การศึกษาสารสกัดจาก Cistanche Deserticola ที่ควบคุม M2 เช่น Macrophage Polarization เพื่อลดการย้ายถิ่นของเซลล์และการก่อตัวของโคโลนีในมะเร็งเต้านม

บทคัดย่อ: วัตถุประสงค์เพื่อสำรวจกลไกการกำกับดูแลของสารสกัดเอทานอลของ Cistanche Deserticola epimedium brevican ต่อโพลาไรเซชันของมาโครฟาจในหลอดทดลอง และผลกระทบต่อ M{{0}}เช่น มาโครฟาจที่ส่งเสริมการย้ายเซลล์ 4T1 และการสร้างโคโลนี วิธีการใช้วิธี CCK-8 เพื่อตรวจหาผลของสารสกัดเอทานอลของ Cistanche Deserticola Deserticola ที่มีความเข้มข้นต่างกันต่อกิจกรรมของมาโครฟาจที่ได้มาจากไขกระดูก (BMDM) และหาความเข้มข้นที่ปลอดภัยของสารสกัดเอทานอลของ Cistanche Deserticola Deserticola Deserticola Western blotting และ qRT PCR ถูกนำมาใช้เพื่อตรวจหาผลกระทบของสารสกัดเอทานอลของ Cistanche Deserticola Deserticola ต่อการแสดงออกของอาร์จิเนส-1 (Arg-1) และ CD163 ซึ่งเป็นเครื่องหมายของ M2 เช่นแมคโครฟาจ QRT PCR ใช้เพื่อตรวจหาผลของสารสกัดแอลกอฮอล์ของ Cistanche Deserticola Deserticola ต่อ inflammatory zone 1 (Fizz1) และ peroxisome proliferator enabler receptor (PPAR) ของ M2 Tumor-associated macrophage (TAMs) ที่เกี่ยวข้องกับยีน (peroxisome-proliferator-activated receiver , PPAR ）, ผลของไคติเนส 3-like 3 (Ym1), chemokine 24 (CCL24), macrophage Galactose type C-type Lectin 2 (MGL2) และ interferon regulatory factor 4 (IRF4) mRNA expression; ผลของสารสกัดเอทานอล ของ Cistanche Deserticola Deserticola บน M2 TAMs ที่ส่งเสริมการย้ายถิ่นของเซลล์ 4T1 ตรวจพบโดยการทดสอบแบบ scratch ตรวจพบผลของสารสกัดเอทานอลของ Cistanche Deserticola Deserticola ต่อการเจริญของเซลล์ 4T1 ที่ถูกกระตุ้นโดย M2 TAMs โดยการทดลองแบบโคโลนี ผลปรากฏว่า สารสกัดเอทานอลของ Epimedium ไม่มีพิษหรือผลข้างเคียงต่อเซลล์ BMDM ที่ความเข้มข้น 0.015 625 ถึง 2.000 000 มก./มล. สารสกัดเอทานอลของ Cistanche Deserticola ยับยั้งยีนที่เกี่ยวข้องกับ M2 TAMs Arg{{ 36}}, CD163, Fizz1, PPAR การแสดงออกของ CCL24, Ym1, MGL2 และ IRF4 (P<0.05, 0.01, 0.001) inhibited the migration and colony formation ability of M2-TAMs in 4T1 cells (P<0.05, 0.001). Conclusion The ethanol extract of Cistanche deserticola can weaken the promotion of M2-like macrophages on 4T1 Cell migration and colony formation, and its mechanism may be related to the inhibition of M2-type polarization of macrophages.

คำสำคัญ: ซิสแทนช์ เดสทิโคลา; มาโครฟาจ; โพลาไรเซชัน M2; โรคมะเร็งเต้านม; การโยกย้าย; การก่อตัวของอาณานิคม กรดเบนโซอิน; โคนิเฟอริลอัลดีไฮด์; อีโมดิน; กรดวานิลลิก

