ระดับการออกกำลังกายที่เหมาะสมช่วยลดภาวะลำไส้แปรปรวนและกรดวาเลอริกเพิ่มขึ้น เพื่อปรับปรุงความยืดหยุ่นของระบบประสาทและการทำงานของการรับรู้หลังการผ่าตัดในหนู ตอนที่ 3

วัสดุและวิธีการ

โปรโตคอลและขั้นตอนการทดลองได้รับการอนุมัติโดยคณะกรรมการการดูแลและการใช้สัตว์ประจำสถาบันของมหาวิทยาลัยเวอร์จิเนีย (ชาร์ลอตส์วิลล์, เวอร์จิเนีย, สหรัฐอเมริกา; หมายเลขโปรโตคอล: 3114)

ความทรงจำเป็นความสามารถอย่างหนึ่งที่เรามักต้องใช้ในชีวิตประจำวัน มันสามารถทำให้ผู้คนฉลาดขึ้น อ่อนไหวมากขึ้น และเอื้อต่ออาชีพการงานและความสัมพันธ์ระหว่างบุคคลมากขึ้น ดังนั้นหลายๆ คนจึงต้องการปรับปรุงความจำของตนเอง มีความสัมพันธ์ระหว่างโปรโตคอลการทดลองกับหน่วยความจำ เรามาสำรวจปัญหานี้กันต่อไป

ประการแรก ระเบียบวิธีการทดลองสามารถช่วยให้ผู้คนพัฒนาความจำของตนเองได้ ในการทดลอง ผู้คนต้องปฏิบัติตามขั้นตอนบางอย่างเพื่อดำเนินการทดลองให้เสร็จสิ้น กิจกรรมทีละขั้นตอนนี้สามารถทำให้สมองของมนุษย์อยู่ในสภาวะที่มีความสนใจและมีสมาธิสูง ซึ่งจะช่วยส่งเสริมการทำงานของสมอง ในเวลาเดียวกัน คุณต้องจดจำข้อมูลการทดลองและขั้นตอนการทดลองในระหว่างการทดลอง ซึ่งจะฝึกการทำงานของหน่วยความจำของสมองด้วย การฝึกซ้ำๆ แบบนี้ ความจำของคุณจะค่อยๆ ดีขึ้น

ประการที่สอง ประสบการณ์ทางประสาทสัมผัสในระหว่างกระบวนการจำมีความเกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิดกับการออกแบบแผนการทดลองด้วย ในการทดลอง นักออกแบบมักจะกำหนดงานเฉพาะบางอย่างในระหว่างการทดลอง เพื่อให้ผู้เข้าร่วมต้องทำซ้ำการดำเนินการเดียวกันหลายครั้ง เช่น การจดจำและการเขียนตัวเลข การจดจำและการจดจำบล็อคสี เป็นต้น ประสบการณ์ที่ทำซ้ำๆ นี้สามารถเสริมสร้างความเข้มแข็งของผู้คนได้ ความสนใจและความสามารถในการจดจำทำให้ผู้คนสามารถประมวลผลข้อมูลนี้ลงในความทรงจำระยะยาวได้ง่ายขึ้น

นอกจากนี้ ในการทดลอง การใช้วัสดุกระตุ้นที่เป็นตัวแทน (เช่น รูปภาพ เสียง กลิ่น ฯลฯ) ก็สามารถให้ผลลัพธ์ที่ดีได้เช่นกัน เนื่องจากสิ่งเร้าเหล่านี้สามารถกระตุ้นความตื่นเต้นและกระบวนการความจำของสมอง จึงช่วยเพิ่มความสามารถในการจดจำของผู้คน ในขณะเดียวกัน สิ่งเร้าเหล่านี้ยังสามารถควบคู่ไปกับสภาพแวดล้อมและสถานการณ์ในชีวิตได้ จึงช่วยลดการเกิดการแยกส่วนและทำให้ข้อมูลง่ายต่อการจดจำและเชื่อมโยงกันมากขึ้น

