สารสกัด Cistanche Deserticola เพิ่มการสร้างกระดูกในเซลล์สร้างกระดูก--ส่วนที่ I

ติดต่อ:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

เต เหมา หลี่^aet a

เชิงนามธรรม
วัตถุประสงค์ เราตรวจสอบผลกระทบของCistancheทะเลทรายม. (ซีดี) onกระดูกรูปแบบโดยเซลล์สร้างกระดูกที่เพาะเลี้ยง วิธีการ การทดสอบการก่อตัวของปมที่มีแร่ธาตุถูกใช้เพื่อตรวจสอบผลกระทบในหลอดทดลองของ CD(Cistancheทะเลทราย)บนกระดูกรูปแบบ. อัลคาไลน์ฟอสฟาเตส (ALP), โปรตีนมอร์โฟเจเนติกของกระดูก (BMP)-2 และการแสดงออกของ mRNA ของออสทีโอพอนติน (OPN) ถูกวิเคราะห์โดยปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสแบบเรียลไทม์เชิงปริมาณ กลไกการออกฤทธิ์ของ CD(Cistancheทะเลทราย)สารสกัดถูกตรวจสอบโดยใช้ Western blotting ฤทธิ์ต้านโรคกระดูกพรุนในร่างกายของCD(Cistancheทะเลทราย)สารสกัดได้รับการประเมินในหนูที่ตัดรังไข่
ข้อค้นพบที่สำคัญ

ซีดี(Cistancheทะเลทราย)สารสกัดไม่มีผลต่อการเพิ่มจำนวน การย้ายถิ่น หรือการรักษาบาดแผลของเซลล์สร้างกระดูกที่เพาะเลี้ยง แต่เพิ่มขึ้น ALP, BMP-2 และ OPN mRNA และการทำให้เป็นแร่ของกระดูก ไคเนสโปรตีนที่กระตุ้นด้วยไมโตเจน (MAPK) หรือตัวยับยั้งนิวเคลียร์แฟกเตอร์ (NF) -kB ลดCD(Cistancheทะเลทราย)สารสกัดที่กระตุ้นการสร้างกระดูกและ ALP, BMP-2 และนิพจน์ OPN อย่างไรก็ตาม CD(Cistancheทะเลทราย)สารสกัดไม่มีผลต่อการสร้างกระดูก นอกจากนี้ CD(Cistancheทะเลทราย)สารสกัดป้องกันการสูญเสียกระดูกที่เกิดจากการตัดรังไข่ในร่างกาย
บทสรุป

ซีดี(Cistancheทะเลทราย)อาจจะเป็นนวนิยายการสร้างกระดูกตัวแทนในการรักษาโรคกระดูกพรุน

