ผลกระทบที่แปลกใหม่ของการบำบัดแบบผสมผสานผ่านการยับยั้งแคสเปส-1/แกสเดอร์มิน ดี อินดัคชัน-ไพรอพโทซิสในโรคลูปัส

สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม:ali.ma@wecistanche.com

Heng Cao, Junyu Liang, Jing Liu, Ye He, Yini Ke, Yiduo Sun, Song Jiang และ Jin Lin

บทคัดย่อ

วัตถุประสงค์: การบำบัดแบบผสมผสานกับ mycophenolate mofetil, Tacrolimus และ steroids มีประสิทธิภาพในการทำให้หายขาดโดยสมบูรณ์ในโรคไตอักเสบลูปัส(แอลเอ็น). การบำบัดแบบผสมผสาน caspase ที่มีการลดระดับที่ไม่ซ้ำกัน-1 เมื่อเปรียบเทียบกับการบำบัดแบบเดี่ยว ซึ่งสามารถแยกแกสเดอร์มิน ดี (GSDMD) และเพิ่งถูกระบุว่าเป็นpyroptosisเพชฌฆาต ดังนั้นเราจึงตรวจสอบว่าการรักษาแบบผสมผสานช่วยยับยั้ง caspase-1/GSDMD-mediated ได้หรือไม่pyroptosisใน LN (โรคไตอักเสบลูปัส).

Click to cistanche deserticola ma สำหรับโรคไตอักเสบ

วิธีการ: ตรวจพบการแสดงออกและการกระตุ้น GSDMD ในตัวอย่างไตของมนุษย์และหนูเมาส์ด้วย LN (โรคไตอักเสบลูปัส) โดยใช้การย้อมสีอิมมูโนฮิสโตเคมีและอิมมูโนบล็อตติง โพโดไซต์ปฐมภูมิที่แยกได้จากหนู MRLlpr ถูกบ่มด้วย LPS บวก ATP และบำบัดก่อนด้วยการบำบัดเดี่ยวหรือการรักษาแบบผสมผสาน การยับยั้งของ caspase-1/GSDMD-inducedpyroptosisโดยการรักษาแบบผสมผสานได้รับการประเมินในหนูเมาส์ MRLlpr และตัวอย่างของมนุษย์ ฉันได้รับการตรวจสอบโดยใช้ชุด FAM caspase-1 และโฟลว์ไซโตเมทรี ความสัมพันธ์ระหว่างpyroptosisในเลือดส่วนปลายและดัชนีกิจกรรมโรคลูปัส erythematosus (SLEDAl)

ผลลัพธ์: ตัวอย่างเนื้อเยื่อไตจาก LN (โรคไตอักเสบลูปัส) ผู้ป่วยและหนูทดลองแสดงระดับการแสดงออกและความแตกแยกของ GSDMD ที่เพิ่มขึ้นอย่างมาก ในการเพาะเลี้ยง podocytes การรักษาแบบผสมผสานยับยั้งการกระตุ้น NLRP3 และ caspase-1 อย่างมีนัยสำคัญ และลดระดับ GSDMD N-terminal การบำบัดแบบผสมผสานยับยั้งการลุกลามของโรคผ่านการยับยั้ง caspase-1/GSDMD-mediatedpyroptosisทั้งในมนุษย์และหนู MRL/LPR แคสเปส-1/เลขเซลล์บวก PI ในเลือดส่วนปลายมีความสัมพันธ์เชิงบวกกับ SLE-DAl แอลเอ็น (โรคไตอักเสบลูปัส) ผู้ป่วยที่มีอาการทุเลาอย่างสมบูรณ์และทุเลาบางส่วนมีแคสเปสลดลงอย่างน่าทึ่ง-1/จำนวนเซลล์ที่เป็นบวกของ PI เมื่อเทียบกับการตรวจวัดพื้นฐาน Ac-FLTD-CMK ซึ่งเป็นตัวยับยั้งที่ได้มาจาก GSDMD ป้องกันการพัฒนาของ LN (โรคไตอักเสบลูปัส).

สรุป: การบำบัดแบบผสมผสานระงับ caspase-1/GSDMD-mediatedpyroptosisในหลอดทดลองและในร่างกายและลดความก้าวหน้าของโรค

คำสำคัญ:โรคไตอักเสบลูปัส, pyroptosis, แคสเปส-1, แกสเดอร์มินดี, การบำบัด

การบำบัดรักษาสำหรับpyroptosis

การแนะนำ

โรคไตอักเสบลูปัส(LN) คือการอักเสบของไตที่เกิดขึ้นจากโรคภูมิต้านตนเอง (autoimmune disease) systemic lupus erythematosus(SLE).LN (โรคไตอักเสบลูปัส) เป็นอาการสำคัญในผู้ป่วยโรคเอสแอลอี ผู้ป่วยประมาณ 60 เปอร์เซ็นต์มีอาการนี้ โดยประมาณ 20 เปอร์เซ็นต์จะเป็นโรคไตระยะสุดท้าย (ESRD) (1) การบำบัดแบบผสมผสานกับ mycophenolate mofetil (MMF), calcineurin inhibitors (CNI) และสเตียรอยด์ก่อให้เกิดผลเสริมและยังลดความเป็นพิษ (2) การบำบัดนี้แนะนำเป็นการรักษาเบื้องต้นสำหรับ LN (โรคไตอักเสบลูปัส) และให้ประสิทธิภาพที่ดีขึ้นและการบรรเทาอาการที่สมบูรณ์มากขึ้นเมื่อเปรียบเทียบกับไซโคลฟอสฟาไมด์ในหลอดเลือดดำ (IVCY) และสเตียรอยด์ (3-5)

เพื่อตรวจสอบกลไกระดับโมเลกุลและระดับเซลล์ของการรักษาแบบผสมผสาน การวิเคราะห์การถอดรหัสแบบครอบคลุมถูกนำมาใช้ในแบบจำลองของหนูของ LN (โรคไตอักเสบลูปัส). หนูเมาส์ MRL/LPR ได้รับ MMF, tacrolimus หรือ prednisone เพียงอย่างเดียวเป็นการบำบัดด้วยยาเดี่ยวหรือการรวมกันของยาสามตัว โปรไฟล์ของการแสดงออกของยีนในไตของหนูที่มี LN (โรคไตอักเสบลูปัส)เผยให้เห็นกลไกที่เป็นไปได้ที่อาจอธิบายถึงผลเสริมและเสริมฤทธิ์กันของการรักษาแบบผสมผสานเมื่อเปรียบเทียบกับการรักษาด้วยยาเดี่ยว ยีนปรับลดหนึ่งใน 45 ยีนที่ถูกมอดูเลตเฉพาะโดยการรักษาแบบผสมผสานคือแคสเปส-1 (6) มันถูกกระตุ้นโดย inflammasomes ซึ่งเป็น multiprotein oligomers ที่ประกอบด้วย NLRP3, pro-caspase-1 และโปรตีนคล้ายจุดที่เกี่ยวข้องกับการตายของเซลล์ (ASC) ที่มีโดเมน caspase affinity แบบบูรณาการ อินแฟลมมาโซม NLRP3/ASC/caspase-1 ได้รับการยอมรับว่าเป็นปัจจัยสำคัญในการก่อโรคของ LN (โรคไตอักเสบลูปัส). Inflammasome NLRP3 กระตุ้นความผิดปกติของการอักเสบอัตโนมัติโดยกระตุ้น caspase-1 เริ่มต้นการสร้างไซโตไคน์ที่ก่อให้เกิดการอักเสบ เช่น IL-1 ซึ่งเป็นที่ทราบกันดีว่ากระตุ้นความผิดปกติของ podocyte ใน LN(7-9)

