ประชากร CD8 และ CD4 T Cell ในไตของมนุษย์
Mar 25, 2022
เชิงนามธรรม:ข้อมูลประกอบ: ที่บริเวณชายแดนและในอวัยวะภายใน ทีเซลล์หน่วยความจำที่อยู่ในเนื้อเยื่อ (TRM) มีส่วนสร้างเกราะป้องกันภูมิคุ้มกันต่อเชื้อโรค เช่น ไวรัส แบคทีเรีย เชื้อรา และมะเร็ง อย่างไรก็ตาม ข้อมูลเกี่ยวกับการมีอยู่และการทำงานของเซลล์เหล่านี้ในไตของมนุษย์ยังไม่เพียงพอ เพื่อให้เข้าใจการป้องกันภูมิคุ้มกันที่อาศัยเซลล์ T ในอวัยวะนี้ดีขึ้น เราจึงมุ่งที่จะกำหนดลักษณะฟีโนไทป์และลักษณะการทำงานของเซลล์ CD8 และ CD4 T ที่มีอยู่ในสุขภาพที่ดีและการปลูกถ่ายอวัยวะทั้งหมดไต เนื้อเยื่อ. วิธีการ: ด้วยการใช้ cytometry แบบหลายช่องสัญญาณ เราประเมินฟีโนไทป์และการทำงานของทีเซลล์ในตัวอย่างเนื้อเยื่อไตที่แข็งแรง (n=5) และไตเนื้อเยื่ออัลโลกราฟต์ (n=7) และเปรียบเทียบลักษณะเหล่านี้กับทีเซลล์ในเลือดส่วนปลายจากกลุ่มควบคุมที่มีสุขภาพดี (n=13) ผลลัพธ์:ไตตัวอย่างเนื้อเยื่อประกอบด้วยเซลล์ CD8 และ CD4 T จำนวนมาก ตรงกันข้ามกับเซลล์หมุนเวียนไตทีเซลล์มักแสดงออก CD69 และ CD103 และบ่อยครั้งกว่าจะหมุนเวียนอย่างแข็งขัน นอกจากนี้เกือบทั้งหมดไตทีเซลล์แสดงออก CXCR3 และมักจะแสดงออก CXCR6 เมื่อเปรียบเทียบกับทีเซลล์ในการหมุนเวียน อย่างเห็นได้ชัดไตทีเซลล์ผลิต IFN ในปริมาณที่มากกว่าเซลล์ที่หมุนเวียนและมักมีลักษณะหลายหน้าที่ สรุป: ทีเซลล์ที่ทำหน้าที่ซึ่งมีลักษณะเฉพาะของ TRM อยู่ในมนุษย์ไตเนื้อเยื่อ เซลล์เหล่านี้มักจะหมุนเวียนอย่างแข็งขันและมักจะแสดงออก CXCR3 และ CXCR6
คำสำคัญ:เซลล์เม็ดเลือดขาวในเนื้อเยื่อ; ทีเซลล์; ซีดี8; ซีดี4; ซีดี69; CD103; ไต; allograft
CISTANCHE จะปรับปรุงโรคไต/โรคไต
1. บทนำทีเซลล์หน่วยความจำที่อยู่อาศัย (TRM) ยังคงอยู่ในเนื้อเยื่อเพื่อให้การป้องกันเฉพาะที่ในระยะยาวต่อเชื้อโรค ในทางตรงกันข้ามกับการหมุนเวียนทีเซลล์ ประชากร TRM ไม่สามารถตรวจพบได้ในเลือดส่วนปลาย และแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญจากการหมุนเวียนประชากรทีเซลล์โดยคำนึงถึงฟีโนไทป์ การทำงาน และเมแทบอลิซึมของพวกมัน [1] อันที่จริง ไม่น่าแปลกใจเลยเมื่อพิจารณาจากข้อเท็จจริงที่ว่าระบบอวัยวะต่างๆ เช่น ปอด มีการสัมผัสกับเชื้อโรคต่างๆ ในปริมาณที่มากกว่ากรณีของระบบไหลเวียน ซึ่งโดยทั่วไปแล้วแยกได้จากโลกภายนอก [2]การคงอยู่ของเนื้อเยื่อ TkM ยังคงมีอยู่เป็นเวลาหลายปีและเป็นสื่อกลางโดยกลไกที่เกี่ยวข้องกับแกน Sphingosine-1-phosphate receptor1 (S1PR1) -sphingosine 1-ฟอสเฟต (SP1) S1PR1 เป็นรีเซพเตอร์ที่แสดงออกโดยทีเซลล์ซึ่งไกล่เกลี่ยการออกจากอวัยวะน้ำเหลืองทุติยภูมิเมื่อจับกับโมเลกุลส่งสัญญาณออกฤทธิ์ทางชีวภาพ SP1 ซึ่งเป็นสื่อกลางที่สำคัญของการค้าทีเซลล์ แกนนี้สามารถถูกขัดจังหวะโดย CD69 ซึ่งเป็นเลคตินชนิด c ที่จับกับเมมเบรนซึ่งต่อต้านการแสดงออกของ S1PR1 จึงเป็นสื่อกลางการคงอยู่ นอกจากนี้ ในหนูทดลองการแสดงออก S1PR1 ถูกกระตุ้นโดยปัจจัยการถอดรหัสเหมือน Krüppel-like Factor 2(KLF2) ซึ่งพบว่ามีการปรับลดการควบคุมใน TRM ดังนั้นจึงยับยั้งการปล่อยน้ำเหลืองออก [3] ในทางกลับกัน การปรับลดของ KLF2 แสดงให้เห็นว่าเป็นสื่อกลางโดยโฮโมล็อกปัจจัยการถอดรหัสของ Blimpl ในทีเซลล์ (Hobit) ซึ่งแสดงออกในลักษณะจำเพาะ TpM ใน T เซลล์ของหนู [4] นอกจากนี้ TRM บางตัวยังแสดง CD103 (อินทิกริน E) โดยที่ TRM สามารถระบุได้โดยใช้การแสดงออกของ CD69 และ CD103 [1]
ในขณะที่ความรู้เกี่ยวกับฟีโนไทป์และหน้าที่ของ TRM เพิ่มขึ้นสำหรับเนื้อเยื่อต่างๆ ของมนุษย์ แต่ยังไม่ค่อยมีใครรู้จักเกี่ยวกับแง่มุมเหล่านี้ในไต. ที่นี่ ทีเซลล์สัมผัสกับชุดของเชื้อโรคที่แตกต่างกัน เช่น แบคทีเรียจากทางเดินปัสสาวะส่วนล่างและไวรัส renotropic เช่น polyomavirus BK (BKPyV) อันที่จริง เมื่อเร็ว ๆ นี้เราได้อธิบายวิธีที่ไตของมนุษย์มีชุดย่อยของทีเซลล์ซึ่งแสดงออก CD69 และ/หรือ CD103 ซึ่งในจำนวนนี้มี CD8 T เซลล์ที่กำหนดเป้าหมายอย่างเฉพาะเจาะจงไปที่โปรตีน virion โปรตีน BKPyV 1 (VP1) และโปรตีน T แอนติเจน (LTAG) ขนาดใหญ่ [5] เราและคนอื่นๆ ยังแสดงให้เห็นถึงการมีอยู่ของ CD69/CD103-ซึ่งแสดงออกเซลล์ T (MAIT) ที่เกี่ยวข้องกับเยื่อเมือกในไตเนื้อเยื่อ [6,7].
