ผลการต่อต้านริ้วรอยของ Leontopodium Alpinum (Edelweiss) Callus Culture Extract ผ่านการทำโปรไฟล์ Transcriptome

กรุณาคลิกoscar.xiao@wecistanche.comสำหรับข้อมูลเพิ่มเติม

เชิงนามธรรม:Edelweiss(Leontopodium Alpinum) ในวงศ์ Asteraceae เป็นดอกไม้ป่าที่เติบโตในบริเวณหินปูนที่เป็นหิน ที่นี่ เราตรวจสอบประสิทธิภาพของสารสกัด edelweiss callus culture (สารสกัด Leontopodium Alpinum callus culture; LACCE) โดยใช้การทดสอบหลายชุดตั้งแต่ ในหลอดทดลอง จนถึง ในร่างกาย เช่นเดียวกับการทำโปรไฟล์การถอดรหัส ผลการทดสอบในหลอดทดลองหลายชิ้นแสดงให้เห็นฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระที่แข็งแกร่งของ LACCE ในการตอบสนองต่อการรักษา UVB นอกจากนี้ LACCE ยังยับยั้งการอักเสบและรอยย่น อย่างไรก็ตาม กิจกรรมการให้ความชุ่มชื้นเพิ่มขึ้นโดย LACCE การทดสอบทางคลินิก ในร่างกาย แสดงให้เห็นว่าการใช้ LACCE อย่างต่อเนื่องกับใบหน้าและเนื้อเยื่อของผิวหนังช่วยเพิ่มริ้วรอยที่ต่อต้านริ้วรอยรอบดวงตา ความยืดหยุ่นของผิว ความหนาแน่นของผิวหนัง และความหนาของผิวหนังเมื่อเปรียบเทียบกับยาหลอก ผลการจัดลำดับอาร์เอ็นเอแสดงให้เห็นว่ายีนของมนุษย์อย่างน้อย 16.56 เปอร์เซ็นต์ถูกแสดงออกในเซลล์เคราติโนไซต์ LACCE ยีนควบคุมขึ้นซึ่งเข้ารหัสโปรตีน KRT หลายตัว; DDIT4, BNIP3 และ IGFBP3 มีส่วนเกี่ยวข้องกับการควบคุมเชิงบวกของกระบวนการพัฒนา การตายของเซลล์ที่ตั้งโปรแกรมไว้ การทำให้เคราติไนเซชัน และการเกิดคอร์นิฟิเคชันซึ่งก่อให้เกิดอุปสรรคต่อผิวหนัง ซึ่งให้ประโยชน์มากมายต่อผิวหนังมนุษย์ ในทางตรงกันข้าม ยีนที่มีการควบคุมต่ำเป็นยีนที่ตอบสนองต่อความเครียด ซึ่งรวมถึงโลหะ ออกซิเดชัน บาดแผล ขาดออกซิเจน และการติดเชื้อไวรัส โดยบอกว่า LACCE ไม่ก่อให้เกิดความเครียดที่เป็นอันตรายต่อผิวหนัง การศึกษาที่ครอบคลุมของเราแสดงให้เห็นว่า LACCE เป็นตัวแทนที่มีแนวโน้มสำหรับเครื่องสำอางต่อต้านวัย

คำสำคัญ:ต่อต้านริ้วรอย; แคลลัส; เอเดลไวส์;เซลล์ผิว; การถอดเสียง

1. บทนำ

Edelweiss(Leontopodium noble sub sp. Alpinum(Cass.) Greuter) ในวงศ์ Asteraceae เป็นดอกไม้ป่าที่เติบโตในบริเวณหินปูนที่ระดับความสูง เช่น เทือกเขาแอลป์สวิส [1,2] เนื่องจากดอกไม้สีขาวอายุสั้นหายาก เอเดลไวส์จึงเป็นตัวแทนของความงามและความบริสุทธิ์ที่เกี่ยวข้องกับเทือกเขาแอลป์และคาร์พาเทียน นอกจากนี้ หลายประเทศ รวมทั้งออสเตรีย บัลแกเรีย โรมาเนีย สโลวีเนีย และสวิตเซอร์แลนด์ ถือว่าเอเดลไวส์เป็นสัญลักษณ์ประจำชาติ

