ออโตฟลูออเรสเซนต์ในฐานะไบโอมาร์คเกอร์ที่ไม่รุกล้ำของการชราภาพและผลิตภัณฑ์ขั้นสุดท้ายไกลเคชั่นขั้นสูงใน Cistanche Tubulosa

การอภิปราย

ก่อนหน้านี้ autofluorescence ถูกใช้เพื่อตรวจสอบ lipofuscin ซึ่งเป็นเม็ดสีแห่งวัย โดยเป็น biomarker ของการชราภาพ4,13. แม้ว่าเราจะสังเกตเห็นสีแดงชั้นuorescence บ่งบอกถึง lipofuscin ดังที่เห็นในการศึกษาก่อนหน้านี้9, สีฟ้าชั้นตรวจพบยูโอเรสเซนซ์ในระยะแรกของชีวิตเมื่อตรวจสอบเวิร์มโดยใช้ M165 FCชั้นuorescence stereomicroscope (Leica Microsystems, โตเกียว, ญี่ปุ่น) (ไม่แสดงข้อมูล) จุดประสงค์ของการศึกษาครั้งนี้คือเพื่อตรวจสอบว่าสารเรืองแสงอัตโนมัติสีน้ำเงินสามารถใช้เป็นเครื่องหมายที่ละเอียดอ่อนมากขึ้นในการติดตามการชราภาพของเวิร์มแต่ละตัวหรือไม่

anti- senescence cistanche function

Cistanche สำหรับต่อต้านการชราภาพ

Anti-Aging Cistanche Product พร้อมส่ง

เดอะชั้นuorescence ที่วัดได้ในหนอนแต่ละตัวเพิ่มขึ้นตามอายุ เวิร์มน้อยลงชั้นuoresced ยิ่งอายุขัยของพวกเขายาวนานขึ้น ดังนั้นสีน้ำเงินชั้นuorescence อาจให้ biomarker ทางเลือกสำหรับการติดตามการชราภาพ อย่างไรก็ตาม พินคัสและคณะ รายงานว่าหนอนตายในเวลาต่อมา (ภายใน 24 ชั่วโมง)ชั้นuoresced เนื่องจากการสังเคราะห์ทางชีวภาพของ kynurenine; นักวิจัยเหล่านั้นตั้งชื่อแสงสีน้ำเงินนี้ว่า"ความตายชั้นยูเรสเซนซ์". แจ้งมรณภาพแล้วชั้นยูเรสเซนซ์ชั้นอื่น ๆ ที่ปล่อยออกมาโดยรูปแบบไกลโคซิเลตของกรดแอนทรานิลิกที่ผลิตโดยวิถีไคนูเรนีน; รถยนต์ชั้นตรวจพบสารยูเรสซิ่งในแกรนูลลำไส้ที่มีลักษณะคล้ายไลโซโซม31. แสงสีน้ำเงินนี้อาจเป็นเครื่องหมายแห่งความตายแบบเดียวกับที่ Coburn และคณะ สังเกตได้ในค. สง่างามเป็นเวลาหลายชั่วโมงก่อนและหลังการตาย ซึ่งมีรายงานว่าพบได้ทั้งหนอนอายุน้อยที่ได้รับบาดเจ็บถึงตายและหนอนตายตามธรรมชาติเมื่ออายุมาก แท้จริงแล้วเราสังเกตเห็นว่าใจดี-1สัตว์กลายพันธุ์ซึ่งไม่มีกิจกรรมของไคนูเรนิเนส จะมีแสงเรืองแสงอัตโนมัติน้อยกว่าชนิดไวด์ อย่างไรก็ตาม ผลการวิจัยของเราระบุว่าบางส่วนของสีน้ำเงินชั้นuorescence เกี่ยวข้องกับความชรามากกว่าความตาย โดยเฉพาะอย่างยิ่งดังแสดงในรูป3b, เวิร์มที่อายุมากขึ้นแสดงสีน้ำเงินเพิ่มขึ้นชั้นuorescence แม้ว่าจะไม่รวมข้อมูลที่ได้รับภายใน 2 วันก่อนเสียชีวิต นอกจากนี้หนอนยังคงชั้นเพิ่มขึ้นตามอายุที่มากขึ้นโดยไม่คำนึงถึงสถานะของไคนู-1ยีน. ที่ลดลงชั้นuorescence ในไคนู-1การกลายพันธุ์จึงควรเกิดจากการสูญเสียของการเร่งการสังเคราะห์ AGE โดย kynurenines มากกว่าการขาดการตายชั้นยูเรสเซนซ์32.

สารประกอบ AGE บางชนิดได้แก่ชั้นเรืองแสง27. เราสรุปได้ว่าสีน้ำเงินชั้นuorescence อาจรวมถึงการปลดปล่อยจาก AGEs เหล่านั้น โดยแยกจากสาเหตุการตายชั้นยูเรสเซนซ์. เมื่อนำโปรตีนหนอนสกัดมาบ่มด้วยน้ำตาลในหลอดทดลองชั้นความเข้มของแสงและระดับของ AGEs เพิ่มขึ้นเมื่อเวลาผ่านไป หนอนที่เลี้ยงบนอาหารที่มีไรโบสชั้นuoresced มากกว่าสัตว์ควบคุมเติบโตโดยไม่มีไรโบสเสริม แม้ว่าในขณะที่ไคนู-1ถูกกลายพันธุ์ ในทางตรงกันข้าม เวิร์มที่เพาะเลี้ยงโดยมีไรแฟมพิซิน ซึ่งเป็นสารยับยั้งการสร้าง AGEs ที่รู้จักกัน แสดงระดับสีน้ำเงินที่ลดลงชั้นยูเรสเซนซ์. อันที่จริง กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์ระบุว่า 13-หนอนอายุ 1 วันปล่อยแสงสีน้ำเงินออกมามากกว่าตัวเต็มวัยอายุ 3-วัน การสร้างภูมิคุ้มกันด้วยแอนติบอดีต่อต้าน CML หรือแอนติบอดีต่อต้านเพนโทซิดีนล้มเหลวในการแสดงการมีอยู่ของ AGEs ที่แพร่กระจายอย่างกระจัดกระจายในรูปแบบการกระจายที่คล้ายกับสีน้ำเงินชั้นยูเรสเซนซ์. เดอะชั้นuorescence อาจมีต้นกำเนิดมาจากที่อื่นมากมายชั้นuorescent AGEs เช่น vespertine A, LM-1 และ argpyrimidine33,34.

