Trifluoromethylated Flavonoid-Based Isoxazoles เป็นสารต้านเบาหวานและต้านโรคอ้วน: การสังเคราะห์, กิจกรรมการยับยั้ง -Amylase ในหลอดทดลอง, การเชื่อมต่อระดับโมเลกุลและโครงสร้าง–การวิเคราะห์ความสัมพันธ์ของกิจกรรม

โปรดติดต่อoscar.xiao@wecistanche.comเพื่อทราบข้อมูลเพิ่มเติม

Faisal K. Algethami 1,*, Ilyes Saidi 2, Hani Nasser Abdelhamid 3, Mohamed R. Elamin 1, Babiker Y. Abdulkhair 1, Amani Chrouda 4 และ Hichem Ben Jannet 2*

เชิงนามธรรม:โรคเบาหวานเป็นปัญหาสุขภาพที่สำคัญทั่วโลก การจัดการการย่อยคาร์โบไฮเดรตให้การรักษาทางเลือกสารฟลาโวนอยด์เป็นกลุ่มที่ใหญ่ที่สุดของโพลีฟีนอลสารประกอบที่ผลิตโดยพืชที่บริโภคกันอย่างแพร่หลายเป็นอาหารและ/หรือใช้เพื่อวัตถุประสงค์ในการรักษาโรค ด้วยเหตุนี้ isoxazoles จึงดึงดูดความสนใจของนักเคมีทางการแพทย์โดยอาศัยฤทธิ์ทางชีวภาพที่สำคัญของพวกมัน ดังนั้น เป้าหมายหลักของงานนี้ก็คือการค้นพบโมเลกุลลูกผสมใหม่ที่มีคุณสมบัติของทั้งฟลาโวนอยด์และไอโซซาโซลเพื่อควบคุมการย่อยคาร์โบไฮเดรต นอกจากนี้ กลุ่มไตรฟลูออโรเมทิลยังเป็นองค์ประกอบสำคัญในการพัฒนายา เนื่องจากมีความเป็นไขมันสูงและความคงตัวของเมตาบอลิซึม ดังนั้น งานปัจจุบันจึงอธิบายถึงการควบแน่นของฟลาโวนอลไตรฟลูออโรเมทิลเลชั่นที่สังเคราะห์ขึ้นก่อนหน้านี้กับเอริลไนไตรล์ออกไซด์ที่แตกต่างกัน โดยได้โมเลกุลไฮบริด 13 โมเลกุลที่ระบุว่าเป็นไอโซซาโซลที่มีไตรฟลูออโรเมทิเลชันเป็นเบส โครงสร้างของสารประกอบที่ได้รับถูกอนุมานจากการวิเคราะห์ 1H NMR, 13C NMR และ HRMS สารประกอบสังเคราะห์ใหม่ 15 ชนิดยับยั้งการทำงานของ -อะไมเลส โดยมีประสิทธิภาพตั้งแต่ 64.5 ± 0.7 เปอร์เซ็นต์ ถึง 94.7 ± 1.2 เปอร์เซ็นต์ ที่ความเข้มข้น 50 ไมโครโมลาร์ และมีค่า IC50 เท่ากับ 12.6 ± 0.2 µM–27.6 ± 1.1 µM สารประกอบที่มีประสิทธิผลมากที่สุดในแง่ของประสิทธิภาพและศักยภาพคือ 3b, 3h, 3j และ 3m ในกลุ่มไตรฟลูออโรเมทิลเลชันใหม่สารฟลาโวนอยด์ไอซอกซาโซล, สารประกอบ 3b เป็นตัวยับยั้งที่มีประสิทธิผลมากที่สุดของการออกฤทธิ์ -อะไมเลส (PI=94.7 ± 1.2 เปอร์เซ็นต์ที่ 50 ไมโครโมลาร์) ด้วยศักยภาพ (IC50=12.6 ± { {13}}.2 µM) คล้ายกับของอะคาร์โบสกลุ่มควบคุมเชิงบวก (IC50=12.4 ± 0.1 µM) การศึกษาความสัมพันธ์ระหว่างโครงสร้างกับกิจกรรมตามการวิเคราะห์การเทียบท่าระดับโมเลกุลพบว่ามีพลังงานยึดเหนี่ยวต่ำ โหมดการโต้ตอบที่ถูกต้องในกระเป๋าที่ใช้งานอยู่ของเอนไซม์เป้าหมาย และความสามารถในการโต้ตอบกับสารตกค้างที่สำคัญของความแตกแยกของไกลโคซิดิก (GLU{{16) }} และ ASP-206) ซึ่งอธิบายผลการยับยั้งของ -อะไมเลสที่สร้างโดยอนุพันธ์หลายชนิด

คำสำคัญ:- การยับยั้งอะไมเลส; เบาหวาน; ต่อต้านโรคอ้วน; ไซโคลแอดดิชั่น; ฟลาโวนอยด์; trifluoromethylation isoxazoles ที่ใช้ฟลาโวนอยด์; การเทียบท่าระดับโมเลกุล การวิเคราะห์ SAR

