อนุภาคนาโนซิงค์ออกไซด์ Ameliorate Dimethylnitrosamine-Induced Renal Toxicity ในหนูแรท

ติดต่อ: Tina Xiang อีเมล:tina.xiang@wecistanche.com

เชิงนามธรรม

ไดเมทิลไนโตรซามีน(DMN) เป็นสารก่อมะเร็ง เป็นพิษต่ออวัยวะต่างๆ ได้แก่ตับ, ไตปอด และระบบภูมิคุ้มกัน ในอดีตมีการใช้ยาหลายชนิดเพื่อปรับความเป็นพิษโดยใช้แบบจำลองสัตว์ทดลอง การศึกษานี้ได้รับการออกแบบมาเพื่อตรวจสอบผลของอนุภาคนาโนซิงค์ออกไซด์ (ZnONPs) ต่อความเป็นพิษของไตที่เกิดจาก DMN ในหนูทดลอง เนื่องจากกลไกการเกิดออกซิเดชันส่วนใหญ่เกี่ยวข้องกับความเป็นพิษของมัน การศึกษาที่เสนอจึงมุ่งเน้นไปที่การแก้ไขของความเครียดออกซิเดชันตอบกลับโดย ZnONP หากมี ผลลัพธ์ปัจจุบันแสดงให้เห็นว่าการให้ ZnONPs (50 มก./กก. น้ำหนักตัว/หนู) กับ DMN (2 ul/100 g น้ำหนักตัว/หนู) - หนูที่ได้รับการบำบัดด้วย ZnONP ทำให้ความเข้มข้นของ malonaldehyde, H, O และ NO ในไตลดลง อย่างไรก็ตาม ความเข้มข้นของกลูตาไธโอนที่ลดลง (GSH) เพิ่มขึ้นหลังการรักษาด้วย ZnONP ผลลัพธ์ของกลูตาไธโอน S-transferase และกลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดสสนับสนุนฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ ผลลัพธ์เหล่านี้ได้รับการสนับสนุนโดยการกู้คืนความเสียหายของ DNA ออกซิเดชันและการเปลี่ยนแปลงทางจุลพยาธิวิทยาที่เด่นชัดในไตน้อยลง มีการตั้งสมมติฐานว่า ZnONP อาจเป็นพิษต่อเนื้อเยื่อไต อย่างไรก็ตาม ศักยภาพในการรักษา/ต้านออกซิเดชันที่แรงของพวกมันช่วยในการบรรเทาที่เกิดจาก DMNความเป็นพิษต่อไตในหนู

คีย์เวิร์ด:ไดเมทิลไนโตรซามีน ไต. อนุภาคนาโนซิงค์ออกไซด์·ความเครียดออกซิเดชัน จุลพยาธิวิทยา

คลิกที่นี่เพื่อดูข้อมูลเอฟเฟกต์ cistanche เพิ่มเติม

บทนำ

Dimethylnitrosamine (DMN) เป็นสารก่อมะเร็ง [2] ได้รับการยืนยันแล้วว่าตำแหน่งที่ต้องการของการเปลี่ยนรูปทางชีวภาพคือตับ อย่างไรก็ตาม อวัยวะ กล่าวคือไตและปอดก็มีส่วนร่วมในการเผาผลาญของมันแม้ว่าจะมีระดับเล็กน้อย [25] มากีและบาร์นส์ [29] เป็นครั้งแรกที่แสดงให้เห็นว่า DMN ครั้งเดียวสามารถทำให้เกิดเนื้องอกในไต การศึกษาในภายหลังระบุว่ามะเร็งไตที่เกิดจาก DMN กับชนิดของออกซิเจนที่มีปฏิกิริยา (ROS) และความเครียดออกซิเดชัน [3, 32].

มีการศึกษาบางอย่างเพื่อปรับความเป็นพิษของ DMN ในสัตว์ทดลองที่เหมาะสมโดยใช้ยาและสารต้านอนุมูลอิสระหลายชนิด Hamza และคณะ [20] ศึกษาผลการรักษาของกรดไลโปอิก (ALA) ต่อการกระตุ้นด้วย DMNความเป็นพิษต่อไตในหนู Rana และ Kumar [40] รายงานว่าแคดเมียมและสังกะสี metallothionein ยับยั้งการเกิด lipid peroxidation (LPO) ในไตของหนูที่ได้รับ DMN ก่อนหน้านี้เป็นที่ทราบกันดีว่าสังกะสีที่เป็นโลหะมีบทบาทสำคัญในการเป็นปัจจัยการถอดรหัสและการป้องกันสารต้านอนุมูลอิสระในการป้องกันความเป็นพิษของ DMN ช่องสังกะสีสร้างสมดุลระหว่างการอยู่รอดของเซลล์และการตายของเซลล์โดยการควบคุมการเคลื่อนไหวของสังกะสีอิสระและภายในเซลล์ [8] ดังนั้น สังกะสีในอดีตจึงถือเป็นสารที่เหมาะสมในการป้องกันความเป็นพิษของซีโนไบโอติกหลายชนิด เช่น คาร์บอนเตตระคลอไรด์ |41 เอทิลแอลกอฮอล์ [62] และไดคลอโรไดฟีนิลไตรคลอโรอีเทน [12]

ความก้าวหน้าล่าสุดใน nanomedicine ได้ใช้อนุภาคนาโนในการรักษาและวินิจฉัยโรคต่างๆ ในบริบทนี้ อนุภาคนาโนหลายตัวกำลังถูกสังเคราะห์และทดสอบความเป็นพิษของพวกมัน [22] อนุภาคนาโนของซิงค์ออกไซด์ (ZnONPs) ได้รับการพิจารณาว่าเป็นยารักษาที่มีศักยภาพเนื่องจากการดูดซึม ความเข้ากันได้ทางชีวภาพ และความสามารถในการละลายสูง มีความสามารถในการควบคุมวัฏจักรของเซลล์และสภาวะสมดุลของเซลล์ [56] สำนักงานคณะกรรมการอาหารและยา (อย.) ได้อนุมัติอนุภาคนาโนซิงค์ออกไซด์สำหรับการบำบัดมะเร็งด้วย มันสามารถทำให้เกิดความเป็นพิษเฉพาะเจาะจงต่อเซลล์มะเร็งโดยความไม่สมดุลของกิจกรรมโปรตีนที่ขึ้นกับสังกะสี (Vinderall and Mitjans, 2015). ราสมุสเซ่นและคณะ [44] ตั้งสมมติฐานว่า ZnONPs สามารถฆ่าเซลล์มะเร็งผ่านการเหนี่ยวนำของความเครียดออกซิเดชัน. ดังนั้น ZnONPs จึงกลายเป็นแพลตฟอร์ม nano theranostics เพื่อต่อต้านโรคต่างๆ โดยเฉพาะอย่างยิ่งโรคที่เกิดจากความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน อย่างไรก็ตาม ห้องปฏิบัติการหลายแห่งได้ตีพิมพ์รายงานแสดงความเป็นพิษต่ออวัยวะและเซลล์เฉพาะ [11,26]

ดังนั้น ดูเหมือนจะมีเหตุผลเพียงพอที่จะตรวจสอบเพิ่มเติมเกี่ยวกับผลการต้านอนุมูลอิสระของ ZnONP ที่แสดงออกมาในการตั้งค่าการทดลองที่เหมาะสม ด้วยมุมมองนี้ การศึกษาเกี่ยวกับผลการป้องกันของ ZnONP ต่อความเป็นพิษต่อตับที่เกิดจาก DMN ในหนู Wistar เพศผู้เพิ่งทำขึ้นในห้องปฏิบัติการของเรา|43] เพื่อขยายการศึกษานี้ มีความพยายามที่จะประเมินผลการป้องกันของ ZnONPs หากมีต่อความเป็นพิษของไตที่เกิดจาก DMN ในหนูแรท นอกจากนี้ยังมีการศึกษาความเป็นพิษต่อไตของ ZnONPs ไปพร้อม ๆ กัน

