สารสกัดจากน้ำ Cistanches Tubulosa ปกป้องอัณฑะจากการบาดเจ็บที่เกิดจากไซโคลฟอสฟาไมด์: ผลและกลไก

XIA Lun-bin1,2 ,JIANG Ping 1,2 ,HE Yan-fei 1,2 ,SUN Tao-tao 1 ,ZHOU Yu1 ,ZUO Ｒui-hua 1,2

1． โรงเรียนวิศวกรรมชีวภาพและเภสัชกรรม West Anhui College, Lu ＇an, Anhui 237012, China; 2． Anhui Engineering Laboratory for Conservation and Sustainable Utilization of Traditional Chinese Medicine Ｒesources, Lu＇an, Anhui 237012, China

【เชิงนามธรรม】

วัตถุประสงค์: เพื่อศึกษาผลการป้องกันของสารสกัดจากน้ำ Cistanche tubulosa (CTWE) ต่อ cyclophosphamide ( CTX) - เหนี่ยวนำให้อัณฑะบาดเจ็บ ( TI) ในหนูและกลไกการออกฤทธิ์

ผงสกัด Cistanche

คลิกที่นี่เพื่อดูผลิตภัณฑ์ Cistanche สำหรับโรคไต

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

วิธีการ: หนูเพศผู้จำนวน 30 ตัวได้รับการสุ่มอย่างเท่าเทียมกันในกลุ่มควบคุมปกติ กลุ่มควบคุมแบบจำลอง TI ที่เกิดจาก CTX และกลุ่มบำบัด CTWE หลังจากการให้อาหารแบบปรับตัวเป็นเวลา 7 วัน หนูในกลุ่มที่รักษาด้วย CTWE ได้รับการรักษาทางช่องท้องด้วย CTWE ที่ 1{{2{{30}}}} g /kg /d ซึ่งอยู่ในกลุ่มควบคุมปกติและแบบจำลอง TI กลุ่มควบคุมที่มีน้ำเกลือปกติในปริมาตรเท่ากันทั้งหมดเป็นเวลา 35 วันติดต่อกัน และกลุ่มควบคุมในรูปแบบ TI และกลุ่มรักษา CTWE โดยการฉีดไซโคลฟอสฟาไมด์เข้าทางช่องท้องที่ 80 มก./กก./วัน ที่ 7,14,21 ,28 และ 35 วัน. จากนั้นนำสัตว์ทั้งหมดมาชั่งน้ำหนัก เก็บตัวอย่างเลือด และเก็บอัณฑะและเอพิไดไดไมด์ของพวกมันเพื่อตรวจหาปริมาณ T ในซีรั่ม การตรวจสอบคุณภาพน้ำอสุจิ การวัดน้ำหนักอัณฑะ การสังเกตการเปลี่ยนแปลงทางจุลพยาธิวิทยาในอัณฑะ และการกำหนดระดับของซูเปอร์ ออกไซด์ดิสมิวเตส (SOD) และมาลอนไดอัลดีไฮด์ (MDA) ในเนื้อเยื่ออัณฑะและการแสดงออกของ mＲNA ของยีนที่เกี่ยวข้องกับปัจจัยนิวเคลียร์อีรีทรอยด์{{10}}ปัจจัยที่เกี่ยวข้อง (Nrf2) เส้นทางการส่งสัญญาณ. ผลที่ได้: หนูในกลุ่มควบคุมแบบจำลอง TI เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมปกติ มีน้ำหนักตัวลดลงอย่างมีนัยสำคัญ ( ［34． 13 ± 1． 56］vs ［47． 08 ± 1． 98］g ,P ＜ 0． 05) ,น้ำหนักอัณฑะ ( ［81． 82 ± 1{{101}}． 61］ เทียบกับ ［148． 50 ± 14． 82］mg,P ＜ 0． 05) ,ความเข้มข้นของสเปิร์ม ( ［32． 60 ± 5． 29］vs ［78． 90 ± 7． 95］ × 106 /ml,P ＜ 0． 05) ,การเคลื่อนไหวของอสุจิ ( ［45． 20 ± 7． {{186 }}9］ เปอร์เซ็นต์ เทียบกับ［86． 70 ± 5． 64］ เปอร์เซ็นต์ ,P ＜ 0． 05) , ปริมาณ T ของซีรั่ม ( ［7． 49 ± 1． 03］vs［15． 93 ± 1． 36 ］ng /L,P ＜ 0． 05) และระดับ SOD ( ［152． 22 ± 10． 66］vs［356． 10 ± 30． 95］U/mg prot,P ＜ 0． 05) แต่เพิ่มขึ้นอย่างโดดเด่น ในเปอร์เซ็นต์ของตัวอสุจิที่ผิดปกติทางสัณฐานวิทยา ( MAS) ( ［39． 30 ± 7． 36］ เปอร์เซ็นต์ เทียบกับ［14． 40 ± 3． 53］ เปอร์เซ็นต์ ,P ＜ 0． 05) และระดับ MDA ( ［54． 91 ± 5． 12］vs［31． 71 ± 3． 57］nmol /mg prot,P ＜ 0． 05) ． สัตว์ที่ได้รับการรักษาด้วย CTWE เมื่อเปรียบเทียบกับการควบคุมแบบจำลอง TI พบว่ามีน้ำหนักตัวเพิ่มขึ้นอย่างชัดเจน (［40． 67 ± 2． 13］vs［34． 13 ± 1． 56］g,P ＜ 0． 05) , น้ำหนักอัณฑะ ( ［121． 21 ± 17． 38］vs ［81． 82 ± 10． 61］mg,P ＜ 0． 05) ความเข้มข้นของอสุจิ ( ［58． 40 ± 9． 94］vs［32． 60 ± 5 ． 29 ］ ×106 /มล.,P ＜ 0． 05) ,การเคลื่อนไหวของอสุจิ (［72． 30 ± 7． 51］ เปอร์เซ็นต์ เทียบกับ［45． 20 ± 7． 09］ เปอร์เซ็นต์ ,P ＜ 0． 05) ปริมาณ T ของเซรั่ม ( ［ 10． 89 ± 1． 07］vs［7． 49 ± 1． 03］ng /L,P ＜ 0． 05) และระดับ SOD ( ［217． 69 ± 24． 59］vs ［152． 22 ± 10． 6 6 ］U/mg prot,P ＜ 0． 05) ,แต่ลดลงร้อยละของ MAS ( ［22． 20 ± 6． 07］ เปอร์เซ็นต์ เทียบกับ ［39． 30 ± 7． 36］ เปอร์เซ็นต์ ,P ＜ 0． 05) และระดับ MDA ( ［36． 41 ± 4． 27］vs ［54． 91 ± 5． 12］ nmol /mg prot,P ＜ 0． 05) ． การแสดงออกของ mＲNA ของ Nrf2,HO-1 และ NQO-1 ในเนื้อเยื่ออัณฑะถูกลดการควบคุมลงอย่างมากในการควบคุมแบบจำลอง TI เมื่อเทียบกับการควบคุมปกติ ( P ＜ 0． 05) และที่น่าทึ่ง เพิ่มขึ้นในกลุ่มการรักษา CTWE เมื่อเทียบกับในกลุ่มแบบจำลอง TI ( P ＜ 0． 05) ในขณะที่ Caspase3 เพิ่มขึ้นอย่างชัดเจนในกลุ่มควบคุมแบบจำลอง TI ( P ＜ 0． 05) และลดลงในกลุ่มการรักษา CTWE ( พี ＜ 0． 05) ． ในทางจุลพยาธิวิทยา เนื้อเยื่ออัณฑะของตัวควบคุมแบบจำลอง TI แสดงโครงร่างที่ไม่ชัดเจนตั้งแต่ฐานของท่อสร้างอสุจิไปจนถึงพื้นผิวลูเมน โดยมีชั้นของเซลล์สร้างอสุจิที่กระจัดกระจายและลดลง และจำนวนของสเปิร์มในท่อสร้างอสุจิลดลง ในขณะที่โครงสร้างของท่อสร้างอสุจิ หายเกือบเป็นปกติในกลุ่มการรักษา CTWE.