แคสเปสที่ใช้งานอยู่-1 แยกแกสเดอร์มิน D(GSDMD) ภายในการเชื่อมโยงของโดเมนเทอร์มินัล N และ C จากนั้น โดเมนปลาย N ช่วยสร้างรูพรุนในเยื่อหุ้มเซลล์ กระตุ้นเซลล์pyroptosisและไซโตไคน์ IL-1 และ IL-18 การผลิต(10) การศึกษาที่เกิดขึ้นใหม่แสดงให้เห็นว่า GSDMD-mediatedpyroptosisมีส่วนร่วมในการพัฒนาของโรคต่างๆ รวมถึงโรคไข้สมองอักเสบจากภูมิต้านตนเอง (11) โรคปลอกประสาทเสื่อมแข็ง (12) โรคตับอักเสบจากแอลกอฮอล์ (13) และโรคลำไส้อักเสบ (14) นอกจากนี้ การยับยั้งยีนหรือทางเภสัชวิทยาของแคสเปส-1/GSDMD ได้รับการพิสูจน์แล้วว่าสามารถปกป้องไตจากการบาดเจ็บในรูปแบบ murine ของโรคไตจากเบาหวาน (15, 16) และหลังจากได้รับบาดเจ็บที่ไตเฉียบพลัน (17-19) อย่างไรก็ตาม,pyroptosisใน LN (โรคไตอักเสบลูปัส)ยังคงกำหนดได้ไม่ดีจนถึงวันที่ (20) เราตั้งสมมติฐานว่าการรักษาแบบผสมผสานให้ผลดีใน LN (โรคไตอักเสบลูปัส)) โดยการยับยั้งpyroptosisเกิดจากแคสเปส-1/GSDMD

ในการศึกษานี้ ได้มีการตรวจสอบการกระตุ้นของ caspase-1 และ GSDMD ในเนื้อเยื่อไต เช่นเดียวกับผลของการรักษาแบบผสมผสานต่อ caspase-1/GSDMD-dependentpyroptosisการยับยั้งในหนู MRL/LPR และผู้ป่วย LN (โรคไตอักเสบลูปัส). ความสัมพันธ์ที่อาจเกิดขึ้นของpyroptosisด้วยดัชนีกิจกรรมของโรค SLE (SLEDAI) และการตอบสนองต่อการรักษายังได้รับการประเมินอีกด้วย

การรักษาpyroptosis

วัสดุและวิธีการ

ศึกษาประชากร

กลุ่มที่ศึกษาประกอบด้วยผู้ป่วยที่ได้รับการวินิจฉัยโดยการตรวจชิ้นเนื้อด้วย LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ) น้อยกว่าหรือเท่ากับ 6 เดือนก่อนการลงทะเบียน ช่วงอายุของผู้ป่วยคือ 18-65 ปี และทั้งหมดเป็นไปตามเกณฑ์การจำแนกประเภทของ American College of Rheumatology for SLE (2l, 22) และ International Society of Nephrology/Renal Pathology Society (2003) ผู้ป่วยได้รับคัดเลือกจากคณะแพทยศาสตร์มหาวิทยาลัยเจ้อเจียงและคณะแพทยศาสตร์มหาวิทยาลัยหนานจิงซึ่งมีโปรตีนในปัสสาวะ (มากกว่าหรือเท่ากับ 1.5 กรัม/วัน) และความเข้มข้นของครีเอตินีนในเลือดน้อยกว่าหรือเท่ากับ 265.2 umol/L เกณฑ์การยกเว้น ได้แก่ ผู้ป่วยเคยได้รับการรักษาด้วยเมทิลเพรดนิโซโลนในปริมาณสูง ชีววิทยา (กำหนดเป้าหมายโมเลกุลที่ทำให้เกิดโรคเฉพาะ) หรือการบำบัดแบบผสมผสาน plasmapheresis ปัจจุบันหรือการรักษาด้วยโกลบูลินทางหลอดเลือดดำภายใน 12 สัปดาห์ของการตรวจคัดกรอง การทำงานของตับผิดปกติ การติดเชื้อที่ใช้งานอยู่ในปัจจุบัน และเนื้องอกร้ายภายใน 4 สัปดาห์ของการเริ่มต้นการศึกษา แอลเอ็น (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ) ผู้ป่วยได้รับการรักษาด้วยชีพจรด้วยเมทิลเพรดนิโซโลนเป็นเวลา 3 วันที่ขนาดยา 0.5 กรัม/วัน เมื่อการรักษาด้วยชีพจรด้วยเมทิลเพรดนิโซโลนเสร็จสิ้น กลุ่มที่รวมกันกับเพรดนิโซน (0.6 มก./กก./วัน), MMF (0.5 ก., สองโดส/วัน) และทาโครลิมัส(2 มก., สองโดส/วัน) ให้เป็นเวลาทั้งหมด 4 สัปดาห์ จากนั้นให้ลดขนาดยาเพรดนิโซนซึ่งยังคงรวมกับ MMF(0.5 กรัม สองโดส/วัน) และทาโครลิมัส(2 มก. สองขนาด/วัน) ลง 5 มก./วัน ทุก 2 สัปดาห์จนกระทั่ง ได้รับขนาดยาคงสภาพ 10 มก./วัน (4) Complete remission(CR) ถูกนำมาเป็น 24-h ความเข้มข้นของโปรตีนในปัสสาวะ น้อยกว่าหรือเท่ากับ 0.4 g ไม่มีตะกอนในปัสสาวะ ความเข้มข้นของ albumin ในซีรัม มากกว่าหรือเท่ากับ 35 g/L และ creatinine ปกติ (23) การให้อภัยบางส่วน (PR) ถูกนำมาเป็นการลดมากกว่าหรือเท่ากับร้อยละ 50 ในความเข้มข้นของโปรตีนในปัสสาวะ 24- ชั่วโมงเป็นน้อยกว่าหรือเท่ากับ 3.5 กรัมความเข้มข้นของอัลบูมินในซีรัมมากกว่าหรือเท่ากับ 30 กรัม L และความเข้มข้นของ creatinine ในซีรัมในเลือดปกติหรือน้อยกว่าหรือเท่ากับ 25 เปอร์เซ็นต์จากการตรวจวัดพื้นฐาน คณะกรรมการตรวจสอบสถาบันของเราอนุมัติการศึกษา (หมายเลข IIT20200410A) และผู้ป่วยทุกรายได้รับความยินยอมเป็นลายลักษณ์อักษรก่อนลงทะเบียน