คีย์เวิร์ดการสร้างกระดูก; Cistancheทะเลทราย; สมุนไพรจีน เซลล์สร้างกระดูก

Cistanche deserticolaเป็นสิ่งที่ดีสำหรับการสร้างกระดูก

บทนำ

กระดูกเป็นเนื้อเยื่อที่ซับซ้อนซึ่งประกอบด้วยเซลล์หลายประเภทที่ผ่านกระบวนการต่ออายุและซ่อมแซมอย่างต่อเนื่องซึ่งเรียกว่า 'การสร้างกระดูกใหม่' เซลล์หลักสองประเภทที่รับผิดชอบในการสร้างกระดูกใหม่ ได้แก่ osteoclasts ซึ่งดูดซับกระดูกและเซลล์สร้างกระดูกซึ่งสร้างกระดูกใหม่ การเปลี่ยนแปลงของกระดูกถูกควบคุมโดยฮอร์โมนในระบบหลายชนิด (เช่น ฮอร์โมนพาราไทรอยด์ 1 25-วิตามินดีไดไฮดรอกซี ฮอร์โมนเพศ และแคลซิโทนิน) และปัจจัยในท้องถิ่น (เช่น ไนตริกออกไซด์ พรอสตาแกลนดิน ปัจจัยการเจริญเติบโต และไซโตไคน์)[1] โรคกระดูกพรุนส่งผลให้เกิดการสลายและการก่อตัวของกระดูกไม่พร้อมเพรียงกัน และการสลายตัวของกระดูกส่วนเกินเกินการสร้างกระดูก[2] การรักษาโรคกระดูกพรุนในปัจจุบัน ได้แก่ bisphosphonates, calcitonin และ estrogen ซึ่งเป็นสารยับยั้งการสลายของกระดูกที่รักษามวลกระดูกโดยการยับยั้งการทำงานของ osteoclast [3] อย่างไรก็ตาม ผลของยาเหล่านี้ในการเพิ่มหรือฟื้นฟูมวลกระดูกนั้นค่อนข้างเล็ก ไม่เกิน 2 เปอร์เซ็นต์ต่อปีอย่างแน่นอน[3] จึงมีความต้องการสารสร้างกระดูก เช่น เทอริพาราไทด์ ที่กระตุ้นการสร้างใหม่กระดูกรูปแบบและแก้ไขการเปลี่ยนแปลงของ trabecular microarchitecture ที่เป็นลักษณะเฉพาะของโรคกระดูกพรุน[4,5] เพราะใหม่กระดูกรูปแบบเป็นหน้าที่หลักของเซลล์สร้างกระดูก สารที่ทำหน้าที่โดยการเพิ่มจำนวนเซลล์ของสายพันธุ์ osteoblastic หรือการกระตุ้นการสร้างความแตกต่างของ osteoblasts สามารถเพิ่มการสร้างกระดูกได้[5,6]
แม้ว่ากลไกของโรคกระดูกพรุนยังไม่ชัดเจน แต่กลไกเหล่านี้มักเกี่ยวข้องกับความพร้อมที่ลดลงหรือผลกระทบของปัจจัยการเจริญเติบโตของกระดูก เช่น โปรตีน morphogenetic ของกระดูก (BMPs)[7] BMPs ซึ่งสัมพันธ์กับโครงสร้างกับการเปลี่ยนแปลงของปัจจัยการเจริญเติบโต -b superfamily เดิมถูกระบุโดยความสามารถในการกระตุ้นนอกมดลูกกระดูก รูปแบบในหนู[8] BMPs มีบทบาทสำคัญในกระดูกรูปแบบและการสร้างความแตกต่างของเซลล์กระดูกโดยกระตุ้นการทำงานของอัลคาไลน์ฟอสฟาเตส (ALP) รวมถึงการสังเคราะห์โปรตีโอไกลแคน คอลลาเจน และออสทีโอปอนติน (OPN) การศึกษาเมื่อเร็วๆ นี้พบความเชื่อมโยงระหว่างโรคกระดูกพรุนกับความหลากหลายจำเพาะในยีน BMP-2, ALP และ OPN ซึ่งบ่งชี้ว่ามีความเกี่ยวข้องกับการพัฒนาของโรคกระดูกพรุน

Cistancheทะเลทรายม. (Orobanchaceae; ย่อมาจาก CD)(Cistancheทะเลทราย)เป็นสมุนไพรพื้นเมืองในประเทศจีนและมีการใช้กันอย่างแพร่หลายในยาแผนโบราณในฐานะตัวแทนการรักษาเนื่องจากคุณสมบัติของยากล่อมประสาท ยาแก้ปวด และภูมิคุ้มกัน [11] การศึกษาทางเภสัชวิทยาสมัยใหม่พบว่า CD(Cistancheทะเลทราย)สารสกัดสามารถกระตุ้นภูมิคุ้มกัน [12] ไล่อนุมูลอิสระ[13] และเพิ่มการทำงานของซูเปอร์ออกไซด์ดิสมิวเตส[14] สารต้านการอักเสบและสารต้านอนุมูลอิสระมีศักยภาพในการรักษาโรคกระดูกพรุนโดยเพิ่มขึ้นกระดูก รูปแบบและ/หรือยับยั้งการสลายของกระดูก[15,16] อย่างไรก็ตาม ผลของ CD(Cistancheทะเลทราย)ยังไม่ได้กำหนดการทำงานของเซลล์กระดูก ที่นี่เรารายงานว่าCD(Cistancheทะเลทราย)สารสกัดไม่ส่งผลต่อการเพิ่มจำนวน การย้ายถิ่น หรือกิจกรรมการรักษาบาดแผลของเซลล์สร้างกระดูกที่เพาะเลี้ยง แต่เพิ่ม ALP, BMP-2 และการแสดงออกของ OPN และการทำให้เป็นแร่ของกระดูก นอกจากนี้ เราแสดงให้เห็นว่าโปรตีนไคเนสที่กระตุ้นด้วยไมโตเจน (MAPK) และนิวเคลียสแฟกเตอร์ (NF)-kB อาจเกี่ยวข้องกับการเพิ่มการแสดงออกของยีนและการสร้างแร่กระดูก ในทางตรงกันข้าม CD(Cistancheทะเลทราย)สารสกัดไม่ได้ยับยั้งการสร้าง osteoclastogenesis ในหลอดทดลอง โดยเฉพาะอย่างยิ่ง การรักษาหนูด้วย CD(Cistancheทะเลทราย)สารสกัดป้องกันการสูญเสียมวลกระดูกที่เกิดจากการตัดรังไข่ภายในร่างกาย ข้อมูลของเราจึงแนะนำว่าCD(Cistancheทะเลทราย)อาจใช้กระตุ้นกระดูกรูปแบบเพื่อรักษาโรคกระดูกพรุน