คลิกที่นี่เพื่อทราบข้อมูลเพิ่มเติม

1. บทนำ

โรคอ้วนและโรคเบาหวานเป็นปัญหาสุขภาพที่สำคัญของมนุษย์ทั่วโลก [1,2] แท้จริงแล้ว โรคเบาหวานมักถูกจำแนกโดยระดับน้ำตาลในเลือดที่ไม่สามารถควบคุมได้ อย่างไรก็ตาม เบาหวานชนิดที่ 1 เป็นผลมาจากการหยุดชะงักในการหลั่งอินซูลิน (ขึ้นอยู่กับอินซูลิน) ในขณะที่ชนิดที่ 2 มักเกิดจากการดื้อต่ออินซูลิน (การเปลี่ยนแปลงโครงสร้างตัวรับในเซลล์เป้าหมาย ส่งผลให้ความสัมพันธ์ระหว่างฮอร์โมนกับตัวรับลดลง) การหยุดชะงัก ในการหลั่งอินซูลินหรือทั้งสองอย่าง [3,4] การยับยั้งการย่อยสลายของพอลิแซ็กคาไรด์ให้เป็นโมโนแซ็กคาไรด์ที่เหมาะสมกับการดูดซึมเข้าสู่เซลล์อย่างหลีกเลี่ยงไม่ได้ จะใช้กลยุทธ์พื้นฐานในการควบคุมโรคเบาหวานและช่วยในการจัดการโรคอ้วน [3] เอนไซม์ -อะไมเลส (EC.3.2.1.1) เป็นเอนไซม์ย่อยอาหารที่ทำปฏิกิริยาไฮโดรไลซ์ -1,4-พันธะไกลโคซิดิกของคาร์โบไฮเดรต เช่น แป้ง [5] ดังนั้นการยับยั้ง -amylase จึงมีส่วนช่วยในการควบคุมการย่อยคาร์โบไฮเดรตไม่ทางใดก็ทางหนึ่ง [6,7]; ดังนั้นจึงเป็นแนวทางบางส่วนในการควบคุมการทำงานของเอนไซม์ของ -อะไมเลส; ดังนั้นจึงเป็นการบำบัดในอุดมคติสำหรับการควบคุมโรคอ้วนและโรคเบาหวาน รวมถึงภาวะแทรกซ้อนที่เกี่ยวข้อง [4] สารยับยั้ง -amylase ในเชิงพาณิชย์ส่วนใหญ่ เช่น acarbose, miglitol, phaseolamine และ voglibose - มีความเกี่ยวข้องกับผลข้างเคียงของลำไส้ เช่น อาการท้องอืด ปวดท้อง ท้องร่วง ตับวาย อาการแพ้ทางผิวหนังอย่างรุนแรง และการติดเชื้อในลำไส้อักเสบจากถุงน้ำดี [6] ]. สารยับยั้ง -amylase ที่ดีที่สุดคือสิ่งที่เรียกว่าตัวยับยั้งการแข่งขันซึ่งยับยั้งเอนไซม์อย่างไม่สามารถย้อนกลับได้ ตัวยับยั้งการแข่งขันจะจับกับบริเวณที่ทำงานของเอนไซม์เป้าหมายและป้องกันสารตั้งต้นจากการยึดเหนี่ยว ดังนั้น ในการยับยั้งการแข่งขัน ตัวยับยั้งจะแข่งขันกับซับสเตรตสำหรับไซต์แอคทีฟ ในทางกลับกัน ในการยับยั้งที่ไม่สามารถย้อนกลับได้ ตัวยับยั้งจะแยกตัวออกจากเอนไซม์เป้าหมายช้ามาก เนื่องจากเกาะติดกับเอนไซม์อย่างแน่นหนา โดยปกติ สารยับยั้งที่ไม่สามารถย้อนกลับได้จะจับกับบริเวณที่ทำงานของเอนไซม์อย่างโควาเลนต์โดยการปรับเปลี่ยนสารตกค้างหรือกลุ่มการทำงานที่จำเป็นสำหรับการทำงานของเอนไซม์ เพื่อให้เอนไซม์ถูกยับยั้งโดยไม่สามารถย้อนกลับได้ สำหรับการยับยั้งการย่อยคาร์โบไฮเดรตที่ดี ซึ่งสามารถช่วยควบคุมโรคอ้วนและแม้กระทั่งโรคเบาหวานประเภท 2 เราจำเป็นต้องมีสารที่ไม่ผ่านการเลือกสรรที่สามารถยับยั้งเอนไซม์ย่อยอาหารส่วนใหญ่ของน้ำตาล ได้แก่ น้ำลาย -อะไมเลส ตับอ่อน -อะไมเลส และ -กลูโคซิเดส [8,9]. การวิจัยก่อนหน้านี้เกี่ยวกับฟลาโวนอยด์กึ่งสังเคราะห์พบว่าอนุพันธ์ฟลาโวนอยด์ที่ใช้ไอโซซาโซลมีผลต้านเบาหวานอย่างมีนัยสำคัญโดยการเพิ่มการดูดซึมกลูโคสในเซลล์ HepG2 ที่ดื้อต่ออินซูลิน [10] นอกจากนี้ ฟลาโวนอยด์ยังเป็นกลุ่มเมแทบอไลต์รองโพลีฟีนอลที่ใหญ่ที่สุด ซึ่งมักพบในพืช เมแทบอไลต์ทุติยภูมิเหล่านี้มีหน้าที่สร้างสีสันที่น่าดึงดูดใจของผู้ติดตาม ผลไม้ และใบไม้ [11] โครงสร้าง ฟลาโวนอยด์มีโครงกระดูกคาร์บอน C15 ซึ่งประกอบด้วยวงแหวนอะโรมาติกสองวง (A) และ (B) ซึ่งเชื่อมโยงกันด้วยสายโซ่ C3 ที่สร้างเฮเทอโรไซเคิล (C) [12] มีการรายงานคุณสมบัติทางชีวภาพหลายอย่างสำหรับสารประกอบโพลีฟีนอลชนิดนี้ เช่น การยับยั้ง -อะไมเลส [7,13–15], ต้านเบาหวาน [16,17], ต้านมะเร็ง [18,19] และสารต้านอนุมูลอิสระผลกระทบ [20] และกิจกรรมทางชีวภาพอื่นๆ [21-25] อย่างไรก็ตาม รายละเอียดทางชีววิทยาที่เข้มข้นนี้ได้กระตุ้นให้ทีมวิจัยทางเคมีหลายแห่งสังเคราะห์สารฟลาโวนอยด์ด้วยมอยอิตีและสารทดแทนพิเศษเพื่อกำหนดเป้าหมายกิจกรรมทางชีวภาพโดยเฉพาะ [26–30] ในทางกลับกัน isoxazole เป็นเฮเทอโรไซเคิลห้าส่วนซึ่งมีความสำคัญอย่างยิ่งในด้านเคมีทางการแพทย์ นอกจากนี้ ไอซอกซาโซลที่เกิดขึ้นตามธรรมชาติ เช่น กรดไอโบเทนิก (ยาหลอนประสาท สารพิษในระบบประสาท) และมัสซิมอล (ยาหลอนประสาท ตัวรับ GABAA) ได้รับความสนใจเพิ่มขึ้นจากนักเคมีและเภสัชวิทยา เนื่องจากมีคุณสมบัติทางชีวภาพและทางเภสัชวิทยาที่มีศักยภาพ นอกจากนี้ อนุพันธ์ของ isoxazole ยังเปิดเผยว่ามีคุณสมบัติทางชีวภาพที่หลากหลาย เช่น ฤทธิ์ต้านเบาหวาน ยาแก้ปวด ต้านการอักเสบ ต่อต้านเอชไอวี และต้านมะเร็ง [10,35–40] วงแหวน isoxazole ถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายเป็นส่วนประกอบสำคัญสำหรับยา เช่น zonisamide (ยากันชัก) [41], valdecoxib, parecoxib (COX-2 inhibitors) [42] และ leflunomide (ยาแก้โรคไขข้อ) [43] ในช่วงไม่กี่สิบปีที่ผ่านมา กลุ่มไตรฟลูออโรเมทิลมีความต้องการเพิ่มขึ้นสำหรับการพัฒนาสารประกอบออกฤทธิ์ทางชีวภาพ เนื่องจากลักษณะการดึงอิเล็กตรอนที่แข็งแกร่ง ความคงตัวในการเผาผลาญ และลักษณะไลโปฟิลิกของมัน ซึ่งถือเป็นคุณสมบัติทางเคมีกายภาพที่สำคัญของโมเลกุลที่ออกฤทธิ์ทางชีวภาพ [44] มอยอิตีที่มีฟลูออไรด์นี้พบว่าขาดไม่ได้ในยาสำคัญหลายชนิด รวมทั้งฟลูเฟนาซีน (ยารักษาโรคจิต ต้านมะเร็ง) [45], เลฟลูโนไมด์ (ต้านโรครูมาติก) [43], เซเลคอกซิบ (COX-2 ตัวยับยั้งการคัดเลือก) [46], ฟลูออกซีทีน (ยากล่อมประสาท) [47] และ fluazinam (ยาฆ่าเชื้อรา) [48] การทบทวนวรรณกรรมฉบับหนึ่งระบุว่ามีรายงานว่ากรดไตรฟลูออโรเมทิลเลชัน 5- อะมิโน-นิโคตินิกแสดงฤทธิ์ของอะไมเลสที่มีแนวโน้มดี [49] นอกจากนี้ พบว่าโมเลกุลคลอรีน pyrazole–thiazole ที่ผสมคลอรีนเป็นตัวยับยั้งเอนไซม์ -amylase ที่ดี [50] ซึ่งบ่งชี้ถึงความสำคัญของอะตอมของคลอรีนในโครงสร้างการยับยั้ง -amylase ข้อมูลวรรณกรรมข้างต้นรายงานคุณสมบัติทางเคมีกายภาพที่สำคัญของกลุ่มไตรฟลูออโรเมทิล และการสนับสนุนควบคู่ไปกับฟลาโวนอยด์และไอโซซาโซล ในการยับยั้งอะไมเลสและออกแรงต้านเบาหวาน ได้สนับสนุนให้เราเตรียมชุดโมเลกุลไฮบริดชุดใหม่ที่มีฟลาโวนอยด์ไตรฟลูออโรเมทิลเลชัน เกี่ยวข้องกับชุดของ aryl isoxazoles ผ่านทางตัวเชื่อมโยงเมทิลีน และเพื่อประเมินพลังการยับยั้งของเอนไซม์ -amylase ความสัมพันธ์ระหว่างโครงสร้างกับกิจกรรม (SAR) ได้รับการศึกษาและอนุมัติผ่านการวิเคราะห์การเทียบท่าระดับโมเลกุล