กรุณาคลิกที่นี่เพื่อทราบข้อมูลเพิ่มเติม

เป็นเวลานานแล้วที่เอเดลไวส์ถูกใช้เป็นยาแผนโบราณป้องกันอาการปวดท้อง หลอดลมอักเสบ ท้องร่วง โรคบิด และไข้ [3, A] เมื่อเร็ว ๆ นี้ มีงานวิจัยหลายชิ้นที่แสดงให้เห็นถึงประสิทธิภาพของสารสกัดเอเดลไวส์ในการต้านการอักเสบในหนูและหนู [3] และ keratinocytes ของมนุษย์และเซลล์บุผนังหลอดเลือด [4] นอกจากนี้ สารสกัดจากต้นเอเดลไวส์ยังมีองค์ประกอบที่ส่งเสริมการสื่อประสาท cholinergic ซึ่งบ่งชี้ถึงศักยภาพของสารต้านภาวะสมองเสื่อม [5] และสารต้านอนุมูลอิสระ เช่น

leontopodic acid A และ 35-caffeoylquinic acid ซึ่งสามารถใช้เป็นสารต่อต้านริ้วรอยได้ [6] นอกจากนี้ สารสกัดเอเดลไวส์ยังมีฤทธิ์ต้านแบคทีเรียต่อ Enterococcus faecium, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumonia และ Streptococcus pyogenes ซึ่งบ่งชี้ว่าอาจใช้ ethnomedicinal กับความผิดปกติของระบบทางเดินหายใจและช่องท้อง [7]

การศึกษาก่อนหน้านี้หลายชิ้นได้วิเคราะห์สารประกอบของสารสกัดเอเดลไวส์ ตัวอย่างเช่น วิธีโครมาโตกราฟีแบบเส้นเลือดฝอยเผยให้เห็นสารประกอบสำคัญทางเภสัชวิทยา 12 ชนิด ซึ่งรวมถึงฟลาโวนอยด์ กรดคาเฟอีน และกรดลิออนโทพอดิกจากส่วนทางอากาศของเอเดลไวส์ [8] ในการสกัดสารต้านอนุมูลอิสระจากพืชเอเดลไวส์ ได้มีการพัฒนาวิธีโครมาโตกราฟีแบบแยกส่วนแบบแรงเหวี่ยง (CPC) และโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC) [6] เป็นที่ทราบกันดีอยู่แล้วว่าสารออกฤทธิ์ของสารสกัดเอเดลไวส์ระหว่างส่วนทางอากาศและรากนั้นมีความหลากหลาย[3] ตัวอย่างเช่น รากที่มีขนดกของเอเดลไวส์ผลิตลิกแนนที่ออกฤทธิ์ทางเภสัชวิทยา เช่น การเข้าสู่ระบบและ 5-methoxy-login ซึ่งสามารถกระตุ้นโดยส่วนประกอบอื่นๆ อีกหลายอย่าง เช่น ซิลเวอร์ไนเตรต ซูโครส เมทิลจัสโมเนต และสารสกัดจากยีสต์ [ 9].ประโยชน์ของสารสกัดจาก cistancheนอกจากนี้ รูปแบบการเผาผลาญของลีโอโทโพเดียม 11 สายพันธุ์ที่แตกต่างกันได้รับการเปิดเผยโดยนิวเคลียร์แมกเนติกเรโซแนนซ์ (1H NMR) สเปกโทรสโกปีและโครมาโตกราฟีของเหลว-แมสสเปกโตรเมทรี (LC-MS) ในความสัมพันธ์แบบอนุกรมวิธาน [10]

