วัคซีน MRNA ของโควิด-19 ป้องกันการติดเชื้อ SARS-CoV-2 Omicron BA.1 ในหนูอ้วนที่เกิดจากอาหารผ่านการส่งเสริมการตอบสนองต่อไวรัสโดยธรรมชาติของโฮสต์
Dec 06, 2023
สรุป
พื้นหลัง
โรคอ้วนเป็นโรคระบาดทั่วโลก และถือเป็นปัจจัยเสี่ยงในการเกิดอาการรุนแรงของโรคติดเชื้อไวรัสโคโรนา 2019 (COVID-19) การเกิดโรคของโรคทางเดินหายใจเฉียบพลันรุนแรง โคโรนาไวรัส 2 (SARS-CoV-2) และการตอบสนองต่อการติดเชื้อ การติดเชื้อซ้ำ และการฉีดวัคซีนในผู้ที่เป็นโรคอ้วนยังคงเป็นที่เข้าใจไม่ครบถ้วน
วิธีการ
ด้วยการใช้แบบจำลองเมาส์ที่เกิดจากภาวะอ้วน (DIO) เราได้ศึกษา SARS-CoV-2 Alpha- และ Omicron BA.1- อาการของโรคที่ชักนำและโฮสต์การตอบสนองทางภูมิคุ้มกันต่อการติดเชื้อ การติดเชื้อซ้ำ และโควิด{ การฉีดวัคซีน mRNA {6}} ครั้ง
ผลการวิจัย
ต่างจากในหนูไร้ไขมัน Omicron BA.1 และ Alpha ถูกจำลองแบบให้มีระดับที่เทียบเคียงได้ในปอดของหนู DIO และส่งผลให้เกิดความเสียหายของเนื้อเยื่อในระดับที่ใกล้เคียงกัน ที่สำคัญ ทั้งทีเซลล์และบีเซลล์เป็นสื่อกลางในการตอบสนองการติดเชื้อ SARS-CoV-2 หรือการฉีดวัคซีน mRNA ของโควิด-19 นั้นมีความบกพร่องในหนู DIO ซึ่งนำไปสู่แนวโน้มการติดเชื้อซ้ำที่สูงขึ้นและวัคซีนที่ลดลง ประสิทธิภาพ อย่างไรก็ตาม แม้ว่าจะไม่มีแอนติบอดีที่ทำให้เป็นกลาง แต่หนู DIO ที่ได้รับการฉีดวัคซีนจะได้รับการปกป้องจากความเสียหายของปอดจากการท้าทายของ Omicron พร้อมด้วยการผลิต IFN และ IFN ในเนื้อเยื่อปอดมากขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ ปอด RNAseq และการทดลองต่อมาระบุว่าการฉีดวัคซีน COVID-19 mRNA ในหนู DIO เพิ่มการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันโดยกำเนิดของไวรัส ซึ่งรวมถึงการแสดงออกของ IFN- เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมที่ไม่ได้รับวัคซีน
cistanche พืชเพิ่มระบบภูมิคุ้มกัน
การตีความ
การค้นพบของเราชี้ให้เห็นว่าการฉีดวัคซีน COVID-19 mRNA ช่วยเพิ่มการตอบสนองของไวรัสโดยธรรมชาติของโฮสต์ในโรคอ้วน ซึ่งช่วยปกป้องหนู DIO ในระดับหนึ่งเมื่อภูมิคุ้มกันแบบปรับตัวยังไม่ค่อยดีนัก
เงินทุน
รายชื่อหน่วยงานที่ให้ทุนทั้งหมดที่สนับสนุนการศึกษานี้สามารถพบได้ในส่วนการรับทราบ
คำสำคัญ: โรคอ้วน; หนูอ้วนที่เกิดจากอาหาร SARS-CoV-2}}; โควิด-19; การฉีดวัคซีน; โอไมครอน
การแนะนำ
โรคติดเชื้อไวรัสโคโรนา 2019 (COVID-19) มีสาเหตุมาจากกลุ่มอาการทางเดินหายใจเฉียบพลันรุนแรง ไวรัสโคโรนา-2 (SARS CoV-2) ซึ่งส่งผลให้เกิดการติดเชื้อมากกว่า 630 ล้านราย และมีผู้เสียชีวิตมากกว่า 6.5 ล้านราย1 –3 อายุขั้นสูงและการเจ็บป่วยร่วม เช่น ความดันโลหิตสูง โรคอ้วน มะเร็งบางชนิด และโรคหลอดเลือดหัวใจ ได้รับการเสนอแนะเป็นปัจจัยเสี่ยงในการพัฒนาโรคโควิดที่รุนแรง-194 ในบรรดาภาวะเหล่านี้ โรคอ้วนถือเป็นโรคระบาดทั่วโลกและเกี่ยวข้องกับประเภทนี้ II โรคเบาหวาน โรคหัวใจและหลอดเลือด ความดันโลหิตสูง และโรคไขมันพอกตับที่ไม่มีแอลกอฮอล์ เนื่องจากสถานะของการอักเสบทั่วร่างกายระดับต่ำเรื้อรัง 5 การศึกษาก่อนหน้านี้รายงานว่าหนูที่เป็นโรคอ้วนที่เกิดจากอาหาร (DIO) ติดการตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติที่ควบคุมไม่ได้ และพัฒนาความเสียหายของปอดอย่างรุนแรงหลังจากนั้น การติดเชื้อไข้หวัดใหญ่สายพันธุ์ใหม่ H1N16–8 นับตั้งแต่เกิดการระบาดของไวรัสโคโรน่า-19 รายงานทางคลินิกชี้ให้เห็นว่าผู้ที่มีภาวะที่เกี่ยวข้องกับโรคอ้วนมีความเสี่ยงสูงต่อโรคโคโรนาไวรัส-19 และมีแนวโน้มที่จะเจ็บป่วยรุนแรงมากกว่า 9,10 นอกจากนี้ การศึกษาเมื่อเร็วๆ นี้ระบุว่าโรคอ้วนสัมพันธ์กับความล่าช้าในการกวาดล้าง SARS-CoV-2 และการพยากรณ์โรคที่ไม่เอื้ออำนวยในผู้ป่วย COVID-1911 อย่างไรก็ตาม ความสามารถในการทำให้เกิดโรคของ SARS-CoV-2 และการตอบสนองต่อการติดเชื้อซ้ำและการฉีดวัคซีนในผู้ที่เป็นโรคอ้วนยังคงเป็นที่เข้าใจไม่ครบถ้วน12 นับตั้งแต่เกิดขึ้นในปี 2019 SARS-CoV-2 ยังคงพัฒนาต่อไปและสร้าง SARS-CoV-2 รูปแบบใหม่ที่น่ากังวล ( VOCs) รวมถึงอัลฟ่า เบต้า แกมมา เดลต้า และโอไมครอน สาร VOC เหล่านี้มีการกลายพันธุ์ที่สำคัญในขัดขวางและโปรตีนของไวรัสอื่นๆ ที่ร่วมกันปรับเปลี่ยนการเกิดโรค การหลีกเลี่ยงของภูมิคุ้มกัน และความสามารถในการแพร่เชื้อ ในช่วงปลายเดือนพฤศจิกายนปี 2021 มีรายงาน SARS-CoV-2 Omicron BA.1 ครั้งแรกในแอฟริกาใต้ ซึ่งแพร่กระจายอย่างรวดเร็วและเข้ามาแทนที่ Delta เนื่องจากเป็นตัวแปร SARS-CoV-2 ที่หมุนเวียนอย่างแพร่หลายในช่วงต้นปี 2022 Omicron BA .1 มีการเปลี่ยนแปลงของกรดอะมิโนมากกว่า 30 รูปแบบอย่างรวดเร็วเมื่อเปรียบเทียบกับ SARS-CoV ของบรรพบุรุษ-2 ซึ่งส่งผลให้เกิดคุณสมบัติทางไวรัสวิทยาที่เป็นเอกลักษณ์ รวมถึงความสามารถในการก่อโรคที่ลดลง ความสามารถในการแพร่เชื้อที่เพิ่มขึ้น13–17 และการหลีกเลี่ยงภูมิคุ้มกันที่เกิดจากวัคซีน18– 20 เนื่องจาก Omicron และเชื้อสายย่อยของมันคือสายพันธุ์ SARS-CoV-2 ที่มีอิทธิพลเหนือกว่า จึงเป็นสิ่งสำคัญที่จะต้องเข้าใจลักษณะที่ปรากฏของการติดเชื้อ Omicron ในประชากรที่เป็นโรคอ้วน สิ่งสำคัญที่สุดคือ ประสิทธิผลของการฉีดวัคซีน mRNA สำหรับโควิด-19 ในรัฐที่เป็นโรคอ้วนยังคงมีการสำรวจไม่ครบถ้วน
ในการศึกษานี้ เราใช้หนู DIO เป็นแบบจำลองสัตว์เพื่อจำลองการปรากฏของ Alpha และ Omicron BA.1 ในบริบทของการเกิดโรค SARS-CoV-2 การติดเชื้อซ้ำ และการใช้วัคซีน mRNA ของ COVID-19 การป้องกันในคนอ้วน ประการแรก เราพบว่า SARS-CoV-2 ส่งผลให้เกิดโรคที่รุนแรงในหนู DIO มากกว่าในหนูไร้ไขมัน ในขณะเดียวกัน เราพบว่าการตอบสนองของแอนติบอดีที่ทำให้ซีรั่มเป็นกลางและการตอบสนองของทีเซลล์ที่จำเพาะต่อไวรัสที่เกิดจากการติดเชื้อไวรัสหรือการฉีดวัคซีน mRNA ของ COVID-19 ถูกลดทอนลงอย่างรุนแรงในหนู DIO ซึ่งส่งผลให้มีความไวต่อการติดเชื้อซ้ำสูงขึ้นและ การป้องกันวัคซีนป้องกันเชื้อโควิด-19 mRNA ของหนู DIO น้อยลง เมื่อเปรียบเทียบกับหนูไร้ไขมัน ประการที่สอง แม้ว่าการติดเชื้อ Omicron BA.1 จะทำให้เกิดโรคในหนูไร้ไขมัน แต่ก็ส่งผลให้เกิดโรคที่รุนแรงในหนู DIO ซึ่งคล้ายกับหนูอัลฟ่า ประการที่สาม เราแสดงให้เห็นว่าการฉีดวัคซีน mRNA ของโควิด{-19 สองโดสล้มเหลวในการกระตุ้นแอนติบอดีที่ทำให้ซีรั่มเป็นกลางต่อ Omicron BA.1 แต่สามารถแก้ไข Omicron BA ได้1- ทำให้เกิดความเสียหายของปอดในหนู DIO การศึกษาการถอดเสียงของเนื้อเยื่อปอดแสดงให้เห็นว่าการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันโดยกำเนิดของไวรัสในหนู DIO ได้รับการควบคุมอย่างมีนัยสำคัญโดยการฉีดวัคซีน ซึ่งบ่งชี้ว่าการฉีดวัคซีน mRNA ของ COVID-19 ให้การปกป้องหนู DIO โดยการเพิ่มภูมิคุ้มกันต้านไวรัสโดยธรรมชาติของโฮสต์ โดยรวมแล้ว การศึกษาของเราเผยให้เห็นความรู้ที่สำคัญเกี่ยวกับการติดเชื้อ SARS-CoV-2 Alpha และ Omicron BA.1 การติดเชื้อซ้ำ และการฉีดวัคซีน mRNA ของ COVID-19 ในหนู DIO
cistanche tubulosa-ปรับปรุงระบบภูมิคุ้มกัน
คลิกที่นี่เพื่อดูผลิตภัณฑ์ Cistanche Enhance Immunity
【สอบถามเพิ่มเติม】 อีเมล:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
วิธีการ
คำแถลงด้านจริยธรรม
การทดลองทั้งหมดที่เกี่ยวข้องกับ SARS-CoV-2 ที่เป็นเชื้อได้ดำเนินการในศูนย์ระดับความปลอดภัยทางชีวภาพ-3 ที่ภาควิชาจุลชีววิทยา มหาวิทยาลัยฮ่องกง (HKU) ตามขั้นตอนการปฏิบัติงานมาตรฐาน ขั้นตอนการทดลองในสัตว์ทั้งหมดได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการการใช้สัตว์มีชีวิตในการสอนและการวิจัยของ HKU ภายใต้ CULATR 5786-21 และการปฏิบัติตามแนวทางการใช้สัตว์
ไวรัสและความปลอดภัยทางชีวภาพ
SARS-CoV-2 B.1.1.7/Alpha (GISAID: EPI_ISL_1273444) และ B.1.1.529.1/Omicron BA.1 (GenBank: OM212469)18 ถูกแยกออก จากผู้ป่วยที่ได้รับการยืนยันจากห้องปฏิบัติการ-19ในฮ่องกง Alpha และ Omicron BA.1 ได้รับการเพาะเลี้ยงและไตเตรทโดยการวิเคราะห์คราบจุลินทรีย์ในเซลล์ VeroE6-TMPRSS2 และเก็บไว้ที่ −80 ◦C ก่อนการใช้งาน
สัตว์
