ความสัมพันธ์ระหว่างสารสกัด Cistanche Tubulosa และระดับฮอร์โมนเพศคืออะไร?
Feb 27, 2022
Tian Wang1, Chen Chen2, Man Yang1,2, Taiwan Deng2, Gordon Michael Kirby3 และ Xiaoying Zhang1
เชิงนามธรรม
บริบท: พืชสกุลCistancheฮอฟแมน. et Link (Orobanchaceae) มักใช้เป็นยาชาติพันธุ์ในเอเชียตะวันออก จากการศึกษาเภสัชวิทยาพบว่าCistancheมีผลคล้ายแอนโดรเจน อย่างไรก็ตาม กลไกที่แน่นอนไม่ชัดเจน
วัตถุประสงค์: การศึกษานี้กำหนดผลของสารสกัดเอทานอลของCistanchetubulosa(Schenk) R. ก้านขาว (CTE) บนฮอร์โมนระดับและเอ็นไซม์สเตียรอยด์ในหนู วัสดุและวิธีการ: ตรวจพบปริมาณ Phenylethanoid glycoside ของ CTE โดย UV spectrophotometry หนูถูกเลี้ยงด้วยขนาดยาที่แตกต่างกันของ CTE ({{0}}.2, 0.4 และ 0.8 กรัม/กก.) โดยการบริหารให้ในกระเพาะอาหารเป็นเวลา 20 วัน พารามิเตอร์ของอสุจิถูกวัดโดยวิธีการย้อมสีและการนับ ระดับของฮอร์โมนโปรเจสเตอโรนและเทสโทสเตอโรนในซีรั่มถูกหาปริมาณโดยการตรวจทางภูมิคุ้มกันด้วยรังสี ระดับการแสดงออกของเอ็นไซม์ความแตกแยกของโคเลสเตอรอลด้านข้าง (CYP11A1), 17a-hydroxylase/17, 20-lyase (CYP17A1) และเอนไซม์เผาผลาญตับ (CYP3A4) ในไมโครโซมได้รับการประเมินโดยการย้อมสีอิมมูโนฮิสโตเคมีหรือ/และแบบตะวันตก การวิเคราะห์รอยเปื้อน
ผลลัพธ์: การศึกษาแสดงให้เห็นว่าการให้ CTE ({{0}}.4 และ 0.8 g/kg) เพิ่มจำนวนอสุจิ (2.3- และ 2.{{ 7}}เท่า) และการเคลื่อนไหวของอสุจิ (1.3- และ 1.4-เท่า) และลดจำนวนอสุจิที่ผิดปกติ (0.76- และ 0{{15} }พับ) ระดับซีรัมของโปรเจสเตอโรนและเทสโทสเตอโรนในหนูยังเพิ่มขึ้นด้วยการบริหาร CTE (p50.05) ผลลัพธ์ของอิมมูโนฮิสโตเคมีและการวิเคราะห์ Western blot ยืนยันว่าการแสดงออกของ CYP11A1, CYP17A1 และ CYP3A4 นั้นได้รับการปรับปรุงโดย CTE (p50.05) นอกจากนี้ยังพบว่า CTE ปริมาณสูงอาจทำให้เกิดอาการบวมน้ำที่ตับเล็กน้อย
สรุป: ผลลัพธ์ของเราชี้ให้เห็นว่าเพศที่เพิ่มขึ้นฮอร์โมน ระดับสามารถไกล่เกลี่ยโดยการเหนี่ยวนำของเอ็นไซม์สเตียรอยด์อัณฑะ
ติดต่อ:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
cistanche ดีต่อสมรรถภาพทางเพศ คลิกที่นี่เพื่อรับตัวอย่าง
บทนำ
Cistancheฮอฟแมน. et Link (Orobanchaceae) เป็นพืชสมุนไพรชนิดหนึ่งที่มีใช้กันในจีนและประเทศอื่นๆ ในเอเชียตะวันออกตั้งแต่ศตวรรษที่ 15 สำหรับการรักษาโรค (ในทฤษฎีการแพทย์แผนจีน) เช่น ความอ่อนแอ การปล่อยน้ำเชื้อ ภาวะมีบุตรยาก ความอ่อนแอทั่วไป ด้วยความอ่อนล้าของเอวและหัวเข่า และท้องผูกเรื้อรัง (Wang et al., 2012). ค.ทะเลทรายYC Ma และCistanchetubulosa(Schenk) R. Wight มีองค์ประกอบทางเคมีและกิจกรรมทางเภสัชวิทยาที่คล้ายคลึงกัน และได้รับการบันทึกไว้ใน Chinese Pharmacopoeia (Editorial Committee of Chinese Pharmacopoeia, 2010) ผลของซีทะเลทรายในแง่ของการเพิ่มดัชนีอวัยวะของระบบสืบพันธุ์เพศชายได้รับการประเมินในหนูที่มีสุขภาพดี (He et al., 1996a,b) ลูกอัณฑะเป็นเนื้อเยื่อหลักที่มีหน้าที่ในการหลั่งแอนโดรเจน ระบบสืบพันธุ์ของหนูตอนตอนได้รับการปรับปรุงให้ดีขึ้นโดย C.ทะเลทรายการบริหาร (He et al., 1996a,b). เอนไซม์ (CYP11A1 และ CYP17A1) และเอนไซม์เมตาบอลิซึม (CYP3A4) ในหนูเพศผู้