Cistanche deserticolaเสริมภูมิต้านทาน

วัสดุและวิธีการ

สารสกัดและวัสดุ Cistanche Deserticola

ซีดี(Cistancheทะเลทราย)ซื้อสารสกัดจาก Chuang Song-Zong Pharmaceutical Company (Kaohsiung, Taiwan) การสกัดและการแยก CD(Cistancheทะเลทราย)ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (บนพื้นฐานของข้อมูลสเปกตรัมที่พวกเขาได้ระบุองค์ประกอบทางเคมีรวมถึงเบตาซิโตสเตอรอล daucosterol กรดซัคซินิก ไตรอะคอนทานอล แอกทีโอไซด์ เบทาอีน และพอลิแซ็กคาไรด์) โพลีโคลนัลแอนติบอดีของกระต่ายที่จำเพาะสำหรับไคเนสที่ควบคุมสัญญาณ p- extracellular (ERK), ERK, p-p38, p38, pc-Jun N-terminal kinases (JNK), JNK, p-p65 และ p65 ถูกซื้อจาก Santa Cruz Biotechnology ( ซานตาครูซ สหรัฐอเมริกา) ซื้อชุด osteocalcin ELISA จาก Biosource Technology (Nivelles ประเทศเบลเยียม) เทโลเปปไทด์ C-terminal ของชุดคอลลาเจน ELISA แบบ I ได้มาจาก Cross Laps (Herlev, เดนมาร์ก) การกลายพันธุ์ที่โดดเด่นและลบของ p38 จัดทำโดย Dr. J. Han (ศูนย์การแพทย์ตะวันตกเฉียงใต้, ดัลลัส, สหรัฐอเมริกา) JNK dominant-negative mutant จัดทำโดย Dr. M. Karin (มหาวิทยาลัยแคลิฟอร์เนีย ซานดิเอโก สหรัฐอเมริกา) การกลายพันธุ์ที่โดดเด่นและลบของ ERK2 จัดทำโดย Dr. M. Cobb (ศูนย์การแพทย์ตะวันตกเฉียงใต้) รีเอเจนต์อื่นๆ ทั้งหมดได้มาจาก Sigma-Aldrich (เซนต์หลุยส์ สหรัฐอเมริกา)

การเพาะเลี้ยงเซลล์

สายพันธุ์เซลล์สร้างกระดูกพรุนของหนู MC3T3-E1 ถูกซื้อจาก American Type Culture Collection (ATCC; Rockville, USA) เพาะเลี้ยงเซลล์ในอากาศ 95 เปอร์เซ็นต์ CO2 5 เปอร์เซ็นต์ด้วย a-MEM ที่เสริมด้วย HEPES 20 มม. และซีรั่มลูกวัวที่ไม่กระตุ้นด้วยความร้อน 10 เปอร์เซ็นต์ กลูตามีน 2 มม. เพนิซิลลิน (100 U/ml) และสเตรปโตมัยซิน (100 มก.) /มล.)