Cistanche สำหรับการปรับปรุงภูมิคุ้มกัน

2. ผลลัพธ์และการอภิปราย

2.1. เคมี การเตรียมฟลาโวนอลไตรฟลูออโรเมทิลเลชั่น (1)—ซึ่งก่อนหน้านี้สังเคราะห์ในห้องปฏิบัติการของเราและแสดงศักยภาพในการเป็นพิษต่อเซลล์ที่น่าสนใจ—ถูกรายงานตามขั้นตอนที่ Znati et al นำมาใช้ (2019) [30]. 5-คลอโร-2-ไฮดรอกซี อะซีโตฟีโนนถูกควบแน่นด้วย 4-(ไตรฟลูออโรเมทิล)เบนซาลดีไฮด์ภายใต้การไหลย้อนของเมทานอลและต่อหน้าโซเดียมไฮดรอกไซด์เป็นเวลา 3 ชั่วโมงเพื่อผลิต 5-คลอโร{{10 }}(ไตรฟลูออโรเมทิล)-2-ไฮดรอกซี คาลโคน; จากนั้น วงแหวนไพรานิก (C) ถูกไซเคิลและคาร์บอน C-3 ถูกออกซิไดซ์โดยการเติม (H2O2, NaOH) เป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง (แบบแผน 1) ได้รับโมเลกุล 1 โดยมีผลผลิตที่ดี (79 เปอร์เซ็นต์ ) หลังจากการตกตะกอนในน้ำเย็นจัด โครงการที่ 1 ทางเดินสังเคราะห์ของฟลาโวนอลไตรฟลูออโรเมทิลเลชัน (1) โครงสร้างของฟลาโวนอล (1) ได้รับการยืนยันโดยการวิเคราะห์ทางสเปกโทรสโกปีและโดยการเปรียบเทียบกับข้อมูลวรรณกรรม [30] 1,3-ไดโพลาร์ไซโคลแอดดิชันเป็นปฏิกิริยาทางเคมีระหว่างไดโพล 1,3-ไดโพลาร์และไดโพลาโรไฟล์เพื่อสร้างวงแหวนห้าส่วน ดังนั้น 1,3-ไดโพลาร์ไซโคลแอดดิชันจึงถือเป็นวิธีที่สำคัญที่สุดในการสังเคราะห์ไอโซซาโซลที่หลากหลาย นอกจากนี้ การสังเคราะห์รีจิโอสเปซิฟิกของไอโซซาโซลที่เร่งปฏิกิริยาโดย Cu(I) ภายใต้การฉายรังสีด้วยไมโครเวฟนั้นอิงตามไซโคลแอดดิชัน [3 บวก 2] ระหว่างเทอร์มินอลอัลไคเนส (ไดโพลาโรฟิล) และเอริลไนไตรล์ออกไซด์ (ไดโพล) โดยให้ 3,{33}}แทน รีจิโอไอโซเมอร์ [39,51]. วิธีการของเราในการกำหนดเป้าหมายไอโซซาโซลอยด์ ไตรฟลูออโรเมทิเลชั่น (3a–m) เริ่มแรกโดยการเตรียมไดโพลาโรไฟล์ (2) ผ่านการแพร่กระจายของกลุ่มไฮดรอกซิลในตำแหน่ง C-3 ของฟลาโวนอล (1) ใน DMF ที่ปราศจากน้ำสำหรับ 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องต่อหน้า K2CO3 ดังแสดงในแผนภาพที่ 2 ไดโพลาโรฟิล (2) ถูกเตรียมด้วยผลผลิตที่ดีเยี่ยม (94 เปอร์เซ็นต์) โครงการที่ 2 เส้นทางสังเคราะห์ของไดโพลาโรฟิล (2)

โครงสร้างของสารประกอบ 2 ถูกสร้างขึ้นตามข้อมูลสเปกตรัม อันที่จริง นอกจากสัญญาณที่สอดคล้องกับโปรตอนและคาร์บอนที่ฟลาโวนอล (1) นำมาใช้แล้ว ยังตรวจพบสัญญาณใหม่ของโพรพาร์จิล มอยอิตีในสเปกตรัม 1H และ 13C NMR นอกจากนี้ สเปกตรัม 1H NMR ของไดโพลาโรฟิล (2) ซึ่งบันทึกใน CDCl3 ที่ 300 MHz แสดงเป็นสองเท่าที่ δH 5.06 (2H, d, J=2.4 Hz) ที่สอดคล้องกับเมทิลีนโปรตอน H{{13 }}" และแฝดสามที่ δH 2.36 (1H, t, J=2.4 Hz) ที่มาจากโปรตอนของกลุ่มเอไทนิล (H-3") สเปกตรัม NMR 13C ยืนยันการแนะนำของกลุ่มโพรพาร์จิลโดยการสังเกตสัญญาณใหม่ที่ δC 78.4, 76.9 และ 59.6 ที่มาจาก C-2", C-3" และ C{{29} }" ตามลำดับ ไฮดรอกซิมิลคลอไรด์ a–m เป็นสารตั้งต้นหลักสำหรับเอริลไนไตรล์ออกไซด์รุ่นในแหล่งกำเนิด—รีเอเจนต์ที่มีส่วนร่วมในปฏิกิริยาของ 1,3-ไดโพลาร์ไซโคลแอดดิชันสำหรับการสังเคราะห์ไอซอกซาโซล สารตั้งต้น (a –m) ถูกสังเคราะห์จากอัลดีไฮด์ที่เหมาะสมตามขั้นตอนทั่วไปที่บรรยายโดย Himo et al. (2005) [51] ไฮดรอกซิลคลอไรด์ที่ต้องการ (a–m) ได้มาด้วยผลผลิตที่ดีตั้งแต่ 80 ถึง 98 เปอร์เซ็นต์ (ตาราง 1) ดังนั้น aryl nitrile oxides ที่สอดคล้องกันจึงเกิดขึ้นจากแหล่งกำเนิดโดยการดีไฮโดรฮาโลจิเนชันของไฮดรอกซิลคลอไรด์ที่เกี่ยวข้องโดยใช้ไตรเอทิลเอมีนเป็นเบส ตารางที่ 1. โครงสร้างและผลผลิตของไฮดรอกซิลคลอไรด์ (a–m) และไอโซซาโซลที่มีฟลาโวนอยด์เป็นไตรฟลูออโรเมทิลเลชัน (3a) –ม.)