ผลการวิจัยข้างต้นระบุว่า C.ทะเลทรายอาจมีส่วนช่วยในการพัฒนาระบบสืบพันธุ์เพศชายผ่านผลการควบคุมฮอร์โมนเพศชายหรือแอนโดรเจน (He et al., 1996a,b) การศึกษาก่อนหน้านี้ยังระบุด้วยว่า C.ทะเลทรายสามารถส่งผลต่อการสร้างกระดูกในเซลล์สร้างกระดูก (Li et al., 2012) แอนโดรเจนเป็นที่รู้จักกันดีในเรื่องอิทธิพลที่เป็นประโยชน์ต่อการพัฒนาและบำรุงรักษาโครงกระดูกในทั้งผู้หญิงและผู้ชาย (Hofbauer & Khosla, 1999)Cistanchetubulosaถือเป็นทางเลือกแทนซีทะเลทรายเนื่องจากมันใกล้จะสูญพันธุ์เนื่องจากการเอารัดเอาเปรียบมานานหลายทศวรรษ ดังนั้น ผลของ C.tubulosaเกี่ยวกับระดับฮอร์โมนเพศและการประเมินความปลอดภัยเป็นสิ่งที่ขาดไม่ได้ เกี่ยวกับเอนไซม์สเตียรอยด์ที่สำคัญสองตัว (CYP11A1 และ CYP17A1) และเอนไซม์เมตาบอลิซึม (CYP3A4) ได้รับการประเมิน (Hanukoglu, 1992)
การศึกษานี้ศึกษาผลกระทบโดยตรงของ C.tubulosaสารสกัด (CTE) ในระดับฮอร์โมนโปรเจสเตอโรนและเทสโทสเตอโรน เช่นเดียวกับการแสดงออกของเอนไซม์สเตียรอยด์ (CYP11A1 และ CYP17A1) และเอนไซม์เมตาบอลิซึม (CYP3A4) ในหนูเพศผู้
วัสดุและวิธีการ
สัตว์
การศึกษาครั้งนี้ใช้หนู Sprague–Dawley เพศผู้ 60 ตัวที่มีน้ำหนัก 100–120 กรัม สัตว์ถูกเลี้ยงไว้ที่อุณหภูมิคงที่ (23 ± 1 ○C) โดยมีการปั่นจักรยานในที่มืดเป็นเวลา 12 ชั่วโมงในกรงโพลีโพรพิลีน และอนุญาตให้เข้าถึงน้ำและอาหารได้ฟรี ขั้นตอนของสัตว์ทั้งหมดได้ดำเนินการตามแนวทางของมหาวิทยาลัยในการดูแลและการใช้สัตว์ทดลอง
การเตรียมสารสกัด C. tubulosa
ลำต้นของค. ทูบูโลซาได้รับความกรุณาและยืนยันจาก Associate Prof. Jian-Jun Hu (มหาวิทยาลัยทาริม, ซินเจียง, จีน) ดิค. ทูบูโลซาถูกเก็บรวบรวมในช่วงเรืองแสง (ในเดือนพฤษภาคม) จากพื้นที่ทะเลทรายทางตอนใต้ของเขตปกครองตนเองซินเจียง ก้านที่แห้งถูกบดให้เป็นผงและร่อนผ่านตะแกรงตาข่าย 200- ผงซิสทานช์ ทูบูโลซา (50 กรัม) ถูกสกัดสองครั้งโดยเอทานอล 70 เปอร์เซ็นต์ 250 มล. และทำให้เข้มข้น จากนั้นแช่แข็งที่ 80 ○ซ และถูกแช่เยือกแข็งจนแห้ง ผงถูกเก็บไว้ที่ 4 ○C จนกว่าจะใช้ต่อไป
ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ (PhGs) เป็นสารประกอบออกฤทธิ์ที่สำคัญของค. ทูบูโลซาและเนื้อหาถูกตรวจพบโดย ultraviolet spectrophotometry (Wang et al., 20{{20}}8) Echinacoside (111670-200503, National Institutes for Food and Drug Control, China) ถูกใช้เป็นสารประกอบมาตรฐานของ PhGs ในการตรวจหา (Editorial Committee of Chinese Pharmacopoeia, 2010) สารสกัดจาก C. tubulosa (2 ก.) ถูกละลายในน้ำกลั่น 100 มล. และนำเรซินที่มีรูพรุน D101 มาผสมกับน้ำกลั่น (200 มล.) เอทานอล 20 เปอร์เซ็นต์ (200 มล.) และเอทานอล 70 เปอร์เซ็นต์ (200 มล.) จากนั้นส่วนเอทานอล 70 เปอร์เซ็นต์ถูกทำให้เข้มข้นถึง 50 มล. และถูกแช่แข็งที่ 80 ○ซ และถูกทำให้แห้งเป็นผงที่ 60 ○ซ ผงถูกละลายในเมทานอล 50 มล. จนกว่าจะใช้ต่อไป (สารละลายแม่) สารละลายในการเจือจาง 40- เท่าถูกวัดที่ 330 นาโนเมตรด้วยสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ สารละลายมาตรฐานถูกเตรียมโดยการเติมปริมาตรที่ทราบของอิชินาโคไซด์ (0.04, 0.08, 0.16,0.32 และ 0.64 มก.) ลงในเมทานอล 5 มล.