เพื่อให้เข้าใจได้ดียิ่งขึ้นว่าทีเซลล์ชนิดใดที่มีการตอบสนองภูมิคุ้มกันเฉพาะที่ในอวัยวะนี้ เราใช้โฟลว์ไซโตเมทรีแบบหลายช่องเพื่อตรวจสอบฟีโนไทป์และหน้าที่ของไตTRMs แยกออกจากผู้บริจาคไตวัสดุของผู้รับการปลูกถ่ายไต (RTR) และจากสุขภาพไตเนื้อเยื่อที่อยู่ติดกับมะเร็งเซลล์ใสของไต เพื่อดูว่าประชากรเหล่านี้เปรียบเทียบกับประชากรทีเซลล์ในระบบไหลเวียนอย่างไรเราพบว่ามนุษย์ไตเนื้อเยื่อเก็บ CD4 และ CD8 ทีเซลล์จำนวนมากซึ่งแสดงออกเพียง CD69, CD69 และ CD103 หรือไม่มีเครื่องหมายเหล่านี้ เราพบว่าซีดี69-ซีดี103-เซลล์ในไตเนื้อเยื่อแตกต่างอย่างมากจากทีเซลล์ในการไหลเวียนและอาจเป็นตัวแทนของประชากร TRM ที่ไม่มีเครื่องหมาย TRM ที่เป็นที่ยอมรับ นอกจากนี้ เราแสดงให้เห็นว่าเซลล์ T ของไตมีการหมุนเวียนอย่างแข็งขันมากกว่า โดยพิจารณาจากการแสดงออกที่เพิ่มขึ้นของ Ki-67 เมื่อเปรียบเทียบกับเลือด นอกจากนี้เรายังพบว่าเซลล์ CD8 และ CD4 T ในไตเนื้อเยื่อมักจะแสดงออก CXCR3 และมักจะแสดงออก CXCR6 การค้นพบนี้เกี่ยวข้องกับบทบาทของตัวรับคีโมไคน์ในการดึงดูดและการบำรุงรักษาประชากรทีเซลล์หน่วยความจำในไต
2. วัสดุและวิธีการ
2.1. ผู้ป่วยและตัวอย่างตัวอย่างได้มาจากโรคไต Biobank ของ Amsterdam UMC ตำแหน่ง AMC ใน Biobank นี้ ตัวอย่างผู้ป่วย เช่น เลือดและไตเนื้อเยื่อถูกรวบรวมและเก็บไว้จากการใช้ชีวิตอย่างมีสุขภาพไตผู้บริจาคและ RTR ที่ติดตามก่อนและหลังการปลูกถ่ายไต การศึกษานี้ดำเนินการตามหลักการที่ระบุไว้ในปฏิญญาเฮลซิงกิและอิสตันบูล และผู้เข้าร่วมทั้งหมดได้ให้ความยินยอมเป็นลายลักษณ์อักษรก่อนที่จะลงทะเบียนใน Biobank นอกจากนี้ เนื้อเยื่อที่เหลือจากผู้ป่วยที่ได้รับการผ่าตัดเนื้องอกในไต (เนื้อเยื่อไตที่อยู่ห่างไกลจากเนื้องอก) ยังได้รับบริจาคจากแผนกพยาธิวิทยาและเก็บไว้ใน Biobank เนื้อเยื่อเหล่านี้ได้รับการประมวลผลโดยไม่ระบุชื่อตามหลักจรรยาบรรณของสมาคมวิทยาศาสตร์การแพทย์แห่งเนเธอร์แลนด์ (การวิจัยเนื้อเยื่อมนุษย์และการวิจัยทางการแพทย์: หลักจรรยาบรรณเพื่อการใช้งานอย่างรับผิดชอบ, 2011 www.federa.org)
2.2. เซลล์เม็ดเลือดขาวชนิดโมโนนิวเคลียร์ (PBMC)ตัวอย่างเลือดได้มาจากกลุ่มควบคุมที่มีสุขภาพดีของ cytomegalovirus (CMV) (ที่มีชีวิตไตผู้บริจาคก่อนการผ่าตัด n= 13) ลักษณะของผู้เข้าร่วมในการศึกษานี้แสดงไว้ในตารางที่ 1 PBMC ถูกแยกออกจากเลือดโซเดียมเฮปารินโดยการหมุนเหวี่ยงเกรเดียนท์ความหนาแน่นมาตรฐานและต่อมาเก็บรักษาด้วยความเย็นจนถึงวันที่ทำการวิเคราะห์
2.3. เนื้อเยื่อไตตัวอย่างเนื้อเยื่อไตที่แข็งแรง (n {0}}) ได้มาจากไตที่ถูกผ่าตัดออกเนื่องจากมะเร็งเซลล์ไต (เนื้อเยื่อที่ไม่เป็นเนื้องอกที่อยู่ห่างไกลจากขั้วตรงกันข้ามของไต) และเนื้อเยื่อไตที่ปลูกถ่าย (n {{1) }}) ได้มาจากการปลูกถ่าย allograft ของไตหลังการปลูกถ่ายล้มเหลว ตัวอย่างเหล่านี้เรียกว่าตัวอย่างไตที่มีสุขภาพดีและปลูกถ่าย ตามลำดับ หั่นเปลือกนอกของไตเป็นชิ้น 1- มม. ด้วยเครื่องตัดเนื้อเยื่อ McElwain (Ted Pella, Redding, CA, USA) ถ่ายโอนไปยังหลอด 50 มล. และล้างด้วย PBS เย็นจนไม่มีเลือด ปรากฏให้เห็นได้ชัดเจน และสิ่งเหนือธรรมชาติก็ชัดเจน เติมอาหารในการย่อยอาหารแบบอุ่น (37 องศา) 40 มล. ต่อเนื้อเยื่อ 10 กรัม (DNAse Type IV(50 KU/mL)(Sigma Aldrich, Zwiindrecht, The Netherlands), collagenase type IV(0.5 mg/mL)(Worthington Biochemical, Lakewood, NJ, USA), BSA(60 mg/mL)(Sigma Aldrich), 20 uL/mL fetal calf serum (FCS, VWR International BV, Amsterdam, The Netherlands), TRIS (0.025 M)(Merck BV, Amsterdam, เนเธอร์แลนด์), penicillin-streptomycin (Biochrom GMBH, Berlin, Germany) ใน HBSS (Westburg BV, Leusden, The Netherlands)) และบ่มในเชคเกอร์เป็นเวลา 20 นาทีที่ 37 องศา ระบบกันสะเทือนแบบอุ่นถูกถ่ายโอนไปยังท่อ C (Miltenvi, Bergisch Gladbach, เยอรมนี) และอยู่ภายใต้โปรแกรม M_spleen_04.01 บน GentleMacs (Miltenyi) สื่อการย่อยอาหารถูกปิดใช้งานด้วย PBS ที่เย็นจัด และสารแขวนลอยของเซลล์ที่เป็นผลลัพธ์ได้ผ่านตัวกรองเซลล์เพื่อให้ได้สารแขวนลอยแบบเซลล์เดียว ซึ่งอยู่ภายใต้การปั่นเหวี่ยงแบบเกรเดียนท์ของความหนาแน่นมาตรฐานตามโปรโตคอลของผู้ผลิต (Lymphoprep, Abbott Diagnostics Technologies AS, ออสโล, นอร์เวย์ ). เซลล์โมโนนิวเคลียร์ที่แยกได้ (MNCs ของไต) คือเก็บรักษาด้วยความเย็นจนถึงวันที่ทำการวิเคราะห์ใน IMDM เสริมด้วย FCS 20 เปอร์เซ็นต์, 000036 เปอร์เซ็นต์ปริมาตร/ปริมาตร -mercaptoethanol, DMSO 5 เปอร์เซ็นต์, เพนิซิลลิน และสเตรปโตมัยซิน
2.4. Flow Cytometryการวัดถูกดำเนินการบน LSRFortessa flow cytometer (BD Biosciences) สำหรับแต่ละตัวอย่าง,2×106 PBMCs หรือ 0.5×106 ถึง 10×106 ไต MNCs ถูกวิเคราะห์ ปริมาตรของปฏิกิริยาการย้อมสีแต่ละครั้งสัมพันธ์กับจำนวนเซลล์และความเข้มข้นของแอนติบอดียังคงที่ เซลล์ถูกบ่มด้วยแอนติบอดีบนพื้นผิว (ตารางเสริม S1) เป็นเวลา 30 นาทีที่ 4 องศาในความมืด ไม่รวมเซลล์ที่ตายแล้วโดยใช้สีย้อม eFluor455UV (eBioscience Inc., Thermo Fisher Scientific, ซานดิเอโก, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา) โมโนโคลนัลแอนติบอดีที่มีเป้าหมายภายในเซลล์ (ตารางเสริม S1) ถูกเติมหลังจากการตรึงและการซึมผ่านของเซลล์โดยใช้ FoxP3/Transcription Factor Staining Set (eBioscience Inc.) มีการปฏิบัติตามวิธีการเผยแพร่สำหรับโฟลว์ไซโตเมทรีและการคัดแยกเซลล์เพื่อวัตถุประสงค์ทางภูมิคุ้มกัน [8] กลยุทธ์เกตติ้งที่ใช้สำหรับการวิเคราะห์ฟีโนไทป์มีอยู่ในรูปที่ S1 เพิ่มเติม ก่อนหน้านี้เราได้แสดงให้เห็นว่าไม่มีเครื่องหมายใดที่วิเคราะห์ได้รับผลกระทบจากวิธีการย่อยอาหารที่ใช้ในการแยก MNC ของไต [7]
