สารสกัดจากเอทานอลของเมล็ด Cucurbita Pepo L. ปรับเปลี่ยนการหยุดชะงักของระบบประสาทในหนูที่เครียดเรื้อรังและการแสดงออกของต่อมหมวกไตของเครื่องหมายการอักเสบและ HSP70

ติดต่อ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 อีเมล:audrey.hu@wecistanche.com

Hailah M. Almohaimeed1, Shereen Hamed2, Hanan S. Sleeem3,4, Ashwaq H. Batawi 5,Zuhair M. Mohammedsaleh6, Maha Jameal Balgoon7, Soad S. Ali 8,9, Soad Al Jaouni 9,10 และ Nasra Ayuob11*

พื้นหลัง: ฟักทอง(Cucurbita pepo L.) ได้อธิบายไว้ว่ามีสารต้านอนุมูลอิสระฤทธิ์ต้านการอักเสบ ต้านความเมื่อยล้า และยากล่อมประสาท ต่อมหมวกไตเป็นอวัยวะที่ตอบสนองต่อความเครียดที่สำคัญซึ่งช่วยรักษาสภาวะสมดุลระหว่างความเครียด

วัตถุประสงค์:การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อประเมินประสิทธิภาพของการใช้สารสกัด Cucurbitapepo L. (CP) ในการบรรเทาการเปลี่ยนแปลงทางพฤติกรรม ชีวเคมี และโครงสร้างในต่อมหมวกไตที่เกิดจากการสัมผัสกับความเครียดที่ไม่รุนแรงเรื้อรังที่คาดเดาไม่ได้ (CUMS) และศึกษากลไกเบื้องหลังผลกระทบนี้

วัสดุและวิธีการ:หนูเผือกเพศผู้สี่สิบตัวถูกแบ่งออกเป็น 4 กลุ่ม (n=10): กลุ่มควบคุม, CUMS, กลุ่มที่บำบัดด้วยฟลูออกซิทีน และกลุ่มที่ได้รับการรักษาด้วย CP การเปลี่ยนแปลงพฤติกรรม ระดับคอร์ติโคสเตอโรน ไซโตไคน์ที่ก่อให้เกิดการอักเสบ TNF- และ IL-6 และสารออกซิแดนท์/สารต้านอนุมูลอิสระโปรไฟล์ถูกประเมินในซีรัมเมื่อสิ้นสุดการทดลอง ต่อมหมวกไตได้รับการประมวลผลสำหรับการประเมินทางจุลพยาธิวิทยาและอิมมูโนฮิสโตเคมี การแสดงออกของยีนของแคสเปส-3 และ Ki67 และโปรตีนช็อกความร้อน 70 (HSP70) ถูกประเมินในต่อมหมวกไตโดยใช้ RT-PCR

ผลลัพธ์:สารสกัด CP ช่วยลดระดับคอร์ติโคสเตอโรนอย่างมีนัยสำคัญ (p < {{0}}.001)="" เวลาที่เคลื่อนไหวไม่ได้="" (p="">< 0.001)="" และการเปลี่ยนแปลงการอักเสบและออกซิเดชันที่เกี่ยวข้องกับภาวะซึมเศร้าที่เกิดจาก="" cums="" เมื่อเทียบกับกลุ่มที่ไม่ได้รับการรักษา="" สารสกัด="" cp="" บรรเทาการเปลี่ยนแปลงทางจุลพยาธิวิทยาของต่อมหมวกไตที่เกิดจาก="" cums="">อะพอพโทซิส(p < 0.001) และได้รับการควบคุมอย่างมีนัยสำคัญสารต้านอนุมูลอิสระระดับในเซรั่ม

บทสรุป:Cucurbita pepo L. ช่วยแก้ไขการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างทางพฤติกรรม ทางชีวเคมี และต่อมหมวกไตที่เกิดจากความเครียดเรื้อรังได้อย่างมีประสิทธิภาพสารต้านอนุมูลอิสระและฤทธิ์ต้านการอักเสบ

คำสำคัญ: ฟักทอง, ความเครียด, ภาวะซึมเศร้า, แคสเปส-3, ki67, Hsp70,อะพอพโทซิส

Cistanche สมุนไพรจีนมีฟังก์ชันต้านอนุมูลอิสระ

การแนะนำ

ผู้คนกว่า 264 ล้านคนในทุกช่วงอายุต้องทนทุกข์จากภาวะซึมเศร้าทั่วโลก (WHO, 2020) ผลงานของผู้เป็นโรคซึมเศร้าโดยทั่วไปมักไม่ดีในโรงเรียน ที่ทำงาน และครอบครัว อาการซึมเศร้าอาจนำไปสู่การฆ่าตัวตาย ดังนั้นจึงถือว่าเป็นสาเหตุอันดับสองของการเสียชีวิตใน 15- ถึง 29-ปี (WHO, 2020) สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมสามารถอยู่รอดจากเหตุการณ์ที่ตึงเครียดได้โดยการกระตุ้นการตอบสนองทางสรีรวิทยาที่เหมาะสมต่อเหตุการณ์เหล่านี้ ต่อมหมวกไตเป็นส่วนหนึ่งของแกน hypothalamic-pituitary-adrenocortical (HPA) และแกน thesympathy-adrenomodullarary ที่รักษาสภาวะสมดุลระหว่างความเครียด (Ulrich-Lai et al., 2006) มีรายงานว่าการสัมผัสกับความเครียดจากความร้อนส่งผลให้มีการแสดงออกอย่างรวดเร็วของ HSP70 ในเยื่อหุ้มสมองต่อมหมวกไต (Huang et al., 2001) โปรตีนเหล่านี้มีการค้าขายภายในเซลล์ การนำเสนอแอนติเจนอะพอพโทซิสและการกระทำอื่น ๆ อีกมากมาย (Khar et al., 2001) มีการอธิบายไว้ว่าฮอร์โมนจากภายนอกหรือการรบกวนฮอร์โมนภายในในช่วงเวลาที่สำคัญของการพัฒนา สามารถมีผลกระทบถาวรต่อวิถีทางสรีรวิทยาและพฤติกรรมที่ควบคุมโดยวงจร hypothalamicneuroendocrine (Gore and Patisaul, 2010) การหยุดชะงักของระบบประสาทต่อมไร้ท่อได้รับการอธิบายเพื่อขยายแนวคิดของการหยุดชะงักของต่อมไร้ท่อไปยัง รวมถึงสรีรวิทยาเชิงบูรณาการอย่างเต็มรูปแบบ ดังนั้นจึงเป็นมากกว่าอารมณ์เสียของฮอร์โมน(Waye and Trudeau, 2011).