หนูเมาส์ C57BL/6N ได้มาจากศูนย์วิจัยยาเปรียบเทียบของ HKU และเก็บไว้ในห้องปฏิบัติการสัตว์ BSL- 2 โดยมีรอบ 12-h-interval กลางวัน/กลางคืน21 ดำเนินการเหนี่ยวนำโรคอ้วนตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ หนูหย่านมตัวเมียอายุ 6 3 สัปดาห์ ได้รับการสุ่มแบ่งออกเป็น 2 กลุ่ม กลุ่มหนึ่งได้รับอาหารที่มีไขมันสูง 45 Kcal% (D12451, Research Diet Inc, New Brunswick, NJ) เป็นเวลา 20 สัปดาห์เพื่อกระตุ้นให้เกิดอาหาร- กระตุ้นให้หนูอ้วน (DIO) และกลุ่มควบคุมได้รับอาหารเม็ดมาตรฐานที่มีอาหาร 13.2 กิโลแคลอรี (PicoLab Rodent Diet 20, LabDiet Code 5053, PMI) เป็นหนูไร้มัน น้ำหนักตัวเฉลี่ยของเมาส์ DIO ที่ใช้ในการศึกษานี้คือ 40–50 กรัม และกลุ่มหนูควบคุมไม่ติดมันอยู่ที่ 25–30 กรัม
การเพาะเลี้ยงเซลล์และการกระตุ้น
ถุงลมขนาดใหญ่ (AM) ถูกแยกออกโดยการล้างหลอดลมและถุงลม (BAL) โดยสรุป หลังจากที่หนูถูกสังเวยโดยการฉีดเพนโทบาร์บิทอลในช่องท้อง ปอดถูกล้างด้วย PBS เย็น 1 มิลลิลิตรเป็นเวลาสามครั้งเพื่อให้ได้ของเหลวสำหรับล้างหลอดลมหลอดลม (BALF) 3 มิลลิลิตร BALF จากหนูในกลุ่มเดียวกันถูกรวมกลุ่มและปั่นแยกที่ 500×กรัม เป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 °C เพื่อรวบรวมเซลล์ที่ตกตะกอน AM ถูกเพาะด้วยความหนาแน่น 50,000 เซลล์/หลุมใน 96- แผ่นหลุมเพาะเลี้ยงใน RPMI 1640 บวก 1% เพนิซิลลิน-สเตรปโตมัยซิน ที่ 37 —C ในบรรยากาศชื้นของ 5% CO2 เป็นเวลา 2 ชั่วโมง จากนั้นชั้นเดียวของ AM สามารถเกาะติดกับแผ่นเพาะเลี้ยงได้ เซลล์ที่ไม่เกาะติดกันถูกล้างจากแผ่นที่มี PBS และ AM ถูกเพาะเลี้ยง ใน RPMI 1640 บวก 1% เพนิซิลิน-สเตรปโตมัยซิน และ 10% ซีรั่มวัวของทารกในครรภ์ (FBS) โดยมีหรือไม่มีการกระตุ้นของวัคซีน mRNA 1 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร, โพลี (I: C) 100 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร หรือโปรตีนขัดขวาง 100 นาโนกรัม/มิลลิลิตร เป็นเวลา 24 ชั่วโมง .22 ส่วนลอยเหนือตะกอนถูกรวบรวมสำหรับการทดสอบ ELISA เซลล์ถูกล้างอย่างทั่วถึงด้วย PBS และเก็บเกี่ยวเพื่อสกัด RNA
ความท้าทายของ Alpha และ Omicron BA.1 ในหนู
DIO และหนูไร้ไขมันภายใต้การดมยาสลบโดยคีตามีน (100 มก./กก.) และไซลาซีน (10 มก./กก.)23 ได้รับการฉีดวัคซีนในจมูกด้วย 103 PFU ของ Alpha หรือ Omicron BA.1 เจือจางในน้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต (PBS) 20 ul หนูควบคุม ฉีด PBS ในปริมาณเท่ากัน ติดตามน้ำหนักตัวและอาการของหนูที่ติดเชื้อเป็นเวลา 14 วัน อาการของโรครวมถึงขนลุก ท่าโค้ง และหายใจลำบาก โดยให้คะแนนหนึ่งคะแนนสำหรับแต่ละสัญญาณ หนูถูกสังเวยโดยการฉีดเพนโทบาร์บาร์บิทอลในช่องท้องที่ 2 และ 4 วันหลังการติดเชื้อ (dpi) หนู 3-6 ตัวในแต่ละกลุ่มถูกการุณยฆาตเพื่อเก็บตัวอย่างเลือด เนื้อเยื่อปอดและเนื้อเยื่อกังหันจมูกสำหรับการประเมินทางไวรัสวิทยา จุลพยาธิวิทยา และภูมิคุ้มกันวิทยา เก็บตัวอย่างปอดจากหนูแต่ละตัวเพื่อการประเมิน จุดข้อมูลแต่ละจุดในแผงรูปภาพแสดงถึงผลลัพธ์จากเมาส์เพียงตัวเดียว
ขั้นตอนการฉีดวัคซีน
หนูถูกสุ่มแบ่งออกเป็นกลุ่มและได้รับวัคซีน mRNA ของเชื้อโควิด-19 สองโดส (BNT162b2, หมายเลขล็อต 1B004A, BioNTech, เยอรมนี) ทุกๆ 14- วัน วัคซีนนี้ใช้ mRNA ดัดแปลงนิวคลีโอไซด์ซึ่งผลิตขึ้นในอนุภาคนาโนของไขมันที่เข้ารหัส SARS-CoV-2 ของบรรพบุรุษแบบเต็มความยาว DIO และหนูไร้ไขมันถูกฉีดเข้ากล้ามด้วยวัคซีน mRNA สำหรับโควิด-19 50 ul (5 ug) หรือน้ำเกลือปกติเป็นตัวควบคุม24,25 ในวันที่ 14 หลังจากฉีดวัคซีนเข็มแรก เราได้เก็บตัวอย่างเลือดแล้วให้ วัคซีน mRNA เข็มที่สอง ที่ 14 วันหลังการให้ยาครั้งที่สอง ตัวอย่างเลือดถูกเก็บเพื่อประเมินการตอบสนองของแอนติบอดี ต่อมาหนูได้รับการปลูกเชื้อในจมูกด้วย 103 PFU ของ Alpha หรือ Omicron BA.1 ที่ 2 dpi หนูจะถูกสังเวยโดยการฉีดเพนโทบาร์บาร์บิทอลในช่องท้อง และเก็บตัวอย่างซึ่งรวมถึงตัวอย่างเลือด ปอด และเนื้อเยื่อเทอร์บิเนตในจมูกเพื่อการประเมินทางไวรัสวิทยา เนื้อเยื่อวิทยา และภูมิคุ้มกันวิทยา เนื้อเยื่อปอดถูกแยกออกเป็นสามส่วน ปอดซ้ายถูกเก็บเกี่ยวเพื่อการประเมินทางเนื้อเยื่อวิทยา กลีบหางของปอดขวาถูกรวบรวมเป็นเนื้อเดียวกันของปอด และปอดที่เหลือด้านขวามีไว้สำหรับการสกัด RNA
การกำหนดสำเนาของยีน SARS-CoV-2 และระดับไทเตอร์ของไวรัสที่ติดเชื้อในเนื้อเยื่อปอดและเนื้อเยื่อเทอร์บิเนทของจมูก
RNA ทั้งหมดจากเนื้อเยื่อปอดและจมูก turbinate (NT) ของหนูที่ติดเชื้อ Alpha และ Omicron BA.1 ถูกสกัดโดยชุดสกัด MiniBEST Universal RNA (9766, Takara Bio Inc. Shiga, Japan) สำเนาของยีน RNA polymerase (RdRp) ที่ขึ้นกับ SARS-CoV-2 ถูกหาปริมาณโดยชุด RT-PCR ของ QuantiNova Probe (208354, Qiagen) qRT-PCR สำหรับการตรวจหาสำเนาของยีน SARS-CoV-2 RdRp และยีนดูแลทำความสะอาด -actin สำหรับการทำให้เป็นมาตรฐานได้ดำเนินการบนระบบ LightCycler 96 (Roche Applied Sciences, Indianapolis, USA)21 สำหรับการไตเตรทไวรัสที่ติดเชื้อ ทำให้เป็นเนื้อเดียวกันจาก ปอด (กลีบหางของปอดด้านขวา) และเนื้อเยื่อ NT ที่ติดเชื้อ Alpha และ Omicron BA.1 ดำเนินการโดยการทดสอบขนาดยาติดเชื้อในการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ 50% (TCID50) ในเซลล์ VeroE6-TMPRSS2 26 โฮโมจีเนตคือ {{ 19}}พับการเจือจางแบบอนุกรมและบ่มด้วยเซลล์ VeroE6-TMPRSS2 ในจานหลุม 96- เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ตู้ฟัก 37 ◦C ส่วนลอยเหนือตะกอนถูกละทิ้งและเซลล์ถูกบ่มเพิ่มเติมที่ 37 ◦C เป็นเวลา 72 ชม. สังเกตผลกระทบของไซโตพาธีค (CPE) และไทเทอร์การติดเชื้อของเนื้อเยื่อ 50% ถูกกำหนดโดยวิธีการคำนวณจุดสิ้นสุด Reed & Munch26
จุลพยาธิวิทยา อิมมูโนฮิสโตเคมี และการย้อมสีอิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์ของเนื้อเยื่อปอดและเนื้อเยื่อเทอร์บิเนทของจมูก
การย้อมสี Haematoxylin และ Eosin (H&E) ของส่วนเนื้อเยื่อที่ฝังฟอร์มาลินคงที่และพาราฟิน (ส่วนละ 4 μm) ถูกสังเกตสำหรับการเปลี่ยนแปลงทางจุลพยาธิวิทยา ความรุนแรงของจุลพยาธิวิทยาในปอดได้รับคะแนนภายใต้การปกปิดอย่างสมบูรณ์27 โดยการประเมินความแออัดของปอด การแทรกซึมของสิ่งของคั่นกลาง การแทรกซึมของถุงลม และการตกเลือด และได้คะแนน 0–4 ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ 26 เกณฑ์ต่อไปนี้ถูกนำมาใช้สำหรับการให้คะแนน: 0 ส่วนปอดปกติ; 1 ความแออัดของหลอดเลือดการแทรกซึมของหลอดเลือดหรือ peribronchiolar; 2 นอกเหนือจาก 1 ที่มีความแออัดของผนังถุงกระจายและการแทรกซึม; 3, การแทรกซึมของอากาศ, การหลั่ง, การตกเลือดของถุงลมอักเสบเฉพาะที่; 4. พบถุงลมอักเสบกระจาย การย้อมสีอิมมูโนฮิสโตเคมีดำเนินการโดยชุดสารตั้งต้น DAB (3,3 ′ -diaminobenzidine) (Vector Laboratories) ตามที่เราอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ 28 โดยสังเขปสำหรับการตรวจหาแอนติเจน ACE2 นั้น ACE2 recombinant rabbit monoclonal antibodies (MA 5-32307, Invitrogen) คือ ใช้แล้วตามด้วยการพัฒนาสีโดยใช้ชุดซับสเตรต DAB ตรวจพบโปรตีน ACE2 โดย hematoxylin จากนั้นส่วนเนื้อเยื่อด้วยสื่อการติดตั้งถาวร VectaMount (Vector Laboratories) สำหรับการแสดงออกของแอนติเจน SARS-CoV-2 สไลด์ของปอดและเนื้อเยื่อ NT ถูกย้อมด้วยแอนติบอดีภายในองค์กรของโปรตีนนิวคลีโอแคปซิดโปรตีน (NP) ที่ต้าน SARS-CoV-2 ของกระต่าย ตามด้วยแอนติบอดีทุติยภูมิของ FITC –IgG แพะต่อต้านกระต่ายแบบคอนจูเกต (65-6111, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) เกณฑ์ต่อไปนี้ถูกนำมาใช้สำหรับการให้คะแนน NP ปอด: "คะแนน 0"- ไม่มีสัญญาณการย้อมสีเรืองแสง "คะแนน 1" - เฉพาะใน 1–3 เยื่อบุผิวหลอดลมที่มีเซลล์บวกแอนติเจน N; "คะแนน 2"- มากกว่า 3 เยื่อบุผิวหลอดลมที่มีเซลล์บวกแอนติเจน N "คะแนน 3"- เยื่อบุผิว Bronchiolar ที่มีเซลล์บวกจำนวนหนึ่งอยู่ในถุงใกล้เคียง "คะแนน 4" - จุดโฟกัสหลายจุดหรือบริเวณถุงลมขนาดใหญ่ที่มีเซลล์บวกแอนติเจน N NT: "คะแนน 0"- ไม่มีสัญญาณการย้อมสีเรืองแสง "คะแนน 1"- เซลล์บวกแอนติเจนจำนวน N สองสามเซลล์กระจัดกระจายอยู่ในเยื่อบุผิว "คะแนน 2"- เยื่อบุผิวแสดงโฟกัสแอนติเจน N เชิงบวกอย่างต่อเนื่องในเซลล์ที่อยู่ติดกัน "คะแนน 3" - มี N แอนติเจนที่เป็นบวกมากขึ้นจากจุดโฟกัสของเยื่อบุผิวที่กระจายอยู่ในพื้นที่อื่น ภาพถูกจับโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ของแสงฟลูออเรสเซนต์แบบกึ่งมอเตอร์ Olympus BX53 หรือสนามสว่างด้วยซอฟต์แวร์มาตรฐาน OLYMPUS CellSense
cistanche tubulosa-ปรับปรุงระบบภูมิคุ้มกัน