ผลของ Cistanche-Antitumor

มะเร็งเต้านมเป็นเนื้องอกร้ายหลักที่เป็นอันตรายต่อสุขภาพของผู้หญิง และยังเป็นสาเหตุการตายอันดับสองของมะเร็งในโลก [1-2] ในระยะท้ายของมะเร็งเต้านมมีการแพร่กระจายไปยังปอดและตับ เมื่อเกิดการแพร่กระจายของอวัยวะ อัตราการรอดชีวิตและคุณภาพชีวิตของผู้ป่วยจะลดลงอย่างมาก [3] การรักษามะเร็งเต้านมในขั้นแรกส่วนใหญ่อาศัยการรักษาด้วยเคมีบำบัดของแอนทราไซคลิน แพคลิแท็กเซล และยาที่เป็นพิษต่อเซลล์อื่นๆ แต่การดื้อยามักเกิดขึ้นในระหว่างการรักษา ดังนั้นจึงเป็นเรื่องสำคัญอย่างยิ่งที่จะต้องสำรวจกลไกทางพยาธิวิทยาของมะเร็งเต้านมและหาวิธีการรักษาที่มีประสิทธิภาพ มาโครฟาจมีความสำคัญต่อการเกิดขึ้นและการพัฒนาของเนื้องอกต่างๆ [4-5] และไบโอมาร์คเกอร์ของมาโครฟาจสามารถใช้เป็นตัวบ่งชี้การพยากรณ์โรคได้ อัตราการแทรกซึมของมาโครฟาจสูงนั้นสัมพันธ์กับการพยากรณ์โรคมะเร็งเต้านมที่ไม่ดี แมคโครฟาจที่เกี่ยวข้องกับเนื้องอก (TAMs) เป็นเซลล์ภูมิคุ้มกันที่แทรกซึมอยู่ในเนื้องอกชนิดที่พบได้บ่อยที่สุด พวกมันมีบทบาทสำคัญตั้งแต่ระยะเริ่มต้นของมะเร็งเต้านมไปจนถึงระยะลุกลาม โดยเฉพาะการแพร่กระจาย [6] TAMs เกี่ยวข้องกับการแพร่กระจาย, การสร้างเส้นเลือดใหม่, การเปลี่ยนแปลงเมทริกซ์, การบุกรุกและการกดภูมิคุ้มกันของมะเร็งเต้านม การแพทย์แผนจีนมีบทบาทสำคัญในการรักษามะเร็งเต้านมทั้งหมด การแพทย์แผนจีนมีลักษณะเฉพาะขององค์ประกอบ วิถีทาง และเป้าหมายที่หลากหลาย ซึ่งสามารถลดอัตราการเกิดซ้ำและการแพร่กระจายของผู้ป่วยเนื้องอก ปรับปรุงคุณภาพชีวิตของพวกเขา และยืดเวลาการอยู่รอดของพวกเขา Cistanche Deserticola Deserticornu Maxim. เป็นพืชตระกูล Berberidaceae ของ Ranunculales มีรสหวานอมหวาน อุ่นโดยธรรมชาติ และไปตามตับและไต 2 ช่อง มีผลในการเสริมสร้างกล้ามเนื้อและกระดูก บำรุงไตหยาง ปกป้องระบบหัวใจและหลอดเลือด [7] ส่งเสริมการสร้างกระดูก [8] ควบคุมภูมิคุ้มกัน [9] และยับยั้งมะเร็ง [10] การวิจัยแสดงให้เห็นว่าสารสกัดแอลกอฮอล์ของ Cistanche Deserticola สามารถยับยั้งการเพิ่มจำนวนของเซลล์มะเร็งเต้านมได้ [11] แต่ยังไม่มีรายงานการวิจัยว่าสารสกัดแอลกอฮอล์ของ Epimedium ส่งผลต่อสภาพแวดล้อมจุลภาคของภูมิคุ้มกันเนื้องอกของมะเร็งเต้านมอย่างไร ดังนั้น การศึกษานี้จึงตั้งใจที่จะสำรวจผลกระทบของสารสกัดแอลกอฮอล์ของ Cistanche Deserticola Deserticola ต่อ M2-เช่น Macrophages และกฎระเบียบของมันต่อการย้ายถิ่นของเซลล์และการสร้างอาณานิคมของมะเร็งเต้านม 4T1 เพื่อให้พื้นฐานการทดลองและแนวทางเชิงทฤษฎีสำหรับการติดตามผล การประยุกต์ใช้ Epimedium ทางคลินิก