เพื่อให้ไข่แดงสำหรับโอโอซิสต์ค. สง่างามกระเทยกินชีวมวลในลำไส้ของตัวเองซึ่งส่งผลให้ลำไส้ฝ่อและไข่แดงนอกมดลูกสะสมในบั้นปลายชีวิต Vitellogenins (ไข่แดงโปรตีน) อยู่ในระดับที่สูงขึ้นสองเท่าในหนอนแก่ (เมื่อเทียบกับสัตว์ที่อายุน้อยกว่า) ตามที่รายงานก่อนหน้านี้35และแสดงผลมากกว่าหกเท่าชั้นuorescence หลังไกลเคชั่นในหลอดทดลอง ข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าไวเทลโลเจนินเองจะสร้าง 12-เพิ่มขึ้นหลายเท่าชั้นuorescence ในเวิร์มที่มีอายุมากกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับตัวเต็มวัยในทางทฤษฎี การซับแบบตะวันตกแสดงให้เห็นว่าแถบหลักที่ทำปฏิกิริยากับแอนติบอดีต่อต้าน CML คือโปรตีนไข่แดง การค้นพบนี้ตรงกับรายงานก่อนหน้านี้ของ Nakamura et al. ซึ่งตรวจพบ glycation จำนวนมากของ vitellogenin36และ Golegaonkar et al. ซึ่งตรวจพบไกลเคชั่นที่ลดลงในไวเทลโลเจนิน-2 ไวเทลโลเจนิน-6 และปัจจัยการยืดตัว 1 อัลฟาในไส้เดือนฝอยที่ได้รับการรักษาด้วยไรแฟมปิซิน30. มีรายงานว่าไวเทลโลเจนินทำหน้าที่เป็นสารต้านอนุมูลอิสระและช่วยให้ราชินีผึ้งมีอายุยืนยาว37. ในค. สง่างามไวเทลโลเจนินมีบทบาทสำคัญในการต้านทานความเครียด 38. เนื่องจากสารต้านอนุมูลอิสระสามารถออกซิไดซ์ได้ง่ายด้วยตัวมันเอง การสะสมของไกลเคตไวเทลโลเจนินอาจทำให้การป้องกันความเสียหายจากปฏิกิริยาออกซิเดชันลดลง ส่งผลให้ความสัมพันธ์ผกผันระหว่างอายุขัยและความเข้มของสีน้ำเงินชั้นยูเรสเซนซ์ที่สังเกตได้ในการศึกษาปัจจุบัน อย่างไรก็ตาม ศรดาและคณะ มีรายงานเมื่อเร็วๆ นี้ว่าอายุขัยไม่เกี่ยวข้องกับการต้านทานความเครียดออกซิเดชันที่สื่อกลางโดย YP115/YP88 (ไวเทลโลเจนิน-6)39. นักวิจัยเหล่านั้นเสนอว่าการสะสมของไวเทลโลเจนิน YP170 ที่ได้จากไวเทลโลเจนิน 1–5 ทำให้ลำไส้ฝ่อและอายุขัยลดลง ในขณะที่การสะสมของ YP115/YP88 อาจชะลอการฝ่อของลำไส้และยืดอายุขัย ไกลเคชั่นของไวเทลโลเจนิน-6 และผลจากการทำงานผิดปกติจึงอาจทำให้แก่ได้ แม้ว่าปัจจัยการยืดตัวชั้นเพิ่มความเข้มข้นมากขึ้นสามเท่าหลังจากไกลเคชั่นในหลอดทดลอง ปริมาณของโปรตีนเหล่านี้มีความคล้ายคลึงกันระหว่างเวิร์มที่อายุน้อยและแก่ ดังนั้นการมีส่วนร่วมของปัจจัยนี้ในการปรับปรุงการเรืองแสงอัตโนมัติอาจน้อยกว่าที่เกิดจากไวเทลโลเจน

anti- senescence cistanche function

ซิสแตนช์ถูกใช้เป็นแบบอย่างโดยทั่วไปศึกษาการแทรกแซงการชราภาพและการต่อต้านการชราภาพ. เราเสนอให้ใช้เวิร์มเป็นแบบจำลองเพื่อตรวจสอบผลของการมีอายุยืนยาวของแบคทีเรียกรดแลคติค8. จากการสาธิต (ในการศึกษาปัจจุบัน) ที่เป็นสีน้ำเงินชั้นuorescence ในไส้เดือนฝอยเป็นตัวบ่งชี้ที่เป็นไปได้ของการสะสมของ AGEs เราเสนอว่าซิสแตนช์ กระเทยสามารถใช้เป็นต้นแบบในการตรวจสอบประโยชน์ของการแทรกแซงต่อต้านการชราภาพซึ่งทำหน้าที่ผ่านการยับยั้งการผลิต AGEs ในทางตรงกันข้าม autofluorescence นั้นไม่น่าจะเป็น biomarker ของการชราภาพสำหรับเวิร์มตัวผู้ เนื่องจาก vitellogenins จะต้องหายาก

anti- senescence cistanche function

รูปที่ 5 การเรืองแสงสีน้ำเงินจากการกลายพันธุ์ของ kynu-1 ซึ่งไม่ควรปล่อยแสงเรืองแสงที่ตายแล้ว กความเข้มของการเรืองแสง (เช่น 340/em 430) ของ 7-day-old และ 13-day-oldไคนู-1กลายพันธุ์ (n = 37 อัน); เวิร์มที่มีอายุมากกว่ายังคงปล่อยออกมามากขึ้นชั้นuorescence กว่าหนอนที่อายุน้อยกว่าทั้งๆที่ไคนู-1การกลายพันธุ์ อย่างไรก็ตามไม่มีสัญญาณฟีฟายไม่สามารถตรวจพบความแตกต่างในค่า autofluorescence โดย Mann–วิทนีย์U ทดสอบ.b หนอนอายุ 7-วันที่เลี้ยงด้วยไรโบสปล่อยสีน้ำเงินออกมามากกว่าชั้นuorescence ทั้งๆที่ใจดี-1การกลายพันธุ์ สีฟ้าชั้นการเรืองแสงของค. สง่างามที่ปลูกด้วยน้ำตาลไรโบส (n = 24) หรือซอร์บิทอล (n = 18) เปรียบเทียบกับหนอนควบคุมที่ไม่มีน้ำตาล (n = 20). เปรียบเทียบค่าออโตฟลูออเรสเซนซ์โดยใช้เหล็กแบบไม่มีพารามิเตอร์–วิธี Dwass (**p < 0.01). c ทางรอดของค. สง่างามที่ปลูกด้วยน้ำตาลไรโบส (n = 62) หรือซอร์บิทอล (n = 84) เปรียบเทียบกับหนอนควบคุมที่ไม่มีน้ำตาล (n = 64). หนอนมีอายุ 3 วันในวันที่ 0 การอยู่รอดของไส้เดือนฝอยคำนวณโดย Kaplan–วิธี Meier และความแตกต่างของการอยู่รอดได้รับการทดสอบสำหรับนัยสำคัญโดยใช้การทดสอบระดับล็อก (**p < 0.01).