การวัดการก่อตัวของก้อนแร่

ประเมินการก่อตัวของปมแร่ตามที่อธิบายไว้[18] โดยสรุป เซลล์สร้างกระดูกถูกเพาะเลี้ยงในอาหารที่มีวิตามินซี (50 มก./มล.) และบี-กลีเซอโรฟอสเฟต (10 มม.) เป็นเวลาสองสัปดาห์ และตัวกลางถูกเปลี่ยนทุกสามวัน หลังจากฟักตัวด้วย CD(Cistancheทะเลทราย)สารสกัดเป็นเวลา 12 วัน ล้างเซลล์สองครั้งด้วยน้ำเกลือ Tris-buffered 20 มม. ที่มีโซเดียมคลอไรด์ 0.15 ม. (pH 7.4) ตรึงในเอทานอล 75 เปอร์เซ็นต์ (ปริมาตร/ปริมาตร) ที่เย็นจัดเป็นเวลา 30 นาที และอากาศ- แห้ง. การสะสมแคลเซียมถูกกำหนดหาโดยใช้การย้อมสีอลิซารินเรด-เอส โดยย่อ เซลล์และเมทริกซ์ที่ตรึงด้วยเอทานอลถูกย้อมเป็นเวลา 1 ชั่วโมงด้วย 40 มม. alizarin red-S (pH 4.2) และล้างด้วยน้ำอย่างกว้างขวาง คราบที่ถูกจับถูกชะด้วย 10 เปอร์เซ็นต์ (w/v) เซทิลไพริดิเนียม คลอไรด์และอลิซาริน เรด-S ในตัวอย่างถูกหาปริมาณโดยการวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 550 นาโนเมตร และเปรียบเทียบกับเส้นโค้งมาตรฐาน หนึ่งโมลของ alizarin red-S เลือกจับแคลเซียมประมาณสองโมล

Cistanche deserticolaเป็นสิ่งที่ดีสำหรับการสร้างกระดูก

ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสแบบเรียลไทม์เชิงปริมาณ

RNA ทั้งหมดถูกสกัดจากเซลล์สร้างกระดูกโดยใช้ชุด TRIzol (MDBio Inc., ไทเป, ไต้หวัน) การถอดรหัสย้อนกลับดำเนินการโดยใช้ RNA ทั้งหมด 2 มก. และไพรเมอร์ oligo(dT)[19,20] ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสแบบเรียลไทม์เชิงปริมาณ (qPCR) ดำเนินการโดยใช้ TaqMan® ขั้นตอนเดียว PCR Master Mix (Applied Biosystems, Carlsbad, สหรัฐอเมริกา). cDNA ทั้งหมดถูกเติม (100 นาโนกรัมต่อปฏิกิริยา 25-มิลลิลิตร) ด้วยไพรเมอร์จำเพาะต่อลำดับและโพรบ Taqman® ไพรเมอร์และโพรบของยีนเป้าหมายทั้งหมดถูกซื้อในเชิงพาณิชย์ ซึ่งรวมถึง b-actin เป็นตัวควบคุมภายใน (Applied Biosystems) การสอบวิเคราะห์ qPCR ดำเนินการเป็นสามเท่าบนระบบการตรวจหาลำดับ StepOnePlus (ระบบชีวภาพประยุกต์) สภาวะแบบเป็นรอบคือ 10-นาทีการกระตุ้นโพลีเมอร์ที่ 95 องศาที่ตามด้วย 40 รอบที่ 95 องศาเป็นเวลา 15 วินาที และ 60 องศาเป็นเวลา 60 วินาที ขีดจำกัดถูกกำหนดไว้เหนือพื้นหลังการควบคุมที่ไม่ใช่เทมเพลต และภายในเฟสเชิงเส้นของการขยายยีนเป้าหมายเพื่อคำนวณหมายเลขรอบที่ตรวจพบการถอดรหัส (แสดง CT)

การวิเคราะห์ Western blot

เซลล์ไลเสตถูกเตรียมตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้[21,22] โปรตีนได้รับการแก้ไขโดย SDS-PAGE และถ่ายโอนไปยังเยื่อ Immobilon polyvinyl difluoride (Millipore, Billerica, USA) blots ถูกบล็อกด้วย 4 เปอร์เซ็นต์ของ bovine serum albumin เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง และจากนั้นตรวจสอบด้วย anti-human antibodies ของกระต่ายที่ต้าน p-65 หรือ p-p65 (1: 1000) เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง หลังจากล้างสามครั้ง หยดถูกบ่มด้วยแอนติบอดีทุติยภูมิของลาที่ต้านกระต่ายด้วยเปอร์ออกซิเดส (1: 1000) เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง รอยเปื้อนถูกมองเห็นได้ด้วยการฉายแสงเคมีที่ได้รับการปรับปรุงโดยใช้ฟิล์ม X-OMAT LS (Eastman Kodak, Rochester, USA)