การรักษาสัตว์
หนูถูกสุ่มแบ่งออกเป็นสี่กลุ่ม: (1) กลุ่มควบคุม (บำบัดด้วยน้ำเกลือปกติ), (2) CTE ต่ำ-, (3) กลุ่มกลาง- และ (4) กลุ่มขนาดสูง (บำบัดด้วย 0 .2, 0.4 และ 0.8 ก./กก. ของ CTE ตามลำดับ) วัสดุถูกป้อนให้กับหนูโดยการบริหารกระเพาะอาหารเป็นเวลา 20 วัน ในวันรุ่งขึ้นหลังการให้ยาครั้งสุดท้าย หนูถูกวางยาสลบด้วยยาเพนโทบาร์บิทัล และเจาะเลือดด้วยหัวใจ อวัยวะ เนื้อเยื่อ และต่อมต่างๆ รวมถึงตับ อัณฑะ ท่อน้ำอสุจิ ถุงน้ำเชื้อ ต่อมลูกหมาก และต่อมพรีพิเชียล ถูกนำออกและชั่งน้ำหนัก ดัชนีอวัยวะคำนวณโดยใช้สมการต่อไปนี้:
ดัชนีอวัยวะ ( เปอร์เซ็นต์ ) ¼ 100 × (น้ำหนักอวัยวะ/น้ำหนักตัว)
ลูกอัณฑะข้างเดียวได้รับการแก้ไขในตรึงของ Bouin ที่อุณหภูมิห้องสำหรับ H&E และการย้อมสีอิมมูโนฮิสโตเคมี และอัณฑะอื่นๆ ถูกเก็บไว้ที่ 80 ○C สำหรับการเตรียมไมโครโซม ตับได้รับการแก้ไขในฟอร์มาลินสำหรับการย้อมสี H&E
ตัวอย่างเลือดถูกรวบรวมและบ่มในตำแหน่งตั้งตรงที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาทีเพื่อให้เกิดการแข็งตัวและจากนั้นหมุนเหวี่ยงเป็นเวลา 15 นาทีที่ 2000 รอบต่อนาที ซีรั่มถูกเก็บไว้ที่ —20 ○C จนกว่าจะใช้ต่อไป
การตรวจจับพารามิเตอร์น้ำอสุจิ
เพื่อให้ได้สเปิร์มแขวนลอย เก็บหลอดน้ำอสุจิของหนูแรทแล้วบดให้ละเอียดในน้ำเกลือปกติ จากนั้นเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 15 นาทีที่อุณหภูมิ 37 ○C เก็บสารแขวนลอยตัวอสุจิเพื่อตรวจหาค่าพารามิเตอร์ของน้ำอสุจิ
สำหรับการทดสอบจำนวนอสุจิ ได้เติมฟอร์มาลินตรึง 10 เปอร์เซ็นต์ 10 เปอร์เซ็นต์ลงในสารแขวนลอยตัวอสุจิ 50 มล. รวม 450 มล. จากนั้นเติมสารละลาย 10 มล. ลงในห้องตรวจนับเม็ดเลือด นับหัวอสุจิและแสดงเป็นล้าน/มล. ของสารแขวนลอย
ตรวจพบความมีชีวิตของอสุจิโดยวิธีการย้อมสี โดยเติมสารแขวนลอยตัวอสุจิ 10 มล. ลงบนสไลด์แก้ว จากนั้น เติมสารละลายย้อมสี 10 มล. (อีโอซิน Y และไนโกรซิน) และบ่มเป็นเวลา 2 นาที ภาพนิ่งถูกสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบออปติคัล (กำลังขยาย 400) สำหรับแต่ละตัวอย่าง มีการประเมินสเปิร์มทั้งหมด 200 ตัวและคำนวณเปอร์เซ็นต์การมีชีวิต
เพิ่มสารแขวนลอยตัวอสุจิทั้งหมด 10 มล. ลงบนสไลด์แก้ว การเคลื่อนที่ของตัวอสุจิถูกสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง (กำลังขยาย 400) เลือกช่องการมองเห็น 10 ช่องจากแต่ละตัวอย่าง และประเมินสเปิร์ม 200 ตัวสำหรับการเคลื่อนไหว มาตรฐานการจำแนกประเภทมีดังนี้ (1) การเคลื่อนไหวแบบก้าวหน้า (PR) ความสามารถด้านกีฬาที่ดี การเคลื่อนไหวเส้นตรงหรือเส้นโค้ง สามารถละเว้นความเร็ว; (2) การเคลื่อนที่แบบไม่ก้าวหน้า (NP), ความสามารถในการเล่นกีฬาที่ไม่ดี, การหมุนรอบหรือแกว่ง; (3) ความไม่สามารถเคลื่อนที่ได้ (IM) ไม่มีการเคลื่อนไหว