โดยสรุป แผนการทดลองมีบทบาทสำคัญในการพัฒนาความจำของมนุษย์ การทดลองต่างๆ ช่วยให้ผู้คนสามารถออกกำลังกายความสามารถด้านการรับรู้ เพิ่มระดับความจำ และในขณะเดียวกันก็ส่งเสริมการทำงานของสมอง ดังนั้นเราจึงควรเรียนรู้วิธีการทดลองใหม่ๆ ต่อไป และมีส่วนร่วมในการทดลองมากขึ้นเพื่อปรับปรุงระดับความจำของเรา และมีส่วนช่วยในอาชีพ ความสัมพันธ์ และสุขภาพของเราให้มากขึ้น จะเห็นได้ว่าเราต้องปรับปรุงความจำ และ Cistanche Deserticola สามารถปรับปรุงความจำได้อย่างมีนัยสำคัญ เนื่องจาก Cistanche Deserticola มีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ ต้านการอักเสบ และต่อต้านวัย ซึ่งสามารถช่วยลดปฏิกิริยาออกซิเดชันและการอักเสบในสมอง จึงช่วยปกป้อง สุขภาพของระบบประสาท นอกจากนี้ Cistanche Deserticola ยังสามารถส่งเสริมการเจริญเติบโตและการซ่อมแซมเซลล์ประสาท ซึ่งจะช่วยปรับปรุงการเชื่อมต่อและการทำงานของโครงข่ายประสาทเทียม ผลกระทบเหล่านี้สามารถช่วยปรับปรุงความจำ ความสามารถในการเรียนรู้ และความเร็วในการคิด และยังอาจป้องกันการพัฒนาของความผิดปกติทางสติปัญญาและโรคเกี่ยวกับความเสื่อมของระบบประสาทอีกด้วย

คลิกรู้จักหน่วยความจำระยะสั้นว่าจะปรับปรุงอย่างไร

การทดลองในสัตว์ทั้งหมดดำเนินการโดยสถาบันคู่มือสุขภาพแห่งชาติสำหรับการดูแลและการใช้สัตว์ทดลอง (สิ่งพิมพ์ของ NIH หมายเลข 80–23) แก้ไขในปี 2554 แหล่งที่มาของวัสดุหลักแสดงอยู่ในตารางทรัพยากรหลักในวัสดุเสริม

สัตว์และการออกแบบการทดลอง

หนู C57BL/6 J เพศผู้อายุแปดสัปดาห์น้ำหนัก 19–22 กรัมถูกเก็บไว้ในห้องที่ได้รับการดูแลภายใต้สภาพแวดล้อมคงที่ (อุณหภูมิ 22–24 องศา วงจรแสง / มืด 12 ชั่วโมง และความชื้น 50 ± 10%) พร้อมการเข้าถึงอาหารฟรี และน้ำ

พวกเขาทั้งหมดได้รับอนุญาตให้ปรับตัวเป็นเวลาหนึ่งสัปดาห์ก่อนการทดลอง พวกเขาได้รับการสุ่มให้กับกลุ่มต่อไปนี้ในการทดลองครั้งแรก: (1) กลุ่มควบคุม (ไม่ได้รับการดมยาสลบและการผ่าตัด), (2) กลุ่มออกกำลังกาย (ออกกำลังกายที่ความสามารถสูงสุด 35–40% แต่ไม่ได้รับการดมยาสลบและการผ่าตัด) , (3) กลุ่มการผ่าตัด (การสัมผัสหลอดเลือดแดงด้านซ้ายเป็นเวลา 15 นาที ภายใต้การดมยาสลบแบบไอโซฟลูเรน เป็นเวลา 2 ชั่วโมง) และ (4) ถึง (6) กลุ่ม Exe-l+Sur, Exe-m+Sur และ Exe-h+Sur: ออกกำลังกายที่ 35 –40%, 55–60% และ 75–80% ความสามารถสูงสุด ตามลำดับ และอยู่ภายใต้การดมยาสลบและการผ่าตัด

สัตว์ถูกใช้เพื่อการเรียนรู้และทดสอบความจำโดยเริ่ม 4 วันหลังการผ่าตัด (n=20) หรือเก็บเกี่ยวสมองของพวกมันเพื่อตรวจวิเคราะห์ทางชีวเคมีที่ 6 ชั่วโมง, 24 ชั่วโมง, 48 ชั่วโมง, 72 ชั่วโมง, 96 ชั่วโมง และ 7 วันหลังการผ่าตัด (n=9 หรือ 14) สำหรับการย้อมสีอิมมูโนฟลูออเรสเซนต์ที่ 48 ชั่วโมงและ 19 วันหลังการผ่าตัด (n=6) และสำหรับการย้อมสี Golgi ที่ 19 วันหลังการผ่าตัด (n=8)

เลือดและอุจจาระจากหนูเมาส์ใน 4 กลุ่มแรกถูกเก็บเกี่ยวเพื่อตรวจวัด SCFA ที่ 7 วันหลังการผ่าตัด (n=7) และสำหรับการวิเคราะห์ 16 S ที่ 3 และ 7 วันหลังการผ่าตัด (n=8) หรือที่ เมื่อสิ้นสุด 4-โปรโตคอลการออกกำลังกายประจำสัปดาห์ (n=8) ​​หรือ ณ เวลาที่สอดคล้องกันใน 2 กลุ่มแรก (n=16) หนูสำหรับการเก็บเกี่ยวเนื้อเยื่อคือหนูกลุ่มต่างๆ ที่ใช้ในการทดสอบการเรียนรู้และความจำ ในการทดลองครั้งที่สอง หนูจะถูกสุ่มให้กับ (1) กลุ่ม Transcontrol+Sur และ (2) กลุ่ม Trans-exe+Sur