การแยก RNA และปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสการถอดรหัสย้อนกลับแบบเรียลไทม์
RNA ทั้งหมดถูกสกัดจากเนื้อเยื่อที่เป็นเนื้อเดียวกัน (กลีบกะโหลก, ตรงกลางและกลีบเสริมถูกเก็บเกี่ยวสำหรับปอด) และการถอดรหัสแบบย้อนกลับสำหรับ cDNA ดำเนินการโดย MiniBEST Universal RNA Extraction Kit และ RT Reagent Kit (RR036A Takara Bio Inc.) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต . ระดับการแสดงออกของไซโตไคน์ คีโมไคน์ และอินเตอร์เฟรอนถูกตรวจพบโดย qRT-PCR ด้วยไพรเมอร์เฉพาะ (ตารางเสริม S1) โดยใช้ชุด SYBR Premix Ex Taq II (RR820A, Takara Bio Inc.) ค่าของแต่ละยีนถูกทำให้เป็นมาตรฐานด้วยยีนดูแลบ้าน - แอคตินและนำเสนอเป็น 2 − ΔCt ตามที่เราอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ 28, 29
การทดสอบอิมมูโนซอร์เบนท์ที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ (ELISA)
นิวคลีโอโปรตีน (N) ของ SARS-CoV-2 โดเมนการจับตัวรับโปรตีนขัดขวาง (RBD) และ SARS-CoV ที่ไม่ทำงาน-2 ถูกเคลือบใน96-เซลล์อิมมูโนบลาสต์อย่างดี (โมดูล Nunc-Immuno; Nunc A /S, รอสกิลด์, เดนมาร์ก) ใน 0.05 M NaHCO3 และบ่มที่ 4 ◦C ข้ามคืน ตัวอย่างซีรั่มถูกเจือจางแบบอนุกรม 2- เท่าและเติมไปยังแผ่นเคลือบ บ่มที่ 4 ◦C เป็นเวลา 1 ชั่วโมงตามด้วยฮอร์ราดิช เปอร์ออกซิเดส (HRP)-แอนติบอดีทุติยภูมิที่คอนจูเกต (IgG ต้านกระต่ายของกระต่าย, IgG1 ต้านหนูของแพะ IgG2a, IgG2b, ab6728, ab98693, M32307, M32507, Abcam และ Invitrogen) ที่ 37 ◦C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง การพัฒนาสีดำเนินการด้วยสารละลาย 3,3′,5,5′ -tetramethylbenzidine (#N301, Thermo Fisher Scientific) ที่ 37 °C เป็นเวลา 15 นาที และหยุดด้วย H2SO4 อ่านค่าความหนาแน่นของแสง (OD) ที่ 450 นาโนเมตร การไทเทอร์แอนติบอดีถูกกำหนดโดยค่า OD ของจุดตัด ซึ่งตั้งค่าไว้ที่ OD เฉลี่ยของซีรั่มที่ไม่ติดเชื้อที่การเจือจางทั้งหมดบวกด้วย 3 ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน และการเจือจางสูงสุดซึ่งสร้างค่า OD เหนือจุดตัดถูกกำหนดให้เป็นไทเทอร์แอนติบอดีของ ความเข้มข้นของเซรั่ม 30 IFN-, IFN-, อัลบูมินและฮีโมโกลบินถูกกำหนดโดยใช้เมาส์ IFN- (Invitrogen, USA), IFN- (ระบบ R&D, USA), อัลบูมินและฮีโมโกลบิน (Abcam, Cambridge, UK) ชุด ELISA ตาม คำแนะนำของผู้ผลิต
การทดสอบไมโครนิวทรัลไลเซชัน (MNT)
ตัวอย่างซีรั่มถูกเจือจางตามลำดับ 2-เท่าโดยเริ่มจาก 1:10 ใน PBS และผสมกับ 100 TCID 50 ของ SARS-CoV-2 เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ 37 ◦C จากนั้นจึงเติมของผสมลงใน VeroE ที่เพาะไว้ล่วงหน้า 6-TMPRSS2 เซลล์ใน 96-จานหลุมที่ 37 ◦C เป็นเวลา 72 ชั่วโมง สังเกต CPE และปรับไตเตอร์ของแอนติบอดีให้เป็นกลางโดยพิจารณาว่าเป็นการเจือจางสูงสุดของซีรั่มที่ยับยั้งผลของไซโตพาติกได้อย่างสมบูรณ์
รูปที่ 1: SARS-CoV-2 Alpha และ Omicron BA.1 ทำให้เกิดโรคที่รุนแรงในหนู DIO มากกว่าหนูไร้ไขมัน
การทดสอบอิมมูโนสปอตที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ (ELISpot)
ตรวจพบเซลล์ที่สร้าง IgG เฉพาะไวรัสโดยการเพาะเซลล์เดียว (2.5 × 105 เซลล์/ต่อหลุม) สารแขวนลอยของเนื้อเยื่อปอดและม้ามลงในเพลต ELISpot ที่มี SARS-CoV-2 ที่ไม่ทำงาน (5 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ที่ 37 ◦C เป็นเวลา 48 ชม. เซลล์ที่สร้าง IgG ถูกกำหนดด้วยแอนติบอดี IgG ที่ต้านหนูเมาส์แบบคอนจูเกตแบบอัลคาไลน์ฟอสฟาเตส (AP) (62-6522, Invitrogen)31 สำหรับการตรวจหาเซลล์ที่สร้าง IFN ที่จำเพาะต่อไวรัส 2.5 × 105 เซลล์/ต่อเซลล์เดี่ยว สารแขวนลอยของปอดและเนื้อเยื่อม้ามถูกบ่มในแผ่น IFN-ELISpot ที่กระตุ้นด้วย SARS-CoV-2 RBD peptide pool และ N โปรตีนที่ 37 ◦C เป็นเวลา 48 ชั่วโมง เซลล์ที่สร้าง IFN ถูกกำหนดโดยใช้เมาส์ IFN-ELISpot BASIC ชุดอุปกรณ์ (3321-2A, Mabtech, Inc., สตอกโฮล์ม, สวีเดน) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต32
การจัดลำดับ RNA และการวิเคราะห์ข้อมูล
RNA ทั้งหมดจากเซลล์เนื้อเยื่อปอดของ DIO และหนูไร้ไขมัน (n มากกว่าหรือเท่ากับ 3 ต่อกลุ่ม) ถูกแยกได้โดยใช้ NucleoSpin RNA Kit (740955.250, MACHEREY-NAGEL, Duren, Germany) . RNA ที่พร่องและบริสุทธิ์ของ DNA ถูกใช้เพื่อสร้างไลบรารี cDNA แบบเกลียวคู่ (ds) โดยใช้ชุดรีเอเจนต์การเตรียมไลบรารี MGIEasy RNA (MGI, เซินเจิ้น, จีน) ตามโปรโตคอลมาตรฐาน ข้อมูลลำดับถูกกรองด้วย fast v0.20.1 เพื่อถอดอะแดปเตอร์ออกและการอ่านคุณภาพต่ำ 33 การอ่าน Ribosomal RNA (rRNA) ถูกกรองด้วย URMAP v1.0 1480 (Edgar, 2020) และ 34 HISAT2 v2.2.0 ถูกนำมาใช้เพื่อจับคู่การอ่านกับจีโนมอ้างอิงของเมาส์ (GRCm38/ ENSEMBL 84)35 ไฟล์การจัดตำแหน่งใช้สำหรับการประกอบการถอดเสียง การประมาณค่าความอุดมสมบูรณ์ และการตรวจจับการแสดงออกที่แตกต่างกันของ ยีน ระดับการแสดงออกของยีนถูกหาปริมาณโดย StringTie v2.1.5.36 การวิเคราะห์องค์ประกอบหลัก (PCA) ดำเนินการด้วย R v4.0 ยีนที่แสดงออกแตกต่างกัน (DEG) และถูกกำหนดตามจำนวนยีนด้วย DESeq2 v3.15.37 DEG ระหว่างกลุ่มการรักษาที่แตกต่างกันถูกระบุโดยคลัสเตอร์โปรไฟล์โดยมีเกณฑ์เป็น |log2FC| > 1 และค่า FDR <0.05 และใช้สำหรับการวิเคราะห์การเพิ่มคุณค่าที่เกี่ยวข้องกับ Gene Ontology (GO) สารานุกรมเกียวโตของยีนและ Genomes Pathway (KEGG) 38 ยีนทั้งหมดในจีโนมของเมาส์ถูกใช้เป็นพื้นหลังการเสริมสมรรถนะ ImmuCellAI_เมาส์ถูกใช้เพื่อระบุความอุดมสมบูรณ์ของเซลล์ภูมิคุ้มกันโดยอาศัยข้อมูล RNAseq39
การวิเคราะห์ทางสถิติ
ข้อมูลแสดงถึงค่าเฉลี่ยและส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน ความแตกต่างทางสถิติระหว่างทั้งสองกลุ่มได้รับการประเมินด้วยการทดสอบทีของนักเรียนโดยใช้ GraphPad Prism 8 ความแตกต่างทางสถิติระหว่างสามกลุ่มขึ้นไปได้รับการประเมินด้วยการวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียวหรือสองทางโดยใช้ GraphPad Prism 9 ความแตกต่างถูกพิจารณาว่ามีนัยสำคัญทางสถิติเมื่อ p < { {5}}.05. ตัวเลขและกราฟในต้นฉบับจัดทำขึ้นด้วย GraphPad Prism 8, Adobe Illustrator หรือ BioRender.com
การตรวจสอบรีเอเจนต์
แอนติบอดีที่ใช้ในการศึกษาได้รับการตรวจสอบโดยแหล่งทางการค้าที่ซื้อมา ข้อมูลโดยละเอียดเกี่ยวกับรีเอเจนต์ที่ใช้ในการศึกษาสามารถพบได้ในไฟล์การตรวจสอบรีเอเจนต์ของข้อมูลเพิ่มเติม (ตารางเสริม S2)
บทบาทของผู้ให้ทุน
แหล่งเงินทุนไม่มีบทบาทในการออกแบบการศึกษา การรวบรวมข้อมูล การวิเคราะห์หรือการตีความ หรือการเขียนรายงาน
ประโยชน์ของซิสตานช์สำหรับระบบภูมิคุ้มกันของผู้ชาย
ผลลัพธ์
SARS-CoV-2 Alpha และ Omicron BA.1 ส่งผลให้เกิดโรคที่รุนแรงในหนู DIO มากกว่าในหนูไร้ไขมัน
เพื่อให้เข้าใจถึงการเกิดโรคของ SARS-CoV-2 ในบริบทของโรคอ้วน DIO และหนูไร้ไขมันได้รับการฉีดวัคซีนด้วย 103 PFU ของ Omicron BA.1 (B.1.1.529.1) หรือ Alpha (B .1.1.7) ผ่านทางจมูก Omicron BA.1 และ Alpha มีการทดแทน N501Y ในลักษณะขัดขวางที่ทำให้พวกมันแพร่เชื้อไปยังหนูชนิดป่าได้40,41 ในหลักสูตรโรค 14- วัน เราสังเกตเห็นการลดลงอย่างช้าๆ แต่คงที่ ของน้ำหนักตัวในหนูไม่ติดมันที่ติดเชื้ออัลฟ่าโดยมีการสูญเสียน้ำหนักตัวเฉลี่ย 5% ที่ 14 dpi (รูปที่ 1a) ในทางตรงกันข้าม เราสังเกตว่าน้ำหนักตัวเฉลี่ยเพิ่มขึ้น 1.5% ใน Omicron BA1- หนูไม่ติดมันที่ติดเชื้อ ซึ่งบ่งชี้ว่าการเกิดโรคของ Omicron BA.1 ในหนูไม่ติดมันลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (รูปที่ 1a) ซึ่งอยู่ใน ตามการศึกษาล่าสุดจากเราและคนอื่นๆ14,42 อย่างไรก็ตาม การติดเชื้อทั้ง Alpha และ Omicron BA.1 ส่งผลให้น้ำหนักตัวลดลงอย่างรุนแรงมากขึ้นในหนูที่เป็นโรคอ้วน (DIO) ที่เกิดจากอาหาร ซึ่งมีประมาณ 12% ที่ 9 dpi เมื่อเปรียบเทียบ ด้วยน้ำหนักตัวเดิม (100%) ที่ 0 dpi (รูปที่ 1a) สิ่งที่น่าสนใจ แม้ว่ามีความแตกต่างที่ชัดเจนในการเปลี่ยนแปลงน้ำหนักตัวเฉลี่ยระหว่าง Alpha- และ Omicron BA1-หนูไร้ไขมันที่ติดเชื้อ (14 dpi: −5.0% เทียบกับ +1.5%) น้ำหนักตัว การสูญเสีย Alpha- และ Omicron BA 1- หนู DIO ที่ติดเชื้อนั้นส่วนใหญ่เหมือนกัน (14 dpi: −11.1% เทียบกับ −11.4%) (รูปที่ 1a) สอดคล้องกับการวัดน้ำหนักตัว