทดสอบโปรตีนของ Bradford (Applygen, Beijing, China) ถูกนำมาใช้สำหรับการหาปริมาณโปรตีน ปริมาณโปรตีนที่เท่ากัน (40ug) ถูกทำให้เสียสภาพที่ 100 องศาเป็นเวลา 10 นาทีในบัฟเฟอร์การโหลด (Applygen, Beijing, China) คั่นด้วยอิเล็กโตรโฟรีซิสบนเจล SDS-PAGE 8-10 เปอร์เซ็นต์ตามน้ำหนักโมเลกุลสัมพัทธ์ และอิเล็กโตรทรานสเฟอร์บน 0{{ 10}}μm เยื่อโพลีไวนิลลิดีน ไดฟลูออไรด์ (Millipore, Bedford, MA, USA) จากนั้นเยื่อหุ้มถูกปิดกั้นในบัฟเฟอร์การปิดกั้น (Nacalai Tesque, Japan) ที่ 25±5 องศาและฟักด้วยแอนติบอดีปฐมภูมิ ได้แก่ -actin (Proteintech Group, USA, 1:5000), -SMA (Proteintech Group, USA, 1: 1000), คอลลาเจน III (col I) (Abcam, UK, 1:5000), STAT3 (Proteintech Group, USA, 1:2000), p-STAT3 (Tyr705) (Cell Signaling Technology, USA, 1:2000), JAK2 (Cell Signaling Technology, USA, 1:1000), p-JAK2 (Cell Signaling Technology, USA, Tyr1007) (1:1000) และ Peroxiredoxin 5 (Prdx5) (Proteintech Group, USA, 1:800) ที่ 4 องศาในชั่วข้ามคืน หลังจากล้างใน TBST เยื่อหุ้มเซลล์ถูกบ่มด้วยแอนติบอดีทุติยภูมิ (Cell Signaling Technology, USA, 1:10000) เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องแล้วล้างอีกครั้งด้วย TBST ต่อมาใช้ชุดตรวจจับ ECL สำหรับการสัมผัส จากนั้น ซอฟต์แวร์ Image Lab™ จะอ่านและวิเคราะห์ความหนาแน่นเชิงแสงของแถบโปรตีนเพื่อการวิเคราะห์เชิงปริมาณ ค่าเดนซิโทเมตริกถูกทำให้เป็นมาตรฐานจนถึงความหนาแน่นของแถบ -แอกติน
PCR แบบเรียลไทม์เชิงปริมาณRNA ทั้งหมดถูกสกัดจากเซลล์หรือไตเนื้อเยื่อโดยใช้ Monarch® Total RNA Miniprep Kit ตามคำแนะนำของผู้ผลิต จากนั้นจึงใช้ GoScript Reverse Transcription System เพื่อสังเคราะห์ cDNA สายแรกตามคู่มือ PCR การถอดรหัสย้อนกลับเชิงปริมาณแบบเรียลไทม์ถูกดำเนินการในปฏิกิริยา 20-μL ไพรเมอร์การกำหนดเป้าหมายทางพันธุกรรมได้รับการออกแบบตามลำดับ mRNA ที่เผยแพร่โดย NCBI และแสดงอยู่ในตารางที่ 1 ความอุดมสมบูรณ์ของ mRNA สัมพัทธ์ถูกกำหนดบนพื้นฐานของอัตราส่วนของการแสดงออกของ mRNA จำเพาะต่อการแสดงออกของ -actin mRNA ในตัวอย่างเดียวกัน และการเปลี่ยนแปลงพับสัมพันธ์กับสิ่งนั้น ในหนูเมาส์ในกลุ่มหลอกหรือเซลล์ในกลุ่ม 0ng/mL TGF- 1 คำนวณโดยวิธี 2 -ΔΔCt
การวิเคราะห์ทางสถิติข้อมูลทั้งหมดจากการทดลองอิสระอย่างน้อยสามครั้งจะแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ± ความคลาดเคลื่อนมาตรฐานของค่าเฉลี่ย (SEM) การวิเคราะห์ทางสถิติดำเนินการโดยใช้แพ็คเกจซอฟต์แวร์ SPSS 20.0 ทำการทดสอบภาวะปกติและการทดสอบความเป็นเนื้อเดียวกันสำหรับความแปรปรวน หากข้อมูลมีการกระจายตามปกติ การทดสอบ t ของนักเรียนถูกใช้เพื่อเปรียบเทียบความแตกต่างระหว่างสองกลุ่ม และใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว (ANOVA) (การทดสอบ LSD สำหรับความแปรปรวนคู่และการทดสอบของ Dunnett สำหรับความแปรปรวนไม่เท่ากัน) เพื่อเปรียบเทียบ ความแตกต่างระหว่างกลุ่ม หากข้อมูลไม่กระจายตามปกติ การทดสอบ Mann-Whitney U แบบไม่อิงพารามิเตอร์จะถูกนำมาใช้เพื่อเปรียบเทียบความแตกต่างระหว่างสองกลุ่ม และใช้การทดสอบ Kruskal-Wallis แบบไม่อิงพารามิเตอร์เพื่อเปรียบเทียบความแตกต่างระหว่างกลุ่มที่มากกว่าสองกลุ่ม พี<0.05, p=""><0.01 or="" p="" <="" 0.001="" indicates="" a="" significant="">
ผลลัพธ์
ผลของ SK ต่อความอยู่รอดของเซลล์ NRK-49F หลังการบำบัดด้วย TGF- 1
TGF- เป็นไซโตไคน์ที่สำคัญที่เกี่ยวข้องกับการเกิดพังผืดของไต ขั้นแรกเราใช้ปริมาณ TGF- 1 (0, 10,20, 40 และ 80ng/mL) ในปริมาณที่แตกต่างกันเพื่อกระตุ้นการเติบโตของเซลล์ NRK- 49F การบำบัดด้วย TGF- 1 เป็นเวลา 24 ชั่วโมงเพิ่มความมีชีวิตของเซลล์ในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา (รูปที่ 1a) ซึ่งสอดคล้องกับการค้นพบก่อนหน้านี้ที่ได้รับผ่านการสอบวิเคราะห์ MTT [17] ความเข้มข้นของเกรเดียนท์ของ SK (1, 2, 4 และ 8 มก./มล.) ลดการเพิ่มประสิทธิภาพของการมีชีวิตที่เหนี่ยวนำโดย 10ng/mL TGF- 1 (รูปที่ 1b) อย่างมีนัยสำคัญ และผลของการบำบัดเป็นเวลา 48 ชั่วโมง ชัดเจนกว่าการรักษา 24 ชม. ผลลัพธ์นี้บ่งชี้ว่า SK สามารถยับยั้งการเจริญของไฟโบรบลาสต์ในไตของ TGF- 1- และการเพิ่มประสิทธิภาพของการมีชีวิตในหลอดทดลอง
SK ยับยั้งการแสดงออกที่เหนี่ยวนำโดย TGF- -ของ -SMA และการสะสมของส่วนประกอบ ECM ในเซลล์ NRK-49FMyofibroblasts เป็นไฟโบรบลาสต์ที่แอคทีฟซึ่งมีลักษณะเฉพาะโดยการแสดงออกของการสะสม -SMA และ ECM TGF- 1 เป็นไซโตไคน์ที่สำคัญที่เกี่ยวข้องกับการผลิต ECM โดย myofibroblasts และพังผืด [18] ดังแสดงในรูปที่ 2a และ b ทั้ง -SMA และ col. III ถูกแสดงออกอย่างมากในเซลล์ NRK-49F หลังการบำบัดด้วย TGF- 1 ซึ่งบ่งชี้ว่าเซลล์ที่เพาะเลี้ยงถูกแปลงเป็นมัยโอไฟโบรบลาสต์ที่ถูกกระตุ้นเมื่อบริหารให้ TGF- 1 เพื่อตรวจสอบเพิ่มเติมว่า SK สามารถระงับการกระตุ้นไฟโบรบลาสต์คั่นระหว่างหน้าของไตได้หรือไม่ เราได้ตรวจสอบผลของ SK ต่อ -SMA และการแสดงออกของคอลลาเจน III ในเซลล์ NRK-49F การบริหารให้ SK ลดการแสดงออกของ -SMA ลงอย่างเห็นได้ชัด (ในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา) (รูปที่ 2 และ 3a) และ col III (รูปที่ 2) แนะนำว่า SK สามารถระงับ TGF{17}}การกระตุ้นเซลล์ NRK-49F ที่เหนี่ยวนำได้โดยตรง มีแนวโน้มที่ผลของ SK 4ng/mL ในการลดการแสดงออกที่เหนี่ยวนำโดย TGF- 1-ของ -SMA และการสะสมของส่วนประกอบ ECM ให้ดีกว่าของโลซาร์แทน (1 มก./ลิตร)