ประโยชน์ต่อสุขภาพของผง Cistanche - Antitumor

คลิกที่นี่เพื่อดูผลิตภัณฑ์ Cistanche

【สอบถามเพิ่มเติม】 อีเมล:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

1. วัสดุ

1.1 สัตว์และเซลล์

หนูเมาส์รุ่น C57BL/6 เพศเมีย SPF อายุ 8 สัปดาห์ ซื้อจาก Sibeifu (Beijing) Biotechnology Co., Ltd. โดยมีใบรับรองสัตว์เลขที่ 110324210105240115 หนูเหล่านี้ถูกเลี้ยงที่ Animal Experimental Center of the Fifth Medical Center of the General Hospital of กองทัพปลดปล่อยประชาชน. ตลอดระยะเวลาการทดลอง หนูได้รับอาหารและน้ำฟรี และได้รับ 12-ชั่วโมงแสง/12-ชั่วโมงในความมืด การทดลองในสัตว์ได้ดำเนินการตามแนวทางการดูแลและการใช้สัตว์ทดลอง และได้รับการอนุมัติจากศูนย์การแพทย์แห่งที่ห้าของโรงพยาบาลทั่วไปแห่งกองทัพปลดปล่อยประชาชน หมายเลขการอนุมัติทางจริยธรรมสำหรับการทดลองกับสัตว์คือ IACUC-2021-0007 ซื้อเซลล์ 4T1 จาก Shanghai Fuheng Biotechnology Co., Ltd.

การศึกษาเชิงทดลองของ Cistanche Deserticola

1.2 ยา

Cistanche Deserticola ถูกระบุโดยนักวิจัย Xiao Xiaohe ว่าเป็น Epimedium E. ซึ่งเป็นพืชตระกูล Berberidaceae Dry leaf จาก Brevicornum Maxim นำใบ Cistanche Deserticola Deserticola บดให้ละเอียดแล้วกรองผ่านตะแกรงเบอร์ 4 ชั่งน้ำหนักอย่างแม่นยำ เติมเอทานอลเจือจาง ทำการบำบัดด้วยอัลตราโซนิก (กำลัง 400 W ความถี่ 50 kHz) เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ทำให้เย็นลง ชั่งน้ำหนักอีกครั้ง ใช้เอทานอลเจือจางเพื่อสร้างน้ำหนักที่หายไป เขย่า กรอง กรองต่อไป แช่แข็งและทำให้แห้งเพื่อให้ได้สารสกัด Cistanche Deserticola Deserticola 1.3 ยาและสารทำปฏิกิริยาอาร์จิเนส-1 (Arg-1) แอนติบอดี (หมายเลขแบทช์: 93668) ซื้อจากบริษัท CST ของสหรัฐอเมริกา - แอนติบอดีแอกติน (หมายเลขแบทช์ 20536 1-AP) ซื้อมาจากบริษัท Protentech แอนติบอดีทุติยภูมิ IgG ทุติยภูมิ HRP ที่ติดฉลากแพะต่อต้านกระต่าย (หมายเลขแบทช์ J111-035-003) ถูกซื้อจาก Jackson Immuno Research; รีเอเจนต์ Trizol (หมายเลขแบทช์ BSC51M1) ซื้อมาจากบริษัท Biolux CCK-8 รีเอเจนต์ (หมายเลขแบทช์ KTA1020-1000T) ถูกซื้อจาก Abbkine Company ปัจจัย Interleukin 4 (IL-4) (หมายเลขแบทช์ 96-214-14-20) ถูกซื้อจาก Peprotech

1.4 เครื่องดนตรี

QB-9002 Seismic Plate Instrument (บริษัท Haimen Qilin Bell); การทดสอบอิมมูโนซอร์เบนต์ที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ Epoch และเครื่องวิเคราะห์ความเข้มข้นของกรดนิวคลีอิก P100 บวก (บริษัท ไบโอเทค สหรัฐอเมริกา); Quantstudio 6 Flex เครื่องเรืองแสง PCR เชิงปริมาณ (Thermo Fisher Scientific, USA); เครื่องหมุนเหวี่ยงปาล์ม MINI6K (บริษัท หางโจว Aosheng); เครื่องสั่น Vortex-Genie 2 (Scientific Industries, USA)

