คุณสมบัติต้านไทโรซิเนสของขมิ้นชนิดต่างๆ และการแยกสารออกฤทธิ์ออกจากขมิ้นชัน

Jesmin Akter1 ● Md. Zahorul Islam1,2 ● Md. Amzad Hossain1 ● Kensaku Takara1

1 คณะเกษตร มหาวิทยาลัยริวกิว โอกินาว่า ประเทศญี่ปุ่น

2 Department of Pharmacology, Faculty of Veterinary Science, Bangladesh Agricultural University, Mymensingh, บังคลาเทศ

สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม:Scotty.Wang@wecistanche.com

เชิงนามธรรม

ขมิ้นมักใช้เป็นเครื่องสำอางบำรุงผิวในบางโอกาสทางศาสนาและวัฒนธรรมในอนุทวีปอินเดีย ในการศึกษานี้ เราเปรียบเทียบคุณสมบัติการยับยั้งไทโรซิเนสของ Curcuma spp. 4 ชนิด ได้แก่ C. xanthorrhiza, C. aromatic, C. amada และ C. zedoaria การแยกวิเคราะห์ทางชีวภาพและการทำให้สารยับยั้งไทโรซิเนสบริสุทธิ์โดยใช้คอลัมน์ซิลิกาเจลและโครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูง การระบุโครงสร้างของสารประกอบดำเนินการโดยใช้ 1 H NMR, 13C

NMR และโครมาโตกราฟีของเหลวควบคู่แมสสเปกโตรเมตรี C. amada แสดงฤทธิ์การยับยั้งไทโรซิเนสสูงสุด, ด้วย IC50 ที่ 53.4 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร ดังนั้นจึงได้รับเลือกสำหรับการแยกและทำให้บริสุทธิ์ของสารยับยั้งไทโรซิเนส สารประกอบที่ทำให้บริสุทธิ์คือซีเดอโรน (1), ฟูราโนไดอีโนน (2), 1,5-อีพ็อกซี-3-ไฮดรอกซี-1-(3,4-ไดไฮดรอกซี-5-เมทอกซีฟีนิล){ {13}}(4-ไฮดรอกซีฟีนิล) เฮปเทน (3), 3,5-ไดไฮดรอกซี-1-(3,4-ไดไฮดรอกซี ฟีนิล)-7-({{22 }}ไฮดรอกซี-3-เมทอกซีฟีนิล) เฮปเทน (4) และ 1,5- อีพ็อกซี 3-ไฮดรอกซี-1-(3,4-ไดไฮดรอกซี-5-เมทอกซีฟีนิล) -7-(4-ไฮดรอกซี-3-เมทอกซีฟีนิล) เฮปเทน (5) ค่า IC50 สำหรับเห็ดต่อต้านไทโรซิเนสกิจกรรมของสารประกอบ 1, 2, 3, 4 และ 5 คือ 108.2, 89.2, 92.3, 21.7 และ 41.3 ไมโครโมลาร์ตามลำดับ สารประกอบเหล่านี้ยังยับยั้งการทำงานของไทโรซิเนสภายในเซลล์ ซึ่งช่วยลดการสังเคราะห์เมลานินในเซลล์เมลาโนมา B16F10 สารประกอบ 4 แข็งแกร่งขึ้นอย่างมีนัยสำคัญต่อต้านไทโรซิเนสออกฤทธิ์มากกว่าอาร์บูติน (ยาควบคุมเชิงบวก) ไม่พบความแตกต่างที่มีนัยสำคัญในผลการยับยั้งไทโรซิเนสระหว่างสารประกอบ 5 และอาร์บูติน การค้นพบของเราแนะนำอย่างยิ่งว่า C. Amanda เป็นแหล่งของสารยับยั้งไทโรซิเนสตามธรรมชาติที่มีแนวโน้มว่าจะช่วยป้องกันการสร้างเม็ดสีและสามารถใช้เป็นเครื่องสำอางฟอกสีฟันได้

คำสำคัญ: Curcuma amada ● สารออกฤทธิ์ ● NMR ● ต่อต้านไทโรซิเนส ● แอนติเมลาโนเจนิค

Cเลียไปที่ Cistanche เพื่อต่อต้านไทโรซิเนส

บทนำ

เมลานินเป็นเม็ดสีดำในเส้นผมและผิวหนัง และจำเป็นต่อการปกป้องผิวจากรังสียูวี เม็ดสีผลิตโดยเซลล์เมลาโนไซต์ ซึ่งอยู่ในชั้นฐานของหนังแท้ผ่านกระบวนการทางสรีรวิทยาที่เรียกว่าการสร้างเม็ดสี อย่างไรก็ตาม การผลิตเมลานินที่ผิดปกติทำให้เกิดความผิดปกติทางผิวหนัง เช่น กระ ฝ้า เลนติจีนส์ จุดด่างอายุ อีฟีไลด์ และรอยดำหลังการอักเสบ [1] ในอุตสาหกรรมอาหาร รอยดำจากผักและผลไม้ทำให้เกิดการสูญเสียคุณภาพทางโภชนาการและมูลค่าตลาดอย่างมีนัยสำคัญ [2] ควบคุมการสร้างเม็ดสีได้โดยการยับยั้งการทำงานของไทโรซิเนส เอ็นไซม์จำกัดอัตราสำหรับการสังเคราะห์เมลานินในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม พืช จุลินทรีย์ และเชื้อรา [3] ดังนั้นการยับยั้งการทำงานของไทโรซิเนสจึงช่วยป้องกันรอยดำและทำให้ผิวขาวขึ้น นอกจากนี้ยังควบคุมคุณภาพของผักและผลไม้ด้วยการควบคุมการเกิดสีน้ำตาลที่ไม่พึงประสงค์ของผักและอาหาร สารปรับสภาพผิวส่วนใหญ่ เช่น ไฮโดรควิโนน กรดอะซีลาอิก กรดโคจิก และอาร์บูติน เป็นสารยับยั้งไทโรซิเนสที่มีศักยภาพ อย่างไรก็ตาม พวกมันมีผลที่ไม่พึงประสงค์ต่างๆ เช่น ความเป็นพิษต่อเซลล์, มะเร็งผิวหนัง, โรคด่างขาว, การระคายเคือง, การลอกของผิวหนัง และรอยแดง [4] นอกจากนี้ กรดโคจิกและ -arbutin ยังแสดงให้เห็นถึงความเสถียรของสูตรผสมและความสามารถในการแทรกซึมของผิวหนัง และประสิทธิภาพในร่างกายต่ำ [5] เกลือปรอทอินทรีย์และอนินทรีย์บางชนิดมีฤทธิ์ต้านการสร้างเม็ดสีและใช้ในสารฟอกสีผิว อย่างไรก็ตาม โดยการดูดซึมทางผิวหนัง สารประกอบปรอทสามารถทำให้เกิดผลที่เป็นพิษ เช่น การเปลี่ยนสีผิว ความเสียหายของไต ปฏิกิริยาการแพ้ และรอยแผลเป็น [6] ดังนั้นจึงจำเป็นต้องมีการตรวจสอบสารยับยั้งไทโรซิเนสที่เป็นพิษน้อยกว่าและมีประสิทธิภาพมากกว่า ขมิ้น (วงศ์: Zingiberaceae; สกุล: Curcuma) ซึ่งเป็นพืชสมุนไพรแบบดั้งเดิมที่เติบโตอย่างโดดเด่นในเขตร้อนและกึ่งเขตร้อนของเอเชียและแอฟริกา มีหน้าที่ทางเภสัชวิทยาที่หลากหลาย มีการใช้ตามประเพณีในพิธีกรรมก่อนการแต่งงานเป็นเวลาหลายพันปีในอนุทวีปอินเดียในฐานะสารให้ความกระจ่างแก่ผิว เชื่อกันว่าขมิ้นช่วยปรับปรุงผิวโดยการลดการเจริญเติบโตของขนบนใบหน้า สิว และริ้วรอยของผิว [7, 8] ดังนั้นผลิตภัณฑ์ดูแลผิวที่เสริมด้วยขมิ้นจึงมีจำหน่ายในท้องตลาด [9] มีการระบุขมิ้นมากกว่า 70 สายพันธุ์/พันธุ์ที่มีคุณสมบัติทางเคมีและทางเภสัชวิทยาที่แตกต่างกัน อย่างไรก็ตาม ยังขาดข้อมูลทางวิทยาศาสตร์เกี่ยวกับคุณสมบัติต้านการสร้างเม็ดสีของขมิ้นสายพันธุ์ต่างๆ และส่วนประกอบออกฤทธิ์ที่มีศักยภาพในขมิ้น เคอร์คูมินอยด์เป็นสารประกอบออกฤทธิ์หลักที่รับผิดชอบต่อกิจกรรมทางชีวภาพส่วนใหญ่ของขมิ้น Curcuminoids มีศักยภาพในเวชสำอางเป็น anสารต้านอนุมูลอิสระ, ต้านการอักเสบ,และสารปรับสีผิว [7, 8]. อย่างไรก็ตาม ในการศึกษาก่อนหน้านี้ เราพบการเปลี่ยนแปลงที่สำคัญในเนื้อหาเคอร์คูมินอยด์ในขมิ้น และบางชนิด (C. amada, C. zedoaria) ไม่มีแม้แต่เคอร์คูมิน [10] เรายังรายงานสารต้านเชื้อราสารต้านอนุมูลอิสระและกิจกรรมขยายหลอดเลือดของขมิ้นชันและพันธุ์ต่างๆ [10-13] ดังนั้น การศึกษานี้จึงมีวัตถุประสงค์เพื่อประเมินผลของขมิ้นสายพันธุ์ต่างๆ ได้แก่ C. xanthorrhiza, C. aromatica, C. amada และ C. zedoaria ต่อเอนไซม์ไทโรซิเนสและเพื่อระบุสารประกอบทางเคมีจำเพาะที่รับผิดชอบสำหรับต่อต้านไทโรซิเนสกิจกรรม. นอกจากนี้เรายังประเมินฤทธิ์ยับยั้งไทโรซิเนสและฤทธิ์ต้านการสร้างเม็ดสีของสารออกฤทธิ์ที่ทำให้บริสุทธิ์ต่อการสังเคราะห์เมลานินในเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16F10