SK ยับยั้ง TGF- 1-กระตุ้น STAT3, การกระตุ้น JAK2 และการแสดงออก Prdx5 ในเซลล์ NRK-49Fในการสำรวจกลไกที่เป็นไปได้ซึ่ง SK ยับยั้งการกระตุ้นไฟโบรบลาสต์ เราได้ตรวจพบการแสดงออกของยีน STAT3 และ JAK2 และระดับโปรตีนในเซลล์ NRK-49F โดยใช้ RT-qPCR และ Western blotting ตามลำดับ เซลล์ NRK-49F แสดงระดับของ STAT3 และ JAK2 mRNA ที่สูงกว่าหลังการกระตุ้น TGF- 1 มากกว่าก่อนการบำบัด SK ยับยั้งการแสดงออกของ TGF- 1-ที่เหนี่ยวนำให้เกิด STAT3 และ JAK2 mRNA อย่างมากที่ 24 ชั่วโมง (รูปที่ 3b และ c) ฟอสฟอรีเลชันของ STAT3 ที่ Tyr705 และ JAK2 ที่ Tyr1007 เพิ่มขึ้นเมื่อมี TGF- 1 SK ยังยับยั้งฟอสโฟรีเลชั่นของโมเลกุลทั้งสองนี้ด้วย (รูปที่ 2) Prdx5 ซึ่งเป็นตัวควบคุมวิถีทาง JAK2/STAT3 ได้รับการควบคุมเมื่อมี TGF- 1 และการปรับเพิ่มนี้ก็ถูกย้อนกลับโดยการบำบัดด้วย SK (รูปที่ 2) ผลกระทบเกือบทั้งหมด ยกเว้นเรื่องฟอสโฟรีเลชั่นของ JAK2 และการแสดงออกของโคล III มีความแข็งแกร่งมากกว่าในกลุ่ม SK ปริมาณมาก มากกว่าในกลุ่ม SK ปริมาณต่ำ ดังนั้น ดูเหมือนชัดเจนว่า SK อาจยับยั้งการกระตุ้น TGF- 1-การกระตุ้นให้เกิดไฟโบรบลาสต์ NRK-49F ผ่านการควบคุมการเปิดใช้งาน JAK2/STAT3 ที่ 2ng/mL หรือ 4 ng/mL, SK มีผลดีกว่าในการทำให้การกระตุ้น TGF- 1-กระตุ้น STAT3 และ JAK2 และการแสดงออก Prdx5 ดีขึ้นกว่ายาโลซาร์แทน
SK บรรเทาความผิดปกติของไตที่เกิดจาก UUO และการเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาของไตแบบจำลองเมาส์การเกิดพังผืดของไตถูกสร้างขึ้นโดยการเหนี่ยวนำ UUO รูปที่ 4 a, b, c แสดงดัชนีการทำงานของไตผิดปกติของกลุ่มหลอกลวง กลุ่ม UUO กลุ่ม ARB และกลุ่ม SK ปริมาณสูง ปานกลาง และต่ำหลังการรักษา 14 วัน ปริมาณ SK ที่สูงทำให้ระดับ Cys-C ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (P น้อยกว่าหรือเท่ากับ 0.05; รูปที่ 4a) และระดับ SCr (P น้อยกว่าหรือเท่ากับ {{12} }.01; รูปที่ 4c) และ SK ลดระดับ BUN ลงอย่างเห็นได้ชัดในทุกขนาด (P น้อยกว่าหรือเท่ากับ 0.05 หรือ P น้อยกว่าหรือเท่ากับ 0.01; รูปที่ 4b) ผลลัพธ์ข้างต้นชี้ให้เห็นว่า SK ช่วยปรับปรุงการด้อยค่าของการทำงานของไตและการเกิดพังผืดของไต และผลของ SK มีความคล้ายคลึงกับผลของยาโลซาร์แทน การย้อมสี HE ของไตเปิดเผยว่าการสะสมของ ECM การแทรกซึมของเซลล์ที่มีการอักเสบ การขยายและ/หรือการฝ่อของท่อไต การเสื่อมสภาพและเนื้อร้ายของเซลล์เยื่อบุผิว tu-bule ของไตโดยไม่มีการเปลี่ยนแปลงที่ชัดเจนในโครงสร้างไตในกลุ่ม UUO (รูปที่ 4d) การด้อยค่าของการทำงานของไตลดลงในระดับที่แตกต่างกันในกลุ่มการรักษาที่แตกต่างกันเมื่อเทียบกับกลุ่ม UUO; ปริมาณปานกลางและขนาดสูงของ SK บรรลุผลที่ดีที่สุด แม้ว่าระดับการทำงานของไตในกลุ่มปฏิบัติการหลอกจะไม่บรรลุผลในกลุ่มการรักษาใดๆ