การเปลี่ยนแปลงในการควบคุม neuroendocrine, เมแทบอลิซึม, และอาหาร/microbiota ถือเป็นตัวกระตุ้นให้เกิดการอักเสบและความโน้มเอียงที่จะพัฒนาภาวะซึมเศร้า (Huang et al., 2019) มีการตั้งสมมติฐานว่าภาวะซึมเศร้าซึ่งเป็นหนึ่งในโรคทางระบบประสาทและการอักเสบมีความสัมพันธ์แบบสองทาง ในขณะที่ภาวะซึมเศร้าส่งเสริมปฏิกิริยาการอักเสบ การอักเสบส่งเสริมความผิดปกติของระบบประสาทรวมทั้งอาการซึมเศร้า (Bauer and Teixeira, 2019)

Fluoxetine ซึ่งเป็นยากล่อมประสาทคลาสสิกเป็นหนึ่งในยาที่มีจำหน่ายในท้องตลาดสำหรับการรักษาภาวะซึมเศร้า ปัจจุบันถือว่าเป็นสารก่อกวน neuroendocrine ที่เกิดขึ้นใหม่ ผลของฟลูอกซีตินนี้เป็นผลข้างเคียง มากกว่าเป้าหมายหลักในการรักษาโรคในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม (León-Olea et al., 2014) ดังนั้นจึงมีความจำเป็นสำหรับยากล่อมประสาทที่ปลอดภัยกว่าโดยไม่มีผลข้างเคียงต่อสถานะต่อมไร้ท่อ

ฟักทอง(Cucurbita pepo L.) เป็นพันธุ์ที่มีความสำคัญทางเศรษฐกิจทั่วโลก พวกเขามีสารอาหารและประโยชน์ต่อสุขภาพเนื่องจากอุดมไปด้วยฟีนอลิก ฟลาโวนอยด์ กรดอะมิโน คาร์โบไฮเดรต และวิตามิน (Wang et al., 2002) งานวิจัยหลายชิ้นเปิดเผยว่าฟักทองมีฤทธิ์ทางชีวภาพมากมาย เช่น ต้านเบาหวาน ต้านมะเร็งสารต้านอนุมูลอิสระฤทธิ์ต้านการอักเสบ ต้านความเมื่อยล้า และยากล่อมประสาท (Wang et al., 2012; Zhanget al., 2012; Nawirska-Olszańska et al., 2013; Kim Nr et al., 2016) ยาแผนโบราณส่วนใหญ่เป็นอายุรเวท ระบบและการแพทย์แผนจีนได้ใช้ส่วนต่างๆ ของฟักทอง รวมทั้งเนื้อของผลไม้และเมล็ดพืช (Perez Gutierrez, 2016). ประสิทธิภาพของยาแก้ซึมเศร้าของ Sweetme Sweet Pumpkin (SSP) และ Cucurbita moschata Duch ได้รับการทดสอบก่อนหน้านี้ใน vivostudy โดยใช้แบบจำลองสัตว์ทดลองของภาวะซึมเศร้าที่เกิดจากการทดสอบว่าย (FST) และเปรียบเทียบกับ fluoxetine (Kim Nr et al.,2016) ในการทบทวนล่าสุดฉบับหนึ่งสรุปว่าอาหารยากล่อมประสาท เช่น เมล็ดฟักทอง ได้รับการอธิบายว่ามีคะแนนอาหารยากล่อมประสาทที่ 47 เปอร์เซ็นต์ ซึ่งให้ผลเหมือนยากล่อมประสาท (Lachance and Ramsey, 2018) เมื่อเร็ว ๆ นี้ Dotto และ Chacha ได้รับรองการดำเนินการศึกษาวิจัยในสัตว์และทางคลินิกมากขึ้น เพื่อยืนยันผลการบรรเทาความเครียดของเมล็ดฟักทอง (Dotto and Chacha, 2020)

รายงานเหล่านี้สนับสนุนให้ทดสอบประสิทธิภาพของฟักทองในการบรรเทาผลกระทบจากความเครียดเรื้อรังต่อต่อมหมวกไต ดังนั้น การศึกษานี้จึงได้ดำเนินการเพื่อประเมินผลของการบริหารช่องปากของสารสกัด Cucurbita pepo L. (CP) ต่อการบรรเทาความเครียดที่ไม่รุนแรงเรื้อรังที่คาดเดาไม่ได้ (CUMS) ที่เกิดจากพฤติกรรม ชีวเคมี และโครงสร้างต่อมหมวกไต และเพื่อสำรวจกลไกเบื้องหลังผลกระทบนี้

สารสกัดจาก Cistanche ทะเลทราย: ต่อต้านอนุมูลอิสระ

วัสดุและวิธีการ

การสกัดและปริมาณฟักทอง

Cucurbita pepo L. (ตัวอย่างคูปอง: AQJ_95) ถูกซื้อจากตลาดท้องถิ่นในเจดดาห์ ประเทศซาอุดีอาระเบีย พวกเขาถูกระบุในสมุนไพร King Abdulaziz University โดยใช้ตัวอย่างพืชสมุนไพรและพันธุ์ไม้ของ KSA (Chaudhary, 2001) ตัวอย่างบัตรกำนัลถูกฝากไว้ในสมุนไพร CP ถูกระบุโดยผู้เขียนและได้รับการตรวจสอบโดยนักพฤกษศาสตร์จากคณะวิทยาศาสตร์ KingAbdulaziz University

การสกัด CP ทำได้ตามการศึกษาก่อนหน้านี้ (Wang et al., 2012) ผลไม้ดิบที่มีเปลือกถูกตัดโดยใช้เครื่องหั่นและทำให้แห้งโดยใช้เครื่องไลโอฟิไลเซอร์ (FD5508; ilShinBioBase Co.,Ltd. ประเทศเกาหลี) แล้วบดโดยใช้เครื่องบดแบบไฟฟ้า ผงถูกส่งผ่านตะแกรงตาข่าย 40- เพื่อให้ได้ผง afine และเก็บไว้ในภาชนะที่มีอากาศถ่ายเท ผงแห้ง (50 กรัม) ผสมกับเอทานอล 80 เปอร์เซ็นต์ 450 มล. และทิ้งไว้ 1 วันที่ 37 องศาในเชคเกอร์ (JSSI-100T; JS Research Inc., Compact ShakingIncubator., Korea) แล้วกรอง ด้วยผ้าฝ้ายและกระดาษกรองในวันที่สอง กระบวนการสกัดนี้ทำซ้ำสองครั้งที่ 37 องศาเพื่อให้ได้สารสกัดเอทานอล

การระบุองค์ประกอบของ CP

องค์ประกอบทางเคมีของ PE ถูกวิเคราะห์โดยใช้แก๊สโครมาโตกราฟีแบบติดตาม GC-TSQ evo 8000 แมสสเปกโตรมิเตอร์ (ThermoScientific, Austin, TX, United States) ด้วยคอลัมน์คาปิลลารีตรง TG–5MS (30 ม. × ความหนาของฟิล์ม 0.25 มม. × 0.25 µm) ตั้งอุณหภูมิเตาอบคอลัมน์ไว้ที่ 50 องศา แล้วเพิ่มขึ้น 5 องศา/นาที เป็น 250 องศา ค้างไว้ 2 นาที แล้วเพิ่มเป็นอุณหภูมิสุดท้ายที่ 300 องศา 25 องศา / นาที และค้างไว้ 2 นาที อุณหภูมิหัวฉีดและสายส่ง MS ถูกเก็บไว้ที่ 270 และ 260 องศา ตามลำดับ; ฮีเลียมถูกใช้เป็นก๊าซพาหะที่อัตราการไหลคงที่ 1 มล./นาที ความล่าช้าของตัวทำละลายคือ 4 นาที และตัวอย่างที่เจือจาง 3 ไมโครลิตรถูกฉีดโดยอัตโนมัติโดยใช้เครื่องเก็บตัวอย่างอัตโนมัติ AS1300 ที่ควบคู่กับ GC ในโหมดแยกส่วนในหัวฉีด PTV EI มวลสเปกตรัมถูกรวบรวมที่แรงดันไฟฟ้า 70 eVionization ในช่วง m/z 50–650 ในโหมดการสแกนแบบเต็ม อุณหภูมิแหล่งกำเนิดไอออนตั้งไว้ที่ 250 องศา ส่วนประกอบถูกระบุโดยการเปรียบเทียบแมสสเปกตรัมของพวกมันกับฐานข้อมูลแมสสเปกตรัม WILEY 09 และ NIST 14 ที่ใช้ในการระบุและศึกษาองค์ประกอบทางเคมีของส่วนประกอบที่ไม่รู้จักในสารสกัดใดๆ (Wiley,2006; Mikaia et al., 2014) การวิเคราะห์ได้ทำการวิเคราะห์แบบไม่เชิงคุณภาพโดยใช้ซอฟต์แวร์ Thermo Scientific™ Xcalibur™ 2.2 และค่าทั้งหมดถูกรายงานเป็นเปอร์เซ็นต์สัมพัทธ์ (Abd El-Kareem et al., 2016)