2 วิธี

2.1 การวิเคราะห์ส่วนประกอบของสารสกัดแอลกอฮอล์ของ Cistanche Deserticola

2.1.1 ตัวอย่างการเตรียม เติมเมทานอลลงในสารสกัดแอลกอฮอล์ของ Cistanche Deserticola เพื่อเตรียมสารแขวนลอย 5 มก./มล. สกัดด้วยอัลตราซาวนด์เป็นเวลา 40 นาที ใช้เวลา 1 มล. แล้วหมุนเหวี่ยงที่ 12 000 รอบ/นาที เป็นเวลา 10 นาที , นำส่วนลอยเหนือตะกอนหลังจากการปั่นแยก, ผ่านเมมเบรนตัวกรอง 0.22 μ M, ตัวอย่างไปยัง UPLC-MS/MS ส่วนประกอบของ Cistanche Deserticola ถูกรวบรวมผ่านฐานข้อมูลเภสัชวิทยาระบบการแพทย์แผนจีนและแพลตฟอร์มการวิเคราะห์ (TCMSP) วิเคราะห์ผลลัพธ์ของ MS โดยใช้แพลตฟอร์มข้อมูล Progression QI (อิงจากฐานข้อมูล NPATLAS และ GNPS) และเปรียบเทียบผลลัพธ์กับการดึงส่วนประกอบ Cistanche Deserticola สำหรับการวิเคราะห์องค์ประกอบที่ไม่ได้กำหนดเป้าหมาย

2.1.2 เงื่อนไขทางโครมาโตกราฟี:

การได้มาซึ่ง UPLC BEH C18 คอลัมน์โครมาโตกราฟี (100 มม. × 2.1 มม., 1.7 µ m), เฟสเคลื่อนที่คือน้ำกลั่นสองเท่า (A) - อะซีโตไนไตรล์ (B), การชะไล่ระดับสี: 0-3 นาที 5 เปอร์เซ็นต์ B; 3 ถึง 35 นาที 5 เปอร์เซ็นต์ถึง 95 เปอร์เซ็นต์ B; 35-42 นาที 95 เปอร์เซ็นต์ -5 เปอร์เซ็นต์ B อัตราการไหลเชิงปริมาตรคือ 0.3 มล./นาที ปริมาณการฉีดคือ 5 μ L; อุณหภูมิของกล่องอุณหภูมิคอลัมน์คือ 40 องศา 2.1.3 สภาวะแมสสเปกโทรเมทรี: ใช้แหล่งกำเนิดอิเล็กโทรสเปรย์ไอออน (ESI) สำหรับการตรวจจับในโหมดไอออนบวก และอุณหภูมิของเส้นเลือดฝอยคือ 275 องศา ; อัตราการไหลของปริมาตรก๊าซเปลือก 20 Arb; อัตราการไหลของปริมาตรก๊าซเสริม 5 Arb; แรงดันแหล่งกำเนิดไอออนคือ 5 kV 2.2 การเพาะเลี้ยงเซลล์มาโครฟาจที่ได้มาจากไขกระดูก (BMDM) แยกได้จากไขกระดูกต้นขาของหนูเพศเมีย C57BL/6 ตัวอายุ 8-สัปดาห์ พวกเขาเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อ DMEM ที่มี Fetal bovine serum 10 เปอร์เซ็นต์, penicillin/Streptomycin 1 เปอร์เซ็นต์ และ M-CSF (50 ng/mL) ซึ่งเป็นปัจจัยกระตุ้นโคโลนีของ macrophage ในหนูและวางไว้ในตู้อบที่อุณหภูมิ 37 องศาและ CO2 5 เปอร์เซ็นต์เป็นเวลา 6 ชั่วโมง วัน

ย่อยเซลล์ด้วยทริปซิน EDTA 0.25 เปอร์เซ็นต์ (2:1) ที่อัตรา 1.2 × เพาะเชื้อความหนาแน่น 106/มล. ในจานหลุมข้ามคืน ในวันที่สอง หลังจากเติมสารสกัดแอลกอฮอล์ของ Cistanche Deserticola เป็นเวลา 1 ชั่วโมง เซลล์จะถูกกระตุ้นด้วย IL-4 (20 ng/mL) เป็นเวลา 24 ชั่วโมง