ข้อจำกัดของตัวอย่างเนื้อเยื่อส่งผลให้มีการแยกตัวอย่างออกจากแผงม่าน CD3 บวกจำนวนเซลล์ที่วิเคราะห์ต่อตัวอย่างใน PBMC ที่มีสุขภาพดี, MNCs ของไตที่แข็งแรง และไต TX ที่มีสุขภาพดีสามารถพบได้ในรูปที่ S3 MNCs ตัวอย่างถูกวิเคราะห์เฉพาะเมื่อมีเซลล์ที่มีชีวิตมากกว่า 50 เปอร์เซ็นต์ภายในลิมโฟไซต์ ตามที่ประเมินโดย dve ความมีชีวิต และชุดย่อยของทีเซลล์ที่มี CD69/CD103 นั้นถูกแสดงคุณลักษณะเพิ่มเติมก็ต่อเมื่อจำนวนเซลล์ทั้งหมดของพวกมันเกิน 50
CISTANCHE จะปรับปรุงไต/ความล้มเหลวของไต
2.5. การทดสอบการกระตุ้นPBMC และ MNC ของไตถูกกระตุ้นตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [7,9] PBMC และ MNC ของไตถูกละลายในการมีอยู่ของ DNAse I(200 KU/mL), ล้าง และปล่อยให้คืนสภาพในชั่วข้ามคืนในเพลต 96-หลุม (คอร์นิง) ที่ไม่ถูกทรีทเมนต์ (คอร์นิง) ในอาหารเลี้ยงเชื้อ (RPMI ที่เสริมด้วย FCS 10 เปอร์เซ็นต์และเพนิซิลลิน-สเตรปโตมัยซิน) ที่ความเข้มข้น 20× 106/มล. (100 ไมโครลิตร/หลุม)
เช้าวันรุ่งขึ้น ฟอร์โบล 12-ไมริสเตท 13-อะซิเตท (PMA, 10 ng/mL; Sigma Aldrich)และไอโนโนซิน(1 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร; Sigma Aldrich) ถูกเติมเพื่อกระตุ้นเซลล์ สื่อเพียงอย่างเดียวถูกเพิ่มเป็นกลุ่มควบคุมเชิงลบ การฟักไข่ทั้งหมดถูกดำเนินการในตัวกลางเพาะเลี้ยงในการมีอยู่ของ CD28 (โคลน 15E8;2 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร), CD29 (โคลน TS 2/16;1 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร), เบรเฟลดิน A(10 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร, อินวิโตรเจน) และ GolgiStop ( BD Biosciences)ในปริมาตรสุดท้าย 200 uL เป็นเวลา 4 ชั่วโมง ที่ 37 องศาและ CO2 5 เปอร์เซ็นต์
ต่อจากนั้น เซลล์ถูกบ่มเป็นเวลา 30 นาทีด้วยแอนติบอดีบนพื้นผิว (ตารางเสริม S2) เซลล์ที่ตายแล้วถูกแยกออกโดยใช้สีย้อมที่มีชีวิตที่คงที่ eFluor780 (bioscience Inc., Thermo Fisher Scientific, San Diego, CA, USA) โมโนโคลนัลแอนติบอดีสำหรับการย้อมสีภายในเซลล์ (ตาราง S1) ถูกเติมหลังจากการตรึงและการซึมผ่านของเซลล์โดยใช้ Cytofix/Cytoperm Reagent Set (BD Biosciences) เซลล์ถูกล้างสองครั้งและวิเคราะห์บนโฟลว์ไซโตมิเตอร์ LSRFortessa กลยุทธ์เกตติ้งที่ใช้ในการวิเคราะห์เชิงฟังก์ชันสามารถพบได้ในรูปที่ S2 เพิ่มเติม ในการกำหนดลักษณะเฉพาะของชุดย่อยของทีเซลล์แต่ละชุด จำนวนฟังก์ชันเฉลี่ยของประชากรแต่ละกลุ่มคำนวณโดยใช้สูตรต่อไปนี้:((เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ที่ผลิตไซโตไคน์ 1 ตัว]*1) บวก ([เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ที่ผลิตไซโตไคน์ 2 ตัว]*2) บวก ([เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ที่ผลิต 3 ไซโตไคน์]*3) บวก ([เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ที่ผลิตไซโตไคน์ 4 ตัว]*4) บวก ([เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ที่ผลิตไซโตไคน์ทั้งหมด 5 ตัว]*5))/100
2.6.การวิเคราะห์ข้อมูล
วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้ FlowJo เวอร์ชัน 10 (FlowJo, Ashland, OR, USA) กราฟและตัวเลขทั้งหมดสร้างขึ้นโดยใช้ Graphpad Prism เวอร์ชัน 800 สำหรับ Windows (ซอฟต์แวร์ GraphPad, La Jolla, CA, USA) โปรแกรมเดียวกันนี้ยังใช้สำหรับการวิเคราะห์ทางสถิติของข้อมูล การทดสอบ Mann-Whitney-U แบบไม่อิงพารามิเตอร์ใช้เพื่อกำหนดความสำคัญของตัวอย่างที่ไม่มีการจับคู่ ในการเปรียบเทียบตัวอย่างที่จับคู่ การทดสอบอันดับที่ลงนามของ Wilcoxon ถูกนำมาใช้ p-values<0.05 were="" considered="" statistically="">
3. ผลลัพธ์
3.1. การแสดงออกที่แตกต่างของ CD8 และ/หรือ CD4 และเครื่องหมายของเนื้อเยื่อที่อยู่อาศัยโดยทีเซลล์ในเนื้อเยื่อไตที่แข็งแรงอันดับแรก เราเปรียบเทียบการแสดงออกของ CD4 และ CD8 โดย CD3-ทีเซลล์ที่เป็นบวกในเลือดส่วนปลายกับเซลล์ที่ตรวจพบในเนื้อเยื่อไตที่แข็งแรง CD4-CD8 plus (CD8) ทีเซลล์ถูกตรวจพบในเนื้อเยื่อไตบ่อยกว่าในเลือดอย่างมีนัยสำคัญ ((มัธยฐาน)25 เปอร์เซ็นต์ เทียบกับ.38 เปอร์เซ็นต์ )(รูปที่ la)ในทางตรงกันข้าม CD4*CD{{9} }(CD4)T เซลล์ถูกตรวจพบในความถี่ที่สูงกว่าในเลือดมากกว่าในเนื้อเยื่อไต ((70 เปอร์เซ็นต์ vs.52 เปอร์เซ็นต์ )รูปที่ la) โดยรวม พบเซลล์ CD4 T บ่อยกว่าในเนื้อเยื่อไตที่มีสุขภาพดีกว่าเซลล์ CD8 T (รูปที่ 1b)