วัสดุและวิธีการ

เคมีภัณฑ์และรีเอเจนต์

อนุภาคนาโนซิงค์ออกไซด์ถูกจัดหาจาก Sigma Chemical Co. Missouri(USA) ตามที่ผู้ผลิตระบุ อนุภาคนาโนประกอบด้วยธาตุสังกะสีประมาณ 80 เปอร์เซ็นต์ ความบริสุทธิ์ 100 เปอร์เซ็นต์ และ<100 nm="" size="" with="" a="" surface="" area="" of="" 15-25="">

ไดเมทิลไนโตรซามีน, กรดไธโอบาร์บิทูริก, 5'-5'-ไดไทโอบิส-2-กรดไนโตรเบนโซอิก,1-คลอโร-2,4-ไดไนโตรเบนซีน, กลูตาไธโอนรีดักเตส, กลูตาไธโอนและ N- (1-แนฟทิล)เอทิลีนไดเอมีน ไดไฮโดรคลอไรด์(NEDA) ถูกซื้อจาก Sigma Chemical Co.(สหรัฐอเมริกา) ด้วย รีเอเจนต์อื่นๆ ที่มีความบริสุทธิ์สูงสุดได้มาจาก High Media (มุมไบ)

การหาลักษณะพิเศษของอนุภาคนาโนซิงค์ออกไซด์

ZnONPs มีลักษณะเฉพาะโดยใช้แบตเตอรีของวิธีการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [43] โดยสังเขป ขนาดและรูปร่างของ ZnONPs ถูกสังเกตผ่านกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่านที่ศูนย์เครื่องมือวิเคราะห์ที่ซับซ้อน มหาวิทยาลัยปัญจาบ จัณฑีครห์ (อินเดีย) การสแกนการสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนและการวิเคราะห์รังสีเอกซ์แบบกระจายพลังงาน (EDAX) ได้ดำเนินการที่ภาควิชาฟิสิกส์ มหาวิทยาลัย Choudhary Charan Singh เมืองมีรุต (อินเดีย) การวิเคราะห์ขนาด การกระจาย และศักยภาพของซีตาและการวิเคราะห์ XRD ของ ZnONP ได้ดำเนินการที่สถาบันเทคโนโลยีแห่งอินเดีย เมือง Roorkee (อินเดีย)

การบำรุงรักษาสัตว์และพิธีสารทดลอง

ขออนุมัติล่วงหน้าจากคณะกรรมการจริยธรรมของสัตว์ประจำสถาบันเพื่อทำการสอบสวนในปัจจุบัน ทำการทดลองกับหนู Wistar เพศผู้ (150±25 ก.) ที่จัดหาจากสถานเลี้ยงสัตว์ของ Jamia Hamdard เมืองเดลี หนูถูกเลี้ยงไว้ภายใต้สภาวะห้องปฏิบัติการมาตรฐาน (อุณหภูมิห้อง 25±5 องศา ความชื้นสัมพัทธ์ 50 บวก 10 เปอร์เซ็นต์ และวงจรความมืด/แสง 12-ชม.) หนูแต่ละตัวถูกเลี้ยงแยกกันในกรงโพลีโพรพิลีนและเสนออาหารเชิงพาณิชย์ (Golden Feeds, เดลี) และน้ำประปาโดยอิสระ

หลังจากปรับตัวให้ชินกับสภาพห้องปฏิบัติการเป็นเวลา 2 สัปดาห์ หนูจะถูกสุ่มแบ่งกลุ่มออกเป็นสี่กลุ่ม โดยแต่ละกลุ่มมีหนูห้าตัว หนูของกลุ่ม A ถูกฉีด DMN (2 ไมโครลิตร/100 กรัมของน้ำหนักตัว) ในน้ำเกลือในช่องท้อง (ip) ในแต่ละวันสลับกันเป็นเวลา 15 วันตามที่บรรยายไว้ก่อนหน้านี้ [43] หนูในกลุ่ม B ถูกบำบัดในฐานะหนูของกลุ่ม A และต่อมาบริหารให้ NOEL ของ ZnONP ที่กำหนดไว้ล่วงหน้า (50 มก./กก.) ในแต่ละวันสลับกันเป็นเวลา 30 วัน หนูในกลุ่ม C ได้รับการรักษาด้วย ZnONPs เท่านั้น โดยในหนูของกลุ่ม B หนูในกลุ่ม D ถูกฉีด (ip) น้ำเกลือ (2 ul/100 g น้ำหนักตัว) เฉพาะในแต่ละวันสลับกันเป็นเวลา 45 วัน และถือว่าเป็นกลุ่มควบคุม

หลังจากผ่านไป 45 วัน หนูจะอดอาหารข้ามคืน และเก็บตัวอย่างปัสสาวะในเช้าวันรุ่งขึ้นผ่านกรงเมตาบอลิซึม หลังจากนั้นหนูก็ถูกสังเวยโดยการดมยาสลบ ดิไตถูกนำออกอย่างระมัดระวังและแปรรูปเพื่อประเมินชนิดของปฏิกิริยา ได้แก่ มาลอนไดอัลดีไฮด์ ไนตริกออกไซด์ และไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ ความเครียดออกซิเดชันถูกกำหนดผ่านพารามิเตอร์มาตรฐาน ได้แก่ กลูตาไธโอนรีดิวซ์ (GSH) กลูตาไธโอนเอส-ทรานสเฟอเรส และกลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดสตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง

ครีเอตินีน

ครีเอตินีนในตัวอย่างปัสสาวะถูกกำหนดโดยวิธีของ Toro และ Acker-man (1975) โดยใช้ชุดเครื่องมือทางการค้าที่จัดหาจาก M/S Span Diagnostics, Surat (คุชราต ประเทศอินเดีย)

ความเครียดออกซิเดชัน

มาลอนไดอัลดีไฮด์ (MDA)

MDA ในเนื้อเยื่อไตถูกกำหนดโดยใช้กรด thiobarbituric ตามวิธีของ Jordan และ Schenkman [24] การดูดซับถูกบันทึกที่ 532 นาโนเมตรโดยใช้สเปกโตรโฟโตมิเตอร์ (Systronics, India)1,1,3,3-Tetramethoxypropane(Sigma) เป็นมาตรฐาน กำหนดโปรตีนตามวิธีการของ Lowry et al. [27] เซรั่มอัลบูมินจากวัว (Sigma) ถูกนำมาใช้เป็นมาตรฐาน

ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ (H202)

ทำให้เป็นเนื้อเดียวกันของไตถูกเตรียมใน 0.25 M ซูโครส H2O2 ถูกวัดโดยใช้วิธีเฟอริกไทโอไซยาเนตตามที่บรรยายโดย Thurman และคณะ [52]. บันทึกค่าการดูดกลืนแสงที่ 480 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ (Systronics, India)

ไนตริกออกไซด์ (NO)

NO ในตัวอย่างไตประเมินได้จากรีเอเจนต์ Griess ตามวิธีการที่ Cortas และ Wakid แนะนำ [6] บันทึกค่าการดูดกลืนแสงที่ 550 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ (Systronics, India)

GSH/Non-protein Sulfhydryls (NPSH)

รีเอเจนต์ของ Ellman ถูกใช้เพื่อกำหนดกลูตาไธโอนที่ลดลงในตัวอย่างไต [10] บันทึกค่าการดูดกลืนแสงที่ 412 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ (Systronics, India)

กลูตาไธโอน เอส-ทรานสเฟอเรส

กลูตาไธโอน เอส-ทรานส์เฟอเรสถูกตรวจวิเคราะห์โดยใช้ 1-คลอโร-2,4-ไดไนโตรเบนซีน(CDNB) ที่ถูกคอนจูเกตด้วยกลูตาไธโอน การดูดซับถูกบันทึกที่ 340 นาโนเมตร [19]

กลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดส

เอนไซม์ได้รับการทดสอบตามวิธี Paglia และ Valentine [37] กลูตาไธโอนไดซัลไฟด์ (GSSG) ที่ผลิตขึ้นจากกลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดสจะลดลงโดยกลูตาไธโอนรีดักเตสส่วนเกิน การแปลง GSSG เป็น GSH ได้รับการตรวจสอบที่ 340 นาโนเมตรโดยใช้สเปกโตรโฟโตมิเตอร์ (Systronics, India)

เมทัลโลไธโอนีน

Metallothionein ในตัวอย่างไตได้รับการวิเคราะห์ตามวิธีการอิ่มตัวของแคดเมียม [36] โดยใช้อะตอมมิกดูดกลืนสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ (EC, ไฮเดอราบัด, อินเดีย)

8-ไฮดรอกซี-2'-ดีออกซีกัวโนซีน (8-OHdG)

ตัวอย่างปัสสาวะของหนูแต่ละตัวถูกเก็บในขวดที่ผ่านการฆ่าเชื้อผ่านกรงเมตาบอลิซึม ตัวอย่างเหล่านี้ถูกเก็บไว้ที่-80 องศาจนกว่าจะมีการวิเคราะห์เพิ่มเติม เทคนิค ELISA ที่แข่งขันได้ถูกนำมาใช้สำหรับการประมาณค่าของ 8-OHdG โดยใช้ชุดเครื่องมือเชิงพาณิชย์ที่จัดหาจากห้องปฏิบัติการเทคโนโลยีชีวภาพ (ประเทศจีน) การดูดซับถูกบันทึกที่ 450 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลท (EC, ไฮเดอราบัด, อินเดีย)

จุลพยาธิวิทยา

ไตชิ้นเล็กๆ ถูกตรึงด้วยฟอร์มาลดีไฮด์ที่เป็นกลาง 10 เปอร์เซ็นต์ ตากแห้ง ล้าง และฝังในขี้ผึ้งพาราฟิน ส่วนที่มีความหนาห้าไมครอนย้อมด้วย hematoxylin และ eosin และตรวจสอบภายใต้กล้องจุลทรรศน์เพื่อการวิจัย (Nikon, Japan)

การวิเคราะห์ทางสถิติ

ใช้การทดสอบ t ของนักเรียนเพื่อทำการเปรียบเทียบระหว่างกลุ่มระหว่างกลุ่มต่างๆ ความแตกต่างระหว่างกลุ่มที่มีค่า ap<0.05 were="" considered="" significant.="" spss="" software="" version="" 2.0="" was="" used="" for="" inter-group="">

ผลลัพธ์

ลักษณะของ ZnONPs

รูปร่าง ขนาด โครงสร้าง และองค์ประกอบทางไฟฟ้าของ ZnONPs ถูกกำหนดโดยใช้วิธีมาตรฐาน ผลลัพธ์แสดงว่าเส้นผ่านศูนย์กลางเฉลี่ยของ ZnONPs เท่ากับ<100 nm="" (fig.1a).="" sem="" observations="" showed="" agglomeration="" of="" nps="" (fig.1b).="" the="" electrical="" components="" of="" the="" znonps="" were="" determined="" through="" edax.="" the="" xrd="" pattern="" of="" znonps="" showed="" a="" hexagonal="" structure="" when="" compared="" with="" the="" standard="" data="" (jspds,="" 00-001-1136)="" published="" elsewhere="" [43].="" the="" zeta="" potential="" of="" the="" nanoparticles="" was="" recorded="" to="" be="" 18.9mv(fig.2).="" the="" intensity-weighed="" particle="" size="" distribution="" of="" znonps="" has="" been="" shown="" in="">

การทำงานของไต

ความเข้มข้นของครีเอตินีนในปัสสาวะที่สูงขึ้นแสดงให้เห็นการด้อยค่าของไตในหนูที่ได้รับการรักษาด้วย DMN การรักษาหนูที่ได้รับ DMN ภายหลังด้วย ZnONPs ทำให้ค่าครีเอตินีนลดลง หนูที่ได้รับ ZnONP เพียงอย่างเดียวยังแสดงค่า creatinine ที่สูงกว่าหนูควบคุม (ตารางที่ 1)

MDA, H2O2 และ NO

Malondialdehyde (MDA) เป็นผลิตภัณฑ์ของ LPO เพิ่มขึ้นในไตของหนูที่ได้รับ DMN การบริหาร ZnONPs กับหนูที่ได้รับ DMN ทำให้ความเข้มข้นในเนื้อเยื่อไตลดลง อย่างไรก็ตาม ความเข้มข้นของ MDA ในไตของหนูที่ได้รับ ZnONP นั้นสูงกว่าหนูที่ควบคุม (ตารางที่ 1)

ค่า NO ที่สูงขึ้นในเนื้อเยื่อไตของหนูที่ได้รับการรักษาด้วย DMN สนับสนุนผลลัพธ์ของ malondialdehyde การบำบัดด้วย ZnONP ให้กับหนูที่ได้รับ DMN ช่วยลดความเข้มข้นของ NO ในไต การเปรียบเทียบค่า NO ที่ได้รับในไตของ ZnONP และหนูควบคุมพบว่าค่า NO ที่สูงกว่าในไตของหนูที่ได้รับ ZnONP นั้นไม่มีนัยสำคัญ (ตารางที่ 1)

ผลลัพธ์ของไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ยังแสดงให้เห็นค่าในไตที่สูงขึ้นของหนูที่ได้รับการรักษาด้วย DMN ค่าเฉลี่ยของ H, O ในไตของหนูที่ได้รับ DMN- บวก ZnONP ต่ำกว่าหนูที่ได้รับ DMN (ตารางที่ 1) เมื่อนำมารวมกัน ผลลัพธ์ทั้งหมดเหล่านี้ชี้ให้เห็นถึงบทบาทของ ZnONPs

GSH

ในไตของหนูที่ได้รับ DMN พบว่าค่า GSH ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ สถานะของมันดีขึ้นหลังจากให้ ZnONPs กับหนูที่ได้รับ DMN การสังเกตเหล่านี้แสดงให้เห็นว่า ZnONPs มีการป้องกันสารต้านอนุมูลอิสระต่อความเป็นพิษของไตที่เกิดจาก DMN การรักษาหนูด้วย ZnONPs ทำให้ไตมีความเข้มข้นของ GSH (ตารางที่ 1)

Glutathione S-transferase และ Glutathione Peroxidase

ผลลัพธ์ของ GSH ได้รับการสนับสนุนโดยการสังเกตจากกลูตาไธโอน เอส-ทรานสเฟอเรส กิจกรรมของเอนไซม์ลดลงในไตของหนูที่ได้รับ DMN การเสริม ZnONPs ให้กับหนูที่ได้รับ DMN ได้ฟื้นฟูกิจกรรมของมันให้ใกล้เคียงกับค่าควบคุม (ตารางที่ 1) กิจกรรมของกลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดสยังลดลงในไตของหนูที่ได้รับการรักษาด้วย DMN อย่างไรก็ตาม มันเพิ่มขึ้นในไตของหนูที่ได้รับการรักษาด้วย DMN- และ ZnONP (ตารางที่ 1)

8-OHdG

ผลลัพธ์ในปัจจุบันของ 8-OHdG แสดงความเสียหายของ DNA ออกซิเดชันที่มากขึ้นในไตของหนูที่ได้รับการบำบัดด้วย DMN การเสริม ZnONP ให้กับหนูที่ได้รับการรักษาด้วย DMN ยับยั้งความเสียหายนี้ได้อย่างมีนัยสำคัญในระดับหนึ่ง อย่างไรก็ตาม การรักษาด้วย ZnONP เพียงอย่างเดียวอาจทำให้ DNA ถูกทำลายในไตของหนู (รูปที่ 4)