2.3 ใช้วิธี CCK{{0}} เพื่อตรวจหาความเป็นพิษต่อเซลล์ของสารสกัดแอลกอฮอล์ของ Cistanche Deserticola Deserticola ต่อเซลล์ BMDM × Inoculate 106/mL ความหนาแน่นในจาน 96 หลุม วางในตู้ฟักข้ามคืน รักษาเซลล์ที่มีความเข้มข้นของมวลต่างกัน (0, 0.015 625, {{10}}.031 25, 0.{{ 9}}, 0.125, 0.25, 0.5, 1, 2, 4 มก./มล.) ของสารสกัดแอลกอฮอล์ของ Cistanche Deserticola เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ทิ้งอาหารเลี้ยงเชื้อ เติม CCK-8-น้ำยาเลี้ยงเชื้อ (1:10) บ่มในตู้ฟักเป็นเวลา 1 ชั่วโมง วัดค่าการดูดกลืนแสง (A) ที่ 450 นาโนเมตรด้วยเครื่องอ่านไมโครเพลท และตรวจหาความเป็นพิษของสารสกัดแอลกอฮอล์ของ Cistanche Deserticola Deserticola ไปยังเซลล์

2.4Western blotting ใช้เพื่อตรวจจับการแสดงออกของโปรตีน Arg{{0}} ในเซลล์ BMDM มีการตั้งค่ากลุ่มควบคุม กลุ่มแบบจำลอง และกลุ่มสารสกัดแอลกอฮอล์ของ Cistanche Deserticola ที่มีความเข้มข้นมวลต่างกัน (0.062 5, 0.125, 0.25 มก./มล.) ยาถูกบริหารตามวิธีการภายใต้ "2.2" รวบรวมเซลล์และเพิ่ม RIPA lysate เพื่อสกัดโปรตีน ตัวอย่างโปรตีนอยู่ภายใต้โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต-โพลีอะคริลาไมด์เจลอิเล็กโตรโฟรีซิส 10 เปอร์เซ็นต์ ถ่ายโอนไปยังเมมเบรน PVDF ปิดผนึกใน TBST ที่มีหางนม 5 เปอร์เซ็นต์เป็นเวลา 1 ชั่วโมง เติมด้วยแอนติบอดีปฐมภูมิ และบ่มค้างคืนที่ 4 องศา ; หลังจากล้างด้วย TBST ให้บ่มด้วยแอนติบอดีทุติยภูมิและพัฒนาโดยใช้น้ำยาตรวจหาเคมิลูมิเนสเซนซ์ที่ปรับปรุงแล้ว

2.5 qRT PCR ใช้เพื่อตรวจหา BMDM cell chemotactic factor 24 (CCL24), inflammatory zone 1 (Fizz1), Chitinase 3-like 3 (Ym1), macrophage galactose type C-type Lectin 2 (MGL2) และ Peroxisome proliferator- แอกติเวตรีเซพเตอร์ (peroxisome-proliferator-activated receiver , PPAR ）, Interferon regulatory factor 4 (IRF4), Arg-1 และการแสดงออกของ CD163 mRNA ถูกตั้งค่าในกลุ่มควบคุม กลุ่มแบบจำลอง และความเข้มข้นของมวลที่แตกต่างกัน ({{17} }.062 5, 0.125, 0.25 มก./มล.) ของสารสกัดแอลกอฮอล์ของ Cistanche Deserticola ตาม "2.2"

