Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosides กระตุ้นการตายของเซลล์ในเซลล์มะเร็งตับ H22 ผ่านเส้นทางการส่งสัญญาณทั้งภายนอกและภายใน
Mar 15, 2022
สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม:ali.ma@wecistanche.com
เผิงเฟย หยวน1 et al
เชิงนามธรรม
พื้นหลัง: Cistanche tubulosa(Schenk) R. Wight เป็นยาจีนโบราณที่ทำให้รากของต้น Tamarix เป็นปรสิต และเคยใช้รักษาอาการหย่อนสมรรถภาพทางเพศของผู้ชาย ภาวะเป็นหมัน ความอ่อนแอของร่างกาย และเป็นยาบำรุงกำลัง อย่างไรก็ตาม ฤทธิ์ต้านมะเร็งของมะเร็งตับก็ยังเข้าใจยาก เราตรวจสอบฤทธิ์ต้านเนื้องอกของCistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์(CTPG) บนเซลล์มะเร็งตับ H22 ทั้งในหลอดทดลอง และในร่างกาย และกลไกของเซลล์
วิธีการ:สัณฐานวิทยา ความมีชีวิตอะพอพโทซิสวัฏจักรของเซลล์และศักย์ของเยื่อหุ้มยล (Δψm) ของเซลล์ H22 ถูกวิเคราะห์โดยกล้องจุลทรรศน์แบบกลับหัว การทดสอบ MTT และโฟลว์ไซโตเมทรีตามลำดับ การแสดงออกและการกระตุ้นโปรตีนในอะพอพโทซิสทางเดินถูกตรวจพบโดย Western blot ผลการต้านเนื้องอกในร่างกายได้รับการประเมินในแบบจำลองเมาส์เนื้องอกที่สร้างขึ้นโดยใช้หนูเมาส์คุนหมิงเพศผู้
ผลลัพธ์:การรักษาด้วย CTPG ยับยั้งการเติบโตของเซลล์ H22 อย่างมีนัยสำคัญในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยาและเวลา ซึ่งสัมพันธ์กับการเพิ่มขึ้นอะพอพโทซิสและการหยุดวงจรของเซลล์ที่เฟส G0/G1 และ G2/M นอกจากนี้ การควบแน่นของโครโมโซมถูกสังเกตพบในเซลล์ H22 ที่บำบัดด้วย CTPG การรักษาด้วย CTPG เพิ่มอัตราส่วน Bax/Bcl-2 อย่างมีนัยสำคัญ ลด Δψm และเพิ่มการปลดปล่อยไซโตโครมค ระดับของ caspase ที่แยกออก-8 และ caspase-9 ในเส้นทางการส่งสัญญาณทั้งภายนอกและภายในเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญซึ่งเปิดใช้งาน caspase ตามลำดับ-7 และ-3 เพื่อแยก PARP สุดท้าย CTPG ยับยั้งการเติบโตของเซลล์ H22 ในหนู และปรับปรุงอัตราการรอดชีวิตของหนูเนื้องอก
บทสรุป: ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า CTPG ยับยั้งการเจริญเติบโตของเซลล์ H22 ผ่านทั้งภายนอกและภายในอะพอพโทซิสทางเดิน
คำสำคัญ: Cistanche tubulosa, ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์, อะพอพโทซิส, เส้นทางการส่งสัญญาณ, โมเดลเมาส์เนื้องอก
คลิกเพื่อออร์แกนิค Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides
พื้นหลัง
มะเร็งตับอยู่ในอันดับที่หกสำหรับอุบัติการณ์มะเร็งและอันดับที่สี่สำหรับการเสียชีวิตด้วยโรคมะเร็งทั่วโลก นอกจากนี้ ยังอยู่ในอันดับที่สี่สำหรับอุบัติการณ์มะเร็งและอันดับหนึ่งสำหรับอัตราการเสียชีวิตด้วยโรคมะเร็งในประเทศที่มีดัชนีทางสังคมวิทยาต่ำ [1] ในประเทศจีน มะเร็งตับเป็นสาเหตุอันดับสามของการเสียชีวิตที่เกี่ยวข้องกับมะเร็งในปี 2558 [2] มะเร็งตับปฐมภูมิมากกว่าร้อยละ 90 เป็นมะเร็งตับ (HCC) ในโลก [3] ปัจจุบัน การผ่าตัดตับเป็นทางเลือกหลักสำหรับการรักษา HCC อย่างไรก็ตาม น้อยกว่า 30 เปอร์เซ็นต์ของผู้ป่วยที่มี HCC ตรงตามเกณฑ์ของการผ่าตัดรักษาตับและอัตราการรอดชีวิตโดยรวม 5- ปียังคงต่ำถึง 35-50 เปอร์เซ็นต์เนื่องจากอัตราการกลับเป็นซ้ำสูง [4, 5] . ทางเลือกในการรักษาสำหรับผู้ป่วยที่มี HCC ระดับกลางถึงขั้นสูงนั้นมีจำกัดมาก Sorafenib ซึ่งเป็นยาที่มีเป้าหมายในระดับโมเลกุล ได้รับการอนุมัติจาก FDA ให้เป็นการรักษาทางเลือกแรกสำหรับ HCC ขั้นสูง อย่างไรก็ตาม โซราเฟนิบสามารถยืดอายุการอยู่รอดได้เพียง 3 เดือนเท่านั้น และอัตราการตอบสนองน้อยกว่า 4 เปอร์เซ็นต์ [6, 7] การพัฒนายาใหม่หรือกลยุทธ์ต่อต้านจุดตรวจสุขภาพฯ เป็นเรื่องเร่งด่วน
การแพทย์แผนจีน (TCM) เพียงอย่างเดียวหรือใช้ร่วมกับกลยุทธ์อื่น ๆ ถูกนำมาใช้ในการรักษา HCC และแสดงให้เห็นถึงประโยชน์ทางคลินิก ซึ่งรวมถึงเวลาการอยู่รอดที่ยาวนานขึ้น คุณภาพชีวิตที่ดีขึ้น อาการไม่พึงประสงค์ลดลง และอื่นๆ [8, 9] Cistanche เป็น TCM ชนิดหนึ่ง มีหน้าที่ทางชีวภาพหลายอย่าง เช่น ต่อต้านอนุมูลอิสระ ต้านการอักเสบ ต่อต้านริ้วรอย และป้องกันระบบประสาท [10, 11]ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ได้รับการพิจารณาว่าเป็นส่วนประกอบสำคัญของ Cistanche ซึ่งมีกิจกรรมที่หลากหลายรวมถึงการต่อต้านอนุมูลอิสระ ต้านการอักเสบ การป้องกันตับและระบบประสาท [12-15] กลุ่มของเราได้รายงานว่าCistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์(CTPG) สามารถชักนำให้อะพอพโทซิสในเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16-F10 และยับยั้งการเติบโตของเนื้องอกในหนูทดลอง [16] ในการศึกษานี้ เราวัดผลต้านเนื้องอกของ CTPG ต่อเซลล์ HCC H22 ทั้งในหลอดทดลองและในร่างกาย และตรวจสอบกลไกของมัน เราพบว่า CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)ชักนำอะพอพโทซิสในเซลล์ H22 ผ่านเส้นทางการส่งสัญญาณทั้งภายนอกและภายใน และยับยั้งการเติบโตของเนื้องอก H22 ในหนูทดลอง