Cistanche สามารถต่อต้านริ้วรอยได้

แคลลัสของพืชสามารถกำหนดได้ว่าเป็นมวลเซลล์ที่ไม่มีการรวบรวมกันหรือไม่แตกต่าง ซึ่งเกิดขึ้นได้ง่ายจากการทำให้บาดเจ็บเพื่อปิดแผลพืชหรือทำระบบในหลอดทดลองโดยปลอมแปลง แคลลัสพืชได้รับการเพาะเลี้ยงโดยการเพิ่มสารอาหารและสารควบคุมการเจริญเติบโตของพืชในสภาวะการเจริญเติบโตของน้ำยาฆ่าเชื้อ ปัจจุบันสามารถผลิตเซลล์พืชจำเพาะจำนวนมากที่มีคุณภาพเท่ากันในเครื่องปฏิกรณ์ชีวภาพได้ นอกจากนี้ เซลล์พืชมีความสามารถที่เรียกว่า totipotency ซึ่งเป็นศักยภาพทางพันธุกรรมของเซลล์พืชในการผลิตพืชที่โตเต็มที่ [11] ดังนั้นจึงเป็นไปได้ที่จะสร้างพืชที่โตเต็มที่จากแคลลัสพืชเฉพาะ นอกจากนี้ แคลลัสยังสามารถใช้กันอย่างแพร่หลายในการฟื้นฟูพืชเพื่ออนุรักษ์พืชหายากและใกล้สูญพันธุ์ [12,13]

เช่นเดียวกับเซลล์สัตว์ เซลล์พืชมีความสามารถในการกระตุ้นและการสร้างใหม่ของพืชหลังได้รับบาดเจ็บ [14] แม้ว่าเซลล์ต้นกำเนิดจากพืชจะถือเป็นวัสดุที่เกิดขึ้นใหม่ในอุตสาหกรรมเครื่องสำอาง แต่วัสดุที่มีอยู่ก็มีจำกัด การระบุแหล่งที่มาของพืชใหม่และประเมินองค์ประกอบการทำงานที่เกี่ยวข้องกับเครื่องสำอางเป็นสิ่งสำคัญ

สารสกัดเอเดลไวส์เป็นที่รู้จักกันดีในการใช้เป็นยารักษาโรค อย่างไรก็ตาม ผลกระทบของสารสกัดจากเอเดลไวส์ในฐานะแหล่งเครื่องสำอางจากธรรมชาตินั้นไม่ค่อยรายงาน ในที่นี้ เราตรวจสอบประสิทธิภาพของสารสกัด edelweiss callus (สารสกัด Leontopodium Alpinum callus culture; LACCE) ที่ได้จากใบ edelweiss โดยใช้การทดสอบหลายครั้งตั้งแต่ ในหลอดทดลอง ถึง ในร่างกาย และเปิดเผยกลไกระดับโมเลกุลที่เกิดจาก LACCE โดยใช้การทำโปรไฟล์การถอดรหัส

2. วัสดุและวิธีการ

2.1. การผลิตเอเดลไวส์ แคลลัส

เมล็ดเอเดลไวส์ถูกซื้อในเชิงพาณิชย์ เมล็ดเอเดลไวส์ถูกแช่ในเอทานอล 70 เปอร์เซ็นต์เป็นเวลา 30 ครั้งแล้วตามด้วยการล้างด้วยน้ำกลั่น อีกครั้ง เมล็ดถูกเขย่าในโซเดียมไฮโปคลอไรต์ 0.3 เปอร์เซ็นต์ (วาโก โอซาก้า ญี่ปุ่น) เป็นเวลา 20 นาที แล้วล้างด้วยน้ำกลั่น เมล็ดที่ผ่านการฆ่าเชื้อได้รับการงอกบนอาหารกลางของ Murashige และ Skoog(MS) (Duchefa Biochemie, Haarlem, The Netherlands) ใบเอเดลไวส์ในสภาพปลอดเชื้อถูกตัดเป็นชิ้นเล็กๆ (0.5 ถึง 1 ซม.) เราเหนี่ยวนำเซลล์พืชในระยะเริ่มต้นบนอาหารเลี้ยงเชื้อ MS ที่มี 6-Benzylaminopurine (6-BAP) (Duchefa Biochemie) 0.5-3 มก./มล.3-1 มก./มล. เท่ากับ 2,4-กรดไดคลอโรฟีนอกซีอะซิติก (2,4-D)(Duchefa Biochemie) ในความมืดที่ 25± 2 องศา [15] pH ของตัวกลาง MS ถูกปรับเป็น 5.8 โดยใช้ 1N ของ NaOH (Duchefa Biochemie) แคลลัสที่ถูกเหนี่ยวนำขยายพันธุ์ในจานเพาะเชื้อ สายแคลลัสที่เลือกได้รับการเพาะเลี้ยงในเครื่องปฏิกรณ์ชีวภาพในสถาบันวิจัยต่อต้านริ้วรอยแห่งวัยของ BIO-FD&C Co., Ltd. เมืองอินชอน ประเทศเกาหลี แคลลัสที่เพาะเลี้ยงถูกเก็บเกี่ยวและล้างด้วยน้ำกลั่นสามครั้งซิสทานเช เจงกีสข่านแคลลัสถูกทำให้แห้งโดยใช้เครื่องทำแห้งแช่แข็ง (IlShinbioBase, Dongducheonsi, Korea) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต แคลลัสเอเดลไวส์แห้งกวนในน้ำกลั่นที่ 50 องศาเป็นเวลา 8 ชั่วโมง สารสกัดแคลลัสได้มาจากการสกัดด้วยความร้อนที่ 98 องศา เป็นเวลา 10 นาที