ผลลัพธ์และการอภิปราย

ในบรรดาขมิ้น 4 สายพันธุ์ที่แตกต่างกัน สารสกัด MeOH ของ C. amada แสดงผลการยับยั้งไทโรซิเนสของเห็ดสูงสุดด้วยค่า IC50 ที่ 53.4 ± 2.7 ตามด้วย C. xanthorrhiza, C. aromatic และ C. zedoaria (รูปที่ 1a) เคอร์คูมินเป็นส่วนประกอบสำคัญของขมิ้น (Curcuma longa) และมีฤทธิ์ทางชีวภาพที่หลากหลาย รวมทั้งฤทธิ์ต้านมะเร็ง ต้านการอักเสบ ต้านแบคทีเรีย ต้านเชื้อรา และสารต้านอนุมูลอิสระ แสดงให้เห็นว่ามีฤทธิ์ต้านไทโรซิเนสที่มีศักยภาพ 75- เท่ามากกว่าอาร์บูตินและกรดโคจิก [14] อย่างไรก็ตาม ในการศึกษาก่อนหน้านี้ เรารายงานว่าเนื้อหาเคอร์คูมินมีความแตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญในขมิ้นสายพันธุ์ต่างๆ [10]

Curcumin มีอยู่ใน C. xanthorrhiza และ C. aromatic แต่ไม่มีใน C. zedoaria และ C. amada [10] ผลการวิจัยที่น่าสนใจของการศึกษานี้คือ หากไม่มีเคอร์คูมิน C. amada แสดงฤทธิ์ยับยั้งไทโรซิเนสที่รุนแรง ผลลัพธ์นี้บ่งชี้ว่าต้องมีสารประกอบออกฤทธิ์บางอย่างของ C. amada เนื่องจากมีฤทธิ์ต้านไทโรซิเนสที่รุนแรง ฤทธิ์ต้านไทโรซิเนสของ C. xanthorrhiza และ C. aromatica อาจเกิดจากเนื้อหาของเคอร์คูมิน อย่างไรก็ตาม เราไม่สามารถแยกแยะความเป็นไปได้ที่จะมีสารประกอบอื่นๆ สารสกัด MeOH ของ C. amada ถูกแยกส่วนด้วยน้ำ, n-เฮกเซน และ EtOAc ในบรรดาเศษส่วนสามส่วนนี้ EtOAc แสดงผลการยับยั้งที่แข็งแกร่งกว่าน้ำและเอ็น-เฮกเซนอย่างมีนัยสำคัญ (รูปที่ 1b) ดังนั้นจึงนำส่วน EtOAc มาทำการแยกส่วนต่อไป ฤทธิ์ต้านไทโรซิเนสของเศษส่วนหกส่วน [n-hexane:EtOAc; ได้รับ 100:0 (F1), 80:20 (F2), 60:40 (F3), 40:60 (F4), 20:80 (F5) และ 0:100 (F6)] จากส่วน EtOAc ของ C. amada ถูกนำมาเปรียบเทียบ ในบรรดาเศษส่วนทั้งหกนี้ F6 และ F3 แสดงฤทธิ์ต้านไทโรซิเนสสูงกว่าส่วนอื่นๆ อย่างมีนัยสำคัญ (รูปที่ 1c) จากนั้นจึงระบุโครงสร้างทางเคมีของสารประกอบทั้งห้าจากเศษส่วน F3 และ F6 ตามสเปกตรัม 1 H NMR และ 13C NMR ของพวกมัน ข้อมูลสูงสุดมีดังนี้:

สารประกอบ 1:

คริสตัลรูปเข็มไม่มีสี UV λmax: nm 234, 285. ESI-MS ( plus ) m/z: 247.3 [M plus H] plus , 229.4 [ M plus H-H2O] plus . 1 H-NMR (CD3OD): δ 7.22 (1H, s, H-12), 5.59 (1H, br d, J=12 Hz, H{{20}}) , 3.99 (1H, s, H-5), 3.85 (1H, d, J=16 Hz, H-9a), 3.69 (1H, d, J=16 Hz, H-9b), 2.57 (1H, dddd, J=13, 13, 12, 4 Hz, H-2a), 2.26 (1H, m, H{{46) }}ก), 2.20 (1H, m, H{{50}}b), 2.09 (3H, s, H-13), 1.57 (3H, s, H-15), 1.32 (1H, ddd, J=13, 13, 4 Hz, H-3b), 1.28 (3H, s, H-14) 13C-NMR (CD3OD): δ 194.2(C-6) 160.2(C-8), 139.7(C12), 132.8 (C-1), 132.0(C-10 ), 124.3(C-11), 123.0(C-7), 67.8(C-5), 65.2(C-4), 42.5(C-9 ), 39.0(C-3), 25.4(C-2), 15.7 (C-15), 15.4(C-14), 10.7(C-13 ) (ข้อมูลเสริม) จากการเปรียบเทียบข้อมูลเหล่านี้กับรายงานในวรรณคดี [15, 16] พบว่าสารเป็นซีเดอโรน (รูปที่ 2) เป็น sesquiterpene ซึ่งแยกได้จาก C. amada และ C. zedoaria ก่อนหน้านี้ และได้รับรายงานว่ามีฤทธิ์ระงับปวด ต้านการอักเสบ ต้านเชื้อรา และพิษต่อเซลล์ [12, 17–20]