การติดเชื้อ Alpha และ Omicron BA.1 ส่งผลให้เกิดอาการทางคลินิกที่เทียบเคียงได้ในหนู DIO รวมถึงขนเป็นระลอก หลังหลังค่อม และการหายใจลำบากซึ่งสูงสุดที่ 4 dpi (รูปที่ 1b) ในขณะที่เราไม่ได้สังเกตใดๆ สัญญาณของโรคในหนูไม่ติดมันจากการติดเชื้อ Alpha หรือ Omicron BA.1 ต่อไปเราประเมินการเปลี่ยนแปลงทางเนื้อเยื่อวิทยาในเนื้อเยื่อทางเดินหายใจส่วนบนและล่าง จำลองหนูที่ติดเชื้อจมูก turbinate (NT) และเนื้อเยื่อปอดถูกแสดงเป็นตัวควบคุม (รูปที่ S1 เพิ่มเติม) เราสังเกตเห็นการทำลายเยื่อบุผิวที่เกิดจากไวรัสเล็กน้อยและการแทรกซึมของการอักเสบใน NT ของทั้ง Alpha และ Omicron BA1- หนูไม่ติดมันที่ติดเชื้อที่ 2 dpi การทำลายล้างของเยื่อบุผิวและการแทรกซึมของระบบภูมิคุ้มกันนั้นน่าทึ่งมากขึ้นในส่วน NT ของหนู DIO ที่ติดเชื้อ Alpha หรือ Omicron BA.1 ที่ 2 dpi เมื่อเปรียบเทียบกับหนูไม่ติดมัน (รูปที่ 1c) ที่ 4 dpi ตรวจพบการทำลายเยื่อบุผิว NT เล็กน้อยด้วยเศษเซลล์ลูมินัลบางส่วนในหนูไม่ติดมันที่ติดเชื้ออัลฟ่า ในขณะที่ NT ของ Omicron BA1- หนูไม่ติดมันที่ติดเชื้อปรากฏค่อนข้างสมบูรณ์ อย่างไรก็ตาม เรายังคงตรวจจับการทำลายของเยื่อบุผิวอย่างรุนแรง เศษ luminal และการแทรกซึมของเซลล์ภูมิคุ้มกันใต้เยื่อเมือกในส่วน NT ของหนู DIO ในวันที่ 4 หลังจากการติดเชื้อ Alpha หรือ Omicron BA.1 (รูปที่ 1c) ในเนื้อเยื่อปอดของหนูไร้ไขมัน การติดเชื้ออัลฟ่าส่งผลให้เกิดการอักเสบของคั่นระหว่างหน้าเฉพาะที่และความแออัดของเส้นเลือดฝอยในถุงลมเล็กน้อยที่ 2 และ 4 dpi ในขณะที่การติดเชื้อ Omicron BA.1 ส่งผลให้เกิดการอักเสบของคั่นระหว่างหน้าในปอดที่ 2 dpi แต่ส่วนใหญ่ได้รับการแก้ไขที่ 4 dpi (รูปที่. 1วัน) ในทางตรงกันข้าม ความเสียหายทางเนื้อเยื่อวิทยาที่รุนแรงกว่าของถุงลมถูกพบในเนื้อเยื่อปอดของหนู DIO หลังจากการติดเชื้อทั้ง Alpha หรือ Omicron BA.1 ซึ่งแสดงออกมาเป็นการอุดตันของหลอดเลือดในปอดอย่างรุนแรงที่ 2 dpi มีการสังเกตการแทรกซึมของเซลล์ภูมิคุ้มกันในเยื่อหุ้มปอดและหลอดเลือดในหลอดเลือดเพิ่มขึ้น เช่นเดียวกับเซลล์ภูมิคุ้มกันและสารหลั่งของของเหลวในถุงถุงที่ 4 dpi (รูปที่ 1d) ความเข้มข้นของอัลบูมินในของเหลวล้างหลอดลมในหลอดลมในหนู DIO สูงกว่าในหนูไม่ติดมันอย่างมีนัยสำคัญในวันที่ 4 หลังจากการติดเชื้ออัลฟ่า ซึ่งบ่งชี้ว่าการซึมผ่านของเส้นเลือดฝอยในถุงลมเพิ่มขึ้นในหนู DIO ที่ติดเชื้อ SARS CoV -2- (รูปที่ S2 เสริม) สอดคล้องกับการค้นพบเหล่านี้ การประเมินเนื้อเยื่อปอดแบบกึ่งปริมาณบ่งชี้ว่าการติดเชื้อของทั้ง Omicron BA.1 และ Alpha ส่งผลให้เกิดจุลพยาธิวิทยาปอดที่รุนแรงในหนู DIO มากกว่าในหนูไม่ติดมัน (รูปที่ 1e) โดยรวมแล้ว ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่าการติดเชื้อ SARS-CoV-2 ส่งผลให้เกิดอาการของโรคที่รุนแรงในหนู DIO มากกว่าในหนูไร้ไขมัน สิ่งสำคัญ แม้ว่า Omicron BA.1 จะทำให้เกิดโรคได้น้อยกว่าอัลฟ่าในหนูไร้ไขมัน แต่สายพันธุ์ SARS CoV-2 ทั้งสองสายพันธุ์นั้นทำให้เกิดโรคได้มากกว่าและทำให้เกิดโรคที่คล้ายคลึงกันในหนู DIO
รูปที่ 2: SARS-CoV-2 ทำซ้ำได้อย่างมีประสิทธิภาพในหนู DIO มากกว่าในหนูไร้ไขมัน
SARS-CoV-2 จำลองแบบอย่างมีประสิทธิภาพในหนู DIO มากกว่าในหนูไร้ไขมัน
ต่อไปเราถามว่า Omicron BA.1 และ Alpha ทำซ้ำได้อย่างมีประสิทธิภาพมากขึ้นในเนื้อเยื่อทางเดินหายใจของหนู DIO หรือไม่เมื่อเปรียบเทียบกับหนูที่ไม่ติดมัน เราพบว่าทั้ง Alpha และ Omicron BA.1 จำลองแบบไปยังระดับที่สูงกว่าในเนื้อเยื่อปอดของหนู DIO มากกว่าในหนูไม่ติดมันที่ 2 และ 4 dpi (รูปที่ 2a และ b) เพื่อให้สอดคล้องกับรายงานก่อนหน้านี้ Omicron BA.1 จำลองแบบไปที่ระดับต่ำกว่าอัลฟ่าในเนื้อเยื่อปอดของหนูไม่ติดมัน โดยเฉพาะอย่างยิ่ง ค่าไทเทอร์ติดเชื้อของ Omicron BA.1 คือ 26.1- และ 3.8-ต่ำกว่าของ Alpha ที่ 2 และ 4 dpi ตามลำดับ ในทางตรงกันข้าม Omicron BA.1 และ Alpha จำลองแบบไปที่ระดับใกล้เคียงกันในเนื้อเยื่อปอดของหนู DIO โดยการวัดสำเนาของยีน RdRp และ titers การติดเชื้อ (รูปที่ 2a และ b) นอกจากนี้เรายังตรวจพบรูปแบบที่คล้ายกันของยีน RdRp ของไวรัสและ titer การติดเชื้อในเนื้อเยื่อ NT โดยที่ Omicron BA.1 และ Alpha จำลองแบบไปยังระดับที่เทียบเคียงได้ในหนู DIO แต่ไม่ได้อยู่ในหนูไม่ติดมัน (รูปที่ 2c และ d) โดยการย้อมสีอิมมูโนฟลูออเรสเซนต์ เราตรวจพบการแสดงออกของไวรัสนิวคลีโอแคปซิด (N) ที่โดดเด่นมากขึ้นในปอดและเนื้อเยื่อ NT ของหนู DIO ที่ติดเชื้อ Omicron BA.1 หรืออัลฟ่าเมื่อเปรียบเทียบกับหนูไม่ติดมันที่ทั้ง 2 และ 4 dpi (รูปที่ 2e และ f และเสริม มะเดื่อ S3) ในแบบคู่ขนาน เราได้วัดปริมาณการแสดงออกของอินเตอร์เฟอรอนสำคัญ (IFNs) และไซโตไคน์ที่ทำให้เกิดการอักเสบในเนื้อเยื่อปอด ผลลัพธ์ของเราแสดงให้เห็นว่า Omicron BA.1 และ Alpha กระตุ้นให้เกิดระดับ IFN- ในหนู DIO ที่ลดลงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเปรียบเทียบกับหนูที่ไม่ติดมัน (รูปที่ 2g และรูปที่ S4 เสริม) ในทางตรงกันข้าม ไซโตไคน์ที่ทำให้เกิดการอักเสบซึ่งรวมถึง IL -6 และ IP -10 ถูกกระตุ้นในระดับที่สูงขึ้นในหนู DIO โดยการติดเชื้อ Omicron BA.1 และอัลฟ่าเมื่อเปรียบเทียบกับหนูไม่ติดมัน (รูปที่ 2 ชม.) นอกจากนี้ เราประเมินการแสดงออกพื้นฐานของ ACE2 และ TMPRSS2 ในหนูไม่ติดมันและหนู DIO ที่ไม่ติดเชื้อ และพบว่า ACE2 และ TMPRSS2 ในหนูไม่ติดมันและหนู DIO นั้นแสดงออกมาในระดับที่เทียบเคียงได้ อย่างไรก็ตามการย้อมสีอิมมูโนฮิสโตเคมีดำเนินการกับการแสดงออกของแอนติเจน ACE2 ตรวจพบความเข้มข้นที่สูงขึ้นของ ACE2 ในเยื่อบุหลอดลมและถุงลมของหนู DIO ที่ไม่ติดเชื้อเมื่อเปรียบเทียบกับหนูไม่ติดมัน (รูปที่ S5 เสริม) การค้นพบเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าการแสดงออก IFN ที่บกพร่องและการแสดงออกของ ACE2 ที่สูงขึ้นในหนู DIO อาจมีส่วนทำให้เกิดการจำลองแบบของไวรัสที่สูงขึ้นและการตอบสนองต่อการอักเสบที่เพิ่มขึ้น นำไปสู่ความเสียหายของเนื้อเยื่อที่รุนแรงยิ่งขึ้นในหนู DIO
รูปที่ 3: ภูมิคุ้มกันแบบปรับตัวที่ได้มาจากการติดเชื้อ SARS-CoV-2 ครั้งก่อนไม่สามารถปกป้องหนู DIO ได้มีประสิทธิภาพ ก
ภูมิคุ้มกันแบบปรับตัวที่ได้มาจากการติดเชื้อ SARS-CoV-2 ครั้งก่อนไม่สามารถปกป้องหนู DIO ได้มีประสิทธิภาพ
ถัดไป เพื่อทำความเข้าใจประสิทธิภาพการป้องกันของภูมิคุ้มกันแบบปรับตัวต่อการติดเชื้อซ้ำในสภาวะที่เป็นโรคอ้วน หนูเมาส์ DIO ระยะพักฟื้นและหนูไร้ไขมันถูกทดสอบใหม่ด้วย 103 PFU ของอัลฟ่าในวันที่ 28 หลังการติดเชื้อปฐมภูมิ และตัวอย่างถูกเก็บเกี่ยวที่ 2 วันหลังการติดเชื้อซ้ำ ( dpr) (รูปที่ 3a) เราวิเคราะห์ IgG แอนติบอดีต่อแอนติเจนของ SARS-CoV-2 ในตัวอย่างซีรั่มที่ถ่ายในวันที่ 14 หลังการติดเชื้ออัลฟ่าปฐมภูมิ และพบว่าไตของ IgG เทียบกับ SARS CoV-2 N และโดเมนที่มีผลผูกพันตัวรับที่ขัดขวาง ( RBD) มีนัยสำคัญในหนู DIO ต่ำกว่าหนูไร้ไขมัน 1.9- (p=0.0128) และ 3.4-เท่า (p=0.0362) ตามลำดับ (รูปที่ 3b) นอกจากนี้ไตเตรทของ IgG รวมที่จับกับไวรัสและชนิดย่อย IgG1, IgG2a และ IgG2b ล้วนต่ำกว่าในหนู DIO อย่างมีนัยสำคัญเมื่อเปรียบเทียบกับหนูไม่ติดมัน (รูปที่ 3b) ตรวจพบไทเทรตการทำให้เป็นกลางในซีรั่มที่ 1:10–1:20 จากหนูไร้ไขมัน 5 ตัวจาก 6 ตัว แต่ตรวจไม่พบจากหนู DIO 6 ตัวใด ๆ (รูปที่ 3b) ซึ่งแนะนำการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันที่ปรับตัวบกพร่องในหนู DIO ต่อ SARS- การติดเชื้อโควี-2 ที่ 2dpr ตรวจพบสำเนาของยีน RdRp ของไวรัสจากเนื้อเยื่อ NT ทั้งหมดและ 3/6 (50%) ของเนื้อเยื่อปอดของหนู DIO ที่ถูกท้าทายอีกครั้ง (รูปที่ 3c) ในขณะที่ไม่มีการดึงสำเนาของยีน RdRp ของไวรัสจาก NT และปอด เนื้อเยื่อของหนูไม่ติดมันที่ถูกท้าทายอีกครั้ง เราตรวจพบโปรตีน N ของไวรัสในเยื่อบุผิวของ NT และเนื้อเยื่อปอดในหนู DIO บ่อยครั้ง แต่ไม่ใช่หนูไม่ติดมัน (รูปที่ 3 มิติ) การตรวจทางจุลพยาธิวิทยาเผยให้เห็นการทำลายของเยื่อบุผิวในเนื้อเยื่อ NT เช่นเดียวกับการอุดตันของผนังถุงลม การแทรกซึมของเยื่อหุ้มหลอดลมและการตกเลือดในถุงลมเฉพาะที่ในเนื้อเยื่อปอดของหนู DIO แต่ไม่ใช่หนูไม่ติดมัน (รูปที่ 3e) ต่อไป เราประเมินการเรียกคืนการตอบสนองของหน่วยความจำภูมิคุ้มกันต่อการติดเชื้อซ้ำในหนูไร้ไขมันและหนู DIO เราพบว่าเซลล์ที่ผลิต IFN และ IgG เฉพาะไวรัสในเนื้อเยื่อปอดและม้ามของหนู DIO นั้นต่ำกว่าหนูไร้ไขมันอย่างมีนัยสำคัญที่ 2dpr (รูปที่ 3f และ g) ที่สำคัญเราไม่สามารถตรวจพบ titer แอนติบอดีที่ทำให้เป็นกลางต่อ Alpha ในซีรั่มของหนู DIO ในวันที่ 2 หลังจากการติดเชื้ออัลฟ่าอีกครั้ง ในขณะที่หนูไม่ติดมันที่ติดเชื้อซ้ำ 4/6 (66.7%) มี titer ที่ทำให้เป็นกลางที่ 1 :10 (รูปที่ 3 ชม.) ดังนั้น การค้นพบของเราชี้ให้เห็นว่าหนู DIO ไวต่อการติดเชื้อซ้ำมากกว่า เนื่องจากการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันของเซลล์ B และ T เซลล์ที่ปรับตัวได้ไม่เพียงพอต่อการติดเชื้อ SARS-CoV -2