เมทัลโลไธโอนีน

ผลการศึกษาความเข้มข้นของเมทัลโลไธโอนในไต (MT) บ่งชี้ว่าการเหนี่ยวนำของ MT ลดลงในไตของหนูที่ได้รับการรักษาด้วย DMN อย่างไรก็ตาม MT เพิ่มขึ้น 16 เปอร์เซ็นต์ในไตของหนูที่ได้รับ DMN- และ ZnONP ZnONPs เพียงอย่างเดียวก็พบว่าเป็นตัวกระตุ้น MT ในไตของหนู (ตารางที่ 1)

จุลพยาธิวิทยา

นอกจาก glomerulonephritis และ proximal tubular necrosis แล้ว adenocarcinoma ใน subcapsular cortex ถูกบันทึกไว้ในไตของหนูที่ได้รับ DMN การเสื่อมสภาพของเยื่อบุผิวมีความชัดเจนในท่อใกล้เคียงและส่วนปลาย นิวเคลียสที่มีรูปร่างและขนาดต่างกันจะสังเกตเห็นได้ทั่วทั้งเยื่อหุ้มสมองและไขกระดูก (รูปที่ 5A, B, C)

การสังเกตทางจุลพยาธิวิทยาในไตของหนูที่ได้รับ DMN- และ ZnONP บ่งชี้ว่า glomerulonephritis รุนแรงน้อยกว่าและเนื้อร้ายของท่อลดลง มะเร็งต่อมน้ำเหลืองก็ต้องการ อย่างไรก็ตาม พบเห็นการก่อตัวของเนื้อเยื่อเนื้องอกในบางตำแหน่งในคอร์เทกซ์ส่วนต้น พบว่าเยื่อบุผิวท่อไม่บุบสลาย การเปลี่ยนแปลงทางนิวเคลียร์ไม่มีนัยสำคัญ(รูปที่ 5D, 6A)

การสังเกตทางจุลพยาธิวิทยาในไตของหนูที่ได้รับ ZnONP พบว่าไม่มีโรคไตอักเสบ หลอดใกล้เคียงและส่วนปลายมีรูปร่างที่ดีซึ่งไม่มีสัญญาณของการเสื่อมสภาพของเยื่อบุผิว พบว่าขอบแปรงไม่บุบสลาย อย่างไรก็ตาม พบกิจกรรมไมโทติคที่เพิ่มขึ้นในคอร์เทกซ์ส่วนปลาย (รูปที่ 6B, C).

การเปลี่ยนแปลงทางพยาธิวิทยาทั้งหมดที่อธิบายไว้ข้างต้นเป็นสิ่งที่ต้องการในไตของหนูควบคุม คอร์เทกซ์ของท่อไตและไขกระดูกไม่มีร่องรอยของการบาดเจ็บ มีการสังเกตนิวเคลียสปกติในเยื่อหุ้มสมองและไขกระดูก (รูปที่ 6D)

การศึกษาในปัจจุบันแสดงให้เห็นว่า DMN เป็นอันตรายต่อไตอย่างที่มันเป็นเพื่อตับและปอด กลไกของความเป็นพิษได้รับการกล่าวถึงโดยคนงานสองสามคนในอดีต ได้ถูกกำหนดไว้แล้วว่าไดเมทิลไนโตรซามีนและสารประกอบไนโตรโซอื่นๆ ถูกเผาผลาญอย่างพิเศษในตับ อย่างไรก็ตาม ไตมีส่วนร่วมในการย่อยสลายทางชีวภาพ DMN ถูกเผาผลาญโดย CYP2E1 ซึ่งไฮดรอกซิเลตหนึ่งกลุ่มเมทิล ผลที่ได้คือไฮดรอกซีเมทิลไนโตรซามีนที่ไม่เสถียรและสลายตัวเป็นฟอร์มัลดีไฮด์ซึ่งเมทิลเลตดีเอ็นเอและโปรตีนหรือทำปฏิกิริยากับน้ำเพื่อสร้างเมทานอล [13] การก่อตัวของออกซิเจนชนิดปฏิกิริยา (ROS) เช่น ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ (H2O2) และไฮดรอกซิล เรดิคัล (OH) มีส่วนทำให้ความเครียดออกซิเดชันซึ่งอาจเป็นหนึ่งในปัจจัยสำคัญในการชักนำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงทางพยาธิวิทยา การก่อมะเร็ง การเปลี่ยนแปลงของเนื้องอก และการก่อตัวของเนื้องอก ไม่เพียงแต่ในตับเท่านั้น แต่ยังรวมถึงไตและปอดด้วย ([57]

การฟื้นฟูการทำงานของไตยังคงเป็นปัญหาที่ท้าทายในการบาดเจ็บของไตที่เป็นพิษ เนื่องจากพบว่า ZnONPs สามารถป้องกันการบาดเจ็บที่ตับที่เกิดจาก DMN ในหนูได้ [43] การศึกษาเกี่ยวกับไตที่คล้ายคลึงกันถือเป็นสิ่งสำคัญในการพิสูจน์ศักยภาพในการรักษาของ ZnONPs การบ่งชี้ครั้งแรกของผลประโยชน์ของ ZnONPs ต่อความเป็นพิษของ DMN ถูกแสดงโดยการสังเกตบนครีเอตินีน มีการเพิ่มขึ้นในตัวอย่างปัสสาวะของหนูที่ได้รับ DMN แต่ลดลงในหนูที่ได้รับ DMN- และ ZnONP การรักษาด้วย ZnONP เพียงอย่างเดียวยังเพิ่มความเข้มข้นของ creatinine ครีเอตินินในปัสสาวะ/ซีรั่มสูงเป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพที่เชื่อถือได้ของการทำงานของไต [4] มีความเกี่ยวข้องกับการทำงานของไตผิดปกติ [5] อาลี นูรี และคณะ [35] ยังรายงานด้วยว่าการรักษาหนู Balb/c ที่มี ZnONPs(50-300 มก./กก.) เพิ่มความเข้มข้นของครีเอตินีนในเลือด มีความสัมพันธ์กับความเสื่อมของไตและท่อ ในระหว่างการศึกษาปัจจุบันอีกด้วย เราพบความสัมพันธ์ระหว่างความเข้มข้นของครีเอตินีนกับการเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาของไต ปรับปรุงรูปร่างของไตและท่อไตในหนูที่ได้รับการรักษาด้วย DMN และ ZnONP สอดคล้องกับการลดลงของความเข้มข้นของครีเอตินินในปัสสาวะ อย่างไรก็ตาม ZnONPs ที่ความเข้มข้นและขนาดยาในปัจจุบันมีระดับปานกลางความเป็นพิษต่อไต.