สารประกอบ 2:

น้ำมันไม่มีสี UV λmax: นาโนเมตร 243, 280 ESIMS ( บวก ) m/z: 231.0 [M บวก H] บวก , 223.3 [M บวก H-H2O] บวก 1 H-NMR (CD3OD): δ 7.16 (1H, s, H-12), 5.83 (1H, s, H-5), 5.21 (1H, dd, J=12 Hz , 5 Hz, H-1), 3.73 (1H, d, J=16 Hz, H-9a), 3.63 (1H, d, J=16 Hz, H -9b), 2.45 (1H, ddd, J=15 Hz, 11 Hz, 4 Hz, H-3a), 2.31 (1H, m, H-2a ), 2.20 (1H, dddd, J=12 Hz, 12 Hz, 12 Hz, 4 Hz, H-2b), 2.06 (3H, s, H{{57} }), 1.92 (3H, s, H-14), 1.89 (1H, m, H-3b), 1.25 (3H, s, H-15) 13C-NMR (CD3OD): δ 191.8 (C-6), 158.6 (C-8), 147.6 (C-4), 140.0 (C-12), 136.1 ( C-10), 133.3 (C-5), 132.0 (C-1), 124.6 (C-11), 123.1 (C-7), 42.4 ( C-9), 41.4 (C-3), 27.3 (C-2), 19.3 (C-14), 15.9 (C-2), 9.9 ( ค-13) (ข้อมูลเสริม) จากการเปรียบเทียบข้อมูลเหล่านี้กับรายงานในวรรณคดี [21] พบว่าสารเป็น furanodienone (รูปที่ 2) แยกได้จาก Lindera pulcherrima (Nees.) Benth อดีตเบ็ด f [22], Curcuma zedoaria [19], Curcuma amada [12] และ Curcuma wenyujin [23] furanosesquiterpenoid ที่แสดงฤทธิ์ต้านเชื้อรา [12], ต้านการอักเสบ [19], ต้านมะเร็ง [24], ฤทธิ์ต้านแบคทีเรียและต่อต้านอนุมูลอิสระ [22]

สารประกอบ 3:

น้ำมันสีเหลือง UV λ max: nm 275. ESIMS ( plus ) m/z: 383.3 [M plus Na] plus , 361.3 [M plus H] plus , 343.2 [M plus H-H2O] plus . 1 H-NMR (CD3OD): δ 6.99 (2H, dd, J=9, 2 Hz, H-2´´, -6´´), 6.67 (2H, d, J=9 Hz, H-3´´, -5´´), 6.52 (2H, s, H-2´, -6´), 4.63 (1H , br b, J=12 Hz, H-1), 4.21 (1H, m, H-3), 3.89 (1H, m, H-5), 3.85 ( 3H, s, 5´-OCH3), 2.63 (2H, m, H-7), 1.82 (1H, m, H-2ก), 1.78 (1H, m, H{{6{ {107}}}}ก), 1.73 (1H, m, H-2b), 1.69 (1H, m, H-4a), 1.68 (1H, m, H{{72} }b), 1.53 (1H, m, H-4b) 13C-NMR (CD3OD): δ 156.3 (C-4´´), 149.5 (C-5´), 146.4 (C-3´), 134.5 (C-4 ´), 134.44 (C-1´), 134.41 (C-1´´), 130.4 (C-2´´, -6´´), 116.1 (C{ {104}}´´, -5´´), 108.0 (C-2´), 102.8 (C-6´), 75.2 (C-1), 72.6 ( C-5), 65.6 (C3), 56.6 (5´-OCH3), 41.1 (C-2), 39.5 (C-4), 39.2 (C-6) 31.8 (C-7) (ข้อมูลเสริม) จากการเปรียบเทียบข้อมูลเหล่านี้กับข้อมูลที่รายงานในวรรณคดี [25] พบว่าสารเป็น 1,5-อีพ็อกซี่-3-ไฮดรอกซี-1-(3,4-ไดไฮดรอกซี{ {145}} เมทอกซีฟีนิล)-7-(4-ไฮดรอกซีฟีนิล) เฮปเทน (รูปที่ 2) แยกได้จากเหง้าของ Zingiber officinale และศึกษาคุณสมบัติของสารต้านอนุมูลอิสระ [25]

สารประกอบ 4:

น้ำเชื่อมหนืด UV λ max: nm 281. ESIMS ( plus ) m/z: 385.3 [M plus Na] plus , 363.3 [M plus H] plus , 345.2 [M plus H-H2O] plus . 1 H-NMR (CD3OD): δ 6.75 (1H, d, J=2 Hz, H-2´), 6.68 (1H, d, J=8 Hz, H{{21 }}´), 6.64 (1H, J=8 Hz, H-5´´), 6.61 (1H, J=2 Hz, H-2´´), 6.60 (1H, dd, J=8, 2 Hz, H-6´), 6.49 (1H, dd, J=8, 2 Hz, H-6´´), 3.80 (3H, s, 3´-OCH3), 3.73 (2H, m, H-3, -5), 2.64-2.47 (4H, m, H{{59) }}ก, -1ข, -7ก, -7ข), 1.71-1.65 (4H, m, H-2ก, {{ 68}}b, -6a, -6b), 1.61 (2H, m, H-4a, -4b) 13C-NMR (CD3OD): δ 148.8 (C-3´), 146.1 (C-3´´), 145.4 (C-4´), 144.2 (C-4 ´´), 135.24 (C-1´ หรือ C-1´´), 135.22 (C-1´ หรือ C-1´´), 121.8 (C{{101) }}´), 120.6 (C-6´´), 116.5 (C-2´´), 116.3 (C-5´´), 116.1 (C-5´ ), 113.2 (C-2´), 70.94 (C-3 หรือ C-5), 70.92 (C-3 หรือ C-5), 56.4 (3 ´-OCH3), 44.9 (C-4), 40.8 (C-2, -6), 32.3 (C-1), 32.1 (C-7) (ข้อมูลเสริม). จากการเปรียบเทียบข้อมูลเหล่านี้กับข้อมูลที่รายงานในวรรณคดี [26, 27] ระบุว่าสารเป็นน้ำมัน 3,5-ไดไฮดรอกซี-1-(3,4-ไดไฮดรอกซีฟีนิล){{150 }} (4-ไฮดรอกซี-3-เมทอกซีฟีนิล) เฮปเทน (รูปที่ 2) แยกได้จากเหง้า Tacca chantrieri [26] และ Curcumalonga L. [27] พวกมันคือไดอาริลเฮปตานอยด์ที่มีฤทธิ์เป็นพิษต่อเซลล์ [26] และต้านเนื้องอก [27]