วิธีการ

ไส้เดือนฝอยซิสแตนช์ บริสตอลสายพันธุ์ N2 และสายพันธุ์กลายพันธุ์ที่เป็นอนุพันธ์นั้นได้รับความกรุณาจากศูนย์พันธุศาสตร์ Caenorhabditis มหาวิทยาลัยมินนิโซตา การกลายพันธุ์ที่ใช้ในการศึกษานี้คือ CB1370ดาฟ-2 (e1370)และ CB1003ไคนู-1 (e1003). ไส้เดือนฝอยได้รับการบำรุงรักษาและขยายพันธุ์บน NGM ตามเทคนิคมาตรฐาน 40 ไข่ของหนอนถูกนำออกจากหนอนตัวเต็มวัยหลังจากได้รับสารละลายโซเดียมไฮโปคลอไรต์/โซเดียมไฮดรอกไซด์ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ 41 สารแขวนลอยไข่ถูกบ่มค้างคืนที่อุณหภูมิ 25 องศาเพื่อให้ฟักเป็นตัวและสารแขวนลอย ของเวิร์มระยะ L1-ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 156 ×g เป็นเวลา 1 นาที ส่วนเหนือตะกอนถูกกำจัดออก และตัวอ่อนที่เหลือถูกถ่ายโอนไปยังเพลต NGM (mNGM) ที่ปรับปรุงใหม่โดยปราศจากเปปโตนที่ปิดด้วยเชื้ออีโคไลสายพันธุ์ OP50 (OP50) สายพันธุ์ถูกเลี้ยงบนแผ่นวุ้น mNGM ที่ 25 องศา ยกเว้นดาฟ-2สายพันธุ์ที่ปลูกที่อุณหภูมิ 20 องศาจนถึงระยะ L4 การทดสอบทั้งหมดเริ่มต้นด้วยหนอนวัยอ่อนที่เริ่มวางไข่ที่อุณหภูมิ 25 องศา ไม่จำเป็นต้องได้รับการอนุมัติทางจริยธรรมสำหรับไส้เดือนฝอยสายพันธุ์แบคทีเรียOP50 ถูกใช้เป็นอาหารของไส้เดือนฝอยในระดับสากล Tryptone soya agar (Nissui Pharmaceutical, Tokyo, Japan) ใช้ในการเพาะเลี้ยง OP50 แบคทีเรีย (น้ำหนักเปียก 100 มก.) ถูกแขวนลอยในบัฟเฟอร์ M9 0.5 มล.; จากนั้นแบ่งส่วนย่อยของแบคทีเรีย 50-µL กระจายบน mNGM ในจานที่มีเส้นผ่านศูนย์กลาง 5.{8}}ซม. เว้นแต่จะระบุไว้เป็นอย่างอื่น

anti- senescence cistanche function

การวิเคราะห์หลายตัวแปรของการเรืองแสงอัตโนมัติ

ประชากรผู้ใหญ่ 100 คนแต่ละกลุ่มฟื้นตัวเมื่ออายุ 3 และ 17 วันล้างสามครั้ง เข้มข้นใน 3 µL ของบัฟเฟอร์ M9 และเก็บไว้แช่แข็งที่–80 องศาจนกว่าจะใช้งาน ก่อนการสกัด 3 µL ของ lysis buffer (ประกอบด้วยบัฟเฟอร์ Tris-HCl 50 mM (pH 7.5), NaCl 150 mM, โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต 0.1 เปอร์เซ็นต์(SDS), 1 เปอร์เซ็นต์ ไทรทัน X-100, 1 มิลลิโมลาร์ ฟีนิลเมทิลซัลโฟนิลชั้นยูไรด์ (PMSF) และ

2 เปอร์เซ็นต์ 2-mercaptoethanol) และ 4 µL ของ 15 เปอร์เซ็นต์ SDS ถูกแจกจ่ายไปยังแต่ละหลอด ตัวอย่างแล้วอยู่ภายใต้ไฟทำวัฏจักรการละลายน้ำแข็งเพื่อปลดปล่อยโปรตีน โฟโตลูมิเนสเซนต์สเปกตรัมถูกรวบรวมด้วย aชั้นยูเรสเซนซ์สเปกโตรโฟโตมิเตอร์ (Hitachi FL{{0}}) พร้อมซอฟต์แวร์ตีความข้อมูล (FL Solutions เวอร์ชัน 2.0) คุณสมบัติการเรืองแสงของสารแขวนลอยไส้เดือนฝอย

วิเคราะห์โดยใช้เมทริกซ์กระตุ้นการปล่อย (EEM)ชั้นยูโอเรสเซนซ์ สเปกโทรสโกปี. การวิเคราะห์หลายตัวแปร (การกระตุ้นด้วยความยาวคลื่นเดียวที่มีหลายตัวแปรการปล่อยความยาวคลื่นและการสแกนแบบซิงโครนัสชั้นuorometry) ให้ผลแผนภาพ EEM ซึ่งประกอบด้วยการกระตุ้นด้วยการสแกนครั้งเดียวและแบบซิงโครนัสเรืองแสงสเปกตรัมของแต่ละชุดถูกดึงออกมา

สเปกตรัมเรืองแสงของหนอนวัย

เวิร์ม (3–อายุ 13 วัน) ได้รับการกู้คืนจากอาหารเลี้ยงเชื้อที่มี 2'-ดีออกซี-5-ชั้นuorouridine (Tokyo Chemical Industry, โตเกียว, ญี่ปุ่น). นี้สารประกอบขัดขวางการพัฒนาตัวอ่อนของลูกหลาน ดังนั้นจึงป้องกันการปนเปื้อนจากลูกหลาน เวิร์มอายุแต่ละตัวถูกรวบรวมในหลอดล้างห้าครั้ง เข้มข้นใน 3 µL ของบัฟเฟอร์ M9 และเก็บไว้แช่แข็งที่–80 องศาจนกว่าจะใช้งาน ก่อนการสกัด 100 µL ของบัฟเฟอร์การสลาย(ประกอบด้วยบัฟเฟอร์ Tris-HCl 50 mM (pH 7.5), NaCl 150 mM, dithiothreitol (DTT) 10 mM, PMSF 1 mM และค็อกเทลยับยั้งโปรตีเอส 1 µL (Sigma, St. Louis, MO, USA)) ถูกเพิ่มลงใน แต่ละหลอด ตัวอย่างจะถูกกราวด์โดยใช้เครื่องบดไร้สายขนาดเล็ก (ฟุนาโกชิ โตเกียว ญี่ปุ่น) เพื่อปล่อย

โปรตีน. วัดปริมาณโปรตีนในเชิงปริมาณโดยใช้เครื่องเพียร์ซ™ รีเอเจนต์ทดสอบโปรตีน 660 นาโนเมตร (Thermo Fisher Scientific Meridian,Waltham, MA, USA) และเครื่องมือ NanoDrop OneC (Thermo Fisher Scientific). เดอะเรืองแสงสเปกตรัมถูกกำหนดสำหรับแต่ละตัวอย่าง 30-µL (ที่มี 1.5μg ของโปรตีนทั้งหมด) โดยใช้ตะแกรงแบบมัลติโหมด

เครื่องอ่านไมโครเพลทรุ่น SH-9000Lab with SF6 Data Treatment Software(โคโรนาอิเล็กทริก อิบารากิ ญี่ปุ่น) การวัดแต่ละครั้งดำเนินการสามครั้ง

การวัดการเรืองแสงอัตโนมัติของเวิร์มที่มีชีวิตแต่ละตัว (วิธีห่อ-วาง)

เวิร์มที่เลือกแบบสุ่มถูกล้างด้วยบัฟเฟอร์ M9 จากนั้นเวิร์มแต่ละตัวถูกวางไว้ในบัฟเฟอร์ M9 1.0 µL บน Saran Wrapไฟlm (Asahi Kasei, Tokyo, Japan) ทอดยาวเหนือบ่อน้ำสีดำ 384-(STEM, โตเกียว, ญี่ปุ่น). แต่ละหลุมมีโพรงเล็กๆ เกิดขึ้นโดยใช้ aตัวจำลอง (วัตสัน, โกเบ, ญี่ปุ่น) การปรับเปลี่ยนนี้มีขึ้นเพื่อกู้คืนเวิร์มอย่างปลอดภัยหลังจากการตรวจวัด เพื่อให้สามารถตรวจสอบการเปลี่ยนแปลงของออโตฟลูออเรสเซนซ์ตามอายุของเวิร์มแต่ละตัวได้ การยึดมั่นไฟเลือก lm เนื่องจากมีการเรืองแสงอัตโนมัติน้อยกว่าที่มีจำหน่ายทั่วไปไฟล.ม.