การศึกษาหลายชิ้นแสดงให้เห็นว่าเมแทบอลิซึมของ DMN ทำให้เกิด ROS ในตับของสัตว์ทดลองที่นำไปสู่ความเครียดออกซิเดชัน[18].) อย่างไรก็ตาม มีคนงานเพียงไม่กี่คนที่แสดงให้เห็นว่า ROS รับผิดชอบต่อความเป็นพิษของไตเช่นกัน [54] ผลลัพธ์ปัจจุบันยืนยันว่า DMN สามารถกระตุ้น LPO ในไตเช่นกัน. การรักษาด้วย ZnONP ที่ตามมาจะยับยั้งการสร้าง ROS ทวายและคณะ [7] ตั้งสมมติฐานว่าอนุภาคนาโนซิงค์ออกไซด์มีความสามารถในการลดมาลอนไดอัลดีไฮด์และเพิ่มการทำงานของเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระ ตรงกันข้าม malondialdehyde เพิ่มขึ้นในไตของหนูที่ได้รับ ZnONP ด้วย การทดลองอื่นๆ เกี่ยวกับความเป็นพิษของ ZnONPs ได้เปิดเผยด้วยว่าความเข้มข้นของ MDA ในปลาม้าลาย [63] และตับของมนุษย์เพิ่มขึ้น [46]

ไนตริกออกไซด์ในไตของหนูที่ได้รับ DMN ก็มีค่าสูงเช่นกัน มันลดลงในไตของหนูที่ได้รับ DMN- และ ZnONP การศึกษาก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่าผู้บริจาคไนตริกออกไซด์เช่น NaNO ป้องกันโรคตับอักเสบเรื้อรังบางส่วนที่เกิดจากไดเมทิลไนโตรซามีน [28] ZnONP อาจส่งผลต่อความเป็นพิษของไตที่เกิดจาก DMN โดยการปรับ NO synthase สารยับยั้งการสังเคราะห์ไนตริกออกไซด์เช่น No-nitro-L-arginine (L-NNA) อาจลดทอนผลการป้องกันต่อความเป็นพิษของ DMN ที่แสดงโดยผู้บริจาคไนตริกออกไซด์ [14] H, O เป็นผลิตภัณฑ์เมตาบอลิซึมที่สำคัญของ DMN [38] ค่าที่สูงขึ้นได้รับการลงทะเบียนสำหรับ H, O ในไตของหนูที่ได้รับ DMN อย่างไรก็ตาม มีการบันทึกการลดลงในหนูที่ได้รับการรักษาด้วย DMN- และ ZnONP การสังเกตนี้ชี้ให้เห็นว่า ZnONPs มีอิทธิพลต่อการเผาผลาญของ DMN อิทธิพลนี้อาจอยู่ที่ระดับ CYP2E1 อย่างไรก็ตาม จำเป็นต้องมีการศึกษาเพิ่มเติมเพื่อยืนยันข้อสันนิษฐานนี้

การเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในความเข้มข้นของไตของ MDA, H, O และ NO ที่ตอบสนองกับภาวะซึมเศร้าอย่างมีนัยสำคัญของ GSH ในไตของหนูที่ได้รับการรักษาด้วย DMN การบริหาร ZnONPs ต่อหนูที่ได้รับ DMN ภายหลังได้คืนสถานะ GSH ในไต การรักษาด้วย ZnONP ในหนูปกติยังทำให้ระดับ GSH สูงขึ้นอีกด้วย เป็นที่ทราบกันดีว่า GSH ซึ่งเป็นสารต้านอนุมูลอิสระที่ไม่มีเอนไซม์สามารถต่อต้านผลกระทบที่สร้างความเสียหายของ ROS [42] ZnONPs แสดงออกถึงผลของสารต้านอนุมูลอิสระซึ่งอาจเกิดจากศักยภาพในการต้านการอักเสบโดยอาศัยการปรับลดของไนตริกออกไซด์ที่เหนี่ยวนำให้เกิดการสังเคราะห์ (iNOS), ไซโคลออกซีเจเนส-2และไซโตไคน์ต่างๆ [34] คนงานคนอื่นให้เหตุผลว่าผลประโยชน์ของ ZnONPs ต่อ metallothionein [23,33] ในการศึกษาก่อนหน้านี้ Rana และ Kumar [40] แสดงให้เห็นว่า metallothionein ป้องกันความเป็นพิษของ DMN จากข้อมูลของ Durham และ Palmiter [9] ดูเหมือนจะมีความเป็นไปได้สูงที่เมื่อถูกปลดปล่อย สังกะสีจะทำหน้าที่เป็นตัวส่งสารชดเชยความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน ซึ่งกระตุ้นปัจจัยในบริเวณเอนแฮนเซอร์ของยีน MT การถอดรหัสยีนเหล่านี้ที่เพิ่มขึ้นสามารถอธิบายระดับที่เพิ่มขึ้นของ Zn-MT ในเซลล์ที่เครียดจากสารออกซิแดนท์ ยีนสำหรับ MT และ GSH กำหนดการป้องกันโดยตัวกระตุ้น MT [16]

ผลลัพธ์ในปัจจุบันแสดงให้เห็นว่า DMN ยับยั้ง MT ในไตเมื่อเทียบกับความเข้มข้นในไตของหนูปกติ ความเข้มข้นของ MT เพิ่มขึ้นในไตของหนูที่ได้รับการรักษาด้วย DMN และ ZnONP การบริหาร ZnONPs เพียงอย่างเดียวเพิ่มความเข้มข้นของ MT ในเนื้อเยื่อไตอย่างมีนัยสำคัญ ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า ZnONPs เป็นตัวกระตุ้นที่รุนแรงของ MT รายงานก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่าสังกะสีเป็นตัวกระตุ้นที่มีศักยภาพของ MT[30] MT แลกเปลี่ยนสังกะสีค่อนข้างเร็วในปฏิกิริยาภายในโมเลกุลและระหว่างโมเลกุลกับกลุ่มสังกะสี/กำมะถันอื่นๆ แม้ว่าจะมีความเสถียรทางอุณหพลศาสตร์ค่อนข้างสูง [31]

เป็นที่ทราบกันดีว่า DMN ส่งผลต่อการทำงานของกลูตาไธโอน S-transferase (GST) ในตับ [1,49] อย่างไรก็ตาม ไม่ทราบถึงผลกระทบของกลูตาไธโอนในไต S-transferases จากการศึกษาในปัจจุบันพบว่า DMN เพิ่มการแสดงออกและกระตุ้นการทำงานของ GST ในไต Aniya และ Anders [1] รายงานว่าการบริหาร DMN ลด GST ของตับ แต่เพิ่มขึ้นในซีรัม การยกระดับนี้มาพร้อมกับการเพิ่มขึ้นของกิจกรรม GPT (SGPT) ในซีรัมและความเข้มข้นของบิลิรูบินในซีรัม การศึกษาก่อนหน้านี้จากห้องปฏิบัติการของเราได้ยืนยันความสูงของซีรัม transaminases ในหนูที่ได้รับ DMN [43] การรักษาหนูที่มี ZnONPs กับหนูปกติเพิ่มกิจกรรม GST ในไต แต่ลดลงในไตของหนูที่ได้รับ DMN และ ZnONP อย่างไรก็ตาม ไม่มีการบันทึกความเข้มข้นของ GSH ในไตเพิ่มขึ้น GST และ GSH มีบทบาทสำคัญในการล้างพิษของสารก่อกลายพันธุ์และสารก่อมะเร็ง [48] นอกจากนี้ GST ยังช่วยลดการจับตัวของอีพอกไซด์ของสารก่อมะเร็ง เช่น DMN[17] ของโควาเลนต์

พนักงานหลายคนเห็นด้วยว่าผลในการป้องกันของ ZnONP ต่อความเสียหายที่เกิดจากสารเคมีในตับ/ไตนั้นแสดงออกผ่านศักยภาพในการต้านอนุมูลอิสระและป้องกันการทำให้เกิดการกลายพันธุ์และสารก่อมะเร็งที่อาศัย ROS [51] การรักษาด้วย DMN กับหนูมีผลต่ออาร์เรย์ของเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระ เช่น ซูเปอร์ออกไซด์ดิสมิวเตส คาตาเลส และกลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดส ภายหลังการบำบัด ZnONPs กับหนูที่ได้รับ DMN เพิ่มกิจกรรมกลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดสเมื่อเทียบกับหนูควบคุม ซึ่งบ่งชี้ว่าความสามารถในการกำจัด H, O เพิ่มขึ้น และลิปิด ไฮโดรเปอร์ออกไซด์ [63] การปรับปรุงทางสัณฐานวิทยาในไตของหนูที่ได้รับการรักษาด้วย DMN ซึ่งแสดงโดย ZnONPs สนับสนุนข้อสังเกตข้างต้น มากีและบาร์นส์ [29] ยืนยันว่า DMN สามารถกระตุ้นเนื้องอกในไตในหนูได้ Hard and Butler [21] ศึกษา morphogenesis ของ epithelial neoplasms ที่เกิดจากไตของหนูโดย DMN Rio-pelle และ Jasmine (1969) จำแนกเนื้องอกในไตเพิ่มเติมที่เกิดจาก DMN พวกเขาตั้งชื่อพวกมันว่าเป็นเกาะเยื่อบุผิว dysplastic อย่างไรก็ตาม การให้ ZnONPs ภายหลังได้ยกเลิกเนื้องอกเหล่านี้และยับยั้งรอยโรคทางสัณฐานวิทยาอื่นๆ การปรับปรุงเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระอาจมีส่วนในการซ่อมแซมทางสัณฐานวิทยาในไต