หนูในกลุ่มแรกได้รับสารละลายอุจจาระ 500 ul จากกลุ่มควบคุมโดยวิธีสวนกระเพาะอาหาร และ 600 ul โดยสวนทวาร วันละครั้งเป็นเวลา 7 วันติดต่อกันหลังการรักษาด้วยยาปฏิชีวนะเพื่อกำจัดจุลินทรีย์ในลำไส้ตามธรรมชาติในผู้รับ หนูในกลุ่มที่สองได้รับสารละลายอุจจาระ 500 ul จากหนูออกกำลังกายโดยการสวนทางกระเพาะอาหาร และ 600 ul โดยสวนทวาร วันละครั้งเป็นเวลา 7 วันติดต่อกันหลังการรักษาด้วยยาปฏิชีวนะ อุจจาระจากผู้รับถูกเก็บเกี่ยว 14 วันหลังจากการปลูกถ่ายอุจจาระเพื่อการวิเคราะห์ 16 S จากนั้นหนูก็ได้รับการผ่าตัด

ประเมินการเรียนรู้และความจำจาก 4 วันหลังการผ่าตัด (n=15) สมองถูกเก็บเกี่ยวสำหรับการศึกษาทางชีวเคมีเช่นเดียวกับในการทดลองครั้งแรก (n=10) ในการทดลองครั้งที่สาม หนูได้รับการสุ่มให้กับ (1) กลุ่ม Transcontrol และ (2) กลุ่ม Trans-control+Sur หนูทั้งสองกลุ่มได้รับการปลูกถ่ายอุจจาระจากหนูควบคุม กลุ่มที่สองได้รับการผ่าตัด 14 วันหลังการปลูกถ่ายอุจจาระ เก็บเกี่ยวฮิบโป 2 วันหลังการผ่าตัดเพื่อวัด GDNF (n=10) ในการทดลองที่สี่ หนูได้รับการสุ่มให้กับ (1) กลุ่มควบคุม (หนูไร้เดียงสาที่ไม่ได้สัมผัสกับสภาวะการทดลองใดๆ ที่อธิบายไว้ในการศึกษานี้) (2) กลุ่มยาปฏิชีวนะที่ได้รับยาปฏิชีวนะเป็นเวลา 7 วัน และ (3) กลุ่มควบคุมทรานส์ที่ได้รับการปลูกถ่ายอุจจาระจากหนูควบคุม

ประเมินการเรียนรู้และความจำ 19 วันหลังจากการปลูกถ่ายอุจจาระเสร็จสมบูรณ์ (26 วันหลังจากเสร็จสิ้นการรักษาด้วยยาปฏิชีวนะในกลุ่มยาปฏิชีวนะ) (n=12) ในการทดลองที่ห้า หนูได้รับการสุ่มกำหนดให้กับ (1) กลุ่มควบคุม (2) กลุ่มทรานส์คอนโทรลที่ได้รับการปลูกถ่ายอุจจาระจากหนูทดลอง และ (3) กลุ่มศัลยกรรมทรานส์ที่ได้รับการปลูกถ่ายอุจจาระจากหนูผ่าตัด 

การปลูกถ่ายอุจจาระดำเนินการตามที่อธิบายไว้ในการทดลองครั้งที่สอง อุจจาระจากผู้รับถูกเก็บเกี่ยว 14 วันหลังจากการปลูกถ่ายอุจจาระสำหรับการวิเคราะห์ 16 S (n=10) การเรียนรู้และหน่วยความจำได้รับการประเมิน 4 วันหลังจากการเก็บเกี่ยวตัวอย่างอุจจาระ (n=17) ในการทดลองที่หก หนูได้รับการสุ่มให้ (1) การผ่าตัดบวกกับกลุ่มน้ำเกลือปกติที่ได้รับน้ำเกลือปกติ (NS) 200 ไมโครลิตรโดยการฉีดเข้าช่องท้องหนึ่งครั้ง ต่อสัปดาห์เป็นเวลา 4 สัปดาห์ จากนั้นจึงทำการผ่าตัด (2)ออกกำลังกายร่วมกับน้ำเกลือปกติร่วมกับกลุ่มการผ่าตัดที่ได้รับ 200 µl NS โดยการฉีดเข้าช่องท้องสัปดาห์ละครั้งในช่วง 4-การออกกำลังกายสัปดาห์ที่ความจุสูงสุด 35–40% จากนั้นจึงทำการผ่าตัด (3 ) การออกกำลังกาย plusvaleric acid ร่วมกับกลุ่มการผ่าตัดที่ได้รับกรดวาเลริก (200 มก./กก. ใน 200 ไมโครลิตร) โดยการฉีดเข้าช่องท้องสัปดาห์ละครั้งในช่วง 4- การออกกำลังกายสัปดาห์ที่ความจุสูงสุด 35–40% แล้วจึงทำการผ่าตัด