ปฏิกิริยาไดโพลาร์ไซโคลแอดดิชัน 13-ถูกนำไปใช้ในแนวทางรีจิโอสเปซิฟิกโดยใช้เทอร์มินอลอัลไคน์ (2) และไฮดรอกซิลคลอไรด์ (a–m) ที่แตกต่างกันซึ่งถูกแทนที่อย่างหลากหลาย (แบบแผน 3) ผลลัพธ์ที่ได้แสดงไว้ในตารางที่ 1 โครงการที่ 3 เส้นทางสังเคราะห์ของฟลาโวนอยด์ไอโซซาโซลิดไตรฟลูออโรเมทิลเลชัน 3a–m ปฏิกิริยาทั้งหมดดำเนินการภายใต้การฉายรังสีไมโครเวฟ (250 วัตต์) ใน DMF โดยมีไตรเอทิลเอมีนและคิวรูรัสไอโอไดด์ (CuI) เป็นเวลา 5 นาที ผลิตภัณฑ์ถูกแยกออกจากของผสมปฏิกิริยาโดยการทำให้บริสุทธิ์อย่างง่ายบนคอลัมน์ซิลิกาเจล ไอซอกซาโซลที่ถูกแทนที่ 3,{10}} ที่เตรียมขึ้นใหม่ (3a–m) ที่เตรียมใหม่ได้มาจากผลผลิตที่มีช่วงตั้งแต่ 73 ถึง 96 เปอร์เซ็นต์ (ตารางที่ 1) โครงสร้างของ isoxazoles ที่เป็นเบสไตรฟลูออโรเมทิเลชันสังเคราะห์ (3a–m) (ตารางที่ 1) ถูกกำหนดหาโดยวิธี 1H, 13C NMR และ DEPT 135 สเปกตรัม 1H NMR ของสารประกอบเหล่านี้แสดงการสะท้อนเดี่ยวที่ δH 6.3{{68 }}–6.60 เนื่องมาจากมีไทน์โปรตอน H-4" ของวงแหวนไอซอกซาโซล อีกสายหนึ่งที่ δH 5.35–5.45 ที่มาจากเมทิลีนโปรตอน H-6" และสัญญาณอื่นๆ ใน โซนโปรตอนอะโรมาติกที่เกี่ยวข้องกับโปรตอนที่แนะนำโดยกลุ่มแอริล นอกจากนี้ โครงสร้างเหล่านี้ได้รับการยืนยันโดยสเปกตรัม 13C NMR และ DEPT 135 ของพวกมัน โดยแสดงสัญญาณคาร์บอนที่คาดไว้ทั้งหมด โดยเฉพาะอย่างยิ่งสัญญาณอะโรมาติกที่นำมาใช้โดยไฮดรอกซิลคลอไรด์ที่ใช้แล้ว เช่นเดียวกับคาร์บอนของมีไทน์ C-4" ของ วงแหวนไอซอกซาโซลสะท้อนที่ δC 1{{9{{1{{105}}0}}}2.5–103.0 และ ซึ่งสัญญาณถูกกลับด้านในสเปกตรัม DEPT 135 ซึ่งสะท้อนที่ δC 63.5–63.9 เนื่องมาจากเมทิลีน C-6" 2.2. การประเมินค่าการยับยั้ง -Amylase เพื่อควบคุมการทำงานของเอนไซม์ การยับยั้งเป็นหนึ่งในวิธีการรักษาที่ประสบความสำเร็จมากที่สุด ดังนั้นการยับยั้งเอนไซม์ -amylase จึงเป็นแนวทางบางส่วนในการจัดการโรคเบาหวานและควบคุมน้ำหนัก โดยขัดขวางการย่อยคาร์โบไฮเดรต จนถึงปัจจุบัน ยาเช่น acarbose ได้เป็นส่วนหนึ่งของคลังแสงของยาที่ใช้รักษา DM และโรคอ้วน อย่างไรก็ตาม อะคาโบสไม่ได้ใช้เป็นยาเดี่ยว เนื่องจากมีประสิทธิภาพและผลข้างเคียง แทนที่จะใช้ acarbose เป็นยาเสริมและมักใช้ร่วมกับยาลดน้ำตาลในเลือดอื่น ๆ นอกจากนี้ ยานี้ยังมักใช้เป็นสารประกอบมาตรฐานในการศึกษาการยับยั้ง -อะไมเลส ในการศึกษานี้ ประเมินสารประกอบ 15 ชนิด (1, 2 และ 3a–m) สำหรับฤทธิ์ยับยั้ง -amylase ของพวกมัน ผลลัพธ์ถูกแสดงออกในพารามิเตอร์ศักยภาพ (IC50 ± SEM µM) และประสิทธิภาพ (PI ที่ 50 µM) และแสดงไว้ในตารางที่ 2 ตามผลลัพธ์ โมเลกุลที่สังเคราะห์ขึ้น (1, 2 และ 3a–m) มีฤทธิ์ต้าน- -อะไมเลสที่มีความหมาย (p น้อยกว่าหรือเท่ากับ 0.05) โดยมีประสิทธิภาพตั้งแต่ 64.5 ± {{177} }.7 ถึง 94.7 ± 1.2 เปอร์เซ็นต์ที่ความเข้มข้น 50 µM และศักยภาพของค่า IC5{{2{{207}}2}} ที่แปรผันตั้งแต่ 12.6 ± {{219} }.2 ถึง 27.6 ± 1.1 µM ในบรรดาไอโซซาโซลที่มีไตรฟลูออโรเมทิลเลชันเป็นเบสที่เตรียมขึ้นใหม่พบว่า 3b (R1=F, R2=H) มีศักยภาพมากที่สุด (IC50=12.6 ± 0.2 ไมโครโมลาร์) และ สารประกอบที่มีประสิทธิผลมากที่สุด (PI=94.7 ± 1.2 เปอร์เซ็นต์ที่ 50 ไมโครโมลาร์) เพื่อยับยั้งการทำงานของเอนไซม์ -อะไมเลส ค่าที่มีนัยสำคัญเหล่านี้พบว่าสามารถเปรียบเทียบได้กับค่าของอะคาร์โบส (PI=97.8 ± 0.5 เปอร์เซ็นต์ที่ 50 µM; IC50=12.4 ± 0.1 µM) ที่ใช้เป็นสารมาตรฐาน ในทำนองเดียวกัน สารประกอบ 3h, 3j และ 3m สามารถพิจารณาได้ว่าออกฤทธิ์ทางชีวภาพในแง่ของประสิทธิภาพและศักยภาพ (PI= 93.1 ± 0.9 เปอร์เซ็นต์ –93.5 ± 1.1 เปอร์เซ็นต์ที่ 50 µM; IC50=13.3 ± 0.2 µM–13.8 ± 0.1 µM) เปรียบเทียบกับ 3b แบบอะนาล็อกและอะคาโบสของพวกมัน สารประกอบที่เหลือ (1, 2, 3a, 3c, 3d, 3e, 3f, 3g, 3i, 3k และ 3l) ยังพบว่าสามารถยับยั้งเอนไซม์ -อะไมเลส แต่ยังคงมีประสิทธิภาพน้อยกว่า (PI{{ 140}}.5 ± 0.7 เปอร์เซ็นต์ –87.1 ± 0.7 เปอร์เซ็นต์ที่ 50 µM; IC50=14.4 ± 0.2 µM ถึง 27.6 ± 1.1 µM) กว่าสารอะนาล็อกที่กล่าวถึงข้างต้น ฤทธิ์ต้าน- -อะไมเลสที่ทำได้โดยสารประกอบสังเคราะห์นั้นสอดคล้องกับรายงานก่อนหน้านี้ ซึ่ง Nie et al. (2020) [10] รายงานว่าไอโซซาโซลที่มีส่วนประกอบของฟลาโวนอยด์สามารถแสดงโครงสร้างที่มีคุณค่าสำหรับการค้นพบยาต้านเบาหวาน โดยการเปรียบเทียบโครงสร้างและกิจกรรมของโมเลกุลที่สังเคราะห์ขึ้น สารประกอบ 3bd ที่ถูกฮาโลจิเนตในตำแหน่งพาราของกลุ่มฟีนิลที่ติดอยู่กับวงแหวนไอออกซาโซล แสดงให้เห็นถึงประสิทธิภาพที่มีนัยสำคัญ (PI= 85.4 ± 0.9 เปอร์เซ็นต์ –94.7 ± 1.2 เปอร์เซ็นต์ที่ 50 µM) และศักยภาพ (IC50=12.6 ± 0.2 µM–14.6 ± 0.3 µM) ในการยับยั้งเอนไซม์ -อะไมเลส การค้นพบนี้เป็นข้อตกลงที่ดีกับวรรณกรรม ซึ่งแสดงให้เห็นว่าการมีอยู่ของอะตอมของฮาโลเจน (F, Cl หรือ Br) ในโครงสร้างจำเป็นต่อการยับยั้ง -อะไมเลสที่มีศักยภาพ [49,50] นอกจากนี้ การศึกษาความสัมพันธ์ระหว่างโครงสร้างกับกิจกรรมทำให้เราสามารถสรุปได้ว่าผลของตัวดึงดูดแบบเหนี่ยวนำ (−I) และผู้ให้ mesomeric (บวก M) มากขึ้นจะเพิ่มประสิทธิภาพและศักยภาพในการยับยั้ง -amylase (กิจกรรมของอนุพันธ์ฟลูออไรด์ 3b (R{{186}) } F, R2=H; PI=94.7 ± 1.2 เปอร์เซ็นต์ที่ 50 µM; IC50=12.6 ± 0.2 µM) สูงกว่าอนุพันธ์คลอรีน 3c (R{ {198}} Cl, R2=H; PI=87.1 ± 0.7 เปอร์เซ็นต์ที่ 50 µM; IC50=14.4 ± 0.2 µM) ตามด้วยอนุพันธ์โบรมีน 3d (R 1=Br, R2=H; PI=85.4 ± 0.9 เปอร์เซ็นต์ที่ 50 µM; IC50=14.6 ± 0.3 µM)) ตามการศึกษาก่อนหน้านี้ [ 4,49]. เห็นได้ชัดว่าการยับยั้ง -amylase เพิ่มขึ้นด้วยผลกระทบของตัวดึงดูดแบบเหนี่ยวนำ (−I) และผู้ให้แบบมีโซเมอร์ (บวก M) ของอะตอมของฮาโลเจน