SK ลดค่า FA ที่เกี่ยวข้องกับพังผืดที่ตรวจพบโดยใช้DTIดังที่แสดงไว้ในรูปที่ 5 ค่า FA ซึ่งมีความสัมพันธ์เชิงเส้นกับระดับของการเกิดพังผืดในเนื้อเยื่อจริงถูกกำหนดโดย DTI ในร่างกาย เมื่อเทียบกับในกลุ่มหลอกลวง ค่า FA ในกลุ่ม UUO เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (P<0.01). the="" increase="" in="" in="" the="" fa="" value="" in="" the="" presence="" of="" ureteral="" obstruction="" conditions="" was="" significantly="" reversed="" in="" the="" arb="" and="" high-,="" moderate-,="" and="" low-dose="" sk="" groups="" compared="" to="" the="" uuo="" group="">< 0.01="" or="" p=""><0.001), with="" moderate-dose="" sk="" having="" the="" most="" significant="" effect="" (p=""><>
SK ยับยั้งการกระตุ้นไฟโบรบลาสต์และการสะสมของส่วนประกอบ ECM ในหนูเมาส์ UUOนอกจากนี้ เรายังประเมินการแสดงออกของตัวบ่งชี้การกระตุ้นไฟโบรบลาสต์ -SMA, โปรตีนจำเพาะของไฟโบรบลาสต์-1 (FSP-1) และองค์ประกอบ ECM แบบคลาสสิกไฟโบรเนกติน (FN), คอล III และคอลลาเจน I (col I) ในกลุ่มหลอก UUO และ SK ปริมาณปานกลางโดยใช้ PCR แบบเรียลไทม์ เนื่องจากขนาดยาปานกลางของ SK เท่ากับขนาดยาที่แนะนำทางคลินิก และเนื่องจากการปรับปรุงโดยรวมในกลุ่มขนาดยาปานกลางนั้นดีกว่าในกลุ่มที่ให้ขนาดสูงและต่ำ SK ขนาดปานกลางจึงถูกใช้เพื่อประเมินการแสดงออกของ mRNA ดังแสดงในรูปที่ 7a และ b ปริมาณ SK ปานกลางช่วยลดการเพิ่มขึ้นใน -SMA, FSP, FN, col III และพ. ฉันระดับ. ผลลัพธ์เหล่านี้สอดคล้องกับผลการย้อมสีซิเรียสเรด ซึ่งแสดงให้เห็นว่าบริเวณสีแดงของการเกิดพังผืดในไตที่ได้รับผลกระทบในกลุ่ม ARB และกลุ่มที่ได้รับยา SK ปานกลางและต่ำ มีขนาดเล็กกว่าในกลุ่มที่ไม่ได้รับการรักษาอย่างมีนัยสำคัญ (P<0.05) (fig.="" 6),="" indicating="" that="" sk="" decreased="" the="" number="" of="" col-="" lagen="" bundles="" in="" the="" affected="">
ผลของ SK ต่อระดับ STAT3, JAK2 และ TGF-mRNA และการแสดงออกของโมเลกุลควบคุมและตัวยับยั้งของโปรตีนการส่งสัญญาณไซโตไคน์ (SOCS) SOCS1 และ SOCS3 ในหนูเมาส์ UUOดังแสดงในรูปที่ 7c ระดับ mRNA ของ TGF- , JAK2 และ STAT3 สูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในกลุ่ม UUO เมื่อเทียบกับกลุ่มหลอกลวงในวันที่ 14 เมื่อเปรียบเทียบกับหนูทดลอง หนู UUO ที่ได้รับการรักษาด้วย SK ขนาดปานกลางพบว่าระดับ JAK2 และ TGF-mRNA ลดลงอย่างเห็นได้ชัดในวันที่ 14 หลังจากการอุดตัน แต่ SK ไม่ได้ลดระดับ STAT3 mRNA อย่างมีนัยสำคัญหลังจาก UUO ผลลัพธ์นี้ชี้ให้เห็นว่าผลของ SK ต่อการเกิดพังผืดของไตและการกระตุ้นไฟโบรบลาสต์ในหนู UUO อาจเกิดขึ้นผ่านการควบคุมของการเปิดใช้งาน JAK2 และ STAT3 โดยไม่มีการเปลี่ยนแปลงในการแสดงออกของ STAT3 