สารประกอบ 5:

น้ำมันไม่มีสี UV λ max nm: 279. ESI-MS ( plus ) m/z: 413.3 [M plus Na] plus , 391.3 [M plus H] plus , 373.3 [M plus HH2O] plus . 1 H-NMR (CD3OD): δ 6.76 (1H, s, H-2´´), 6.67 (1H, d, J=8 Hz, H{{20}} ´´), 6.21 (1H, dd, J=8, 2 Hz, H-6´), 6.53 (2H, s, H-2´, -6´´ ), 4.63 (1H, br d, J=12 Hz, H-1), 4.21 (1H, m, H-3), 3.83 (3H, s, 5´-OCH3) , 3.78 (3H, s, 3-OCH3), 2.65 (2H, m, H-7), 1.84 (1H, m, H-2a), 1.79 (1H, m, H-6ก), 1.74 (1H, m, H-2b), 1.69 (1H, m, H-4a), 1,68 (1H, m, H{{ 75}}b), 1.53 (1H, m, H-4b) 13C-NMR (CD3OD): δ 149.5 (C-5´), 148.8 (C-3´´), 146.4 (C-3´), 145.4 (C-4 ´´), 135.3 (C-1´), 135.2 (C-1´´), 134.4 (C-4´), 121.9 (C-6}´´), 116.1 (C-5´´), 113.4 (C-2´´), 108.0 (C-2´), 102.7 (C-6´), 75.2 (C{ {121}}), 72.5 (C-5), 65.6 (C-3), 56.6 (5´-OCH3), 56.3 (3´´-OCH3), 41.2 (C{{140}) }), 39.4 (C-4), 39.3 (C-6), 32.2 (C-7) (ข้อมูลเสริม) จากการเปรียบเทียบข้อมูลเหล่านี้กับข้อมูลที่รายงานในวรรณคดี [20] พบว่าสารเป็น 1,5-อีพ็อกซี่-3-ไฮดรอกซี-1-(3,4-ไดไฮดรอกซี{ {157}}เมทอกซีฟีนิล)- 7-(4-ไฮดรอกซี-3-เมทอกซีฟีนิล) เฮปเทน (รูปที่ 2) และไม่มีข้อมูลเกี่ยวกับการออกฤทธิ์ทางชีวภาพของพวกมัน เราแยกสารประกอบ 3, 4 และ 5 ออกจาก C. amada เป็นครั้งแรก สารประกอบทั้งหมดแสดงฤทธิ์ยับยั้งเอนไซม์ไทโรซิเนสจากเห็ด

สารประกอบห้าชนิด ได้แก่ ซีเดอโรน ฟูราโนไดอีโนน 1,5-อีพ็อกซี่-3-ไฮดรอกซี-1-(3,4-ไดไฮดรอกซี-5-เมทอกซีฟีนิล)- 7-( 4-ไฮดรอกซีฟีนิล) เฮปเทน, 3,5-ไดไฮดรอกซี-1-(3,4-ไดซีไฮดรอกซีฟีนิล)-7-(4-ไฮดรอกซี-3- เมทอกซีฟีนิล) เฮปเทนและ 1,5-อีพอกซี-3-ไฮดรอกซี-1-(3,4-ไดไฮดรอกซี-5-เมทอกซีฟีนิล)- 7-(4- ไฮดรอกซี-3-เมทอกซีฟีนิล) เฮปเทนถูกแยกได้จากเศษส่วน F3 และ F6 สารประกอบที่แยกได้แสดงฤทธิ์ต้านไทโรซิเนสในลักษณะที่ขึ้นกับความเข้มข้น ในบรรดาสารประกอบทั้งห้า สารประกอบ 4 มีฤทธิ์ต้านไทโรซิเนสที่แรงกว่าอาร์บูตินอย่างมีนัยสำคัญ ฤทธิ์ต้านไทโรซิเนสระหว่างสารประกอบ 5 และอาร์บูตินไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญ (รูปที่ 3) ศึกษาผลของสารประกอบที่แยกได้ต่อความมีชีวิตของเซลล์ในเซลล์มะเร็งผิวหนังชนิด B16F10 ของหนู เซลล์ถูกบำบัดด้วยความเข้มข้นของสารประกอบ 50, 100, 200 และ 400 ไมโครโมลาร์เป็นเวลา 48 ชั่วโมง สารประกอบที่แยกได้ไม่แสดงผลที่เป็นพิษต่อเซลล์สูงถึง 200 ไมโครโมลาร์ อย่างไรก็ตาม ประมาณห้าสิบเปอร์เซ็นต์ของการตายของเซลล์ถูกสังเกตพบในทุกกรณีที่ความเข้มข้น 400 ไมโครโมลาร์ (รูปที่ 4) ดังนั้นความเข้มข้นสูงถึง 200 ไมโครโมลาร์จึงถูกใช้เพื่อประเมินฤทธิ์ต้านไทโรซิเนสภายในเซลล์และฤทธิ์ต้านการสร้างเม็ดสี

เพื่อตรวจสอบฤทธิ์ต้านเมลาโนเจนและต้านไทโรซิเนสของสารประกอบที่แยกได้ ผลกระทบต่อปริมาณเมลานินและกิจกรรมของไทโรซิเนสได้รับการประเมินในเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16F10 ตามที่แสดงในตารางที่ 1 สารประกอบที่แยกได้ของเรายับยั้งปริมาณเมลานินภายในเซลล์และการออกฤทธิ์ของไทโรซิเนสโดยขึ้นกับขนาดยา สารประกอบ 4 แข็งแกร่งกว่าอาร์บูตินของยากลุ่มควบคุมเชิงบวกอย่างมีนัยสำคัญทั้งในผลการยับยั้งเมลานินและไทโรซิเนส ไม่พบความแตกต่างที่มีนัยสำคัญระหว่างสารประกอบ 5 และอาร์บูติน เนื่องจากเซลล์ไทโรซิเนสช่วยเพิ่มการผลิตเมลานิน การลดการทำงานของไทโรซิเนสจึงเป็นกลยุทธ์ที่มีประสิทธิภาพสำหรับการพัฒนาสารต่อต้านการสร้างเม็ดสี สำหรับสิ่งนี้ เราประเมินคุณสมบัติการยับยั้งของกิจกรรมไทโรซิเนสภายในเซลล์และการสร้างเมลาโนเจเนซิสในเซลล์เมลาโนมา B16F10 คล้ายกับการค้นพบฤทธิ์ยับยั้งไทโรซิเนสของเห็ด สารประกอบที่แยกได้จะยับยั้งการทำงานของไทโรซิเนสภายในเซลล์และการสร้างเมลาโนเจเนซิสในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา ฤทธิ์ต้านไทโรซิเนสของสารประกอบที่แยกได้ส่งผลให้เกิดคุณสมบัติต้านการสร้างเม็ดสี ลำดับของฤทธิ์ต้านไทโรซิเนสและฤทธิ์ต้านการสร้างเม็ดสีของสารประกอบเหล่านี้คือ สารประกอบ 4 > อาร์บูติน > 5 > 2 > 3 > 1 ค่า IC50 ที่คำนวณได้ของสารประกอบ 4 ต่ำกว่าอาร์บูตินอย่างมีนัยสำคัญ ประสิทธิผลของสารประกอบ 4 คือ 1.9- ถึง 5- เท่าสูงกว่าสารประกอบอื่นๆ อีกสี่เท่า สารประกอบ 5 ยังแสดงฤทธิ์ต้านไทโรซิเนสที่รุนแรงซึ่งเทียบได้กับของอาร์บูติน ผลลัพธ์ของเราระบุว่าสารประกอบ 4 และ 5 สามารถใช้เป็นสารยับยั้งไทโรซิเนสตามธรรมชาติและเครื่องสำอางที่ทำให้ผิวขาวได้ ความเครียดออกซิเดชันได้รับการเสนอให้มีส่วนร่วมในกลไกพื้นฐานของการผลิตเมลานินมากเกินไป [28] ดังนั้นจึงมีการตรวจสอบบทบาทของสารต้านอนุมูลอิสระในความผิดปกติของผิวหนังที่หลากหลาย รวมทั้งการก่อมะเร็งด้วยแสงหรือเมลาโนมา [9] ก่อนหน้านี้เราและคนอื่นๆ ได้รายงานคุณสมบัติต่อต้านอนุมูลอิสระของ C. amada [13, 29] ที่อาจส่งผลต่อฤทธิ์ต้านการเกิดมะเร็งของสารประกอบที่แยกได้ ในการศึกษานี้ เราตรวจพบผลการยับยั้งของสารประกอบที่แยกได้ต่อการสังเคราะห์เมลานินภายในเซลล์และกิจกรรมของไทโรซิเนสที่เกิดจาก -MSH ดังนั้น สารประกอบที่แยกออกมาของเราจึงสามารถนำมาใช้เป็นตัวแทนในเครื่องสำอางที่ใช้งานได้จริง เพื่อพัฒนาทรีตเมนต์การฟอกสีผิวที่มีประสิทธิภาพ

บทสรุป

เราขอแนะนำอย่างยิ่งว่า C. amada สามารถมีบทบาทสำคัญในการเป็นตัวยับยั้งไทโรซิเนสที่มีประสิทธิภาพ C. amada และสารออกฤทธิ์ทางชีวภาพของมันสามารถนำมาใช้ในอุตสาหกรรมเครื่องสำอางเป็นสารฟอกสีธรรมชาติ อุตสาหกรรมอาหารเป็นสารต้านการเกิดสีน้ำตาล และด้านการแพทย์สำหรับการรักษารอยดำ อย่างไรก็ตาม จำเป็นต้องมีการศึกษาเพิ่มเติมเพื่อตรวจสอบฤทธิ์ต้านการสร้างเม็ดสีของสารประกอบที่แยกได้ในแบบจำลองสัตว์

วัสดุและวิธีการ

เคมีภัณฑ์

ซื้อ Tyrosinase จากเห็ดและอาร์บูตินจาก Sigma–Aldrich Chemical Co. (St. Louis, MO, USA) L-Tyrosine มาจาก Wako pure Chemical Industries Ltd. (โอซาก้า ประเทศญี่ปุ่น) เมธานอล (MeOH), เอทิลอะซิเตต (EtOAc) และ n-เฮกเซนถูกซื้อจาก Nacalai Tesque (เกียวโต ประเทศญี่ปุ่น) ซื้อซิลิกาเจล (63–200 μm, Kanto Chemical Co. Tokyo, Japan) และ MeOH-d4 (CD3OD, Merck KGaA, Germany)

การเตรียมวัสดุปลูก ขมิ้น 4 สายพันธุ์ ได้แก่ C. xanthorrhiza, C. aromatica, C. amada และ C. zedoaria ที่ปลูกในแปลงดินสีเทา (ทรายหยาบ 3.6 เปอร์เซ็นต์ ทรายละเอียด 30.9 เปอร์เซ็นต์ , ตะกอน 24.3 เปอร์เซ็นต์ , ดินเหนียว 32.8 เปอร์เซ็นต์ , pH 7.4, NO{{10}}N 0.07 เปอร์เซ็นต์ , NH4-N 0.08 เปอร์เซ็นต์ , P 4.6 ng/g, K 42.9 ng/g) ที่ ศูนย์วิทยาศาสตร์ภาคสนามกึ่งเขตร้อน มหาวิทยาลัยริวกิว เมืองโอกินาวา ประเทศญี่ปุ่น อุณหภูมิ ความชื้น และปริมาณน้ำฝนเฉลี่ยรายเดือนในช่วงระยะเวลาการเพาะปลูกคือ 17–29 องศา 61–83 เปอร์เซ็นต์ และ 22–369 มม. ตามลำดับ จัดให้มีการปฏิบัติทางการเกษตรทั่วไปรวมทั้งการให้ปุ๋ยและการชลประทาน เหง้าถูกเก็บเกี่ยวเมื่อยอดของสายพันธุ์เหี่ยวเฉาอย่างสมบูรณ์ ล้างเหง้า หั่นบาง ๆ และผึ่งให้แห้งในเตาอบลมร้อนที่ 50 องศาเป็นเวลา 72 ชั่วโมง

การสกัดตัวอย่าง

การสกัดถูกดำเนินการโดยละลายผงขมิ้นต่างๆ (300 กรัม) ลงใน MeOH (3 ลิตร) ที่อุณหภูมิห้อง (25 องศา ) และความดันบรรยากาศ และเก็บไว้เป็นเวลาสองวันด้วยการกวนด้วยแม่เหล็กอย่างต่อเนื่องเพื่อป้องกันการเกิดออกซิเดชันทางอากาศและป้องกันแสงแดด สารประกอบที่ละลายได้ในตัวทำละลายถูกกรองโดยใช้กระดาษกรอง (No. 2, Advantec, Tokyo Roshi Kaisha Ltd., Tokyo, Japan) ตัวทำละลายสด (MeOH) ถูกเติมลงในวัสดุจากพืชที่ใช้แล้ว และกระบวนการถูกทำซ้ำสามครั้ง สารละลายที่ถูกกรองที่มีสารประกอบจากพืชถูกทำให้แห้งโดยเครื่องระเหยแบบหมุนภายใต้แรงดันที่ลดลงที่ 40 องศา ผลผลิตของสารสกัดทั้งหมดถูกเก็บไว้ในตู้เย็นที่ 4 องศาสำหรับการวิเคราะห์ทดลอง

การทดสอบการยับยั้งไทโรซิเนส

กิจกรรมการยับยั้งไทโรซิเนสถูกกำหนดตามวิธีการก่อนหน้า [30] การวัดความเข้มข้นของ DOPA chrome ที่เกิดจากการกระทำของเอนไซม์ไทโรซิเนสบนสารตั้งต้นของไทโรซีน โดยย่อ ตัวอย่างทดสอบถูกละลายใน 80 เปอร์เซ็นต์ MeOH เพื่อให้ได้ความเข้มข้นที่ต่างกัน (25, 50 และ 100 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) แผ่นหลุม 96-หลุมถูกตั้งค่าตามลำดับต่อไปนี้: 120 ไมโครลิตรของบัฟเฟอร์ฟอสเฟต (20 มิลลิโมลาร์, pH 6.8), ตัวอย่าง 20 ไมโครลิตร และไทโรซิเนสเห็ด 20 ไมโครลิตร (500 U/mL ในฟอสเฟต 20 มิลลิโมลาร์ กันชน). หลังจากการฟักไข่เป็นเวลา 15 นาทีที่ 25 องศา ปฏิกิริยาเริ่มต้นโดยการเติมสารละลาย L-tyrosine ขนาด 0.85 มิลลิโมล 20 ไมโครลิตร จากนั้นจึงบ่มเป็นเวลา 10 นาทีที่ 25 องศา กิจกรรมของไทโรซิเนสถูกกำหนดโดยการวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 470 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลท (เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ Biotek Powerwave XS2) Arbutin ถูกใช้เป็นตัวควบคุมเชิงบวก ในขณะที่ 80 เปอร์เซ็นต์ MeOH ถูกใช้เป็นตัวควบคุมเชิงลบ เปอร์เซ็นต์ของการยับยั้งไทโรซิเนสคำนวณได้ดังนี้:

โดยที่ C คือการดูดกลืนแสงของตัวควบคุมเชิงลบ B คือการดูดกลืนแสงของช่องว่าง และ S คือการดูดกลืนแสงของตัวอย่างทดสอบ

การแยกสารออกฤทธิ์ทางชีวภาพจากสารสกัดหยาบของ Curcuma amada

เมื่อพิจารณาผลของสารสกัดขมิ้น 4 ชนิด C. amada มีฤทธิ์ต้านไทโรซิเนสสูงกว่าชนิดอื่นๆ อย่างมีนัยสำคัญ ดังนั้น การทำบริสุทธิ์โดยอาศัยการทดสอบทางชีวภาพของสารประกอบออกฤทธิ์จากสารสกัดหยาบของ C. amada ได้ดำเนินการ ในการระบุสารประกอบต้านไทโรซิเนส การแยกส่วนจากสารสกัดหยาบของ C. amada ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ในรูปที่ 5 สารสกัดหยาบถูกเจือจางด้วยน้ำกลั่นแล้วสกัดด้วย n-hexane ตามด้วย EtOAc ปริมาตรที่เท่ากันของตัวทำละลายแต่ละชนิดและสารละลายที่สกัดแบบหยาบถูกผสมโดยการเขย่าเป็นเวลา 3 นาทีในกรวยแยก เศษส่วนทั้งหมดถูกทำให้เข้มข้นจนแห้งโดยเครื่องระเหยแบบหมุนที่ 40 องศา ฤทธิ์ต้านไทโรซิเนสของเศษส่วนทั้งสามถูกกำหนดตามขั้นตอนข้างต้น เนื่องจากเศษส่วนของ EtOAc แสดงฤทธิ์ต้านไทโรซิเนสสูงสุด จึงถูกเลือกสำหรับการแยกและทำให้บริสุทธิ์ของสารประกอบออกฤทธิ์ทางชีวภาพ เศษ EtOAc ที่ออกฤทธิ์ถูกระเหยจนแห้งและถูกโครมาโตกราฟีบนคอลัมน์ซิลิกาเจล (75 กรัม) (30 × 3 ซม.) การชะดำเนินการโดยใช้ n-hexane และ EtOAc ด้วยปริมาณ EtOAc ที่เพิ่มขึ้น [100:0 (F1), 80:20 (F2), 60:40 (F3), 40:60 (F4), 20:80 (F5) และ 0:100 (F6)] ฤทธิ์ต้านไทโรซิเนสของเศษส่วนทั้งหกนี้ดำเนินการตามขั้นตอนข้างต้น และกิจกรรมส่วนใหญ่พบใน F3 และ F6 เศษส่วน F3 และ F6 ถูกทำให้บริสุทธิ์โดย C18 รีเวิร์สเฟส HPLC (COSMOSIL 5C18-AR-II; Nacalai Tesque, Inc., Kyoto, Japan) ที่ติดตั้งน้ำและอะซิโตไนไทรล์เป็นเฟสเคลื่อนที่ที่มีอัตราการไหล 2.5 มล. min-1 ตรวจพบที่ 280 นาโนเมตร

สามพีคจาก F3 ชะที่ 9.55, 13.66 และ 16.47 นาที และสี่พีคจาก F6 ที่ชะล้างที่ 11.56, 12.20, 12.75 และ 1503 นาที เป็นสารสีขาวไม่มีสี ซึ่งยับยั้ง ตรวจพบกิจกรรมในเศษส่วนพีคห้าส่วนที่ถูกชะที่ 9.55 และ 16.47 นาทีจาก F3 และ 11.56, 12.75 และ 1503 นาที (ข้อมูลเสริม) จาก F6 (รูปที่ 5) สารประกอบที่ถูกแยกเดี่ยว (~10 มก.) ถูกละลายใน MeOH-d4 และจากนั้นนำไปวิเคราะห์ทางสเปกตรัม สเปกตรัมคลื่นแม่เหล็กไฟฟ้านิวเคลียร์ (NMR) ถูกบันทึกบนสเปกโตรมิเตอร์ BRUKER NMR (500 MHz สำหรับ 1 H และ 125 MHz สำหรับ 13C) ที่อุณหภูมิห้อง การเปลี่ยนแปลงทางเคมี (δ) ถูกบันทึกเป็นส่วนต่อล้าน (ppm) เทียบกับ tetramethylsilane (TMS) เป็นมาตรฐานภายใน การทดลองแมสสเปกโตรเมทรีได้ดำเนินการบนเครื่องสเปกโตรมิเตอร์มวลน้ำโดยใช้โพรบอิเล็กโตรสเปรย์ไอออไนซ์ (ESI − MS) ภายใต้เงื่อนไขเครื่องมือต่อไปนี้: คอลัมน์: COSMOSIL 5C18-AR-II, (2 × 150) มม. ตัวทำละลาย A: น้ำ (กรดฟอร์มิก 0.1 เปอร์เซ็นต์), ตัวทำละลาย B: อะซิโตไนไตรล์, อัตราการไหล: 4 มล./นาที, ปริมาตรการฉีด: 100 µL, เวลาทำงาน: 35 นาที, โปรแกรมเวลาสำหรับ F3: 75 เปอร์เซ็นต์ B (0 นาที) → 75 เปอร์เซ็นต์ B (20 นาที) → 100 เปอร์เซ็นต์ B (20.1 นาที) → 100 เปอร์เซ็นต์ B (27 นาที) → 75 เปอร์เซ็นต์ B (27.1 นาที) → 75 เปอร์เซ็นต์ B (35 นาที) โปรแกรมเวลาสำหรับ F6: 45 เปอร์เซ็นต์ B (0 นาที) → 45 เปอร์เซ็นต์ B (14 นาที) → 100 เปอร์เซ็นต์ B (14.1 นาที) → 100 เปอร์เซ็นต์ B (20 นาที) → 45 เปอร์เซ็นต์ B (20.1 นาที) → 45 เปอร์เซ็นต์ B (25 นาที). โหมดปั๊ม: การไล่ระดับสีแบบไบนารี รายละเอียดเตาอบ: CTO-20AC อุณหภูมิ 40 องศา โหมดไอออไนซ์ MS: ES (บวก) แรงดันไฟของเส้นเลือดฝอย: 4.0 kV แรงดันกรวย: 20 V อุณหภูมิต้นทาง: 120 องศา อุณหภูมิการละลาย: 350 องศา การไหลของก๊าซรูปกรวย: 100 ลิตร/ชม. การไหลของก๊าซละลาย: 800 ลิตร /ชม. (ข้อมูลเสริม)