การออกแบบทดลอง

การศึกษานี้ได้รับการอนุมัติโดยคณะกรรมการจริยธรรมการวิจัยทางชีวการแพทย์ที่คณะแพทยศาสตร์ King AbdulazizUniversity, Jeddah, KSA (หมายเลขอ้างอิง {{0}}) ในการศึกษานี้ หนูเผือกเพศผู้สี่สิบตัวที่มีน้ำหนัก 150–200 กรัมและอายุ 2-3 เดือนได้รับจากศูนย์วิจัยการแพทย์ King Fahd (KFMRC) ก่อนเริ่มการทดลอง ปล่อยให้หนูปรับตัวให้เข้ากับสภาพห้องปฏิบัติการเป็นเวลา 1 สัปดาห์ หนูสิบตัวได้รับมอบหมายให้เป็นกลุ่มควบคุมซึ่งถูกปล่อยทิ้งไว้โดยไม่ได้สัมผัสกับ CUMS หนูอีก 30 ตัวต้องผ่านขั้นตอนของ CUMS เป็นเวลา 4 สัปดาห์ ซึ่งรวมถึงตัวสร้างความเครียดประเภทต่างๆ ในช่วงเวลาต่างๆ ระหว่างวัน เพื่อป้องกันไม่ให้เกิดความเคยชินกับความเครียด ขั้นตอน CUMS ได้รับการอธิบายอย่างครบถ้วนในงานก่อนหน้านี้ (Ayuob et al., 2016; Ali et al.,2017) และแสดงในตารางที่ 1 หนูที่สัมผัสกับ CUMS แบ่งออกเป็น 3 กลุ่ม (n 10) กลุ่มที่ไม่ถูกบำบัด (CUMS) ได้รับกระสายยา 0.03 เปอร์เซ็นต์คาร์บอกซีเมทิลเซลลูโลส(CMC-Na) โดยทางสายน้ำเป็นเวลา 2 สัปดาห์ กลุ่มที่ได้รับ FLU ได้รับ FLU (Dar Al Dawa Pharmaceuticals Co., Ltd.,Amman, Jordan) ซึ่งเป็นยากล่อมประสาทที่ใช้สำหรับการตรวจสอบทางเภสัชวิทยา ละลายใน CMC-Na 0.03 เปอร์เซ็นต์ ata dose 20 มก./กก. โดย gastric gavage (Li et al. , 2014). กลุ่มที่ได้รับการรักษาด้วย CP ได้รับสารสกัด CP ที่ละลายในน้ำกลั่นในขนาด 100 มก./กก. โดยทางสายน้ำ เป็นเวลา 2 สัปดาห์ตามWang et al. (2012).

การประเมินการเปลี่ยนแปลงพฤติกรรม

FST ดำเนินการหลังจาก 4 สัปดาห์เพื่อยืนยันผลของ CUMS ต่อหนู (Ali et al., 2017) ในระหว่างการทดสอบ หนูแต่ละตัวถูกวางในภาชนะทรงกระบอกแก้ว (สูง 20 ซม. เส้นผ่านศูนย์กลาง 14 ซม.) ที่มีน้ำ 15 ซม. ที่ 25 ± 2 องศา หนูถูกบันทึกวิดีโอเป็นเวลา 6 นาทีโดยใช้ซอฟต์แวร์แสดงพฤติกรรม (Noldus InformationTechnology, EthoVision XT®) และเวลาทั้งหมดที่ใช้ในการเคลื่อนที่ไม่ได้ระหว่าง 6 นาทีนั้นวัดโดยช่างตาบอดไปยังกลุ่มทดลอง เวลาทั้งหมดเป็นวินาทีที่หนูใช้โดยไม่มีการเคลื่อนไหวของแขนขา ยกเว้นการเคลื่อนไหวของตัวรองที่จำเป็นเพื่อให้เมาส์ลอย "เวลาที่ไม่สามารถเคลื่อนที่ได้" ระหว่าง 6 นาทีถูกกำหนด

เทคนิคทางชีวเคมี

ยี่สิบสี่ชั่วโมงหลังจากเสร็จสิ้นการทดสอบพฤติกรรม ตัวอย่างเลือดถูกนำมาจากไซนัสในวงโคจรของหนูหลังจากได้รับยาสลบด้วยไอโซฟลูเรน 4 เปอร์เซ็นต์ (SEDICO PharmaceuticalsCompany, Cairo, Egypt) ในออกซิเจน 100 เปอร์เซ็นต์ หลังจากนั้นหนูก็ถูกทำการุณยฆาตโดยปากมดลูกคลาดเคลื่อน ตัวอย่างเลือดถูกหมุนเหวี่ยงที่ 3,{5}} รอบต่อนาที เป็นเวลา 15 นาทีที่ 4 องศาเพื่อให้ได้ซีรัมและถูกเก็บไว้ที่ −18 องศาสำหรับการประเมินทางชีวเคมี

ระดับของคอร์ติโคสเตอโรน (ALPCO Diagnostics, Orangeburg, NY, United States) ได้รับการประเมินโดยใช้ชุดทดสอบเอนไซม์ที่เชื่อมโยงกับภูมิคุ้มกันตามคำแนะนำของผู้ผลิต ตามคำแนะนำของผู้ผลิต TNF- และ IL-6 (ระบบ R&D ของ Quantakin, USA Kit) ถูกประเมินโดยใช้การทดสอบอิมมูโนดูดซับที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ ความหนาแน่นเชิงทฤษฎีของแต่ละตัวอย่างถูกกำหนดหาซ้ำกันด้วยเครื่องอ่าน ELISA แบบไมโครเพลทที่ตั้งค่าไว้ที่ 450 นาโนเมตร

ชุดทดสอบสารทำปฏิกิริยากรด thiobarbituric (TBARS) (Biodiagnostic; Egypt) ใช้เพื่อวัดระดับของมาลอนไดอัลดีไฮด์ (MDA) ทางสเปกโตรโฟโตเมตริกที่ 535 นาโนเมตร (Gamal et al., 2018) ระดับของซูเปอร์ออกไซด์ดิสมิวเตส (SOD) ถูกวัดโดยใช้ชุดทดสอบ SOD (Biodiagnostic; Egypt)(Packer, 2002) การประเมินระดับกลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดส (GPX) ดำเนินการโดยใช้ชุดเครื่องมือ GPX (Randox Labs,Crumlin, United Kingdom) ในการหาปริมาณกิจกรรมของ catalase (CAT) กราฟการสอบเทียบถูกสร้างขึ้นสำหรับการทดสอบและตัวอย่างทั้งหมด โดยใช้ชุดทดสอบ (Biodiagnostic; Egypt) วิธีการนี้อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Gamal et al., 2018)