การสังเกตส่วนใหญ่ที่กล่าวถึงข้างต้นสนับสนุนศักยภาพในการป้องกัน/ต้านอนุมูลอิสระ/ต้านมะเร็งของ ZnONPs รายงานฉบับนี้อธิบายถึงความเป็นพิษของ ZnONPs คุณลักษณะที่สำคัญอย่างหนึ่งของ ZnONPs คือความเป็นพิษที่เลือกได้ต่อเซลล์มะเร็งเมื่อเปรียบเทียบกับเซลล์ปกติ [39] ZnONPs แสดงความเป็นพิษต่อเซลล์เนื่องจากองค์ประกอบเฉพาะและคุณสมบัติพื้นผิว ZnONP มีฤทธิ์ทางเคมีมากกว่า ทำให้เกิด ROS ขึ้นเองที่พื้นผิว และทำให้เกิดความเครียดออกซิเดชัน[60]. การก่อตัวของ ROS ก่อให้เกิดความเป็นพิษต่อเซลล์และการปล่อย Zn plus ion จาก ZnONP เนื่องจากความไม่เสถียรในช่องที่เป็นกรดของไลโซโซม ยู และคณะ [61] และฟุกุอิและคณะ [15]ยังสรุปว่าความเป็นพิษของ ZnONP เกิดจาก Zn² บวกกับไอออนที่ปล่อยออกมาจาก ZnONP ในหลอดทดลอง และในร่างกาย นักปราชญ์และคณะ (2006,2007 เปิดเผยว่า Zn2 plus ที่มากเกินไป (ละลายจาก ZnONPs) มากเกินไปส่งผลให้กลุ่มซัลฟไฮดริลในเมทัลโลไธโอนลดลงและการทำงานของไมโตคอนเดรียลดลงจนทำให้เซลล์ตายหรือตายได้ สรุปได้ว่าความเป็นพิษของ ZnONP อาจแสดงออกผ่านกลไกต่างๆ , ได้แก่ ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน การยับยั้งเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระ ความผิดปกติของไมโตคอนเดรีย และการตายของเซลล์ ที่น่าสนใจคือ ชนิดของระบบเซลล์ที่บำบัดด้วย ZnONP ความแรงของความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน และสภาพแวดล้อมระหว่างเซลล์/ภายในเซลล์ที่มีอยู่เป็นปัจจัยสำคัญที่จะกำหนด ZnONP ความเป็นพิษ

บทสรุป

โดยสรุป การศึกษานี้ชี้ให้เห็นว่า ZnONPs มีประสิทธิภาพในการรักษาเพื่อกำจัด ROS กระตุ้นเอนไซม์ GSH และ GSH กระตุ้นการสังเคราะห์ metallothionein และลดความเสียหายของ DNA ออกซิเดชัน กลไกเหล่านี้ขึ้นอยู่กับระหว่างกันสร้างสภาพแวดล้อมในการป้องกันต่อความเป็นพิษของเซลล์ไตที่เกิดจาก DMN อย่างไรก็ตาม พบว่า ZnONPs เป็นพิษปานกลางถึงไต. สูตรการให้ยาต้องถือเป็นปัจจัยสำคัญในการป้องกันผล