2.3. การศึกษาการเชื่อมต่อระดับโมเลกุลเอนไซม์ -อะไมเลส (EC 3.2.1.1)—ไกลโคซิล ไฮโดรเลส—ไฮโดรไลซ์ -1,4-พันธะไกลโคซิดิกในแป้ง เช่น อะมิโลส โครงสร้างผลึกของเอนไซม์ -อะไมเลส (PDB: 7TAA) ประกอบด้วยสายโซ่ A ที่มีกรดอะมิโน 478 ตัวตามลำดับ [52] -อะไมเลสเป็นหนึ่งในเอ็นไซม์หลักที่สำคัญที่สุดในการย่อยคาร์โบไฮเดรต [5]; ดังนั้นการปิดกั้นเอนไซม์ -amylase จึงเป็นกลยุทธ์ในการควบคุมโรคเบาหวานและช่วยในการจัดการโรคอ้วน [6,7] การวิเคราะห์การเทียบท่าระดับโมเลกุลอย่างครอบคลุมถูกดำเนินการเพื่อสำรวจโหมดการจับ กำหนดปฏิกิริยาที่เป็นไปได้ของโมเลกุลที่สังเคราะห์ (1, 2 และ 3a–m) ภายในกระเป๋ายึดเกาะที่ไม่ชอบน้ำของ ABC (อะคาโบสเฮกซาแซ็กคาไรด์ดัดแปลง) ของโครงสร้างผลึกโปรตีนของ Aspergillus oryzae - เอนไซม์อะไมเลส (PDB: 7TAA) [52] โดยใช้ซอฟต์แวร์ AutoDock Vina และหาเหตุผลเข้าข้างตนเองกิจกรรมการยับยั้งในหลอดทดลอง -อะไมเลสของสารประกอบที่สังเคราะห์ขึ้นใหม่ โมเลกุลสังเคราะห์ทั้งหมด (1, 2 และ 3a–m) และอะคาโบสซึ่งใช้เป็นสารมาตรฐานได้รับการศึกษาในซิลิโก พลังงานจับและรายละเอียดอันตรกิริยา (จำนวนอันตรกิริยา จำนวนของกรดอะมิโนที่ทำปฏิกิริยา กรดอะมิโนที่ทำปฏิกิริยากับพันธะไฮโดรเจน) ของลิแกนด์กับเอ็นไซม์เป้าหมายถูกนำเสนอในตารางที่ 2 จากผลการเทียบท่าในซิลิโก (ตารางที่ 2) สังเกตได้ ว่าสารประกอบ 1 และ 2 แสดงพลังงานการจับที่ดี (−7.7 และ−7.8 kcal/โมล ตามลำดับ) ภายในตำแหน่งการจับของเอนไซม์ -อะไมเลส (PDB: 7TAA) ค่าเหล่านี้เทียบได้กับค่าของสารมาตรฐาน (อะคาโบส, −7.9 กิโลแคลอรี/โมล) ทำให้เข้ากับตำแหน่งออกฤทธิ์ของเอนไซม์เป้าหมายได้พอดี ที่น่าสนใจคือ ไอซอกซาโซลที่มีไตรฟลูออโรเมทิเลชันที่สังเคราะห์ขึ้นใหม่ (3a–m) ที่สังเคราะห์ขึ้นใหม่ให้ผลลัพธ์ที่คาดหวัง พวกมันอยู่ในท่าประสานอย่างเหมาะสมและแสดงพลังงานการยึดเกาะที่ยอดเยี่ยมตั้งแต่ −9.6 ถึง −8.2 kcal/mol (ตารางที่ 2) สิ่งนี้จะช่วยให้พวกมันทั้งหมดเข้ากับตำแหน่งแอคทีฟของเอนไซม์ -อะไมเลสได้ดีกว่าอะคาโบส โหมดการจับของสารประกอบที่ออกฤทธิ์มากที่สุดสามชนิด (3b, 3h และ 3j) กับเอนไซม์เป้าหมายถูกอภิปรายไว้ด้านล่าง สารประกอบ 3b—ตัวยับยั้งที่มีศักยภาพและมีประสิทธิภาพมากที่สุดของเอนไซม์ -อะไมเลสในชุดที่ทดสอบของไอซอกซาโซลอยด์ที่มีไตรฟลูออโรเมทิลเลชันเป็นพื้นฐาน—แสดงพลังงานการจับที่ดีเยี่ยมที่ −9.6 กิโลแคลอรี/โมล นอกจากนี้ โหมดการจับของ 3b เสนอแนะว่ามันเกี่ยวข้องกับการกระทำระหว่างกันที่ไม่ใช่โควาเลนต์ 16 อย่างกับกรด 10 อะมิโน (ตารางที่ 2) อย่างละเอียด มอยอิตี 3-(3-(4-ฟลูออโรฟีนิล)ไอซอกซาโซล-5-อิล)เมทอกซิลสร้างพันธะฮาโลเจน (ฟลูออรีน) สองตัวกับ ASP-206 ซึ่งเป็น Pi –Pi พันธะรูปตัว T กับ TYR-82, พันธะ Pi–cation กับ HIS-80, Molecules 2021, 26, 5214 8 ของพันธะไฮโดรเจนทั่วไป 18 พันธะที่มี ARG{{71 }} และ Pi–anion และพันธะคาร์บอน-ไฮโดรเจนที่มีเรซิดิว ASP-340 นอกจากนี้ กลุ่มไตรฟลูออโรเมทิลที่ติดอยู่กับ C-40 ของโครงกระดูกฟลาโวนอยด์ยังเกี่ยวข้องกับการจับไฮโดรเจนแบบธรรมดากับ GLY-167 และพันธะอัลคิลสองพันธะกับอะมิโน LEU-166 และ LEU-173 กรด ในทางกลับกัน โครงกระดูกฟลาโวนอยด์มีปฏิสัมพันธ์ผ่านพันธะ Pi–anion กับ ASP-340 พันธะไฮโดรเจนทั่วไปกับ GLN-35 และพันธะ Pi–alkyl และพันธะซ้อน Pi–Pi สองพันธะกับ TYR{ {80}} (รูปที่ 1).