ต่อไป เราตรวจสอบการแสดงออกของเครื่องหมายที่อยู่อาศัยของเนื้อเยื่อ CD69 และ CD103 ใน CD8 และ CD4-ชุดย่อยของทีเซลล์ที่กำหนด ตามที่คาดไว้ CD69 และ CD103 แทบไม่ถูกแสดงออกโดยเซลล์ในเลือดส่วนปลาย (รูปที่ 1c) ในเนื้อเยื่อที่มีสุขภาพดี CD69-CD103-, CD69 plus CD103-, CD69tCD103 plus และ CD69-CD103 บวกฟีโนไทป์ถูกแสดงออกโดย 46 เปอร์เซ็นต์ , 45 เปอร์เซ็นต์ , 6.6 เปอร์เซ็นต์ และ 1.8 เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ CD8T, 61 เปอร์เซ็นต์ ,38 เปอร์เซ็นต์ ,0.44 เปอร์เซ็นต์ และ 0.43 เปอร์เซ็นต์ ของ CD4Tcells ตามลำดับ (รูปที่ lc) โดยสรุป CD8 แต่โดยเฉพาะอย่างยิ่ง CD4 T เซลล์ถูกตรวจพบในปริมาณมากในเนื้อเยื่อไตของมนุษย์ที่มีสุขภาพดี นอกจากนี้ การแสดงออกของ CD69 และ CD103 ซึ่งเป็นเครื่องหมายของการอยู่อาศัยของเนื้อเยื่อ ถูกตรวจพบโดยหลักในกลุ่มทีเซลล์ที่พบในเนื้อเยื่อที่มีสุขภาพดีและไม่พบในเลือด
3.2.รูปแบบการแสดงออกที่แตกต่างกันของเครื่องหมายกำหนดกลุ่มย่อยทั่วไปโดยทีเซลล์ในสุขภาพ/โดยเนื้อเยื่อไต
CD45RA, ไทโรซีนฟอสฟาเตส, CCR7, คีโมไคน์รีเซพเตอร์ที่รู้จักกันในการไกล่เกลี่ยการค้าทีเซลล์ไปยังอวัยวะต่อมน้ำเหลืองทุติยภูมิ และ CD28 และ CD27 ทั้งรีเซพเตอร์ costimulatory ที่เกี่ยวข้องอย่างยิ่งในการกระตุ้นทีเซลล์ ล้วนเป็นเครื่องหมายที่ใช้ในการระบุกลุ่มย่อยของทีเซลล์ที่ใช้งานได้ J1{ {53}},1ล. เราต้องการตรวจสอบว่าการกระจายของชุดย่อยเหล่านี้ในเลือดแตกต่างจากการกระจายในเนื้อเยื่อไตมากน้อยเพียงใด ตามที่คาดไว้ ชุดย่อยของ CD8 T ที่ใหญ่ที่สุดที่ตรวจพบในการไหลเวียน (กล่าวคือ กลุ่มที่เกี่ยวข้องกับมากกว่าหรือเท่ากับ 5 เปอร์เซ็นต์ของประชากรทั้งหมด) คือกลุ่มที่มี CD45RA บวก CCR7 บวก CD28 บวก CD27 บวก (เซลล์ T ไร้เดียงสาหรือ TN ( ค่ามัธยฐาน) 13 เปอร์เซ็นต์ ), CD45RA-CCR7 plus CD28 plus CD27 plus (central-memory Tcells หรือ TcM, 6 เปอร์เซ็นต์ ), CD45RA-CCR7-CD28 plus CD27 plus (TEv1,30 เปอร์เซ็นต์ ), CD45RA-CCR7-CD28 plus CD27-(Tau2,10 เปอร์เซ็นต์ ), CD45RA-CCR7-CD28-CD27*(TEy3,6 เปอร์เซ็นต์ ) , CD45RA-CCR7-CD28-CD27-(TM4,6 เปอร์เซ็นต์ )และ CD45RA บวก CCR7-CD28-CD27-(TEMRA ,10 เปอร์เซ็นต์ )ฟีโนไทป์ ในเนื้อเยื่อที่มีสุขภาพดี แทบไม่มีการตรวจพบเซลล์ CD8 T (0.6 เปอร์เซ็นต์) ที่มีฟีโนไทป์ TN และมีเพียงไม่กี่ (0.8 เปอร์เซ็นต์) ที่แสดงฟีโนไทป์ของภาษี ในทางตรงกันข้าม เซลล์ CD8 T ที่ตรวจพบในเนื้อเยื่อไตที่แข็งแรงประกอบด้วย TEv1-(22 เปอร์เซ็นต์ ),TEM2-(12 เปอร์เซ็นต์ ), Tpx3-(18 เปอร์เซ็นต์ ),TEx{ มาก {65}} (23 เปอร์เซ็นต์ ) และประชากรทีเซลล์ TEyRA (11 เปอร์เซ็นต์ )T (รูปที่ ld และรูปที่ S4) เมื่อดูที่เซลล์ CD4 T ในเลือด ประชากรที่ใหญ่ที่สุดคือกลุ่มที่แสดง Ty-(35 เปอร์เซ็นต์ ), TcM-(25 เปอร์เซ็นต์ ), TEMl-(16 เปอร์เซ็นต์ ), TFM2-(9 เปอร์เซ็นต์ ) และ ประชากรที่มี CD45RAtCCR ที่ไม่ได้ระบุเป็นอย่างอื่น7-CD28 บวกกับฟีโนไทป์ของ CD27* (0.4 เปอร์เซ็นต์ )(รูปที่ 1d และรูปที่ S4) ในเนื้อเยื่อไตที่แข็งแรง CD4 T เซลล์เพียงไม่กี่เซลล์แสดง TN- (3 เปอร์เซ็นต์) หรือ TcM - (ร้อยละ 3 ) ฟีโนไทป์ ในทางกลับกัน เซลล์จำนวนมากที่มี TEM1-(22 เปอร์เซ็นต์ ), TEM2-(40 เปอร์เซ็นต์ ) หรือ TEM4 (14 เปอร์เซ็นต์ ) ฟีโนไทป์ถูกตรวจพบในเนื้อเยื่อที่มีสุขภาพดี (รูปที่ ld และรูปที่ S4) . โดยสรุป การกระจายของ CD45RA/CCR7/CD28/CD27-ชุดย่อยของ CD8 และ CD4 T ที่กำหนดไว้มีความแตกต่างกันอย่างมากระหว่างเลือดและเนื้อเยื่อไตที่แข็งแรง
3.3. ทีเซลล์ CD8 และ CD4 ในเนื้อเยื่อไตของมนุษย์ที่มีสุขภาพดีมักประกอบรวมด้วยไซเคิลเซลล์อย่างแข็งขันต่อไป เราตรวจสอบว่ามีความแตกต่างในการแสดงออกของเครื่องหมายตามแบบฉบับของโปรไฟล์หน่วยความจำเอฟเฟกเตอร์ที่เป็นพิษต่อเซลล์หรือไม่ ระหว่างประชากรทีเซลล์ CD8 และ CD4 ในเลือดและเนื้อเยื่อไต อันดับแรก เราดูที่การแสดงออกของปัจจัยการถอดรหัส T-box T-bet และ eomeso-dermin(Eomes) สารควบคุมการถอดรหัสเหล่านี้เกี่ยวข้องโดยตรงในการสร้างเซลล์เอฟเฟกเตอร์เฟสเฉียบพลัน กระตุ้นการแสดงออกของโมเลกุลเช่น interferon-y และ granzyme B และในการสร้างการตอบสนองของหน่วยความจำรอง ตามที่คาดไว้ การแสดงออกของ T-bet เกิดขึ้นบ่อยครั้งในกลุ่ม CD8 Tcells ที่มีการไหลเวียนโลหิต (54 เปอร์เซ็นต์) ในขณะที่ CD4 T cells ที่เกี่ยวกับการไหลเวียนโลหิตมักไม่ค่อยแสดงออกถึงปัจจัยการถอดรหัสนี้ (13 เปอร์เซ็นต์) ที่น่าสนใจสำหรับเซลล์ CD4 T การแสดงออกของ T-bet นั้นสูงกว่าอย่างมีนัยสำคัญในเซลล์ T ที่ตรวจพบในเนื้อเยื่อไตที่แข็งแรงกว่าในการไหลเวียน (53 เปอร์เซ็นต์ เทียบกับ 13 เปอร์เซ็นต์) การแสดงออกบางอย่างยังตรวจพบบ่อยครั้งในเซลล์ CD8 T ในระบบไหลเวียนโลหิต (59 เปอร์เซ็นต์) ในขณะที่พบอีกครั้งในเซลล์ CD4 T ในระบบไหลเวียนโลหิต (15 เปอร์เซ็นต์) อย่างไรก็ตาม การแสดงออกของ Eomes พบได้บ่อยในเซลล์ CD4 T ในเนื้อเยื่อไต (32 เปอร์เซ็นต์) มากกว่าในเลือด (รูปที่ 2a,b)