ตัวย่อ

DMN: ไดเมทิลไนโตรซามีน

ZnONPs: อนุภาคนาโนซิงค์ออกไซด์

NEDA: N-(1-แนพทิล)เอทิลีนไดเอมีน ไดไฮโดรคลอไรด์

IP: ในช่องท้อง

Zn-MT: สังกะสีเมทัลโลไธโอนีน

H2O2: ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์

NO: ไนตริกออกไซด์

MDA: มาลอนไดอัลดีไฮด์

GSH: ลดกลูตาไธโอน

ROS: ชนิดของออกซิเจนที่เกิดปฏิกิริยา

CDNB: 1-คลอโร-2,4-ไดไนโตรเบนซีน

8-OHdG: 8-ไฮดรอกซี-2'-deoxyguanosine

AD: มะเร็งต่อมน้ำเหลือง

CO: Cortex

ND: การเสื่อมสภาพของนิวเคลียร์

BR: ขอบแปรง

ED: ความเสียหายต่อเยื่อบุผิว / การเสื่อมสภาพ

GL: โกลเมอรูลัส

แมสซาชูเซตส์: กิจกรรม Mitotic

NPL: เนื้องอก

NPR: การเพิ่มจำนวนนิวเคลียร์

BC: เซลล์สองนิวเคลียส

EP: เยื่อบุผิว

PCT: ท่อที่ซับซ้อนใกล้เคียง

GL: โกลเมอรูลี

TEM: กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด

SEM: การสแกนกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน

XRD: การเลี้ยวเบนของรังสีเอกซ์

JSPDS: คณะกรรมการร่วมเกี่ยวกับมาตรฐานการเลี้ยวเบนของผง

EDAX: เอกซเรย์กระจายพลังงาน

อ้างอิง

1. Aniya, Y. และ Anders, MW (1985) การเปลี่ยนแปลงของตับ glutathione S-transferases และปล่อยเข้าสู่ซีรัมหลังการรักษาด้วย bromobenzene, carbon tetrachloride หรือ N-nitrosodimethylamine เภสัชวิทยาชีวเคมี, 34, 4239–4244.2. ATSDR, (1989). ข้อมูลทางพิษวิทยาสำหรับ N-nitrosomethylamine หน่วยงานสำหรับสารพิษและทะเบียนโรค Atlanta, GA: กระทรวงสาธารณสุขและบริการมนุษย์ของสหรัฐอเมริกา, บริการสาธารณสุข CAS: 62–75 (9)
3. Bansal, AK, Bansal, M. , Soni, G. , & Bhatnagar, D. (2005) การปรับ N-nitrosodiethylamine (NDEA) ที่กระตุ้นความเครียดออกซิเดชันโดยวิตามินอีในเม็ดเลือดแดงของหนู พิษวิทยาของมนุษย์และการทดลอง, 24, 297–302.
4. เบนเน็ตต์, WM (1996). กลไกการเกิดพิษต่อไตเฉียบพลันและเรื้อรังจากยากดภูมิคุ้มกัน ภาวะไตวาย, 18, 453–460.
5. Bishop, LM, Fody, PE & Schoe, HL (2005) เคมีคลินิก หลักการ ขั้นตอน ความสัมพันธ์ 5th เอ็ด Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, pp 730. ISBN 0781746116.
6. Cortas, NK และ Wakid, NW (1990). การหาปริมาณไนเตรตอนินทรีย์ในตัวอย่างซีรัมและปัสสาวะโดยวิธีรีดิวซ์แคดเมียมจลนศาสตร์ เคมีคลินิก, 36, 1440–1443.
7. Dawei, AI, Zhisheng, W. , & Angu, Z. (2009). ผลการป้องกันของ nano-ZnO ต่อเซลล์เยื่อบุผิวในลำไส้ของหนูที่เพาะเลี้ยงในหลอดทดลองในหลอดทดลองต่อการบาดเจ็บจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน วารสารนาโนเทคโนโลยีนานาชาติ, 3, 1–6.
8. Dhawan, DK และ Chadha, VD (2010) สังกะสี: สารที่มีแนวโน้มในการป้องกันมะเร็งในอาหาร วารสารการวิจัยทางการแพทย์ของอินเดีย, 132, 676–682
9. Durnam, DM และ Palmiter, RD (1981) การควบคุมการถอดเสียงของยีน metallothionein-I โดยโลหะหนัก วารสารเคมีชีวภาพ, 256, 5712–5716.
10. เอลล์แมน GL (1959) กลุ่มเนื้อเยื่อซัลไฟดริล จดหมายเหตุของชีวเคมีและชีวฟิสิกส์ 82, 70–77
11. Fazilati, M. (2013). การตรวจสอบคุณสมบัติความเป็นพิษของอนุภาคนาโนซิงค์ออกไซด์ต่อเอนไซม์ตับในหนูเพศผู้ European Journal of Experimental Biology, 3, 97–103.
12. Feaster, JP, Van Middelem, CH, & Davis, GK (1972) ความสัมพันธ์ของ Zinc DDT ในการเจริญเติบโตและการสืบพันธุ์ในหนู วารสารโภชนาการ, 102, 523–528.
13. Frei, E. , Kuchenmeister, F. , Gliniorz, R. , Breuer, A. , & Schmezer, P. (2001) N-nitrosodimethylamine ถูกกระตุ้นในไมโครโซมตั้งแต่เซลล์ตับไปจนถึงเมแทบอไลต์ที่ทำปฏิกิริยาซึ่งทำลาย DNA ของเซลล์ที่ไม่ใช่เนื้อเยื่อในตับของหนู จดหมายพิษวิทยา, 123, 227–234.
14. Fukawa, A., Kabayashi, O., Yamaguchi, M., Uchida, M., & Hosono, A. (2017). -lactalbumin ที่ได้จากนมจากวัวช่วยป้องกันการเกิดพังผืดในตับที่เกิดจากไดเมทิลไนโตรซามีนผ่านทางเดินไนตริกออกไซด์ในหนูแรท ชีววิทยาศาสตร์ เทคโนโลยีชีวภาพ และชีวเคมี ค.ศ. 81, 1941–1947
15. Fukui, H. , Horie, M. , Endoh, S. , Kato, H. , Fujita, K. , Nishio, K. , Komaba, LK, Maru, J. , Miyauhi, A., Nakamura, A. , Kinugasa, S. , Yoshida, Y. , Hagihara, Y. , & Iwahashi, H. (2012) ความสัมพันธ์ของการปล่อยสังกะสีไอออนและความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันที่เกิดจากการหยอดอนุภาคนาโน ZnO เข้าไปในปอดของหนูในหลอดลม Chemico ปฏิสัมพันธ์ทางชีวภาพ, 198, 29–37.

