การวิเคราะห์ส่วนประกอบที่ดูดซึมในพลาสมาของหนูหลังการบริหารช่องปากของเศษส่วนของเอสโตรเจนเสมือนของ Cistanche

การวิเคราะห์ส่วนประกอบที่ดูดซึมในพลาสมาของหนูหลังการบริหารช่องปากของเศษส่วนของเอสโตรเจนเสมือนของ Cistanche

สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม: Ali.ma@wecistanche.com

คลิกเพื่อดูประโยชน์และผลข้างเคียง

เชิงนามธรรม:

เพื่อวิเคราะห์และระบุองค์ประกอบในพลาสมาของหนูหลังจากการบริหารช่องปากของเศษที่ใช้งานของcistancheส่วนประกอบในพลาสมาของหนูตรวจพบโดยโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง-อิเล็กโทรสเปรย์ไอออไนซ์-ควอดรูโพล-เวลาของสเปกโตรเมตรีการบิน (HPLC-Q-TOF MS) โครงสร้างของส่วนประกอบได้รับการอธิบายโดยการเปรียบเทียบเวลาการกักเก็บและสเปกตรัม MS /MS กับสารประกอบอ้างอิงและข้อมูลที่รายงานในเอกสาร มีการระบุองค์ประกอบทางเคมี 13 ชนิด รวมทั้งส่วนประกอบต้นแบบ 6 ชนิด เช่น กรดเจนิโพซิดิก ซาลิโดรไซด์ซิสตาโนไซด์ A, อีชินาโคไซด์, แอคทีโอไซด์, ซิสตาโนไซด์ ดี,7 องค์ประกอบของเมตาโบไลต์ เช่น 3,4-ไดไฮดรอกซีฟีนิลเอธานอล ไกลโคไซด์, เมทิเลชัน แอกทีโอไซด์, อะซีติเลชั่น ซิสตาโนไซด์ G,3,4-ไดไฮดรอกซีฟีนิลเอธานอล, อะซีติล ทูบูโลไซด์ B, ซิสตาโนไซด์ บี กลูโคโรไนด์ เมตาโบไลต์และเมทิลเลชัน-3,4 ไดไฮดรอกซีฟีนิลเอธานอล ผลลัพธ์สามารถให้ข้อมูลที่จำเป็นสำหรับการให้ความกระจ่างแก่พื้นฐานการรักษาของกิจกรรมการควบคุมฮอร์โมนเอสโตรเจนเสมือนของcistanche．

คำสำคัญ:

ซิสแทนเช่; ยาที่มีส่วนผสมของซีรั่ม เอสโตรเจนเสมือน; โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง-อิเล็กโทรสเปรย์ไอออไนซ์-ควอดรูโพล-เวลาของสเปกโตรเมตรีการบิน (HPLC-Q-TOFMS)

Cistanche deserticolaเป็นพืชกาฝากในรากของต้นไม้ทะเลทราย (เช่น haloxylon ammodendron, tamarix เป็นต้น) เป็นยาแผนโบราณที่มีคุณค่าทางโภชนาการและบำรุงทางเภสัชวิทยาหลายชนิด เช่น บำรุงไต หยาง ควบคุมภูมิคุ้มกัน ชะลอความชรา ต่อต้านรังสี และปกป้องระบบประสาทส่วนกลาง เป็นที่รู้จักกันในชื่อ "โสมทะเลทราย" ปัจจุบันการศึกษาส่วนใหญ่เกี่ยวกับกิจกรรมของค. Deserticola ในประเทศและต่างประเทศถูก จำกัด อยู่ที่การประเมินกิจกรรมทางเภสัชวิทยาในขณะที่ยังไม่มีการชี้แจงพื้นฐานของสารเภสัชพลศาสตร์ซึ่งเป็นอุปสรรคต่อการพัฒนาอย่างมีเหตุผลและการประยุกต์ใช้Cistanche deserticola.