mRNA ทั้งหมด ระดับของ TGF- ซึ่งเป็นโมเลกุลปลายน้ำของ STAT3 ก็ลดลงเช่นกันโดย SK ในบริบทของ ligation ของท่อไต โปรตีน SOCS ถือว่ามีความสำคัญสำหรับการควบคุมเชิงลบของการส่งสัญญาณ JAK/STAT [19] เพื่อตอบสนองต่อ UUO ระดับ SOCS1 และ SOCS3 เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญและลดลงอย่างมีนัยสำคัญในกลุ่ม SK เมื่อเทียบกับกลุ่มแบบจำลอง (รูปที่ 7d) ผลลัพธ์นี้ชี้ให้เห็นว่า SK สามารถยับยั้งวิถี JAK/STAT เพื่อลดการแสดงออกของโมเลกุลควบคุมเชิงลบเป็นความคิดเห็น
CISTANCHE จะช่วยเพิ่มอาการปวดไต/ไต
การอภิปราย
พังผืดของไตในท่อไตเป็นทางเดินร่วมขั้นสุดท้ายของโรคไตวายเรื้อรังระยะสุดท้าย Myofibroblasts ซึ่งได้มาจากเซลล์ต่างๆ รวมทั้งเซลล์เยื่อบุผิว เซลล์บุผนังหลอดเลือด และเยื่อหุ้มเซลล์ ผ่านเยื่อบุผิว-มีเซนไคม์ ทรานสดิฟเฟอเรนติเอชัน (EMT) หรือ endothelial-mesenchymal transdifferentiation (EndoMT) สามารถช่วยซ่อมแซมเนื้อเยื่อที่เสียหายโดยการผลิต ECM และ -SMA สร้างแรงตึงหดตัว [20] ในบรรดาเซลล์ประเภทต่างๆ เหล่านี้ ไฟโบรบลาสต์คั่นระหว่างหน้าที่กระตุ้นเป็นแหล่งหลักของ myofibroblasts ซึ่งคิดเป็น 50 เปอร์เซ็นต์ของเซลล์เหล่านี้ [21] นอกเหนือจาก -SMA ไฟโบรบลาสต์ที่ถูกกระตุ้นยังแสดง FSP อย่างจำเพาะด้วย-1 TGF- ถูกกำหนดให้เป็นตัวขับเคลื่อนหลักของการเกิดพังผืดของไตและพบว่ามีการกระตุ้นในรูปแบบต่างๆของโรคไตและเซลล์ไต TGF ที่เปิดใช้งาน- จับกับตัวรับ TGF และกระตุ้นโมเลกุลสัญญาณปลายน้ำ รวมถึงโมเลกุลและปัจจัยการถอดรหัสที่เกี่ยวข้องกับ EMT, EndoMT, การกระตุ้นไฟโบรบลาสต์, การผลิต ECM และการยับยั้งการเสื่อมสภาพของ ECM ผ่าน Smad รวมถึง TGF- [23], STAT3 ถูกกระตุ้นโดย Tyr phosphorylation ที่ Tyr705 ผ่าน Janus kinases โปรตีน STAT3 ที่ถูกกระตุ้นจะเข้าสู่นิวเคลียสในรูปของไดเมอร์และจับกับยีนเป้าหมาย นอกจากนี้ STAT3 ยังกระตุ้นการส่งสัญญาณเส้นทาง TGF [24] โดยแท้จริงแล้ว ในแบบจำลอง UUO การกระตุ้นของ STAT3 ที่ Tyr705 ในไฟโบรบลาสต์คั่นระหว่างหน้าของไต ร่วมกับรอยโรคทางจุลพยาธิวิทยาและการกระตุ้นไฟโบรบลาสต์ เพิ่มขึ้นตั้งแต่วันแรก โดยสูงสุดที่ 7 วันและเพิ่มขึ้นจนถึง 14 วัน [25] STAT3 มีแนวโน้มที่จะเกี่ยวข้องกับโรคไตหลายชนิดโดยการควบคุมการแสดงออกของยีนเป้าหมาย โดยเฉพาะอย่างยิ่งปัจจัยการถอดรหัสที่เกี่ยวข้องกับการพัฒนาของ CKD ในการศึกษานี้ ในวันที่ 14 หลังจากการอุดตัน ระดับ mRNA ของ -SMA, JAK2 และ STAT3 เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญเมื่อระดับการเกิดพังผืดในไตเพิ่มขึ้น