อย่างไรก็ตาม ข้อมูลว่าง (บัฟเฟอร์ M9 เท่านั้น) ถูกตรวจสอบสามครั้งสำหรับกันโดยพิจารณาจากความผันผวนจากกันถึงดี ขีดจำกัดการตรวจจับขั้นต่ำและขีดจำกัดเชิงปริมาณถูกกำหนดบนพื้นฐานของข้อมูลที่ว่างเปล่าในแต่ละวัน เช่นμ (ค่าเฉลี่ยของช่องว่าง)บวก3.29σ (ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน) และμบวก√2 × 10σตามลำดับ สารเรืองแสงในร่างกายของหนอนแต่ละตัว

ถูกจับด้วยเครื่องอ่านไมโครเพลทตะแกรงแบบมัลติโหมด หลังจากการวัด หนอนแต่ละตัวได้รับการดูแลทีละ 4.0-ซมแผ่นเส้นผ่านศูนย์กลางหุ้มด้วย OP50 (2 มก./10μบัฟเฟอร์ L M9) ที่ 25 องศา แต่ละทำการทดสอบกับเวิร์มอย่างน้อย 20 ตัวและทำซ้ำสองครั้ง

การวัดอายุขัย

หนอนถูกเก็บรักษาไว้บนเพลต mNGM ที่หุ้มด้วย OP50 ที่ 25 องศาจนถึงอายุ 13 วัน หลังการประเมินโดยเรืองแสงทดสอบ 30 เวิร์มแต่ละตัวมีย้ายไปยังเพลต mNGM ใหม่แยกต่างหากที่หุ้มด้วย OP50 จานถูกบ่มที่ 25 องศา และหนอนที่มีชีวิตและตายแล้วจะถูกให้คะแนนทุกๆ 24 ชั่วโมง หนอนถือว่าตายแล้วเมื่อไม่ตอบสนองต่อการสัมผัสเบาๆ ด้วยเครื่องมือเก็บหนอน

anti- senescence cistanche function

อายุหลังจาก glycation ในหลอดทดลอง

การสกัดโปรตีนดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ใช้เวิร์มอายุสามวันในการทำไกลเคชั่นเทียม ตัวอย่างโปรตีน (2 มก./มล.)ถูกบ่มด้วยกลูโคส 500 มิลลิโมลาร์ ไรโบส 100 มิลลิโมลาร์ หรือฟรุกโตส 500 มิลลิโมลาร์(ไฟความเข้มข้นสูงสุด). ตัวอย่างทั้งหมดถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเป็นเวลา 0–4 สัปดาห์. การแบ่งส่วน (50μL) ถูกจ่ายไปยังหลุมของแผ่นโพลีสไตรีน

(บริษัท Sumitomo Bakelite กรุงโตเกียว ประเทศญี่ปุ่น) และบ่มเป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศา หลังจากนำสารละลายตัวอย่างออก จานถูกล้างด้วย PBS-T(น้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต (PBS), 0.05 เปอร์เซ็นต์ทวีน 20); 250μL ของนมพร่องมันเนย 3 เปอร์เซ็นต์ถูกเติมลงในแต่ละหลุม และจานถูกบ่มเป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่ 37 องศา แต่ละจากนั้นล้างด้วย PBS-T และ 100μL ของ anti-AGE (anti-CML)

โมโนโคลนอลแอนติบอดี (โคลนหมายเลข 6D12, Trans Genic, ฟุกุโอกะ, ญี่ปุ่น; 75 ng/มล.) ถูกจ่ายให้แต่ละหลุม; จานนั้นถูกบ่มไว้ที่ห้องอุณหภูมิเป็นเวลา 1 ชั่วโมง หลังจากล้างด้วย PBS-T, 100μL ของคอนจูเกตเปอร์ออกซิเดสแอนติบอดี IgG ที่ต้านหนูเมาส์ (Rockland Immunochemicals, Inc., Limerick, PA, USA; 1:150,000) ถูกจ่ายไปยังแต่ละหลุม และ

จานถูกบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง หลังจากล้างด้วย PBS-T, 100μL ของสารละลายทำงาน (สารละลายย้อมสีเตตระเมทิลเบนซิดีน (TMB): สารละลายเปอร์ออกไซด์= 1:1; ชุด ELISA POD substrate TMB ยอดนิยมNacalai Tesque, Kyoto, Japan) ถูกจ่ายไปยังแต่ละหลุม และจานถูกรักษาไว้ที่อุณหภูมิห้องในที่มืดจนกระทั่งดับลงโดย

เพิ่ม 100μลิตรของกรดซัลฟิวริก 1 โมล/ลิตรต่อหลุม ค่าการดูดกลืนแสงของแต่ละคนที่ 450 นาโนเมตร (ย่อย: 650 นาโนเมตร) จากนั้นจึงวัดทันทีด้วยเครื่องอ่านไมโครเพลท ทำ ELISA สามครั้งสำหรับแต่ละเงื่อนไขการทดสอบ