บทสรุป: สารสกัดจากน้ำ Cistanches tubulosa สามารถยับยั้งการบาดเจ็บของอัณฑะที่เกิดจากไซโคลฟอสฟาไมด์ได้อย่างมีประสิทธิภาพ โดยเพิ่มการทำงานของเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระและควบคุมการแสดงออกของยีนที่เกี่ยวข้องกับทางเดินสัญญาณ Nrf2

ผงซิสแตนช์

【คำสำคัญ】สารสกัดจากน้ำ Cistanche tubulosa; อัณฑะ; ไซโคลฟอสฟาไมด์; ความเครียดออกซิเดชัน หนู

ไซโคลฟอสฟาไมด์ (CTX) เป็นยาต้านเนื้องอก [1] และสารกดภูมิคุ้มกัน [2] ถูกนำมาใช้อย่างแพร่หลายในทางการแพทย์ อย่างไรก็ตาม ยังมีผลกระทบที่เป็นพิษต่อเซลล์อย่างมาก และความเสียหายต่อระบบสืบพันธุ์เป็นหนึ่งในผลข้างเคียงของมัน การศึกษาก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่า CTX อาจทำให้เกิดความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันต่อเนื้อเยื่ออัณฑะในตัวผู้หรือสัตว์เพศผู้ ซึ่งนำไปสู่ความผิดปกติของการสร้างสเปิร์ม เช่น จำนวนสเปิร์มและความสามารถในการเคลื่อนไหวลดลง [3-6] ดังนั้น การสำรวจวิธีการลดหรือกำจัดความเสียหายของ CTX ต่อเนื้อเยื่ออัณฑะและซ่อมแซมการทำงานของตัวสร้างอสุจิตามปกติจึงกลายเป็นจุดสนใจของการวิจัย

Cistanche Deserticola ถูกบันทึกครั้งแรกใน "Shennong Materia Medica Classic" และเป็นยาจีนโบราณที่มีค่า มีฤทธิ์ในการบำรุงธาตุและเลือด บำรุงไตหยาง บำรุงหยินไต ทำให้ลำไส้ชุ่มชื้น และบรรเทาอาการท้องผูก ตามตำรับยาจีน Cistanche Deserticola เป็นไม้ล้มลุกอายุยืนต้นในวงศ์ Orobaceae Cistanche deserticola YCMa หรือ Cistanche tubulosa (Schenk) Light เป็นลำต้นเนื้อแห้งเป็นสะเก็ด ตาม "ความหมายทางการแพทย์" [8] Cistanche Deserticola "อยู่ในหยินหยาง... เป็นสารหลักในการเสริมสร้างไตและเป็นผลิตภัณฑ์ที่ช่วยเสริมสร้างหยางและแก่นแท้" Materia Medica Preparation [9] เน้นว่ากุญแจสำคัญในการใช้ Cistanche Deserticola เป็นยาคือ "บำรุงไตและบำรุงลำไส้" Cistanche Deserticola ใช้กันอย่างแพร่หลายในใบสั่งยาแพทย์แผนจีน และเป็นหนึ่งในสมุนไพรที่ใช้บ่อยที่สุดในการปรับสภาพไต เสริมพลังหยาง และเพิ่มความแข็งแกร่ง ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา การวิเคราะห์ทางเคมีและการศึกษาทางเภสัชวิทยาพบว่า Cistanche Deserticola มีส่วนประกอบที่ออกฤทธิ์หลายชนิด เช่น phenylethanoid glycosides, iridoids และ glycosides, lignans and their glycosides, polysaccharides, alkaloids, amino acids และ trace elements [10]. 

ประสิทธิภาพของ Cistanche Deserticola—ทำให้ไตแข็งแรง

การวิจัยทางเภสัชวิทยาสมัยใหม่แสดงให้เห็นว่าไม่เพียงแต่มีผลทางเภสัชวิทยา เช่น ชะลอวัย [11-12] ต่อต้านความเมื่อยล้า [13] ต้านอนุมูลอิสระ [14] ควบคุมภูมิคุ้มกัน [15] และป้องกันเส้นประสาท [{{6 }}] แต่ยังปรับปรุงการทำงานของระบบสืบพันธุ์อย่างมีนัยสำคัญ [18] LI และคณะ [19] รายงานว่า Cistanche Deserticola สามารถย้อนกลับความเป็นพิษต่อระบบสืบพันธุ์ที่เกิดจาก Tri pterygium glycoside ในหนู; หวังเต๋อจุน et al. [20] พิสูจน์ได้ว่า Cistanche Deserticola สามารถส่งเสริมการสร้างสเปิร์มของอัณฑะและปรับปรุงสภาพแวดล้อมจุลภาคของหลอดน้ำอสุจิ Zhao Donghai และคณะ [21] พบว่า phenylethanoid glycosides จาก Cistanche Deserticola มีผลการรักษาที่มีนัยสำคัญต่อความผิดปกติของ CTX ที่เกิดจากเชื้ออสุจิในหนู และชี้ให้เห็นว่ากลไกของมันอาจเกี่ยวข้องกับการปรับปรุงระดับฮอร์โมนเพศชายในเนื้อเยื่ออัณฑะ อย่างไรก็ตาม มีรายงานเพียงเล็กน้อยเกี่ยวกับกลไกของผลกระทบของ Cistanche Deserticola ต่อการส่งเสริมการทำงานของระบบสืบพันธุ์ เช่น การสร้างสเปิร์ม และจำเป็นต้องมีการสำรวจเชิงลึกเพิ่มเติม การศึกษาเชิงทดลองนี้ใช้ CTX ในการสร้างแบบจำลองของเมาส์ของการบาดเจ็บของเนื้อเยื่ออัณฑะ และศึกษาผลการซ่อมแซมของสารสกัดจากน้ำ Cistanche tubulosa (CTWE) บนเนื้อเยื่ออัณฑะที่เสียหายในหนู การศึกษาดำเนินการด้วยวิธีทางเนื้อเยื่อวิทยา สรีรวิทยา และชีวเคมี การศึกษาตัวบ่งชี้สารต้านอนุมูลอิสระและการแสดงออกของยีนที่เกี่ยวข้องกับปัจจัยนิวเคลียร์ E2 ปัจจัยที่เกี่ยวข้อง 2 (Nrf2) เส้นทางการส่งสัญญาณในเนื้อเยื่ออัณฑะมีวัตถุประสงค์เพื่อเพิ่มพื้นฐานทางเภสัชวิทยาของ Cistanche Deserticola และให้ พื้นฐานทางวิทยาศาสตร์สำหรับคุณค่าทางยาและการพัฒนาผลิตภัณฑ์