โมเดลสัตว์

หนู MRL/emoji-FasPr (MRL/LPR) เพศเมียได้รับการจัดหาโดย SLAC Laboratory Animal Co.Ltd (เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน) หนูทั้งหมดได้รับการสุ่มแบ่งโดยใช้เครื่องกำเนิดตัวเลขสุ่ม หนู 5 ตัวในแต่ละกลุ่มและแต่ละกรง . พวกเขาได้รับการรักษาเมื่ออายุ 8 สัปดาห์โดยรับประทาน โดยใช้ยาทาโครลิมัสร่วมกัน 0.5 มก./กก. (MCE HY-13756}), 50 มก./กก. MMF(MCE HY-B0199) และ 1 มก./ กก. เพรดนิโซน (MCE HY-B0214) หรือยานพาหนะทุกวันเป็นเวลารวม 8 สัปดาห์ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (6) Ac-FLTD-CMK ถูกสังเคราะห์โดย MCE และ 10 มก./กก. ถูกฉีด ip ทุกวัน การรักษาทั้งหมดถูกปิดบังให้กับผู้เข้าร่วมที่รับผิดชอบในการตรวจหาต่อไปนี้ อัตราส่วนอัลบูมินต่อครีเอตินินในปัสสาวะ (UACR) ถูกกำหนดโดยใช้ Albuwell M และ Creatinine Companion (Excell, Phil, US) ตัวอย่างไตได้รับการแก้ไขในพาราฟอร์มัลดีไฮด์ร้อยละ 4 ก่อนการย้อมสีทางเนื้อเยื่อวิทยาและอิมมูโนฮิสโตเคมีและการแยกเยื่อหุ้มไตสำหรับการวิเคราะห์อิมมูโนโบล็อต การใช้หนูได้รับการอนุมัติโดยคณะกรรมการการดูแลและการใช้สัตว์ประจำสถาบันของเรา (หมายเลข2019-883)

การแยก Glomeruli ของหนูและการเพาะเลี้ยง Podocyte

Glomeruli ถูกทำให้บริสุทธิ์จากไตของหนูเมาส์ C57 และ MRL/LPR เพศเมีย 12-สัปดาห์ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้า (24) หนูที่ดมยาสลบถูกผสมด้วยลูกปัดแม่เหล็กที่อุ่นที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส นำไตออกและบดน้ำแข็งให้เป็น 1 มม.³ จากนั้นเนื้อเยื่อไตถูกย่อยที่ 37 องศาด้วยคอลลาเจนเนส 1 มก./มล. และ 100 U/มล. DNase I เป็นเวลา 30 นาที จากนั้นกรองสองครั้งด้วยตัวกรองเซลล์ Falcon 100-μm (431752, BD) หลังจากล้างหลายครั้งด้วยสารละลาย HBSS 4 องศา (H1025, Solarbio) และการหมุนเหวี่ยงอย่างอ่อนโยนที่ 200 กรัม เป็นเวลา 5 นาที รวบรวมเม็ดบีดโกลเมอรูลีโดยใช้ขาตั้งแม่เหล็ก (HY-K0200, MCE) และล้างด้วยสารละลาย HBSS สามครั้ง โกลเมอรูไลที่แยกได้เพาะเลี้ยงบนจานเพาะเลี้ยงคอลลาเจนชนิดที่ 1 (C3867, Sigma-Aldrich) ที่เคลือบด้วยคาร์บอนไดออกไซด์ 5 เปอร์เซ็นต์ ที่ 37 องศาตามวิธีการที่เจฟฟรีย์บรรยายไว้ (25) ทางผ่าน 2 podocytes ถูกใช้ในการทดลองในหลอดทดลองไพรอพโทซิสการเหนี่ยวนำ ความเป็นพิษต่อเซลล์ และ IL-1 การตรวจหาสารคัดหลั่ง

Podocytes จากหนูเมาส์ MRL/LPR ถูกเตรียมด้วย LPS 1 มก./มล. (tell-pb5lps, In InvivoGen) ที่ได้รับการแก้ไขใน Opti-MEM เป็นเวลา 4 ชั่วโมง จากนั้นตามด้วยการกระตุ้น ATP(tlrlatpl, In Vivo ยีน) 5 มิลลิโมลาร์ Podocytes จากหนูเมาส์ C57 ถูกตัดออกจากกลุ่มควบคุมปกติ การบำบัดด้วยยาทาโครลิมัส (10μM), MMF (luM) และเพรดนิโซน (10μM) หรือการรักษาแบบผสมผสานถูกบ่มล่วงหน้าด้วยเซลล์เป็นเวลา 1 ชั่วโมงก่อนไพรเมอร์ LPS ความเป็นพิษต่อเซลล์หลังการกระตุ้นถูกกำหนดโดยใช้ชุดตรวจหาความเป็นพิษต่อเซลล์ (11644793001, Roche) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ส่วนลอยเหนือตะกอนหลังการกระตุ้นถูกรวบรวมและวัดโดยใช้ IL-1 mouse ELISA Kit(BMS6002, Invitrogen) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต

แอนติบอดีและรีเอเจนต์

Caspase-1(sc-398715, Santa Cruz Biotech), GSDMDC1 (sc-81868, Santa Cruz Biotech)ได้รับการประเมินตามคำแนะนำของผู้ผลิตไพรอพโทซิสในเลือดส่วนปลายถูกวัดโดยใช้ FAM FLICAMCaspase-1 Kit(Bio-Rad, USA) โดยโฟลว์ไซโตเมทรี

การวิเคราะห์ทางสถิติ

การวิเคราะห์ทางสถิติดำเนินการโดยใช้ GraphPad Prism(vers. 8.0) และข้อมูลจะได้รับเป็นค่าเฉลี่ย ± SD การเปรียบเทียบสองกลุ่มดำเนินการโดยใช้การทดสอบ t-test ของนักเรียนและการวิเคราะห์สหสัมพันธ์โดยใช้สหสัมพันธ์ของเพียร์สัน p . สองหาง<0.05 was="" considered="" statistically="">

การรักษาpyroptosis ในโรคไตอักเสบลูปัส (LN)

ผลลัพธ์

GSDMD-ไกล่เกลี่ยไพรอพโทซิสถูกกระตุ้นในไตที่ได้รับผลกระทบจาก LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ)