โรคกระดูกพรุนที่เกิดจากการตัดรังไข่

หนู ICR เพศเมีย อายุสี่สัปดาห์ 22~28 กรัม ถูกใช้สำหรับการศึกษานี้ หนูเมาส์ถูกตัดรังไข่ทั้งสองข้างภายใต้การระงับความรู้สึกไตรคลอโรอะซีตัลดีไฮด์ (100 มก./กก.) และหนูควบคุมได้รับการผ่าตัดหลอก (Sham) สำหรับการเปรียบเทียบ วัดความหนาแน่นของแร่ธาตุในกระดูกและปริมาณแร่ธาตุในกระดูกหลังการให้สารCD . ความเข้มข้นต่างๆ ในช่องปาก(Cistancheทะเลทราย)แยกทุกสองวันเป็นเวลาสี่สัปดาห์ ความหนาแน่นของแร่ธาตุกระดูกในร่างกายทั้งหมดและปริมาณแร่ธาตุในกระดูกถูกกำหนดโดยเครื่องดูดกลืนรังสีเอ็กซ์แบบใช้พลังงานคู่ (DEXA; XR-26; Norland, Fort Atkinson, USA) โดยใช้โหมดสำหรับวัตถุขนาดเล็กตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้[18, 23] โปรโตคอลทั้งหมดเป็นไปตามแนวทางของสถาบันและได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการการดูแลสัตว์ของมหาวิทยาลัยการแพทย์จีน

การวิเคราะห์ทางสถิติ

การวิเคราะห์ทางสถิติดำเนินการโดยใช้ Prism 401ซอฟต์แวร์ (บริษัท GraphPad Software Inc. ซานดิเอโก สหรัฐอเมริกา) ค่าที่กำหนดคือ SEM เฉลี่ย ทำการวิเคราะห์ทางสถิติระหว่างสองตัวอย่างโดยใช้การทดสอบ t ของนักเรียน การเปรียบเทียบทางสถิติของกลุ่มมากกว่าสองกลุ่มดำเนินการโดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียวกับการทดสอบหลังสิ้นสุดของ Bonferroni ในทุกกรณี P <0.05>

Cistanche deserticolaเป็นสิ่งที่ดีสำหรับการสร้างกระดูก

ผลลัพธ์

Cistanche ทะเลทรายสารสกัดเพิ่มแร่ธาตุกระดูกโดยเซลล์สร้างกระดูก นอกจากนี้ CD(Cistancheทะเลทราย)สารสกัดเป็นเวลา 24 หรือ 48 ชั่วโมงไม่ส่งผลต่อการเพิ่มจำนวนของเซลล์ osteoblast MC3T3-E1 ของหนูเมาส์ในการสอบวิเคราะห์ MTT (ไม่แสดงข้อมูล) เนื่องจากการสร้างความแตกต่างของ osteoblast เป็นกระบวนการที่ซับซ้อนซึ่งเกี่ยวข้องกับการเพิ่มจำนวนและการย้ายเซลล์ เราจึงได้ทดสอบความสามารถในการย้ายของเซลล์ MC3T3-E1 หลังการรักษาด้วยซีดี(Cistancheทะเลทราย)สารสกัด. จากการทดสอบ Transwell และการรักษาบาดแผล เราพบว่า CD(Cistancheทะเลทราย)สารสกัดไม่ส่งผลต่อการย้ายถิ่นของ osteoblast (ไม่แสดงข้อมูล) การก่อตัวของก้อนแร่เป็นหนึ่งในเครื่องหมายของการเจริญเต็มที่ของเซลล์สร้างกระดูก การย้อมสี A ลิซารินเรด S แสดงให้เห็นว่าก้อนแร่ก่อตัวขึ้นเมื่อเพาะเลี้ยงเซลล์สร้างกระดูกเป็นเวลาสองสัปดาห์ในอาหารที่มีวิตามินซี (50 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) และ -กลีเซอโรฟอสเฟต (10 มม.) ลักษณะที่ขึ้นกับความเข้มข้นโดยการเติมซีดี(Cistancheทะเลทราย)(รูปที่ 1a). ดังนั้น CD(Cistancheทะเลทราย)สารสกัดที่เหนี่ยวนำให้เกิดการสร้างก้อนกระดูกโดยเซลล์สร้างกระดูกที่เพาะเลี้ยง แต่ไม่เพิ่มจำนวนหรือการย้ายถิ่นของพวกมัน นอกจากนี้เรายังตรวจสอบบทบาทของCD(Cistancheทะเลทราย)สารสกัดใน osteoclastogenesis ที่เกิดจาก RANKL แต่ไม่พบผลกระทบ (ไม่แสดงข้อมูล)