รูปที่ 4: การฉีดวัคซีน mRNA ของโควิด-19 ให้การป้องกันการติดเชื้ออัลฟ่าในหนู DIO ได้น้อยลง เนื่องจากการตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกันแบบปรับตัวลดลง ก
การฉีดวัคซีน mRNA ของโควิด-19 ให้การป้องกันการติดเชื้ออัลฟ่าในหนู DIO ได้น้อยลง เนื่องจากการตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกันแบบปรับตัวลดลง
เพื่อสำรวจประสิทธิภาพของการป้องกันหนู DIO หลังจากสร้างภูมิคุ้มกันด้วยวัคซีน mRNA เราได้ฉีด DIO และหนูไร้ไขมันด้วยแผนการฉีดวัคซีน mRNA ของเชื้อ COVID-19 สองโดส ตามด้วยการทดสอบอัลฟ่าที่ 14 วันหลังการเพิ่มดังที่แสดงในรูปที่ 4ก. สำหรับเนื้อเยื่อ NT เราตรวจพบยีน RdRp ของไวรัสใน 3/6 (50%) และระดับไทเทอร์ของการติดเชื้อใน 2/6 (33.3%) ของหนูทดลองไม่ติดมันที่ได้รับการฉีดวัคซีน ในขณะที่เราตรวจพบยีน RdRp ของไวรัสและไทเทอร์ของการติดเชื้อในหนูที่ได้รับการฉีดวัคซีนทั้งหมด หนู DIO (รูปที่ 4b) แสดงให้เห็นว่าการติดเชื้อหลังการฉีดวัคซีนที่ก้าวหน้านั้นเกิดขึ้นได้ง่ายกว่าในหนู DIO อย่างมีนัยสำคัญเมื่อเปรียบเทียบกับหนูที่ไม่ติดมัน เพื่อให้สอดคล้องกับรายงานก่อนหน้านี้ที่แนะนำว่าการฉีดวัคซีนให้การป้องกันระบบทางเดินหายใจส่วนล่างที่ดีกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับระบบทางเดินหายใจส่วนบนในแบบจำลองของมนุษย์และสัตว์43,44 เราไม่ได้ตรวจพบสำเนายีนของไวรัสหรือไวรัสติดเชื้อจากเนื้อเยื่อปอดใดๆ ที่ได้รับวัคซีน หนูไม่ติดมัน (รูปที่ 4c) ในทางตรงกันข้าม เราตรวจพบยีน RdRp ของไวรัสใน 3/6 (50%) และระดับการติดเชื้อใน 4/6 (66.7%) ของเนื้อเยื่อปอดของหนู DIO ในทางจุลพยาธิวิทยา เราสังเกตเห็นการทำลายเยื่อบุผิวอย่างกว้างขวางในเนื้อเยื่อ NT ของหนู DIO ที่ได้รับการฉีดวัคซีนหลังจากการท้าทายโดยไวรัสอัลฟ่า ในขณะที่ตรวจพบความเสียหายของเนื้อเยื่อ NT ในระดับที่น้อยกว่าในหนูที่ได้รับการฉีดวัคซีนไม่ติดมัน (รูปที่ 4d) ในเนื้อเยื่อปอดของหนู DIO ที่ได้รับการฉีดวัคซีน เราตรวจพบความแออัดและการแทรกซึมในช่องว่างของถุงลมพร้อมกับจุดโฟกัสของการตกเลือดในถุงจากการติดเชื้ออัลฟ่า ในขณะที่ความเสียหายทางจุลพยาธิวิทยาเหล่านี้ส่วนใหญ่หายไปในเนื้อเยื่อปอดของหนูไม่ติดมันที่ได้รับการฉีดวัคซีน (รูปที่ 4e) เพื่อให้สอดคล้องกับการค้นพบนี้ การฉีดวัคซีน mRNA ของ COVID-19 ช่วยลดการแสดงออกของ SARS-CoV- 2 N ในหนูที่ไม่ติดมันและหนู DIO ในเนื้อเยื่อ NT (รูปที่ 4f) ในเนื้อเยื่อปอด สัญญาณ N ของไวรัสถูกตรวจพบในหนู DIO ที่ได้รับการฉีดวัคซีนแล้วเท่านั้น แต่ไม่ใช่หนูที่ได้รับการฉีดวัคซีนแล้ว (รูปที่ 4 ก.) ต่อไป เราพบว่าเซลล์ที่สร้าง IFN- และ IgG เฉพาะไวรัสในเนื้อเยื่อม้ามของหนู DIO ที่ได้รับการฉีดวัคซีนนั้นต่ำกว่าอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเปรียบเทียบกับในหนูไม่ติดมันที่ได้รับวัคซีนในวันที่ 2 หลังการติดเชื้ออัลฟ่า (รูปที่ 4 ชม.) ที่สำคัญ การทดสอบการทำให้เป็นกลางในระดับไมโครตรวจพบเฉพาะแอนติบอดีที่ทำให้เป็นกลางต่ออัลฟ่าในซีรั่มของหนู DIO ที่ 14 วันหลังการฉีดวัคซีนครั้งที่สอง และ 2 วันหลังจากการท้าทายไวรัส แต่ระดับคือ 28-เท่า (p < 0.0001) และ 21 .8- เท่า (p=0.0053) ต่ำกว่าของหนูไร้ไขมัน ตามลำดับ (รูปที่ 4i) โดยรวมแล้ว ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่าการตอบสนองของแอนติบอดีที่ปรับตัวได้ต่อการฉีดวัคซีน mRNA ของโควิด-19 มีความบกพร่องในหนูเมาส์ DIO
การฉีดวัคซีน mRNA ของโควิด-19 ช่วยแก้ไขความเสียหายของปอดที่เกิดจากความท้าทายของ Omicron BA.1 ในหนู DIO ในกรณีที่ไม่มีแอนติบอดีที่ทำให้เป็นกลางที่ตรวจพบได้
ต่อไป เราถามว่าการฉีดวัคซีน mRNA สำหรับโควิด{{0}} ที่ขยายระยะเวลาใดจะช่วยปกป้องหนู DIO จาก SARS-CoV-2 Omicron BA.1 ด้วยเหตุนี้ อันดับแรก เราได้ทดสอบไตเตรทของแอนติบอดีที่ทำให้เป็นกลางในซีรั่มเทียบกับ Omicron BA.1 และตรวจพบไตเตรทต่ำในหนูไร้ไขมันที่ 14 วันหลังการเพิ่ม ในขณะที่ไม่มีการตรวจพบไตเตรทของแอนติบอดีที่ทำให้เป็นกลางในหนู DIO แม้ว่าจะฉีดวัคซีนแล้วสองครั้งก็ตาม โควิด{{ 6}} mRNA ที่เพิ่มขึ้นหรือ 2 วันหลังจากการติดเชื้อ Omicron BA.1 (รูปที่ 5a และ b) แนะนำให้ฉีดวัคซีนในหนู DIO ทำให้เกิด cross antibody เล็กน้อยกับ Omicron BA.1 ถัดไป DIO และหนูไร้มันถูกท้าทายด้วย 103 PFU ของ Omicron BA.1 ผ่านเส้นทาง intranasal ที่ 14 วันหลังการฉีดวัคซีนกระตุ้น (รูปที่ 5a) ในเนื้อเยื่อ NT การฉีดวัคซีน COVID-19 mRNA ช่วยลดการจำลองแบบของ Omicron BA.1 และไตเตรติดเชื้อในหนูไม่ติดมันได้เล็กน้อย แต่มีผลเพียงเล็กน้อยในหนู DIO เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมที่ไม่ได้รับการฉีดวัคซีน (รูปที่ 5c) สิ่งที่น่าสนใจคือ การฉีดวัคซีน mRNA สำหรับโควิด-19 ลดการจำลอง Omicron BA.1 ในเนื้อเยื่อปอดของหนู DIO ลงอย่างมีนัยสำคัญ เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมที่ไม่ได้รับการฉีดวัคซีน แม้ว่าจะไม่มีประสิทธิภาพเท่ากับการยับยั้ง Omicron BA.1 อย่างสมบูรณ์ในเนื้อเยื่อปอดของหนูที่ได้รับวัคซีนไร้ไขมัน หนูเมาส์ (รูปที่ 5d) โดยเฉพาะอย่างยิ่ง สำเนาของยีน Omicron BA.1 RdRp ลดลง 867- เท่า (p=0.0087) และ titre สำหรับการติดเชื้อ 7979 9- เท่า (p < 0.0001) ในหนู DIO ที่ได้รับการฉีดวัคซีน . สอดคล้องกับการค้นพบทางไวรัสวิทยาข้างต้น การฉีดวัคซีน mRNA ของโควิด-19 มีประสิทธิภาพน้อยลงในการลดการแสดงออกของแอนติเจน Omicron BA.1 ในเนื้อเยื่อ NT ของหนูไร้ไขมันและ DIO แต่ลดการแสดงออกของแอนติเจน Omicron BA.1 ในเนื้อเยื่อปอดของหนูไร้ไขมันและ DIO (รูปที่ 5จ) ที่ 2 dpi การติดเชื้อ Omicron BA.1 ส่งผลให้เกิดความแออัดและการแทรกซึมเข้าไปในช่องว่างของถุงลมในระดับหนึ่ง ร่วมกับอาการตกเลือดในปอดและความเสียหายของเยื่อบุผิวในหนู DIO ที่ไม่ได้รับการฉีดวัคซีน ซึ่งลดลงโดยการฉีดวัคซีน mRNA ของ COVID -19 (รูปที่ 5f) ที่สำคัญ เราพบว่าความเข้มข้นของ IFN- และ IFN- ในเนื้อเยื่อปอดของหนู DIO ที่ได้รับการฉีดวัคซีนนั้นเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเปรียบเทียบกับหนูที่ไม่ได้รับการฉีดวัคซีนที่ 2 dpi หลังจากการท้าทายของ Omicron BA.1 ในขณะที่แอนติบอดีที่ทำให้เป็นกลางในซีรั่มยังคงตรวจไม่พบจากการฉีดวัคซีน หนู DIO (รูปที่ 5 ก.) ความรุนแรงของโรคโดยรวมจากการเปลี่ยนแปลงของน้ำหนักตัวแสดงให้เห็นว่าการฉีดวัคซีน mRNA ของ COVID -19 ช่วยลดการสูญเสียน้ำหนักตัวสูงสุดในหนู DIO เป็น 9% เมื่อเปรียบเทียบกับ 13% ในหนู DIO ที่ไม่ได้รับการฉีดวัคซีน (รูปที่ S6 เสริม) เมื่อนำมารวมกัน ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่าแม้จะกระตุ้นการตอบสนองของแอนติบอดีในระดับที่ตรวจไม่พบ แต่การฉีดวัคซีน mRNA ของเชื้อ COVID-19 อาจเพิ่มการตอบสนองของไวรัสโดยธรรมชาติเพื่อช่วยบรรเทาความเสียหายของ Omicron BA1- ที่ชักนำให้เกิดความเสียหายต่อเนื้อเยื่อปอดในหนู DIO
รูปที่ 5: วัคซีน mRNA ของโควิด-19 ช่วยแก้ไขความเสียหายของปอดในกรณีที่ไม่มีการตอบสนองของแอนติบอดีที่เป็นกลางในหนู Omicron BA1- หนู DIO ที่ติดเชื้อ ก
การฉีดวัคซีน mRNA ของโควิด-19 ควบคุมการตอบสนองของไวรัสในปอดของหนู DIO