ให้ฉีดในตอนเช้าของวันออกกำลังกายวันแรกของสัปดาห์ และฉีดเพิ่มอีก 1 ครั้งในวันผ่าตัด มีการประเมินผลลัพธ์ด้านพฤติกรรม (n=13) และทางชีวเคมี (n=10) เช่นเดียวกับในการทดลองครั้งที่สอง ในการทดลองครั้งที่ 7 C57BL/ เพศชายอายุ 13- สัปดาห์ (น้ำหนัก 23–27 กรัม) หนูทดลอง 6 ตัวถูกสุ่มให้กับ (1) กลุ่มควบคุม (2) กลุ่ม NS ที่ได้รับ NS 4 ไมโครลิตรโดยการฉีดเข้ากล้ามเนื้อและหัวใจห้องล่างวันละครั้งเป็นเวลา 4 วันติดต่อกัน และ (3) กลุ่มกรดวาเลอริกที่ได้รับ 4 มก./กก. ใน 4 ไมโครลิตรในกล้ามเนื้อในสมองและหัวใจห้องล่าง ฉีดวันละครั้งเป็นเวลา 4 วันติดต่อกัน ฉีดสมองซีรีโบรเวนตริเคิลซ้ายและขวาในช่วงเวลาอื่น ประเมินการเรียนรู้และความจำ 4 วันหลังการฉีด (n=15)

ในการทดลองที่แปด หนูได้รับการสุ่มให้ (1) กลุ่มการผ่าตัดร่วมกับไดเมทิลซัลฟอกไซด์ (DMSO) ที่ได้รับ DMSO ฉีดเข้ากล้ามเนื้อหัวใจและหลอดเลือดวันละครั้งเป็นเวลา 4 วันติดต่อกัน โดยเริ่มในวันที่ผ่าตัด (2) การผ่าตัดร่วมกับกลุ่มต้าน C3ar ที่ได้รับตัวต้าน C3ar (SB290157 ) โดยการฉีดเข้ากล้ามเนื้อหัวใจและหลอดเลือดวันละครั้งเป็นเวลา 4 วันเริ่มตั้งแต่วันผ่าตัด (3) การออกกำลังกาย plusDMSO บวกกับกลุ่มการผ่าตัดที่ได้รับ DMSO โดยการฉีดเข้ากล้ามเนื้อหัวใจและหลอดเลือดวันละครั้งเป็นเวลา 4 วันติดต่อกัน เริ่มในวันผ่าตัดหลังจากการออกกำลังกาย 4- สัปดาห์ที่อายุ 35 ปี –40% ของความจุสูงสุด และ(4) การออกกำลังกายบวกกับ C3ar agonist บวกกับกลุ่มการผ่าตัดที่ได้รับ C3aragonist โดยการฉีดเข้าสมองและหลอดเลือด วันละครั้งเป็นเวลา 4 วันติดต่อกัน โดยเริ่มในวันผ่าตัดหลังจากออกกำลังกาย 4- สัปดาห์ที่ความจุสูงสุด 35–40% . การทดสอบพฤติกรรมเริ่มต้นจาก 4 วันหลังการผ่าตัดตามที่ระบุไว้ข้างต้น (n=15)

ในการทดลองที่เก้า หนูได้รับการสุ่มเลือกให้กับ (1) กลุ่มควบคุม (2) กลุ่มการผ่าตัด (3) กลุ่มการผ่าตัดบวก GDNF ที่ได้รับ GDNF โดยการฉีดเข้ากล้ามเนื้อและหัวใจห้องล่างเมื่อมีการผ่าตัด และ (4) การผ่าตัดร่วมกับ GDNF ที่ทำให้หมดฤทธิ์ด้วยความร้อน กลุ่มที่ได้รับ GDNF ที่ถูกทำให้หมดฤทธิ์ด้วยความร้อนโดยการฉีดเข้ากล้ามเนื้อหัวใจและหลอดเลือด ขณะทำการผ่าตัด ฮิปโปแคมปีเก็บเกี่ยวที่ 48 ชั่วโมงหลังการผ่าตัดสำหรับการศึกษา ELISA (n=12) หลังจากหนึ่งสัปดาห์ของการปรับตัวให้ชินกับสภาพแวดล้อม หนูแก่ (18- หนู C57BL/6 Jmice ตัวผู้อายุเดือนเดือน) ที่มีน้ำหนัก 30–36 กรัมถูกนำมาใช้ใน สามการศึกษา ในการทดลองครั้งแรก หนูอายุจะถูกสุ่มให้กับ (1) กลุ่มควบคุม (2) กลุ่มออกกำลังกายที่หนูออกกำลังกายเป็นเวลา 4- สัปดาห์ที่สมรรถภาพสูงสุด 35–40% (3) กลุ่มการผ่าตัด และ (4) กลุ่ม Exe+Sur ซึ่งหนูออกกำลังกายเป็นเวลา 4- สัปดาห์ที่ความจุสูงสุด 35–40% ก่อนการผ่าตัด สัตว์เหล่านี้ใช้สำหรับการเรียนรู้และทดสอบความจำโดยเริ่มตั้งแต่ 4 วันหลังการผ่าตัด (n=12) หรือสมองของพวกมันถูกเก็บเกี่ยวเพื่อตรวจวิเคราะห์ทางชีวเคมีที่ 48 ชั่วโมงหลังการผ่าตัด (n=10 หรือ 12) สำหรับการย้อมสีอิมมูโนฟลูออเรสเซนท์ที่ 48 ชั่วโมง และ 19 วันหลังการผ่าตัด (n=6) และสำหรับการรักษาโกลกิสเทนที่ 19 วันหลังการผ่าตัด (n=8)