แขวนสเปิร์มทั้งหมด 50 มล. บนสไลด์แก้วและย้อมด้วยสารละลายอีโอซิน 1 เปอร์เซ็นต์เป็นเวลา 10 นาที สังเกตสัณฐานวิทยาของอสุจิด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบออปติคัล (กำลังขยาย 400) มีการประเมินสเปิร์มทั้งหมด 200 ตัวและคำนวณอัตราการเสียรูปของตัวอสุจิ
การตรวจภูมิคุ้มกันด้วยรังสี
ระดับฮอร์โมนโปรเจสเตอโรนและเทสโทสเตอโรนถูกหาปริมาณโดยตรงจากซีรั่มที่เตรียมไว้โดยใช้ชุดตรวจทางภูมิคุ้มกัน (RIA) (สถาบันเทคโนโลยีชีวภาพปักกิ่ง ชิโน-สหราชอาณาจักร ปักกิ่ง ประเทศจีน) ตามโปรโตคอลของผู้ผลิต
การย้อมสีอิมมูโนฮิสโทเคมี
เนื้อเยื่อตายตัวถูกตัดเป็นส่วนของพาราฟิน (5 มม.) และทำอิมมูโนฮิสโตเคมีเพื่อประเมินการแสดงออกของ CYP11A1 และ CYP17A1 โดยใช้ชุดอุปกรณ์เชิงพาณิชย์ (Fuzhou Maixin Biotechnology Co., Ltd., Fuzhou, China) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต แอนติบอดีต้าน CYP11A1 และ CYP17A1 ถูกเจือจางใน PBS (1:200) และแอนติบอดีที่สองมีอยู่ในชุดอุปกรณ์ เลือกสี่ส่วนจากแต่ละกลุ่ม 10 ช่องภาพถูกเลือกจากแต่ละส่วนและเซลล์บวกถูกนับในเชิงคุณภาพโดยนักพยาธิวิทยา
การเตรียมโปรตีนไมโครโซมอลอัณฑะและตับ
การเตรียม Microsomal ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้โดย Jiang et al (2012). ตัวอย่างอัณฑะหรือตับถูกบดและทำให้เป็นเนื้อเดียวกันในสี่ปริมาตรของบัฟเฟอร์ TMS ที่เย็นด้วยน้ำแข็ง (20 มิลลิโมลาร์ Tris–HCl, 5 มิลลิโมลาร์ MgCl2 และซูโครส 0.25 โมลาร์, pH 7.5) โฮโมจีเนตถูกหมุนเหวี่ยงที่ 9000 กรัมเป็นเวลา 20 นาทีที่ 4 ○ซ ส่วนลอยเหนือตะกอนถูกกำจัดออกและผสมกับสารละลาย CaCl2 88 มิลลิโมลาร์ (10:1, ปริมาตร/ปริมาตร) หมุนเหวี่ยงที่ 27 000 กรัม เป็นเวลา 20 นาทีที่ 4 ○ซ เม็ดที่มีเศษส่วนของเยื่อที่ยังไม่ผ่านกระบวนการใดๆ ถูกแขวนลอยในบัฟเฟอร์ทริส 0.1 โมลาร์ที่มีกลีเซอรอล 20 เปอร์เซ็นต์ ไมโครโซมถูกเก็บไว้ที่ 80 ○C จนกว่าจะใช้ต่อไป ความเข้มข้นของโปรตีนถูกกำหนดโดยการย้อมสีฟ้าสดใสของคูแมสซี่โดยใช้เซรั่มอัลบูมินจากวัวเป็นมาตรฐาน
การวิเคราะห์ Western blot
นิพจน์ CYP11A1, CYP17A1 และ CYP3A4 ถูกประเมินโดยการวิเคราะห์ western blot โปรตีนไมโครโซมของอัณฑะหรือตับถูกแยกโดย SDS-PAGE บนเจล 12 เปอร์เซ็นต์ และถ่ายโอนไปยังเมมเบรนโพลีไวนิลลิดีนฟลูออไรด์ (PVDF) เยื่อเมมเบรนถูกปิดกั้นในนมพร่องมันเนยไขมันต่ำ 5 เปอร์เซ็นต์ (w/v) ในน้ำเกลือ Tris-buffered ที่มี 0.05 เปอร์เซ็นต์ Tween-20 (TBST) เป็นเวลา 2 ชั่วโมง และฟักต่อไปด้วยกระต่าย สารต้านหนู CYP11A1 และ CYP17A1 (Boster Biological Technology, Wuhan, China) และ CYP3A4 (Beijing Biosynthesis Biotechnology Co., Ltd., Beijing, China) polyclonal anti-bodies (1:200) ใน TBST ที่อุณหภูมิ 4 ○C เป็นเวลา 8 ชั่วโมง ตามด้วยแอนติบอดีต้านกระต่าย (1:3000) เปอร์ออกซิเดสของแพะ (Tianjin Sungene Biotech Co., Ltd., Tianjin, China) เจือจางใน TBST ที่ 37 ○C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง การตรวจจับสารเคมีดำเนินการโดยใช้ Bio-Rad ChemiDocTM MP Imaging System (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) ค่าสีเทาของแถบนั้นวิเคราะห์โดยซอฟต์แวร์ Image J2 (สถาบันสุขภาพแห่งชาติ, เบเทสดา, แมสซาชูเซตส์)
การทดสอบความเป็นพิษต่อตับ
เพื่อตรวจหาความเป็นพิษต่อตับของ CTE ในหนู ค่าดัชนีตับ พยาธิวิทยาตับ ระดับอะลานีนอะมิโนทรานสเฟอเรส (ALT) ได้รับการประเมิน ส่วนของพาราฟินถูกเตรียมขึ้นภายใต้ขั้นตอนมาตรฐานและลักษณะทางเนื้อเยื่อวิทยาถูกสังเกตพบโดยกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงหลังจากการย้อมสี H&E ส่วนต่างๆ ได้รับการตรวจสอบโดยนักพยาธิวิทยาที่มองไม่เห็นการระบุตัวอย่าง ระดับ ALT ในซีรัมวัดโดยใช้ชุด ALT/GPT (Biosino Biotechnology and Science Inc. ปักกิ่ง ประเทศจีน) ตามโปรโตคอลของผู้ผลิต
การวิเคราะห์ทางสถิติ
ข้อมูลทั้งหมดแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ± SD และวิเคราะห์ด้วยการวิเคราะห์ความแปรปรวนการวัดซ้ำทางเดียว (ANOVA) พารามิเตอร์ทางสถิติทั้งหมดคำนวณโดยใช้ซอฟต์แวร์ SPSS เวอร์ชัน 19.0 (SPSS Inc., Chicago, IL) ความแตกต่างที่มีค่า p น้อยกว่า 0.05 ถือว่ามีนัยสำคัญทางสถิติ
ผลลัพธ์
เนื้อหาของฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ในสารสกัด C. tubulosa
เส้นโค้งมาตรฐานแสดงความสัมพันธ์เชิงเส้นที่ดีระหว่างการดูดกลืนแสงและความเข้มข้นของอิชินาโคไซด์จาก {{0}}.008 ถึง 0.128 มก./มล. (Y 14.39 x บวก 0.08125, R2 0.9982 )
(รูปที่ 2). เนื้อหาของ PhGs ใน CTE คือ 41.52 เปอร์เซ็นต์โดยการคำนวณ
ผลของสารสกัด C. tubulosa ต่อดัชนีอวัยวะ
ความแปรปรวนของดัชนีอวัยวะสืบพันธุ์เพศชายระหว่างกลุ่มควบคุมและกลุ่มบำบัดทั้งหมดไม่มีความแตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (ตารางที่ 1) พบความแตกต่างที่มีนัยสำคัญ (p50.05) ของดัชนีตับระหว่างกลุ่มควบคุมและกลุ่มบำบัด CTE ปริมาณสูง (0.8 กรัม/กิโลกรัม)
ผลของสารสกัด C. tubulosa ต่อพารามิเตอร์ของน้ำอสุจิ
ตามที่แสดงในตารางที่ 2 จำนวนอสุจิของหนูเพิ่มขึ้นโดยการรักษา 0.4 และ 0.8 g/kg CTE (p50.05) ในขณะที่ความมีชีวิตของอสุจิไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่าง แต่ละกลุ่ม การบริหาร CTE ก็แสดงให้เห็นเช่นกัน
