การเปลี่ยนแปลงกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระในระหว่างการหมักเอนไซม์

บทที่ 4 การเปลี่ยนแปลงในกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระในระหว่างการหมักเอนไซม์

ผลไม้อุดมไปด้วยสารอาหารและมีหลายสายพันธุ์ การผลิตสารในระหว่างการหมักนั้นซับซ้อนและหลากหลายและมีการศึกษามากมายเกี่ยวกับของพวกเขาฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ- ผู้คนมักจะสำรวจและค้นพบโดยมองหาอาหารที่เป็นประโยชน์ต่อสุขภาพของมนุษย์ดังนั้นเอนไซม์จึงกลายเป็นประเด็นร้อนแรงในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา กระบวนการผลิตเอนไซม์แบบดั้งเดิมคือการได้รับเอนไซม์โดยการหมักตามธรรมชาติของผักและผลไม้ จากการวิจัยก่อนหน้านี้บทความนี้เพิ่มแบคทีเรียหมักที่เป็นประโยชน์ 4 ตัว แบคทีเรียนี้ยังมีอยู่ในเอนไซม์ หลังจากการเพิ่มแบคทีเรียเพิ่มเติมจำนวนและชนิดของจุลินทรีย์ในกระบวนการหมักจะเปลี่ยนไป การเปลี่ยนแปลงนี้จะมีผลอย่างไรต่อกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระ? ในบทก่อนหน้าเราใช้แอปเปิ้ลเป็นตัวอย่างสำหรับคำอธิบายโดยละเอียด การเปรียบเทียบกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระของกลุ่มทดลองและกลุ่มควบคุมที่ความเข้มข้นของเอนไซม์ที่แตกต่างกันแสดงให้เห็นว่ากิจกรรมต้านอนุมูลอิสระของเอนไซม์ในกลุ่มทดลองนั้นมากกว่ากลุ่มควบคุม ความเข้มของกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระยังสะท้อนถึงความน่าเชื่อถือของเอนไซม์ในวิธีใดวิธีหนึ่ง

สมุนไพรใหม่ Cistanche ที่มีพลังต้านอนุมูลอิสระที่แข็งแกร่ง

 

บริการสนับสนุนของ Wecistanche- ผู้ส่งออก Cistanche รายใหญ่ที่สุดในประเทศจีน:
อีเมล: wallence.suen@wecistanche.com
whatsapp/tel: +86 15292862950

 

บทนี้จะเพิ่มผลไม้ทั่วไปลูกแพร์และส้มในการทดลองดั้งเดิมและติดตามและตรวจจับการเปลี่ยนแปลงในของพวกเขาฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระในระหว่างการหมัก บนพื้นฐานของการลดค่าใช้จ่ายผ่านการทดลองเราหวังว่าจะสะท้อนกิจกรรมทางชีวภาพของเอนไซม์ได้อย่างครอบคลุมมากขึ้นหลังจากเพิ่มแบคทีเรียและให้พื้นฐานทางทฤษฎีและการสนับสนุนข้อมูลสำหรับการผลิตเอนไซม์จุลินทรีย์ B B By การฉีดวัคซีนเทียมของสายพันธุ์.

 

 

 

4.1 วัสดุและวิธีการ

4.1.1 วัสดุ

(1) วัสดุทดลอง

ล้างแอปเปิ้ลสด, ลูกแพร์และผลไม้ส้มด้วยน้ำที่ผ่านการฆ่าเชื้อภายใต้สภาวะปลอดเชื้อแห้งตามธรรมชาติบนโต๊ะทำงานที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้วปอกเปลือกพวกเขาและหั่นพวกเขาเพื่อใช้ในภายหลัง เพิ่มน้ำตาลขาวและผลไม้ลงในขวดแก้วที่ผ่านการฆ่าเชื้อที่อัตราส่วนมวล 1: 1 เปิดใช้งานแบคทีเรียที่จำเป็นสำหรับการทดลองและฉีดวัคซีนเข้าไปในเอนไซม์ตามรูปแบบที่ดีที่สุด (ขั้นตอนการดำเนินการนี้ถูกละเว้นสำหรับกลุ่มควบคุม) ปิดผนึกและวางไว้ในที่เย็นและแห้ง นำตัวอย่างในช่วงเวลาที่แตกต่างกันของการหมักที่อุณหภูมิห้องเพื่อให้ได้ของเหลวเอนไซม์ทั้งหมดที่มีเยื่อผลไม้และกรอง ใช้ supernatant เป็นตัวอย่างการทดลองและใช้เพื่อวัดข้อมูลที่เกี่ยวข้องหลังจากการหมุนเหวี่ยงที่ 10, 000 รอบต่อนาทีในการหมุนเหวี่ยงความเร็วสูงเป็นเวลา 15 นาที เป็นที่น่าสังเกตว่าในกระบวนการสร้างเอนไซม์เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนที่ไม่จำเป็นการดำเนินการทั้งหมดของเราจะดำเนินการภายใต้สภาวะปลอดเชื้อ

(2) เครื่องมือหลัก

เครื่องมือที่จำเป็นสำหรับการทดลองนั้นเหมือนกับ 3.1.1 (2)

 

4.1.2 วิธีการ

(1) การเปลี่ยนแปลงของปริมาณฟีนอลทั้งหมดในระหว่างการหมัก

เพิ่มสารละลายตัวอย่าง450μLด้วยน้ำกลั่นเพื่อให้ปริมาตร 46ml จากนั้นเพิ่มน้ำยา Folin-phenol 1ml ผสมให้เข้ากันและตอบสนองเป็นเวลา 3 นาที จากนั้นเพิ่ม 3ml ของ 20% naco3 ส่วนผสมถูกเขย่าในอ่างน้ำอุณหภูมิคงที่ที่ 25 องศาเป็นเวลา 2 ชั่วโมง ใช้น้ำกลั่นเป็นตัวควบคุมเปล่า การดูดกลืนแสง A ถูกวัดที่ 760nm โดยสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ มีการทำซ้ำสามครั้งสำหรับการรักษาแต่ละครั้ง ปริมาณฟีนอลทั้งหมดคำนวณตามสมการเส้นโค้งมาตรฐาน

(2) การเปลี่ยนแปลงในการลดพลังงานระหว่างการหมัก

เพิ่ม 45 0 μlของตัวอย่างถึง 2.5ml ของบัฟเฟอร์ฟอสเฟตที่มีความเข้มข้นของ 0. 2mol/L และค่า pH 6.6 จากนั้นเพิ่มโพแทสเซียมเฟอร์ซิยาด์ (w/v) (w/v) ที่มีความเข้มข้นมวล 10%, centrifuge ที่ 3000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีนำออกและดึง supernatant 2.5 มล. ลงในขวดปริมาตรเพิ่มขึ้น 2.5 มล. ของน้ำกลั่นและเฟอร์ริกคลอไรด์ 0.5 มล. (w/v) ใช้น้ำกลั่นเป็นตัวควบคุมที่ว่างเปล่าและวัดการดูดกลืนแสง A ที่ความยาวคลื่น 700Nm ด้วยเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ ทำซ้ำ 3 ซ้ำสำหรับการรักษาแต่ละครั้ง ความแข็งแรงของการลดพลังงานจะถูกกำหนดตามค่าการดูดซับ

 

(3) การเปลี่ยนแปลงของความสามารถในการกำจัดไอออน superoxide anion ในระหว่างการหมัก
วาง 4.5 มล. ของ 0. {{1 0}} 5 mol/l pH 8.2 บัฟเฟอร์ Tris-HCl ในอ่างน้ำอุณหภูมิคงที่และปรับอุณหภูมิ 25 องศา หลังจาก 20 นาทีให้เพิ่มสารละลายตัวอย่างเอนไซม์ 1 มล. และสารละลายไพโรเจนลอล 0.4 มล. ด้วยความเข้มข้นของโมลาร์ 25 มิลลิโมล/ลิตร ผสมให้เข้ากันและวางในอ่างน้ำ 25 องศาเป็นเวลา 5 นาที เพิ่ม 1.0 มล. ของ 8 mol/l hcl เพื่อยุติปฏิกิริยา ใช้บัฟเฟอร์ Tris-HCl เป็นข้อมูลอ้างอิงและใช้สเปกโตรโฟโตมิเตอร์เพื่อวัดการดูดกลืนแสง A ที่ 299 นาโนเมตรเพื่อคำนวณอัตราการกำจัด กลุ่มควบคุมเปล่าใช้ตัวทำละลาย 1 มล. แทนตัวอย่าง อัตราการกำจัดอนุมูลอิสระของ superoxide anion ถูกคำนวณตามสูตร 4.1: อัตราการกำจัดอนุมูลอิสระ superoxide anion (%)=(A 1- A2)/A1 × 100 (4.1) โดยที่: A1 คือการดูดซับของกลุ่มควบคุมเปล่า; A2 คือการดูดซับของสารละลายตัวอย่างเอนไซม์ของกลุ่มทดลอง