1 วัสดุและวิธีการ

1.1 วัสดุ

1.1.1 สัตว์ทดลอง

หนูขาวคุนหมิงเกรดสะอาด 40 ตัว เพศผู้ น้ำหนักตัว (18 ± 2) กรัม ซื้อจากศูนย์สัตว์ทดลองแห่งมหาวิทยาลัยการแพทย์อันฮุย โดยมีใบอนุญาตสัตว์หมายเลข SCXK (มณฑลอานฮุย) 2017-001 หนูถูกเลี้ยงในกรงแยกกัน ให้อาหารและดื่มอย่างอิสระที่อุณหภูมิห้อง 20-24 องศา และความชื้น 55 เปอร์เซ็นต์ -65 เปอร์เซ็นต์ หลังจากให้อาหารแบบปรับตัวได้ 7 วัน พวกมันถูกนำมาใช้สำหรับการทดลอง

1.1.2 วัสดุยาและรีเอเจนต์

Cistanche Deserticola เม็ดแห้งถูกซื้อมาจากตลาดสมุนไพรในเมืองโปโจว มณฑลอันฮุย พวกเขาถูกระบุว่าเป็น Cistanche Deserticola แบบท่อโดยศาสตราจารย์ Chen Naidong จากสำนักงานการสอนและการวิจัยการแพทย์แผนจีนของ School of Biological and Pharmaceutical Engineering, Wanxi University ผลิตภัณฑ์มาตรฐานของ Echinacetin (ความบริสุทธิ์มากกว่าหรือเท่ากับ 98 เปอร์เซ็นต์) Shanghai Tongtian Biotechnology Co., Ltd; การย้อมสี Hematoxylin eosin (HE) บริษัท Zhuhai Besso Biotechnology Co. , Ltd; Malondialdehyde (MDA), superoxide dismutase (SOD) ชุด ELISA, Nanjing Jiancheng Technology Co., Ltd; CTX, Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd; ชุดเทสโทสเตอโรน ELISA, Shanghai Zhenke Biotechnology Co., Ltd; คอลัมน์ UNlQ-10 Trizol รวมชุดสกัด RNA, Shenggong Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd; EasyScript One Step การกำจัด gDNA และการสังเคราะห์ cDNA SuperMix, Trans Start Green qPCRSuperMix, Beijing Quanshi Biotech Co., Ltd.

Cistanche Deserticola เม็ดแห้ง

1.1.3 เครื่องมือและอุปกรณ์

กล้องจุลทรรศน์ BX53 บริษัท Olympus; YD-335 เครื่องตัดพาราฟิน, Zhejiang Jinhua Yidi Medical Equipment Co., Ltd; RE-2002 เครื่องระเหยแบบหมุน Shanghai Yaote Instrument Equipment Co., Ltd; TU-1950 UV Visible Spectrophotometer, Beijing Puxi General Instrument Co., Ltd; NanoDrop2000 Ultramicro Spectrophotometer, Thermo Fisher Scientific; Agilent 1260 Infinity II Prime Liquid Chromatography System, Agilent Technologies; ขั้นตอนที่หนึ่งพร้อมเครื่องมือ PCR เชิงปริมาณเรืองแสง, Applied Biosystems

1.2 วิธีการ

1.2.1 การเตรียม CTWE

อ้างอิงถึงวิธีการสกัดด้วยน้ำร้อนที่รายงานในเอกสารอ้างอิง [22] โดยมีการปรับปรุงเล็กน้อย บด Cistanche Deserticola 500 กรัม แล้วจุ่มลงในน้ำกลั่น 5 ลิตร ต้มและสกัดที่อุณหภูมิ 100 องศาเป็นเวลา 2 ชั่วโมง กรองและรวบรวมสิ่งที่กรอง เติมน้ำกลั่น 5 ลิตรลงในกากกรองและแยกกากออกต่อไป ทำซ้ำการสกัดสามครั้ง รวมสิ่งกรอง ระเหยภายใต้สุญญากาศที่อุณหภูมิ 65 องศา และทำให้เข้มข้นจนได้ปริมาณยาหยาบ 0.5 กรัม/มล. การควบคุมคุณภาพของ CTWE ขึ้นอยู่กับเนื้อหาของ Echinacetin [23] ปริมาณของ Echinacetin ใน CTWE ถูกกำหนดโดยโครมาโตกราฟีของเหลวสมรรถนะสูงเป็น (7.63 ± 0.08) มก./มล.

1.2.2 การแบ่งกลุ่มและการบริหารสัตว์

หนู 30 ตัวถูกสุ่มแบ่งออกเป็นกลุ่มควบคุมปกติ กลุ่มตัวอย่าง และกลุ่มรักษา Cistanche Deserticola โดยมีหนู 10 ตัวในแต่ละกลุ่ม หนูกลุ่มที่ได้รับการบำบัดได้รับ CTWE ขนาด 10 กรัม/กก. ของน้ำหนักร่างกายโดยทางสายยาง [คำนวณเป็น 20 เท่าของผู้ใหญ่ 0.5 กรัม/(กก. · d) [13]] ในขณะที่กลุ่มควบคุมและหนูกลุ่มแบบจำลองได้รับปริมาตรเท่ากัน ของน้ำเกลือทางสรีรวิทยาโดย gavage วันละครั้งเป็นเวลา 35 วันติดต่อกัน; ในวันที่ 7, 14, 21, 28 และ 35 ของการบริหารให้ กลุ่มตัวอย่างและหนูกลุ่มที่ได้รับการรักษาด้วย Cistanche Deserticola ได้รับ CTX 80 มก./กก. ของน้ำหนักตัวสำหรับการฉีดเข้าช่องท้อง ในขณะที่หนูกลุ่มควบคุมได้รับ น้ำเกลือทางสรีรวิทยาในปริมาณเท่ากันสำหรับการฉีดเข้าช่องท้อง

1.2.3 การเก็บตัวอย่างและการประมวลผล

หลังฉีดซีทีเอ็กซ์ครั้งสุดท้ายและอดอาหาร 12 ชั่วโมง วัดน้ำหนักตัวและเก็บตัวอย่างเลือด จากนั้น หนูในแต่ละกลุ่มได้รับการดมยาสลบด้วยคลอรอลไฮเดรต (0.3 มล./100 ก.) เข้าทางช่องท้อง และเอาอัณฑะออกและชั่งน้ำหนัก นำเนื้อเยื่อ epididymal จากทั้งสองด้านเพื่อทดสอบคุณภาพของตัวอสุจิ นำลูกอัณฑะข้างซ้ายไปเก็บไว้ในสารละลายพาราฟอร์มัลดีไฮด์ความเข้มข้น 4 เปอร์เซ็นต์สำหรับการตัดชิ้นเนื้อและการตรวจทางจุลพยาธิวิทยา นำลูกอัณฑะที่ถูกต้องและเก็บไว้ในไนโตรเจนเหลวสำหรับตัวบ่งชี้ทางชีวเคมีของเนื้อเยื่อและการตรวจจับ PCR เชิงปริมาณเรืองแสง