วิธีการ
เซลล์ไลน์
เซลล์มะเร็งตับ H22 ของหนูเมาส์ได้มาจาก Xinjiang Key Laboratory of Biological Resources and Genetic Engineering, Xinjiang University (Urumqi, Xinjiang, China) และเพาะเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อ RPMI 1640 (Gibco) ที่เสริมด้วย 100 U/ml penicillin และ 100 ug/ml สเตรปโตมัยซินและซีรั่มโคนมของทารกในครรภ์ที่ไม่ใช้งานความร้อน 10 เปอร์เซ็นต์ (Gibco) ที่ 37 องศาในบรรยากาศที่มีความชื้น CO2 5 เปอร์เซ็นต์
การทดสอบ MTT
CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)ซื้อมาจาก Hetian Dichen Biotech Co., Ltd. (Hetian, Xinjiang, China) และสารประกอบหลักของ CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)มีคุณสมบัติและวัดปริมาณโดยโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง [16] ความอยู่รอดของเซลล์ถูกประเมินโดย 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) (Sigma, St. Louis, MO สหรัฐอเมริกา) การทดสอบ เซลล์ H22 ถูกฉีดวัคซีนลงในจาน 96-หลุมที่ความหนาแน่น 2 × 104 เซลล์ในตัวกลาง 100 ul ต่อหลุมและเพาะเลี้ยงที่ 37 องศา หลังจาก 24 ชั่วโมง เซลล์ถูกบำบัดด้วยความเข้มข้นที่แตกต่างกันของ CTPG (0,100, 200, 300 และ 400 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) หรือ 0.3 เปอร์เซ็นต์ DMSO (เท่ากับความเข้มข้นนั้นใน CTPG 400 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) เป็นเวลา 24, 48 และ 72 ชั่วโมง ตามลำดับ หลังจากการปั่นแยกที่ 1000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 7 นาที, สารลอยลอยเหนือตะกอนถูกละทิ้งและ 100 ul ของสารละลาย MTT (5 มก./มล. ใน PBS) ถูกเติมลงในแต่ละหลุม เพลตถูกบ่มที่ 37 องศาเป็นเวลา 4 ชั่วโมงและเติม 100 ul DMSO เพื่อละลายผลึกฟอร์มาซานที่ก่อรูป ค่า OD490 ตรวจพบโดยเครื่องอ่านไมโครเพลท 96-หลุม (Bio-Rad Laboratories, CA, USA) ความมีชีวิตของเซลล์คำนวณตามสูตร: ความมีชีวิตของเซลล์ ( เปอร์เซ็นต์ )=(ODtreated/ODuntreated) x 100 เปอร์เซ็นต์
Cistanche tubulosa phenylethanoid ไกลโคไซด์
การตรวจหาอะพอพโทซิส
เซลล์ H22 ถูกบำบัดด้วยความเข้มข้นของ CTPG . ที่ต่างกัน(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)({{0}}, 100, 200, 300 และ 400 ug/ml) หรือ 0.3 เปอร์เซ็นต์ DMSO เป็นเวลา 24 ชั่วโมง แล้วย้อมด้วย Annexin VFITC/Propidium iodide (PI)อะพอพโทซิสชุดตรวจจับ (YEASEN ประเทศจีน) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ตัวอย่างถูกวิเคราะห์โดยโฟลว์ไซโตเมทรี (BD FACSCalibur, USA)
การตรวจหาศักยภาพของเยื่อหุ้มไมโตคอนเดรีย
เซลล์ H22 ถูกบำบัดด้วยความเข้มข้นของ CTPG . ที่ต่างกัน(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)(0, 200 และ 400 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) เป็นเวลา 24 ชั่วโมง แล้วย้อมด้วยสีย้อม JC-1 ที่ซึมผ่านเมมเบรนได้ (เบโยไทม์ ประเทศจีน) เป็นเวลา 20 นาทีที่ 37 องศา หลังจากการล้างสองครั้งด้วยบัฟเฟอร์ JC-1 ตัวอย่างถูกแขวนลอยใหม่ด้วยบัฟเฟอร์ JC-1 300 ul และวิเคราะห์โดยโฟลว์ไซโตเมทรี (BD FACSCalibur, USA)
การวิเคราะห์วัฏจักรเซลล์
เซลล์ H22 ถูกฉีดวัคซีนในจานเพาะเลี้ยง 60 มม. และบำบัดด้วยความเข้มข้นที่แตกต่างกันของ CTPG (0, 100,200, 300 และ 400 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) หรือ 0.3 เปอร์เซ็นต์ DMSO เป็นเวลา 24 ชั่วโมง . เซลล์ทั้งหมดถูกรวบรวมและล้างสองครั้งด้วย PBS เซลล์ถูกตรึงในเอธานอลที่เย็นจัดด้วยน้ำแข็ง 70 เปอร์เซ็นต์ ที่ -20 องศาเป็นเวลา 2 ชั่วโมง และล้างสองครั้งด้วย PBS จากนั้นแขวนตะกอนอีกครั้งใน 300 ul Propidium iodide/RNase staining buffer (BD Biosciences) หลังจาก 10 นาทีที่อุณหภูมิห้อง ตัวอย่างถูกรวบรวมโดยโฟลว์ไซโตเมทรี (BD FACSCalibur สหรัฐอเมริกา) และการกระจายวัฏจักรเซลล์ถูกวิเคราะห์ด้วยซอฟต์แวร์ ModFit LT 3.0
ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ในCistanche tubulosa
Hoechst 33,258 การย้อมสี
การเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาของนิวเคลียสของเซลล์ H22 ถูกวิเคราะห์โดยการย้อมสี Hoechst 33,258 ซึ่งจับ DNA ที่ซึมผ่านเมมเบรนได้ เซลล์ H22 ถูกเพาะในจาน 6-หลุมที่ความเข้มข้น 1 × 105 เซลล์/หลุมในตัวกลางขนาด 2 มล. หลังจากการบรรจบกัน 60 เปอร์เซ็นต์ ~ 70 เปอร์เซ็นต์ เซลล์ได้รับการบำบัดด้วย CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)(0, 100, 200, 300 และ 400 ไมโครกรัม/มล.) เป็นเวลา 24 ชั่วโมง เซลล์ถูกรวบรวมและตรึงด้วยพาราฟอร์มัลดีไฮด์ที่เย็นเป็นน้ำแข็ง 4 เปอร์เซ็นต์ที่ 4 องศาเป็นเวลา 10 นาที หลังจากล้างด้วย PBS เซลล์ถูกย้อมด้วย Hoechst 33,258 (Beyotime, China) ที่ 4 องศาเป็นเวลา 10 นาที ตัวอย่างถูกสังเกตโดยกล้องจุลทรรศน์เรืองแสงแบบกลับหัว (Nikon Eclipse Ti-E, Japan)
หยดตะวันตก
Anti-caspase-3, anti-cleaved caspase-3, Anti-Bcl-2 และ anti-Bax ถูกซื้อจาก Beyotime Biotech Co., Ltd. (เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน) แอนติ-แคสเปส-7, แอนติ-คีม-แคสเปส-7, แอนติ-แคสเปส-8, แอนตี้-คลีฟ-แคสเปส-8, แอนติ-แคสเปส-9, แอนติ แคสเปสที่แยกออก-9, แอนติ-PARP, PARP ที่ต้านการแตกแยก, แอนติเมาส์ IgG-HRP และ IgG-HRP ที่ต้านกระต่ายถูกซื้อมาจากเทคโนโลยีการส่งสัญญาณของเซลล์ Anti- -actin ซื้อมาจาก Beijing ComWin Biotech Co., Ltd. (ปักกิ่ง ประเทศจีน)
เซลล์ H22 ถูกบำบัดด้วยความเข้มข้นของ CTPG . ที่ต่างกัน(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)({{0}}, 100, 200, 300 และ 400 ug/ml) หรือ 0.3 เปอร์เซ็นต์ DMSO เป็นเวลา 24 ชั่วโมง เซลล์ถูกรวบรวมและสลายด้วย Cell Lysis Solution RIPA (Beijing ComWin Biotech Co., Ltd) เป็นเวลา 30 นาทีบนน้ำแข็ง ตัวอย่างถูกปั่นลง (12,000 กรัมเป็นเวลา 15 นาทีที่ 4 องศา ) เพื่อรวบรวมส่วนลอยเหนือตะกอนและความเข้มข้นของโปรตีนถูกวัดโดยชุด BCA (Thermo Fisher Scientific, USA) ปริมาณโปรตีนที่เท่ากันในแต่ละตัวอย่างถูกแยกออกโดย SDS-PAGE 12 เปอร์เซ็นต์ และถ่ายโอนไปยังเยื่อ PVDF (Biosharp, China) หลังจากการปิดกั้นด้วยบัฟเฟอร์ TBST มีนมที่ไม่มีไขมัน 5 เปอร์เซ็นต์ เยื่อหุ้มถูกบ่มด้วยแอนติบอดีปฐมภูมิที่สอดคล้องกันและแอนติบอดีทุติยภูมิที่คอนจูเกตกับฮอร์สแรดิชเปอร์ออกซิเดส (HRP) ตามลำดับ หลังจากล้างด้วย TBST ตรวจพบโปรตีนเป้าหมายโดยชุดทดสอบ ECL (Beyotime, China)
คำแถลงเกี่ยวกับสัตว์และจริยธรรม
หนูคุนหมิงเพศผู้อายุ 6-8 สัปดาห์ถูกซื้อมาจาก Animal Laboratory Center, Xinjiang Medical University (Urumqi, Xinjiang, China) หนูถูกเลี้ยงไว้ในห้องควบคุมสัตว์แบบหมุนรอบแสงมาตรฐานของมหาวิทยาลัยซินเจียง การศึกษาในสัตว์ทั้งหมดได้ดำเนินการตามแนวทางของคณะกรรมการการดูแลและการใช้สัตว์ของมหาวิทยาลัยซินเจียง โปรโตคอลได้รับการอนุมัติโดยคณะกรรมการจริยธรรมการทดลองกับสัตว์ของ Xinjiang Key Laboratory of Biological Resources and Genetic Engineering (BRGE-AE001) มหาวิทยาลัยซินเจียง
การศึกษาหนูเนื้องอก
สำหรับการเหนี่ยวนำของแบบจำลองเมาส์เนื้องอก หนูเมาส์คุนหมิงเพศผู้ถูกฉีดใต้ผิวหนังด้วยเซลล์ H22 1 × 106 เซลล์ใน 100 ul PBS เข้าไปในปีกขวา หลังจาก 3 วัน หนูถูกสุ่มแบ่งเป็น 3 กลุ่ม (7 หนู/กลุ่ม) กลุ่มควบคุมถูกฉีดด้วย DMSO 0.1 มล. ใต้ผิวหนังรอบๆ เนื้องอก กลุ่ม CTPG-200 และ CTPG-400 ถูกฉีดใต้ผิวหนังด้วย CTPG 200 หรือ 400 มก./กก.(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)ใน 0.1 มล. DMSO รอบเนื้องอก หนูได้รับการรักษาทุก 2 วันนานถึง 21 วัน วัดขนาดเนื้องอกโดยใช้เครื่องวัดเส้นผ่าศูนย์กลางสูงสุด 25 วัน และปริมาตรเนื้องอกคำนวณตามสูตร: ปริมาตรเนื้องอก (mm3)=(ยาว×กว้าง2)/2 หลังจาก 25 วัน การรอดชีวิตของหนูเนื้องอกได้รับการตรวจสอบทุกวันจนกระทั่งสิ้นสุดการศึกษานี้
การวิเคราะห์ทางสถิติ