สารสกัดจากทะเลทราย cistanche ประโยชน์: ต้านการอักเสบ

PCR แบบเรียลไทม์เชิงปริมาณ

การแยก RNA จากตัวอย่างเนื้อเยื่อทำได้โดยใช้รีเอเจนต์ TriFast™ (PeqLab, Germany, Cat No.: 30-2010) ตามที่อธิบายไว้ในโปรโตคอลของผู้ผลิต ประเมินความเข้มข้นของ RNA บริสุทธิ์โดยใช้ NanoDrop 2000cspectrophotometer (Thermo Scientific, United States) RNA ที่สกัดจากแต่ละตัวอย่างถูกคัดลอกย้อนกลับโดยใช้ชุดการสังเคราะห์ SensiFAST™ cDNA สำหรับ RT-qPCR(Bioline USA Inc., United States, Cat No.: BIO-65053) โดยทำตามคำแนะนำของผู้ผลิต cDNA ที่สังเคราะห์ขึ้นถูกเก็บไว้ที่ -80 องศาจนถึงการใช้งานสำหรับ qRT-PCR

ปฏิกิริยา qRT-PCR ดำเนินการโดยใช้ชุดอุปกรณ์ SensiFAST™ SYBR Lo-ROX (Bioline USA Inc., UnitedStates, Cat No.: BIO-94002) บน Applied Biosystems 7500real ระบบตรวจจับ PCR ตามเวลา (Life technology, United States)ไพรเมอร์เฉพาะยีนสำหรับหนูที่ใช้ในการศึกษานี้ ออกแบบโดยซอฟต์แวร์ Primer3 (v.0.4.0) และตรวจสอบความจำเพาะโดยใช้โปรแกรม NCBI/Primer-BLAST จากนั้นจึงซื้อไพรเมอร์จาก Willowfort™ (สหราชอาณาจักร) ไพรเมอร์คือ GAPDH (5′-TGCACCACCAACTGCTTAGC-3′, 5′-GGCATGGACTGTGGTCATGAG-3′), caspase-3 (ไปข้างหน้า 5- TGTATGCTTACTCTACCGCACCCG-3 ย้อนกลับ {{ 20}}GCGCAAAGTGACTGGATGAACC-3), HSP70 (5′-ACGAGGGTCTCAAGGGCAAG-3′, 5′-CTCTTTCTCAGCCAGCGTGTTAG-3′)

Ki67 (ไปข้างหน้า 5-AGAAGAGCCCACAGCACAGAGAA-3 ย้อนกลับ 5-AGAAGAGCCCACAGCACACAGAA 3) PCRmixture ถูกเตรียมดังต่อไปนี้: 10 µl SensiFASTTM SYBRLo-ROX ผสม, 0.8 µl forward primer, 0.8 µl reverse primer, 2 µltemplate cDNA และ 6.4 µl น้ำที่ปราศจากนิวคลีเอส ส่วนผสมของปฏิกิริยาถูกถ่ายโอนไปยังตัวหมุนเวียนความร้อนซึ่งเคยตั้งโปรแกรมไว้ให้คงไว้ที่ 95 องศาเป็นเวลา 2 นาที ตามด้วย 40 รอบที่ 95 องศาเป็นเวลา 15 วินาที และ 60 องศาเป็นเวลา 30 วินาที มีการเรียกใช้ปฏิกิริยาควบคุมเชิงลบที่ไม่มีเทมเพลตในการทดสอบแต่ละครั้ง

การวิเคราะห์เส้นโค้งหลอมเหลวได้ดำเนินการเพื่อพิสูจน์ความจำเพาะของผลิตภัณฑ์ PCR และได้ค่า Ct สำหรับแต่ละปฏิกิริยาจากแผนภาพการขยาย การหาปริมาณสัมพัทธ์สำหรับการแสดงออกของยีนแต่ละรายการในตัวอย่างเนื้อเยื่อคำนวณโดยใช้วิธีเกณฑ์เปรียบเทียบ (ΔΔCt) โดยมี GAPDH เป็นยีนควบคุมภายใน สำหรับการเปลี่ยนแปลงการพับโดยรวม คำนวณและทำเป็นเส้นตรงโดยสูตรเลขคณิต 2−ΔΔCt

เทคนิคทางเนื้อเยื่อ

ในตอนท้ายของการทดลองและหลังจากที่หนูได้รับยาสลบ ช่องท้องก็เปิดออกและผ่าต่อมหมวกไตด้านขวาออก เพื่อให้ได้บล็อกพาราฟิน ทำการตรึงต่อมหมวกไตในฟอร์มาลินบัฟเฟอร์ที่เป็นกลาง 10 เปอร์เซ็นต์และดำเนินการต่อไป ส่วนของพาราฟินที่มีความหนา4-ไมครอนถูกเตรียมและย้อมด้วยฮีมาทอกซิลินันด์ อีโอซิน (H&E) นอกจากนี้ ส่วนพาราฟินอื่นๆ ถูกย้อมด้วยอิมมูโนฮิสโตเคมีโดยใช้เทคนิคเธรปตาวิดิน-ไบโอติน-เปอร์ออกซิเดส สไลด์ถูกบ่มข้ามคืนที่ 4 องศา และจากนั้นพวกมันถูกบ่มด้วยโมโนโคลนัลแอนติ-Ki67 (Dako Cytomation, United States, ที่การเจือจาง 1:1,000) ​​สำหรับการสาธิตการเพิ่มจำนวนเซลล์ นอกจากนี้ โพลีโคลนัลแอนติ-caspase-3 แอนติบอดี (เทคโนโลยีชีวภาพของซานตาครูซ สหรัฐอเมริกา ที่การเจือจาง 1:1,000) ถูกใช้เพื่อตรวจหาอะพอพโทซิส. โพลีโคลนัลแอนติบอดีต้านโปรตีนช็อกจากความร้อน-70 (HSP70) (ดาโก,คาร์พินเทเรีย, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา, ที่การเจือจาง 1:1,000) ยังถูกใช้อีกด้วย ใช้แอนติบอดีรองคอนจูเกตรองไบโอตินิลเลตที่สอดคล้องกันจากระบบการย้อมสีดาโก สไลด์ที่ย้อมด้วยแอนติบอดีทุติยภูมิถูกใช้เป็นตัวควบคุมเชิงลบเท่านั้น

นิวเคลียสถูกย้อมด้วย hematoxylin การย้อมสีน้ำตาลไซโตพลาสซึมถือเป็นปฏิกิริยาเชิงบวก ส่วนที่เป็นรอยเปื้อนได้รับการตรวจสอบและถ่ายภาพโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ของโอลิมปัส BX{{0}} (Olympus) ที่เชื่อมต่อกับกล้องดิจิตอลและคอมพิวเตอร์ การวิเคราะห์เชิงกึ่งปริมาณของแอนติบอดีต่อปฏิกิริยาภูมิคุ้มกันทำได้โดยซอฟต์แวร์วิเคราะห์ภาพ Pro Plus พื้นที่ร้อยละของปฏิกิริยาภูมิคุ้มกันได้รับการประเมินใน 30 ฟิลด์ที่กำลังขยาย × 400 เซลล์บวกถูกนับต่อพื้นที่ 1.0 mm2 ตามที่อธิบายโดย Zhou et al (2016). มีการตรวจสอบอย่างน้อยห้าฟิลด์จากแต่ละสไลด์และคำนวณค่าเฉลี่ยสำหรับสัตว์แต่ละตัว

สำหรับการวิเคราะห์ทางสัณฐานวิทยา ได้ทำการตรวจสอบสี่ส่วนในสัตว์แต่ละตัว (กำลังขยาย ×100) ความหนาของต่อมหมวกไตโซนต่างๆ วัดเป็นไมโครเมตร ความหนาของเยื่อหุ้มสมองต่อมหมวกไตได้มาจากการวัดระยะทางระหว่างไขกระดูกและแคปซูลต่อมหมวกไตในแนวเส้นตรง โดยวัดหนึ่งครั้งในแต่ละด้านของต่อมหมวกไต