เพื่อให้เข้าใจการตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกันในเนื้อเยื่อปอดของหนู DIO ได้ดีขึ้นด้วยการฉีดวัคซีน mRNA ของ COVID -19 เราได้เก็บเกี่ยวตัวอย่างปอดของหนูและสำรวจโปรไฟล์การถอดเสียงของพวกมันในวันที่ 2 จากการติดเชื้อ Omicron BA.1 (รูปที่ 6a และรูปที่ 2 เพิ่มเติม) S7) น่าประหลาดใจที่เราสังเกตเห็นการเพิ่มคุณค่าของยีนที่เกี่ยวข้องในวิถีทางที่เกี่ยวข้องกับการตอบสนองของไวรัสโดยธรรมชาติ ซึ่งรวมถึง "การตอบสนองของเซลล์ต่อ IFN- และ IFN-" และ "การควบคุมเชิงบวกของการผลิต IFN- และ IFN-" ในเนื้อเยื่อปอดของหนู DIO ที่ได้รับวัคซีน ( รูปที่ 6b) การวิเคราะห์ชุดยีนภูมิคุ้มกันเผยให้เห็นเพิ่มเติมว่าหนู DIO ที่ได้รับการฉีดวัคซีนนั้นมีมาโครฟาจ M1 ที่อุดมสมบูรณ์มากที่สุดในกลุ่มที่ได้รับการประเมินทั้งหมด (รูปที่ 6c) เพื่อประเมินว่าวัคซีน mRNA ของเชื้อโควิด-19 กระตุ้นการตอบสนองของอินเตอร์เฟอรอนของไวรัสในถุงมาโครฟาจหรือไม่ เราได้แยกถุงมาโครฟาจจากหนูไร้ไขมันและหนู DIO และกระตุ้นด้วยวัคซีน mRNA (รูปที่ 7a) เราพบว่าวัคซีน mRNA ในการกระตุ้นหลอดทดลองของแมคโครฟาจในถุงลมของหนูทำให้เกิดการควบคุม RIG-I, MDA5, STAT1, STAT2, ISG15, IFIT3 และ OAS3 อย่างมีนัยสำคัญ ในขณะที่มีเพียงแมคโครฟาจในถุงลมจากหนู DIO เท่านั้นที่แสดงการปรับปรุงการผลิต IFN บน mRNA อย่างมีนัยสำคัญ และระดับโปรตีน (รูปที่ 7b และ c) การค้นพบนี้เสนอแนะโปรไฟล์การตอบสนองที่แตกต่างกันของมาโครฟาจในถุงลมจากหนู DIO และหนูไร้ไขมัน ต่อไป เราแยกแมคโครฟาจในถุงลมของเมาส์ออกจากหนูไร้ไขมันที่ได้รับวัคซีนหรือไม่ได้รับการฉีดวัคซีน และหนู DIO ตามด้วยการกระตุ้นเซลล์ด้วยโพลี (I: C) หรือโปรตีนขัดขวาง SARS-CoV-2 (รูปที่ 7d) การกระตุ้น ในหลอดทดลอง ด้วยโพลี (I: C) เพิ่มการแสดงออกของยีนที่เกี่ยวข้องกับการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติในแมคโครฟาจในถุงจากหนูที่ได้รับการฉีดวัคซีนแบบลีนและ DIO สิ่งที่น่าสนใจคือยีนที่กระตุ้นด้วยอินเตอร์เฟอรอน รวมถึง ISG15, IFIT3 และ OAS3 ได้รับการควบคุมอย่างมากในแมคโครฟาจของถุงลมที่เตรียมไว้ด้วยวัคซีนจากหนู DIO เมื่อเปรียบเทียบกับหนูที่ไม่ติดมัน (รูปที่ 7e) ในแบบคู่ขนาน การกระตุ้นโปรตีนสไปค์ชนิดรีคอมบิแนนท์ SARS-CoV-2 เพิ่มการแสดงออกของการแสดงออกของ RIG-I, TLR3, IL-6, TNF- , IFN- , IFN- , IRF7 และ STAT2 mRNA ในวัคซีน- เตรียมมาโครฟาจในถุงของหนู DIO แต่ไม่ใช่หนูไร้ไขมัน (รูปที่ 7 กรัม) ที่สำคัญการผลิต IFN- เพิ่มขึ้นอย่างมากในถุงขนาดใหญ่ของหนู DIO ที่ได้รับการฉีดวัคซีนเพื่อตอบสนองต่อการกระตุ้นโปรตีนโพลี (I: C) หรือ S (รูปที่ 7f และ h) เมื่อนำมารวมกัน ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่าการฉีดวัคซีน mRNA ของโควิด-19 อาจฟื้นฟูการตอบสนองของไวรัสโดยธรรมชาติในปอดของหนู DIO ผ่านการมอดูเลตการแสดงออกของยีนที่เกี่ยวข้องกับอินเตอร์เฟอรอนประเภท I ในมาโครฟาจของถุงลม
รูปที่ 6: การฉีดวัคซีน mRNA ของโควิด-19 ควบคุมการตอบสนองของไวรัสในปอดของหนู DIO ก
การอภิปราย
โรคอ้วนมีความเกี่ยวข้องกับการตอบสนองต่อการอักเสบที่รุนแรงขึ้นและการหยุดชะงักของระบบภูมิคุ้มกัน ซึ่งส่งผลให้มีความเสี่ยงสูงต่อความรุนแรงและการเข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลสำหรับผู้ป่วยโรคโควิด-1945 ยังไม่ชัดเจนว่าการอักเสบเรื้อรังระดับต่ำและความผิดปกติของการตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกันเหล่านี้เกิดขึ้นได้อย่างไร ปรับวิถีการติดเชื้อ SARS-CoV-2 เพื่อสำรวจการเกิดโรคของโรค SARS-CoV-2 และประเมินประสิทธิภาพของการฉีดวัคซีน mRNA ของโควิด-19 ในคนอ้วน จำเป็นต้องมีแบบจำลองสัตว์ขนาดเล็กที่เหมาะสมอย่างเร่งด่วนเพื่อเลียนแบบลักษณะทางคลินิกของผู้ป่วย COVID-19 . อย่างไรก็ตาม SARS-CoV-2 ของบรรพบุรุษไม่แพร่เชื้อไปยังหนูทดลองประเภทไวด์ เนื่องจาก RBD ของขัดขวางของบรรพบุรุษไม่ได้จับกับเมาส์อย่างมีประสิทธิภาพ ACE2.21,40,41 ที่น่าสนใจคือ สายพันธุ์ SARS-CoV-2 ที่เพิ่งเกิดขึ้นเมื่อเร็วๆ นี้ ซึ่งรวมถึงอัลฟ่า (B.1.1.7), เบตา (B.1.351), แกมมา (P.1) และ Omicron BA.1 (B.1.1.529.1) ได้รับการกลายพันธุ์ของ N501Y ในลักษณะขัดขวาง ซึ่งช่วยให้สามารถข้าม- การแพร่กระจายของสายพันธุ์ของ SARS-CoV-2 ไปยังหนูพันธุ์ป่า41,46–50 ในการศึกษานี้ เราใช้แบบจำลองเมาส์ประเภทป่าที่เป็นโรคอ้วนที่เกิดจากอาหารเพื่อตรวจสอบ SARS-CoV-2 อัลฟ่าและ การเกิดโรคของ Omicron BA.1 การติดเชื้อซ้ำและการฉีดวัคซีน
cistanche tubulosa-ปรับปรุงระบบภูมิคุ้มกัน
ผลลัพธ์ของเราแสดงให้เห็นว่าการติดเชื้อ Omicron BA.1 มีความรุนแรงน้อยกว่าการติดเชื้ออัลฟ่าในหนูไร้ไขมันตามการเปลี่ยนแปลงน้ำหนักตัว ปริมาณไวรัส ระดับไวรัส เครื่องหมายการอักเสบของปอด และการค้นพบทางจุลพยาธิวิทยา ผลลัพธ์เหล่านี้เป็นไปตามรายงานล่าสุดที่สังเกตเห็นระดับการติดเชื้อของ Omicron BA.1 ที่ต่ำกว่าเมื่อเทียบกับสายพันธุ์ SARS-CoV{3}} ก่อนหน้าในสัตว์ทดลอง14,42 ความรุนแรงที่เพิ่มขึ้นของ SARS-CoV{{7} } การติดเชื้อในหนู DIO มากกว่าหนูไม่ติดมันนั้นสอดคล้องกับผลลัพธ์จากการศึกษาล่าสุดที่ดำเนินการในหนูอ้วนและหนูแฮมสเตอร์ที่เกิดจากอาหาร 51–53 ที่น่าสนใจคือเราเปิดเผยว่า Omicron BA.1 จำลองแบบไปสู่ระดับที่ใกล้เคียงกันเมื่อเปรียบเทียบกับ Alpha ในหนู DIO ส่งผลให้เกิดการก่อโรคที่เทียบเคียงได้ของ Omicron BA.1 และ Alpha ในหนู DIO โดยเฉพาะอย่างยิ่ง ไซโตไคน์ที่ทำให้เกิดการอักเสบที่เป็นตัวแทน รวมถึง IP-10 และ IL-6 ถูกกระตุ้นอย่างมากโดยการติดเชื้อ Omicron BA.1 ในหนู DIO ซึ่งบ่งชี้ถึงความเสียหายจากการอักเสบและการเจ็บป่วยที่เพิ่มขึ้น 54 ในขณะเดียวกัน การผลิต IFN ต้านไวรัสในเนื้อเยื่อปอด ของหนู DIO นั้นต่ำกว่าหนูไร้ไขมันอย่างมีนัยสำคัญจากการติดเชื้อทั้ง Alpha และ Omicron BA.1 ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าการติดเชื้อ Omicron BA.1 ในหนู DIO สามารถทำให้เกิดโรคร้ายแรงเช่นเดียวกับหนูอัลฟ่า ปัจจุบันยังไม่เป็นที่เข้าใจอย่างถ่องแท้ว่าโรคอ้วนมีส่วนทำให้เกิดโรคร้ายแรงในโควิดได้อย่างไร-19 ระดับเลปตินที่เพิ่มขึ้นเป็นจุดเด่นของโรคอ้วนที่ควบคุมการเผาผลาญ Jak/STAT และวิถีการส่งสัญญาณ Akt และปรับการทำงานของทีเซลล์ ซึ่งอาจนำไปสู่ผลลัพธ์ที่รุนแรง 55,56 ภูมิคุ้มกันของร่างกายที่ใช้แอนติบอดีเป็นสื่อกลางเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการป้องกันโฮสต์ 57–59 ในขณะที่การกวาดล้างไวรัสที่เหมาะสมที่สุดในหนูที่ติดเชื้อ SARS-CoV-2- ยังต้องการการตอบสนองของทีเซลล์ CD4+ และ CD8+ ด้วย60 ในการศึกษานี้ เราตรวจพบระดับบีเซลล์ที่ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ และการตอบสนองของทีเซลล์จากหนู DIO เมื่อเปรียบเทียบกับหนูไร้ไขมัน ซึ่งอาจส่งผลให้ความไวต่อการติดเชื้อซ้ำเพิ่มขึ้นในหนู DIO กลไกพื้นฐานของการตอบสนองของเซลล์ B และ T เซลล์ที่ลดลงในหนู DIO ยังคงได้รับการสำรวจไม่สมบูรณ์ แต่อาจเกี่ยวข้องกับความบกพร่องของการทำงานของเซลล์ dendritic ตามที่เปิดเผยในการศึกษาไวรัสไข้หวัดใหญ่ครั้งก่อน 61–63
แม้ว่าความสำเร็จของการฉีดวัคซีน mRNA สำหรับโรคโควิด-19 ที่มีประสิทธิภาพสูงในการป้องกันโรคร้ายแรงจากโรค SARS-CoV-2 แต่การเกิดขึ้นของการหลีกเลี่ยงภูมิคุ้มกันในสายพันธุ์ SARS-CoV-2 อาจเป็นอันตรายต่อประสิทธิภาพของวัคซีน43 ในเมาส์ DIO ของเราที่มีข้อกำหนดการสร้างภูมิคุ้มกันสองโดส แอนติบอดีที่ทำให้เป็นกลางในหนูไร้ไขมันถูกตรวจพบทันทีและเสริมประสิทธิภาพด้วยการฉีดวัคซีนโดสที่สองกับ Alpha และ Omicron BA.1 ในทางตรงกันข้าม รูปแบบการสร้างภูมิคุ้มกันสองโดสของการฉีดวัคซีน mRNA ของโควิด-19 ส่งผลให้แอนติบอดีที่ทำให้เป็นกลางในซีรั่มตรวจไม่พบต่อทั้ง Alpha และ Omicron BA.1 ในหนู DIO และไม่มีการตรวจพบแอนติบอดีที่ทำให้เป็นกลางต่อ Omicron BA.1 แม้ในวันที่ 2 เมื่อท้าทาย Omicron BA.1 การค้นพบเหล่านี้บ่งชี้ว่าการตอบสนองของเซลล์บีแบบปรับตัวต่อวัคซีน mRNA นั้นอ่อนแอลงอย่างรุนแรงในหนู DIO ซึ่งอาจเนื่องมาจากความบกพร่องในการพัฒนา การกระตุ้น และการทำงานของเซลล์บี 64–66 สิ่งที่น่าสนใจคือการฉีดวัคซีนให้การป้องกันในระดับหนึ่งต่อ Omicron BA .1-หนู DIO ที่ถูกท้าทายในระบบทางเดินหายใจส่วนล่าง แต่ไม่อยู่ในกังหันจมูกของสัตว์ที่ติดเชื้อ การป้องกันที่ไม่เพียงพอในเนื้อเยื่อ turbinate ของจมูกอาจเนื่องมาจากการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันของเยื่อเมือกไม่เพียงพอต่อการฉีดวัคซีนในกล้ามเนื้อซึ่งล้มเหลวในการกระตุ้นภูมิคุ้มกันที่เพียงพอที่บริเวณเยื่อเมือก67,68