เลือดและอุจจาระจากหนูเมาส์ทั้ง 4 กลุ่มถูกเก็บเกี่ยวสำหรับการวัด SCFA ที่ 7 วันหลังการผ่าตัด (n=7) และสำหรับการวิเคราะห์ 16 S ที่ 3 และ 7 วันหลังการผ่าตัด (n=8) หรือที่สิ้นสุด ของ 4- เกณฑ์วิธีการออกกำลังกายประจำสัปดาห์หรือตามเวลาที่สอดคล้องกันใน 2 กลุ่มแรก (n=16) หนูสำหรับการเก็บเกี่ยวเนื้อเยื่อเป็นกลุ่มต่างๆ ที่ใช้สำหรับการเรียนรู้และการทดสอบหน่วยความจำ ในการทดลองครั้งที่สอง หนูอายุได้รับการสุ่มให้กับ (1) กลุ่ม Trans-Old Control+Sur และ (2) กลุ่ม Trans-Old Exe+Sur หนูเหล่านี้ได้รับการผ่าตัด 14 วันหลังการปลูกถ่ายอุจจาระตามที่อธิบายไว้ใน การทดลองครั้งที่สองของหนูวัยผู้ใหญ่ ประเมินการเรียนรู้และความจำจาก 4 วันหลังการผ่าตัด (n =10)

ในการทดลองครั้งที่สาม มีการสุ่มหนูแก่ให้ทำ (1) การผ่าตัดร่วมกับกลุ่ม NS; (2) กลุ่มออกกำลังกายบวก NS บวกการผ่าตัด; และ (3)การออกกำลังกายร่วมกับกรดวาเลริกร่วมกับกลุ่มการผ่าตัด หนูเหล่านี้ได้รับการปรับสภาพการออกกำลังกายและกรดวาเลอริกตามที่อธิบายไว้ในการทดลองครั้งที่หกของหนูวัยหนุ่มสาว ผลลัพธ์ด้านพฤติกรรมได้รับการทดสอบโดยเริ่มตั้งแต่ 4 วันหลังการผ่าตัด (n=11) ขนาดตัวอย่าง (n) ที่อธิบายไว้ข้างต้นแสดงถึงจำนวนสัตว์ที่ถูกสุ่มเข้าในแต่ละกลุ่ม/สภาวะ จำนวนสัตว์เหล่านี้คือผลรวมของอย่างน้อย 3 ซ้ำของการทดลองแต่ละครั้ง สัตว์ต่างๆ ถูกสุ่มแจกออกเป็นกลุ่มตามตารางสุ่มที่สร้างด้วยคอมพิวเตอร์ในการทดลองแต่ละครั้ง

การกำหนดความสามารถในการออกกำลังกายสูงสุดและการฝึกออกกำลังกาย

ก่อนการผ่าตัด หนูอายุ {{0}} สัปดาห์และ 18-} สัปดาห์ได้สัมผัสกับการออกกำลังกายแบบแอโรบิก 4- สัปดาห์หลังจากการพิจารณาความสามารถในการออกกำลังกายสูงสุดของหนูแต่ละตัว การกำหนดนี้ดำเนินการในลักษณะเดียวกันกับที่อธิบายไว้ก่อนหน้า [47, 48] โดยสรุป หนูเหล่านี้เคยชินกับลู่วิ่งไฟฟ้าในวันแรกด้วยการตั้งค่าเริ่มต้นของตะแกรงช็อตที่ 25 V, 0.3mA และ 2 Hz และความเร็วและความเอียงที่ศูนย์เป็นเวลา 10 นาที ความเร็วของลู่วิ่งไฟฟ้าเพิ่มขึ้นเป็น 10 ซม./วินาที โดยตั้งค่าความเอียงเป็น 50 เป็นเวลา 10 นาที ต่อไป ความเร็วและความเอียงของลู่วิ่งไฟฟ้าเพิ่มขึ้นเป็น 15 ซม./ทราย 100 เป็นเวลา 5 นาที