การวิเคราะห์ทางสถิติ

ข้อมูลด้านพฤติกรรม ชีวเคมี และอิมมูโนฮิสโตเคมีได้รับการวิเคราะห์โดย Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) เวอร์ชัน 16 ตัวแปรในการศึกษาได้รับผลกระทบจากปัจจัยอิสระ 2 ประการ ได้แก่ การได้รับความเครียดและการรักษา ดังนั้น การวิเคราะห์โดยใช้ ANOVA แบบสองทางแบบผสมตาม Bonferroni post hoc ได้ดำเนินการ นัยสำคัญทางสถิติพิจารณาที่ p <>

ประโยชน์ของ cistanche ทะเลทราย: ต่อต้านริ้วรอย

ผลลัพธ์

ผลพฤติกรรม

เวลาที่เคลื่อนที่ไม่ได้ระหว่าง FST สูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (p=0.03) ในกลุ่ม CUMS มากกว่ากลุ่มควบคุม ในขณะที่ต่ำกว่าอย่างมีนัยสำคัญ (p=0.01, p=0.001) ในกลุ่มที่บำบัดด้วย FLU และ CP มากกว่าในกลุ่ม CUMS (รูปที่ 1A)

ผลการวิเคราะห์สารสกัด CP โดยใช้GC-MS

สารประกอบหลักที่ตรวจพบใน CP ได้แก่ กรดโอเลอิก (ประมาณ 56 เปอร์เซ็นต์) กรดปาลมิติก (ประมาณ 8.9 เปอร์เซ็นต์) กรดลิโนเลนิก 3.5 เปอร์เซ็นต์ กรดไลโนเลอิก 2.8 เปอร์เซ็นต์ นอกเหนือจากสารประกอบอื่น ๆ อีกมากมาย (ตารางที่ 2 รูปที่ 2) ในบรรดาสารประกอบของ CP ที่รายงานว่ามีฤทธิ์ต้านการอักเสบ ได้แก่ กรดโอเลอิก กรดปาลมิติก กรดลิโนเลนิก เบทูลิน และกรดลิโนเลอิก ในขณะที่สารประกอบที่มีสารต้านอนุมูลอิสระผลที่ได้คือกรดปาลมิติก,10-กรดออคทาเดซีโนอิก และเมทิลเอสเทอร์

การประเมินทางชีวเคมี

ระดับคอร์ติโคสเตอโรนในเซรั่ม

ระดับคอร์ติโคสเตอโรนเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (p < {{0}}.001) ในหนูที่ไม่ได้รับการรักษาที่สัมผัสกับ CUMS เมื่อเทียบกับหนูที่ได้รับการควบคุม ในขณะที่หนูที่ได้รับ FLU และ CP มีการลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (p < 0.001) ในซีรัมคอร์ติโคสเตอโรน เมื่อเทียบกับหนูที่ไม่ได้รับการรักษาที่สัมผัสกับ CUMS (รูปที่ 1B)

ระดับ TNF- และ IL-6 ในเซรั่ม

เมื่อสิ้นสุดการทดลอง การประเมิน TNF- และ IL ในซีรัม-6 พบว่ามีการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (p < 0.001) ในกลุ่ม CUMS ในขณะที่มีการลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (p< 0.001)="" in="" flu-="" and="" cp-treated="" groups="" compared="" with="" those="" in="" the="" untreated="" rats="" exposed="" to="" cums="" (figures="" 1c,="">

ระดับ MDA, SOD, GPX และ CAT ในเซรั่ม

พบว่าระดับ MDA ในซีรัมสูงกว่าอย่างมีนัยสำคัญ (p < {0}}.001)="" ในกลุ่ม="" cums="" มากกว่าในหนูที่ควบคุม="" ขณะที่ในกลุ่มที่ได้รับ="" cp="" ต่ำกว่าอย่างมีนัยสำคัญ="" (p="" 0.003)="" มากกว่านั้นในหนูที่ไม่ได้รับการรักษาที่สัมผัสกับ="" cums="" การบริหารโรคไข้หวัดใหญ่ไม่สามารถลดระดับ="" mda="" ที่สัมผัสกับ="" cums="" ได้อย่างมีนัยสำคัญ="" (รูปที่="">

ในทางตรงกันข้าม ระดับของ SOD, GPX และ CAT ในกลุ่มซีรัมของกลุ่ม CUMS ต่ำกว่าอย่างมีนัยสำคัญ (p < {{0}}}="" 001,="" p="">< 0.001,="" p="0" .002)="" มากกว่ากลุ่มซีรั่มของกลุ่มควบคุม="" ในขณะที่ระดับของพวกเขาแสดงให้เห็นการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ="" (p="0.01," p="0.003," p="" 0.03)="" ในกลุ่มที่ได้รับการรักษาด้วย="" cp="" เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มที่ได้รับ="" cp="" ในกลุ่มที่เปิดเผย="" cums="" การบริหาร="" flu="" ไม่สามารถเพิ่ม="" sod,="" gpx="" และ="" cat="" ในหนูที่สัมผัสกับ="" cums="" ได้อย่างมีนัยสำคัญ="" (รูปที่="">

การแสดงออกของยีน Ki67, Caspase-3 และHSP70

RT-PCR พบการแสดงออกของยีน Ki67 สูงอย่างไม่มีนัยสำคัญ (p=0.14) ในต่อมหมวกไตของกลุ่ม CUMS เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม ในขณะที่กลุ่มที่ได้รับการรักษาด้วย FLU และ CP มีการแสดงออกที่สูงอย่างมีนัยสำคัญ (p {{6 }}.02, p 0.01) เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มที่สัมผัส CUMS (รูปที่ 3E) เกี่ยวกับ caspase-3 การแสดงออกของยีนเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (p < 0.001) ในต่อมหมวกไตของกลุ่ม CUMS เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม ในขณะที่กลุ่มที่ได้รับการรักษาด้วย FLU และ CP ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (p=0.03, p=0.04) เมื่อเทียบกับกลุ่มที่สัมผัส CUMS (ภาพที่ 3F) เมื่อพูดถึงการแสดงออกของยีน HSP70 พบว่ามีระดับต่อมหมวกไตของกลุ่ม CUMS ที่สูงกว่ากลุ่มควบคุมอย่างมีนัยสำคัญ (p < 0.001) อย่างมีนัยสำคัญ กลุ่มที่ได้รับ CP แสดงให้เห็นการลดลงที่ไม่มีนัยสำคัญ (p=0.07,p=0.08) เมื่อเทียบกับกลุ่มที่สัมผัส CUMS (รูปที่ 3G)

การประเมินทางจุลพยาธิวิทยา

ต่อมหมวกไตของหนูควบคุมมีโครงสร้างที่ไม่บุบสลายด้วยสถาปัตยกรรมที่เก็บรักษาไว้ของคอร์เทกซ์รวมถึง zona glomerulosa, zona fasciculata และ zona reticularis และไขกระดูก (รูปที่ 4) ต่อมหมวกไตของหนูที่สัมผัสกับ CUMS แสดงให้เห็นเซลล์จำนวนมากใน ZG, ZF และ ZR ที่มี vacuolation ที่ชัดเจนและนิวเคลียสที่เสื่อมโทรมและบางครั้งนิวเคลียสที่ย้อมอย่างล้ำลึกมีความหนาปานกลางในแคปซูลและเนื้อเยื่อเกี่ยวพันtrabeculae เซลล์จำนวนมากของ ZR มีสีเข้มและมีสารสี lipofuscin สีน้ำตาล ในทางกลับกัน ต่อมหมวกไตของหนูที่ได้รับการรักษาด้วย CP แสดงให้เห็นเซลล์ที่มีแวคคิวโอเลตน้อยกว่าและนิวเคลียสที่ย้อมลึกใน ZG และ ZF และ ZR เผยให้เห็นเซลล์มืดจำนวนเล็กน้อย