นัยสำคัญทางสถิติคำนวณโดยการวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียวในกลุ่มบำบัดและกลุ่มควบคุม ข้อมูลทั้งหมดแสดงเป็นค่าเฉลี่ย±ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (SD) p < 0.05="">
ผลลัพธ์
CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)ลดความมีชีวิตของเซลล์ H22 ในหลอดทดลอง
เพื่อสำรวจฤทธิ์ต้านเนื้องอกของ CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)บน HCC เซลล์ H22 ถูกบำบัดด้วยความเข้มข้นที่แตกต่างกันของ CTPG (0, 100, 200, 300 และ 400 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ในหลอดทดลอง หลังจากผ่านไป 24 ชั่วโมง สังเกตลักษณะทางสัณฐานวิทยาของเซลล์ H22 โดยใช้กล้องจุลทรรศน์แบบกลับหัว เราพบว่าสัณฐานวิทยาของเซลล์ H22 เปลี่ยนแปลงไปอย่างมากโดยการรักษาด้วย CTPG ด้วยความเข้มข้นของ CTPG ที่เพิ่มขึ้น เซลล์จึงมีขนาดเล็กและกลม และจำนวนเซลล์ก็ลดลงอย่างมากเช่นกัน (รูปที่ 1a) การสอบวิเคราะห์ MTT ถูกใช้เพื่อวิเคราะห์ความมีชีวิตของเซลล์ H22 หลังการบำบัดด้วย CTPG เป็นเวลา 24, 48 และ 72 ชั่วโมง ตามลำดับ CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)ลดความมีชีวิตของเซลล์ H22 อย่างมีนัยสำคัญในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยาและขึ้นอยู่กับเวลา (รูปที่ 1b) CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)ที่ 300 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร มาถึงอัตราการยับยั้งที่ดีที่สุด (รูปที่ 1c) ค่าของ IC50 ของ CTPG สำหรับเซลล์ H22 คือ 236 ไมโครกรัม/มิลลิลิตรที่ 24 ชั่วโมงและ 169.8 ไมโครกรัม/มิลลิลิตรที่ 48 ชั่วโมง
CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)กระตุ้นการตายของเซลล์ในเซลล์ H22
เพื่อตรวจสอบว่าความมีชีวิตที่ลดลงของเซลล์ H22 นั้นเป็นสื่อกลางโดยการเหนี่ยวนำของอะพอพโทซิส, เซลล์ H22 ถูกบำบัดด้วยความเข้มข้นที่แตกต่างกันของ CTPG (0,100, 200, 300 และ 400 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) เป็นเวลา 24 ชั่วโมงและย้อมด้วย PI และ Annexin V ผลโฟลว์ไซโตเมทรีแสดงให้เห็นว่า CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)ถูกชักจูงอย่างมีนัยสำคัญอะพอพโทซิสของเซลล์ H22 (รวมทั้งช่วงต้นและปลายอะพอพโทซิส) ในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา (รูปที่ 2a) แม้ว่า CTPG . ปริมาณสูง(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)ยังเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญเนื้อร้ายของเซลล์ H22 เนื้อร้ายมีบทบาทสำคัญในการยับยั้งการเจริญเติบโตของเซลล์ H22 เนื่องจากสัดส่วนที่ต่ำกว่า (8.3 เปอร์เซ็นต์) เมื่อเทียบกับอะพอพโทซิส(ร้อยละ 52.6 ). นอกจากนี้ โปรตีนทั้งหมดของเซลล์ H22 ถูกแยกออกหลังจาก CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)การบำบัดและการแสดงออกของมะเร็งต่อมน้ำเหลืองต้านอะพอพโทซิสบีเซลล์ 2 (Bcl-2) และโปรอะพอพโทซิส BCL-2-โปรตีน X ที่เกี่ยวข้อง (Bax) ตรวจพบโดย Western blot ข้อมูลการสแกนระดับสีเทาแสดงให้เห็นว่าระดับการแสดงออกของ Bax และ Bcl-2 เพิ่มขึ้นและลดลงตามลำดับ อัตราส่วน Bax/Bcl-2 เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (รูปที่ 2b) ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า CTPG ก่อให้เกิดอะพอพโทซิสในเซลล์ H22
CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)ทำให้เกิดการรวมตัวของโครโมโซมและการหยุดวงจรของเซลล์ในเซลล์ H22
มีรายงานว่าความเสียหายของดีเอ็นเอและการจับกุมวัฏจักรของเซลล์ที่เกิดจากยาสามารถยับยั้งการเจริญเติบโตของเซลล์เนื้องอกและก่อให้เกิดอะพอพโทซิสในเซลล์เนื้องอก [17, 18] เพื่อตรวจหาสัณฐานวิทยาของนิวเคลียสในเซลล์ H22 หลัง CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)การบำบัดเป็นเวลา 24 ชั่วโมง, เซลล์ H22 ถูกย้อมโดย Hoechst 33,342 และสังเกตโดยใช้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสงกลับหัว CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)เซลล์ที่บำบัดแล้วแสดงการเพิ่มขึ้นตามขนาดยาของโครมาตินที่ควบแน่นอย่างสว่างสดใสของนิวเคลียส ในขณะที่เซลล์ที่ไม่ผ่านการบำบัดแสดงนิวเคลียสที่ย้อมเป็นเนื้อเดียวกัน (รูปที่ 3a) การกระจายตัวของวัฏจักรเซลล์ในเซลล์ H22 ถูกวิเคราะห์เพิ่มเติมโดยการย้อมสี PI หลังการบำบัดด้วย CTPG เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ดังแสดงในรูปที่ 3b, CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)การรักษาเพิ่มสัดส่วนของเซลล์เฟส G0/G1- และ G2/M อย่างมีนัยสำคัญ และลดสัดส่วนของเซลล์เฟส S อย่างมีนัยสำคัญ ซึ่งแนะนำว่า CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)ชักนำให้เกิดการหยุดเฟส G0/G1 และ G2/M ในเซลล์ H22 ปริมาณสูงของ CTPG ยังเพิ่มสัดส่วนของเซลล์ย่อย G1 อย่างมีนัยสำคัญ
CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)ลดศักยภาพของเยื่อหุ้มไมโตคอนเดรียและเพิ่มการปลดปล่อยไซโตโครม c
เส้นทางที่ขึ้นกับยลมีบทบาทสำคัญในการเหนี่ยวนำของอะพอพโทซิส[19, 20]. การเปลี่ยนแปลงศักย์ของเยื่อหุ้มยล (Δψm) สามารถเป็น
ตรวจสอบโดยการย้อมสี JC-1 เนื่องจากการรวม JC-1 (การเรืองแสงสีแดง) สามารถแตกตัวเป็นโมโนเมอร์ (การเรืองแสงสีเขียว) ด้วยการลดลงของ Δψm [21] หลังจาก CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)การบำบัดเป็นเวลา 24 ชั่วโมง, เซลล์ H22 ถูกย้อมด้วยสีย้อม JC-1 ข้อมูลโฟลว์ไซโตเมทรีแสดงให้เห็นว่าการเรืองแสงสีแดงในช่อง FL-2 และการเรืองแสงสีเขียวในช่อง FL-1 ลดลงอย่างมีนัยสำคัญและเพิ่มขึ้นตาม CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)การรักษา. สัดส่วนของ PE−FITC บวกเซลล์เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (รูปที่ 4a) ซึ่งบ่งชี้ว่า CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)ลด Δψm ในเซลล์ H22 ซึ่งสอดคล้องกับอัตราส่วน Bax/Bcl-2 ที่เพิ่มขึ้น ดังนั้นเราจึงสังเกตเห็นการปลดปล่อย cytochrome c เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญเมื่อ CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)การรักษา (รูปที่ 4b) ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า CTPG อาจก่อให้เกิดอะพอพโทซิสในเซลล์ H22 ผ่านทางวิถีที่ขึ้นกับไมโตคอนเดรีย (ภายใน)
CTPG เปิดใช้งานเส้นทางแคสเปสและป้องกันการซ่อมแซมดีเอ็นเอ
ถัดไป การกระตุ้นของ caspase ที่เกิดจาก CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)วิเคราะห์โดยผ่านวิถีการส่งสัญญาณทั้งภายนอกและภายใน หลังจาก CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)การรักษาเป็นเวลา 24 ชั่วโมง แยกโปรตีนทั้งหมดออกจากเซลล์ H22 และ Western blot ตรวจพบระดับของโปร-และแคลป-แคสเปส เมื่อเทียบกับการควบคุมที่ไม่ได้รับการรักษาหรือ DMSO CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)การรักษาที่มีการควบคุมอย่างมีนัยสำคัญไม่เพียงแต่ระดับของ caspase แยก-8 (ทางเดินภายนอก) แต่ยังรวมถึงระดับของ caspase ที่แยกออกด้วย-9 (ทางเดินภายใน) (รูปที่ 5) ตามลำดับ แคสเปสที่ถูกกระตุ้น-8 และ -9 แยกโปรแคสเปสส่วนปลายน้ำ-3 และ -7 ที่สังเกตพบในรูปที่ 5 แคสเปสที่ถูกกระตุ้น-3 แยกดีเอ็นเอ ซ่อมแซมเอนไซม์ของโพลี (ADP-ไรโบส) โพลีเมอเรส (PARP) เพื่อป้องกันการซ่อมแซมดีเอ็นเอและสะสมความเสียหายของดีเอ็นเอตามที่สังเกตได้จากรูปที่ 3a ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)ชักนำอะพอพโทซิสในเซลล์ H22 ผ่านเส้นทางการส่งสัญญาณทั้งภายนอกและภายใน
CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)ยับยั้งการเจริญเติบโตของ H22 HCC ในร่างกาย และเพิ่มอัตราการรอดชีวิตของหนูเนื้องอก
ในที่สุดฤทธิ์ต้านเนื้องอกของ CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)บน HCC ถูกประเมินผลในแบบจำลองหนูเมาส์ที่เป็นเนื้องอก ซึ่งจัดตั้งขึ้นโดยการฉีดใต้ผิวหนังของเซลล์ H22 หลังจาก 3 วันของการฉีดเซลล์ H22 หนูที่เป็นเนื้องอกได้รับการรักษาด้วย CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)8 ครั้ง. น้ำหนักตัวของหนูเมาส์และขนาดเนื้องอกถูกเฝ้าติดตามที่จุดเวลาที่ระบุ ดังแสดงในรูปที่ 6a น้ำหนักตัวของหนูในแต่ละกลุ่มไม่มีความแตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญ ซึ่งบ่งชี้ว่าขนาดยาที่เลือกของ CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)ไม่มีผลข้างเคียงที่ชัดเจน ที่น่าสนใจคือ การเติบโตของเนื้องอกในหนูเมาส์ที่บำบัดด้วย CTPG ทั้ง 200 มก./กก. และ 400 มก./กก. ถูกยับยั้งอย่างมีนัยสำคัญ (รูปที่ 6b) นอกจากนี้ CTPG . สองโดส(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)การบำบัดปรับปรุงการอยู่รอดของหนูที่เป็นเนื้องอกอย่างมาก (3/7, 3/7) เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม (0/7) ที่ส่วนท้ายของการทดลอง (รูปที่ 6b) นอกจากนี้เรายังพบว่า CTPG ช่วยเพิ่มการแพร่กระจายของ splenocytes ที่แยกได้จากหนู Kunming เพศผู้ในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา (รูปที่ 6c) อย่างมีนัยสำคัญซึ่งแนะนำว่า CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)มีผลกระตุ้นภูมิคุ้มกัน