1.2.4 การตรวจคุณภาพอสุจิ

ตัดเนื้อเยื่อ epididymis ที่เก็บและวางไว้ในน้ำเกลือทางสรีรวิทยา 37 องศาอุ่น บ่มที่อุณหภูมิคงที่ 15 นาที เพื่อให้สเปิร์มว่ายออกมาเต็มที่และเตรียมสารแขวนลอยสเปิร์ม นำสารแขวนลอยสเปิร์มไปวางบนกระดานนับสเปิร์มที่อุ่นที่อุณหภูมิ 37 องศา สังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์และเลือกสเปิร์มที่สามารถเคลื่อนที่เป็นเส้นตรงหรือไม่มีทิศทางเป็นสเปิร์มที่มีชีวิต สเปิร์มอื่น ๆ ที่สามารถหมุนได้หรือยังคงอยู่ในตำแหน่งที่ตายแล้ว นับจำนวนสเปิร์มที่มีชีวิตในสเปิร์ม 200 ตัวและคำนวณอัตราการเคลื่อนไหวของสเปิร์ม [24]; ใช้เวลา 10 μ หลังจากเจือจางสารแขวนลอยสเปิร์มด้วยน้ำเกลือทางสรีรวิทยา 20 เท่า ให้คำนวณความเข้มข้นของสเปิร์มโดยใช้วิธีจานนับเซลล์เม็ดเลือด นำสารแขวนลอยสเปิร์มผสมกับสารละลายอีโอซิน 1 เปอร์เซ็นต์ในอัตราส่วน 10:1 สำหรับการย้อม ละเลง ผึ่งลมให้แห้ง ตรึงในเมทานอล สังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์ และคำนวณอัตราความผิดปกติของสเปิร์ม

1.2.5 การสังเกตทางพยาธิวิทยาของเนื้อเยื่ออัณฑะ

นำลูกอัณฑะข้างซ้ายมาแช่ในสารละลายพาราฟอร์มัลดีไฮด์ความเข้มข้น 4 เปอร์เซ็นต์ ตัดเป็นบล็อกเนื้อเยื่อขนาดประมาณ 0.5 cm3 ด้วยใบมีด ฝังในพาราฟิน ย้อมด้วย HE และสังเกตการเปลี่ยนแปลงทางพยาธิสภาพของอัณฑะ เนื้อเยื่อภายใต้กล้องจุลทรรศน์

1.2.6 การตรวจหาตัวบ่งชี้ทางชีวเคมีในเนื้อเยื่ออัณฑะ

ตามคำแนะนำของชุดตรวจจับ SOD และ MDA ให้นำลูกอัณฑะไปเก็บไว้ในไนโตรเจนเหลวและเตรียมโฮโมจีเนต 10 เปอร์เซ็นต์ ปฏิบัติตามคำแนะนำของชุดอุปกรณ์เพื่อตรวจหาเนื้อหาของ SOD และ MDA ในเนื้อเยื่ออัณฑะ

1.2.7 การตรวจหาปริมาณฮอร์โมนเพศชายในซีรั่ม

ตามคู่มือการใช้งานของชุดตรวจหาเทสโทสเตอโรน ELISA ให้ตรวจหาเนื้อหาของเทสโทสเตอโรนในซีรั่มของหนู

1.2.8 เนื้อเยื่ออัณฑะของหนู

ตรวจพบเนื้อหาของยีนที่เกี่ยวข้องกับเส้นทางการส่งสัญญาณ Nrf2 โดยใช้ fluorescence quantitative PCR เพื่อตรวจหาระดับการแสดงออกของ mRNA ของยีน เช่น Nrf2, Caspase-3, heme oxygenase-1 (HO-1) , NADPH quinine oxidoreductase-1 (NQO-1) และโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับ ECH คล้าย Kelch-1 (Keap1) ในเนื้อเยื่ออัณฑะของหนู วิธีการรายงานในเอกสารอ้างอิง [25] และแก้ไขเล็กน้อย . Total RNA ถูกสกัดจากเนื้อเยื่ออัณฑะของหนูโดยใช้ชุดสกัด Trizol total RNA แบบเรียงเป็นแนว cDNA ถูกสังเคราะห์โดยการถอดความแบบย้อนกลับโดยใช้ EasyScript One Step gDNA removal และ cDNA Synthesis SuperMix และตรวจพบโดย RTFQ PCR โดยใช้ Trans Start Green qPCRSuper Mix kit ไพรเมอร์สำหรับ Nrf2, Caspase3, HO-1, NQO-1 และ Keap1 ได้รับการออกแบบและสังเคราะห์โดย Bioengineering (Shanghai) Co., Ltd. ลำดับไพรเมอร์แสดงในตารางที่ 1 ข้อมูลถูกบันทึกไว้ โดยใช้ซอฟต์แวร์ในตัวของเครื่องมือ PCR เชิงปริมาณเรืองแสง และค่า Ct ของตัวอย่างถูกแสดงออกอย่างเสถียรในหนูทดลอง แอกตินเป็นยีนอ้างอิงภายใน [26] สูตร 2 - ΔΔ คำนวณระดับนิพจน์ mRNA สัมพัทธ์โดยใช้ CT

1.3 การวิเคราะห์ทางสถิติ

ข้อมูลทั้งหมดวิเคราะห์โดยใช้ SPASS 19.0 สำหรับการวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว โดยมีข้อมูลการวัดแทนด้วย x ± s และ P น้อยกว่าหรือเท่ากับ 0.05 ซึ่งบ่งชี้ถึงความแตกต่างที่มีนัยสำคัญทางสถิติ

ตารางที่ 1. ลำดับเฉพาะของ Nrf2,Caspase3,HO-1,NQO-1,Keap1 และ -actin ที่ใช้ใน RTFQ-PCR

2 ผลลัพธ์

2.1 ผลของ CTWE ต่อน้ำหนักตัวและมวลอัณฑะของหนูที่มีอาการบาดเจ็บที่อัณฑะที่เกิดจาก CTX

เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมปกติ มวลกายและมวลลูกอัณฑะของหนูทดลองกลุ่มตัวอย่างลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (P<0.05); Compared with the model group, the body mass and testicular mass of mice treated with Cistanche deserticola significantly increased (P<0.05). See Table 2.

2.2 ผลของ CTWE ต่อคุณภาพน้ำเชื้อในหนูที่ได้รับบาดเจ็บที่ลูกอัณฑะที่เกิดจาก CTX

จากตารางที่ 3 จะเห็นได้ว่าเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมปกติ การเคลื่อนไหวของสเปิร์มและความเข้มข้นของหนูทดลองกลุ่มตัวอย่างลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (P<0.05), while the sperm deformity rate was significantly increased (P<0.05); Compared with the model group, the sperm motility and sperm concentration in the Cistanche deserticola treatment group were significantly increased (P<0.05), while the sperm deformity rate was significantly reduced (P<0.05). The results showed that CTWE significantly improved the semen quality of mice with testicular injury caused by CTX.

ตารางที่ 2． น้ำหนักตัวและน้ำหนักอัณฑะของหนูในกลุ่มต่างๆ ( x ± s)

NC: การควบคุมปกติ; TIMC: การควบคุมแบบจำลองการบาดเจ็บที่อัณฑะ; CTWE: การบำบัดด้วยสารสกัดจากน้ำ Cistanche tubulosa; * : P ＜ {{0}}}． 05 กับกลุ่ม NC; #: หน้า ＜ 0． 05 เทียบกับกลุ่ม TIMC.