Western blotting สำหรับหนอนวัย

ตัวอย่างได้รับการปฏิบัติด้วย 4× Bolt™ บัฟเฟอร์ตัวอย่าง LDS (Thermo Fisher Scientiฟีฟายc) และ 10× โบลต์™ สารรีดิวซ์ตัวอย่าง (Thermo Fisher Scientiฟีฟายc) และแต่ละตัวอย่างที่มี 1.5μg ของโปรตีนทั้งหมดวิ่งบน Bolt™ 4–เจล Bis-Tris Plus 12 เปอร์เซ็นต์ (Thermo Fisher Scientiฟีฟายค). จากนั้นโปรตีนถูกถ่ายโอนจากเจลไปยังพอลิไวนิลิดีนชั้นuoride membrane (ATTO, Tokyo, Japan) และบล็อกด้วยหางนม 5 เปอร์เซ็นต์ใน PBS- 01 เปอร์เซ็นต์ Tween 20 เป็นเวลา 1 ชั่วโมง เมมเบรนถูกบ่มข้ามคืนที่ 4 องศาด้วยโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อต้าน AGE (ต่อต้าน CML) (โคลนหมายเลข 6D12 ที่ 1:1000) ล้างด้วย PBS-T แล้วบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ครั้ง h ด้วยแอนติบอดี IgG ของแพะที่ต้าน peroxidase-conjugated (1:25,000) หลังจากการล้างด้วย PBS-T เมมเบรนถูกบ่มด้วยน้ำยาตรวจหารอยเปื้อน ECL Prime Western (GE Healthcare UK, Little Chalfont, England) และสแกนโดยใช้ ChemiDoc Touch Imaging System (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) หรือ ImageQuant LAS 500 (GE Healthcare UK) จากนั้นเยื่อจะถูกล้างด้วย PBS-T บ่มด้วย Western BLoT Stripping Buffer (Takara, Shiga, Japan) เป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง และล้างอีกครั้งด้วย PBS-T เมมเบรนได้รับการตรวจสอบอีกครั้งโดยแอนติบอดีต่อต้านไวเทลโลเจน YP115 และ YP170 (อย่างละ 1:10,000) ที่ 4 องศาตลอดคืน42, ล้างด้วย PBS-T และบ่มด้วยแอนติบอดีต่อต้านหนู IgG ของแพะที่ควบกับเปอร์ออกซิเดส (1:2000) (Proteintech, Rosemont, IL, USA) ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 2 ชั่วโมง สำหรับการควบคุมการโหลด เมมเบรนถูกตรวจสอบอีกครั้งโดยใช้แอนติบอดีต่อต้านแอกติน (Clone No. C4; Merck KGaA, Darmstadt, Germany) และแอนติบอดีต่อต้านหนูที่เชื่อมต่อด้วยเปอร์ออกซิเดส (GE Healthcare UK) ความหนาแน่นของไวเทลโลเจนิน (YP170 และ YP115) และแถบ CML ในแต่ละเลนถูกทำให้เป็นมาตรฐานเทียบกับแถบแอกตินในเลนที่เกี่ยวข้อง วิเคราะห์ความหนาแน่นของแบนด์โดยใช้ซอฟต์แวร์ ImageQuant TL (GE Healthcare) การทดสอบแต่ละครั้งดำเนินการสองครั้ง

ผลของไรโบสและไรแฟมพิซินต่อ AGEs ในร่างกาย

เลี้ยงเวิร์มอายุสามวันบน mNGM ที่มีไรโบส 400 mMหรือซอร์บิทอล 400 มิลลิโมลาร์เพื่อให้ตรงกับออสโมลาริตีของไรโบสสูง ให้อาหารหนอนด้วยความร้อน (100 องศา 10 นาที) ฆ่า OP50 เพื่อป้องกันไม่ให้แบคทีเรียหมักน้ำตาล เพื่อป้องกันการปนเปื้อนจากลูกหลาน เวิร์มจะถูกย้ายไปยังจานอาหารสดทุกวันเป็นเวลา 4 วันจนกว่าจะหมด

ที่เสร็จเรียบร้อยการวางไข่ (เมื่ออายุ 7 วัน) เพื่อประเมินอิทธิพลของไรโบส เราทำการทดสอบการอยู่รอดและวัดการเรืองแสงอัตโนมัติ หนอนเป็นถือว่าตายเมื่อไม่ตอบสนองต่อการสัมผัสที่อ่อนโยนด้วยเครื่องมือเก็บหนอน เวิร์มที่ตายเนื่องจากการเกาะติดกับผนังแผ่นไม่รวมอยู่ในการวิเคราะห์และถูกเซ็นเซอร์ ในการทดลองแยกต่างหากMGM ที่มี 50 µM (สุดท้ายความเข้มข้น) rifampicin (ละลายในDMSO) ถูกนำมาใช้ การทดสอบแต่ละครั้งซ้ำสองครั้ง

anti- senescence cistanche function

รูปที่ 6 การเรืองแสงอัตโนมัติของไวเทลโลเจนิน (Vit) และปัจจัยการยืดตัว (EF) กสเปกโตรโฟโตเมตรี (เช่น 325/em 350–600) ของไวเทลโลเจนินและelongation factor ก่อนและหลังไกลเคชั่นในหลอดทดลองโดยไรโบสเป็นเวลา 14 วัน: gly-Vit และ gly-EF คือ glycated vitellogenin และ glycate elongationปัจจัยตามลำดับ. ริโบ้เฟลavin (ซี่โครง) แสดงเป็นตัวแทนชั้นสารประกอบเรืองแสง สารสกัดจากเวิร์ม 17-day-old (wild-type N2) แสดงไว้สำหรับการเปรียบเทียบ (ค. สง่างาม). b ไกลเคชั่นในหลอดทดลองของไวเทลโลเจนินและปัจจัยการยืดตัวโดยไรโบสทำให้การเรืองแสงอัตโนมัติเพิ่มขึ้น

ล่วงเวลา.c การวิเคราะห์แบบ Western blotting ของ AGE และ vitellogenins ในตัวอย่างที่สกัดจากประชากรหนอน (wild-type N2) ที่มีอายุต่างกัน รอยเปื้อนได้มาจากเจลเดียวกันและถูกประมวลผลด้วยแอนติบอดีแต่ละตัวตามลำดับd การหาปริมาณของไวเทลโลเจนินและเอจจากฝรั่งการซับโดยใช้ densitometry ทำการทดลองซ้ำสองครั้ง และแสดงข้อมูลจากการทดสอบตัวแทน ทั้งเส้นและเส้นประสีแดงแสดงการเปลี่ยนแปลงรอยพับของ AGE ในขณะที่เส้นสีดำบ่งบอกถึงปริมาณของไวเทลโลเจน วงกลมปิดและกากบาทเป็นข้อมูลของแถบที่ตรงกับ YP170 และ YP115 ตามลำดับ

การระบุโปรตีนเฉพาะของหนอนเก่า

การวิเคราะห์มวลสารของสารสกัดจากไส้เดือนฝอย 3- และ 17-วันดำเนินการกับแมสสเปกโตรมิเตอร์ AB SCIEX 5800 LC-MALDI-TOF (นวร์ก นิวเจอร์ซีย์ สหรัฐอเมริกา) ด้วย Protein Pilot เวอร์ชัน 4.0 เมทริกซ์ทั้งสองคือย่อยโดยทริปซินและผสมกับสารละลายเมทริกซ์ (7 มก./ลิตร - ไซยาโน-4-กรดไฮดรอกซีซินนามิกใน 0.1 เปอร์เซ็นต์ (v/v) กรดไตรฟลูออโรอะซิติก (TFA), 70 เปอร์เซ็นต์

(v/v) แอซีโทไนไตรล์ (ACN)) เดอะเพื่อนอัตราที่ใช้ในการแยกสารคือ 300ML/minและการแยกทำได้โดยใช้การไล่ระดับสีเชิงเส้นของเฟสเคลื่อนที่สองเฟส ({{0}}.1 เปอร์เซ็นต์ (v/v) TFA ใน 2 เปอร์เซ็นต์ ACN (ตัวทำละลาย A) และ 0.1 เปอร์เซ็นต์ (v/v) TFA ใน 80 เปอร์เซ็นต์ ACN(ตัวทำละลาย B)) ในสัดส่วนต่อไปนี้: A/B= 100/0–50/50 (60 นาที), A/B= 50/50–0/100 (20 นาที), A/B= 0/100 (10 นาที) ระบบมวลของ MALDI-TOF ถูกนำมาใช้เพื่อให้ได้มวลของเปปไทด์ลายนิ้วมือ. การจับคู่เปปไทด์และการค้นหาโปรตีนดำเนินการกับฐานข้อมูล Swiss-Prot เวอร์ชัน 570