การอภิปราย
มีการใช้ TCM ในการรักษาโรคต่างๆ รวมทั้งมะเร็งมาอย่างยาวนาน มีรายงานว่า TCM สามารถกระตุ้นอะพอพโทซิสในเซลล์เนื้องอกประเภทต่างๆ ทั้งจากภายนอก (ตัวรับความตาย) และเส้นทางส่งสัญญาณภายใน (ขึ้นอยู่กับไมโตคอนเดรีย) เพื่อออกฤทธิ์ต้านเนื้องอก [22-25] สองเส้นทางสามารถเปิดใช้งาน caspase-8 และ -9 ตามลำดับ [24, 26] ที่นี่เราพบว่า CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)ยับยั้งการเจริญเติบโตของเซลล์ H22 อย่างมีนัยสำคัญผ่านการเหนี่ยวนำให้เกิดการตายของเซลล์และหยุดวงจรของเซลล์ ระดับของ caspase แบบแยกส่วน-8 และ -9 ได้รับการควบคุมอย่างมีนัยสำคัญโดย CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)การรักษาโดยบอกว่าทั้งเส้นทางการส่งสัญญาณภายนอกและภายในมีส่วนร่วมในการเหนี่ยวนำของอะพอพโทซิส. การศึกษาก่อนหน้านี้ของเราแสดงให้เห็นว่า CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)ที่เหนี่ยวนำให้เกิดการตายของเซลล์มะเร็งเมลาโนมา B16-F10 โดยวิถีทางที่ขึ้นกับไมโตคอนเดรียซึ่งเพิ่มระดับของแคสเปสที่แยกออก-9แต่ไม่ใช่แคสเปส-8 [16] CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)อาจกระตุ้นเส้นทางการส่งสัญญาณที่แตกต่างกันในเซลล์เนื้องอกประเภทต่างๆ
ความสมบูรณ์ของเยื่อหุ้มไมโตคอนเดรียถูกควบคุมอย่างเข้มงวดโดยสมาชิกของตระกูลโปรตีน BCL-2 ซึ่งรวมถึง Bax และ Bcl-2 [27, 28] อัตราส่วนของ Bax ต่อ Bcl-2 มีบทบาทสำคัญในการพึ่งพาไมโตคอนเดรียอะพอพโทซิสทางเดิน [29]. ในเซลล์ H22 ที่บำบัดด้วย CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์), อัตราส่วน Bax/Bcl-2 ได้รับการควบคุมอย่างมีนัยสำคัญ ซึ่งอาจทำให้ Δψm ลดลงและการปลดปล่อยไซโตโครม c ที่สังเกตพบในการศึกษานี้ ดังนั้น pro-caspase-9 จึงถูกแยกออกและเปิดใช้งาน สุดท้าย ผู้ริเริ่มของ caspase ที่ใช้งานอยู่-8 และ -9 ได้กระตุ้นผู้ดำเนินการ caspase-3 เพื่อแยก PARP เพื่อป้องกันการซ่อมแซม DNA เมื่อนำมารวมกันแล้ว ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า CTPG เหนี่ยวนำให้เกิดอะพอพโทซิสในเซลล์ H22 ผ่านเส้นทางการส่งสัญญาณทั้งภายนอกและภายใน ในรูปแบบเมาส์เนื้องอก CTPG ยับยั้งการเจริญเติบโตของ H22 HCC อย่างมีนัยสำคัญ และปรับปรุงการอยู่รอดของหนูเนื้องอกอย่างมาก ที่น่าสนใจคือ CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)ส่งเสริมการเพิ่มจำนวนของเซลล์ม้ามจากหนูคุนหมิงโดยขึ้นกับขนาดยา ซึ่งสอดคล้องกับการศึกษาก่อนหน้านี้ของเรา [16] ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า CTPG อาจยับยั้งการเจริญเติบโตของ H22 HCC ในหนูขาวผ่านทั้งฤทธิ์ต้านเนื้องอกโดยตรงและการเพิ่มภูมิคุ้มกันทางอ้อม
Cistanche tululosaสินค้า
บทสรุป
CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)ยับยั้งการเจริญเติบโตของเซลล์ H22 ทั้งในหลอดทดลองและในร่างกายและเหนี่ยวนำอะพอพโทซิสในเซลล์ H22 ผ่านเส้นทางการส่งสัญญาณทั้งภายนอกและภายใน ข้อมูลเหล่านี้บ่งชี้ว่า CTPG(Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์)อาจเป็นผู้สมัครที่มีศักยภาพในการรักษา HCC
ตัวย่อ
Bax: BCL-2-โปรตีน X ที่เกี่ยวข้อง; Bcl-2: มะเร็งต่อมน้ำเหลือง B เซลล์ 2; CTPG:Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์; HCC: มะเร็งตับ; HRP: มะรุมเปอร์ออกซิเดส; MTT: 3-(4, 5-ไดเมทิลไทอะซอล-2-อิล)-2, 5-ไดฟีนิลเตตราโซเลียม โบรไมด์; PARP: เอนไซม์ซ่อมแซมดีเอ็นเอของโพลี (ADP-ไรโบส)พอลิเมอเรส; TCM: ยาจีนโบราณ; Δψm: ศักยภาพของเยื่อหุ้มไมโตคอนเดรีย
เงินทุน
งานนี้ได้รับการสนับสนุนโดยโครงการแนะนำผู้มีความสามารถระดับสูงของเขตปกครองตนเองซินเจียงอุยกูร์ถึง JL, ทุนมูลนิธิวิทยาศาสตร์ธรรมชาติแห่งชาติจีน (31460241) แก่ JL และกองทุนเริ่มต้นระดับปริญญาเอกของมหาวิทยาลัยซินเจียง (BS160261 ถึง XW และ BS150236 ถึง วายแอล).
ความพร้อมใช้งานของข้อมูลและวัสดุ
ข้อมูลดิบสำหรับการศึกษานี้มีให้ตามคำขอที่สมเหตุสมผลสำหรับผู้เขียนที่เกี่ยวข้อง
ผลงานของผู้เขียน
JL และ JL ออกแบบการทดลอง PY, JL, AA และ YY ทำการทดลอง LX, XW และ YL วิเคราะห์ข้อมูล PY, JL และ JL เขียนต้นฉบับ ผู้เขียนทุกคนมีส่วนร่วมและอนุมัติต้นฉบับสุดท้าย
การอนุมัติจรรยาบรรณ
การศึกษาในสัตว์ทดลองได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการจริยธรรมการทดลองกับสัตว์ของ Xinjiang Key Laboratory of Biological Resources and Genetic Engineering, Xinjiang University
การแข่งขันความสนใจ
ผู้เขียนประกาศว่าพวกเขาไม่มีส่วนได้เสียในการแข่งขัน
หมายเหตุของผู้จัดพิมพ์
Springer Nature ยังคงเป็นกลางเกี่ยวกับการอ้างสิทธิ์ในเขตอำนาจศาลในแผนที่ที่เผยแพร่และความเกี่ยวข้องของสถาบัน
รายละเอียดผู้แต่ง
1Xinjiang Key Laboratory of Biological Resources and Genetic Engineering, College of Life Science and Technology, Xinjiang University, 666 Shengli Road, Urumqi, Xinjiang 830046, China.2วิทยาลัยชีววิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัยครูซินเจียง 102 Xinyi Road, Urumqi 830054, Xinjiang, China3โรงพยาบาลเนื้องอกในเครือ Xinjiang Medical University, Urumqi 830011 ประเทศจีน
Cistanche tululosaสินค้า
จาก: 'Cistanche tubulosa ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์กระตุ้นอะพอพโทซิสในเซลล์มะเร็งตับ H22 ผ่านเส้นทางการส่งสัญญาณทั้งภายนอกและภายใน ' โดย Pengfei Yuan1 et al
---หยวนและคณะ BMC ยาเสริมและยาทางเลือก (2018) 18:275 https://doi.org/10.1186/s12906-018-2201-1
อ้างอิง
1. ความร่วมมือกับโรคมะเร็งทั่วโลก ภาระของ Fitzmaurice C, Allen C, Barber RM, Barregard L, Bhutta ZA, Brenner H, Dicker DJ, Chimed-Orchir O, Dandona R, et al. อุบัติการณ์มะเร็งทั่วโลก ระดับภูมิภาค และระดับชาติ อัตราการเสียชีวิต ปีที่สูญเสียชีวิต ปีที่อยู่กับความทุพพลภาพ และปีชีวิตที่ปรับความทุพพลภาพสำหรับกลุ่มมะเร็ง 32 กลุ่ม พ.ศ. 2533 ถึง พ.ศ. 2558: การวิเคราะห์อย่างเป็นระบบสำหรับภาระการศึกษาโรคทั่วโลก จามา ออนคอล 2017;3:524–48.
2. Chen W, Zheng R, Baade PD, Zhang S, Zeng H, Bray F, Jemal A, Yu XQ, สถิติ He J.Cancer ในประเทศจีน, 2015. CA Cancer J Clin 2016;66:115–32.3. สมาคมยุโรปเพื่อการศึกษาตับ, องค์กรยุโรปเพื่อการวิจัยและรักษาโรคมะเร็ง. แนวทางปฏิบัติทางคลินิก EASL-EORTC: การจัดการมะเร็งตับ เจเฮปาตอล. 2012;56:908–43.
4. Roayaie S, Obeidat K, Sposito C, Mariani L, Bhoori S, Pellegrinelli A, Labow D, Llovet JM, Schwartz M, Mazzaferro V. การผ่าตัดมะเร็งตับน้อยกว่าหรือเท่ากับ 2 ซม.: ผลลัพธ์จากศูนย์ตะวันตกสองแห่ง วิทยาตับ. 2013;57:1426–35.
5. Ting CT, Cheng YY, Tsai TH. ปฏิกิริยาระหว่างยาและสมุนไพรระหว่างสูตรป้องกันตับแบบดั้งเดิมกับ Sorafenib ต่อความเป็นพิษต่อตับ จุลพยาธิวิทยา และเภสัชจลนศาสตร์ในหนูแรท โมเลกุล 2017;22:E1034.
6. Llovet JM, Ricci S, Mazzaferro V, Hilgard P, Gane E, Blanc JF, de Oliveira AC, Santoro A, Raoul JL, Forner A และอื่น ๆ Sorafenib ในมะเร็งตับขั้นสูง N Engl เจ เมด. 2008;359:378–90.
7. Cheng AL, Kang YK, Chen Z, Tsao CJ, Qin S, Kim JS, Luo R, Feng J, Ye S, Yang TS และอื่น ๆ ประสิทธิภาพและความปลอดภัยของ sorafenib ในผู้ป่วยในภูมิภาคเอเชียแปซิฟิกที่เป็นมะเร็งตับขั้นสูง: การทดลองแบบสุ่มตัวอย่างแบบ double-blind และ placebo-controlled ระยะที่ 3 มีดหมอ ออนคอล. 2552;10:25–34.
8. Shi Z, Song T, Wan Y, Xie J, Yan Y, Shi K, Du Y, Shang L. การทบทวนอย่างเป็นระบบและการวิเคราะห์อภิมานของยาจีนโบราณที่ผสมแมลงด้วยเคมีบำบัดสำหรับการบำบัดมะเร็งตับที่ไม่ผ่าตัด ตัวแทนวิทย์.2017;7:4355.
9. Yang Z, Liao X, Lu Y, Xu Q, Tang B, Chen X, Yu Y. การบำบัดแบบเสริมด้วยยาจีนโบราณช่วยปรับปรุงผลลัพธ์และลดเหตุการณ์ไม่พึงประสงค์ในมะเร็งตับ: การวิเคราะห์อภิมานของการทดลองแบบสุ่มที่มีกลุ่มควบคุม Evid ตาม Complement Alternat Med 2017;2017:3428253.
10. Lin LW, Hsieh MT, Tsai FH, Wang WH, Wu CR. ฤทธิ์ต้าน nociceptive และต้านการอักเสบที่เกิดจาก Cistanche deserticola ในสัตว์ฟันแทะ เจ เอธโนฟาร์มาคอล. 2002;83:177–82.