การวัดทางสัณฐานวิทยาแสดงให้เห็นว่าความหนาของ ZG และ ZR แสดงให้เห็นการเพิ่มขึ้นที่ไม่มีนัยสำคัญหลังจากสัมผัสกับ CUMS ในขณะที่เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญใน FLU- (p 001,p 0.02) และกลุ่มที่บำบัดด้วย CP (p=0.02, p=0.001) ตามลำดับ เกี่ยวกับความหนาของ ZF เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (p 0.02) ในกลุ่มที่สัมผัส CUMS และเพิ่มขึ้นอีก แต่ไม่มีนัยสำคัญในกลุ่มที่ได้รับการรักษาด้วย FLU- และ CP เมื่อเทียบกับในกลุ่ม CUMS ที่ไม่ได้รับการรักษา

เพื่อตรวจสอบว่าเซลล์ hyperplasia ถูกจำกัดไปยังภูมิภาคย่อยเฉพาะของต่อมหมวกไต จะใช้การติดฉลากทางอิมมูโนฮิสโตเคมีสำหรับ Ki67 (เครื่องหมายของเซลล์แบ่ง) จำนวน Ki67-เซลล์การงอกขยายที่เป็นบวกเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (p < 0.001)="" ใน="" zf="" หลังจากการสัมผัสกับ="" cums="" ในขณะที่การรักษาด้วย="" flu="" และ="" cpin="" เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับกลุ่ม="" cums="" ที่ไม่ได้รับการรักษา="" แม้ว่าจำนวนเซลล์ที่เพิ่มจำนวนจะเพิ่มขึ้นเล็กน้อยใน="" zg="" และ="" zr="" และลดลงเล็กน้อยในไขกระดูกของกลุ่ม="" cums="" เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม="" การรักษาด้วย="" flu="" และ="" cp="" เพิ่มจำนวนเซลล์ที่เพิ่มจำนวนใน="" zg="" อย่างมีนัยสำคัญ="" (p="0.001" ,="" p="0.003),ZR" (p="">< 0.001)="" และ="" medulla="" (p="0.004," p="0.003)" เปรียบเทียบกับกลุ่ม="" cums="" ที่ไม่ผ่านการบำบัด="" (รูปที่="" 4,="">

การย้อมสีอิมมูโนฮิสโตเคมีโดยใช้แคสเปส-3 ถูกดำเนินการเพื่อประเมินอะพอพโทซิส(รูปที่ 6) สังเกตพบว่าพื้นที่ร้อยละของการแสดงออกของ caspase-3 เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (p < 0.001)="" ในทุกโซนของต่อมหลังจากได้รับ="" cums="" เป็นเวลา="" 4="" สัปดาห์ใน="" เปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม="" กลุ่มที่ได้รับการรักษาด้วย="" cp="" แสดงการลดลงอย่างมีนัยสำคัญในการแสดงออกของ="" caspase-3="" ใน="" zg="" (p="">< 0.001),="" zf="" (p="">< 0.001),="" zr="">< 0.001,="" p=""
="" 0.005),="" and="" medulla="" (p="0.004," p="0.001)," in="" comparison="" to="" that="" of="" the="" cums="" group="" (figures="">

เปอร์เซ็นต์พื้นที่ของการแสดงออกของ HSP70 เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (p < 0.001) ในทุกโซนของเยื่อหุ้มสมองและในไขกระดูกของต่อมหมวกไตของกลุ่ม CUMS เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม ในขณะที่ลดลงเล็กน้อยใน โซนทั้งหมดและเมดัลลาของกลุ่มที่ได้รับการรักษาด้วย FLU และ CP เปรียบเทียบกับกลุ่มที่ได้รับ CUMS (รูปที่ 5)

Cistanche tubulosa ชิ้นแห้ง

อภิปรายผล

เห็นได้ชัดว่าสังคมสมัยใหม่เต็มไปด้วยความเครียดที่อาจเกิดขึ้นจากปัญหาในชีวิตประจำวัน การดูแลสุขภาพ และปัญหาที่เกี่ยวข้องกับงาน แรงกดดันเหล่านี้อาจทำให้เกิดความผิดปกติที่เรียกว่าความเครียด (Clayton andMccance, 2014) ในการศึกษานี้ สารสกัดเอธานอลของเนื้อและเปลือกของ Cucurbita pepo L. ถูกนำมาใช้เพื่อตรวจสอบศักยภาพในการบรรเทาพฤติกรรมซึมเศร้าที่เกิดจาก CUMS และผลกระทบต่อต่อมหมวกไต สิ่งนี้ได้รับการพิสูจน์โดยการเพิ่มขึ้นของระดับคอร์ติโคสเตอโรนในซีรัมและได้รับการยืนยันโดยระยะเวลาที่ไม่สามารถเคลื่อนไหวได้เป็นเวลานานในช่วง FST การค้นพบนี้สอดคล้องกับรายงานก่อนหน้านี้ (Tang et al., 2015)

มีรายงานว่าทั้ง TNF- และ IL-6 เกี่ยวข้องกับการเกิดโรคของภาวะซึมเศร้า (Taraz et al., 2015; Pedraz-Petrozziet al., 2020) มีรายงานว่าหนูที่ขาด IL-6 หรือตัวรับ TNF นั้นดื้อต่อพฤติกรรมซึมเศร้า (Viana et al., 2010) ดังนั้นจึงได้รับการประเมินในการศึกษานี้ และพบว่าทั้ง TNF- และ IL{ {9}} เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในหนูเหล่านี้ที่สัมผัสกับ CUMS เป็นเวลา 4 สัปดาห์ ซึ่งบ่งชี้ว่ามีอาการซึมเศร้า การค้นพบนี้ได้รับการสนับสนุนโดย Numakawa et al.(2014) ในหนูที่มีพฤติกรรมสิ้นหวังและโดย Taraz et al. (2015)ในผู้ป่วยโรคซึมเศร้า.

ในการศึกษานี้ การบริหารสารสกัดจากฟักทองมีความเกี่ยวข้องกับการเยียวยาพฤติกรรมซึมเศร้า โดยเห็นได้จากการลดเวลาที่ไม่สามารถเคลื่อนไหวของ FST ได้อย่างมีนัยสำคัญ และยืนยันโดยการลดลงอย่างมีนัยสำคัญของ incorticosterone และ inflammatory cytokines TNF- และ IL-6 ในซีรัม การค้นพบนี้ได้รับการสนับสนุนโดย Kim Nr et al (2016) ซึ่งรายงานว่า SSP เป็นเวลา 28 วันลดระดับของการอักเสบของไซโตไคน์ในหนูที่เป็นโรคซึมเศร้า ฤทธิ์ต้านการอักเสบของฟักทองอาจมีสาเหตุมาจากสารออกฤทธิ์ของฟักทอง เช่น โอเลอิกและปาล์มิติคาซิดและเอสตราไดออล