ความเป็นพิษต่อตับของสารสกัด C. tubulosa
ดัชนีตับของกลุ่มที่ได้รับ CTE ขนาดสูงลดลงและ ALT ในซีรัมเพิ่มขึ้นเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม (รูปที่ 7) CTE ปริมาณสูงทำให้เกิดอาการบวมน้ำที่ตับเล็กน้อย (รูปที่ 8) โครงสร้างตับของกลุ่มควบคุมปกติ เซลล์ตับรักษาสัณฐานวิทยาของเซลล์และถูกจัดเรียงในสายตับที่มองเห็นได้ (รูปที่ 8a) ในทางกลับกัน เซลล์ตับในกลุ่ม CTE ปริมาณสูง (รูปที่ 8b) กระจัดกระจายและมากกว่า 50 เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ตับแสดงระดับอาการบวมน้ำต่างๆ เซลล์ตับจำนวนหนึ่งแสดงการเสื่อมสภาพของไขมัน เซลล์ตับบางชนิดแสดงการตายของเซลล์ด้วยนิวเคลียส pyknotic และหลักฐานอื่น ๆ ของการตายของเซลล์รวมถึง karyolysis และเศษเซลล์กระจาย
Cistanche tubulosa ได้รับการพิสูจน์แล้วว่ามีผลลดคอเลสเตอรอล (Shimoda et al., 2009; Xiong et al., 2013) ระดับ mRNA ของ CYP11A1 ถูกควบคุมโดย CTE (400 มก./กก.) (Shimoda et al., 2009) ซึ่งสอดคล้องกับรายงานก่อนหน้านี้ อย่างไรก็ตาม กลไกการควบคุมการถอดความไม่ชัดเจน เช่นเดียวกับ steroidogenic P450s อื่น ๆ กฎระเบียบของ CYP11A1 และ CYP17A1 ค่อนข้างซับซ้อน และเป็นที่ทราบกันดีว่าการเหนี่ยวนำของพวกมันเกิดจากเส้นทางการส่งสัญญาณของค่าย (Guo et al., 2003; Kosˇir et al., 2012) โปรโมเตอร์ของ CYP11A1 และ CYP17A1 มีลำดับที่ผูกมัดกับปัจจัยสเตียรอยด์ (SF-1) ซึ่งจะมีบทบาทสำคัญในการแสดงออกของยีนสเตียรอยด์ที่จำเพาะต่อเนื้อเยื่อและควบคุมด้วยฮอร์โมน (Ortiz de Montellano, 2005) ปัจจัยอื่นๆ รวมถึงการจับองค์ประกอบการตอบสนองของแคมป์ (CREB), โปรตีนกระตุ้น 1 (AP-1), โปรตีนจำเพาะ (SP-1, SP-3) ก็มีส่วนเกี่ยวข้องในการกระตุ้น CYP11A1 และการถอดความ CYP17A1 การรวมตัวของปัจจัยการถอดรหัสต่างๆ ที่ก่อตัวเป็นโปรตีนเชิงซ้อนของ DNA ดูเหมือนจะเป็นขั้นตอนสำคัญในการถอดรหัส CYP11A1 และ CYP17A1 (Ortiz de Montellano, 2005) โปรตีนเป้าหมายของ CTE ที่ส่งผลต่อการแสดงออกของ CYP11A1 และ CYP17A1 จำเป็นต้องได้รับการตรวจสอบเพิ่มเติม
และสารก่อมะเร็ง ผลการวิจัยพบว่า CTE กระตุ้นด้วยเอนไซม์เมแทบอลิซึมของฮอร์โมนหลัก (CYP3A4) ในหนูที่มีสุขภาพดี จะมีการควบคุมฮอร์โมนป้อนกลับ ผู้เขียนตั้งสมมติฐานว่าการแสดงออกของ CYP3A4 เพิ่มขึ้นในการศึกษานี้เพื่อเผาผลาญฮอร์โมนที่มากเกินไป นั่นอาจเป็นสาเหตุที่ระดับฮอร์โมนโปรเจสเตอโรนและฮอร์โมนเทสโทสเตอโรนเพิ่มขึ้นไม่สำคัญ หาก CTE ได้รับการดูแลในหนูที่มีระดับฮอร์โมนเพศต่ำ ผลที่ได้อาจจะชัดเจนมากขึ้น