เพื่อตรวจสอบว่า GSDMD มีส่วนทำให้เกิดโรคของ LN หรือไม่ (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ) ก่อนอื่นเราทดสอบระดับการแสดงออกของโปรตีนของ GSDMD ในตัวอย่างไตที่นำมาจาก LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ) ผู้ป่วย. การวิเคราะห์ทางอิมมูโนฮิสโตเคมีพบว่าระดับการแสดงออกของ GSDMD เพิ่มขึ้นอย่างน่าทึ่งในตัวอย่างชิ้นเนื้อไตที่นำมาจาก LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ) ผู้ป่วยที่เป็น type IV, V, I plus Vand IV plus V และเปรียบเทียบกับคนที่มีสุขภาพดี GSDMD ถูกแสดงออกอย่างทั่วถึงในพอดไซต์ไต เซลล์รูปท่อ และเซลล์คั่นระหว่างหน้าที่ถูกแทรกซึมใน LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ) ผู้ป่วย. พื้นที่ที่มีเครื่องหมายบวก (ลูกศรสีแดง) และการย้อมสีเชิงลบ (ลูกศรสีดำ) ถูกขยาย (รูปที่ 1A) จากนั้นจึงประมาณเปอร์เซ็นต์ของพื้นที่ที่เป็นบวก GSDMD ในไต (รูปที่ 1B) พบผลลัพธ์ที่คล้ายคลึงกันในไตของหนู MRL/LPR และกลุ่มควบคุมแบบ wild-type การวิเคราะห์อิมมูโนบล็อตติงยืนยันการแสดงออกและความแตกแยกของ GSDMD ที่เพิ่มขึ้นอย่างมากในตัวอย่างไตของหนูเมาส์ MRL/LPR (รูปที่ 1C) GSDMD ใน glomerular podocytes, เซลล์ tubular และเซลล์คั่นระหว่างหน้าที่ถูกแทรกซึมถูกยกระดับในหนูเมาส์ MRL/LPR เมื่อเปรียบเทียบกับหนูเมาส์ควบคุม (รูปที่ 1D) ข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า GSDMD-mediated ถูกกระตุ้นในเนื้อเยื่อไตที่ได้รับผลกระทบจาก LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ).

รูปที่ 1|GSDMD สูงขึ้นอย่างมากและแยกออกในไตของผู้ป่วยและหนูที่ได้รับผลกระทบจาก LN (lupus nephritis)

(A) การย้อมสีภูมิคุ้มกันของ GSDMD ในตัวอย่างไตที่นำมาจากอาสาสมัครที่มีสุขภาพดีและ LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ) ผู้ป่วยบวก (ลูกศรสีแดง) และย้อมสีเชิงลบ (ลูกศรสีดำ) ขยายใหญ่ขึ้น

(B) การหาปริมาณของพื้นที่บวก GSDMD แสดงอยู่ในประเภท III บวก V, IV, IV บวก V, V LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ) ผู้ป่วยและวิชาที่มีสุขภาพดี

(C) การวิเคราะห์อิมมูโนโบลต์ของโดเมนปลาย N แบบแยกส่วนและโดเมนปลาย C GSDMD ในเยื่อหุ้มสมองของไตจากกลุ่มควบคุมสามคู่และหนูเมาส์ MRL/LPR

(D) การย้อมสีภูมิคุ้มกันของ GSDMD ในตัวอย่างไตที่นำมาจากกลุ่มควบคุมและหนู MRL/LPR

*p < {{0}}.05,="" **p="">< 0.01="" แอลเอ็น="">โรคลูปัสโรคไตอักเสบ), โรคลูปัสโรคไตอักเสบ; FL เต็มความยาว; NT, โดเมน N-terminal; CT, โดเมน C-terminal

การรักษาแบบผสมผสานยับยั้ง GSDMD-Mediatedไพรอพโทซิสการเปิดใช้งานใน Podocytes หลักในหลอดทดลอง

เพื่อตรวจสอบผลการยับยั้งของการรักษาแบบผสมผสานกับpyroptosisเราใช้วิธีการกระตุ้น LPS บวก ATP เพื่อกระตุ้นpyroptosisใน podocytes จากหนู MRL/LPR โดยใช้ podocytes จากหนู C57 ชนิด wild-type เป็นกลุ่มควบคุมปกติ Podocytes จากหนูเมาส์ MRLlpr ถูกเตรียมไว้เป็นเวลา 4 ชั่วโมงด้วย LPS และต่อมาได้รับการรักษาเป็นเวลา 4 ชั่วโมงด้วย ATP ซึ่งเป็นสิ่งเร้าที่ใช้กันทั่วไปสำหรับ GSDMD-mediatedpyroptosisการเปิดใช้งาน(26). เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุมปกติ หลังจากนั้น podocytes จะแสดงลักษณะทางสัณฐานวิทยาของ pyroptotic เช่น การบวมของเซลล์และการเดือดปุด ๆ การปรับสภาพด้วยการรักษาแบบผสมผสานทำให้ลักษณะทางสัณฐานวิทยาของไพรอพโทติกดีขึ้นอย่างมีนัยสำคัญและความเป็นพิษต่อเซลล์ (รูปที่ 2A) LPS บวกกับ ATP ที่เหนี่ยวนำให้เกิดความเป็นพิษต่อเซลล์ของพอดไซต์ อย่างเปรียบเทียบ การรักษาแบบผสมผสานลดความเป็นพิษต่อเซลล์และการคัดหลั่ง IL-1 ในส่วนลอยเหนือตะกอนที่เหนี่ยวนำโดยการกระตุ้น LPS ร่วมกับ ATP (รูปที่ 2B, C) อย่างมีนัยสำคัญ เพื่อตรวจสอบเพิ่มเติมการเปิดใช้งาน GSDMD-mediatedpyroptosisเราวิเคราะห์ Canonical inflammasomes และการเปิดใช้งาน GSDMD โดยใช้ immunoblotting สอดคล้องกับการเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาของไพโรโทติกและความเป็นพิษต่อเซลล์ LPS บวก ATP กระตุ้น NLRP3, แคสเปส-1อย่างมีนัยสำคัญ และ GSDMD ที่แยกออกในพอดไซต์ (รูปที่ 2D) การรักษาแบบผสมผสานยับยั้งการกระตุ้น NLRP3 และ caspase-1 อย่างเห็นได้ชัด และลดระดับของเทอร์มินัล GSDMD N โดยเฉพาะอย่างยิ่ง การบำบัดเดี่ยวด้วยทาโครลิมัส, MMF หรือเพรดนิโซนที่กดทับ LPS บวกกับความเป็นพิษต่อเซลล์ของเซลล์ที่ถูกกระตุ้นด้วย ATP และการคัดหลั่ง L-1 แต่การรักษาแบบผสมผสานแสดงผลการยับยั้งที่มีนัยสำคัญต่อแคสเปส-1และ GSDMD ผลลัพธ์เหล่านี้ให้หลักฐานที่สนับสนุนมุมมองที่ว่าการรักษาแบบผสมผสานทำให้ GSDMD-mediated ดีขึ้นpyroptosisโดยระงับการเปิดใช้งาน NLRP3 และ caspase-1