รูปที่ 7: ถุงขนาดใหญ่ (AMs) ของหนู DIO มีส่วนทำให้เกิดการตอบสนองของไวรัสที่ได้รับการควบคุม ก
จากการวิเคราะห์การถอดเสียง เราได้เปิดเผยว่าการฉีดวัคซีน mRNA ของโควิด-19 เพิ่มการควบคุมการตอบสนองของยาต้านไวรัสในปอดของหนู DIO การทดลองต่อมาเผยให้เห็นว่าการผลิต IFN ในการตอบสนองต่อการกระตุ้นโปรตีนขัดขวางโพลี (I: C) หรือ SARS-CoV-2 ได้รับการเสริมในมาโครฟาจในถุงลมของหนู DIO ที่ได้รับการฉีดวัคซีน เมื่อรวมกับปริมาณไวรัสที่ลดลงและการเปลี่ยนแปลงทางจุลพยาธิวิทยา และความเข้มข้นที่เพิ่มขึ้นของ IFN- / ในปอดของ Omicron BA.1- หนู DIO ที่ได้รับการฉีดวัคซีนที่ถูกท้าทาย การค้นพบของเราชี้ให้เห็นว่าการฉีดวัคซีน mRNA ช่วยเพิ่มภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติของโฮสต์ในสัตว์อ้วนที่ มีส่วนช่วยในการปกป้องที่สังเกตได้ โดยรวมแล้ว การศึกษาของเราเผยให้เห็นความรู้ที่สำคัญเกี่ยวกับการติดเชื้อ SARS-CoV-2 Alpha และ Omicron BA.1 การติดเชื้อซ้ำ และการฉีดวัคซีนในหนูอ้วนที่เกิดจากอาหาร ซึ่งให้ข้อมูลเชิงลึกเกี่ยวกับกลยุทธ์การจัดการ การรักษา และการฉีดวัคซีนสำหรับ ประชากรอ้วน การศึกษาของเรามีข้อ จำกัด หลายประการ. อันดับแรก เราทำการทดสอบซ้ำที่ 28 วันหลังการติดเชื้อเบื้องต้น ในสถานการณ์ในชีวิตจริง ควรติดตามการมีอายุยืนยาวของหน่วยความจำและการป้องกันการติดเชื้อซ้ำในผู้ป่วยในกรอบเวลาที่นานขึ้น ประการที่สอง หนูตัวเมียถูกนำมาใช้ในการศึกษานี้ เนื่องจากเป็นที่ทราบกันว่าตัวเมียมีการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติและการปรับตัวที่แข็งแกร่งกว่าตัวผู้69 การตอบสนองทางภูมิคุ้มกันที่แตกต่างกันต่อ SARS-CoV-2 ระหว่างเพศและบทบาทของพวกเขาในการพัฒนาโรคของโควิด{{ 19}} ควรมีการสำรวจเพิ่มเติม ประการที่สาม เราใช้เฉพาะแบบจำลองหนูพันธุ์ป่าสำหรับการศึกษานี้เท่านั้น ควรมีการประเมินเพิ่มเติมในมนุษย์ในการศึกษาทางคลินิกในอนาคตเพื่อยืนยันและสำรวจเพิ่มเติมที่เราค้นพบว่าการฉีดวัคซีน mRNA ของเชื้อโควิด-19 ปรับปรุงการตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติหรือไม่ การติดเชื้อ SARS-CoV-2 ในผู้ป่วยโรคอ้วนที่ได้รับการฉีดวัคซีน อย่างไรก็ตาม การศึกษาของเราให้ข้อมูลเชิงลึกที่สำคัญซึ่งแนะนำว่าผู้ป่วยโรคอ้วนอาจเกิดโรคทางคลินิกที่รุนแรงมากขึ้นจากการติดเชื้อ SARS-CoV-2 และมีความเสี่ยงต่อการติดเชื้อซ้ำหรือการติดเชื้อที่เกิดจากการพัฒนาวัคซีน ที่สำคัญ ข้อมูลของเราชี้ให้เห็นว่าวัคซีนป้องกันเชื้อโควิด-19 mRNA อาจยังคงมีประสิทธิภาพในผู้ที่เป็นโรคอ้วน แม้ว่าการตอบสนองของแอนติบอดีจะต่ำหรือไม่มีเลยก็ตาม โดยเน้นย้ำถึงความสำคัญของการฉีดวัคซีนในประชากรเหล่านี้
อ้างอิง
1 Zhou P, Yang XL, Wang XG และคณะ การระบาดของโรคปอดบวมที่เกี่ยวข้องกับไวรัสโคโรนาสายพันธุ์ใหม่ที่น่าจะมาจากค้างคาว ธรรมชาติ. 2020;579(7798):270–273.
2 Chu H, Chan JF, Yuen TT และคณะ ทรอปิซึมเชิงเปรียบเทียบ จลนศาสตร์ของการจำลอง และโปรไฟล์ความเสียหายของเซลล์ของ SARS-CoV-2 และ SARS-CoV ที่มีผลกระทบต่ออาการทางคลินิก ความสามารถในการแพร่เชื้อ และการศึกษาในห้องปฏิบัติการของ COVID-19: การศึกษาเชิงสังเกต มีดหมอจุลินทรีย์ 2020;1(1):e14–e23.
3 Chan JF, Kok KH, Zhu Z และคณะ การศึกษาลักษณะทางพันธุกรรมของเชื้อไวรัสโคโรนาสายพันธุ์ใหม่ 2019 ที่แยกได้จากผู้ป่วยที่เป็นโรคปอดบวมที่ไม่ปกติหลังจากไปเยือนเมืองอู่ฮั่น การติดเชื้อจุลินทรีย์อุบัติใหม่ 2020;9(1):221–236.
4 วิลเลียมสัน อีเจ, วอล์คเกอร์ เอเจ, บาสการัน เค และคณะ ปัจจัยที่เกี่ยวข้องกับการเสียชีวิตที่เกี่ยวข้องกับโควิด-19-โดยใช้ OpenSAFELY ธรรมชาติ. 2020;584(7821):430–436.
5 Guh DP, Zhang W, Bansback N, Amarsi Z, เบอร์มิงแฮม ซีแอล, อานิส AH อุบัติการณ์ของการเจ็บป่วยร่วมที่เกี่ยวข้องกับโรคอ้วนและน้ำหนักเกิน: การทบทวนอย่างเป็นระบบและการวิเคราะห์เมตาดาต้า บบส. สาธารณสุข. 2552;9:88.
6 Zhang AJX, Zhu H, Chen Y และคณะ การด้อยค่าของพรอสตาแกลนดิน E2-โดยอาศัยสื่อกลางของการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติต่อการติดเชื้อ A(H1N1)pdm09 ในหนูอ้วนที่เกิดจากอาหารสามารถฟื้นฟูได้ด้วยพาราเซตามอล เจ โรคติดเชื้อ 2019;219(5):795–807.
7 Smith AG, Sheridan PA, ฮาร์ป JB, เบ็ค MA หนูอ้วนที่เกิดจากอาหารจะเพิ่มอัตราการตายและการเปลี่ยนแปลงการตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกันเมื่อติดเชื้อไวรัสไข้หวัดใหญ่ เจ นัท. 2007;137(5):1236– 1243.
8 Hulme KD, Noye EC, KR สั้น, Labzin LI การอักเสบที่ควบคุมไม่ได้ในระหว่างโรคอ้วน: ทำให้เกิดความรุนแรงของโรคในไวรัสไข้หวัดใหญ่และการติดเชื้อ SARS-CoV-2 อิมมูนอลด้านหน้า 2021;12:770066.
9 Sanchis-Gomar F, Lavie CJ, Mehra MR, Henry BM, Lippi G. โรคอ้วนและผลลัพธ์ในโรคโควิด-19: เมื่อโรคระบาดและโรคระบาดมาปะทะกัน มาโย คลินิก พรอค. 2020;95(7):1445–1453.
10 ครูกลิคอฟ อิลลินอยส์, ชาห์ เอ็ม, เชเรอร์ พีอี. โรคอ้วนและโรคเบาหวานในฐานะโรคร่วมสำหรับโรคโควิด-19: กลไกเบื้องหลังและบทบาทของปฏิสัมพันธ์ของไวรัสและแบคทีเรีย เอไลฟ์. 2020;9:e61330.
11 Chen X, Hu W, Ling J และคณะ ความดันโลหิตสูงและโรคเบาหวานทำให้การกวาดล้างไวรัสในผู้ป่วยโควิด-19 ล่าช้า medRxiv. 2020. https://doi. org/10.1101/2020.03.22.20040774.
12 นาสเซอร์ เอ็มซี, เกียร์ลิ่ง อี, ปินโต เอเค. ผลกระทบของโรคอ้วนต่อการฉีดวัคซีน SARS-CoV-2 Front Endocrinol (โลซาน) 2022;13:898810.
13 Viana R, Moyo S, Amoako DG และคณะ การแพร่ระบาดอย่างรวดเร็วของเชื้อ SARS-CoV-2 Omicron ในแอฟริกาใต้ ธรรมชาติ. 2022;603(7902):679–686.
14 Shuai H, Chan JF, Hu B และคณะ ลดการจำลองแบบและการเกิดโรคของ SARS-CoV-2 B.1.1.529 Omicron ธรรมชาติ. 2022;603(7902): 693–699.
15 Hu B, Chan JF, Liu H และคณะ การกลายพันธุ์แบบขัดขวางมีส่วนทำให้การตั้งค่าการเข้าเปลี่ยนแปลงของ SARS-CoV-2 Omicron BA.1 และ BA.2 การติดเชื้อจุลินทรีย์อุบัติใหม่ 2022;11:1–31.
16 Chan JF, Hu B, Chai Y และคณะ ลักษณะทางไวรัสและการก่อโรคของ SARS-CoV-2 Omicron BA.2 เซลล์ตัวแทน Med 2022;3(9):100743.
17 หยวน S, Ye ZW, Liang R และคณะ การเกิดโรค ความสามารถในการแพร่เชื้อ และความเหมาะสมของ SARS-CoV-2 Omicron ในหนูแฮมสเตอร์ซีเรีย ศาสตร์. 2022;377(6604):428–433.
18 Lu L, Mok BW, Chen LL และคณะ การทำให้เป็นกลางของตัวแปร SARS-CoV-2 Omicron ตามซีรั่มจากผู้รับวัคซีน BNT162b2 หรือ Coronavac คลินิกโรคติดเชื้อ 2022;75(1):e822–e826. https://doi.org/10. 1093/ซิด/เซียบ1041.
19 Liu L, Iketani S, Guo Y และคณะ การหลีกเลี่ยงแอนติบอดีที่โดดเด่นซึ่งแสดงออกโดยแวเรียนต์ Omicron ของ SARS-CoV-2 ธรรมชาติ. 2022;602(7898): 676–681.
20 Iketani S, Liu L, Guo Y และคณะ คุณสมบัติการหลีกเลี่ยงแอนติบอดีของเชื้อสายย่อย Omicron ของ SARS CoV-2 ธรรมชาติ. 2022;604(7906):553–556.
21 เฉิน วาย, ลี ซี, หลิว เอฟ และคณะ การติดเชื้อ SARS-CoV-2 ที่เกี่ยวข้องกับอายุและการเปลี่ยนแปลงการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันในแบบจำลองเมาส์ การติดเชื้อจุลินทรีย์อุบัติใหม่ 2022;11(1):368–383.
22 จาง เอกซ์, กอนคาลเวส อาร์, มอสเซอร์ DM การแยกและจำแนกลักษณะของมาโครฟาจของหนู Curr Protoc Immunol. 2008;83(1): 14:14.1.1-14.1.14.
23 Li C, Chen Y, Zhao Y และคณะ การฉีดวัคซีน mRNA สำหรับโรคติดเชื้อไวรัสโคโรนา 2019 (COVID{2}}) ทางหลอดเลือดดำสามารถกระตุ้นให้เกิดภาวะกล้ามเนื้อหัวใจอักเสบเฉียบพลันในหนูทดลองได้ คลินิกโรคติดเชื้อ 2022;74(11): 1933–1950.
24 Li C, Chen YX, Liu FF และคณะ การไม่มีโรคที่เสริมด้วยวัคซีนซึ่งมีการป้องกันในเชิงบวกอย่างไม่คาดคิดต่อกลุ่มอาการทางเดินหายใจเฉียบพลันรุนแรง โคโรนาไวรัส 2 (SARS-CoV-2) โดยวัคซีนเชื้อตายที่ให้ภายใน 3 วันนับจากการทดสอบไวรัสในแบบจำลองหนูแฮมสเตอร์ซีเรีย คลินิกโรคติดเชื้อ 2021;73(3):e719–e734.
25 Vogel AB, Kanevsky I, Che Y และคณะ วัคซีน BNT162b ปกป้องลิงแสมจาก SARS-CoV-2 ธรรมชาติ. 2021;592(7853):283–289.
26 Lee AC, Zhang AJ, Chan JF และคณะ การฉีดวัคซีน SARS-CoV-2 ทางปากทำให้เกิดการติดเชื้อทางเดินหายใจแบบไม่แสดงอาการโดยมีการแพร่กระจายของไวรัสในหนูแฮมสเตอร์ซีเรียสีทอง เซลล์ตัวแทน Med 2020;1(7):100121.