ตารางที่ 3． การเคลื่อนที่ของตัวอสุจิ ความเข้มข้นของตัวอสุจิ และร้อยละของตัวอสุจิที่ผิดปกติทางสัณฐานวิทยา (MAS) ของหนูในกลุ่มต่างๆ ( x ± s)

NC: การควบคุมปกติ; TIMC: การควบคุมแบบจำลองการบาดเจ็บที่อัณฑะ; CTWE: การบำบัดด้วยสารสกัดจากน้ำ Cistanche tubulosa; * : P ＜ {{0}}}． 05 กับกลุ่ม NC; #: หน้า ＜ 0． 05 เทียบกับกลุ่ม TIMC.

รูปที่ 1. ภาพทางสัณฐานวิทยาของเนื้อเยื่ออัณฑะของหนูในกลุ่มต่างๆ (HE × 400)

A＇ และ A: การควบคุมปกติ; B＇and B: การควบคุมรูปแบบการบาดเจ็บที่อัณฑะ; C＇และ C: การบำบัดด้วยสารสกัดจากน้ำ Cistanche tubulosa; ลูกศรชี้ไปที่การเปลี่ยนแปลงของชั้นเซลล์สร้างอสุจิทุกระดับในท่อสร้างอสุจิ กล่องระบุชั้นของเซลล์สร้างอสุจิที่ไม่เป็นระเบียบและลดชั้น; และวงกลมแสดงถึงจำนวนสเปิร์มที่ลดลงในท่อสร้างอสุจิ

2.3 ผลของ CTWE ต่อการเปลี่ยนแปลงทางพยาธิวิทยาของเนื้อเยื่ออัณฑะในหนูที่มีการบาดเจ็บที่อัณฑะที่เกิดจาก CTX

ดังที่เห็นได้จากรูปที่ 1 เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมปกติ โครงสร้างของท่อเซมินิเฟอร์รัสในเนื้อเยื่ออัณฑะของหนูกลุ่มตัวอย่างมีการเปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญ เค้าโครงของเยื่อหุ้มชั้นใต้ดินของท่อสร้างเซมินิเฟอรัสไม่ชัดเจน ระดับของสเปิร์มในทุกระดับในลูเมนจะลดลงและจัดเรียงไม่เป็นระเบียบ และจำนวนสเปิร์มในลูเมนจะลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (รูปที่ 1B, B '); เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มตัวอย่าง หลังจากการรักษาในกลุ่มการรักษา Cistanche Deserticola โครงร่างของเยื่อหุ้มชั้นใต้ดินของท่อเซมินิเฟอรัสในอัณฑะของหนูกลายเป็นสมบูรณ์และชัดเจน ชั้นของสเปิร์มในลูเมนเพิ่มขึ้นและการเรียงตัวของพวกมันมีแนวโน้มที่จะสม่ำเสมอ และจำนวนสเปิร์มในลูเมนเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (รูปที่ 1C, C ')

2.4 ผลของ CTWE ต่อระดับ SOD และ MDA ในเนื้อเยื่ออัณฑะของหนูที่มีการบาดเจ็บที่อัณฑะที่เกิดจาก CTX

เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมปกติ ปริมาณ SOD ในเนื้อเยื่ออัณฑะของหนูกลุ่มตัวอย่างลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (P<0.05) and the MDA content significantly increased (P<0.05); Compared with the model group, the SOD content in the testicular tissue of mice treated with Cistanche deserticola significantly increased (P<0.05) and the MDA content significantly decreased (P<0.05). The results showed that CTWE had a significant improvement effect on SOD and MDA indicators in the testicular tissue of mice with CTX-induced testicular injury. See Table 4.

ตารางที่ 4． ระดับของ SOD และ MDA ในเนื้อเยื่ออัณฑะของหนูในกลุ่มต่างๆ ( x ± s)

SOD: ซูเปอร์ออกไซด์ ดิสมิวเตส; MDA: มาลอนไดอัลดีไฮด์; NC: การควบคุมปกติ; TIMC: การควบคุมแบบจำลองการบาดเจ็บที่อัณฑะ; CTWE: การบำบัดด้วยสารสกัดจากน้ำ Cistanche tubulosa; * : P ＜ {{0}}}． 05 กับกลุ่ม NC; #: หน้า ＜ 0． 05 เทียบกับกลุ่ม TIMC.

2． 5 ผลของ CTWE ต่อปริมาณฮอร์โมนเทสโทสเตอโรนในซีรั่มในหนูที่ได้รับบาดเจ็บที่ลูกอัณฑะซึ่งเกิดจาก CTX

ตามตารางที่ 5 เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุมปกติ ปริมาณฮอร์โมนเทสโทสเตอโรนในซีรั่มของหนูกลุ่มตัวอย่างลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (P<0.05); Compared with the model group, the serum testosterone content of mice treated with Cistanche deserticola significantly increased (P<0.05). This indicates that CTWE not only has a good anti-injury and repair effect on CTX-induced testicular injury in mice but also significantly increases the serum testosterone content in testicular injury mice.

ตารางที่ 5． เนื้อหาของซีรั่ม T ในกลุ่มต่างๆ ของหนู ( x ± s)

NC: การควบคุมปกติ; TIMC: การควบคุมแบบจำลองการบาดเจ็บที่อัณฑะ; CTWE: การบำบัดด้วยสารสกัดจากน้ำ Cistanche tubulosa; * : P ＜ {{0}}}． 05 กับกลุ่ม NC; #: หน้า ＜ 0． 05 เทียบกับกลุ่ม TIMC.

2． 6 ผลของ CTWE ต่อการแสดงออกของยีนทางเดิน Nrf2 ในอัณฑะของหนูที่มีการบาดเจ็บที่ลูกอัณฑะที่เกิดจาก CTX

ดังที่แสดงในรูปที่ 2 เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมปกติ ระดับการแสดงออกของ mRNA ของ NQO-1, HO-1 และ Nrf2 ในเนื้อเยื่ออัณฑะของหนูกลุ่มแบบจำลองถูกควบคุมลงอย่างมีนัยสำคัญ (P<0.05), while the mRNA expression level of the apoptotic gene Caspase3 was significantly upregulated (P<0.05); Compared with the model group, the expression levels of NQO-1, HO-1, and Nrf2 mRNA in the testicular tissue of mice treated with Cistanche deserticola were significantly upregulated (P<0.05), while the expression levels of Caspase3 mRNA were significantly downregulated (P<0.05); The mRNA expression level of Keap1 gene showed no significant difference between the normal control group, model group, and Cistanche deserticola treatment group (P>0.05). ดังนั้น CTWE สามารถซ่อมแซมความเสียหายจากปฏิกิริยาออกซิเดชั่นของ CTX ต่อฮิสทิโอไซต์ของอัณฑะของหนูโดยควบคุมการแสดงออกของ NQO-1, HO-1 และปัจจัยต้านอนุมูลอิสระอื่นๆ ที่ควบคุมโดย Nrf2 และยับยั้งการแสดงออกของยีน apoptosis Caspase3 .