The speed was then increased by 5 cm/s every 5 min to an average maximal speed of 70 cm/s in young mice and 60 cm/s in old mice (around 65–75 cm/s and 55–65 cm/s, respectively), as they reached the criteria for exercise-induced exhaustion. These criteria were: (1) 10 consecutive seconds on the electric grid; (2) spending >50% ของเวลาบนตาราง; และ/หรือ (3) ขาดแรงจูงใจในการกระตุ้นด้วยตนเอง หนูถูกลบออกจากเลนทันทีเมื่อตรงตามเกณฑ์เหล่านี้อย่างน้อยหนึ่งข้อ ในวันถัดไป หนูวิ่งบนลู่วิ่งเครื่องเดียวกันด้วยความเร็วสูงสุดครึ่งหนึ่งของความเร็วเฉลี่ย (35 ซม./วินาที ในหนูอายุน้อย หรือ 30 ซม./วินาที ในหนูอายุมาก) และเอียง 100 องศา จนกระทั่งถึงเกณฑ์การหมดแรงข้อใดข้อหนึ่งอีกครั้ง และระยะเวลาของ การออกกำลังกายอย่างต่อเนื่องถูกบันทึกเป็นความสามารถในการออกกำลังกายสูงสุดของเมาส์แต่ละตัว หลังจากโปรโตคอลทั้งสองนี้ หนูจะถูกแยกเก็บเป็นเวลา 30 นาทีเพื่อหลีกเลี่ยงพฤติกรรมก้าวร้าวที่เห็นได้ชัดเจนหลังการออกกำลังกาย

After resting for 2 days, mice assigned to exercise training groups were subjected to a 4-week protocol of forced treadmill running at 35–40%, 55–60%, or 75–80% of the maximal capacity, respectively, for 5 days a week. Mice that were shocked for >5% of the total daily exercise time in 2 consecutive days or >3% ของเวลาทั้งหมดใน 3 วันติดต่อกันจะถูกยกเว้น

กลุ่มที่ไม่ออกกำลังกายในชุดเดียวกันของการทดลองกับกลุ่มออกกำลังกายถูกวางบนลู่วิ่งที่ไม่เคลื่อนไหวทุกวันเป็นเวลาประมาณ 30–40 นาที พวกเขาได้รับการกระแทก 10 ครั้งเป็นเวลารวม 5 วินาที ซึ่งเป็นจำนวนการกระแทกโดยเฉลี่ยที่หนูในกลุ่มออกกำลังกายได้รับในแต่ละวัน ขณะอยู่บนลู่วิ่งไฟฟ้าที่ไม่เคลื่อนไหว หากชุดการทดลองไม่มีกลุ่มการออกกำลังกาย ก็แสดงว่าไม่มีหนูในชุดการทดลองใดที่ได้รับการกระแทก

การรักษาด้วยยาปฏิชีวนะ

เพื่ออำนวยความสะดวกในการตั้งอาณานิคมของจุลินทรีย์ที่ปลูกถ่าย หนูผู้รับจะได้รับการรักษาด้วยยาปฏิชีวนะวันละครั้งเป็นเวลา 7 วันติดต่อกันเพื่อกำจัดจุลินทรีย์ในลำไส้ดั้งเดิมตามที่อธิบายโดยเราและคนอื่นๆ [11, 36] โดยสรุป หลังจากการล้างด้วยแมกนีเซียมซัลเฟต 10% (200 ไมโครกรัม/10 กรัม สองครั้งโดยมีช่วงเวลา 3 ชั่วโมง) โดยการล้างกระเพาะอาหารในวันแรก หนูเมาส์ C57BL/6 J ได้รับอะม็อกซีซิลลิน/กรดคลาวูลานิก (200 มก./กก.), เมโทรนิดาโซล ( 200 มก./กก.) และเซฟาโซลิน (2 ก./กก.) โดยวิธี gastric gavage andenema (ใน 300 ul สำหรับ gastric gavage และ 400 ul NS สำหรับสวน) ในตอนเช้าวันละครั้งเป็นเวลา 7 วันติดต่อกัน และ amoxicillin/clavulanicacid (20 มก./กก.) ), เมโทรนิดาโซล (20 มก./กก.) และเซฟาโซลิน (300 มก./กก.) ในขนาด 200 ul. NS ทุกวันโดยการฉีดเข้าช่องท้องเป็นเวลา 7 วันเดียวกัน (เวลา 16.00 น. ถึง 17.00 น.) เพื่อป้องกันการปนเปื้อนข้ามของแบคทีเรีย การจัดการเมาส์และการเปลี่ยนกรงและขวดน้ำทุกวันดำเนินการโดยช่างเทคนิคโดยสวมเสื้อคลุมและถุงมือที่สะอาดในหมวกที่มีการระบายอากาศ อุจจาระจากหนูเหล่านี้ถูกเก็บเกี่ยว 24 ชั่วโมงหลังการบำบัดครั้งสุดท้ายสำหรับการวิเคราะห์ 16 S เพื่อตรวจสอบผลลัพธ์