ยังไม่มีการตรวจสอบความเป็นพิษต่อระบบและความปลอดภัยของ CTE อย่างครบถ้วน และการศึกษาในปัจจุบันของเราพบว่า CTE ปริมาณสูงทำให้เกิดอาการบวมน้ำที่ตับ คิมและคณะ (2012) พบว่า Cistanche herba ก่อให้เกิดความเสียหายต่ออัณฑะ รวมถึงการลดจำนวนอสุจิและระดับฮอร์โมนเทสโทสเตอโรน ทำลายโครงสร้างทางเนื้อเยื่อของลูกอัณฑะ อย่างไรก็ตาม ในงานของเรา โครงสร้างอัณฑะเป็นปกติในการตรวจเนื้อเยื่อ (ไม่แสดงข้อมูล) แม้ว่าปริมาณที่ใช้ในการศึกษานี้จะคล้ายกับรายงานของ Kim et al (พ.ศ. 2555) พันธุ์พืชสมุนไพรมีความแตกต่างกัน สภาพการเจริญเติบโต ฤดูเก็บเกี่ยว และวิธีการแปรรูปไม่ชัดเจนซึ่งอาจนำไปสู่คุณภาพหรือผลทางเภสัชวิทยาทางคลินิกที่แตกต่างกัน (Wang et al., 2012)
บทสรุป
การรักษาด้วย CTE แสดงให้เห็นการกระตุ้นอย่างมีนัยสำคัญในระดับของฮอร์โมนเพศในหนูเพศผู้ ซึ่งอาจเกิดจากการกระตุ้นการแสดงออกของ CYP11A1 และ CYP17A1 ในฐานะที่เป็นยาจีนโบราณและสารกระตุ้นอาหาร C. tubulosa สามารถพัฒนาต่อไปเป็นยาใหม่ อาหารที่มีประโยชน์หรืออาหารเสริมได้ในอนาคต อย่างไรก็ตาม ควรมีการประเมินการตรวจสอบความปลอดภัยของ C. tubulosa อย่างเป็นระบบ และควรคำนึงถึงความเสี่ยงด้านความปลอดภัยที่อาจเกิดขึ้น การพิจารณา.
1วิทยาลัยสัตวแพทยศาสตร์, Northwest A&F University, Yangling, จีน, 2College of Biological Science and Engineering, Shaanxi University of Technology, Hanzhong, จีน และ 3Department of Biomedical Sciences, University of Guelph, Guelph, Ontario, Canada
รับทราบ
ผู้เขียนขอขอบคุณ Prof. Jian-Jun Hu สำหรับความช่วยเหลือในการรวบรวมและยืนยันต้นกำเนิดของ Cistanche tubulosa
ประกาศดอกเบี้ย
งานนี้ได้รับการสนับสนุนโดย Open Project Program of State Key Laboratory of Natural Medicines, China Pharmaceutical University (No. SKLNMKF201221), Ministry of Education and State Administration of Foreign Experts Affairs โครงการ ''Overseas Teacher'' (หมายเลข MS2011XBNL057) ประเทศจีน , โครงการจัดหาผู้เชี่ยวชาญต่างประเทศระดับไฮเอนด์ (GDW20146100228) ประเทศจีน และได้รับการสนับสนุนจากโครงการก่อสร้างหลักของฐานความร่วมมือระหว่างประเทศใน S&T มณฑลส่านซี (2015SD0018) ประเทศจีน
อ้างอิง
Bosmann HB, Hales KH, Li X และอื่น ๆ (1996). การยับยั้งฮอร์โมนเทสโทสเตอโรนแบบเฉียบพลันในร่างกายโดยเอนโดท็อกซินควบคู่ไปกับการสูญเสียโปรตีนควบคุมเฉียบพลันแบบสเตียรอยด์ (StAR) ในเซลล์เลย์ดิก ต่อมไร้ท่อ 137: 4522–5.
กองบรรณาธิการเภสัชตำรับจีน. (2010). ตำรับยาแห่งสาธารณรัฐประชาชนจีน. ปักกิ่ง ประเทศจีน: สำนักพิมพ์วิทยาศาสตร์การแพทย์และเทคโนโลยีแห่งประเทศจีน.
Ge RS, ส.ส. ฮาร์ดี้ (2007). ระเบียบของเซลล์ Leydig ระหว่างการพัฒนาในวัยแรกรุ่น ใน: Payne AH, Hardy MP, eds. Leydig Cell ในสุขภาพและโรค Totowa: Humana Press, 55–70.