ต่อไป เราตรวจสอบการแสดงออกของแกรนไซม์บี ซึ่งเป็นซีรีนโปรตีเอสที่ทราบว่าเป็นสื่อกลางในการตายของเซลล์หลังจากฉีดเข้าไปในไซโทพลาสซึมโดยเซลล์ทีเป็นพิษต่อเซลล์ ตามรายงานก่อนหน้านี้ ตรวจพบการแสดงออกของ T-bet และแกรนไซม์ B เป็นจำนวนมากในการหมุนเวียนเซลล์ CD8 T (28 เปอร์เซ็นต์) อย่างไรก็ตาม การแสดงออกของยีนพบได้ยากในกลุ่ม CD4 T ที่หมุนเวียน (1 เปอร์เซ็นต์) สำหรับเซลล์ CD8 T การแสดงออกของกรานไซม์ B มีความคล้ายคลึงกันในเนื้อเยื่อไตและประชากรที่หมุนเวียน (28 เปอร์เซ็นต์ ys.23 เปอร์เซ็นต์ )(รูปที่ 2c) น่าสนใจ ความถี่การแสดงออกของ T-bet และ Eomes ที่สูงขึ้นที่ตรวจพบในเซลล์ CD4 T ของไตไม่สอดคล้องกับความถี่ในการแสดงออกของแกรนไซม์ B ที่สูงขึ้นในช่องนี้ (5 เปอร์เซ็นต์) จากนั้นเราดูที่การแสดงออกของ KLRGl ซึ่งเป็นตัวรับการยับยั้งการรวมกันที่ทราบว่าแสดงออกอย่างเด่นชัดโดยเซลล์เอฟเฟกต์ระยะเฉียบพลันที่เป็นพิษต่อเซลล์และเซลล์หน่วยความจำเอฟเฟกต์ KLRG1 ถูกแสดงออกบ่อยครั้งโดยการหมุนเวียน CD8 T เซลล์ (54 เปอร์เซ็นต์) แต่ไม่ใช่โดยเซลล์ CD4 T ( 10 เปอร์เซ็นต์ ). ไม่พบความแตกต่างระหว่างช่องทางกายวิภาคในการแสดงออกของ KLRG1l สำหรับเซลล์ CD8 หรือ CD4 T สุดท้าย เราได้ตรวจสอบการแสดงออกของ Ki-67 ซึ่งเป็นเครื่องหมายที่แสดงถึงการหมุนเวียนเซลล์อย่างแข็งขัน ตามการสังเกตก่อนหน้านี้ การแสดงออก Ki-67 ระหว่างเซลล์ CD8 และ CD4 T ที่หมุนเวียนอยู่หายาก (1 เปอร์เซ็นต์ และ 2 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ) ที่น่าสนใจ ในบรรดาเซลล์ CD8 T แต่โดยเฉพาะอย่างยิ่งในเซลล์ CD4 T การแสดงออกของ Ki-67 ถูกตรวจพบบ่อยกว่าอย่างมีนัยสำคัญในเซลล์ T ในเนื้อเยื่อไต (3 เปอร์เซ็นต์และ 11 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ) (รูปที่ 2e) โดยสรุป ตรวจพบเซลล์ CD4 T ในเนื้อเยื่อไตของมนุษย์ที่มีสุขภาพดี แต่ไม่ใช่เซลล์ CD8 T ในช่องนี้ ซึ่งแสดง T-bet และ Homes บ่อยกว่า อย่างไรก็ตาม สิ่งนี้ไม่ได้แปลเป็นการแสดงออกของแกรนไซม์บีโดยเซลล์ CD4 T ในไตบ่อยขึ้น นอกจากนี้ แม้ว่าจำนวนเซลล์การปั่นจักรยานโดยรวมจะต่ำ แต่เนื้อเยื่อไตยังมีเซลล์ CD8 และ CD4 T ที่หมุนเวียนอย่างแข็งขันมากกว่าการไหลเวียนอย่างมีนัยสำคัญ
3.4. CD8 และ CD4 T Cells ในเนื้อเยื่อไตที่แข็งแรงนั้นเกือบทั้งหมดเป็น CXCR3-ตำแหน่งจากนั้นเรามองหาความแตกต่างในการแสดงออกของตัวทำเครื่องหมายอื่น ๆ โดยทั่วไปในการหมุนเวียนประชากรของหน่วยความจำที่ไม่เป็นพิษต่อเซลล์ในทันที ดังที่แสดงไว้ก่อนหน้านี้สำหรับการหมุนเวียนประชากรทีเซลล์ อันดับแรก เราดูที่การแสดงออกของ IL-7R ซึ่งแสดงออกโดยหลักในเซลล์หน่วยความจำที่ไร้เดียงสาและมีความแตกต่างในระยะแรกในระบบไหลเวียน ซึ่งเกี่ยวข้องกับการรักษาการงอกของสภาวะสมดุลคงที่ [10,12,13] ในเลือดส่วนปลาย IL-7Ra ถูกแสดงออกบ่อยครั้งโดย CD8 ทีเซลล์ (84 เปอร์เซ็นต์) และ CD4 ทีเซลล์ (98 เปอร์เซ็นต์) ทีเซลล์ CD8 และ CD4 ทีในเนื้อเยื่อไตที่แข็งแรงแสดงเครื่องหมายนี้น้อยกว่าทีเซลล์หมุนเวียนอย่างมีนัยสำคัญ (71 เปอร์เซ็นต์ และ 76 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ) (รูปที่ 2f)
ต่อไป เราตรวจสอบการแสดงออกของตัวรับคีโมไคน์อื่นๆ ที่น่าสนใจ CXCR3 ตัวรับคีโมไคน์ที่เกี่ยวข้องกับการค้า Tcell ไปยังเนื้อเยื่ออักเสบ[14-17] แสดงออกโดยเซลล์ CD8 และ CD4 T ในเนื้อเยื่อไตจำนวนมากเกินไป (99 เปอร์เซ็นต์ และ 91 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ) และบ่อยครั้งน้อยลงอย่างมีนัยสำคัญโดยการหมุนเวียนทีเซลล์ (58 เปอร์เซ็นต์ และ 26 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ)(รูปที่ 2g) สุดท้าย เราได้กำหนดนิพจน์ของ CXCR6 ซึ่งทราบว่ามีส่วนเกี่ยวข้องในการสร้างประชากร TRM [18-22] ในขณะที่ CXCR6 ถูกแสดงออกโดยประชากรกลุ่มเล็กๆ ของ CD8 T เซลล์ที่หมุนเวียนอยู่ (16 เปอร์เซ็นต์ ) และแทบไม่ได้เกิดจากการหมุนเวียน CD4 T เซลล์ สัดส่วนที่มากขึ้นอย่างมีนัยสำคัญของ CD8 และ CD4 Tcells ในเนื้อเยื่อไตแสดงโมเลกุลนี้ (40 เปอร์เซ็นต์ และ 40 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ)(รูปที่ 2h) โดยสรุป เครื่องหมายที่มักเกี่ยวข้องกับสภาวะที่ไม่เปลี่ยนแปลงในทันทีในระบบไหลเวียน ซึ่งมีแนวโน้มว่า -7Ra, CCR7, CD28 และ CD27 มักแสดงออกโดยเซลล์ CD8 และ T ของไตน้อยกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับเลือดใน ตรงกันข้าม ทีเซลล์ในไตมักแสดงออก CXCR6 และมักแสดงออก CXCR3
3.5.ความแตกต่างในฟีโนไทป์ระหว่าง Healthy Kidney และ Allograft T Cells นั้นน้อยที่สุดต่อไป เราต้องการตรวจสอบว่าการค้นพบนี้ยังคงอยู่ในเนื้อเยื่อจากการปลูกถ่ายไต allografts ที่ได้รับสำหรับการบ่งชี้ทางคลินิกต่างๆ หรือไม่ (ตารางที่ 1)สำหรับจำนวนของ CD8 และ CD4 ทีเซลล์ในเนื้อเยื่อที่มีสุขภาพดีและเนื้อเยื่ออัลโลกราฟต์ ไม่พบความแตกต่าง (รูปที่ 3a) อย่างไรก็ตาม เราสังเกตเห็นแนวโน้มที่ไม่มีนัยสำคัญต่อเซลล์ CD4T และเซลล์ CD8T ในเนื้อเยื่อที่มีสุขภาพดีน้อยกว่าในเนื้อเยื่อ allograft (รูปที่ 3b) นอกจากนี้ เมื่อดู CD69/CD103expression และ CD45RA/CCR7/CD28/CD27- ชุดย่อยที่กำหนดไว้ ไม่มีความแตกต่างในการกระจายของ CD69/CD103- หรือ CD45RA/CCR7/CD28/CD27- เซตย่อยที่กำหนดไว้ถูกบันทึกไว้ โดยไม่คำนึงถึงฟีโนไทป์ของ CD8/CD4 (รูปที่ 3d และรูปที่ S5) เมื่อตรวจสอบความถี่การแสดงออกของเครื่องหมายที่เป็นแบบฉบับมากขึ้นสำหรับเซลล์ T ที่เป็นพิษต่อเซลล์ เราพบว่าไม่มีความแตกต่างในการแสดงออกของ T-bet, KLRG1 หรือ granzyme B ระหว่างไตที่แข็งแรงหรือเซลล์ T allograft (รูปที่ 3a,gh) เราพบว่าการแสดงออกของ Eomes พบได้น้อยกว่าในเซลล์ CD4 T ของเนื้อเยื่อ allograft มากกว่าในเซลล์ T ของเนื้อเยื่อที่มีสุขภาพดี (รูปที่ 3f) ไม่พบความแตกต่างในการแสดงออกของเครื่องหมายอื่นๆ (รูปที่ 3-l และรูปที่ S5b-d) โดยสรุป นอกเหนือจากความถี่การแสดงออกที่ต่ำกว่าของ Eomes ในเซลล์ CD4 T allograft แล้ว ประชากรเซลล์ไม่แตกต่างกันระหว่างประชากรที่ศึกษา