11. Wu CR, Lin HC, ซู MH กลับรายการโดยสารสกัดจากน้ำของCistanche tubulosaจากพฤติกรรมบกพร่องในแบบจำลองหนูที่เป็นโรคอัลไซเมอร์: ความเกี่ยวข้องสำหรับการสะสมอะไมลอยด์และการทำงานของสารสื่อประสาทส่วนกลาง BMC Complement Altern Med. 2014;14:202.
12. Jiang Y, Tu PF. การวิเคราะห์องค์ประกอบทางเคมีในสายพันธุ์ Cistanche JChromatogr A. 2009;1216:1970–9.
13. Morikawa T, Pan Y, Ninomiya K, Imura K, Matsuda H, Yoshikawa M, Yuan D, Muraoka O. Acylated phenylethanoid oligo glycosides ที่มีฤทธิ์ป้องกันตับจากพืชทะเลทรายซิสแทนเช่ ทูบูโลซ่าไบโอออร์ก เมด เคม. 2010; 18:1882–90.
14. Nan ZD, Zeng KW, Shi SP, Zhao MB, Jiang Y, Tu PFฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ด้วยฤทธิ์ต้านการอักเสบจากลำต้นของ Cistanche deserticola ที่เพาะในทะเลทรายทาริม Fitoterapia.2013;89:167–74.
15. Deng M, Zhao J, Tu P, Jiang Y, Li Z, Wang Y. Echinacoside นำเซลล์ประสาท SHSY5Y กลับมาใช้ใหม่จาก TNFอะพอพโทซิส. เออ เจ. ฟาร์มาคอล. 2004;505:11–8.
16. Li J, Li J, Aipire A, Gao L, Huo S, Luo J, Zhang F.ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์จากCistanche tubulosaยับยั้งการเจริญเติบโตของเซลล์ B16-F10 ทั้งในหลอดทดลองและในร่างกายโดยการเหนี่ยวนำของอะพอพโทซิสผ่านวิถีที่ขึ้นกับไมโตคอนเดรีย เจ มะเร็ง. 2016;7:1877–87.
17. Shang HS, Chang CH, Chou YR, Yeh MY, Au MK, Lu HF, Chu YL, Chou HM, Chou HC, Shih YL และอื่น ๆ เคอร์คูมินทำให้เกิดความเสียหายต่อ DNA และส่งผลต่อการแสดงออกของโปรตีนที่เกี่ยวข้องในเซลล์มะเร็งปากมดลูกของมนุษย์ของ HeLa ตัวแทน Oncol. 2016;36:2207–15.
18. Wang R, Zhang Q, Peng X, Zhou C, Zhong Y, Chen X, Qiu Y, Jin M, Gong M, Kong D. Stellettin B ก่อให้เกิดการจับกุม G1,อะพอพโทซิสและ autophagy ในเซลล์มะเร็งปอดที่ไม่ใช่เซลล์ขนาดเล็กของมนุษย์ A549 ผ่านการปิดกั้นเส้นทาง PI3K/Akt/mTOR ตัวแทนวิทย์. 2016;6:27071.
19. Sinha K, Das J, Pal PB, Sil PC. ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน: วิถีที่ขึ้นกับไมโตคอนเดรียและไมโตคอนเดรียของอะพอพโทซิส. อาร์คท็อกซิคอล 2013; 87:1157–80.
20 Zhang YS, Shen Q, Li J. ยาจีนโบราณที่กำหนดเป้าหมายกลไก apoptotic สำหรับการรักษามะเร็งหลอดอาหาร แอคตา ฟาร์มาคอล ซิน. 2559; 37:295–302.
21. Chong ZZ, Lin SH, Li F, Maiese K. นิโคตินาไมด์สารยับยั้ง sirtuin ช่วยเพิ่มการอยู่รอดของเซลล์ประสาทในระหว่างการบาดเจ็บที่เป็นพิษเฉียบพลันผ่าน AKT, BAD, PARP และไมโทคอนเดรียที่เกี่ยวข้องกับวิถี Curr Neurovasc Res. 2005;2:271–85.
22. Hu B, Wang SS, Du Q. ยาจีนโบราณสำหรับการป้องกันและรักษามะเร็งตับ: จากม้านั่งไปข้างเตียง เวิลด์ เจ เฮปาทอล 2015;7:1209–32.
23. Hu B, An HM, Wang SS, Chen JJ, Xu L. ผลการป้องกันและการรักษาของสารประกอบสมุนไพรจีนต่อมะเร็งตับ โมเลกุล 2016;21:142.
24 Xu H, Zhao X, Liu X, Xu P, Zhang K, Lin X. ฤทธิ์ต้านเนื้องอกของยาจีนโบราณที่กำหนดเป้าหมายเส้นทางเซลล์ตาย ยา Des Devel Ther 2015;9:2735–44.
25. Li-Weber M. การกำหนดเป้าหมายอะพอพโทซิสเส้นทางสู่มะเร็งด้วยการแพทย์แผนจีน มะเร็งเล็ท 2013;332:304–12.
26. Xu G, Shi Y.อะพอพโทซิสเส้นทางการส่งสัญญาณและสภาวะสมดุลของลิมโฟไซต์ ความละเอียดของเซลล์ 2007;17:759–71.
27. Tait SW, Green DR. ไมโตคอนเดรียและการตายของเซลล์: การซึมผ่านของเยื่อหุ้มชั้นนอกและอื่น ๆ แนท เรฟ โมล เซลล์ ไบโอล. 2010;11:621–32.
28. Galluzzi L, Kepp O, Kroemer G. Mitochondria: หน่วยงานกำกับดูแลหลักในการส่งสัญญาณอันตราย แนท เรฟ โมล เซลล์ ไบโอล. 2012;13:780–8.
29. มาร์ตินู เจซี, ยูล อาร์เจ ไมโตคอนเดรียในอะพอพโทซิส: Bcl-2 สมาชิกในครอบครัวและพลวัตของไมโตคอนเดรีย เดฟ เซลล์. 2011;21:92–101.