Guo IC, หู MC, ชุง BC. (2003). ระเบียบการถอดความของ CYP11A1 เจ ไบโอเมด วิทย์ 10:593–8.
Hanukoglu L. (1992). เอ็นไซม์สเตียรอยด์: โครงสร้าง หน้าที่ และบทบาทในการควบคุมการสังเคราะห์ฮอร์โมนสเตอรอยด์ เจ สเตียรอยด์ ไบโอเคม โมล ไบโอล 43:779–804
He W, Shu XF, Zong GZ และอื่น ๆ (1996a). การศึกษาการเสริมแรงไตและหยางที่สนับสนุนการทำงานของ Cistanche deserticola YC Ma ก่อนและหลังการเตรียม ชิน เจ ชิน เมเตอร์ เมด 21:534–7
He W, Zong GZ, Wu GL, เฉิน MH (1996b). การศึกษาเบื้องต้นเกี่ยวกับหน้าที่คล้ายฮอร์โมนเพศชายของ Cistanche deserticola ชิน เจ ชิน เมเตอร์ เมด 21:5.
Hofbauer LC, Khosla S. (1999). ผลกระทบของแอนโดรเจนต่อการเผาผลาญของกระดูก: ความคืบหน้าและการโต้เถียงล่าสุด Eur J Endocrinol 140:271–86.
Jiang B, Cai F, Gao SH และอื่น ๆ (2012). การเหนี่ยวนำของไซโตโครม P450 3A โดย Shexiang Baoxin Pill และส่วนประกอบหลัก เคมีชีวภาพโต้ตอบ 195:105–13.
Kim SW, Yoo SH, Lee HJ, และคณะ (2012). Cistanches herba กระตุ้นให้อัณฑะเป็นพิษต่อเซลล์ในหนูเพศผู้ สภาพแวดล้อมกระทิง Contam Toxicol 88: 112–17
Kosˇir R, Zmrzljak UP, Bele T, และคณะ (2012). นิพจน์ circadian ของ
steroidogenic cytochromes P450 ในการมีส่วนร่วมของต่อมหมวกไตของเมาส์ของโมดูเลเตอร์องค์ประกอบที่ตอบสนองต่อ cAMP ในการควบคุม epigenetic ของ Cyp17a1 ก.พ. 279:1584–93
Li TM, Huang HC, Su CM, และคณะ (2012). สารสกัดจาก Cistanche Deserticola ช่วยเพิ่มการสร้างกระดูกในเซลล์สร้างกระดูก เจ Pharm Pharmacol 64: 897–907
ออร์ติซ เดอ มอนเตลลาโน โปร (2005). โครงสร้าง กลไก และชีวเคมีของ Cytochrome P450 นิวยอร์ก: สำนักพิมพ์ Kluwer Academic/ Plenum
Payne AH, โอชอเนสซี่ พีเจ (1996). โครงสร้าง หน้าที่ และการควบคุมของเอ็นไซม์สเตียรอยด์ในเซลล์เลย์ดิก ใน: Payne AH, Hardy MP, Russell LD, eds. เซลล์เลย์ดิก เวียนนา: Cache River Press, 259–86
Shimoda H, Tanaka J, Takahara Y, และคณะ (2009). ฤทธิ์ลดไขมันในเลือดของสารสกัด Cistanche tubulosa ซึ่งเป็นยาแผนโบราณของจีนในหนูทดลอง แอม เจ ชิน เมด 37:1125–38
วัง T, Zhang XY, Xie WY (2012). Cistanche deserticola YC Ma, ''Desert Ginseng'': บทวิจารณ์ แอม เจ ชิน เมด 40:1123–41
Wang LN, Chen J, Yang MH และอื่น ๆ (2551). การหาปริมาณของฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ทั้งหมดใน Cistanche desertiola ภาคตะวันตกเฉียงเหนือ Pharm J 23:67–9
Xiong WT, Gu L, Wang C และอื่น ๆ (2013). ฤทธิ์ต้านภาวะน้ำตาลในเลือดสูงและภาวะไขมันในเลือดต่ำของ Cistanche tubulosa ในหนูเมาส์ db/db ที่เป็นเบาหวานชนิดที่ 2 เจ เอธโนฟาร์มาคอล 150:935–45.
ยามาซากิ เอช, ชิมาดะ ที. (1997). โปรเจสเตอโรนและไฮดรอกซิเลชันของฮอร์โมนเทสโทสเตอโรนโดยไซโตโครม P450 2C19, 2C9 และ 3A4 ในไมโครโซมของตับมนุษย์ Arch Biochem Biophys 346:161–9.