3.6. CD69-CD103-T เซลล์ในเนื้อเยื่อไตแตกต่างจากเซลล์หมุนเวียนเมื่อพิจารณาจากลักษณะฟีโนไทป์ที่คล้ายคลึงกันของเซลล์ CD8 และ CD4 T ที่พบในเนื้อเยื่อไตที่มีสุขภาพดีและในเนื้อเยื่อไตที่ปลูกถ่าย เรารวบรวมข้อมูลจากทั้งสองกลุ่มการศึกษาเพื่อตรวจสอบลักษณะเฉพาะของเซลล์เหล่านี้เพิ่มเติมตามการแสดงออกของ CD69 และ CD103 เนื่องจาก CD69-CD103 plus cells ถูกตรวจพบในความถี่ต่ำมากเสมอ (<50 events),="" we="" excluded="" these="" cells="" from="" further="" analyses.="">อันดับแรก เราตรวจสอบความแตกต่างในชุดย่อยเหล่านี้ตามการแสดงออกร่วมของ CD69/CD103 ในประชากรทีเซลล์ไต (รูปที่ 4 และรูปที่ S6) ที่น่าสนใจ สำหรับทั้ง CD8 และ CD4 ทีเซลล์ ความแตกต่างที่สำคัญถูกบันทึกไว้ในการแจกแจงของ CD45RA/CCR7/CD28/CD27-ชุดย่อยที่กำหนดระหว่าง CD69-CD103-,CD69 บวก CD{ {14}}และชุดย่อย CD69*CD103* สำหรับ CD8 ทีเซลล์ ซีดี69-ซีดี103-เซลล์มีประชากรที่ปรับขนาดได้ของเซลล์ TeyRA (21 เปอร์เซ็นต์ ) ซึ่งมีขนาดเล็กกว่ามากในเซตย่อย CD69 บวก CD103- และ CD69 บวก CD103 (5.8 เปอร์เซ็นต์ และ 2.2 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ) ในทางกลับกัน ประชากรกลุ่มหลังเหล่านี้มี TEy3 ที่ใหญ่กว่ามาก (13 เปอร์เซ็นต์ , 30 เปอร์เซ็นต์ และ 32 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ) และ TEy4 (8 เปอร์เซ็นต์ , 19 เปอร์เซ็นต์ และ 33 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ) ประชากรย่อย สำหรับ CD4 T เซลล์ พบเซลล์ TEyRA สองสามเซลล์ระหว่าง CD69-CD103-, CD69*CD103- และ CD69 บวกชุดย่อย CD103* (2.6 เปอร์เซ็นต์ ,0 เปอร์เซ็นต์ และ 1.7 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ) แต่เซลล์เหล่านี้มีประชากรย่อยจำนวนมากของ TFw1 (26 เปอร์เซ็นต์ .24 เปอร์เซ็นต์ และ 10 เปอร์เซ็นต์ตามลำดับ) และ TEy2 ells (30 เปอร์เซ็นต์ ,46 เปอร์เซ็นต์ และ 27 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ) ในกลุ่ม CD69 plus CD103-และโดยเฉพาะอย่างยิ่ง ในบรรดาเซลล์ CD69*CD103* พบว่ามีประชากรย่อย TEM4 ที่ใหญ่กว่ามาก (6 เปอร์เซ็นต์, 11 เปอร์เซ็นต์ และ 34 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ)
จากความแตกต่างเหล่านี้และการสังเกตก่อนหน้านี้ว่าประชากรทีเซลล์ในไตแทบไม่ประกอบด้วยเซลล์ TN และ TcM เราจึงตรวจสอบเซลล์ CD69-CD103- ที่พบในเนื้อเยื่อไตเพิ่มเติมเพื่อกำหนดว่าเซลล์เหล่านี้อยู่มากน้อยเพียงใด ไม่ใช่แค่การหมุนเวียนเซลล์ผ่านการไหลเวียนของไต ในการทำเช่นนั้น เราเปรียบเทียบเซลล์เหล่านี้กับเซลล์หมุนเวียน CD69-CD103~เซลล์ในเนื้อเยื่อไตแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญจากเซลล์ในระบบหมุนเวียน: T-bet, Ki-67 และ CXCR3 แสดงออกบ่อยขึ้นโดยเซลล์ไต T โดยไม่คำนึงถึงฟีโนไทป์ของ CD8/CD4 (รูปที่ 5a-c) ในทางตรงกันข้าม IL-7R , CCR7, CD28 และ CD27 ทั้งหมดถูกแสดงออกโดยความถี่ที่น้อยกว่าอย่างมีนัยสำคัญโดย CD69-CD103- ไต T เซลล์ โดยไม่คำนึงถึงฟีโนไทป์ของ CD8/CD4 (รูปที่ 5d- กรัม) CD69-CD103-CD4 Tcells ในเนื้อเยื่อไตแสดง KLRG1 บ่อยกว่าในเลือดและ CD69-CD103-CD8 T ในเนื้อเยื่อไตแสดงออก Eomes บ่อยกว่าอย่างมีนัยสำคัญ ในเลือด
ต่อไป เราต้องการดูว่าการแสดงออกร่วมของ CD69 และ CD103 ส่งผลต่อเครื่องหมายของศักย์เชิงฟังก์ชันอย่างไร อันดับแรก เราดูที่เครื่องหมายที่เกี่ยวข้องกับศักยภาพของพิษต่อเซลล์ แม้ว่าความแตกต่างจะถูกบันทึกไว้ระหว่างประชากรย่อยแต่ละกลุ่ม แต่ไม่พบรูปแบบที่เป็นผลตามมาสำหรับ T-bet และ Eomes ในเซลล์ CD8 T เมื่อ CD69 หรือ CD103 ถูกแสดงร่วมกัน (รูปที่ 6a,b) ในทางตรงกันข้าม ในเซลล์ CD4 T ปัจจัยการถอดรหัสเหล่านี้ทั้งคู่เพิ่มขึ้นพร้อมกับ การแสดงออกร่วมกันของ CD69 และ CD103 (รูปที่ 6a,b) เมื่อดูที่ KLRG1 เราสังเกตว่าสำหรับเซลล์ CD8 T การแสดงออกของ KLRG1 ลดลงพร้อมกับการแสดงออกร่วมกันของ CD69/CD103 สำหรับเซลล์ CD4 T จะเห็นแนวโน้มที่คล้ายคลึงกัน อย่างไรก็ตาม ในที่นี้มีเพียง CD69-CD103-เซลล์ที่แสดง KLRG1 ที่ความถี่ที่สูงกว่า CD69 บวก CD103- และ CD69 บวก CD103* เซลล์ (รูปที่ 6c) ความถี่การแสดงออกของแกรนไซม์ B ยังลดลงพร้อมกับเครื่องหมายของถิ่นที่อยู่ของเนื้อเยื่อ โดยความถี่ในการแสดงออกนั้นต่ำที่สุดในบรรดาเซลล์ CD69 บวก CD103* ภายในทั้ง CD8 และ CD4 ทีเซลล์ (รูปที่ 6d) การแสดงออกของ Ki-67 ซึ่งสูงกว่าในกลุ่มทีเซลล์ไตเมื่อเปรียบเทียบกับทีเซลล์ในเลือด ไม่แตกต่างกันตามการแสดงออกร่วมกันของ CD69 หรือ CD103 (รูปที่ 6e)