ฤทธิ์ต้านไทโรซิเนสของสารประกอบที่แยกได้

สารประกอบที่แยกได้ถูกละลายใน MeOH ที่ความเข้มข้น 5, 10, 30, 50, 100 และ 200 ไมโครโมลาร์สำหรับสารประกอบแต่ละชนิด ฤทธิ์ต้านไทโรซิเนสถูกกำหนดโดยใช้ขั้นตอนที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้

การยับยั้งไทโรซิเนสและการสร้างเม็ดสีภายในเซลล์โดยสารประกอบที่แยกได้

การเพาะเลี้ยงเซลล์

เซลล์เมลาโนมา B16F10 ถูกเพาะเลี้ยงในตัวกลางของ Eagle (DMEM) ดัดแปลงของ Dulbecco เสริมด้วยซีรัมของตัวอ่อนในครรภ์ที่ไม่กระตุ้นด้วยความร้อน 10 เปอร์เซ็นต์ (FBS) และเพนิซิลลิน 1 เปอร์เซ็นต์ (10,{6}} U/mL)/streptomycin (100 ug/mL) ที่ 37 องศาในบรรยากาศที่มีความชื้นซึ่งมี CO2 5 เปอร์เซ็นต์

ความมีชีวิตของเซลล์

เซลล์ B16F10 ถูกชุบที่ความหนาแน่น 5 × 104 เซลล์/หลุมในจาน 96-หลุม หลังจากผ่านไป 24 ชั่วโมง เซลล์ถูกเปิดเผยต่อความเข้มข้นต่างๆ ของสารประกอบที่ถูกแยกเดี่ยวและถูกบ่มเป็นเวลาเพิ่มเติม 48 ชั่วโมงที่ 37 องศา หลังจากการฟักตัว ความอยู่รอดของเซลล์ถูกกำหนดหาโดยการสอบวิเคราะห์ MTS เติมสารละลาย MTS 20 ไมโครลิตรและบ่มเป็นเวลา 60 นาที หลังจากการฟักไข่ การดูดกลืนแสงของเซลล์ถูกกำหนดหาที่ 490 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลท (Benchmark Plus)

ฤทธิ์ต้านไทโรซิเนสและต้านการสร้างเม็ดสีของสารประกอบที่แยกได้

การกำหนดปริมาณเมลานินในเซลล์และการทดสอบกิจกรรมของไทโรซิเนสได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [31] โดยมีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย เซลล์เมลาโนมา B16F10 ถูกเคลือบที่ความหนาแน่น 5 × 104 เซลล์/หลุมในจาน 96-หลุม หลังจากผ่านไป 24 ชั่วโมง เซลล์ถูกเปิดเผยต่อความเข้มข้นต่างๆ ของสารประกอบที่ถูกแยกเดี่ยวหรืออาร์บูติน หลังจาก 1 ชั่วโมง ฮอร์โมนกระตุ้นเมลาโนไซต์ ( -MSH) 100 นาโนโมลาร์ ถูกเติม และเซลล์ถูกบ่มเป็นเวลาเพิ่มเติม 48 ชั่วโมงที่ 37 องศา สำหรับการศึกษาฤทธิ์ต้านไทโรซิเนส จากนั้นล้างเซลล์ด้วยบัฟเฟอร์ฟอสเฟตที่เย็นจัดและสลายด้วยบัฟเฟอร์ฟอสเฟต (pH 6.8) ที่มีไทรทัน-เอ็กซ์ 1 เปอร์เซ็นต์ (90 ไมโครลิตร/หลุม) เพลตถูกแช่แข็งที่ −80 องศา เป็นเวลา 30 นาที หลังจากการละลายและการผสม 10 ไมโครลิตรของ 1 เปอร์เซ็นต์ L-DOPA ถูกเติมลงในแต่ละหลุม หลังจากการบ่มที่ 37 องศาเป็นเวลา 2 ชั่วโมง การดูดกลืนแสงถูกวัดที่ 490 นาโนเมตร สำหรับการสอบวิเคราะห์ปริมาณเมลานิน เซลล์ถูกล้างสองครั้งด้วยบัฟเฟอร์ฟอสเฟตและจากนั้นถูกละลายใน 100 ไมโครลิตรของ NaOH (1 นิวตัน) ที่มี DMSO 10 เปอร์เซ็นต์ ตัวอย่างถูกบ่มที่ 80 องศาเป็นเวลา 1 ชั่วโมงและผสมเพื่อทำให้เมลานินละลาย ความหนาแน่นเชิงแสงของโฮโมจีเนตแบบผสมถูกวัดที่ 490 นาโนเมตร

การวิเคราะห์ทางสถิติ

ผลลัพธ์แสดงเป็นค่าเฉลี่ย± SEM ความแตกต่างทางสถิติระหว่างทั้งสองวิธีได้รับการประเมินโดยการทดสอบ t ของนักเรียน การเปรียบเทียบหลายรายการดำเนินการโดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียวตามด้วยการทดสอบ Bonferroni ความแตกต่างถือว่ามีนัยสำคัญที่ P <>

นี่คือผลิตภัณฑ์ป้องกันความเมื่อยล้าของเรา! คลิกที่ภาพเพื่อดูข้อมูลเพิ่มเติม!

อ้างอิง

1. Solano F, Briganti S, Picardo M, Ghanem GH สารลดสี: การตรวจสอบล่าสุดในด้านชีววิทยา เคมี และทางคลินิก ความละเอียดเซลล์รงควัตถุ 2549;19:550–71.

2. Loizzo MR, Tundis R, Menichini F. สารยับยั้งไทโรซิเนสตามธรรมชาติและสังเคราะห์เป็นสารต้านการเกิดสีน้ำตาล: การปรับปรุง คอมพ์ Rev Food Sci Food Saf. 2012;11:378–98.

3. Lin YS, Chen HJ, Huang JP, Lee PC, Tsai CR, Hsu TF, และคณะ จลนพลศาสตร์ของฤทธิ์ยับยั้งเอนไซม์ไทโรซิเนสโดยใช้สารสกัดจากใบวินิเฟอราของ Viti Biomed Res Int. 2017:5232680.

4. Manini P, Napolitano A, Westerhof W, Riley PA, d' Ischia M. ปฏิกิริยาออร์โธ-ควิโนนที่เกิดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันของไทโรซิเนสที่เร่งปฏิกิริยาของโมโนเบนโซนที่ทำให้ผิวลอกออก: ปฏิกิริยาการมีเพศสัมพันธ์ในตัวเองและปฏิกิริยาผันกลับของไทออล และผลกระทบที่เป็นไปได้สำหรับเมลาโนไซต์ ความเป็นพิษ Chem Res ท็อกซิคอล. 2552;13:1398–405.

5. Couteau C, Coiffard L. ภาพรวมของสารฟอกสีผิว: ยาและผลิตภัณฑ์เครื่องสำอาง เครื่องสำอาง. 2016;3:27.

6. Al-Saleh I, Shinwari N, El-Doush I, Billedo G, Al-Amodi M, Khogali F. การเปรียบเทียบระดับปรอทในเนื้อเยื่อต่างๆ ของหนูเผือกและหนูที่มีเม็ดสีที่รักษาด้วยครีมทาผิวปรอทสองยี่ห้อที่แตกต่างกัน Biometals: บทบาท Int J พบไอออน Biol, Biochem, Med 2004;17:167–75.

7. Gopinath H, Karthikeyan K. Turmeric: เครื่องปรุงรสเครื่องสำอางและการรักษา อินเดีย เจ เดอร์มาทอล เวเนเรออล เลพรอล 2018;84:16–21.