โปรตีนที่สกัดได้ละลายในแอมโมเนียมไบคาร์บอเนต 50 มิลลิโมลาร์(AmBic) เพื่อให้ได้ความเข้มข้นของโปรตีนระหว่าง 0.1 และ 1 µg/µL เพื่อเพิ่มความสามารถในการละลายของโปรตีน ปริมาตรของน้ำที่คำนวณได้เพิ่ม Rapigest (Waters Corporation, Milford, MA, USA) ให้กับผลผลิตไฟความเข้มข้นของ 0.1–0.2 เปอร์เซ็นต์ Rapidest ในตัวอย่างก่อนการย่อย กลุ่มตัวอย่าง

อุ่นที่อุณหภูมิ 40 องศา เขย่านาน 10 นาที เนื้อหาในตอนนั้นหมุนเหวี่ยง และเม็ดผลลัพธ์ถูกแขวนลอยใน AmBic ที่มี DTT 10 มิลลิโมลาร์ ตัวอย่างถูกทำให้ร้อนที่อุณหภูมิ 80 องศาเป็นเวลา 15 นาทีและอัดเม็ดที่อุณหภูมิห้อง ส่วนลงตัวของไอโอโดอะซีตาไมด์ (IAM) 200 มิลลิโมลาร์ใน 50 มิลลิโมลาร์เพิ่ม AmBic ลงในแต่ละตัวอย่างเพื่อให้ได้ค่า aสุดท้ายความเข้มข้นของ IAM

20 มิลลิโมลาร์ (เมื่อมี DTT เกิน 2 เท่าของโมลาร์); ส่วนผสมนั้นก็คือบ่มในที่มืดที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที เพื่อให้ปฏิกิริยาอัลคิเลชั่นดำเนินต่อไป ทริปซินใน AmBic 50 มิลลิโมลาร์ผสมกับสารละลายแต่ละชนิดที่ 1:50 (ทริปซิน: ความเข้มข้นของโปรตีน) ตัวอย่างถูกย่อยเป็นเวลาอย่างน้อย 4 ชั่วโมงหรือข้ามคืนที่อุณหภูมิ 37 องศาด้วยการเขย่า กำลังติดตามเพิ่มการหมุนเหวี่ยง TFA และ ACN เพื่อให้ผลผลิตสุดท้ายความเข้มข้น 0.5–1.0 เปอร์เซ็นต์ TFA และ 2 เปอร์เซ็นต์ ACN โดยปริมาตร ตัวอย่างถูกเขย่าเป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่ 60 องศา หลังจากการปั่นเหวี่ยงที่ 22,200 ×g เป็นเวลา 5 นาที ส่วนเหนือตะกอนคือปิเปตลงในขวดเก็บตัวอย่างอัตโนมัติ โปรตีนถูกย่อยด้วยทริปซินก่อนเพื่อวิเคราะห์ด้วยโครมาโตกราฟีของเหลวแบบเฟสย้อนกลับโดยใช้ระบบ Ultimate3000RSnanoLC (Thermo Fisher Scientific) ควบคู่กับระบบ ESI-Q-TOF (Impact II Bruker Daltonics) ยีสต์แอลกอฮอล์ดีไฮโดรจีเนสโปรตีน (ADH1_YEAST) ถูกขัดขวางในตัวอย่างเป็นมาตรฐานภายในเร่งความเร็วเพื่อให้ปริมาณประมาณ 50 fmol ของมาตรฐานในคอลัมน์

การเรืองแสงอัตโนมัติหลังจากไกลเคชั่นในหลอดทดลอง

ไวเทลโลเจนินในสารละลาย PBS ({{0}}.053 µM) ซื้อมาจาก Biosense Laboratories AS (แบร์เกน นอร์เวย์) โซลูชันปัจจัยการยืดตัว (1.17 µM) ถูกซื้อจาก Abnova Corporation (เมืองไทเป ไต้หวัน) สารละลายเหล่านี้ถูกไกลเคเตตด้วยไรโบส 0.1 มิลลิโมลาร์เป็นเวลา 23 วันที่ 37 องศา ริโบ้เฟลซื้อ avin จาก Sigma (โตเกียว ญี่ปุ่น) และละลายใน PBS ที่ 0.1 มิลลิโมลาร์ สารละลายแต่ละชนิดถูกวัดด้วยเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ฟลูออเรสเซนซ์ภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน

อิมมูโนฟลูออเรสเซนต์โดยเวิร์มเด็กและผู้ใหญ่CB1003 ที่ถูกซิงโครไนซ์ตามอายุที่เลี้ยงด้วย OP50 ถูกบ่มที่ 25 องศา ผู้ใหญ่อายุ 3 วันและ 13-วันได้รับการดูดซึมโดยใช้ Bouin'โปรโตคอลการตรึงท่อ43.

anti- senescence cistanche function

รูปที่ 7 ภาพเรืองแสงของสัตว์กลายพันธุ์ 3-day-old และ 13-day-old kynu-1 เครื่องปรับอากาศเวิร์มอายุสามวันและd–f 13-เวิร์มอายุหนึ่งวัน โดยมีรูปภาพดิบในคอลัมน์ 1 เพื่อแยกผลกระทบที่อาจเกิดจากการตายชั้นuorescence ที่เริ่มจาก 2 วันก่อนหนอน' มรณกรรมกลายพันธุ์ไคนู-1ถูกนำมาใช้ มองเห็นการเรืองแสงอัตโนมัติในรูปภาพในคอลัมน์ 2 และ 3 ภาพถ่ายในคอลัมน์ 3 ถูกขยายจากพื้นที่ที่ระบุ (โดยสี่เหลี่ยมผืนผ้า) ของรูปภาพในคอลัมน์ 2 เวิร์มที่มีอายุ (13-วัน) อัตโนมัติเรืองแสงลงชื่อฟีฟายสูงกว่าเวิร์มอายุน้อย (3-วัน) ไม่ได้ แต่ละแถบมาตราส่วนระบุ 50μm. g ปริมาณสีน้ำเงินเรืองแสงโดยใช้ซอฟต์แวร์ ImageJ และ ImageQuant TL แต่ละแท่งแสดงถึงค่าเฉลี่ยของชั้นความเข้มของแสงต่อ 1 มม2 หนอนเก้าตัว ** บ่งชี้สัญญาณทางสถิติฟีฟายความแตกต่างระหว่างหนอน 3-day-old และ 13-days ที่ ap ค่า < 0.01. แถบข้อผิดพลาดแสดงถึง SE