ส่วนประกอบของยาจีนโบราณมีความซับซ้อนและหลากหลาย และหลังจากการบริหารที่เหมาะสมผ่านการดูดซึมและเมแทบอลิซึมในร่างกายแล้ว ส่วนประกอบจะเข้าสู่กระแสเลือดในที่สุดเพื่อเป็นพื้นฐานทางเภสัชพลศาสตร์ของยาจีนโบราณ สารออกฤทธิ์เหล่านี้อาจเป็นต้นแบบหรือสารเมตาโบไลต์ของยาจีนดั้งเดิม หรืออาจเป็นส่วนผสมใหม่ที่เกิดจากปฏิกิริยาร่วมกันของส่วนประกอบต่างๆ ในยาจีนโบราณ หรืออาจเป็นสารออกฤทธิ์ทางสรีรวิทยาภายในร่างกายที่เกิดจากการกระทำโดยตรงของยา บนร่างกาย ดังนั้น ส่วนประกอบของเลือดเหล่านี้จึงสามารถเป็นตัวแทนของสารพื้นฐานทางเภสัชพลศาสตร์ของยาจีนโบราณและยาผสมได้ การวิเคราะห์ส่วนประกอบและเมแทบอไลต์ที่สามารถเข้าสู่กระแสเลือดได้หลังจากการบริหารช่องปาก และการค้นหากฎการทำงานร่วมกันของส่วนประกอบ สามารถให้พื้นฐานบางอย่างสำหรับการวิจัยพื้นฐานของสารทางเภสัชพลศาสตร์

วิธีการเพิ่มน้ำหนักของมดลูกของหนูและการวัดสี MTT ถูกใช้เพื่อคัดกรองส่วนที่ใช้งานเหมือนเอสโตรเจนและปริมาณของ cistanche deserticola ผลการทดลองเบื้องต้นพบว่าค่าสัมประสิทธิ์มดลูกของหนูที่ยังไม่บรรลุนิติภาวะเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญโดยการฉีดเอธานอลในกระเพาะ (95 เปอร์เซ็นต์) ของสารสกัด cistanche deserticola ที่ 30 กรัม/กก. ต่อวัน และซีรั่มที่มีส่วนผสมของยาช่วยส่งเสริมการงอกขยาย ของเซลล์ McF-7 อย่างมีนัยสำคัญ (P < 0.="" 01)="" ซึ่งเป็นส่วนออกฤทธิ์ของผลคล้ายเอสโตรเจนของ="" cistanche="">

ในการศึกษานี้ โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง-quadrupole time-of-flight Mass spectrometry (HPLC-Q-TOF MS) ถูกใช้เพื่อวิเคราะห์และระบุส่วนประกอบของเลือด ส่วนประกอบต้นแบบ และเมแทบอไลต์ของส่วนออกฤทธิ์ของซิสแทนช์หลังการให้ยา cistanche กับเอสโตรเจนและเพื่อคาดเดาเส้นทางการเผาผลาญเพื่อให้เป็นพื้นฐานสำหรับการวิจัยขั้นพื้นฐานเกี่ยวกับสารทางเภสัชพลศาสตร์ของซิสแทนช์กับเอสโตรเจน

1 ส่วนทดลอง

1.1 เครื่องมือและรีเอเจนต์

Waters-600 Liquid chromatograph: Waters Co., LTD., มาพร้อมกับปั๊มไล่ระดับสี่องค์ประกอบ, เครื่องเก็บตัวอย่างอัตโนมัติ, เครื่องดูดแก๊สสูญญากาศ, กล่องอุณหภูมิคอลัมน์, เครื่องตรวจจับ DAD, เพิ่มศักยภาพเวิร์กสเตชันเคมี

Agilent-1290 6530 series Q-TOF LC-MS แมสสเปกโตรมิเตอร์: ผลิตภัณฑ์ของบริษัท American Agilent;

Xw-80เครื่องผสมน้ำวน: Shanghai Yugong Machinery Co., LTD.

Dk-80 อ่างน้ำร้อนไฟฟ้า: Shanghai Yiheng Technology Co., LTD.

Alc-110. 4 เครื่องชั่งเชิงวิเคราะห์: Shanghai Renhe Scientific Instrument Co., LTD.

ออสซิลเลเตอร์อัลตราโซนิก H66MC: Ohaus Technology Co., LTD.

Cistanche deserticola: ซื้อจากตลาดสมุนไพร San Ke Shu ระบุว่าเป็น Cistanche deserticola โดยศาสตราจารย์ Zhang Delian จาก Harbin Commercial University;

Mullein (Batch No. 111530-200505), echinoside (batch No. 111670-200503), salidroside (batch No. 110736-200628): ทั้งหมดจัดทำโดย China National Institute for The Control of Pharmaceutical and Biological Products ;

เอทิลีน สติลเบสสตรอล: Guangzhou Hampden Pharmaceutical Co., LTD. เมทานอลและอะซิโตไนไทรล์: เกรด HPLC ผลิตภัณฑ์ของ Shandong Yuwang Reagent Co., LTD. รีเอเจนต์อื่นๆ นั้นบริสุทธิ์ในเชิงวิเคราะห์