8. Vaughn AR, Branum A, Sivamani RK. ผลของขมิ้นชัน (Curcuma longa) ต่อสุขภาพผิว: การทบทวนหลักฐานทางคลินิกอย่างเป็นระบบ Phytother Res. 2016;30:1243–64.

9. บาลิกา MS, Katiyar SK. การป้องกันเคมีของการเกิดมะเร็งด้วยแสงโดยพืชอาหารที่เลือก โฟโตเคม Photobio วิทย์. 2006;5:243–53.

10. Akter J, Hossain MA, Sano A, Takara K, อิสลาม MZ, Hou DX ฤทธิ์ต้านเชื้อราของขมิ้นหลายสายพันธุ์และหลายสายพันธุ์ (Curcuma spp.) ต่อ Fusarium Solani Sensu Lato Pharm Chem J. 2018;52:292–7.

11. Akter J, อิสลาม MZ, Hossain MA, Kawabata S, Takara K, Nguyen H, et al. การคลายตัวของหลอดเลือดแดงสมองหมูที่ไม่ขึ้นกับเอนโดทีเลียมและแคลเซียมแชนเนลโดยอาศัยขมิ้นชันและสายพันธุ์ต่างๆ เจ ตราดิษฐ์ เสริมเมดิ. 2018;9:297–303.

12. Akter J, Takara K, อิสลาม MZ, Hossain MA, Sano A, Hou DX การแยกและการอธิบายโครงสร้างของสารต้านเชื้อราจาก Curcuma amada เอเชี่ยน แพค เจ ทรอป เมด 2019;12:123–9.

13. Akter J, Hossain MA, Takara K, อิสลาม MZ, Hou DX ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของขมิ้นชันชนิดต่างๆ (Curcuma spp): การแยกสารออกฤทธิ์ คอมพ์ ไบโอเคม Physiol C Toxicol Pharm. 2019;215:9–17.

14. คุณลัด พี, ทุนดูลาเวช วาย, ศุภศิริ ที, ชุตตง ว. ฤทธิ์ยับยั้งเอนไซม์เคอร์คูมินอยด์จากผงขมิ้น (Curcuma longa Linn.). เจ มศว วิทย์. 2008;24:125–39.

15. Giang PM, Son PT. การแยก sesquiterpenoids จากเหง้าของ Vietnam Curcuma aromatic Salisb เจ เคม. 2000;38:96–9.

16. Asem SD, Laitonjan SW. การศึกษาความสัมพันธ์เชิงโครงสร้างและความไม่เชิงเส้นของซีเดอโรนจากเหง้าของขมิ้นชัน อินเจ เคม. 2012;51:1738–42.

17. Faiz Hossain C, Al-Amin M, Rahman KM, Sarker A, Alam MM, Chowdhury MH, และคณะ ยาแก้ปวดจาก Curcuma amada เจ เอธโนฟาร์มาคอล. 2015;163:273–7.

18. Ahmed Hamdi OA, Syed Abdul Rahman SN, Awang K, Abdul Wahab N, Looi CY, Thomas NF, Abd Malek SN ส่วนประกอบที่เป็นพิษต่อเซลล์จากเหง้าของ Curcuma zedoaria วิทย์โลก J. 2014;2014:321943.

19. Makabe H, Maru N, Kuwabara A, Kamo T, Hirota M. สารต้านการอักเสบ sesquiterpenes จาก Curcuma zedoaria แนทโปรดักส์ Res. 2006;20:680–5.

20. Kikuzaki H, Nakatani N. Cyclic diarylheptanoids จากเหง้าของ Zingiber officinale ไฟโตเคมี. 1996;43:273–7.

21. Dekebo A, Dagne E, Sterner O. Furanosesquiterpenes จาก Commiphora sphaerocarpa และสารปนเปื้อนที่เกี่ยวข้องกับมดยอบแท้ ฟิตเทอราเปีย. 2002;73:48–55.

22. โจชิ เอสซี, มาเทลา ซีเอส. ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระและต้านเชื้อแบคทีเรียของน้ำมันหอมระเหยจากใบและ furanodienone และ curzerenone ที่เป็นส่วนประกอบจาก Lindera pulcherrima (Nees.) Benth อดีตเบ็ด ฉ. Pharmacogn Res. 2012;4:80–4.

23. Yang FQ, Li SP, Zhao J, Lao SC, Wang YT. การปรับสภาพ GC–MS ให้เหมาะสมที่สุดโดยพิจารณาจากความละเอียดและความเสถียรของสารที่วิเคราะห์เพื่อกำหนด sesquiterpenoids เก้าชนิดในเหง้าขมิ้นชัน 3 สายพันธุ์พร้อมกัน J Pharm Biomed ก้น 2007;43:73–82.

24. Li YW, Zhu GY, Shen XL, Chu JH, Yu ZL, Fong WF. Furanodienone ยับยั้งการเพิ่มจำนวนและการอยู่รอดของเซลล์โดยการยับยั้งการส่งสัญญาณ ER ในเซลล์มะเร็งเต้านมของมนุษย์ MCF-7 เจ เซลล์ ไบโอเคม. 2011;112:217–24.

25. เต่า QF, Xu Y, Lam RY, Schneider B, Dou H, Leung PS, et al. Diarylheptanoids และ monoterpenoid จากเหง้าของ Zingiber officinale: คุณสมบัติต้านอนุมูลอิสระและ cytoprotective เจ แนท โปร. 2008;71:12–17.

26. Yokosuka A, Mimaki Y, Sakagami H, Sashida Y. ไดอารีลเฮปตานอยด์ใหม่และไดอาริลเฮปตานอยด์กลูโคไซด์จากเหง้าของ Tacca chantrieri และกิจกรรมที่เป็นพิษต่อเซลล์ เจ แนท โปร. 2002;65:283–9.

27. Jiang JL, Jin XL, Zhang H, Su X, Qiao B, Yuan YJ. การระบุองค์ประกอบต้านเนื้องอกในเคอร์คูมินอยด์จาก Curcuma longa L. ตามความสัมพันธ์ระหว่างองค์ประกอบกับกิจกรรม J Pharm Biomed ก้น 2012;70:664–70.

28. Marrot L, Meunier JR. ความเสียหายจากแสงของ DNA ของผิวหนังและผลที่ตามมาทางชีวภาพ เจ แอม อแคด เดอร์มาทอล. 2008;58:139–48.

29. Policegoudra RS, Abiraj K, Channe Gowda D, Aradhya SM. การแยกและคุณลักษณะของสารต้านอนุมูลอิสระและสารต้านแบคทีเรียจากเหง้ามะม่วง (Curcuma amada Roxb.) J Chromatogr B Anal Technol Biomed ชีวิต Sci. 2007;852:40–8.

30. Tadtong S, Viriyaroj A, วรรัตน์ S, Nimkuntat S, Suksamrarn S. Antityrosinase และฤทธิ์ต้านเชื้อแบคทีเรียของสารสกัดจากเปลือกมังคุด เจ สุขภาพ Res. 2552;23:99–102.

31. Li X, Guo L, Sun Y, Zhou J, Gu Y, Li Y. Baicalein ยับยั้งการสร้างเม็ดสีผ่านการกระตุ้นเส้นทางการส่งสัญญาณ ERK อินท์ เจ โมล เมด 2010;25:923–7.