รูปที่ 2|การรักษาแบบผสมผสานช่วยเยียวยา pyroptosis ใน podocytes ในหลอดทดลอง

(A) ลักษณะเฉพาะของไพรอปโทติกถูกแสดงในโพโดไซต์ปฐมภูมิที่เพาะเลี้ยงหลังจากการบ่มด้วย LPS บวก ATP และบำบัดก่อนด้วยการบำบัดแบบผสมผสาน ลูกศรระบุเซลล์ที่มีลักษณะเหมือนไพรอปโทติก

(B) ส่วนลอยเหนือตะกอนจากเซลล์ที่ท้าทายถูกวิเคราะห์หาการตายของเซลล์ ตามที่วัดได้จากการคัดหลั่งของ LDH

(C) ส่วนลอยเหนือตะกอนจากเซลล์ที่ท้าทายถูกวิเคราะห์สำหรับการปลดปล่อย IL-1b

(D) การวิเคราะห์อิมมูโนโบล็อตติงของ NLRP3, caspase-1, GSDMD-NT และการแสดงออกของ ASC หลังจากทาโครลิมัส, MMF, เพรดนิโซน หรือการรักษาแบบผสมผสานหลังการกระตุ้นด้วยการอักเสบของ NLRP3

*p < {{0}}.05;="" **p="">< 0.01;="" ***p="">< 0.001;="" ****p="">< 0.0001.="" ldh,="">

DSMO, ไดเมทิลซัลฟอกไซด์, FK506, ทาโครลิมัส; MMF, ไมโคฟีโนเลต โมเฟทิล; PNS, เพรดนิโซน; COM, การบำบัดแบบผสมผสาน; ASC, โปรตีนคล้ายจุดที่เกี่ยวข้องกับการตายของเซลล์อะพอพโทซิส

Caspase ระงับการรักษาแบบผสมผสาน-1/GSDMD-Inducedไพรอพโทซิสในหนู MRL/LPR

หนูเมาส์ MRL/LPR อายุแปดสัปดาห์ได้รับการรวมกันของ MMF, ทาโครลิมัส และเพรดนิโซนหรือกลุ่มควบคุมด้วยพาหะนำยา สอดคล้องกับการศึกษาก่อนหน้านี้ (6) หลังการรักษาเป็นเวลา 8 สัปดาห์ ไม่พบความแตกต่างในอัตราการตายหรือน้ำหนักตัวระหว่างกระสายยาและกลุ่มการรักษาแบบผสมผสาน ในทางตรงกันข้ามกับกลุ่มกระสายยา การรักษาแบบผสมผสานมีประสิทธิผลอย่างมากในการป้องกันโปรตีนในปัสสาวะ โรคหลอดเลือดตีบและการแทรกซึมของเซลล์ภูมิคุ้มกันคั่นระหว่างไตในไต (รูปที่ 1)

ต่อไป เราตรวจสอบระดับการแสดงออกของแคสเปส-1และ GSDMD ในการรักษาแบบผสมผสานและกลุ่มควบคุมด้วยกระสายยา การวิเคราะห์ทางอิมมูโนฮิสโตเคมีพบว่า caspase คั่นระหว่างไตและไต-1 และการแสดงออกของ GSDMD ลดลงอย่างเห็นได้ชัดในกลุ่มการรักษาแบบผสมผสาน (รูปที่ 3A) การวิเคราะห์ immunoblotting ยังพบการแสดงออกและความแตกแยกของ caspase-1 และ GSDMD ที่ลดลงในเยื่อหุ้มไตของกลุ่มการรักษาแบบผสมผสาน (รูปที่ 3B) นอกจากนี้ แคสเปส-1/โพรพิเดียมไอโอไดด์ (PI) เซลล์บวกสองเท่าถูกนับโดยใช้โฟลว์ไซโตเมทรีและpyroptosisFAM Caspase-1ชุด ผลลัพธ์แสดงให้เห็นการลดลงอย่างเห็นได้ชัดในแคสเปส-1*/PI' หมายเลขเซลล์เม็ดเลือดส่วนปลายในหนูเมาส์ MRL/LPR ที่ได้รับการรักษาแบบผสมผสานเมื่อเปรียบเทียบกับหนูเมาส์ MRL/LPR ที่บำบัดด้วยกระสายยา (รูปที่ 3C,D) นอกจากนี้ การรักษาแบบผสมผสานยังลดความเข้มข้นของซีรัม Ii ลงอย่างมีนัยสำคัญ (รูปที่ 3E) เราจึงสรุปได้ว่าการรักษาแบบผสมผสานยับยั้ง caspase-1/GSDMD-inducedpyroptosisในไตและเซลล์เม็ดเลือดของ LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ) หนู

รูปที่ 3|การบำบัดแบบผสมผสาน caspase ที่ลดทอน-1/ไพรอพโทซิสที่อาศัย GSDMD ในหนูเมาส์ MRL/LPR

(A) การย้อมสีอิมมูโนเคมีของ GSDMD และแคสเปส-1 ในตัวอย่างไตของหนูเมาส์ MRL/LPR เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมด้วยกระสายยา การแสดงออกของแคสเปส-1 และ GSDMD ถูกยับยั้งอย่างชัดเจนในกลุ่มบำบัดแบบผสมผสาน

(B) การวิเคราะห์อิมมูโนโบลต์ของ GSDMD และ caspase แบบเต็มความยาวและแบบผ่า-1ในตัวอย่างเยื่อหุ้มสมองของไตของหนูเมาส์ MRL/LPR การเปรียบเทียบผลลัพธ์จากกลุ่มการรักษาแบบกระสายยาและแบบผสมผสาน

(C) FACS ของแคสเปส-1/PI เซลล์ที่เป็นบวกสองเท่าในเลือดส่วนปลายจากหนูเมาส์ MRL/LPR ที่ได้รับหรือไม่ได้รับการบำบัดแบบผสมผสาน

(D) การหาปริมาณของ caspase-1/PI double-positive cells ในเลือดส่วนปลายของ MRL/LPR หนูที่ได้รับหรือไม่ได้รับการบำบัดแบบผสมผสาน

(E) การหาปริมาณของความเข้มข้น IL ในซีรัม{{0}}b ในหนูเมาส์ MRL/LPR ที่ให้หรือไม่ได้รับการบำบัดแบบผสมผสาน ####P < 0.0001.="" facs="" การคัดแยกเซลล์ที่กระตุ้นการเรืองแสง="" ct,="">