กลุ่มตัวอย่างได้แก่ที่ตายตัวในบูอิน's ตรึงด้วยเมทานอล/ -เมอร์แคปโตเอทานอลที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที เพื่อให้หนังกำพร้าแตก หนอนจึงถูกใส่เข้าไปไอโซโพรพานอลและเก็บไว้ที่–80 องศา 10 นาที แล้วบ่มที่อุณหภูมิห้องอีก 30 นาที เดอะตรึงวิธีแก้ปัญหาถูกลบออกและแทนที่ด้วยสารละลาย BTB (25 mM borate buffer, 0.5 เปอร์เซ็นต์ Triton X-100, 2 เปอร์เซ็นต์

-mercaptoethanol) ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง; การฟักตัวใน BTB คือทำซ้ำทั้งหมดสามครั้ง เวิร์มถูกถ่ายโอนจาก BTB ไปยัง BT (25 mM borate buffer, 0.5 เปอร์เซ็นต์ Triton X-100), บ่มในสารละลายบัฟเฟอร์แอนติบอดี (1× PBS, 0.5 เปอร์เซ็นต์ Triton X-100, 0.1 mM EDTA, {{10}}.1 เปอร์เซ็นต์ bovine serum albumin (BSA), 0.05 เปอร์เซ็นต์ sodium azide, pH 7.2) ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา

1 ชั่วโมง และบล็อกด้วยสารละลายบัฟเฟอร์แอนติบอดีที่มีซีรั่มแพะ 10 เปอร์เซ็นต์(คอสโมไบโอ, โตเกียว, ญี่ปุ่น) ที่ 4 องศาในชั่วข้ามคืน แอนติบอดีปฐมภูมิประกอบด้วยแอนติบอดีต่อต้านวัย (anti-CML) ของหนูเมาส์โมโนโคลนัล (แอนติบอดีหมายเลข 6D12; 1:125) และแอนติบอดีต่อต้านเพนโทซิดีน (สำเนาหมายเลข PEN-12, ทรานส์เจนิก; 1:5 0) แอนติบอดีทุติยภูมิประกอบด้วยแอนติบอดีที่ต่อต้านหนูจากแพะที่เชื่อมต่อกันของ Alexa Fluor 555- (Abcam, Cambridge, England; 1:100) การเจือจางแอนติบอดีทั้งหมดถูกดำเนินการโดยใช้แอนติบอดีบัฟเฟอร์ที่มี BSA 0.5 เปอร์เซ็นต์ ตัวอย่างถูกติดตั้งบนกระจกสไลด์โดยใช้ตัวกลางสำหรับติดตั้งแอนติเฟด VECTASHIELD (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA)

กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง

ภาพเรืองแสงของหนอนตัวเต็มวัยอายุ 3- หรือ 13-วัน ซึ่งติดตั้งบนสไลด์แก้วตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ถูกบันทึกโดยใช้การกลับด้านชั้นยูเรสเซนซ์กล้องจุลทรรศน์ (BZ-X700; Keyence) พร้อมเลนส์ใกล้วัตถุ 10x (CFI Plan Fluor DL10×/0.30) อัตโนมัติเฟลuorescence ของเวิร์มเป็นสีแดงเรืองแสงจากอเล็กซ่าดู Fluor 555 ด้วย BZ-X DAPI (ความยาวคลื่นกระตุ้น (Ex), 360 ±20 nm; ความยาวคลื่นที่ปล่อยออกมา (Em), 460 ± 25 nm) และ TRITC (Ex, 545 ±12.5 นาโนเมตร; Em, 605 ± 35 นาโนเมตร)ตัวกรองตามลำดับ ภาพส่วนถูกถูกจับโดยโหมดการแบ่งส่วนด้วยสลิตแบบหนึ่งมิติด้วย aความกว้าง 32 และระยะพิทช์ Z-stack 0.7μม. สำหรับ 40-μตัวอย่างหนา m เพื่อวัดปริมาณสีน้ำเงินเรืองแสง,เรืองแสงความเข้มวัดโดยภาพ

ซอฟต์แวร์ Quant TL (GE Healthcare) ถูกทำให้เป็นค่าความหนาแน่นต่อ 1 มม2 ของหนอน'พื้นที่ฉายภาพ ขนาดของร่างกายถูกกำหนดด้วยซอฟต์แวร์ Adobe Photoshop Elements และ ImageJ ที่พัฒนาโดย National Institutes of Health ในระบบนี้พื้นที่ของเวิร์ม'การฉายภาพถูกประเมินโดยอัตโนมัติและใช้เป็นดัชนีขนาดของร่างกาย

การวิเคราะห์ทางสถิติ

ความสัมพันธ์ของอายุขัยคำนวณโดยใช้สเปียร์แมน's อันดับค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ ระดับออโตฟลูออเรสเซนต์หลังจากไกลเคชั่นในหลอดทดลองถูกเปรียบเทียบโดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนแฟกทอเรียลแบบสองปัจจัยและเชฟเฟ่'s F ทดสอบ. เดอะค่า ELISA หลังจากไกลเคชั่นในหลอดทดลองถูกเปรียบเทียบโดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนแบบปัจจัยเดียวและการทดสอบ Dunnett สำหรับการเปรียบเทียบหลายรายการ การอยู่รอดของไส้เดือนฝอยถูกคำนวณโดย Kaplan–วิธีไมเออร์และความแตกต่างของการอยู่รอดได้รับการทดสอบสำหรับนัยสำคัญโดยใช้การทดสอบล็อกอันดับ ค่าการเรืองแสงอัตโนมัติหลังการรักษาด้วย rifampicin และการแก่ชราของดาฟ-2และไคนู-1เปรียบเทียบการกลายพันธุ์สำหรับแต่ละคนโดยใช้ Student's t การทดสอบ การวัด ANOVA แบบสองปัจจัยซ้ำๆ และ Mann–วิทนีย์U ทดสอบ. ค่าออโตฟลูออเรสเซนต์หลังการบำบัดด้วยไรโบสสำหรับ N2 หรือไคนู-1เปรียบเทียบการกลายพันธุ์โดยใช้เหล็กแบบไม่มีพารามิเตอร์–วิธี Dwass เปรียบเทียบความหนาแน่นจากกล้องจุลทรรศน์ออโตฟลูออเรสเซนต์โดยใช้ Student's t-ทดสอบ. เมื่อมีการสังเกตนัยสำคัญ ข้อมูลจะถูกจัดประเภทฟีฟายเอ็ดเป็น *p < 0.05 and **p < 0.01. All การวิเคราะห์ทางสถิติดำเนินการด้วย Microsoft Excel ที่เสริมด้วยซอฟต์แวร์เสริมบวกStatcel 3 (OMS, โตเกียว, ญี่ปุ่น) และ JSTAT สำหรับ Windows(นันโคโดะ โตเกียว ญี่ปุ่น).