รูปที่ 1 สารประกอบ 3b พอดีกับกระเป๋าจับที่ไม่ชอบน้ำของ ABC ใน PDB: 7TAA

นอกจากนี้ สารประกอบ 3 ชั่วโมงยังมีพลังงานจับที่น่าสนใจที่ −9.3 กิโลแคลอรี/โมล โหมดการจับของมันแสดงให้เห็นว่ามันเกี่ยวข้องกับการกระทำระหว่างกันที่ไม่ใช่โควาเลนต์ 15 อย่างกับเรซิดิว 10 ตัว (ตารางที่ 2) ดังนั้น ความเข้าใจเชิงลึกระดับโมเลกุลจากการวิเคราะห์เทียบท่าเสนอแนะว่ามอยอิตี 3-(3-(4- เมทอกซีฟีนิล)ไอซอกซาโซล-5-อิล)เมทอกซิลสร้างพันธะคาร์บอน-ไฮโดรเจนสองพันธะกับ GLU{{12 }}, พันธะรูปตัว Pi–Pi T กับ TYR-82, พันธะไฮโดรเจนธรรมดาสองพันธะที่มี ARG-344, พันธะคาร์บอน-ไฮโดรเจนที่มี HIS-80 และพันธะ Pi–anion ด้วย ASP-340 เรซิดิว นอกจากนี้ หมู่ไตรฟลูออโรเมทิลยังเกี่ยวข้องกับพันธะไฮโดรเจนทั่วไปกับ GLY-167 และการกระทำระหว่างกันของอัลคิลสองครั้งกับกรดอะมิโน LEU-166 และ LEU-173 นอกจากนี้ โครงกระดูกฟลาโวนอยด์ยังเกี่ยวข้องกับพันธะไฮโดรเจนทั่วไปกับ GLN-35 พันธะ Pi–anion กับ ASP-340 พันธะซ้อน Pi–Pi สองพันธะ และพันธะ Pi–alkyl กับ TYR{ {24}} (รูปที่ 2)

ในทางกลับกัน สารประกอบ 3j มีพลังงานจับที่สำคัญที่ −9.2 กิโลแคลอรี/โมล โหมดการผูกมัดของมันแสดงให้เห็นว่าเกี่ยวข้องกับ 16 อันตรกิริยาที่ไม่ใช่โควาเลนต์กับกรด 13 อะมิโน (ตารางที่ 2) ดังนั้น การวิเคราะห์เชิงลึกของการเทียบท่าระดับโมเลกุลแนะนำว่า 3-(3-(4-บิวทอกซี-3-คลอโรฟีนิล)ไอซอกซาโซล-5-อิล)เมทอกซิล มอยอิตีในรูปแบบทั่วไปสองแบบ พันธะไฮโดรเจนกับ ARG-344, พันธะ Pi–alkyl สามพันธะกับ TYR-82, HIS-210 และ HIS-296, อันตรกิริยาของอัลคิลกับ LEU-232, a พันธะคาร์บอน-ไฮโดรเจนที่มีสารตกค้าง GLU-230 พันธะ Pi–anion กับ ASP-340 และพันธะ Pi–cation กับ HIS-80 นอกจากนี้ กลุ่มไตรฟลูออโรเมทิลที่เชื่อมโยงกับวงแหวนอะโรมาติก B ของโครงกระดูกฟลาโวนอยด์เกี่ยวข้องกับพันธะไฮโดรเจนแบบธรรมดากับ GLY-167 และการกระทำระหว่างกันของอัลคิลสองครั้งกับเรซิดิว LEU-166 และ LEU-173 นอกจากนี้ โครงกระดูกฟลาโวนอยด์ยังเกี่ยวข้องกับพันธะไฮโดรเจนทั่วไปกับ GLN-35 และ Pi–alkyl และพันธะ Pi–Pi สองพันธะกับกรดอะมิโน TYR-75 (รูปที่ 3) ในเอ็นไซม์ Aspergillus oryzae -amylase (PDB: 7TAA) นิวคลีโอไฟล์และกรดเร่งปฏิกิริยา/เบสเรซิดิว ซึ่งมีหน้าที่ในความแตกแยกของพันธะไกลโคซิดิก คือ กรดอะมิโน ASP-206 และ GLU-230 ตามลำดับ [5]. ดังนั้น อันตรกิริยาระหว่างโปรตีนและลิแกนด์ โดยหลักแล้วผ่านทางเรซิดิว GLU-230 และ ASP-206 จึงเป็นวิธีที่ดีที่สุดในการสกัดกั้นการแตกแยกของพันธะไกลโคซิดิก อันที่จริง พลังงานการจับต่ำ ท่าจับที่ถูกต้อง ความสามารถในการโต้ตอบกับส่วนที่เหลือที่สำคัญของความแตกแยกของไกลโคซิดิก (GLU-230 และ ASP-206) และการโต้ตอบจำนวนมากในกระเป๋าที่ใช้งานอยู่ของ เอนไซม์เป้าหมาย (ตารางที่ 2) สามารถอธิบายประสิทธิภาพของการยับยั้ง -amylase ที่แข็งแกร่งซึ่งกำหนดโดยสารประกอบส่วนใหญ่