การบำบัดแบบผสมระงับ Caspase-1/GSDMD-Inducedไพรอพโทซิสใน LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ) ผู้ป่วย

ระหว่างมกราคม 2020 ถึงมิถุนายน 2020,47 ผู้ป่วย LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ) ถูกลงทะเบียนและ 43 เสร็จสิ้น 24-สัปดาห์ของการรักษาแบบผสมผสาน โรคพื้นฐานและข้อมูลประชากรของกลุ่มประชากรที่ลงทะเบียนแสดงอยู่ในตารางเสริมที่ 1 การหาปริมาณของแคสเปส-1/โพรพิเดียมไอโอไดด์ (เซลล์ PI double-positive ดำเนินการในผู้ป่วยที่มี LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ) ประเภท III, IV, V, III บวก V, IV บวก V และในการควบคุมที่ดีต่อสุขภาพโดยใช้apyroptosisFAM Caspase-1 kit และโฟลว์ไซโตเมทรี เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุมที่มีสุขภาพดี จำนวนเซลล์แคสเปส-1/PI ที่เป็นบวกสองเท่าในเลือดส่วนปลายเพิ่มขึ้น (รูปที่ 4A, B) นอกจากนี้เรายังตรวจสอบเซลล์แคสเปส-1/PI double-positive หลังจาก 24-สัปดาห์ของการรักษาและที่การตรวจวัดพื้นฐาน หลังจาก 24-สัปดาห์ของการรักษาแบบเหนี่ยวนำ อุบัติการณ์ของ CR และ PR เท่ากับ 39.5 เปอร์เซ็นต์ (17/43) และ 32.6 เปอร์เซ็นต์ (14/43) ตามลำดับ หมายเลขเซลล์บวกสองเท่าของแคสเปส-1/PI ในเลือดส่วนปลายของผู้ป่วย CR และ PR ลดลงอย่างน่าทึ่งเมื่อเทียบกับการตรวจวัดพื้นฐาน (รูปที่ 4C) นอกจากนี้เรายังระบุความสัมพันธ์ระหว่าง caspase-1 ที่เหนี่ยวนำpyroptosisและสเลดา; ข้อมูลแสดงให้เห็นอย่างชัดเจนว่าอัตราส่วนแคสเปส-1/PI บวกในเลือดส่วนปลายมีความสัมพันธ์เชิงบวกกับ SLEDAI (รูปที่ 4D) Ac-FLTD-CMK สารยับยั้งที่ได้รับจาก GSDMD ป้องกันการพัฒนาของ LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ).

รูปที่ 4|การบำบัดแบบผสมผสาน attenuated caspase-1-mediated pyroptosis ในผู้ป่วย LN (lupus nephritis)

(A) FACS ของแคสเปส-1/PI เซลล์ที่เป็นบวกสองเท่าในเลือดส่วนปลายของ LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ) ผู้ป่วยที่รักษาด้วยหรือไม่มีการรักษาแบบผสมผสาน

(B) การหาปริมาณของแคสเปส-1/PI เซลล์ที่เป็นบวกสองเท่าในเลือดส่วนปลายของชนิด III, IV, V, III บวก V และ IV บวก V LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ) ผู้ป่วยและวิชาที่มีสุขภาพดี

(C) การหาปริมาณของแคสเปส-1/PI เซลล์บวกสองเท่าในเลือดส่วนปลายของ LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ) ผู้ป่วยที่การตรวจวัดพื้นฐาน, CR, PR และการไม่บรรเทาอาการหลังการรักษาร่วมกัน

(D) การวิเคราะห์สหสัมพันธ์ของอัตราส่วนเซลล์บวกสองเท่า-1/PI กับ SLE-DAI

**p < 0.01.="" facs="" การคัดแยกเซลล์ที่กระตุ้นการเรืองแสง="" แอลเอ็น="">โรคลูปัสโรคไตอักเสบ), โรคลูปัสโรคไตอักเสบ; CR การให้อภัยที่สมบูรณ์; PR, การให้อภัยบางส่วน; SLE-DAI ดัชนีกิจกรรมโรคลูปัส erythematosus

การศึกษาเมื่อเร็วๆ นี้พบว่า GSDMDhmice พัฒนาการสะสมของ C3 และ IgG ของไต อาการบาดเจ็บที่ไตรุนแรงขึ้น และอัตราการตายที่เพิ่มขึ้นในรูปแบบ SLE ที่เกิดจาก imiquimod 17 เพื่อชี้แจงบทบาทของ GSDMD ใน LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ), หนูเมาส์ MRL/LPR ถูกบำบัดด้วย Ac-FLTD-CMK21 โดยเริ่มที่ 8-สัปดาห์เก่า, โดยที่กระสายยาเป็นตัวควบคุม หลังจาก 8-สัปดาห์ของการรักษา ไม่พบความแตกต่างในการตายหรือน้ำหนักตัวระหว่างกระสายยาและกลุ่มที่บำบัดด้วย Ac-FLTD-CMK เมื่อเทียบกับหนูควบคุมด้วยกระสายยา หนูเมาส์ MRL/LPR ที่บำบัดด้วย Ac-FLTD-CMK มีอัตราส่วนอัลบูมิน-ครีเอตินีนในปัสสาวะที่ต่ำกว่า (รูปที่ 5A), ความเข้มข้นของครีเอตินีนในซีรัมที่ต่ำกว่า (รูปที่ 5B), ภาวะน้ำตาลในเลือดลดลง (รูปที่ 5C) และ CD3 การแทรกซึมของเซลล์ที่เป็นบวก CD4 และ CD68 (รูปที่ 5D) ผลลัพธ์ของอิมมูโนฮิสโตเคมีแสดงการแสดงออกที่ลดลงของ GSDMD(รูปที่ 5D) และซีรัม IL-1 ที่ยับยั้งการคัดหลั่งที่กำหนดโดย ELISA(รูปที่ 5E) โดยรวมแล้ว ข้อมูลชี้ให้เห็นว่า Ac-FLTD-CMK ยับยั้งpyroptosisในไตที่ได้รับผลกระทบจาก LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ).