รูปที่ 2． Ｒการแสดงออกเชิงเปรียบเทียบของยีนที่เกี่ยวข้องกับวิถีการส่งสัญญาณ Nrf2 ในกลุ่มต่างๆ ของหนู

NC: การควบคุมปกติ; TIMC: การควบคุมแบบจำลองการบาดเจ็บที่อัณฑะ; CTWE: การบำบัดด้วยสารสกัดจากน้ำ Cistanche tubulosa; * : P ＜ {{0}}}． 05 กับกลุ่ม NC; #: หน้า ＜ 0． 05 กับกลุ่ม TIMC

3 การอภิปราย

ในฐานะที่เป็นยาต้านเนื้องอกและยากดภูมิคุ้มกัน CTX มีความเป็นพิษต่อระบบสืบพันธุ์อย่างมากและสร้างความเสียหายอย่างมากต่อการเจริญพันธุ์ [27] ผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าเนื้อเยื่ออัณฑะของหนูทดลองแบบจำลอง CTX ได้รับความเสียหายอย่างมาก รูปร่างของเยื่อหุ้มเซลล์ฐานของหลอดเซมินิเฟอร์รัสไม่ชัดเจน เส้นผ่านศูนย์กลางของลูเมนลดลง และระดับของสเปิร์มในทุกระดับลดลง และ อัตราความผิดปกติของสเปิร์มเพิ่มขึ้น ความมีชีวิตและความเข้มข้นของสเปิร์มลดลง ซึ่งสอดคล้องกับผลการวิจัยของ Jiang Ping [24] ซึ่งบ่งชี้เพิ่มเติมว่า CTX มีความเป็นพิษต่อระบบสืบพันธุ์อย่างมาก Cistanche Deserticola เป็นยาที่ดีในการเสริมสร้างหยางและบำรุงไต ผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่า CTWE สามารถซ่อมแซมความเป็นพิษต่อระบบสืบพันธุ์ของ CTX ในหนูได้อย่างมีประสิทธิภาพ น้ำหนักและคุณภาพลูกอัณฑะของหนูในกลุ่มที่ได้รับยา Cistanche Deserticola เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ ความเข้มข้นของสเปิร์มและความมีชีวิตเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ อัตราความผิดปกติของสเปิร์มลดลงอย่างมีนัยสำคัญ และปริมาณฮอร์โมนเทสโทสเตอโรนในซีรั่มเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ ในแง่ของจุลพยาธิวิทยา การสังเกตการย้อมสี HE ของส่วนเนื้อเยื่อพบว่าความเสียหายของเนื้อเยื่ออัณฑะได้รับการปรับปรุงอย่างมีนัยสำคัญ รูปร่างของเยื่อชั้นใต้ดินของท่อเซมินิเฟอรัสมีความสมบูรณ์และชัดเจน ระดับของสเปิร์มในลูเมนมีความชัดเจนและมีแนวโน้มที่จะเป็นปกติ และสัณฐานวิทยาของเนื้อเยื่อมีแนวโน้มเป็นปกติ ซึ่งสอดคล้องกับรายงานการวิจัยของ Wang Dejun et al. [20] แสดงว่า CTWE มีผลในการซ่อมแซมความเสียหายของเนื้อเยื่ออัณฑะของหนูที่เกิดจาก CTX

cistanche ทะเลทราย—บำรุงไต

ภายใต้สภาวะทางสรีรวิทยาปกติ เนื้อเยื่อของร่างกายจะกำจัดอนุมูลอิสระของออกซิเจนและเปอร์ออกไซด์ของพวกมันอย่างต่อเนื่องซึ่งผลิตโดยกิจกรรมการเผาผลาญอาหารผ่านระบบต้านอนุมูลอิสระ ดังนั้นจึงช่วยรักษาสมดุลไดนามิกของระบบรีดอกซ์ของร่างกายและหลีกเลี่ยงความเสียหายจากความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันของเนื้อเยื่อ [28] SOD และ MDA เป็นตัวบ่งชี้ที่สำคัญของกิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระของเนื้อเยื่อ ซึ่งสะท้อนถึงความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระของเนื้อเยื่อและระดับของความเสียหายจากความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน ตามลำดับ [29] หม่า เสี่ยวชิง และคณะ [30] พบว่า Cistanche Deserticola สามารถเพิ่มระดับของ SOD และลดระดับของ MDA ในเนื้อเยื่อไตของหนูอย่างมีนัยสำคัญ ดังนั้นจึงมีผลในการป้องกันความเสียหายที่เกิดจาก Gentamicin ต่อเนื้อเยื่อไตของหนู ผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่า CTWE สามารถเพิ่มระดับของกิจกรรม SOD ได้อย่างมีประสิทธิภาพและลดปริมาณของ MDA ในเนื้อเยื่ออัณฑะที่เสียหายของหนู ซึ่งคล้ายกับผลการวิจัยข้างต้น ซึ่งบ่งชี้ว่า CTWE สามารถต้านทานความเสียหายจากความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันโดยเพิ่มความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระ ของเนื้อเยื่ออัณฑะ

สมุนไพรซูเปอร์แมน cistanche—บำรุงไต

Nrf2 เป็นสมาชิกของตระกูล Cap'n'collar transcription factor และมีบทบาทสำคัญในกระบวนการต่างๆ ของโรค เช่น เนื้องอกและการอักเสบ [31] Nrf2 เป็นปัจจัยถอดรหัสสำคัญที่ควบคุมความเครียดของสารต้านอนุมูลอิสระในเซลล์ เมื่อร่างกายประสบกับความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชั่น มันจะเข้าสู่นิวเคลียสและจับกับองค์ประกอบตอบสนองของสารต้านอนุมูลอิสระที่ปลายน้ำ (ARE) ซึ่งควบคุมกิจกรรมการถอดรหัสของปัจจัยต้านอนุมูลอิสระภายนอกต่างๆ รวมถึง SOD, H2O-1 และ NQO-1 และยับยั้งปฏิกิริยาออกซิเดชัน [32]. ภายใต้เงื่อนไขทางพยาธิวิทยา ฟังก์ชันควบคุม Nrf2 ผิดปกติ และฮิสทิโอไซต์ได้รับความเสียหายจากความเครียดออกซิเดชัน เลอ et al. [33] รายงานว่า CTX มีบทบาทในการบาดเจ็บจากความเป็นพิษต่อระบบสืบพันธุ์โดยลดการแสดงออกของ Nrf2 จึงยับยั้งการแสดงออกของปัจจัยต้านอนุมูลอิสระ เช่น HO-1 และ NQO-1 ในการศึกษานี้ การแสดงออกของยีน Nrf2, HO-1 และ NQO-1 ในเนื้อเยื่ออัณฑะของหนูกลุ่มแบบจำลองถูกควบคุมลงอย่างมีนัยสำคัญ และการแสดงออกของยีน Caspase3 ที่ตายแล้วถูกควบคุม ซึ่งบ่งชี้ว่า CTX อาจส่งเสริมการตายของเซลล์อัณฑะฮิสทิโอไซต์ของหนูผ่านทางเดินสัญญาณ Nrf2 ทำให้เนื้อเยื่ออัณฑะเสียหาย ซึ่งสอดคล้องกับผลการวิจัยข้างต้น การแสดงออกของ Nrf2, NQO-1 และ HO-1 ในเนื้อเยื่อลูกอัณฑะของหนูที่ได้รับการรักษาด้วย Cistanche Deserticola นั้นได้รับการควบคุมอย่างมีนัยสำคัญ ในขณะที่การแสดงออกของ Caspase3 ถูกควบคุมลงอย่างมีนัยสำคัญ ซึ่งบ่งชี้ว่า Cistanche Deserticola สามารถ ส่งเสริมการเข้าสู่นิวเคลียร์ของ Nrf2 และการรวม ARE, ควบคุมการแสดงออกของ NQO-1, H2O-1 และปัจจัยต้านอนุมูลอิสระอื่นๆ ที่ควบคุมโดย Nrf2, ซ่อมแซมความเสียหายจากปฏิกิริยาออกซิเดชันของ CTX ต่อฮิสทิโอไซต์อัณฑะของหนู และฟื้นฟูการสร้างสเปิร์มของอัณฑะ การทำงาน.