จากนั้นเราตรวจสอบเครื่องหมายโดยปกติเกี่ยวข้องกับโปรไฟล์หน่วยความจำที่ไม่เป็นพิษต่อเซลล์ตามการแสดงออกร่วมกันของ CD69/CD103 การแสดงออกของ IL-7Ra, CCR7 และ CD28 สูงที่สุดในกลุ่ม CD69-CD103- โดยมีแนวโน้มในการกำหนดการแสดงออกพร้อมกับการแสดงออกร่วมกันของ CD69/CD103 (รูปที่ 6f-h ). จากนั้นเราดูที่การแสดงออกของ CXCR3 และ CXCR6 คีโมไคน์รีเซพเตอร์ทั้งสองมักถูกแสดงออกโดยเซลล์ CD69tCD103t โดยไม่คำนึงถึงฟีโนไทป์ของ CD8/CD4 และมีแนวโน้มสูงขึ้นด้วยการแสดงออกร่วมของ CD69/CD103 สำหรับ CXCR6 เท่านั้น แนวโน้มนี้มีนัยสำคัญทางสถิติ ส่งผลกระทบต่อทั้ง CD8 และ CD4 Tells (รูปที่ 6j,k) โดยสรุป เซลล์ CD69-CD103- ในเนื้อเยื่อไตแตกต่างอย่างมากจากเซลล์ในระบบไหลเวียนและอาจเกี่ยวข้องกับประชากร TBv อื่นที่ไม่ได้ทำเครื่องหมายโดยการแสดงออกของ CD69 หรือ CD103 เครื่องหมายเดียวที่แตกต่างกันอย่างสม่ำเสมอ โดยไม่คำนึงถึงฟีโนไทป์ CD8/CD4 ในแง่ของการแสดงออกร่วมของ CD69 และ CD103 คือ CXCR6
3.7.T เซลล์ในเนื้อเยื่อไตมีการสร้าง Interferon- มากกว่า T Cells ในเลือดสุดท้าย เราได้ตรวจสอบกำลังการผลิตไซโตไคน์โดย CD8/CD4-ประชากรทีเซลล์ที่กำหนดในเนื้อเยื่อไต ขั้นแรก เราเปรียบเทียบการผลิตอินเตอร์เฟอรอน-y (IFNy), ปัจจัยเนื้อร้ายของเนื้องอก (TNF ), อินเตอร์ลิวคิน-2 (IL-2), แกรนูโลไซต์-มาโครฟาจ-โคโลนี-กระตุ้นแฟกเตอร์(GM-CSF) และ IL-17 โดยการกระตุ้น CD8/CD4-ประชากรทีเซลล์ที่กำหนดซึ่งพบในเลือดไปยังผู้ที่อยู่ในเนื้อเยื่อไตที่มีสุขภาพดี (รูปที่ 7a-e) ที่น่าสนใจ มีเพียง IFNy เท่านั้นที่แสดงออกอย่างสม่ำเสมอโดยสัดส่วนที่มากขึ้นของทีเซลล์ในเนื้อเยื่อไตที่มีสุขภาพดี เมื่อเปรียบเทียบกับทีเซลล์ในเลือด โดยไม่คำนึงถึงฟีโนไทป์ของ CD8/CD4 (รูปที่ 7a) ยังสังเกตเห็นความแตกต่างในระดับเซตย่อยแต่ละรายการ โดยเฉพาะอย่างยิ่ง TNF และ GM-CSF ถูกผลิตขึ้นบ่อยขึ้นโดยเซลล์ CD4 T ในเนื้อเยื่อไต (รูปที่ 7b.c) ในแง่ของลักษณะการทำงานหลายฟังก์ชัน (กล่าวคือ จำนวนของไซโตไคน์ที่ผลิตพร้อมกัน) พบว่าเซลล์ CD4 T ในเนื้อเยื่อไตมีฟังก์ชันหลายหน้าที่มากกว่าเซลล์ CD4 ในเลือด (รูปที่ 7f)
ต่อไป เราดูความแตกต่างของกำลังการผลิตไซโตไคน์ระหว่างทีเซลล์ที่ถูกกระตุ้นจากเนื้อเยื่อที่แข็งแรงและเนื้อเยื่ออัลโลกราฟต์ ไม่พบความแตกต่างในการผลิตของไซโตไคน์แต่ละตัว หรือจำนวนของไซโตไคน์ที่ผลิตได้พร้อม ๆ กันถูกตรวจพบระหว่างทีเซลล์จากเนื้อเยื่อไตที่แข็งแรงหรือเนื้อเยื่อไตทั้งหมด (รูปที่ S7) เนื่องจาก CD69 แสดงออกตามการกระตุ้นของทีเซลล์ เราจึงศึกษาเฉพาะความแตกต่างระหว่าง CD103-เชิงลบและ CD103-ที่แสดงออก CD4 และ CD8 ทีเซลล์ (รูปที่ 7g-) เมื่อเปรียบเทียบ CD4 และ CD8 ทีเซลล์ซึ่งแสดงออก CD103 กับเซลล์ที่ไม่แสดงออก CD103 ในเนื้อเยื่อไต เราสังเกตว่าเซลล์ CD8 และ CD4 CD103 แสดงออก IFNy มากกว่าเซลล์ CD103- (รูปที่ 7g) นอกจากนี้ แม้ว่าเซลล์ที่ผลิต IL-1ZA มีค่าต่ำระหว่างเซลล์ CD103 บวก CD8 และ CD4 T ในเนื้อเยื่อไต แต่ก็พบได้บ่อยในประชากรกลุ่มนี้อย่างสม่ำเสมอเมื่อเทียบกับประชากร CD103- โดยสรุป ทีเซลล์จำนวนมากขึ้นในเนื้อเยื่อไตผลิต IFNy เมื่อเทียบกับทีเซลล์หมุนเวียน โดยไม่คำนึงถึงฟีโนไทป์ของ CD8/CD4 โดยแท้จริงแล้ว เปอร์เซ็นต์สูงสุดของเซลล์ที่ผลิต IFNy ถูกพบในกลุ่ม CD103- ซึ่งแสดงออกถึง CD4 และ CD8 ที่มาจากไต นอกจากนี้ ทีเซลล์ในการปลูกถ่ายไตไม่แตกต่างจากเซลล์ในเนื้อเยื่อไตที่มีสุขภาพดีเมื่อเทียบกับพารามิเตอร์เหล่านี้
4. การอภิปราย
ในการศึกษาปัจจุบัน เราได้กล่าวถึงความหลากหลายของชุดย่อยของทีเซลล์ตามการแสดงออกของ CD8 และ CD4 และเครื่องหมายของถิ่นที่อยู่ของเนื้อเยื่อ CD69 และ CD103 ในไตของมนุษย์และเปรียบเทียบกับสิ่งเหล่านี้กับเลือด ตรวจพบจำนวนเซลล์ CD8 และ CD4 T ในเนื้อเยื่อไต นอกจากนี้ ทีเซลล์เหล่านี้ในไตยังมี CD69*CD103-เซลล์จำนวนมาก CD69 บวก CD103 plus เซลล์ถูกตรวจพบเช่นกัน แต่ส่วนใหญ่ในหมู่ CD8 ทีเซลล์ และแทบไม่มีอยู่เลยระหว่างเซลล์ CD4 ที การค้นพบที่คล้ายกันเกี่ยวข้องกับ TRM ปอดก่อนหน้านี้ [23] ตามที่คาดไว้ การแสดงออกของประชากร CD69 และ CD103- นั้นแทบจะหายไปจากการไหลเวียน ความแตกต่างที่เด่นชัดเมื่อเปรียบเทียบทีเซลล์ในไตกับสิ่งที่อยู่ในเลือด เกี่ยวข้องกับการกระจายตัวที่ชัดเจนของชุดย่อยที่กำหนดไว้ของ CD45RA/CCR7/CD28/CD27- ดั้งเดิม ที่น่าสนใจ การแสดงออกของ CD28 มักไม่ถูกแสดงออกเมื่อทีเซลล์แสดงร่วมกันกับ CD69 เพียงอย่างเดียวหรือร่วมกับ CD103 ในทางทฤษฎี สิ่งนี้ควรทำให้ประชากรเหล่านี้มีความไวต่อสัญญาณ costimulatory น้อยลงโดย CD80 และ CD86 ความแตกต่างอื่นๆ เกี่ยวข้องกับความถี่การแสดงออกที่สูงขึ้นของ CXCR3, CXCR6 และ Ki-67 นอกจากนี้ ทีเซลล์ในไตมักจะมีเซลล์ที่ผลิต IFNy และมักมีฟังก์ชันหลายหน้าที่ โดยแท้จริงแล้ว ภายในไต CD103 บวก Tpys มีเซลล์ที่ผลิต IFN มากกว่า CD103- คู่ที่เป็นลบของพวกมัน นอกจากนี้ เซลล์ CD103T มักผลิต IL-17 แม้ว่าจะเกี่ยวข้องกับประชากรที่พอประมาณก็ตาม
CISTANCHE จะปรับปรุงการติดเชื้อในไต/ไต
เกี่ยวกับการแสดงออกที่บ่อยมากขึ้นของ CXCR3 โดยเซลล์ไต CD8 และ CD4 แกน CXCR3/CXCL10 ถูกแสดงให้เห็นก่อนหน้านี้ว่ามีส่วนเกี่ยวข้องกับการสร้างประชากร TpM ในผิวหนัง ตับ และเนื้อเยื่อน้ำเหลือง [24-28] นอกจากนี้ ยังเกี่ยวข้องกับการค้ามนุษย์ไปยังเยื่อบุผิวที่มีความเครียดและการอักเสบในความหมายทั่วไป [14-17] ด้วยความถี่สูงของ CXCR3 ในกลุ่ม T เหล่านี้ในเนื้อเยื่อไตที่มีสุขภาพดี CXCR3 ดูเหมือนจะเกี่ยวข้องกับ TRM homeostasis ในเนื้อเยื่อไตเช่นกัน และอาจไม่จำเป็นต้องเกี่ยวข้องกับการอักเสบหรือสัญญาณอันตรายที่จะทำเช่นนั้น สำหรับ CXCR6 นั้นแกน CXCR6/CXCL16 ได้แสดงให้เห็นแล้วว่ามีความจำเป็นสำหรับการนำ Tpst ไปยังส่วนต่างๆ เช่น ปอด ผิวหนัง ตับ และสมอง และอาจเกี่ยวข้องกับกลไกสากลที่จำเป็นสำหรับการชี้นำและรักษา TRM ไปยังและ ในเนื้อเยื่อ รวมถึง TRM ในเนื้อเยื่อไตของมนุษย์ด้วย [18-22]