รูปที่ 3 สารประกอบ 3j พอดีกับกระเป๋าจับที่ไม่ชอบน้ำของ ABC ใน PDB: 7TAA

3. วัสดุและวิธีการ

3.1. การทดลองทั่วไปขั้นตอน ตัวทำละลายที่ใช้ทั้งหมดถูกกลั่นใหม่ก่อนใช้ ปฏิกิริยาเคมีทั้งหมดถูกเฝ้าติดตามโดยใช้เพลต TLC เชิงพาณิชย์ (ซิลิกาเจล 60, F254, SDS) ใช้เครื่องมือ Büchi 510 เพื่อกำหนดจุดหลอมเหลว สเปกตรัม 1H NMR (300 MHz), DEPT 135 และ 13C NMR(75 MHz) ทั้งหมดถูกบันทึกในคลอโรฟอร์มดิวเทอเรตและไดเมทิล ซัลฟอกไซด์-d6 ด้วยสเปกโตรมิเตอร์ Bruker AC-300 รายงานการเปลี่ยนแปลงทางเคมีทั้งหมด (δ) เป็นส่วนต่อล้าน (ppm) ค่าคงที่ของคัปปลิ้ง (J) ถูกกำหนดเป็นเฮิรตซ์ (Hz) และใช้เรโซแนนซ์ตัวทำละลายที่ไม่ใช่ดิวเทอเรตที่เหลือเป็นข้อมูลอ้างอิงภายใน สเปกตรัม DCI-HRMS ถูกเรียกใช้ใน aWaters GCT 1er ในโหมดไอออนบวก สเปกตรัม ESI-HRMS ถูกบันทึกด้วย ESI-TOF (Waters LCT, Markham, Ontario, Canada) ในโหมดไอออนบวกโดยใช้โหมดรีเฟลกตรอน

4. บทสรุป

trifluoromethylation flavonoid-based isoxazoles (3a–m) ที่สังเคราะห์ขึ้นใหม่ 15 ชนิดได้รับการประเมินในหลอดทดลองสำหรับฤทธิ์ยับยั้ง -amylase ของพวกมัน และสังเกตผลลัพธ์จำนวนมาก ไซโคลแอดดักเตอร์ 3b, 3h, 3j และ 3m มีประสิทธิภาพและศักยภาพที่เทียบเคียงได้กับอะคาร์โบสที่ใช้เป็นสารมาตรฐานในการยับยั้งเอนไซม์ -อะไมเลส นอกจากนี้ การวิเคราะห์ความสัมพันธ์ระหว่างโครงสร้างกับกิจกรรมพบว่าอนุพันธ์ของฮาโลจิเนตและอัลค็อกซิเลตเป็นสารประกอบที่ออกฤทธิ์มากที่สุด จากการวิเคราะห์ด้วยซิลิโคด็อกกิ้ง ไอโซซาโซลจากไตรฟลูออโรเมทิลเลชันที่มีฟลาโวนอยด์เป็นเบสมีพลังงานจับต่ำ ปฏิกิริยาจำนวนมาก และตำแหน่งการจับที่ถูกต้องในกระเป๋าที่ใช้งานอยู่ของเอนไซม์เป้าหมาย สารเหล่านี้ส่วนใหญ่มีปฏิสัมพันธ์กับนิวคลีโอไฟล์และกรด/เบสตัวเร่งปฏิกิริยา (GLU-230 และ ASP-206) ซึ่งอาจอธิบายประสิทธิภาพและศักยภาพในการยับยั้งการทำงานของเอนไซม์ของ -อะไมเลส กิจกรรมที่น่าสนใจที่แสดงโดยสารประกอบไฮบริดที่สังเคราะห์ได้ส่งเสริมการมีส่วนร่วมของพวกเขาในฐานะผู้สมัครสำหรับการค้นพบสารต้านโรคเบาหวานและสารต้านโรคอ้วนชนิดใหม่ อย่างไรก็ตาม การศึกษาเชิงลึกและปัจจัยด้านความปลอดภัยต้องคำนึงถึงความเสี่ยงที่เกี่ยวข้องกับความแปลกใหม่ของสารออกฤทธิ์ ความเป็นพิษ ความคงตัว และการละลายในตัวกลางที่เป็นน้ำ และลักษณะทางเภสัชพลศาสตร์ รวมถึงความน่าเชื่อถือที่สามารถติดตามผลข้างเคียงได้ ในมนุษย์ก่อนที่จะเกิดผลกระทบร้ายแรง/ไม่สามารถย้อนกลับได้ วัสดุเสริม: มีข้อมูลต่อไปนี้ทางออนไลน์, NMR Spectra ของสารประกอบสังเคราะห์ (1, 2, และ 3a–m), ตารางที่ S1: กราฟการตอบสนองความเข้มข้นที่ใช้ในการคำนวณค่า IC50 ผลงานของผู้เขียน: Conceptualization FKA และ IS; ระเบียบวิธี, HBJ; ซอฟต์แวร์ IS และ H.NA; การตรวจสอบความถูกต้อง, FKA และ AC; การวิเคราะห์อย่างเป็นทางการ MRE; การสอบสวน FKA และ IS; ทรัพยากร BYA; การจัดการข้อมูล FKA และ IS; การเขียน—การเตรียมร่างต้นฉบับ FKA และ IS; การเขียน—ทบทวนและแก้ไข, HBJ; การสร้างภาพ FKA และ BYA; การกำกับดูแล HBJ; การบริหารโครงการ FKA และ HBJ; การจัดหาเงินทุน FKA ผู้เขียนทั้งหมดได้อ่านและตกลงที่จะเผยแพร่ต้นฉบับของต้นฉบับ เงินทุน: งานวิจัยนี้ไม่ได้รับเงินทุนจากภายนอก คำชี้แจงของคณะกรรมการพิจารณาสถาบัน: ไม่เกี่ยวข้อง คำชี้แจงความยินยอมที่ได้รับแจ้ง: ไม่เกี่ยวข้อง คำชี้แจงเกี่ยวกับความพร้อมใช้งานของข้อมูล: ไม่เกี่ยวข้อง การตอบรับ: ผู้เขียนขอขอบคุณคณบดีฝ่ายวิจัยทางวิทยาศาสตร์ที่อิหม่ามโมฮัมหมัดอิบันซาอูดอิสลาม มหาวิทยาลัยให้ทุนสนับสนุนงานนี้ผ่านกลุ่มวิจัย RG-21-09-69.ความขัดแย้งทางผลประโยชน์: ผู้เขียนประกาศไม่มีผลประโยชน์ทับซ้อน ตัวอย่างที่มีจำหน่าย: ผู้เขียนไม่มีตัวอย่างของสารประกอบดังกล่าว