27 เมเยอร์โฮลซ์ ดีเค, เบ็ค เอพี. หลักการและแนวทางการให้คะแนนรอยเปื้อนในเนื้อเยื่อในการวิจัย แล็บลงทุน 2018;98(7): 844–855.
28 Chu H, Shuai H, Hou Y และคณะ การกำหนดเป้าหมายการตายของเซลล์ที่เกิดจากเชื้อไวรัสโคโรนาที่ก่อให้เกิดโรคสูงจะช่วยลดการเกิดโรคของไวรัสและความรุนแรงของโรค วิทยาศาสตรบัณฑิต 2021;7(25):eabf8577.
29 Chu H, Hou Y, Yang D, และคณะ โคโรนาไวรัสใช้ประโยชน์จากโฮสต์ซิสเทอีนแอสปาร์ติกโปรตีเอสเพื่อการจำลองแบบ ธรรมชาติ. 2022;609(7928):785–792.
30 Zhang AJ, Li C, ถึง KK และคณะ อิมิคิโมดตัวเอกที่มีลักษณะคล้ายตัวรับ 7 ร่วมกับวัคซีนไข้หวัดใหญ่เร่งและเพิ่มการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันของร่างกายต่อการติดเชื้อไวรัสไข้หวัดใหญ่ A (H1N1) pdm09 ในหนู BALB / c คลินิกวัคซีนอิมมูนอล 2014;21(4):570–579.
31 Li C ถึง KKW จาง AJX และคณะ การกระตุ้นร่วมกับ TLR7 agonist imiquimod และอนุภาคไวรัสไข้หวัดใหญ่ที่ไม่ทำงานส่งเสริมการกระตุ้นการทำงานของเซลล์ B ของเมาส์ การสร้างความแตกต่าง และเร่งการผลิตแอนติบอดีจำเพาะต่อแอนติเจน อิมมูนอลด้านหน้า 2018;9:2370.
32 Zhou R, To KK, Wong YC และคณะ การติดเชื้อ SARS-CoV แบบเฉียบพลัน-2 ทำให้การตอบสนองของเซลล์เดนไดรต์และทีเซลล์ลดลง ภูมิคุ้มกัน 2020;53(4): 864–877.e5.
33 Chen S, Zhou Y, Chen Y, Gu J. fastp: พรีโปรเซสเซอร์ FASTQ แบบออลอินวันที่รวดเร็วเป็นพิเศษ ชีวสารสนเทศศาสตร์ 2018;34(17):i884–i890.
34 Edgar R. URMAP นักทำแผนที่การอ่านที่รวดเร็วเป็นพิเศษ เพียร์เจ. 2020;8:e9338.
35 คิม ดี, แพ็กกี้ เจเอ็ม, พาร์ค ซี, เบนเน็ตต์ ซี, ซัลซ์เบิร์ก เอสแอล. การจัดตำแหน่งจีโนมตามกราฟและจีโนไทป์ด้วย HISAT2 และ HISAT-genotype แนท ไบโอเทคโนล. 2019;37(8):907–915.
36 เพอร์เทีย เอ็ม, เพอร์ที จีเอ็ม, อันโตเนสคู ซีเอ็ม, ฉาง TC, เมนเดลล์ เจที, ซัลซ์เบิร์ก เอสแอล StringTie ช่วยให้สามารถสร้างทรานสคริปโตมจากการอ่าน RNA-seq ได้ดีขึ้น แนท ไบโอเทคโนล. 2015;33(3):290–295.
37 Love MI, Huber W, Anders S. การประมาณค่าปานกลางของการเปลี่ยนแปลงการพับและการกระจายตัวของข้อมูล RNA-seq ด้วย DESeq2 จีโนมไบโอล 2014;15(12):550.
38 Yu G, Wang LG, Han Y, He QY คลัสเตอร์Profiler: แพ็คเกจ R สำหรับการเปรียบเทียบธีมทางชีววิทยาระหว่างกลุ่มยีน โอมิกส์. 2012;16(5):284–287.
39 Miao YR, Xia M, Luo M, Luo T, Yang M, Guo AY เมาส์ ImmuCellAI: เครื่องมือสำหรับการคาดการณ์ที่ครอบคลุมเกี่ยวกับความอุดมสมบูรณ์ของเซลล์ภูมิคุ้มกันของเมาส์และการพรรณนาสภาพแวดล้อมจุลภาคของระบบภูมิคุ้มกัน ชีวสารสนเทศศาสตร์ 2021;38:785.
40 Shuai H, Chan JF, Yuen TT และคณะ สายพันธุ์ SARS-CoV-2 ที่เกิดขึ้นใหม่ขยายเขตร้อนของสายพันธุ์ไปสู่หนูทดลอง ชีวการแพทย์ 2021;73:103643.
41 Gu H, Chen Q, Yang G, และคณะ การปรับตัวของ SARS-CoV-2 ในหนู BALB/c เพื่อทดสอบประสิทธิภาพของวัคซีน ศาสตร์. 2020;369(6511):1603– 1607.
42 ฮาล์ฟแมนน์ พีเจ, อีดะ เอส, อิวัตสึกิ-โฮริโมโตะ เค และคณะ ไวรัส SARS-CoV-2 Omicron ทำให้เกิดโรคที่อ่อนแรงในหนูและหนูแฮมสเตอร์ ธรรมชาติ. 2022;603(7902):687–692.
43 Krause PR, Fleming TR, Longini IM และคณะ สายพันธุ์และวัคซีน SARS-CoV-2 N ภาษาอังกฤษ J Med 2021;385(2):179–186.
44 Corbett KS, Nason MC, Flach B และคณะ ความสัมพันธ์ทางภูมิคุ้มกันของการป้องกันด้วยวัคซีน mRNA-1273 ต่อ SARS-CoV-2 ในไพรเมตที่ไม่ใช่มนุษย์ ศาสตร์. 2021;373(6561):eabj0299.
45 ฮาเมอร์ เอ็ม, เกล ซีอาร์, คิวิมากิ เอ็ม, แบ็ตตี้ GD. น้ำหนักเกิน โรคอ้วน และความเสี่ยงในการเข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลเนื่องจากโรคโควิด-19: การศึกษาตามกลุ่มประชากรในชุมชนของผู้ใหญ่ในสหราชอาณาจักร Proc Natl Acad Sci สหรัฐอเมริกา 2020;117(35):21011–21013.
46 Mannar D, Saville JW, Zhu X และคณะ ตัวแปร SARS-CoV-2 Omicron: การหลีกเลี่ยงแอนติบอดีและโครงสร้าง cryo-EM ของโปรตีน Spike-ACE2 เชิงซ้อน ศาสตร์. 2022;375(6582):760–764.
47 Zhang Y, Huang K, Wang T และคณะ SARS-CoV-2 จะปรับตัวอย่างรวดเร็วในหนู BALB/c อายุมากและทำให้เกิดโรคปอดบวมทั่วไป เจ วิโรล. 2021;95(11):e02477.
48 Huang H, Zhu Y, Niu Z, Zhou L, Sun Q. SARS-CoV-2 N501Y ตัวแปรที่น่ากังวลและศักยภาพในการแพร่เชื้อด้วยเมาส์ การตายของเซลล์แตกต่างกัน 2021;28(10):2840–2842.
49 Niu Z, Zhang Z, Gao X และคณะ การกลายพันธุ์ของ N501Y ทำให้เกิดการถ่ายทอดข้ามสายพันธุ์ของ SARS-CoV-2 ไปยังหนูโดยเพิ่มการจับตัวรับ เป้าหมายการถ่ายโอนสัญญาณ Ther. 2021;6(1):284.
50 Chu H, Chan JF, หยวน KY แบบจำลองสัตว์ในการวิจัย SARS-CoV-2 วิธีการแนท 2022;19(4):392–394.
51 Briand F, Sencio V, Robil C, และคณะ โรคอ้วนที่เกิดจากอาหารและ NASH บั่นทอนการฟื้นตัวของโรคในหนูแฮมสเตอร์สีทองที่ติดเชื้อ SARS-CoV-2- ไวรัส 2022;14(9):2067.
52 พอร์ต JR, Adney DR, Schwarz B และคณะ การเปลี่ยนแปลงของการเผาผลาญไขมันที่เกิดจากอาหารที่มีไขมันสูงสูงมีความสัมพันธ์กับความรุนแรงของไวรัสที่เพิ่มขึ้นเล็กน้อย-19 และการฟื้นตัวที่ล่าช้าในหนูแฮมสเตอร์ซีเรีย ไวรัส 2021;13(12):2506.
53 Zhang YN, Zhang ZR, Zhang HQ และคณะ การเจ็บป่วยที่เพิ่มขึ้นของหนูอ้วนที่ติดเชื้อ SARS-CoV ที่ดัดแปลงโดยเมาส์-2 เซลล์ดิสคอฟ 2021;7(1):74.
54 อัคบาร์ AN, กิลรอย DW. ภูมิคุ้มกันสูงวัยอาจทำให้เชื้อโควิดรุนแรงขึ้น-19 ศาสตร์. 2020;369(6501):256–257.
55 Rebello CJ, Kirwan JP, กรีนเวย์ ฟลอริดา โรคอ้วน โรคร่วมที่พบบ่อยที่สุดใน SARS-CoV-2: เลปตินมีส่วนเชื่อมโยงหรือไม่ อินท์ เจ โอเบส. 2020;44(9):1810–1817.
56 มัลเลน เอ็ม, กอนซาเลซ-เปเรซ RR. การส่งสัญญาณ JAK / STAT ที่เกิดจาก Leptin และการเติบโตของมะเร็ง วัคซีน (บาเซิล) 2016;4(3):26.
57 Zhu A, Chen Z, Wang Y และคณะ การตอบสนองทางภูมิคุ้มกันต่อการติดเชื้อ SARS-CoV-2 ในมนุษย์และหนู ACE2 ที่ทำให้มีลักษณะของมนุษย์ ฟันดัมเรส 2021;1(2):124–130.
58 Achkar JM, Casadevall A. ภูมิคุ้มกันที่ใช้แอนติบอดีต่อวัณโรค: ผลกระทบต่อการพัฒนาวัคซีน จุลินทรีย์โฮสต์ของเซลล์ 2013;13(3):250–262.
59 Casadevall A, พิรอฟสกี LA การสังเคราะห์ใหม่สำหรับภูมิคุ้มกันที่ใช้แอนติบอดี แนท อิมมูนอล. 2011;13(1):21–28.
60 Israelow B, Mao T, Klein J, และคณะ ตัวกำหนดภูมิคุ้มกันแบบปรับตัวของการกวาดล้างและการป้องกันไวรัสในเมาส์รุ่น SARS-CoV-2 วิทย์อิมมูนอล. 2021;6(64):eabl4509.
61 Smith AG, Sheridan PA, Tseng RJ, Sheridan JF, เบ็ค MA ความบกพร่องแบบเลือกสรรในการทำงานของเซลล์เดนไดรต์และการเปลี่ยนแปลงการตอบสนองของทีเซลล์ซีดี8+ เฉพาะแอนติเจนในหนูอ้วนที่เกิดจากอาหารซึ่งติดเชื้อไวรัสไข้หวัดใหญ่ ภูมิคุ้มกันวิทยา 2009;126(2):268–279.
62 Macia L, Delacre M, Abboud G และคณะ การด้อยค่าของการทำงานของเซลล์เดนไดรต์และจำนวนสถานะคงตัวในหนูอ้วน เจ อิมมูนอล. 2006;177(9):5997–6006.
63 Honce R, Schultz-Cherry S. ผลกระทบของโรคอ้วนต่อการเกิดโรคของไวรัสไข้หวัดใหญ่ A การตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกันและวิวัฒนาการ อิมมูนอลด้านหน้า 2019;10:1071.
64 ฟราสก้า ดี, บลอมเบิร์ก บีบี. โรคอ้วนเร่งความบกพร่องทางอายุในหนูและเซลล์บีของมนุษย์ อิมมูนอลด้านหน้า 2020;11:2060.
65 เคนเนดี้ DE, อัศวิน KL. การยับยั้ง B Lymphopoiesis โดยเซลล์ไขมันและ IL-1- ซึ่งสร้างเซลล์กดรับที่ได้มาจากไมอีลอยด์ เจ อิมมูนอล. 2015;195(6):2666–2674.
66 Pham TD, Chng MHY, Roskin KM และคณะ อาหารที่มีไขมันสูงทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงทางระบบของบีเซลล์ซึ่งสัมพันธ์กับการดื้อต่ออินซูลิน เมือกอิมมูนอล 2017;10(6):1468–1479.
67 Alu A, Chen L, Lei H, Wei Y, Tian X, Wei X. วัคซีนป้องกันโควิดในจมูก-19: จากม้านั่งไปจนถึงเตียง อีไบโอเมดิซิน. 2022;76:103841.
68 Tiboni M, Casettari L, Illum L. การฉีดวัคซีนป้องกัน SARS CoV ทางจมูก-2: เสริมฤทธิ์หรือทางเลือกแทนวัคซีนเข้ากล้าม? อินท์เจ ฟาร์มา. 2021;603:120686.
69 ไคลน์ SL, ฟลานาแกน KL. ความแตกต่างทางเพศในการตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกัน แนท เรอ อิมมูนอล. 2016;16(10):626–638.