2.2. การเพาะเลี้ยงเซลล์ผิวหนังมนุษย์

ผลการประเมินของสารสกัดจากเอเดลไวส์ต่อเซลล์ผิวหนังของมนุษย์ เซลล์เคราติน (HaCaT) และไฟโบรบลาสต์ Detroit 551 ของมนุษย์ปกติ (ATCC, Manassas, VA, USA) ได้รับการปลูกฝังใน Modified Eagle Medium (DMEM) ของ Dulbecco (Welgene, Gyeongsan-si, Korea ) เสริมด้วยซีรั่มโคนมของทารกในครรภ์ 10 เปอร์เซ็นต์ (FBS) (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) และ 1 เปอร์เซ็นต์ยาปฏิชีวนะ-antimycotic (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) ที่ 37 องศาโดยมีเงื่อนไข CO2 5 เปอร์เซ็นต์

2.3. การประเมินกิจกรรมการเผาผลาญของเซลล์โดย MTT Assay

เพื่อประเมินความเป็นพิษต่อเซลล์ของ LACCE ต่อการเจริญเติบโตของเซลล์ การขยายพันธุ์ และการอยู่รอดของเซลล์ผิวหนังของมนุษย์ MTT({0}}(45-dimethylthiazol-2-yl){{3} },5-การทดสอบไดฟีนิลเตตตราโซเลียม โบรไมด์) ดำเนินการดังที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้[16,17] โดยสรุป เซลล์ HaCaT และดีทรอยต์ 551 ที่ความหนาแน่น 5×10* เซลล์ต่อหลุมตามลำดับ ถูกบ่มในจานหลุม 96-หลุมเป็นเวลา 24 ชั่วโมง หลังจากนั้น ความเข้มข้นสุดท้ายที่ 0.1 เปอร์เซ็นต์ , 0.5 เปอร์เซ็นต์ และ 1 เปอร์เซ็นต์ LACCE ถูกบำบัดเป็นเวลา 24 ชั่วโมง ใช้น้ำกลั่นเป็นตัวควบคุม หลังการรักษา LACCE สื่อถูกกำจัดออกตามด้วยการเติม MTT (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) 4 μLof 5 มก./มล. 4 ไมโครลิตร และบ่มเป็นเวลา 4 ชั่วโมง หลังจากนำสื่อออกแล้ว เติมไดเมทิลซัลฟอกไซด์ (DMSO) (ซิกมา) 100 ไมโครลิตรและละลายเป็นเวลา 10 นาทีcistanche การยืดอายุการดูดกลืนแสงของความยาวคลื่นวัดที่ 570 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ Thermo Scientific Multiskan GO Microplate (Fisher Scientific Ltd., Vantaa, Finland) ความอยู่รอดของเซลล์ได้มาจากการใช้สูตรต่อไปนี้ ความมีชีวิตของเซลล์ ( เปอร์เซ็นต์ )=(ปริมาณการดูดกลืนแสงสำหรับเซลล์ที่บำบัด/ปริมาณการดูดกลืนแสงของเซลล์ควบคุม)× 100