อ้างอิง
1. บูตาเยบ, ก.; Boutayeb, S. ภาระโรคไม่ติดต่อในประเทศกำลังพัฒนา. อินเตอร์ J. Equity Health 2005, 4, 1–8. [ข้ามอ้างอิง]
2. วากเนอร์ KH; Brath, H. มุมมองระดับโลกเกี่ยวกับการพัฒนาของโรคไม่ติดต่อ ก่อนหน้า เมดิ. 2012, 54, S38–S41. [ข้ามอ้างอิง]
3. Tseng, CH กลไกทางชีววิทยาที่มีศักยภาพของโรคเบาหวานที่เกิดจากสารหนู ท็อกซิคอล แอปพลิเค ฟา. 2547, 197, 67–83. [ข้ามอ้างอิง]
4. ศาลา ดี.; Zorzano, A. การควบคุมความแตกต่างของมวลกล้ามเนื้อในเบาหวานชนิดที่ 1 และชนิดที่ 2 เซลล์. มล. วิทย์ชีวิต. 2015, 72, 3803–3817. [ข้ามอ้างอิง]
5. Brzozowski, น.; Davies, GJ โครงสร้างของ aspergillus oryzae -amylase เชิงซ้อนกับตัวยับยั้ง acarbose ที่ความละเอียด 2.0 Å ชีวเคมี 1997, 36, 10837–10845 [ข้ามอ้างอิง]
6. ชยราช, ส.; Suresh, S.; Kadeppagari, RK Amylase inhibitors และการประยุกต์ใช้ทางชีวการแพทย์ของพวกมัน แป้ง-Stärke 2013, 65, 535–542. [ข้ามอ้างอิง]
7. ข่านเอส.; นาซีร์, ม.; Raiz, N.; สะลีม, ม.; Zengin, G.; ฟาซาล, จี.; ซาเลม, เอช.; มุกตาร์, ม.; ตูซิฟ มิชิแกน; ทารีน อาร์บี; และคณะ การทำโปรไฟล์พฤกษเคมี คุณสมบัติทางชีวภาพในหลอดทดลอง และในการศึกษาซิลิโกเกี่ยวกับสต็อก Caragana ambigua (Fabaceae): แนวทางที่ครอบคลุม Ind. พืชผล Prod. 2019, 131, 117–124. [ข้ามอ้างอิง]
8. เบิร์ก เจเอ็ม; ติมอซโก เจแอล; สไตรเออร์, แอล. เอ็นไซม์สามารถยับยั้งได้ด้วยโมเลกุลจำเพาะ ในชีวเคมี 5th ed.; WH Freeman: นิวยอร์ก, นิวยอร์ก, สหรัฐอเมริกา, 2002
9. คัม, ก.; หลี่ KM; Razmovski-Naumovski, V.; Nammi, S.; ชิ เจ.; จันทร์, ก.; Li, GQ การศึกษาเปรียบเทียบผลการยับยั้งของส่วนต่างๆ และองค์ประกอบทางเคมีของผลทับทิมต่อ -อะไมเลส และ -กลูโคซิเดส ไฟโตเธอร์. ความละเอียด 2013, 27, 1614–1620. [ข้ามอ้างอิง]
10. เนี่ย เจพี; คู ZN; เฉิน Y.; เฉิน JH; เจียง, วาย.; จิน มินนิโซตา; ยู, วาย.; นิว, ไวโอมิง; ด้วน กองบัญชาการ; Qin, N. Discovery และฤทธิ์ต้านเบาหวานของอนุพันธ์ฟลาโวนอยด์ที่อิงไอโซซาโซล Fitoterapia 2020, 142, 104499. [CrossRef]
11. Malešev, D.; Kunti´c, V. การตรวจสอบโลหะ-ฟลาโวนอยด์คีเลตและการหาค่าฟลาโวนอยด์ผ่านปฏิกิริยาเชิงซ้อนของโลหะ-ฟลาโวนอยด์ เจ เซิร์บ. เคมี. ซ. 2550, 72, 921–939. [ข้ามอ้างอิง]
12. พินเฮโร PF; Goncalon, CJ การวิเคราะห์โครงสร้างของฟลาโวนอยด์และสารประกอบที่เกี่ยวข้อง—การทบทวนการใช้งานทางสเปกโตรสโกปี ในไฟโตเคมิคอล—มุมมองระดับโลกเกี่ยวกับบทบาทของพวกเขาในด้านโภชนาการและสุขภาพ; อินเทค: ลอนดอน สหราชอาณาจักร 2555
13. โล ปิปาโร อี.; Scheib, H.; Frei, N.; วิลเลียมสัน, จี.; Grigorov, ม.; Chou, CJฟลาโวนอยด์สำหรับควบคุมการย่อยแป้ง: ข้อกำหนดโครงสร้างสำหรับการยับยั้งมนุษย์ -อะไมเลส เจ เมด เคมี. 2551, 51, 3555–3561. [ข้ามอ้างอิง]
14. เสี่ยว เจ.; นิ, X.; ไก่, จี.; Chen, X. การทบทวนความสัมพันธ์ระหว่างโครงสร้างกับกิจกรรมของอาหารสารโพลีฟีนอลยับยั้ง-อะไมเลส คริติคอล รายได้วิทยาศาสตร์อาหาร. Nutr. 2013, 53, 497–506. [CrossRef] [PubMed]
15. หัว, เอฟ.; โจว, พี.; วู HY; ชู, GX; เซีย, ZW; Bao, GH การยับยั้ง -glucosidase และ -amylase โดย flavonoid glycosides จากชา Lu'an GuaPian: กลไกการเทียบท่าและปฏิสัมพันธ์ระดับโมเลกุล ฟังก์ชั่นอาหาร 2018, 9, 4173–4183. [CrossRef] [PubMed]
16. วินัยกัม, ร.; Xu, B. คุณสมบัติต้านเบาหวานของฟลาโวนอยด์ในอาหาร: การทบทวนกลไกของเซลล์ Nutr. เมตาบ 2015, 12, 1–20. [CrossRef] [PubMed] 17. Ghorbani, A. กลไกของฤทธิ์ต้านเบาหวานของฟลาโวนอยด์รูติน ไบโอเมด เภสัช. 2017, 96, 305–312. [CrossRef] [PubMed]