 

(4) การเปลี่ยนแปลงของความสามารถในการกำจัดอนุมูลอิสระไฮดรอกซิลในระหว่างการหมัก

 

เพิ่มน้ำเป็น 45 0 μlตัวอย่างสารละลาย 2ml จากนั้นเพิ่มลงในไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 1.4ml ด้วยความเข้มข้นของมวลโมลาร์ของ 6mmol/L จากนั้นเพิ่มโซเดียม salicylate 0.6 มล. 1h. ศูนย์ด้วยน้ำกลั่นและวัดการดูดกลืนแสง A ที่ความยาวคลื่น 562Nm ด้วยเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ มีการทำซ้ำสามครั้งสำหรับการรักษาแต่ละครั้ง อัตราการกำจัดอนุมูลอิสระไฮดรอกซิลถูกคำนวณตามสูตร 4.2: อัตราการกำจัดอนุมูลอิสระไฮดรอกซิล (%)=[(A 1- A2)/a1] × 100 (4.2) โดยที่: A1 คือการดูดซับโดยเฉลี่ยของช่องว่าง; A2 คือการดูดซับโดยเฉลี่ยของสารละลายตัวอย่าง

 

(5) การเปลี่ยนแปลงในความสามารถในการกำจัดอนุมูลอิสระ DPPH ในระหว่างการหมัก
ถ่ายโอนสารละลายตัวอย่างเอนไซม์ 2 มิลลิลิตรไปยังขวดปริมาตร 1 0 ml จากนั้นเพิ่มสารละลายน้ำเอทานอลเอทานอล 80% DPPH 2 80% ลงในขวดปริมาตรด้วยความเข้มข้นของมวลโมลาร์ที่ 2 × 10-4 mol/L ผสมให้เข้ากันแล้วปล่อยให้ยืนที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที ใช้สารละลายเอทานอล 80% เป็นข้อมูลอ้างอิงและวัดการดูดกลืนแสงของตัวอย่างที่ความยาวคลื่น 517 นาโนเมตรซึ่งบันทึกเป็น A1 ผสมสารละลาย DPPH 2 มล. และสารละลายเอทานอล 80% 2 มล. และวัดการดูดกลืนแสงที่ความยาวคลื่นเดียวกันซึ่งบันทึกเป็น A0 ผสมสารละลายเอนไซม์ 2 มล. และสารละลายเอทานอล 80% 2 มล. และวัดการดูดกลืนแสงที่ความยาวคลื่นเดียวกันซึ่งบันทึกเป็น A2 มีการทำซ้ำสามครั้งสำหรับการรักษาแต่ละครั้ง คำนวณอัตราการกำจัดอนุมูลอิสระ DPPH ตามสูตร 4.3:
อัตราการกำจัดอนุมูลอิสระ DPPH (%) {{0}} [1- (a 1- a2)/a 0] × 100 (4.3) A2 คือการดูดกลืนแสงของสารละลายเอนไซม์ 2 มล. และสารละลายผสมเอทานอล 2 มิลลิลิตร 20% A0 คือการดูดกลืนแสงของสารละลาย DPPH 2 มล. และสารละลายผสมเอทานอล 20% 80%

(6) การเปลี่ยนแปลงของ ABTS ความสามารถในการกำจัดอนุมูลอิสระในระหว่างการหมัก
สารละลายตัวอย่าง 8 μlเสริมเป็น 10 μlด้วยบัฟเฟอร์ฟอสเฟต (5 mmol/L pH 7.4) จากนั้นผสมให้เท่ากันกับโพแทสเซียมซัลเฟต 10 มล. และสารละลายผสม ABTs เพื่อตอบสนองที่อุณหภูมิปฏิกิริยา 30 องศาและเวลาตอบสนอง 5 นาที ศูนย์สารละลายด้วยน้ำกลั่นและวัดการดูดกลืนแสง A ที่ความยาวคลื่น 734 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ มีการทำซ้ำสามครั้งสำหรับการรักษาแต่ละครั้ง อัตราการกำจัดอนุมูลอิสระ ABTS ถูกคำนวณตามสูตร 4.4:
ABTS อัตราการกำจัดอนุมูลอิสระ (%)=[(a 1- A2)/a1] × 100 (4.4) โดยที่: A1 คือการดูดซับของกลุ่มควบคุมเปล่า; A2 คือการดูดซับของกลุ่มทดลองตัวอย่าง