ฟาร์เบอร์และเพื่อนร่วมงานมีลักษณะเฉพาะอย่างกว้างขวางและเปรียบเทียบประชากร TRM CD8 และ CD4 ที่อาศัยอยู่ในเนื้อเยื่อของมนุษย์ประเภทต่างๆ ที่ได้มาจากผู้บริจาคอวัยวะ พวกเขาอธิบายว่าประชากร TRM ในปอด ม้าม ลำไส้เล็ก และเนื้อเยื่อน้ำเหลืองทุติยภูมิต่างๆ แตกต่างกันอย่างไรในแง่ของการถอดรหัส แต่ยังรวมถึงการแสดงออกของโปรตีนต่างๆ รวมทั้งไซโตไคน์ ในการศึกษาปัจจุบัน [29-31 อย่างไรก็ตาม การตรวจสอบเหล่านี้ไม่ได้ประกอบด้วยประชากร TRM ในไตของมนุษย์ และข้อมูลเกี่ยวกับเรื่องนี้
วัตถุนั้นหายาก ก่อนหน้านี้เราแสดงให้เห็นว่าเซลล์ CD8 T ที่กำหนดเป้าหมายเป็นโปรตีน polyomavirus BK VP1 และ LTAG ซึ่งมาจากไวรัสที่มี tropism ที่แข็งแกร่งสำหรับเซลล์เยื่อบุผิวของไตนั้นสามารถตรวจพบได้ในไต allograft ทีเซลล์ที่จำเพาะต่อไวรัสเหล่านี้แสดง CD69 และ CD103 ในจำนวนที่สูงกว่าจำนวนที่เท่ากันที่พบในการหมุนเวียนของผู้ป่วยรายเดียวกัน นอกจากนี้, โดยทั่วไปทีเซลล์เหล่านี้แสดงออก CD45RA-CD27-ฟีโนไทป์เชิงลบของกราไซม์บี[5] ต่อมา คนอื่น ๆ ยังได้รายงานเกี่ยวกับประชากร TRM ในเนื้อเยื่อไตของมนุษย์ที่ได้จากการปลูกถ่ายไต ในเอกสารเผยแพร่นี้ ผู้เขียนรายงานว่าทีเซลล์ในเนื้อเยื่อเหล่านี้เกี่ยวข้องกับเซลล์ CD8 T เป็นหลัก [321 เรากลับพบว่าที่จริงแล้ว CD4 T เซลล์ประกอบด้วยชุดย่อยของ T เซลล์ที่ใหญ่ที่สุด อย่างไรก็ตาม เรายังพบว่าความสมดุลเปลี่ยนไปแม้ว่าจะไม่มีนัยสำคัญ ต่อจำนวนเซลล์ CD8 T ในเนื้อเยื่อ allograft ที่มากขึ้น เมื่อเทียบกับเนื้อเยื่อไตที่มีสุขภาพดี ด้วยเหตุนี้ ความคลาดเคลื่อนนี้อาจอธิบายได้โดยกลุ่มการศึกษาที่แตกต่างกัน และอาจเป็นไปได้ว่าในด้านสุขภาพ การป้องกันทางภูมิคุ้มกันจะเน้นไปที่การคุกคามนอกเซลล์มากกว่า เช่น แบคทีเรีย เทียบกับการคุกคามภายในเซลล์ เช่น ไวรัสและมะเร็งในโฮสต์ที่มีภูมิคุ้มกันบกพร่อง เราไม่พบความแตกต่างอื่นๆ ในเครื่องหมายที่ศึกษาระหว่างไตที่แข็งแรงและทีเซลล์ allograft อย่างไรก็ตาม ควรมีการวิจัยเพิ่มเติมโดยใช้เทคนิคที่มีมุมมองที่กว้างขึ้นเกี่ยวกับทรานสคริปโทม เช่น การหาลำดับอาร์เอ็นเอ หรือโปรตีโอม เช่น แมสสเปกโตรเมทรี เพื่อตรวจสอบว่าเป็นกรณีนี้จริงหรือไม่
นอกจากนี้ เดอ เลอร์ และคณะ อธิบายว่า TRM ในไตมักแสดงแกรนไซม์บีอย่างไร ในขณะที่เราตรวจพบแกรนไซม์บีในปริมาณต่ำในเนื้อเยื่อไตที่มีสุขภาพดีและเนื้อเยื่อไต [32] อย่างไรก็ตาม เราตรวจพบ T-bet และเซลล์ T ที่แสดงออกถึง Eomes ในเนื้อเยื่อไต ซึ่งปกติแล้วในการหมุนเวียนประชากร T เซลล์นั้นมักเกี่ยวข้องกับการแสดงออกของแกรนไซม์ B [10] ที่สูงขึ้น ในขณะที่สิ่งหลังอาจไม่น่าแปลกใจ เนื่องจากความจริงที่ว่าการแสดงออกของแกรนไซม์บีนั้นถูกกระตุ้นโดยตรงจาก T-bet [33,34] ความสัมพันธ์นี้ไม่ชัดเจนในกลุ่มทีเซลล์ไตในการศึกษาปัจจุบัน ดังที่เราและคนอื่นๆ ได้แสดงให้เห็นว่า TRM ที่มาจากปอด สมอง และผิวหนังของมนุษย์ [25,26,3536] เช่นเดียวกับ MAIT ælls ที่อยู่ในเนื้อเยื่อจากไต 【6,7】มีแกรนไซม์ B ต่ำ เนื้อหา ในขณะที่มักจะแสดง T-bet และ Eomes เป็นจำนวนมาก แต่นี่อาจเป็นลักษณะทั่วไปของ (มนุษย์) TkM นอกจากนี้ การแสดงออกของกรานไซม์ B ของ TRM ในปอดถูกควบคุมอย่างรวดเร็วเมื่อถูกกระตุ้น [35l ซึ่งบ่งชี้ว่าสิ่งนี้อาจเกิดขึ้นใน TeM อื่นเช่นกัน ในที่นี้ ผู้เขียนตั้งสมมติฐานว่า 'ความเป็นพิษต่อเซลล์ที่ซ่อนอยู่นั้นทำหน้าที่ปกป้องความสมบูรณ์ของโครงสร้างของเนื้อเยื่อจากความเสียหายจากเซลล์ T ที่เป็นพิษต่อเซลล์
โดยสรุป เราแสดงให้เห็นว่า T cll ในเนื้อเยื่อไตมีอยู่เป็นจำนวนมากและประกอบรวมด้วยประชากรที่มักแสดงออก CD69 plus และ CD103 plus โมเลกุลโดยที่ T เซลล์ยึดเกาะและคงอยู่ในเนื้อเยื่อ อย่างไรก็ตาม ทีเซลล์ CD69-CD103- ในเนื้อเยื่อไตดูเหมือนจะแตกต่างจากการหมุนเวียนทีเซลล์ และอาจเกี่ยวข้องกับประชากร TiM ที่แตกต่างกันอีกกลุ่มหนึ่ง ซึ่งอาจยังคงอยู่ในไตโดยกลไกอื่นๆ ที่จะเปิดเผย อีกทางเลือกหนึ่งอาจเป็นได้ว่าเซลล์ CD69-CD103-T เหล่านี้เกี่ยวข้องกับประชากรที่เฮย์เพิ่งออกจากการไหลเวียน และเฮย์ได้รับลักษณะฟีโนไทป์ใหม่เพียงชั่วคราวเนื่องจากปฏิสัมพันธ์กับสภาพแวดล้อมจุลภาคของไต จำเป็นต้องมีการสอบสวนเพิ่มเติมเกี่ยวกับประชากรกลุ่มนี้เพื่อชี้แจงความเป็นไปได้เหล่านี้ นอกจากนี้. ทีเซลล์ไต CD8 และ CD4 มักจะหมุนเวียนอย่างแข็งขันและแสดงออก CXCR6 บ่อยกว่า นอกจากนี้ ประชากร CD8 และ CD4 แทนที่การแสดงออกของ CXCR3 ที่สูงเป็นพิเศษ ซึ่งส่งผลกระทบอย่างมากต่อตัวรับคีโมไคน์เหล่านี้ เช่นเดียวกับ CXCR6 ในการคงค้างของ TRM และความคงอยู่ของไตของมนุษย์ ดังนั้นจึงจำเป็นต้องมีการตรวจสอบเพิ่มเติมเพื่อเพิ่มภาพลักษณ์ของประชากร Tpv ในไตของมนุษย์ อย่างไรก็ตาม การค้นพบที่นำเสนอนี้เป็นก้าวแรกที่มั่นคงในการกำหนดลักษณะเฉพาะของประชากรทีเซลล์ในเนื้อเยื่อไตอย่างละเอียดยิ่งขึ้น และบทบาทของพวกเขาในด้านสุขภาพและโรค