โดยสรุป CTWE สามารถบรรเทาความเสียหายของเนื้อเยื่ออัณฑะที่เกิดจาก CTX ในหนู ซ่อมแซมโครงสร้างเนื้อเยื่ออัณฑะที่เสียหาย และฟื้นฟูการทำงานของอัณฑะที่สร้างอสุจิ กลไกนี้อาจเกี่ยวข้องกับความสามารถของ CTWE ในการเพิ่มกิจกรรมของเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระ ควบคุมการแสดงออกของยีนปัจจัยความเครียดของสารต้านอนุมูลอิสระที่เกี่ยวข้องกับเส้นทางการส่งสัญญาณ Nrf2 และลดการแสดงออกของยีน Caspase3 ที่ตายแล้ว บทความนี้ส่วนใหญ่สำรวจผลกระทบจากการบาดเจ็บจากความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันของ CTWE ต่อเนื้อเยื่ออัณฑะ และจำเป็นต้องมีการวิจัยเพิ่มเติมเกี่ยวกับกลไกการออกฤทธิ์

อ้างอิง

［1］ Smolej L, Brychtová Y, Cmunt E, et al. การให้ fludarabine ขนาดต่ำและ cyclophosphamide ร่วมกับ rituximab ในการรักษาผู้ป่วยสูงอายุ / ผู้ป่วยที่มีโรคร่วมกับมะเร็งเม็ดเลือดขาวชนิด lymphocytic เรื้อรัง / มะเร็งต่อมน้ำเหลืองชนิด lymphocytic ขนาดเล็ก (CLL /SLL) : ผลลัพธ์ระยะยาวของโครงการ Q-lite โดยกลุ่มศึกษา CLL ของเช็ก Br J Haematol,2021,193( 4) : 769-778．

［2］ Li Ruijun, Qin Yong, Zhou Yalin และคณะ ผลของเปปไทด์ถั่วชิกพีต่อการทำงานของภูมิคุ้มกันของหนูที่มีภาวะภูมิคุ้มกันบกพร่อง วิทยาศาสตร์การอาหาร พ.ศ. 2563 41 (21): 133-139

［3］Liu Bo, Li Ye, Wu Qi และอื่นๆ ผลของ Erxian Tang ต่อการทำงานของระบบสืบพันธุ์ของหนูจำลอง oligospermia ที่เกิดจาก cyclophosphamide Chinese Journal of Andrology, 2018, 24 (6): 547-552

［4］Lai Yongwei, Xi Yanli, Shao Minghai และคณะ ผลการป้องกันของ Myrica rubra flavonoids ต่อ cyclophosphamide ทำให้เกิดพิษต่อระบบสืบพันธุ์ในหนูตัวผู้ การวิจัยด้านสุขภาพ, 2020, 49 (5): 790 - 794

［5］Liu Jianguo, Zhao Hongle, Li Jiaojiao และคณะ ผลของ Bushen Huoxue Recipe ต่อการตายของเซลล์อสุจิอัณฑะของหนูที่เกิดจาก cyclophosphamide Chinese Journal of Andrology, 2020, 26 (9): 826-831

［6］Mi Zhaoyan, Zhang Yanan, Hua Rui และคณะ ผลการป้องกันของ resveratrol ต่อ cyclophosphamide ทำให้เกิดความเสียหายจากปฏิกิริยาออกซิเดชั่นในตัวอสุจิของมนุษย์ Journal of Modern Urology, 2021, 26 (4): 340-344

［7］คณะกรรมการเภสัชตำรับแห่งชาติ. ตำรับยาของสาธารณรัฐประชาชนจีน: ตอนที่ 1 ปักกิ่ง: China Medical Science and Technology Press, กรกฎาคม 2022

［ 8 ］ เจี่ยสั่วเสวี่ย. เภสัชเคมี. ปักกิ่ง: China Traditional Chinese Medicine Press, กรกฎาคม 2015

［9］วังอ่าง. การเตรียม Materia Medica ปักกิ่ง: China Traditional Chinese Medicine Press, 2009.121

［10］Zhi Yajing, Zhen Yaqin, Tian Wei และคณะ ความคืบหน้าการวิจัยองค์ประกอบทางเคมีและฤทธิ์ทางเภสัชวิทยาของ Cistanche Deserticola และการวิเคราะห์การทำนายเครื่องหมายคุณภาพ (Q-Markers) ยาสมุนไพรจีน, 2021, 52 (9): 2758-2767

［11］Wu Yan, Zhang Hong, Bu Ren และคณะ การศึกษาผลการป้องกันของ Cistanche Deserticola Polysaccharide ต่อ D-neneneba galactose เหนี่ยวนำให้เกิดการแก่ตัวแบบเฉียบพลัน Chinese Pharmacological Bulletin, 2017, 33 (7): 927-933

［12］ Wang NQ, Ji SZ, Zhang H และอื่นๆ Herba Cistanches: ต่อต้านริ้วรอย. โรคชรา พ.ศ.2560,8(6) : 740-759．

［13］หวัง เสี่ยวหมิง. งานวิจัยเกี่ยวกับส่วนประกอบและกลไกการออกฤทธิ์ของ Desert Cistanche ในการบรรเทาความเหนื่อยล้าทางร่างกาย (วิทยานิพนธ์ปริญญาเอก). ปักกิ่ง: Peking Union Medical College, 2019139-145

［14］Guo Qiaoli, Wu Zhibo, Zhou Yubi และคณะ การวิเคราะห์องค์ประกอบและฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของพอลิแซ็กคาไรด์จาก Lanzhou Cistanche Deserticola เทคโนโลยีอุตสาหกรรมอาหาร พ.ศ. 2564 42 (15): 96-103

［15］Yang Xiumei, Yang Yu, Wang Danyang และคณะ สารสกัดเอทานอลของ Cistanche Deserticola ในซินเจียงควบคุมผลการเพิ่มภูมิคุ้มกันของการเจริญเติบโตของ DCs ต่อ Th1/Th2 ในหนู วารสารสัตวบาลและสัตวแพทยศาสตร์ พ.ศ. 2564, 52 (3): 820-830