รูปที่ 5|Ac-FLTD-CMK ซึ่งเป็นตัวยับยั้งที่ได้มาจาก GSDMD ป้องกันการพัฒนาของ LN (lupus nephritis)

(A) อัตราส่วนอัลบูมินต่อครีเอตินินในปัสสาวะคำนวณในหนูเมาส์ MRL/LPR ที่ให้หรือไม่ได้รับสารยับยั้ง GSDMD

(B) เซรั่มครีเอตินีนในหนูเมาส์ MRL/LPR ที่ได้รับหรือไม่ได้รับสารยับยั้ง GSDMD

(C) ภาพตัวแทนของสิ่งส่งตรวจไตที่ย้อมด้วยกรดธาตุ-ชิฟฟ์ (PAS) และเปอร์เซ็นต์ภาวะไตเสื่อม

(D) การย้อมสีอิมมูโนเคมีของ CD3, CD4, F4/80 และ GSDMD (E) การหาปริมาณของความเข้มข้น IL ในซีรัม-1bในหนูเมาส์ MRL/LPR ที่ให้หรือไม่ได้รับสารยับยั้ง GSDMD

ข้อมูลแสดงเป็นค่าเฉลี่ย± SEM #p < {{0}}.05,="" ##p=""><>

อภิปรายผล

การรักษาแบบผสมผสานเป็นกลยุทธ์ที่มีแนวโน้มดี เนื่องจาก CR ที่สูงขึ้นและอัตราการตอบสนองโดยรวม ระยะเวลาในการบรรเทาอาการสั้นลง และมีผลข้างเคียงน้อยลง จนถึงขณะนี้ ยังไม่ทราบกลไกระดับโมเลกุลพื้นฐานของการบำบัดแบบผสมผสาน เมื่อเร็วๆ นี้ Fu et al.(6)รักษาหนูทดลอง MRL/LPR ด้วยการบำบัดแบบเดี่ยวหรือการบำบัดแบบผสมผสาน และทำการวิเคราะห์การถอดรหัสแบบครอบคลุมในไตทั้งหมด ที่น่าสนใจคือ พวกเขาพบว่าการบำบัดแบบผสมผสานแต่ไม่ใช่การบำบัดแบบเดี่ยวที่ยับยั้งการแสดงออกของ caspase-1 อย่างเฉพาะเจาะจงและไม่ซ้ำกัน

NLRP3/ASC/caspase-1 inflammasome ได้รับการยอมรับว่าเป็นปัจจัยสำคัญในการก่อโรคของ LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ). NLRP3 inflammasomes ใน podocytes ถูกกระตุ้นในหนูที่เป็นโรคลูปัสและในผู้ป่วยที่มี LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ). เมื่อ inflammasome ของ NLRP3 ถูกยับยั้งด้วยตัวยับยั้ง caspase-1 พบว่ามีโปรตีนในปัสสาวะ รอยโรคทางเนื้อเยื่อของไต และกระบวนการที่เท้าของพอโดไซต์ถูกทำให้ดีขึ้นในหนูที่มีแนวโน้มเป็นโรคลูปัส (8) หวางและคณะ (27)รายงานว่า NLRP3 ถูกแสดงออกในเซลล์รูปท่อของ LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ) คลาส IV และการเปิดใช้งาน NLRP3 มีความสัมพันธ์เชิงบวกกับคะแนนดัชนีกิจกรรมสำหรับผู้ป่วยที่มี LN Caspase-1 ได้รับการพิสูจน์แล้วว่ามีบทบาทสำคัญในโรคลูปัสและความผิดปกติของหลอดเลือด ดังนั้นจึงเป็นเป้าหมายที่เป็นไปได้สำหรับการแทรกแซงการรักษาแบบใหม่ (28) ยาทดลองที่เกิดขึ้นใหม่ เช่น RIP3(29), P2X7 receptor antagonists(30), GSK-3 inhibitors (31) และ Nrf2 agonist (32) ยับยั้งการพัฒนาของ LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ) ในหนูเมาส์ MRL/LPR โดยมอดูเลตกิจกรรมการอักเสบของ NLRP3/ASC/caspase-1 ซึ่งเน้นถึงความสำคัญและความสำคัญของ NLRP3/ASC/caspase-1 inflammasome ใน LN ความเข้มข้นของ IL ในซีรัมที่เพิ่มขึ้น-18มีความสัมพันธ์กับความรุนแรงของโรคและระดับของการบาดเจ็บที่ไต/การมีส่วนร่วมในผู้ป่วยโรคเอสแอลอี(33) จากความรู้ที่ดีที่สุดของเรา ดูเหมือนว่าตระกูลแกสเดอร์มินอาจมีความสำคัญต่อการพัฒนาของpyroptosisแต่มีหลักฐานไม่เพียงพอที่แสดงว่ามี GSDMD/GSDME ในผู้ป่วยโรคเอสแอลอี

โดยรวมแล้ว เราตรวจสอบการกระตุ้นและการแสดงออกของ GSDMD ในตัวอย่างชิ้นเนื้อไตที่นำมาจาก LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ) ผู้ป่วยและหนู MRL/LPR GSDMD ถูกเหนี่ยวนำและแยกออกอย่างรุนแรงในพอดไซต์ของไตและเซลล์ท่อและเซลล์คั่นระหว่างหน้าที่ถูกแทรกซึม ต่อมา หนูเมาส์ MRL/LPR ได้รับการรวมกันของ MMF, ทาโครลิมัส และเพรดนิโซนหรือกระสายยา เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมที่เป็นกระสายยา การกระตุ้นของแคสเปส-1 และ GSDMD ลดลงในกลุ่มการบำบัดแบบผสมผสาน ระดับของpyroptosisในเลือดส่วนปลายก็ต่ำกว่ามากใน LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ) ผู้ป่วยหลังการให้การรักษาแบบผสมผสาน นอกจากนี้,pyroptosisในเลือดส่วนปลายมีความสัมพันธ์เชิงบวกกับ SLEDAI ซึ่งแนะนำว่าpyroptosisในเลือดส่วนปลายสามารถทำหน้าที่เป็นตัวบ่งชี้ที่สำคัญสำหรับกิจกรรม SLE เราจึงตั้งสมมติฐานว่าการรักษาแบบผสมผสานอาจให้ผลดีใน LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ) โดยการยับยั้งpyroptosisเกิดจากแคสเปส-1/GSDMD การศึกษาโครงสร้างผลึกก่อนหน้านี้ของแคสเปส-1ในคอมเพล็กซ์ที่มี Ac-FLTD-CMK เผยให้เห็นปฏิกิริยาระหว่างเอนไซม์กับตัวยับยั้งหลายอย่างที่ป้องกันการรับรู้ GSDMD โดยแคสเปส-1 อย่างไรก็ตาม เราพบว่า Ac-FLTD-CMK ซึ่งทำหน้าที่เป็นตัวยับยั้งที่ได้มาจาก GSDMD ยับยั้งpyroptosisใน LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ) ซึ่งอาจเกิดจากกลไกที่ต่างกัน