น้ำทดลอง: น้ำบริสุทธิ์

หนู Wistar เพศเมีย: หมายเลขรุ่น SCXK-(JI) 2003 -- 2004 น้ำหนัก (220 ± 20) ก. จัดทำโดยศูนย์สัตว์ทดลองแห่งฐานอุตสาหกรรมชีวภาพแห่งชาติฉางชุน

1.2 การเตรียมสารละลายยาในกระเพาะ

ผงดิบของ cistanche deserticola สกัดโดยการสกัดกรดไหลย้อนด้วยเอธานอล 95 เปอร์เซ็นต์ จากนั้นจึงสกัดด้วยตัวทำละลาย 8 เท่าเป็นเวลา 150 นาที ตัวทำละลาย 6 เท่าเป็นเวลา 75 นาที และตัวทำละลาย 6 เท่าเป็นเวลา 75 นาทีติดต่อกัน จากนั้นนำสารสกัดทั้งสามมารวมกันและควบแน่นภายใต้แรงกดดันเพื่อให้ได้สารสกัดซึ่งเก็บไว้ในตู้เย็นเพื่อใช้ในภายหลัง ก่อนใช้ น้ำกลั่นถูกใช้เพื่อเตรียมสารละลายในกระเพาะอาหารที่มีความเข้มข้น 1.5 กรัมต่อมิลลิลิตร

1.3 การเตรียมสารละลายอ้างอิง

ปริมาณที่แม่นยำของ mullein, salidroside และ echinacoside ถูกถ่ายและละลายจนหมดในเมทานอลเพื่อเตรียมสารละลายคอนทราสต์แบบผสม 1 มล. ซึ่งแต่ละชนิดมี 0.2 มก. ของสารอ้างอิงสามชนิด ใส่สารละลายของสารอ้างอิงผ่านเมมเบรนกรอง 0.45 μm แล้วพักไว้

1.4 การเตรียมซีรั่มยาและซีรั่มเปล่า

การเตรียมซีรั่มที่ประกอบด้วยยา: ชั่งน้ำหนักหนู Wistar เพศเมีย ให้ 1 มล./100 กรัมต่อวันตามลำดับ ให้น้ำกลั่นและสารละลายทางสายธารสองครั้งในตอนเช้าและเย็น 3 วันติดต่อกัน 60 นาทีหลังจากให้ยาครั้งสุดท้าย ดมยาสลบด้วยคลอรัลไฮเดรต 10 เปอร์เซ็นต์ 2 มล./กก. โดยการฉีดเข้าช่องท้อง เลือดถูกนำออกจากหลอดเลือดดำพอร์ทัลตับและหมุนเหวี่ยงที่ 3 000 r /min เป็นเวลา 10 นาทีหลังจากการแข็งตัวเต็มที่ ส่วนลอยเหนือตะกอนนั้นเป็นซีรั่มที่ประกอบด้วยยา

การเตรียมซีรั่มเปล่า: หนูทดลองในกระเพาะมีปริมาตรน้ำกลั่นเท่ากันทุกวัน และวิธีการเตรียมอื่นๆ เหมือนกับซีรัมที่ประกอบด้วยยา

นำซีรัมที่ประกอบด้วยยา มิลลิลิตร เติม 5 เท่าของปริมาณของเมทานอล และนำกระแสน้ำวนถูกดำเนินการในหลอดสำหรับการปั่นแยกเป็นเวลา 10 นาที การหมุนเหวี่ยงถูกดำเนินการที่ 14 000 รอบ/นาที เป็นเวลา 10 นาที และส่วนลอยเหนือตะกอนถูกดูดซับ และตัวทำละลายถูกทำให้แห้ง 0.5 มล. เมทานอลถูกเติมด้วยไมโครปิเปตเพื่อละลายเรซิดิว ส่วนที่เหลือถูกกรองโดยเยื่อพรุนที่มีรูพรุนขนาด 0.22 ไมโครเมตร และวิเคราะห์โดยโครมาโตกราฟี