2.4. การประเมินฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระโดย DPPH Assay

กิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระของ LACCE ถูกวัดในการทดสอบ DPH (2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazine-hydrate) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [18] โดยสังเขป 0.1 มล. ของ ความเข้มข้นสุดท้ายที่ 0.1 เปอร์เซ็นต์ , {{10}}.5 เปอร์เซ็นต์ และ 1 เปอร์เซ็นต์ LACCE ได้รับการบำบัดใน 0.1 มล. ของ 0.1 มิลลิโมลาร์ DPPH (Sigma-Aldrich) ต่อหน้า 0.4 mL ของเอทานอล เราใช้กรดแอสคอร์บิก (วิตามินซี) (Sigma-Aldrich) 0.001 เปอร์เซ็นต์เป็นตัวควบคุมเชิงบวก ตัวอย่างถูกผสมอย่างดีเป็นเวลา 10 วินาที และบ่มที่อุณหภูมิห้องในที่มืดเป็นเวลา 30 นาที การดูดกลืนแสงของความยาวคลื่นวัดที่ 517 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ Thermo Scientific Multiskan GO Microplate (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) กิจกรรมการไล่ระดับรุนแรงคำนวณโดยใช้สูตรต่อไปนี้ กิจกรรมการกำจัด ( เปอร์เซ็นต์ )=[1-(การดูดซับของตัวอย่างทดสอบ/การดูดซับของตัวควบคุม)]×100

2.5. การประเมินฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระโดยการทดสอบไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์(H2O2)

ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ผลิตอนุมูลอิสระในเซลล์ ส่งผลให้เซลล์ตาย เราทดสอบอัตราการตายของเซลล์ที่เกิดจากไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ในตัวอย่างที่ได้รับการบำบัดด้วย LACCE เซลล์ HaCaT ที่ความหนาแน่น 5×105 เซลล์ต่อหลุมถูกบ่มในจาน 24-หลุมเป็นเวลา 24 ชั่วโมง หลังจากนั้น ความเข้มข้นสุดท้ายที่ 0.1 เปอร์เซ็นต์ ,0.5 เปอร์เซ็นต์ และ 1 เปอร์เซ็นต์ LACCE ได้รับการบำบัดต่อหน้า H, O 1 มิลลิโมลาร์เป็นเวลา 8 ชั่วโมง ในกลุ่มควบคุมเชิงบวก ใช้ NAC (Sigma-Aldrich) 0.033 เปอร์เซ็นต์ การสอบวิเคราะห์ MTT ใช้เพื่อวัดอัตราการรอดชีวิตของเซลล์ของตัวอย่างที่บำบัดด้วย LACCE ที่เกิดจาก HO2 นอกจากนี้ เราสังเกตสัณฐานวิทยาของเซลล์โดยการย้อมสีเมทิลีนบลู (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)