2.6การเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อปรับอากาศ วิธีการอ้างอิง [12]: BMDM เพาะเลี้ยงตามวิธีในข้อ "2.2" หลังจากติดแผ่นเซลล์เมล็ดแล้ว สื่อที่ปราศจากซีรั่มที่มีสารสกัดแอลกอฮอล์ Cistanche Deserticola (0.25 มก./มล.) และ IL-4 (20 ng/mL ) ถูกเพิ่มใน 1 ชั่วโมงต่อมา หลังจากผ่านไป 24 ชั่วโมง ให้เก็บส่วนเกินไว้เป็นตัวกลางปรับอากาศ สื่อปรับอากาศถูกหมุนเหวี่ยงที่ 2,000 รอบ/นาที เพื่อให้ชิ้นส่วนตกตะกอน สำลัก และเก็บไว้ที่อุณหภูมิ −80 องศาสำหรับการทดลองย้ายเซลล์ BMDM ได้รับการเพาะเลี้ยงตามวิธีการภายใต้ "2.2" และอาหาร DMEM ที่มีสารสกัดแอลกอฮอล์ของ Cistanche Deserticola (0.25 มก./มล.) ถูกเติมหลังจากติดเพลตเมล็ดเซลล์เข้ากับผนัง และ IL-4 (20 ng /mL) ถูกเติมหนึ่งชั่วโมงต่อมา หลังจากผ่านไป 24 ชั่วโมง ให้เก็บส่วนเกินไว้เป็นตัวกลางปรับอากาศ หมุนเหวี่ยงตัวกลางที่ปรับสภาพแล้ว 2000 เพื่อให้ชิ้นส่วนตกตะกอน ดูดส่วนเหนือตะกอน และเก็บไว้ที่ระดับ -80 สำหรับการทดลองโคโลนีของเซลล์2.7 การทดลองย้ายเซลล์ วางปลั๊กอุดรูสำหรับการรักษาบาดแผล {{0}}ลงในแผ่นปิดรู 12- และเซลล์ 4T1 จะได้รับการฉีดวัคซีน 3.6 × 105/มล. . หลังจากที่เซลล์ติดกับผนังข้ามคืน ให้ถอดปลั๊กอินออกและล้างเซลล์ที่ตายแล้วที่ลอยอยู่ออกด้วย PBS เพิ่มอาหารเลี้ยงเชื้อที่ปราศจากซีรั่มที่มีอาหารเลี้ยงเชื้อ 50 เปอร์เซ็นต์ ฟักตัวในตู้อบ 24 ชม. ที่ 0 และ 24h ถ่ายภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบกลับด้าน วิเคราะห์ภาพด้วย Image J และคำนวณอัตราการย้ายเซลล์ อัตราการย้ายเซลล์=(0 ชม. พื้นที่บาดแผล -24 ชม. พื้นที่บาดแผล)/0 ชม. พื้นที่บาดแผล

2.8การทดลองเกี่ยวกับอาณานิคมของเซลล์ 1000 4เซลล์ T1 ถูกเพาะเชื้อลงในแต่ละหลุมด้วยเพลต 6 หลุม และบ่มด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีอาหารเลี้ยงเชื้อ 50 เปอร์เซ็นต์เป็นเวลา 8 วัน แก้ไขด้วยพาราฟอร์มัลดีไฮด์ 2 เปอร์เซ็นต์ ย้อมด้วยคริสตัลไวโอเล็ต 1 เปอร์เซ็นต์ ถ่ายภาพและวิเคราะห์ภาพด้วย Image J

2.9การวิเคราะห์ทางสถิติดำเนินการโดยใช้ซอฟต์แวร์ GraphPad Prism 8 โดยมีข้อมูลการวัดที่แสดงเป็น xs ± และการเปรียบเทียบระหว่างกลุ่มโดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนแบบทางเดียว

3 ผลลัพธ์

3.1 การวิเคราะห์องค์ประกอบของสารสกัดแอลกอฮอล์ของ Cistanche Deserticola Deserticola แสดงไว้ในรูปที่ 1 และตารางที่ 2 สารสกัดแอลกอฮอล์ของ Cistanche Deserticola Deserticola ประกอบด้วยกรดเบนโซอิก โคนิเฟอริลอัลดีไฮด์ อีโมดิน กรดวานิลลิก ไฮยาลิน และเลพิรูดิน เอ

ตารางที่ 1 ลำดับไพรเมอร์

รูปที่ 1 การวิเคราะห์สารสกัดแอลกอฮอล์จาก Cistanche Deserticola Deserticola

ตารางที่ 2 การวิเคราะห์ส่วนประกอบของสารสกัดแอลกอฮอล์ของ Cistanche Deserticola Deserticola

3.2ความเป็นพิษต่อเซลล์ของสารสกัด Cistanche Deserticola Alcohol Extract ต่อ BMDM ผลการวิจัยพบว่า 0.015 625 - 2 mg/mL ของสารสกัด Cistanche Deserticola Alcohol Extract ไม่มีความเป็นพิษต่อเซลล์ BMDMs หลังจากบำบัดเซลล์ BMDMs ด้วยสารสกัด Cistanche Deserticola Alcohol ที่มีความเข้มข้นต่างกัน เป็นเวลา 24 ชั่วโมง (รูปที่ 2)

รูปที่ 2 ความเป็นพิษต่อเซลล์ของสารสกัดแอลกอฮอล์ของ Cistanche Deserticola Deserticola ต่อ BMDM (xs ±, n=3)