สารสกัดจาก Cistanche Deserticola ช่วยเพิ่มอัลคาไลน์ฟอสฟาเตส โปรตีน morphogenetic ของกระดูก-2 และการแสดงออกของ osteopontin ในเซลล์สร้างกระดูกที่เพาะเลี้ยง

เซลล์สร้างกระดูกที่แตกต่างกันแสดงกิจกรรม ALP ที่เพิ่มขึ้น ซึ่งสัมพันธ์กับการแสดงออกของเอนไซม์ในระดับสูง เราพบว่าการรักษาด้วย CD(Cistancheทะเลทราย)สารสกัดเป็นเวลา 72 ชั่วโมงเพิ่มกิจกรรมของ osteoblast ALP อย่างมีนัยสำคัญ (รูปที่ 1b) ด้วยบทบาทสำคัญของ BMP-2, ALP และ OPN ในการสร้างความแตกต่างของกระดูกพรุน เราจึงทดสอบว่าซีดี(Cistancheทะเลทราย)extract ออกฤทธิ์ต่อการสร้างความแตกต่างของ osteoblast โดยควบคุมการแสดงออกของ BMP-2, ALP และ OPN การรักษาเซลล์ด้วย CD(Cistancheทะเลทราย)แยกการแสดงออกของ mRNA ที่เพิ่มขึ้นของ ALP, BMP-2 และ OPN ในลักษณะที่ขึ้นกับความเข้มข้น (รูปที่ 1c) ซึ่งแสดงให้เห็นว่าซีดีนั้น(Cistancheทะเลทราย)สารสกัดที่เหนี่ยวนำให้เกิดการสร้างความแตกต่างของเซลล์สร้างกระดูกโดยการปรับเพิ่มการแสดงออกของ ALP, BMP-2 และ OPN

สารสกัดจาก Cistanche Deserticola ช่วยเพิ่มการสร้างก้อนกระดูกผ่านวิถีไคเนสที่กระตุ้นด้วยไมโตเจน

มีรายงานว่า MAPK มีบทบาทสำคัญในกระดูกรูปแบบ[24,25] ต่อไปเราจึงตรวจสอบว่าเส้นทางการส่งสัญญาณนี้เกี่ยวข้องกับ CD . หรือไม่(Cistancheทะเลทราย)การทำให้เป็นแร่กระดูกที่เกิดจากสารสกัด การปรับสภาพเซลล์ด้วยตัวยับยั้ง ERK U0126, p38 inhibitor SB203580 หรือตัวยับยั้ง JNK SP600125 ลดซีดี(Cistancheทะเลทราย)การเพิ่มแร่ธาตุของกระดูกที่สกัดจากสารสกัด (รูปที่ 2a, 3a และ 4a) นอกจากนี้ สารยับยั้งยังปิดกั้น CD(Cistancheทะเลทราย)ALP ที่เหนี่ยวนำโดยสารสกัด, BMP-2 และนิพจน์ OPN (รูปที่ 2b–4c) การทรานส์เฟกชันของเซลล์ด้วยการกลายพันธุ์ ERK2, p38 หรือ JNK ลดCD(Cistancheทะเลทราย)การแยกเพิ่มขึ้นในการแสดงออกของ ALP, BMP-2 และ OPN mRNA (รูปที่ 2c, 3c และ 4c) ต่อไป เราตรวจสอบการเปิดใช้งาน ERK, p38 และ JNK โดยตรงหลังจาก CD(Cistancheทะเลทราย)การบำบัดด้วยสารสกัด การฟักตัวของเซลล์ด้วย CD(Cistancheทะเลทราย)สารสกัดที่เหนี่ยวนำให้เกิดฟอสโฟรีเลชัน ERK, p38 และ JNK (รูปที่ 2d, 3d และ 4d) ดังนั้น ERK, p38 และ JNK จึงเป็นสื่อกลางที่เพิ่มขึ้นกระดูกรูปแบบเกิดจาก CD(Cistancheทะเลทราย)การรักษาเซลล์สร้างกระดูก