การปรับลดกรดโอเลอิก กรดปาลมิติก และกรดลิโนเลอิกถูกอธิบายไว้ในภาวะซึมเศร้า (Conklin et al., 2010; Martín et al.,2010) มีรายงานว่า neuroprotectionis ที่เป็นสื่อกลางของกรดโอเลอิกเชื่อมโยงกับผลต้านการอักเสบโดยอาศัยการกระตุ้นด้วยแกมมาที่กระตุ้นด้วย peroxisomeproliferator (PPAR-) (Song et al., 2019) นอกจากนี้ ยังมีรายงานว่ากรดปาล์มิติกยับยั้งฟอสโฟไลเปส A(2) และด้วยเหตุนี้ ถือเป็นสารต้านการอักเสบ (Aparna et al., 2012). เอสตราไดออลเป็นหนึ่งในสารประกอบของฟักทองที่ตรวจพบในการศึกษานี้ มีรายงานว่าเอสตราไดออลกระตุ้นฤทธิ์ต้านการอักเสบและต่อมาก็บรรเทาพฤติกรรมซึมเศร้า (Xu et al., 2015) กลไกอีกประการหนึ่งที่เอสตราไดออลสามารถกระตุ้นฤทธิ์ต้านอาการซึมเศร้าได้คือการปรับการควบคุมของ การแสดงออกของปัจจัย neurotrophic ที่ได้รับจากสมอง (BDNF) และ ERK phosphorylation โดยการกระตุ้น ER- ในสมอง (Yang et al., 2010)

ในการศึกษานี้ ระดับซีรั่มของ MDA เพิ่มขึ้น ในขณะที่ระดับ SOD, GPX และ CAT ลดลงใน CUMS-exposedrats การเปลี่ยนแปลงที่คล้ายคลึงกันได้รับการบันทึกไว้หลังจากการสัมผัสกับ CUMS ในการศึกษาก่อนหน้านี้ และพวกเขาเสริมว่าการเปลี่ยนแปลงทางชีวเคมีเหล่านี้ส่งผลให้เกิดความเครียดออกซิเดชันและการด้อยค่าของ HPA (Nabavi et al., 2015) Liu T. และคณะ (2015) ยังรายงานด้วยว่าการพัฒนาของภาวะซึมเศร้าอาจเนื่องมาจากสารต้านอนุมูลอิสระในร่างกายมีปริมาณต่ำ คุณสมบัติต้านอนุมูลอิสระของฟักทองมีการรายงานสารสกัดจากผลไม้บ่อยครั้ง (Bahramsoltani et al., 2017) นอกจากนี้ ยังมีรายงานว่าเนื้อและเปลือกของ Cucurbita pepo L. ประมวลผลกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระที่สูงกว่าส่วนอื่นๆ เช่น เมล็ดพืช (Oyeleke et al., 2019) การบริหารสารสกัดจากฟักทอง ในการศึกษาก่อนหน้านี้จำนวนมาก เพิ่มระดับ SOD และ GPX และลด MDA ในซีรัมของหนูอย่างมีนัยสำคัญ (Guo-Huaet al., 2000; Dang, 2004) และผลกระทบนี้ได้รับการบันทึกไว้ในการศึกษานี้ด้วย ดังนั้นสารต้านอนุมูลอิสระการทำงานของฟักทองอาจอยู่เบื้องหลังผลยากล่อมประสาทในการศึกษานี้ ซึ่งสอดคล้องกับข้อสังเกตของ Kim Nr et al (2016). มีรายงานว่าผลิตภัณฑ์จากธรรมชาติที่มีฤทธิ์ต้านการอักเสบสารต้านอนุมูลอิสระและฤทธิ์ต้านความเหนื่อยล้าก็มีผลเหมือนยากล่อมประสาท (Jeong et al., 2015) กิจกรรมก่อนหน้านี้ทั้งหมดได้รับการพิสูจน์ในฟักทอง.

Cistanche มีฤทธิ์ต่อต้านริ้วรอย

การเพิ่มขึ้นของ cytoplasmic vacuolation ของเซลล์เยื่อหุ้มสมองต่อมหมวกไตที่สังเกตได้ในกลุ่ม CUMS ในการศึกษานี้ อาจมีสาเหตุมาจากความต้องการลิปิดที่เพิ่มขึ้น ซึ่งเป็นรากฐานสำคัญในการสังเคราะห์คอร์ติซอล Cigankova และคณะ (2005) สังเกตว่าไฮเปอร์ไดนามิกในการทดลองที่ยาวนานส่งผลให้เกิดการรวมตัวของหยดลิปิดไซโตพลาสซึมหลายหยดของเซลล์คอร์เทกซ์ lipiddroplets เหล่านี้มีคอเลสเตอรอลซึ่งเป็นสารตั้งต้นหลักในการสังเคราะห์ฮอร์โมนสเตียรอยด์ อย่างไรก็ตาม Koldysheva และLushnikova (2008) รายงานว่าความเครียดส่งผลให้หยดไขมันในเซลล์ของต่อมหมวกไตลดลงอย่างมีนัยสำคัญ โดยเฉพาะ ZF (Koldysheva and Lushnikova, 2008) มีการอธิบายไว้ว่าเมื่อสัมผัสกับความเครียดทางกายภาพ สิ่งกระตุ้นความเจ็บปวดจะถูกส่งไปยังไฮโปทาลามัส ส่งผลให้มีการหลั่ง CRH เข้าสู่ระบบพอร์ทัล hypophyseal ซึ่งเพิ่มการหลั่ง ACTH และกระตุ้นตัวรับใน ZF และ ZR เพื่อเพิ่มการหลั่งคอร์ติซอล (Patti et al., 2018) มีรายงานก่อนหน้านี้ว่าต่อมหมวกไตแคปซูลและ trabeculae ที่หนาขึ้นที่พบในหนูที่สัมผัส CUMS (El-Desouki et al., 2011; Altayeb และ Salem, 2017) อันเป็นผลมาจากการสังเคราะห์คอลลาเจนที่เพิ่มขึ้นโดยไฟโบรบลาสต์เมื่อสัมผัสกับความเครียดจากการตรึง

เซลล์จำนวนมากในต่อมหมวกไตของหนูทดลองที่สัมผัส CUMS แสดงนิวเคลียสที่มีคราบฝังลึก ซึ่งบ่งชี้ว่าเซลล์เหล่านั้นอยู่ภายใต้การหมุนเวียนของเยื่อหุ้มสมองที่ได้รับการยืนยันโดยแคสเปส-3 immunohistochemicalstaining Altayeb และ Salem รายงานข้อสังเกตที่คล้ายกัน(2017) ในขณะที่พวกเขากำลังศึกษาผลกระทบของการตรึงความเครียดต่อต่อมหมวกไตของหนู Liu Q. และคณะ (2015) รายงานว่าความเครียดออกซิเดชันที่มากเกินไป ซึ่งเห็นได้ชัดจากการสัมผัสกับ CUMS ในการศึกษานี้ ปรับเปลี่ยนระดับการแสดงออกของ "อะพอพโทซิส-ยีนที่เกี่ยวข้องกัน" และกระตุ้นการตายของเซลล์และการเสื่อมสภาพผ่านวิถีการส่งสัญญาณของ Bcl-2, Bax และ caspase-3 กลไกนี้ได้รับการยืนยันในการศึกษานี้โดย RT-PCR ซึ่งเผยให้เห็นการควบคุมที่เพิ่มขึ้นของยีน caspase-3 ในการทบทวนวรรณกรรม ไม่มีผลโดยตรงของ Cucurbita pepo ต่อ caspase-3–mediated apoptosis in differenttissues ดูเหมือนว่าการลดลงของ caspase-3–positive apoptoticcells ที่ตรวจพบในต่อมหมวกไตมีสาเหตุมาจากสารต้านอนุมูลอิสระผลของ Cucurbita pepo ที่บันทึกไว้ในการศึกษานี้ ได้รับการสนับสนุนโดยการศึกษาก่อนหน้านี้จำนวนมากที่ดำเนินการเกี่ยวกับพืชชนิดอื่นและสมุนไพรที่มีกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระที่สำคัญ (Banagozar Mohammadi et al., 2019; Ghazizadeh et al., 2020)

การศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าการสัมผัสกับ CUMS เพิ่ม Ki67-เซลล์บวกในเยื่อหุ้มสมองต่อมหมวกไตซึ่งเห็นได้ชัดเจนใน ZF ซึ่งบ่งชี้ว่ามีการเพิ่มจำนวนเซลล์ที่เพิ่มขึ้น และเป็นผลให้ความหนาของชั้นนี้เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญบน ในทางกลับกัน จำนวน Ki67-เซลล์การเพิ่มจำนวนที่เป็นบวกลดลงเล็กน้อยในไขกระดูกเพื่อตอบสนองต่อ CUMS การสังเกตเหล่านี้สอดคล้องกับเซลล์ของ Ulrich-Lai et al.(2006) ซึ่งรายงานการเพิ่มขึ้นของ Ki{{ 4}}นิวเคลียสของเซลล์ที่เป็นบวกเท่านั้นใน ZF ด้านนอกหลังจากสัมผัสกับความเครียดเรื้อรังแบบแปรผัน ในขณะที่ธีมดูลลาแสดงการโตมากเกินไปของเซลล์และไม่ใช่การเกิด hyperplasia นอกจากนี้ Laborie et al., (2003) รายงานว่าการทำงานของไขกระดูกโดยรวมเพิ่มขึ้นหลังจากสัมผัสกับความเครียดเรื้อรัง ซึ่งบ่งชี้ว่า ความเครียดเรื้อรังอาจนำไปสู่การเจริญเติบโตมากเกินไปของไขกระดูก ในการศึกษานี้ การบริหารให้ฟักทองสกัดได้อย่างมีนัยสำคัญเพิ่มการงอกขยายของเซลล์อย่างเห็นได้ชัดโดยการเพิ่มขึ้นของยีน Ki67 และการแสดงออกของภูมิคุ้มกันในเกือบทุกโซนและธีมของต่อมหมวกไตเมื่อเทียบกับ CUMS สิ่งนี้อธิบายความหนาที่เพิ่มขึ้นของโซนต่อมที่บันทึกไว้ในการศึกษานี้ นอกจากนี้ยังอาจชดเชยผลการตายของเซลล์ที่เกิดจากการสัมผัส CUMS การค้นพบนี้ได้รับการสนับสนุนโดย Kim Hy et al (2016) ผู้รายงานการปรับขึ้นที่สำคัญของการแสดงออกของ mRNA ของ Ki67 และการเพิ่มจำนวนของเซลล์ม้ามที่แยกได้จากม้ามของหนู BALB/c ที่บำบัดด้วย SSP, สตรีม และ Cucurbita moschataDuch และส่วนประกอบหลักคือ -แคโรทีน

ในการศึกษาปัจจุบัน การสัมผัสกับ CUMS อย่างมีนัยสำคัญเพิ่มการแสดงออกของยีนและการแสดงออกของภูมิคุ้มกันของ HSP70 ในทุกโซนของต่อมหมวกไต เพื่อให้สอดคล้องกับสิ่งนั้น Zheng และคณะ (2008) ยังพิสูจน์ด้วยว่าการแสดงออกของ HSP70 ที่เพิ่มขึ้นหลังจากการสัมผัสกับสภาวะที่ตึงเครียดปรับเปลี่ยนการตอบสนองการอักเสบโดยการยับยั้งการกระตุ้นของปัจจัยการถอดรหัสการอักเสบซึ่งเป็นปัจจัยนิวเคลียร์ - คัปปา B (NF-kappaB) นอกจากนี้ HSP70 อาจรบกวนโดยตรงด้วยการตายของเซลล์และเนื้อร้าย (Yenari et al., 2005) เมื่อไม่นานมานี้ Liet al (2019) รายงานการเพิ่มขึ้นของการแสดงออกของ HSP70 ในเนื้อเยื่อต่อมหมวกไตของสุกรหลังจากได้รับความเครียดจากความร้อน ซึ่งบ่งชี้ถึงบทบาทของ HSP70 ในการบาดเจ็บของต่อมหมวกไตและเน้นความเกี่ยวข้องกับการตอบสนองต่อการอักเสบ การเหนี่ยวนำอย่างรวดเร็วของ HSP70 ในการตอบสนองต่อความเครียดถือเป็นสิ่งสำคัญต่อกระบวนการปกป้องเซลล์

ในการศึกษาของเรา การรักษาหนูที่สัมผัส CUMS ด้วยฟักทองสัมพันธ์กับการลดลงเล็กน้อยในการแสดงออกของ HSP70 ซึ่งสัมพันธ์กับการตายของเซลล์และการอักเสบที่ลดลง สิ่งนี้อาจชี้ให้เห็นถึงผลประโยชน์ของระดับ HSP70 ที่ค่อนข้างสูงซึ่งเกิดจากทั้ง FLU และ CP โดยที่ส่งผลให้มีการลดลงของแคสเปส-3ซึ่งเป็นสื่อกลางอะพอพโทซิสและปล่อยไซโตไคน์อักเสบ แม้ว่าผลของฟักทองต่อกลุ่มโปรตีนช็อตจากความร้อนจะไม่ได้อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ แต่กรดโอเลอิกซึ่งแสดงถึงองค์ประกอบหลักของฟักทองใช้ในการศึกษานี้ อธิบายเพื่อลดการแสดงออกของ HSP60 ในสายเซลล์ทีลิมโฟไซต์ของมนุษย์ (Martins De Lima et al., 2004) ซึ่งสนับสนุนการศึกษาค้นคว้าของเรา กลไกการออกฤทธิ์ของสารคล้ายยากล่อมประสาท Cucurbita pepo asan สรุปไว้ในรูปที่ 7 ท่ามกลางข้อจำกัดของการศึกษานี้คือไม่สามารถตรวจสอบกลไกในเชิงลึกของผลยากล่อมประสาทของ CP ได้ ดังนั้นจึงแนะนำให้ทำการศึกษาต่อไป .

โดยสรุป การศึกษานี้แสดงหลักฐานทางวิทยาศาสตร์เกี่ยวกับประสิทธิภาพของสารสกัด Cucurbita pepo L. ในการบรรเทาการเปลี่ยนแปลงทางพฤติกรรมและชีวเคมีที่เกิดจาก CUMS รวมทั้งผลกระทบทางจุลพยาธิวิทยาต่อต่อมหมวกไต ผลกระทบเหล่านี้เห็นได้ชัดจากการปรับลดของอะพอพโทซิสและการแสดงออกของHSP70และดูเหมือนว่าจะเป็นสื่อกลางผ่านสารต้านอนุมูลอิสระและฤทธิ์ต้านการอักเสบของ Cucurbita pepoL สารสกัด. แม้ว่าการศึกษานี้และการศึกษาเมื่อเร็วๆ นี้บางส่วนได้บันทึกถึงผลคล้ายยากล่อมประสาทของ Cucurbita pepo และสำรวจกลไกของมัน แต่จำเป็นต้องมีการศึกษาเพิ่มเติมรวมถึงการศึกษาทางคลินิกเพื่อยืนยันผลกระทบนี้ในมนุษย์

เม็ด Cistanche