3.3 สารสกัดเอทานอลของ Cistanche Deserticola ยับยั้งโพลาไรเซชัน M2 ของมาโครฟาจในหลอดทดลอง ใน BMDM M0 macrophages เครื่องหมาย Arg-1 และ CD163 ของ M2-เช่น macrophages มีการแสดงออกในระดับต่ำ และการแสดงออกจะเพิ่มขึ้นอย่างมากหลังจากการเหนี่ยวนำโดย IL-4 ซึ่งบ่งชี้ว่า BMDM นั้นโพลาไรซ์เป็น M2-เหมือนมาโครฟาจได้สำเร็จ ใช้เทคนิค Western blotting และ qRT PCR เพื่อตรวจสอบว่าสารสกัดแอลกอฮอล์ของ Cistanche Deserticola สามารถปรับการแสดงออกของ Arg-1 และ CD163 ที่เกิดจาก IL-4 ในลักษณะที่ขึ้นกับปริมาณ (รูปที่ 3) ซึ่งบ่งชี้ว่า ว่าสารสกัดแอลกอฮอล์ของ Cistanche Deserticola สามารถยับยั้ง M2 ได้โดยตรง เช่น โพลาไรเซชันของมาโครฟาจ ในการสำรวจผลกระทบของสารสกัดแอลกอฮอล์ของ Cistanche Deserticola Deserticola ต่อโพลาไรเซชัน M2 ของแมคโครฟาจเพิ่มเติม qRT PCR ถูกนำมาใช้เพื่อศึกษา M2 เช่น ยีนที่เกี่ยวข้องกับแมคโครฟาจ Fizz1 และ PPAR ระดับการถอดความของ Ym1, CCL24, MGL2 และ IRF4 แสดงไว้ในรูปที่ 4. เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มแบบจำลอง ระดับการแสดงออกของ mRNA ของ Fizz1, Ym1, CCL24 และ IRF4 ในสารสกัดแอลกอฮอล์ของ Cistanche Deserticola (0.062 5, 0.125, { {29}}.25 มก./มล.) ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (P<0.05, 0.01, 0.001), and the PPAR in the alcohol extract of Cistanche deserticola (0.125, 0.25 mg/mL) group γ The mRNA expression level decreased significantly (P<0.01, 0.001), and the MGL2 mRNA expression level in the alcohol extract of Cistanche deserticola deserticola (0.25 mg/mL) group decreased significantly (P<0.001).

3.4 สารสกัดเอทานอลของ Cistanche Deserticola ทำให้การส่งเสริม M2-like macrophages ในการย้ายเซลล์ 4T1 ลดลง การทดสอบรอยขีดข่วนใช้เพื่อสังเกตผลของส่วนเหนือของสารสกัดเอทานอลจาก Cistanche Deserticola ต่อความสามารถในการย้ายถิ่นของเซลล์มะเร็งเต้านม BMDM ถูกบ่มในอาหารเลี้ยงเชื้อที่ปราศจากซีรั่มที่มี IL-4 และสารสกัดแอลกอฮอล์ของ Cistanche Deserticola Deserticola เป็นเวลา 24 ชั่วโมง และเก็บส่วนเกินไว้เป็นสื่อปรับสภาพ เลี้ยง 4T1 ในอาหารเลี้ยงเชื้อที่ปราศจากซีรั่มซึ่งมีอาหารเลี้ยงเชื้อปรับอากาศ 50 เปอร์เซ็นต์ ดังแสดงในรูปที่ 5 อาหารเลี้ยงเชื้อปรับอากาศที่รวบรวมโดย BMDM ที่บำบัดด้วย IL-4 เพียงอย่างเดียวส่งเสริมการย้ายเซลล์ 4T1 อย่างมีนัยสำคัญ (P<0.05), while the conditioned medium of BMDM treated with alcohol extract of Cistanche deserticola significantly inhibited the migration of 4T1 cells (P<0.05). 3.5 Cistanche deserticola alcohol extract weakens the promotion of M2-like macrophages on 4T1 cell colony formation Use colony formation experiment to evaluate the effect of Cistanche deserticola alcohol extract on M2-like macrophages promoting 4T1 cell colony formation. As shown in Figure 6, the conditioned medium treated with IL-4 significantly promoted the colony formation of 4T1 cells (P<0.05), while the conditioned medium treated with alcohol extract of Cistanche deserticola significantly inhibited the colony formation of cells (P<0.001)