การปลูกถ่ายอุจจาระ

เม็ดอุจจาระสดที่เก็บภายใน 30 นาทีหลังจากการขับถ่ายของหนูควบคุม หนูทันทีหลังจากเสร็จสิ้นการออกกำลังกาย 4- สัปดาห์ หนู 2 ถึง 8 วันหลังการผ่าตัดถูกเจือจางด้วยน้ำเกลือฆ่าเชื้อ 100 มก./มล. เม็ดอุจจาระทั้งหมด 7 เม็ด –ผู้บริจาค 10 รายที่มีเงื่อนไขการทดลองแต่ละอย่างถูกผสมและแขวนลอยใหม่ร่วมกันในน้ำเกลือ โดยสรุป สสารอุจจาระถูกผสมอยู่ในกระแสน้ำวนเป็นเวลา 5 นาที จากนั้นจึงผ่านเครื่องกรองเซลล์ไนลอนขนาด 70 ไมโครเมตร เพื่อกำจัดอาหารและวัสดุที่เป็นอนุภาคที่ไม่ได้ย่อย หนูผู้รับได้รับสารละลายอุจจาระที่สอดคล้องกัน 500 ul โดยการล้างกระเพาะอาหารในตอนเช้า และ 600 ul โดยสวนทวารในช่วงบ่ายตั้งแต่ 24 ชั่วโมงหลังการให้ยาปฏิชีวนะครั้งสุดท้ายเป็นเวลา 7 วันติดต่อกัน หนูที่ปลูกถ่ายจะได้รับการบำรุงรักษาเป็นเวลา 2 สัปดาห์หลังการปลูกถ่ายอุจจาระก่อนที่จะถูกเก็บอุจจาระเพื่อการวิเคราะห์และการผ่าตัด 16 S

การดมยาสลบและการผ่าตัด

การผ่าตัดปล่อยให้มีการสัมผัสกับหลอดเลือดแดงคาโรติดตามที่เราได้อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [6] ในช่วงสั้นๆ หนูได้รับการดมยาสลบด้วยไอโซฟลูเรน 2% และรักษาการหายใจตามธรรมชาติด้วยหน้ากากอนามัยที่ให้ออกซิเจน 100% ในระหว่างขั้นตอน มีการตรวจสอบและรักษาอุณหภูมิทางทวารหนักไว้ที่ 37 องศา โดยใช้ผ้าห่มทำความร้อน แผลที่คอตรงกลาง 2- ซม. และการผ่าเนื้อเยื่ออ่อนโดยมีการสัมผัสกับหลอดเลือดแดงทั่วไปที่ยาว 1- ซม. โดยไม่มีความเสียหายใดๆ ต่อเส้นประสาทเวกัส หลังจากที่หนูถูกดมยาสลบด้วยไอโซฟลูเรนเป็นเวลาอย่างน้อย 20 นาที จากนั้นจึงทำการชลประทานและปิดแผลโดยใช้ไหมเย็บ 4-0 ขั้นตอนการผ่าตัดถูกดำเนินการในสภาวะที่ไม่ผ่านการฆ่าเชื้อและใช้เวลาประมาณ 15 นาทีในหนูอายุน้อยและหนูอายุ 12 นาที ระยะเวลาในการดมยาสลบทั้งหมดคือ 2 ชั่วโมง หลังการผ่าตัด สัตว์ทุกตัวได้รับการฉีดใต้ผิวหนัง 3 มก./กก.บูพิวาเคน ไม่พบการตอบสนองต่อการบีบนิ้วเท้าระหว่างการดมยาสลบ