จากการวิจัยก่อนหน้านี้พบว่า SK และส่วนประกอบต่างๆ สามารถลดความเสียหายทางพยาธิวิทยา ยับยั้งการเพิ่มจำนวนเซลล์บุผนังหลอดเลือด บรรเทาโปรตีนในปัสสาวะและโรคลิ่มเลือดอุดตัน ปกป้องการทำงานของไตที่ตกค้างและความก้าวหน้าของโรคได้ช้า ซึ่งขัดขวางการทำงานของ CKD และการเกิดพังผืดของไต อย่างไรก็ตาม ยังไม่มีรายงานการเปิดใช้งานไฟโบรบลาสต์ จากการศึกษาก่อนหน้านี้และผลลัพธ์ CCK-8 ของเรา, 10 ng/mL TGF- 1 ถูกใช้เพื่อกระตุ้นไฟโบรบลาสต์ 1, 2 และ 4 มก./มล. ถูกเลือกให้เป็นขนาดยาต่ำ ปานกลาง และสูงของ SK; และเลือก 48 ชั่วโมงเป็นเวลาแทรกแซงในการศึกษาปัจจุบัน การปรับเพิ่มของ -SMA และการเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาที่มาพร้อมกับการเพิ่มจำนวนและการกระตุ้นของเซลล์ ซึ่งแสดงออกโดยการเพิ่มความมีชีวิตของเซลล์และการผลิต ECM เกิดขึ้นในเซลล์ NRK-49F หลังการกระตุ้น TGF- 1 [26, 27] ในการศึกษานี้ ได้รับการยืนยันว่า TGF- 1 ควบคุมการแสดงออกของยีนของ -SMA และ ECM โดยการเปิดใช้งานวิถีต้นน้ำ JAK2/STAT3 ข้อมูลของเราแสดงให้เห็นว่า SK ยับยั้ง TGF- 1-กระตุ้นการกระตุ้นเซลล์ NRK-49F และการผลิต ECM ในหลอดทดลองโดยตรง นอกจากนี้ เราแสดงให้เห็นว่า SK สามารถลดทอนการเกิดพังผืดของไตในหนู UUO ในร่างกาย โดยลดการสะสม ECM คั่นระหว่างหน้าในวันที่ 14 หลังจากการอุดตัน ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า SK สามารถลดทอนการเกิดพังผืดของไตได้อย่างเห็นได้ชัดโดยการยับยั้งการกระตุ้นไฟโบรบลาสต์คั่นระหว่างหน้าและการลดการแสดงออกของ -SMA กลไกที่เป็นไปได้ของฤทธิ์ต้านการเกิดพังผืดของ SK คือการยับยั้งการกระตุ้นไฟโบรบลาสต์ผ่านการควบคุมเส้นทางการส่งสัญญาณ JAK2/STAT3 ทั้งในหลอดทดลองและในร่างกาย SK ในขนาดปานกลางยังเปลี่ยนการควบคุม TGF- 1 ที่เหนี่ยวนำโดย UUO อย่างมีนัยสำคัญ ซึ่งบ่งชี้ว่าผลกระทบของ SK นั้นสัมพันธ์กับ TGF- เนื่องจาก TGF- และ STAT3 มีปฏิสัมพันธ์ระหว่างกัน SK อาจยับยั้ง STAT3 โดยการกำหนดเป้าหมาย TGF- ปรับลด TGF- โดยการกำหนดเป้าหมาย STAT3 หรือยับยั้งทั้งสองอย่าง การศึกษาเภสัชวิทยาระบบก่อนหน้านี้ของเราคาดการณ์ว่า STAT3 เป็นหนึ่งในโมเลกุลเป้าหมายที่เป็นไปได้ของ SK [28] และการค้นพบนี้ได้รับการยืนยันในการศึกษาปัจจุบัน เราใช้โลซาร์แทน ARB
สามารถลดการเกิดพังผืดของไตและการตายของเซลล์ท่อไตได้อย่างมีนัยสำคัญโดยการยับยั้ง phosphorylation ของโปรตีนส่งสัญญาณ STAT3 ในรูปแบบ UUO [29] ของหนู ซึ่งเป็นยาควบคุมเชิงบวก ผลการวิจัยก่อนหน้านี้สอดคล้องกับข้อมูลของเรา Peroxiredoxins เป็นตระกูลของเปอร์ออกซิเดสที่ขึ้นกับเมอร์แคปแทนซึ่งสามารถลดความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันโดยเร่งปฏิกิริยาการลดลงของไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ ระดับของ Prdx5 ในไตของหนูลดลงในวันแรกหลัง UUO สังเกตได้ว่าการแสดงออกของ Prdx5 ค่อยๆ เพิ่มขึ้นจนถึง 5 วันหลังจากการรักษาด้วย TGF- การแสดงออกที่มากเกินไปของ Prdx5 แสดงให้เห็นว่ายับยั้งฟอสโฟรีเลชันที่เหนี่ยวนำโดย TGF- -ของ STAT3 และลดการแสดงออก -SMA และ FN ที่เหนี่ยวนำโดย TGF ในเซลล์ NRK-49F ซึ่งบ่งชี้ว่า Prdx5 ควบคุม TGF ในเชิงลบ- - กระตุ้นการกระตุ้นและการเกิดพังผืดของ STAT3 ในเซลล์ NRK-49F [12] กลไกการกำกับดูแลหลักที่อยู่ภายใต้การส่งสัญญาณ STAT3 ภายนอกนั้นเกี่ยวข้องกับตระกูลโปรตีน SOCS หลังจากที่ STAT3 ถูกกระตุ้นโดยไซโตไคน์ ไดเมอร์ของ STAT3 จะถูกส่งไปยังยีนเป้าหมายปลายทางของการเหนี่ยวนำนิวเคลียร์ ซึ่งรวมถึง SOCS [30] โดยเฉพาะอย่างยิ่ง บริเวณที่ยับยั้งไคเนสของ SOCS1 สามารถผูกมัดโดยตรงสามารถลดการเกิดพังผืดในไตและการตายของเซลล์ท่อไตได้อย่างมีนัยสำคัญโดยการยับยั้งฟอสโฟรีเลชันของโปรตีนส่งสัญญาณ STAT3 ในแบบจำลองหนู UUO [29] เป็นยาควบคุมเชิงบวก ผลการวิจัยก่อนหน้านี้สอดคล้องกับข้อมูลของเรา Peroxiredoxins เป็นตระกูลของเปอร์ออกซิเดสที่ขึ้นกับเมอร์แคปแทนซึ่งสามารถลดความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันโดยเร่งปฏิกิริยาการลดลงของไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ ระดับของ Prdx5 ในไตของหนูลดลงในวันแรกหลัง UUO สังเกตได้ว่าการแสดงออกของ Prdx5 ค่อยๆ เพิ่มขึ้นจนถึง 5 วันหลังจากการรักษาด้วย TGF- การแสดงออกที่มากเกินไปของ Prdx5 แสดงให้เห็นว่ายับยั้งฟอสโฟรีเลชันที่เหนี่ยวนำโดย TGF- -ของ STAT3 และลดการแสดงออกของ TGF- -ที่เหนี่ยวนำ -SMA และ FN ในเซลล์ NRK-49F ซึ่งบ่งชี้ว่า Prdx5 ควบคุม TGF ในเชิงลบ{{ 38}}กระตุ้นการกระตุ้นและการเกิดพังผืดของ STAT3 ในเซลล์ NRK-49F [12] กลไกการกำกับดูแลหลักที่อยู่ภายใต้การส่งสัญญาณ STAT3 ภายนอกนั้นเกี่ยวข้องกับตระกูลโปรตีน SOCS หลังจากที่ STAT3 ถูกกระตุ้นโดยไซโตไคน์ ไดเมอร์ของ STAT3 จะถูกส่งไปยังยีนเป้าหมายปลายทางของการเหนี่ยวนำนิวเคลียร์ ซึ่งรวมถึง SOCS [30] โดยเฉพาะอย่างยิ่ง บริเวณที่ยับยั้งไคเนสของ SOCS1 สามารถจับได้โดยตรง
เพื่อ JAK2 และยับยั้ง STAT3 phosphorylation [31] การเปิดใช้งาน JAK/STAT ที่เหนี่ยวนำโดย UUO ทำให้เกิดการยกระดับการแสดงออกของ SOCS [32] หลังจากการกระตุ้นด้วย 10 ng/mL TGF- 1 เป็นเวลา 48 ชั่วโมง การแสดงออกของโปรตีน Prdx5 ในเซลล์ NRK-49F เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ ซึ่งสอดคล้องกับผลลัพธ์ก่อนหน้านี้ SK (4 มก./มล.) ลดระดับโปรตีน Prdx5 ลงอย่างมีนัยสำคัญหลังจาก 48 ชั่วโมงของการแทรกแซง ในวันที่ 14 หลังจาก UUO ระดับของ SOCS1 และ SOCS3 mRNA ในไตที่ได้รับผลกระทบนั้นถูกควบคุมอย่างมีนัยสำคัญในกลุ่ม UUO เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม ซึ่งบ่งชี้ว่าการกระตุ้นสัญญาณ STAT3 หลังจาก UUO กระตุ้นการแสดงออกของ SOCS1 และ SOCS3 ไป ควบคุมสัญญาณ STAT3 ที่ใช้งานมากเกินไปในทางลบ หลังจาก 14 วันของการแทรกแซงของ SK ระดับของ SOCS1 และ SOCS3 mRNA ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ ผลลัพธ์เหล่านี้แสดงให้เห็นว่าแทนที่จะยกระดับตัวควบคุมเชิงลบโดยตรงเพื่อยับยั้งการส่งสัญญาณ JAK2/ STAT3 SK ยับยั้ง JAK2/STAT3 ส่งผลให้มีการปรับค่าตัวควบคุมเชิงลบ Prdx5, SOCS1 และ SOCS3 ดังนั้น JAK2/STAT3 อาจเป็นเป้าหมายการรักษาโดยตรงของ SK สำหรับพังผืดในไต
MRI เป็นวิธีที่ปลอดภัยมากในการประเมินการเปลี่ยนแปลงทางโครงสร้างและทางสรีรวิทยาในไตโดยไม่ต้องใช้สารต้านทางหลอดเลือดดำ [33, 34] การถ่ายภาพด้วยน้ำหนักแบบกระจาย (Diffusion-weighted imaging - DWI) เป็นวิธีการ MRI ที่รู้จักกันดีซึ่งใช้ในการสร้างภาพการเคลื่อนไหวของโมเลกุลหรือการแพร่กระจายที่สะท้อนการเปลี่ยนแปลงในโครงสร้างจุลภาคของเนื้อเยื่อชีวภาพ [35] DTI เป็นเทคโนโลยีการถ่ายภาพแบบใหม่ที่พัฒนาขึ้นโดยใช้การถ่ายภาพแบบถ่วงน้ำหนักแบบกระจาย (DWI) ที่สามารถอธิบายได้ไม่เพียงแค่ความเร็วของโมเลกุลของน้ำเท่านั้น แต่ยังรวมถึงทิศทางการเคลื่อนที่ของพวกมันด้วย กล่าวคือ แอนไอโซโทรปี เมื่อเทียบกับ DWI แล้ว DTI มีความละเอียดอ่อนและแม่นยำกว่าในการสะท้อนการเปลี่ยนแปลงของการกระจายตัวของน้ำ DTI ยังสามารถให้ข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับทิศทางและปริมาณของการแพร่กระจายที่วัดได้บนพื้นฐานของ FA Hueper และคณะ [36] แสดงให้เห็นว่าในหนู DN นั้น FA เกี่ยวข้องกับ glomerulosclerosis, interstitial fibrosis และ renal tubular trauma Yan และคณะ [37] พบว่า FA อาจเป็น biomarker ของ DN ต้น ไคโมริและคณะ [38] สังเกตความสัมพันธ์เชิงเส้นตรงระหว่างค่า FA และระดับของการเกิดพังผืดของเนื้อเยื่อจริงในแบบจำลองหนู UUO ในการศึกษานี้ เราปรับพารามิเตอร์ให้เหมาะสมเพื่อลดเวลาในการสแกน เวลาในการดมยาสลบ และการใช้ทรัพยากรในการทดลอง ผลลัพธ์ของ DTI นั้นสอดคล้องกับการย้อมสีแดงของ Sirius ในแง่ของระดับของการเกิดพังผืดของไตที่เกิดจาก UUO และความสามารถของ SK ในการบรรเทาการเกิดพังผืดของไต ในระดับหนึ่ง การค้นพบนี้เปิดเผยว่า SK มีผลจริงต่อการเกิดพังผืดของไตในร่างกาย ในการศึกษานี้ เราสาธิตกลไกที่ SK ควบคุมการเกิดพังผืดในไตทั้งในร่างกายและในหลอดทดลอง ในการศึกษาในอนาคต จำเป็นต้องใช้สารยับยั้งหรือ siRNA เพื่อยับยั้ง JAK2/STAT3 เพื่อตรวจสอบกลไกนี้เพิ่มเติม
บทสรุป
โดยสรุป ข้อมูลของเราแนะนำว่า SK อาจยับยั้งการกระตุ้นไฟโบรบลาสต์ของไตและการเกิดพังผืดของไตในหนู UUO ได้อย่างมีประสิทธิภาพโดยควบคุมเส้นทางการส่งสัญญาณ JAK2/STAT3 ผลลัพธ์ของเราช่วยให้เข้าใจกลไกของ SK ในการรักษาโรคไตได้เป็นอย่างดี อย่างไรก็ตาม กลไกระดับโมเลกุลโดยละเอียดของการรักษา SK ในการเกิดพังผืดของไตจำเป็นต้องมีการสำรวจเพิ่มเติม