1.5 เงื่อนไขการทดลอง

สภาพโครมาโตกราฟี: คอลัมน์ A Waters Symmetry ShieldTM RP18 (4.6 มม. × 250 มม. × 5 ไมโครเมตร); คอลัมน์แรก: Nova - PakC18 Guard - PakTM; อัตราการไหล: 0.5 มล./นาที; ปริมาณการฉีด : 10 ไมโครลิตร; เฟสเคลื่อนที่: acetonitrile-0.2 เปอร์เซ็นต์สารละลายกรดฟอร์มิก; เงื่อนไขการไล่ระดับสี: 0-35 นาที, 5 เปอร์เซ็นต์ -34 เปอร์เซ็นต์ acetonitrile, 35-65 นาที, 24 เปอร์เซ็นต์ -26 เปอร์เซ็นต์ acetonitrile; อุณหภูมิคอลัมน์: 30 องศา ; ความยาวคลื่นตรวจจับ :254 นาโนเมตร

แหล่งกำเนิดไอออนตามเงื่อนไขของมวลสาร: แหล่งกำเนิดไอออนไนซ์อิเล็กโตรสเปรย์แรงดันบรรยากาศ (ESI); อัตราการไหล: {{0}}.5 มล./นาที; แรงดันแก๊สทำให้เป็นละออง: 0.2 MPa; อัตราการไหลของก๊าซแห้ง :8. 0 ลิตร/นาที; อุณหภูมิแห้ง :30 องศา ; แรงดันเส้นเลือดฝอย: 3.5 kV; อัตราการไหลของก๊าซฝัก: 12.0 ลิตร/นาที; อุณหภูมิฝัก :400 องศา โหมดการสแกนไอออนบวกและลบถูกเลือก และช่วงการสแกนมวลคือ m/z 100 ~ 3 000

2 ผลลัพธ์และการอภิปราย

2.1 การวิเคราะห์ HPLC-ESI-Q-TOF MS/MS ขององค์ประกอบทางเคมีในซีรัมของส่วนที่ออกฤทธิ์ของฮอร์โมนเอสโตรเจนของ Cistanche deserticola

การวิเคราะห์เชิงคุณภาพได้ดำเนินการกับตัวอย่างซีรัมที่ประกอบด้วยยาจากหนูในส่วนที่ใช้งานเอสโตรเจนของ Cistanche deserticola โดยเครื่องตรวจจับ ESI-MS ใช้โหมดไอออนบวกและโหมดไอออนลบในการสแกนตามลำดับ และผลลัพธ์แสดงในรูปที่ 1 โดยการเปรียบเทียบแผนภาพการไหลของไอออนรวมแมสสเปกโตรเมทรีระดับที่ 1 ของโหมดการสแกนทั้งสองแบบในรูปที่ 1 พบว่ามีไอออนทั้งหมด การไหลที่ได้รับในโหมดไอออนลบมีลักษณะเฉพาะที่แข็งแกร่งและมีความไวสูง ดังนั้นจึงเลือกการสแกนโหมดไอออนลบในการทดลองนี้

ในโหมดไอออนลบ เครื่องตรวจจับ esI-MS ถูกใช้เพื่อทำการวิเคราะห์เชิงคุณภาพของซีรั่มของหนูหลังจากให้สารออกฤทธิ์ของเอสโตรเจนของ Cistanche deserticola ผ่านการวิเคราะห์เปรียบเทียบของการสแกนระดับแรกของแผนภาพการไหลของไอออนรวมของซีรัมเปล่าและซีรัมการบริหาร ทำเครื่องหมายยอดรวมของ 13 พีคไอออนของโมเลกุลดังแสดงในรูปที่ 2 พีค 2, 3, 5, 7, 9 และ 10 จะถือว่า เป็นส่วนประกอบต้นแบบ และพีค 1, 4, 6, 8, 11, 12 และ 13 ถือว่าเป็นส่วนประกอบเมตาบอลิซึม

ตามพีคของโมเลกุลไอออนที่ตรวจพบโดยพีคโครมาโตกราฟีแต่ละพีคในโหมดไอออนลบและน้ำหนักโมเลกุลสัมพัทธ์ที่กำหนดโดยส่วนย่อยที่มีลักษณะเฉพาะที่สอดคล้องกัน พีคทั้งหมด 13 มิลลิวินาทีถูกทำเครื่องหมาย องค์ประกอบทางเคมีของ 13 พีคถูกระบุโดยการเปรียบเทียบข้อมูล UV-MS ของสารมาตรฐานแต่ละชนิดและอ้างอิงถึงส่วนประกอบที่รายงานในวรรณกรรม ซึ่งแสดงไว้ในตารางที่ 1

ส่วนประกอบต้นแบบหกตัว ได้แก่ geniposide, salidroside, Cistanche glycoside a, Echinacea glycoside, Mullein glycoside และ Cistanche glycoside D;