การฉีดเข้าหลอดเลือดสมอง

ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น หนูบางกลุ่มได้รับการฉีดเข้าสมอง โดยสรุป หนูเหล่านี้ถูกวางไว้ในโครงศีรษะแบบ Stereotactic ในท่าคว่ำ ตำแหน่งที่ฉีดอยู่ที่: 1.00 มม. ตรงกลาง,−0.3 มม. จากด้านหน้าไปหลังจากเบร็กมา และความลึก dorsoventral −2.5 มม. หนูที่ทำการผ่าตัดร่วมกับกลุ่ม GDNF ได้รับการฉีดเข้ากล้ามเนื้อหัวใจและหลอดเลือดจำนวน 1{{ 20}} ug/kg recombinant mouse GDNF ในน้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต (PBS) 3 ul ตามที่อธิบายไว้ในการศึกษาก่อนหน้า [6, 26] และหนูในการผ่าตัดกลุ่ม GDNF ที่ถูกทำให้หมดฤทธิ์ด้วยความร้อนได้รับการฉีดความร้อน (5 minat 1,000 C ) โซลูชัน GDNF หนูในการผ่าตัดบวกกับกลุ่มต้าน C3ar ได้รับ 10 ไมโครกรัม/กิโลกรัม SB290157 ใน 3 ul PBS ที่มี 5% DMSO ที่ 0 ชั่วโมง, 24 ชั่วโมง, 48 ชั่วโมง และ 72 ชั่วโมงหลังการผ่าตัด หนูเมาส์ในการออกกำลังกายบวกกับ C3ar agonist และกลุ่มการผ่าตัดได้รับ C3ar agonist 1 ไมโครกรัม/กิโลกรัมใน 3 ul PBS ที่มี 5% DMSO ในเวลาเดียวกันกับ SB290157 หนูเมาส์ในกลุ่มกรดวาเลริกของการทดลองที่หกได้รับกรดวาเลริก 4 มก./กก. ใน 4 ไมโครลิตรเป็นเวลา 4 วันติดต่อกัน

การทดสอบพฤติกรรม

การเรียนรู้และความจำได้รับการประเมินโดยการรู้จำวัตถุแบบใหม่และการทดสอบเขาวงกตของ Barnes การทดสอบพฤติกรรมทั้งหมดดำเนินการเวลา 10.00 น.-17.00 น. ในห้องที่แยกเสียง หนูที่ใช้ในการทดสอบการเรียนรู้และความจำไม่ได้ใช้สำหรับการศึกษาทางชีวเคมีใดๆ เพื่อหลีกเลี่ยงผลกระทบของการทดสอบเหล่านี้

การทดสอบการรู้จำวัตถุนวนิยาย

ดังที่เราและคนอื่นๆ อธิบายไว้ก่อนหน้า [20, 49, 50] หนูถูกจับในห้องเปิดโล่งเป็นเวลา 5 นาทีเพื่อสร้างความคุ้นเคย 4 วันหลังการผ่าตัด การทดสอบดำเนินการในลักษณะต่อไปนี้ วัตถุสองชิ้นที่เหมือนกันถูกวางไว้ในมุมที่ติดกันของห้องในวันเรียน หนูถูกนำเข้าไปในห้องโดยหันหลังไปทางวัตถุ และได้รับอนุญาตให้สำรวจห้องอย่างอิสระเป็นเวลา 5 นาที สัตว์นั้นจะถูกกำจัดออกไปหากเวลารวมในการสำรวจวัตถุทั้งสองนั้นเป็นเวลา<5 s. One of the objects was replaced by a novel object 30 seconds or 24 hours later. The mouse was put into the chamber with their backs turned toward the objects and allowed to explore for 5 min. Animal behavior was recorded by ANY-maze behavioral tracking software (Stoelting Co., IL). Exploratory time of new (T2) and old (T1) objects within 5 min was recorded and the memorization ability of the mouse was quantified by discrimination index: DI = T2 / (T1 + T2). The DIs at 30 s and 24 hours after the training reflected the instant and long-term memory, respectively. The field was always provided with even light, and the objects and fields were cleaned with 70% ethanol after each test.

เขาวงกตบาร์นส์

เจ็ดวันหลังการผ่าตัด สัตว์ต่างๆ จะถูกนำไปไว้ในเขาวงกต Barnes เพื่อทดสอบการเรียนรู้เชิงพื้นที่และความทรงจำดังที่เราอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [6, 49] เขาวงกต Barnes เป็นแพลตฟอร์มทรงกลมที่มีระยะห่างเท่ากัน 20 หลุม (SDInstruments, San Diego, CA) หลุมหนึ่งเชื่อมต่อกับห้องมืดที่เรียกว่ากล่องเป้าหมาย การทดสอบเริ่มต้นด้วยการวางสัตว์ไว้กลางเขาวงกต Barnes เสียงรบกวน (85 dB) และแสงสว่าง (200W) ที่สาดส่องบนแท่นถูกนำมาใช้เพื่อกระตุ้นให้หนูค้นหากล่องนี้ หลังจากฝึกเป็นเวลา 4 วัน หน่วยความจำอ้างอิงของพวกมันจะถูกทดสอบในวันที่ 5 และวันที่ 12 ไม่มีการทดสอบใด ๆ ในระหว่างช่วงดังกล่าว ตั้งแต่วันที่ 5 ถึงวันที่ 12 ความหน่วงในการเข้าสู่กล่องเป้าหมายระหว่างการทดลองแต่ละครั้งได้รับการบันทึกโดยระบบติดตามวิดีโอ ANYMaze (SD Instruments)

For more information:1950477648nn@gmail.com