16. Garg, Q. และ Hart, BA (1997). ผลของไธออลต่อการแสดงออกของแคดเมียมที่เกิดจากเมทัลโลไธโอนีนและยีนความเครียดของสารออกซิแดนท์อื่นๆ ในเซลล์เยื่อบุผิวปอดของหนูแรท พิษวิทยา, 119, 179–191.
17. Gopalan, P., Jensen, DE, & Lotlikar, PD (1992). การรวมกลูตาไธโอนของอะฟลาทอกซิน B1–8 ที่มีไมโครสื่อกลางและสังเคราะห์, 9-ออกไซด์โดยกลูตาไธโอนบริสุทธิ์ S-transferases จากหนูแรท จดหมายมะเร็ง, 64, 225–233.
18. Guengerich, FP, Johnson, WW, Ueng, YF, Yamazaki, H. , & Shimada, T. (1996). การมีส่วนร่วมของ cytochrome P450, glutathione S-transferase และ epoxide hydrolase ในการเผาผลาญอะฟลาทอกซิน บี 1 และความเกี่ยวข้องกับความเสี่ยงของมะเร็งตับในมนุษย์ มุมมองด้านสุขภาพสิ่งแวดล้อม, 104, 557–562.
19. Habig, WH, Pabst, MJ, & Jakoby, WB (1974) กลูตาไธโอน เอส-ทรานสเฟอเรส ขั้นตอนของเอนไซม์แรกในการสร้างกรดเมอร์แคปทูริก วารสารเคมีชีวภาพ, 249, 7130–7139.
20. Hamza, RZ, Ismail, HA, & El-Shenawy, NS (2017). ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน การเปลี่ยนแปลงทางจุลพยาธิวิทยาและกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนที่เกิดจากไดเมทิลไนโตรซามีนในหนูทดลองของไต และผลในการป้องกันของกรดไลโปอิก วารสารสรีรวิทยาพื้นฐานและคลินิก & เภสัชวิทยา, 28, 149–158.
21. ฮาร์ด GC และบัตเลอร์ WH (1971) สัณฐานวิทยาของเนื้องอกเยื่อบุผิวที่เกิดจากไตของหนูโดยไดเมทิลไนโตรซามีน การวิจัยโรคมะเร็ง, 31, 1496–1505.
22. Hulla, JE, Sahu, SC, & Hayes, AW (2015) นาโนเทคโนโลยี: ประวัติศาสตร์และอนาคต. พิษวิทยาของมนุษย์และการทดลอง, 24, 1318–1321.
23. Jing, L., Li, L., Zhao, J., Zhao, J., Sun, Z., & Perg, S. (2015). การแสดงออกของโลหะโลไธโอนีนที่เหนี่ยวนำมากเกินไปช่วยป้องกันความเป็นพิษของโดโซรูบิซินในคาร์ดิโอไมโอไซต์โดยควบคุมเพอร์ออกซิเรดอกซิน ซีโนไบโอติกา, 1, 1–11.
24. จอร์แดน, RA, & Schenkman, JB (1982) ความสัมพันธ์ระหว่างการผลิตมาลอนไดอัลดีไฮด์และการบริโภคอาราชิโดเนตระหว่างเปอร์ออกซิเดชันของไขมันไมโครโซมอลที่สนับสนุน NADPH เภสัชวิทยาชีวเคมี, 31, 1393–1400.
25. เนคท์, เอ็ม. (1966). เกี่ยวกับการแปลของ microsomal N-demethylase ในอวัยวะของหนู เนเจอร์สเซนชาฟเทน, 53, 85.
26. Li, CH, Shen, CC, Cheng, YW และอื่น ๆ (2012). การกระจายตัวทางชีวภาพ การล้าง และความเป็นพิษต่อพันธุกรรมของอนุภาคนาโนซิงค์ออกไซด์ที่รับประทานทางปากในหนูทดลอง พิษวิทยานาโน, 6, 746–756.
27. Lowry, OH, Rosenbrough, NJ, Forr, AL, & Randall, RJ (1951) การวัดโปรตีนด้วยรีเอเจนต์ Follin phenol วารสารเคมีชีวภาพ, 193, 265–275.
28. Lukivskaya, O. , Lis, R. , Zwierz, K. , & Buko, V. (2004) ผลของการให้ไนตริกออกไซด์และสารยับยั้งการสังเคราะห์ไนตริกออกไซด์ต่อตับของหนูที่เป็นโรคตับอักเสบเรื้อรังที่เกิดจากไดเมทิลไนโตรซามีน วารสารเภสัชวิทยาโปแลนด์ 56, 599–604
29. มากี PN & Barnes, JM (1962) การชักนำให้เกิดเนื้องอกในไตในหนูแรทด้วยไดเมทิลไนโตรซามีน (n-nitrosodimethylamine) วารสารพยาธิวิทยาและแบคทีเรีย, 84, 19–31.
30. มะเร็ต, ว. (2000). หน้าที่ของสังกะสีเมทัลโลไธโอนีน: การเชื่อมโยงระหว่างเซลล์สังกะสีและสถานะรีดอกซ์ วารสารโภชนาการ 130, 1455–1458
31. Maret, W. , Larsen, KS, & Vallee, BL (1997). พลวัตของการประสานงานของ "คลัสเตอร์" ของสังกะสีทางชีวภาพในเมทัลโลไธโอนน์และในโดเมนที่จับกับดีเอ็นเอของปัจจัยการถอดรหัส Gal4 การดำเนินการของ National Academy of Sciences USA, 94, 2233–2237
32. Mittal, G., Brar, AP, & Soni, G. (2006). ผลกระทบของไขมันในเลือดสูงต่อความเป็นพิษของ N-nitrosodiethylamine: ผลกระทบทางชีวเคมีและทางจุลพยาธิวิทยา รายงานทางเภสัชวิทยา 58, 413–419
33. Mo, R. , Jiang, T. , & Gu, Z. (2014). ความคืบหน้าล่าสุดในการจัดส่งยาหลายชนิดไปยังเซลล์มะเร็งด้วยไลโปโซม นาโนเมดิซีน, 9, 1117–1120.
34. Nagajyothi, PC, Chan, SJ, Yang, IJ, Sreekanth, TV, Kim, KJ, & Shin, HM (2015). ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระและต้านการอักเสบของอนุภาคนาโนซิงค์ออกไซด์ที่สังเคราะห์โดยใช้สารสกัดจากราก Polygala tenuifolia วารสารเคมีแสงและชีววิทยาแสง B: ชีววิทยา 146, 10–17
35. Noori, A., Karimi, F., Fatahian, S., & Yazdani, F. (2014) ผลของอนุภาคนาโนซิงค์ออกไซด์ต่อการทำงานของไตในหนูทดลอง วารสารชีววิทยาศาสตร์นานาชาติ, 5, 140–146.
36. Onosaka, S., Tanaka, K., Doi, M., & Okahara, KA (1978) ขั้นตอนที่ง่ายขึ้นสำหรับการกำหนดโลหะโลไธโอนีนในเนื้อเยื่อสัตว์ Eisei Kagaku, 24, 128–133.
37. Paglia, DP และ Valentine, VM (1967) การศึกษาคุณลักษณะเชิงปริมาณและคุณภาพของเม็ดเลือดแดงกลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดส วารสารห้องปฏิบัติการและเวชศาสตร์คลินิก, 70, 158–169.
38. Pradeep, K., Mohan, CV, Gopichand, K., & Karthikeyan, S. (2007). ผลของ Cassia fistula Linn. สารสกัดจากใบบนไดเอทิลไนโตรซามีนทำให้เกิดการบาดเจ็บที่ตับในหนูแรท เคมีและชีววิทยา, 167, 12–13.
39. Premanathan, M., Karthikeyan, K., Jeyasubramanian, K., & Manivannan, G. (2011). ความเป็นพิษเฉพาะเจาะจงของอนุภาคนาโน ZnO ต่อแบคทีเรียแกรมบวกและเซลล์มะเร็งโดยกระบวนการอะพอพโทซิสผ่านลิพิดเปอร์ออกซิเดชัน นาโนเมดิซีน, 7, 184–192.
40. Rana, SVS และ Kumar, A. (2000) Metallothionein ที่เกิดจากแคดเมียมหรือสังกะสียับยั้งการเกิด lipid peroxidation ในหนูที่ได้รับสารไดเมทิลไนโตรซามีน จดหมายเหตุของสุขอนามัยอุตสาหกรรมและพิษวิทยา, 51, 279–286.
41. Rana, SVS และ Tayal, MK (1981) อิทธิพลของสังกะสี วิตามินบี 12 และกลูตาไธโอนต่อตับของหนูที่ได้รับคาร์บอนเตตระคลอไรด์ สุขภาพอุตสาหกรรม, 19, 65–69.
42. Rana, SVS, & Kumar, A. (2001). ผลของแคดเมียมและซิงค์เมทัลโลไทโอนีนต่อเมทาโมโกลบินและไนตริกออกไซด์ในหนูที่ได้รับการบำบัดด้วยไดเมทิลไนโตรซามีน วารสารชีววิทยาทดลองของอินเดีย, 39, 487–489.
43. Rani, V. , Verma, Y. , Rana, K. , & Rana, SVS (2018) อนุภาคนาโนซิงค์ออกไซด์ยับยั้งการบาดเจ็บของตับที่เกิดจากไดเมทิลไนโตรซามีนในหนู ปฏิสัมพันธ์ทางชีวภาพของ Chemico, 295, 84–92.
44. Rasmussen, JW, Martinez, E., Louka, P., & Wingett, DG (2010) อนุภาคนาโนซิงค์ออกไซด์สำหรับการทำลายเซลล์เนื้องอกแบบเลือกสรรและศักยภาพในการประยุกต์ใช้การนำส่งยา ความคิดเห็นของผู้เชี่ยวชาญเกี่ยวกับการนำส่งยา,7, 1063–1077.
45. Riopelle, JL, & Jasmin, G. (1969). ลักษณะ การจำแนก และการเรียกชื่อเนื้องอกในไตที่เกิดจากไดเมทิลไนโตรซามีนในหนู วารสารสถาบันมะเร็งแห่งชาติ, 42, 643–662.
46. ​​Sharma, V., Anderson, D., & Dhawan, A. (2012). อนุภาคนาโนของซิงค์ออกไซด์ทำให้เกิดความเสียหายของดีเอ็นเอที่เกิดจากออกซิเดชันและการตายของเซลล์ที่กระตุ้นด้วยไมโตคอนเดรียที่กระตุ้นโดย ROS ในเซลล์ตับของมนุษย์ (HepG2) อะพอพโทซิส, 17, 852–870.
47. Shen, C. , James, SA, de Jonge, MD, Turney, TW, Wright, PF, & Feltis, BN (2013) เกี่ยวกับความเป็นพิษต่อเซลล์ สังกะสีไอออน และออกซิเจนปฏิกิริยาในเซลล์ภูมิคุ้มกันของมนุษย์ที่สัมผัสกับอนุภาคนาโน ZnO วิทยาศาสตร์พิษวิทยา, 136, 120–130.
48. Sheweita, SA, & Tilmisany, อลาสก้า (2003) มะเร็งและเอนไซม์เผาผลาญยาระยะที่ 2 การเผาผลาญยาในปัจจุบัน, 4, 45–58.
49. Sheweita, SA, Mousa, N. และ Al-Masry, HM (2008) N-Nitrosodimethylamine เปลี่ยนการแสดงออกของกลูตาไธโอน S-transferase ในตับของหนูตัวผู้: บทบาทของสารต้านอนุมูลอิสระ วารสารชีวเคมีและอณูพิษวิทยา, 22, 389–395.
50. Soheili, S. , Moradhaseli, S. , Shokouhian, A. , & Ghorbani, M. (2013) ผลกระทบทางจุลพยาธิวิทยาของอนุภาคนาโน ZnO ต่อเนื้อเยื่อตับและหัวใจในหนู Wistar ความก้าวหน้าในการวิจัยทางชีวภาพ, 4, 83–88.
51. Taccola, L., Rafa, V., Riggio, C., Vittorio, O., Iorio, MC, Vanacore, R., Pietrabissa, A., & Cuschieri, A. (2011) อนุภาคนาโนซิงค์ออกไซด์เป็นตัวฆ่าเฉพาะของเซลล์ที่เพิ่มจำนวน วารสารการแพทย์นาโนนานาชาติ, 6, 1129–1140.
52. Thurman, RG, Ley, HG, & Scholz, R. (1972) การเกิดออกซิเดชันของเอทานอลไมโครโซมอลตับ การก่อตัวของไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์และบทบาทของคาตาเลส วารสารชีวเคมีแห่งยุโรป, 25, 420–430.
53. Toro, G. และ Ackermann, P. (1975) เคมีคลินิกเชิงปฏิบัติ ฉบับแรก Little, Brown and Company, บอส ตัน, หน้า 154.