เมื่อเร็วๆ นี้ ในรูปแบบหนูทดลองของ SLE(34) ที่เกิดจาก TLR7- หนู GSDMD-/- พัฒนาระดับความเสียหายของไตที่มากขึ้นและอัตราการตายที่เพิ่มขึ้น ซึ่งในตอนแรกแนะนำว่าการลบ GSDMD จะมีผลในการป้องกันและเกี่ยวข้องกับ การอักเสบอย่างเป็นระบบและการผลิต autoantibodies ที่มีการตายเพิ่มขึ้นที่เกี่ยวข้อง หนูที่ขาด GSDMD จะพัฒนาการสะสมของคอมเพล็กซ์ภูมิคุ้มกันของไตในตัวอย่างไตและโปรตีนในปัสสาวะที่สูงขึ้นเมื่อเทียบกับหนูป่า การหลั่งที่เพิ่มขึ้นของ HMGB1 นอกเซลล์ยังพบใน GSDMD-/lymphocytes ซึ่งบ่งชี้ว่าเนื้อร้าย/pyroptosisเกิดขึ้นเมื่อไม่มี GSDMD

แคสเปส-1 ทริกเกอร์pyroptosisโดย GSDMD ความแตกแยก ในทางตรงกันข้าม ในเซลล์ที่ขาด GSDMD หรือเซลล์ที่มี GSDMD ต่ำ แคสเปส-1จะกระตุ้นการตายของเซลล์ จากนั้นเนื้อร้ายทุติยภูมิที่ขึ้นกับ GSDME และpyroptosis. เมื่อไม่มีกิจกรรม GSDMD หลังการรักษา GSDME อาจเปลี่ยน caspase-3-apoptosis ที่เป็นสื่อกลางเป็นpyroptosis(35,36) นอกจากนี้ การกระตุ้นของ caspase-8 ยังได้รับการปรับปรุงอย่างมากในมาโครฟาจที่ขาด GSDMD การกระตุ้นที่สำคัญของ caspase-8 ยังพบใน TLR7-ที่เหนี่ยวนำให้เกิด LN ที่ขาด GSDMD (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ) หนู (34) ดังนั้น ในกรณีที่ไม่มี GSDMD เป็นไปได้ว่า caspase-1 ร่วมมือกับ caspase-8 เพื่อทำให้ caspase-3-การตายของเซลล์แบบ GSDME เปลี่ยนไปเป็นpyroptosisใน LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ) สมมติฐานที่ต้องการการตรวจสอบเชิงทดลองเพิ่มเติม

มีข้อ จำกัด หลายประการในการศึกษาปัจจุบัน อันดับแรก จากข้อมูลปัจจุบัน เราตรวจสอบแล้วว่าการรักษาแบบผสมผสานสามารถระงับได้pyroptosisแต่การรักษาอื่นๆ เช่น การรักษาด้วยสเตียรอยด์และ MMF แบบคู่ สเตียรอยด์และทาโครลิมัส หรือแอนติบอดีต้าน CD20 ก็อาจมีผลเช่นเดียวกัน ประการที่สอง ยังไม่มีการศึกษากลไกระดับโมเลกุลที่แน่นอนของผลการยับยั้งของการรักษาแบบผสมผสานกับแคสเปส-1 สุดท้ายแต่ไม่ท้ายสุด เราสังเกตความสัมพันธ์ของ caspase-1/PI double-positive cells ในเลือดส่วนปลายกับ SLE-DAI และการเปลี่ยนแปลงก่อนและหลังการรักษาแบบผสมผสานใน LN ย้อนหลัง (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ) กลุ่มผู้ป่วย ค่าการทำนายทางคลินิกของ caspase-1/PI double-positive cells สำหรับกิจกรรมของโรคและการตอบสนองต่อการรักษาจำเป็นต้องได้รับการตรวจสอบเพิ่มเติมในกลุ่มที่คาดหวังที่มีขนาดใหญ่กว่า

โดยรวมแล้ว เราพบว่าการรักษาแบบผสมผสานให้ผลดีโดยการยับยั้ง caspase-1/GSDMDpyroptosisใน LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ) ซึ่งให้ข้อมูลเชิงลึกใหม่เกี่ยวกับกลไกของเซลล์ที่เกี่ยวข้อง โดยแท้จริง การบำบัดแบบผสมผสานระงับการแสดงออกของแคสเปส-1อย่างจำเพาะและไม่ซ้ำกัน การยับยั้งทางเภสัชวิทยาหรือทางพันธุกรรมของ NLRP3 และ caspase-1 ปรับปรุงการทำงานของไตและยับยั้งภูมิต้านทานผิดปกติใน LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ). บทบาททางพยาธิสรีรวิทยาของแคสเปส-1ใน LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ) มีค่าควรแก่การศึกษาเพิ่มเติม และการรักษาที่กำหนดเป้าหมาย GSDMD ในผู้ป่วย LN (โรคลูปัสโรคไตอักเสบ) จะต้องได้รับการประเมินอย่างรอบคอบมาก

วิธีการรักษาpyroptosis

ข้อมูลอ้างอิง

1. Saxena R, Mahajan T, Mohan C.โรคลูปัสโรคไตอักเสบ: อัพเดทปัจจุบัน โรคข้ออักเสบ Res Ther (2011)13:240.doi: 10.1186/ar3378

2. An Y, Zhang H, Liu Z. การบำบัดเฉพาะบุคคลในโรคลูปัสโรคไตอักเสบ. Kidney Int Rep (2019)4:1366-72.doi: 10.1016/j.ekir.2019.08.005

3. Bao H, Liu ZH, Xie HL, Hu WX, Zhang HT, LiLS การรักษา Class V plus IV ที่ประสบความสำเร็จโรคลูปัสโรคไตอักเสบด้วยการบำบัดแบบหลายเป้าหมาย J Am Soc Nephrol (2008)19:2001-10.doi: 10.1681/ASN.2007121272

4. Liu Z, Zhang H, Liu Z, Xing C, Fu P, Ni Z, et al.Multitarget Therapy สำหรับการรักษาแบบเหนี่ยวนำโรคลูปัสโรคไตอักเสบ: การทดลองแบบสุ่ม Ann Intern Med (2015)162:18-26 ดอย: 10.7326/M14-1030

5. Zhang H, Liu Z, Zhou M, Liu Z, Chen J, Xing C, et al.Multitarget Therapy สำหรับการรักษาบำรุงรักษาโรคลูปัสโรคไตอักเสบ. J Am Soc Nephrol(2017)28:3671-8.doi:10.1681/ASN.2017030263

6. Fu J, Wang Z, Lee K, Wei C, Liu Z, Zhang M, et al.Transcriptomic Analysis เผยกลไกเสริมฤทธิ์กันของนวนิยายในการบำบัดแบบผสมผสานสำหรับโรคลูปัสโรคไตอักเสบ. Kidney Int(2018)93:416-29.doi: 10.1016/j.kint.2017.08.031

7. อุมมาริโน ดี.โรคลูปัสโรคไตอักเสบ: NLRP3 Inflammasome กระตุ้นการทำงานของ Podocyte Dysfunction. Nat Rev Rheumatol(2017)13:451.doi: 10.1038/Orpheum. 2017.9