2.6. Real-Time Reverse Transcription (RT) -PCR

เพื่อตรวจสอบผลของ LACCE ต่อการต่อต้านริ้วรอย เพิ่มความชุ่มชื้น และต้านการอักเสบ เราดำเนินการ RT-PCR แบบเรียลไทม์ด้วยไพรเมอร์ที่เป็นที่รู้จักซึ่งขยายยีนของเครื่องหมายโดยใช้ QuantiTect Primer Assays (Qiagen, Hilden, Germany) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต เซลล์ดีทรอยต์ 551 เซลล์ที่ความหนาแน่น 5×104 เซลล์ต่อหลุมถูกบ่มในจาน 96-หลุมเป็นเวลา 24 ชั่วโมง หลังจากนั้น ความเข้มข้นสุดท้ายที่ 0.1 เปอร์เซ็นต์ ,0.5 เปอร์เซ็นต์ และ 1 เปอร์เซ็นต์ LACCE ได้รับการรักษาเป็นเวลา 24 ชั่วโมง cDNA ถูกสังเคราะห์จากเซลล์ดีทรอยต์ 551 ตามลำดับที่บำบัดด้วยความเข้มข้นของ LACCE ที่แตกต่างกันโดยใช้ SuperPrep Cell Lysis & RT Kit สำหรับ qPCR (Toyobo, โอซาก้า, ญี่ปุ่น) ที่มีรีเอเจนต์สลายตัวและรีเอเจนต์ RT ตามคำแนะนำของผู้ผลิต สำหรับผลการต่อต้านริ้วรอยในการรักษาด้วย LACCE การแสดงออกของยีนที่เข้ารหัส Matrix Metalloproteinase-2(MMP-2) ถูกหาปริมาณโดย RT-PCR แบบเรียลไทม์โดยใช้ Thunderbird SYBR qPCR Mix kit (Toyobo) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต สำหรับการประเมินความชุ่มชื้นผ่านการบำบัดด้วย LACCE การแสดงออกของยีนที่เข้ารหัส Aquaporin 3(AOP3) ได้รับการตรวจสอบโดย RT-PCR แบบเรียลไทม์ ในกรณีของการสอบวิเคราะห์การต้านการอักเสบ เซลล์ HaCaT ที่ความหนาแน่น 5×104 เซลล์ต่อหลุมถูกบ่มในจาน 96-หลุมเป็นเวลา 24 ชั่วโมง หลังจากนำสื่อออกแล้ว UVB ถูกฉายรังสีบนเซลล์ HaCaT สำหรับการฉายรังสี UVB 5 mJ/cm' ถูกใช้โดย CL-1000 UV box (Analytik Jena AG, Jena, Germany) หลังจากนั้น ให้ความเข้มข้นสุดท้ายที่ 0.1 เปอร์เซ็นต์ ,0.5 เปอร์เซ็นต์ และ 1 เปอร์เซ็นต์ LACCE ถูกบำบัดเป็นเวลา 4 ชั่วโมง เราใช้ dexamethasone(Dex)(Sigma-Aldrich) เป็นตัวควบคุมเชิงบวก สำหรับผลต้านการอักเสบของการรักษา LACCE การแสดงออกของยีนที่เข้ารหัส COX2 และ iNOS ตามลำดับ ถูกหาปริมาณโดย RT-PCR แบบเรียลไทม์ การแสดงออกของยีนแต่ละตัวถูกทำให้เป็นมาตรฐานเพื่อการแสดงออกของยีน GAPDH 2.7. การประเมินทางคลินิกของ LACCE ในฐานะตัวแทนเครื่องสำอางใน Vioo

การศึกษาทางคลินิกสำหรับการประเมินประสิทธิภาพของ LACCE ในการยกกระชับใบหน้าและการปรับปรุงริ้วรอยรอบดวงตา ความยืดหยุ่นของผิว ความหนาแน่นของผิวหนัง และความหนาของผิวหนังได้ดำเนินการโดยบริษัท Ellead หลังจากได้รับการอนุมัติตามขั้นตอนการปฏิบัติงานมาตรฐาน (เวอร์ชัน 3.{{1} }) (Ellead, Seongnam, Korea) ของ Ellead IRB ตามแนวทางปฏิบัติที่ดีทางคลินิกของเกาหลี (B1-2015-4-002) อธิบายโดยกระทรวงความปลอดภัยด้านอาหารและยา (MFDS) และขั้นตอนการปฏิบัติงานมาตรฐานของ Ellead (EL-P{ {4}})

เพื่อตรวจสอบผลของ LACCE ในร่างกาย เราได้ทำการประเมินทางคลินิกของ LACCE สำหรับปัจจัยสี่ประการ: การยกกระชับใบหน้าและปรับปรุงริ้วรอยรอบดวงตา ความยืดหยุ่นของผิวหนัง ความหนาแน่นของผิวหนัง และความหนาของผิวหนัง สำหรับเรื่องนี้ อาสาสมัครหญิงทั้งหมด 21 คน ที่มีอายุเฉลี่ย 48.04 ± 4.28 ปี ซึ่งแบ่งออกเป็นอาสาสมัคร 12 คนที่มีอายุ 40 ปี และอาสาสมัครอายุ 50 ปี 9 คน เข้าร่วมการประเมินทางคลินิกตลอดสี่สัปดาห์