［16］Wang Jingkang, Wang Lichao, Jiang Yong และคณะ การศึกษาฤทธิ์ป้องกันและกลไกของสารสกัดแอลกอฮอล์จาก Cistanche Deserticola ต่อการทำลายเซลล์ประสาทจากภาวะขาดออกซิเจน/ภาวะน้ำตาลในเลือดต่ำ Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2019, 44 (13): 2686-2690

［17］Cai Kerui, Liu Zhixin, Sun Xiaodong และคณะ ผลการป้องกันและกลไกของ Cistanche Deserticola Polysaccharide ต่อเซลล์ประสาทสมองในหนูอายุมากที่ถูกเหนี่ยวนำโดย D-neneneba galactose Chinese Journal of Gerontology, 2018, 38 (19): 4732-4734

［18］Wang Qixin, Chen Zehua, Luo Hujie และคณะ ผลของสารสกัด Cistanche Deserticola ชนิดต่างๆ ต่อการเพิ่มสมรรถภาพทางเพศของหนูแรทที่ไตพร่องหยาง Chinese Journal of Experimental Prescriptions, 2018, 24 (22): 95-101

［19］ Li J, Huang D, He LQ． ผลของ Ｒoucongrong( Herba Cistanch es Deserticolae) ต่อความเป็นพิษต่อระบบสืบพันธุ์ในหนูที่ถูกเหนี่ยวนำโดย gly coside ของ Leigongteng ( Ｒadix et Ｒhizoma Tripterygii) ． เจ ตราดิต ชิน เมด,2557,34( 3) : 324-328．

［20］หวังเต๋อจุน, เซิ่งซูชิง, เหลียงหง ผลของ Cistanche Deserticola ต่อสัณฐานวิทยาและฮิสโตเคมีของอัณฑะของหนูและหลอดน้ำอสุจิ การวิจัยทางกายวิภาค, 2543, 22 (2): 101-103158

［21］Zhao Donghai, Zhang Lei, Zhang Yan และคณะ ผลการรักษาและกลไกของฟีนิลเอทานอลไกลโคไซด์จาก Cistanche Deserticola ต่อการชักนำให้เกิดความผิดปกติของสเปิร์มโตเจนิกในหนูถีบจักรไซโคลฟอสฟาไมด์ Journal of Jilin University (ฉบับการแพทย์), 2014, 40 (3): 612-615

［22］Li Y, Peng Y, Wang MY และอื่นๆ เมแทบอลิซึมในทางเดินอาหารของมนุษย์ของสารสกัดน้ำสมุนไพร cistanches ในหลอดทดลอง: การอธิบายโปรไฟล์เมแทบอลิซึมตามการระบุเมตาโบไลต์ที่ครอบคลุมในน้ำย่อย น้ำย่อยในลำไส้ แบคทีเรียในลำไส้ของมนุษย์ และไมโครโซมในลำไส้ J Agricult Food Chemist, 2017,65( 34) : 7447-7456.

［23］Xu Shanshan, Wu Kangyu, Tu Xingming. การหา Echinacetin ในสารสกัดน้ำของ Cistanche Deserticola โดย HPLC การแพทย์แผนจีนและเภสัชวิทยาคลินิกใหม่, 2019, 30 (5): 598-601

［24］Jiang Ping, Xu Qinghong, Chen Cunwu และคณะ ผลของ Jingui Shenqi Wan ต่อการแสดงออกของยีนวิถีการส่งสัญญาณ Nrf2 ในเนื้อเยื่ออัณฑะของหนูที่มีอาการบาดเจ็บที่ลูกอัณฑะที่เกิดจาก cyclophosphamide Chinese Journal of Andrology, 2020, 26 (2): 160-166

［25］หม่า เฉาหยาง, จู ลี่จวน, หลัว เฉินซี และคณะ ผลการป้องกันของกรดเบทูลินิกต่อการบาดเจ็บของตับที่เกิดจากไซโคลฟอสฟาไมด์ในหนู วิทยาศาสตร์การอาหาร พ.ศ. 2563 41 (21): 147-153

［26］Hai Zhuo, Xiong Xianrong, Ma Hongcheng และคณะ การคัดกรองยีนอ้างอิงภายในสำหรับการวิเคราะห์ PCR เชิงปริมาณเรืองแสงของอัณฑะของหนู Journal of Southwest University for Nationalities (Natural Science Edition), 2020, 46 (5): 448-456

［27］ Guo XB, Zhai JW, Xia H และอื่นๆ ผลการป้องกันของ exosomes ที่ได้จากเซลล์ต้นกำเนิดจากเซลล์กระดูก mesenchymal ต่อความเป็นพิษต่อระบบสืบพันธุ์ของไซโคลฟอสฟาไมด์นั้นสัมพันธ์กับเส้นทางการส่งสัญญาณ p38MAPK/EＲK และ AKT เอเชียน เจ อันดรอล, 2021,23( 4) : 386-391.

［28］ Liu M, Li H, Zhang L และอื่นๆ น้ำมันเมล็ดฝ้ายช่วยบรรเทาอาการบาดเจ็บจากความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชั่นที่เกิดจากโรคหลอดเลือดสมองขาดเลือดผ่านการเปิดใช้งานทางเดิน Nrf2 sig naling โมลนิวโรไบโอล,2021,58(6) : 2494-2507．

［29］ Yang Y, Wu ZZ, Cheng YL และอื่นๆ Ｒเอสเวอราทรอลป้องกันความเสียหายจากปฏิกิริยาออกซิเดชันของเซลล์เยื่อบุผิวที่สร้างเม็ดสีจอประสาทตาโดยการปรับการทำงานของ SOD/MDA และกระตุ้นการแสดงออกของ Bcl-2 Eur Ｒev Med Pharmacol Sci,2019,23( 1) : 378-388．

［30］หม่า เสี่ยวชิง, หวัง จี้, หู จุนผิง และอื่นๆ การศึกษาเภสัชพลศาสตร์ของ glycosides ทั้งหมดของ phenylethanol จาก Cistanche Deserticola ต่อ Gentamicin ที่เหนี่ยวนำให้เกิดการบาดเจ็บของไตเฉียบพลันในหนูแรท Journal of Xinjiang Medical University, 2020, 43 (7): 942-946950

［31］ Huang Y, Yang Y, Xu Y และอื่นๆ แกน Nrf2 /HO-1 ควบคุมการสร้างหลอดเลือดของมะเร็งกระเพาะอาหารผ่านการกำหนดเป้าหมาย VEGF ผู้จัดการมะเร็ง Ｒes,2021,13( ​​1) : 3155-3169．

［32］ Zhao Y, Wang Y, Zhang M และอื่นๆ ผลการป้องกันของ ginsenosides (20Ｒ) -Ｒg3 ต่อ H 2O 2-ทำให้เกิดการบาดเจ็บของเซลล์กล้ามเนื้อหัวใจโดยการกระตุ้นเส้นทางการส่งสัญญาณ Keap-1 /Nrf2 /HO{8}} นักเคมี Biodiver,2021, 18( 4) : e2001007．

［33］ Le X, Ping L, Gu Y และอื่นๆ โพลีแซคคาไรด์หมึกปลาหมึกช่วยลดความเสียหายของอัณฑะที่เกิดจากไซโคลฟอสฟาไมด์ผ่านเส้นทางการออกฤทธิ์ Nrf2 /AＲE ในหนู อิหร่าน J Basic Med Sci,2015,18( 8) : 827-831．