ส่วนประกอบเมตาบอลิซึม 7 ชนิดคือ 3,4-dihydroxy phenyl ethanol glycoside, methylated Mullein glycoside, acetylated Cistanche glycoside g, 3,4-dihydroxy phenyl ethanol, acetyl tubuloside B, Cistanche glycoside B glucuronic acid metabolite และ methylated{{ 4}},4-ไดไฮดรอกซี ฟีนิล เอทานอล ในบรรดาสารเมตาโบไลต์ทั้งเจ็ด เป็นที่คาดการณ์ว่าพีค 1 (3,4-ไดไฮดรอกซีฟีนิลเอธานอล), พีค 8 (3,4-ไดไฮดรอกซีฟีนิลเอธานอล) และพีค 13 (เมทิลเลต 3,4-ไดไฮดรอกซีฟีนิลเอธานอล ไกลโคไซด์) คือ ชิ้นส่วนไฮโดรไลติกของฟีนิลเอธานอลไกลโคไซด์ใน Cistanche deserticola; พีค 4 (methylated Mullein glycoside) เป็นสารเมตาโบไลต์ของ Mullein glycoside; พีค 6 (acetylated Cistanche glycoside g) คือ metabolite ของ Cistanche glycoside G; พีค 11 (acetyl guanosine b) เป็นสารเมตาบอไลต์ของ guanosine B; พีค 12 (เมตาโบไลต์ของกรดกลูโคนิกของ Cistanche glycoside b) คือเมแทบอไลต์ของ Cistanche glycoside B.

ตัวอักษรจีนขยายคำอธิบาย:

质谱信息 หมายถึงข้อมูลสเปกตรัมมวล

相对分子质量 แทนมวลโมเลกุลสัมพัทธ์

化合物推测结果 แสดงถึงผลการเก็งกำไรแบบทบต้น

代谢 หมายถึง องค์ประกอบการเผาผลาญ

原型 หมายถึงส่วนประกอบต้นแบบ

2.2 การอภิปราย

ในการทดลองนี้ ใช้ hplc-q-tof MS เพื่อระบุจุดสูงสุดของโครมาโตกราฟีหลัก 13 จุดในซีรัมหลังการให้ฮอร์โมนเอสโตรเจน เช่นเดียวกับส่วนที่ออกฤทธิ์ของ Cistanche deserticola สิ่งเหล่านี้อาจเป็นสารที่ออกฤทธิ์โดยตรงของ Cistanche deserticola in vivo ในขณะเดียวกัน ก็ยังสะท้อนว่าประสิทธิภาพของการแพทย์แผนจีนเป็นผลมาจากการประสานงานหลายองค์ประกอบ การเสริมหรือข้อจำกัด จากการวิเคราะห์องค์ประกอบเฉพาะกาล 13 รายการในเลือด ได้รับการพิสูจน์แล้วว่าฟีนิลเอธานอลไกลโคไซด์เป็นส่วนประกอบสำคัญของ Cistanche deserticola ในการศึกษาติดตามผล ความสัมพันธ์ของเอฟเฟกต์สเปกตรัมที่สอดคล้องกันจะถูกสร้างขึ้นเพื่อศึกษาความสัมพันธ์ระหว่างผลของยา เพื่อชี้แจงพื้นฐานทางวัตถุของผลกระทบของยา และสร้างความสัมพันธ์ระหว่างขนาดยา เวลา และผลของส่วนประกอบหลายส่วนในเวลาที่ต่างกัน ในร่างกายเพื่อแสดงวิถีเมแทบอลิซึมและโหมดเมตาบอลิซึมของ Cistanche Deserticola

3 บทสรุป

ในการทดลองนี้ เทคโนโลยี hplc-esi-q-tof MS / MS ถูกใช้เพื่อวิเคราะห์ส่วนประกอบเลือดของเอสโตรเจน เช่น ส่วนที่ใช้งานของ Cistanche Deserticola และมีการระบุส่วนประกอบทางเคมี 13 รายการ ซึ่งมีความสำคัญอย่างยิ่งในการชี้แจงพื้นฐานของวัสดุทางเภสัชพลศาสตร์ ของเอสโตรเจนเช่นส่วนประกอบที่ใช้งานของ Cistanche deserticola และยังสามารถให้พื้นฐานที่เชื่อถือได้สำหรับการวิจัยเพิ่มเติมและยาทางคลินิกของ Cistanche deserticola