สรุปการรายงาน

ข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับการออกแบบการวิจัยมีอยู่ใน Nature Researchสรุปการรายงานที่เชื่อมโยงกับบทความนี้

ความพร้อมใช้งานของข้อมูล

ชุดข้อมูลที่สร้างขึ้นในระหว่างการศึกษาปัจจุบันมีให้จากข้อมูลที่เกี่ยวข้องผู้เขียนตามคำขอที่สมเหตุสมผล

อ้างอิง

1. Brenner, S. พันธุศาสตร์ของCaenorhabditis elegans. พันธุศาสตร์ 77, 71–94 (1974).

2. Riddle, DL, Blumenthal, T., Meyer, BJ, Priess, JR (บรรณาธิการ)C. elegans II. (เย็นสำนักพิมพ์สปริงฮาร์เบอร์, Cold Spring Harbor, 1997)

3. เฮิร์นดอน, แอลเอ และคณะ ปัจจัยสุ่มและพันธุกรรมมีอิทธิพลต่อความชราของเนื้อเยื่อเฉพาะค. สง่างาม. ธรรมชาติ419, 808–814 (2002).

4. คลาส ม.ร.ว. อายุในไส้เดือนฝอยCaenorhabditis elegans: ปัจจัยทางชีวภาพและสิ่งแวดล้อมที่สำคัญที่มีอิทธิพลต่อช่วงชีวิตเมค นักพัฒนาผู้สูงอายุ 6, 413–429 (1977).

5. Son, HG, Altintas, O., Kim, EJE, Kwon, S. & Lee, SV การเปลี่ยนแปลงตามอายุและไบโอมาร์คเกอร์ของความชราในCaenorhabditis elegans. เอจจิ้งเซลล์18, e12853 (2019).

6. Yoshino, J., Mills, KF, Yoon, MJ & Imai, S. Nicotinamide mononucleotide, NAD หลัก (บวก) ระดับกลาง รักษาพยาธิสรีรวิทยาของโรคเบาหวานที่เกิดจากอาหารและอายุในหนูเซลล์ Metab 14, 528–536 (2011).

7. Denzel, MS, Lapierre, LR & Mack, HID หัวข้อที่เกิดขึ้นใหม่ในค. สง่างามการวิจัยเกี่ยวกับอายุ: การควบคุมการถอดรหัส, การตอบสนองต่อความเครียดและ epigeneticsเมค อายุที่กำลังพัฒนา 177, 4–21 (2019).

8. Ikeda, T., Yasui, C., Hoshino, K., Arikawa, K. & Nishikawa, Y. Inเฟลแบคทีเรียกรดแลกติกต่อการมีอายุยืนยาวของCaenorhabditis elegansและเป็นเจ้าภาพป้องกันเชื้อซัลโมเนลลาลำไส้ซีโรวาร์ เอนเทอริติดิสแอป สิ่งแวดล้อม. ไมโครไบโอล. 73, 6404–6409 (2007).

9. Komura, T., Ikeda, T., Yasui, C., Saeki, S. & Nishikawa, Y. กลไกที่เป็นพื้นฐานของการมีอายุยืนยาวที่เกิดจากบิฟิโดแบคทีเรียในCaenorhabditis elegans. ชีวจีรอนโตโลจี14, 73–87 (2013).

10. Clark, LC & Hodgkin, J. Commensals โปรไบโอติกและเชื้อโรคในCaenorhabditis elegansแบบอย่าง.เซลล์ไมโครไบโอล 16, 27–38 (2013).

11. Cabreiro, F. & Gems, D. หนอนก็ต้องการจุลินทรีย์เช่นกัน: ไมโครไบโอต้า สุขภาพ และความชราในCaenorhabditis elegans. EMBO โมล ยา 5, 1300–1310 (2013).

12. คิม วาย & มิโลนาคิส อีCaenorhabditis elegansปรับภูมิคุ้มกันด้วยแบคทีเรียโปรไบโอติกแลคโตบาซิลลัส แอซิโดฟิลัสสายพันธุ์ NCFM ช่วยเพิ่มการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันของแกรมบวกติดเชื้อ ภูมิคุ้มกัน 80, 2500–2508 (2012).

13. Gerstbrein, B., Stamatas, G., Kollias, N. & Driscoll, M. In vivo spectrofluorimetryเปิดเผยตัวบ่งชี้ทางชีวภาพภายนอกที่รายงานช่วงสุขภาพและการจำกัดอาหารในCaenorhabditis elegans. เอจจิ้งเซลล์4, 127–137 (2005).

14. โคเบิร์น ซี. และคณะ แอนทรานิเลทเรืองแสงนับเป็นคลื่นเนื้อตายที่แพร่กระจายโดยแคลเซียมซึ่งส่งเสริมการตายของสิ่งมีชีวิตในค. สง่างาม. PLoS ไบโอล 11, e1001613 (2013).

15. Pincus, Z., Mazer, TC & Slack, FJ Autoเฟลuorescence เป็นตัววัดความชราภาพในค. สง่างาม: มองเป็นสีแดง ไม่ใช่สีน้ำเงินหรือสีเขียวเอจจิ้ง (ออลบานี นิวยอร์ก) 8, 889–898 (2016).

16. Sebekova, K. & Sebekova, KB Glycated proteins ในโภชนาการ: เพื่อนหรือศัตรู?ประสบการณ์ เจอรอนตอล. 117, 76–90 (2019).

17. Giacco, F. & Brownlee, M. ความเครียดออกซิเดชันและภาวะแทรกซ้อนจากเบาหวานหมุนเวียน Res 107, 1058–1070 (2010).

18. ศรีกันต์, ว. et al. ผลิตภัณฑ์ขั้นสุดท้ายไกลเคชั่นขั้นสูงและตัวรับ RAGE ในอัลไซเมอร์'โรคนิวโรบิล อายุ 32 ปี, 763–777 (2011).

19. Zhuo, Q., Yang, W., Chen, JY & Wang, Y. กลุ่มอาการเมแทบอลิซึมตรงกับโรคกระดูกพรุนณัฐ. รายได้ Rheumatol 8, 729–737 (2012).

20. Gkogkolou, P. & Bohm, M. ผลิตภัณฑ์ขั้นสุดท้ายไกลเคชั่นขั้นสูง: ผู้เล่นหลักในการชะลอวัยของผิว?เดอร์มาโทเอนโดครินอล4, 259–270 (2012).

21. หลิว เจ และคณะ ตัวรับสำหรับผลิตภัณฑ์ขั้นสุดท้ายไกลเคชั่นขั้นสูงส่งเสริมก่อนวัยอันควรการชราภาพของเซลล์เยื่อบุผิวท่อใกล้เคียงโดยการกระตุ้นของเอนโดพลาสมิกการส่งสัญญาณ p21 ที่ขึ้นกับความเครียดของเรติคูลัมสัญญาณเซลล์26, 110–121 (2014).

22. Mendler, M., Schlotterer, A., Morcos, M. & Nawroth, PP ทำความเข้าใจกับโรคประจำตัวหลายโรคที่เป็นเบาหวานและอายุยืน: เราสามารถเรียนรู้อะไรจากไส้เดือนฝอยCae norhabditis elegans? ประสบการณ์ คลิน. ต่อมไร้ท่อ เบาหวาน 120, 182–183 (2012).

สอบถามเพิ่มเติม:

อีเมล:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp plus 86 15292862950