สารสกัด Cistanche Deserticola ช่วยเพิ่มการสร้างก้อนกระดูกผ่านวิถีนิวเคลียส-kB

ตามที่กล่าวไว้ก่อนหน้านี้ การเปิดใช้งาน NF-kB จำเป็นสำหรับกระดูกรูปแบบต่อไปเรารักษาเซลล์สร้างกระดูกด้วยสารยับยั้ง NF-kB pyrrolidine dithiocarbamate (PDTC) และ N-tosyl-L-phenylalanine chloromethyl ketone (TPCK) จาก Calbiochem (Darmstadt, Germany) เพื่อตรวจสอบว่าการกระตุ้น NF-kB เป็น เกี่ยวข้องกับซีดี(Cistancheทะเลทราย)การทำให้เป็นแร่กระดูกที่เกิดจากสารสกัด รูปที่ 5a แสดงว่าการปรับสภาพเซลล์สร้างกระดูกด้วย PDTC หรือ TPCK ยับยั้ง CD(Cistancheทะเลทราย)การก่อรูปก้อนกระดูกที่เหนี่ยวนำด้วยสารสกัด และยังลดการเพิ่มขึ้นในการแสดงออกของ ALP, BMP-2 และ OPN (รูปที่ 5b และ 5c) ฟอสฟอริเลชันของหน่วยย่อย NF-kB p65 เป็นตัวบ่งชี้การเปิดใช้งาน NF-kB [28] สอดคล้องกับสิ่งนี้ เราพบว่าซีดี(Cistancheทะเลทราย)สารสกัดเพิ่ม p65 phosphorylation ในเซลล์สร้างกระดูก (รูปที่ 5d) ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่าการกระตุ้น NF-kB มีความสำคัญสำหรับ ALP, BMP-2 ที่เหนี่ยวนำด้วยการแยก CD และการแสดงออกของ OPN และการสร้างก้อนกระดูก

รูปที่ 4 การมีส่วนร่วมของไคเนส c-Jun N-terminal (JNK) ในCistancheทะเลทราย(CD) การแยกแร่ธาตุจากกระดูกในเซลล์สร้างกระดูก (a) เซลล์ถูกชุบในเพลต24-หลุมและเพาะเลี้ยงในตัวกลางที่มีวิตามินซี (50 มก./มล.) และบี-กลีเซอโรฟอสเฟต (10 มิลลิโมลาร์) เป็นเวลาสองสัปดาห์ เซลล์ถูกบำบัดร่วมกันด้วยCD(Cistancheทะเลทราย)สารสกัด (26 มก./มล.) บวก SP600125 (3 mM) การก่อรูปปมแร่ธาตุถูกประเมินโดยการย้อมสีอลิซาริน เรด-เอส (n=5) (b, c) เซลล์ถูกปรับสภาพก่อนด้วย SP600125 เป็นเวลา 30 นาทีหรือทรานส์เฟกด้วยการกลายพันธุ์ JNK หรือ 24 ชั่วโมง ตามด้วยการกระตุ้นด้วยสารสกัดจากซีดี และฤทธิ์ของอัลคาไลน์ฟอสฟาเตส (ALP) และ ALP, โปรตีนมอร์โฟเจเนติกของกระดูก (BMP)-2 และ การแสดงออกของ mRNA ของ osteopontin (OPN) ถูกวัดโดยชุด ALP และปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสแบบเรียลไทม์เชิงปริมาณ (d) เซลล์ถูกบำบัดด้วยสารสกัด CD สำหรับช่วงเวลาที่ระบุ และการแสดงออกของ p-JNK ถูกตรวจสอบโดย Western blotting *ป< 0.05,="" compared="" with="" control="" group;="">< 0.05,="" compared="" with="" cd="">(Cistancheทะเลทราย)กลุ่มสกัด