การทดสอบทางคลินิกดำเนินการในช่วงเวลาที่แตกต่างกันสามจุด คือ พื้นฐาน 2 สัปดาห์ และ 4 สัปดาห์ สำหรับอาสาสมัครทุกคน ตั้งแต่หนึ่งสัปดาห์ก่อนเริ่มการศึกษาจนถึงสิ้นสุด อาสาสมัครทุกคนไม่ได้รับการรักษาเพิ่มเติมเพื่อปรับปรุงผิว เครื่องสำอาง และอุปกรณ์สุขาภิบาล ซึ่งอาจส่งผลต่อผลลัพธ์ หลังจากล้างหน้าของอาสาสมัครโดยใช้โฟมล้างหน้า อาสาสมัครยืนอยู่อย่างน้อย 30 นาทีในห้องควบคุมที่มีอุณหภูมิคงที่ (20-24 องศา ) และความชื้น (40 เปอร์เซ็นต์ -60 เปอร์เซ็นต์ความชื้นสัมพัทธ์) . เราทำการวัดแบบสุ่มที่ด้านซ้ายหรือด้านขวาของใบหน้าของอาสาสมัคร การทดสอบของเราคือการทดสอบแบบ double-blind ซึ่งทั้งอาสาสมัครและนักวิจัยไม่ทราบว่าผลิตภัณฑ์ใดเป็นตัวอย่างการทดสอบ สูตรสำหรับคำนวณอัตราที่ลดลงและเพิ่มขึ้นได้อธิบายไว้ในตารางที่ 1

2.8. การวัดการยกกระชับใบหน้าและการปรับปรุงริ้วรอยรอบดวงตา

ที่การตรวจวัดพื้นฐาน ริ้วรอยรอบดวงตา ความยืดหยุ่นของผิวหนัง ความหนาแน่นของผิวหนัง ความหนาของผิวบริเวณแก้ม และการยกกระชับใบหน้าที่มุมปากสำหรับอาสาสมัครทุกคน หลังจากนั้น ใช้ตัวอย่าง LACCE และยาหลอก (กลุ่มควบคุม) สองตัวอย่างที่แตกต่างกันไปยังบริเวณที่กำหนดของใบหน้าวันละสองครั้ง (เช้าและกลางคืน) อาสาสมัครถูกแบ่งออกเป็นสองกลุ่มที่แตกต่างกัน กลุ่มที่ 1 (LACCE ถูกนำไปใช้กับบริเวณใบหน้าด้านซ้ายในขณะที่กลุ่มที่ได้รับยาหลอกถูกนำไปใช้กับบริเวณใบหน้าด้านขวา) และกลุ่มที่ II (กลุ่มที่ได้รับยาหลอกถูกนำไปใช้กับบริเวณใบหน้าด้านซ้ายในขณะที่ LACCE ถูกนำไปใช้กับ บริเวณใบหน้าด้านขวา) สองและสี่สัปดาห์หลังการรักษา การวัดแบบเดียวกันได้ดำเนินการเพื่อประเมินผลของ LACCE เมื่อเทียบกับยาหลอก

ริ้วรอยรอบดวงตาได้รับการวิเคราะห์โดยใช้ระบบการวัดผิวแบบออปติคัล 3 มิติ (มิติ) PRIMOS High Resolution (Canfield Scientific, Parsippany, NJ, USA) ซึ่งเหมาะอย่างยิ่งสำหรับการตรวจสอบโครงสร้างจุลภาคของผิวหนังและริ้วรอย พารามิเตอร์ความหยาบสองแบบที่แตกต่างกัน Ra(ความหยาบเฉลี่ย) ซึ่งเป็นค่าเฉลี่ยของค่าสัมบูรณ์ของความสูงโปรไฟล์ของโปรไฟล์ความหยาบ และ Rg (ค่าเฉลี่ยรากของความหยาบกำลังสอง) ซึ่งเป็นค่าเฉลี่ยรากที่สองของความสูงโปรไฟล์ของ โปรไฟล์ความหยาบถูกวัด

บทความนี้คัดลอกมาจาก Genes 2020, 11, 230; ดอย:10.3390/genes11020230 www.mdpi.com/journal/genes