การยับยั้งการสูญเสียมวลกระดูกด้วยสารสกัด Cistanche Deserticola ในหนูที่ตัดรังไข่

เพื่อตรวจสอบผลกระทบของCD(Cistancheทะเลทราย)สารสกัดจากการสูญเสียมวลกระดูกและโรคกระดูกพรุนในหนูเพศเมียโดยการตัดรังไข่ ตามที่คาดไว้ หนูเมาส์ที่ตัดรังไข่แสดงความหนาแน่นของแร่ธาตุกระดูกในร่างกายทั้งหมดและปริมาณแร่ธาตุในกระดูกที่ลดลง (รูปที่ 6a และ 6b) การรักษาด้วย CD(Cistancheทะเลทราย)สารสกัดเป็นเวลาสี่สัปดาห์ยับยั้งการสูญเสียความหนาแน่นของกระดูกและปริมาณแร่ธาตุในกระดูกในลักษณะที่ขึ้นกับปริมาณรังสี (รูปที่ 6a และ 6b) ความเข้มข้นของ ALP ในเลือดสามารถสะท้อนถึงกิจกรรมการสร้างกระดูก ดังแสดงในรูปที่ 6c, CD(Cistancheทะเลทราย)สารสกัดยับยั้งการลดลงของกิจกรรม ALP ในซีรัมที่เกิดจากการตัดรังไข่ นอกจากนี้ CD(Cistancheทะเลทราย)สารสกัดยังช่วยเพิ่มระดับของ osteocalcin ซึ่งเป็นเครื่องหมายของกระดูกรูปแบบและลดระดับของเทโลเปปไทด์ที่ปลาย C ของคอลลาเจนประเภท I ซึ่งเป็นเครื่องหมายของการสลายของกระดูก (รูปที่ 6d และ 6e) การค้นพบนี้จึงสนับสนุนศักยภาพและประสิทธิภาพของ CD(Cistancheทะเลทราย)สารสกัดในการป้องกันการสูญเสียมวลกระดูกในร่างกาย

รูปที่ 6 การยับยั้งการตัดรังไข่ที่เกิดจากการลดความหนาแน่นของมวลกระดูกและปริมาณแร่ธาตุในกระดูกโดยCistancheทะเลทราย(ซีดี) สารสกัด หนู ICR เพศเมียได้รับการผ่าตัดหลอกหรือตัดรังไข่ออก หนูเมาส์ที่ตัดรังไข่ได้รับการบำบัดด้วยความเข้มข้นของ CD . ที่ระบุ(Cistancheทะเลทราย)สกัดโดยการให้อาหารทางปาก ความหนาแน่นของมวลกระดูกในร่างกายทั้งหมด (a), ปริมาณแร่ธาตุในกระดูก (b), กิจกรรมอัลคาไลน์ฟอสฟาเตสในซีรัม (ALP) (c), osteocalcin ในซีรัม (d) และเทโลเปปไทด์ C-terminal ในซีรัมของคอลลาเจนชนิดที่ 1 (e) ถูกกำหนดเป็นสี่ สัปดาห์หลังการผ่าตัด ข้อมูลถูกนำเสนอเป็น SE เฉลี่ย n=8–10 หนู/กลุ่ม *P < 0.05="" เมื่อเปรียบเทียบกับการหลอกลวง="" #p="">< 0.05="">

อภิปรายผล

คลิกที่นี่เพื่อดูข้อมูลเกี่ยวกับส่วนที่ II (การอภิปรายและบทสรุป) ของบทความนี้

จาก: 'Cistancheทะเลทรายสารสกัดเพิ่มขึ้นกระดูกรูปแบบในเซลล์สร้างกระดูกโดยเต เหมา หลี่^aet al

---© 2012 ผู้เขียน JPP © 2012 ราชสมาคมเภสัชกรรม 2012วารสารเภสัชและเภสัชวิทยา, 64, หน้า 897–907