4. การอภิปราย

ประโยชน์ของ cistanche tubulosa-Antitumor

ปัจจุบันมะเร็งเต้านมยังคงเป็นปัญหาทางสาธารณสุขทั่วโลก อัตราการเกิดมะเร็งเต้านมเพิ่มขึ้นทุกปีและอายุยังน้อย ซึ่งคุกคามสุขภาพของผู้หญิงอย่างมาก [13] การแพทย์แผนจีนเชื่อว่าในระยะแรกของเนื้องอก เนื่องจากร่างกายไม่สามารถกระจายชี่เนื่องจากการขาดธาตุหยาง ชี่หยินจึงไม่เพียงพอและไม่สามารถสร้างการสะสมสเปิร์มตามปกติได้ อย่างไรก็ตาม การสะสมที่ผิดปกติจะนำไปสู่ผลิตภัณฑ์ทางพยาธิวิทยา เช่น เสมหะขุ่นและเลือดหยุดนิ่ง ซึ่งนำไปสู่การเปลี่ยนสารพิษเป็นเนื้องอก [14] Cistanche Deserticola Deserticola เป็นยาที่จำเป็นสำหรับการปรับสภาพหยาง มีผลในการปรับสภาพพลังงานที่สำคัญและหยางของไต และสามารถควบคุมภูมิคุ้มกันได้ เป็นยาจีนบำรุงไตที่ใช้กันทั่วไปในทางคลินิก ตอนนี้มักใช้เพื่อรักษามะเร็งเต้านมและมักใช้เป็นยาผสมที่มีความถี่สูง ลักษณะหนึ่งของมะเร็งคือภูมิคุ้มกันบกพร่อง เซลล์ภูมิคุ้มกันที่ควรต่อสู้กับเนื้องอกโดยเฉพาะการยับยั้งทางเพศโดยเนื้อเยื่อรอบข้างและสภาพแวดล้อมจุลภาคของเนื้องอก ซึ่งนำไปสู่การเติบโตและการแพร่กระจายของเนื้องอกที่ไม่สามารถควบคุมได้ [15] หลักฐานจำนวนมากขึ้นเรื่อยๆ แสดงให้เห็นว่าเมื่อมีอยู่ในสภาพแวดล้อมจุลภาคของเนื้องอก เซลล์ภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติ (มาโครฟาจ นิวโทรฟิล เซลล์เดนไดรต์ เซลล์น้ำเหลืองโดยธรรมชาติ เซลล์ยับยั้งทางเพศที่ได้มาจากไขกระดูก และเซลล์ NK) และเซลล์ภูมิคุ้มกันแบบปรับตัว (เซลล์ทีเซลล์และเซลล์บี ) มีส่วนทำให้เนื้องอกลุกลาม [16] มาโครฟาจเป็นสื่อกลางที่ขาดไม่ได้ของสภาวะสมดุลของเนื้อเยื่อ และโพลาไรเซชันของพวกมันไปยังมาโครฟาจที่เปิดใช้งานทางเลือก (ชนิด M2) สามารถส่งเสริมการเพิ่มจำนวนเซลล์มะเร็ง การสร้างเส้นเลือดใหม่ และการแพร่กระจาย ดังนั้นการควบคุม TAMs และรักษาสภาวะสมดุลของร่างกายจึงกลายเป็นจุดเน้นของการรักษาเนื้องอก [17] TAMs เกี่ยวข้องกับการแพร่กระจาย, การสร้างเส้นเลือดใหม่, การเปลี่ยนแปลงเมทริกซ์, การบุกรุกและการกดภูมิคุ้มกันของมะเร็งเต้านม TAM ส่วนใหญ่แบ่งออกเป็นสองฟีโนไทป์ที่แตกต่างกัน ได้แก่ M ที่เปิดใช้งานแบบคลาสสิก1-เหมือนมาโครฟาจและ M ที่เปิดใช้งานทางเลือก2-เช่นมาโครฟาจ [18] ในเนื้องอกที่ไม่ร้ายแรงหรือไม่ทำงาน TAM ส่วนใหญ่จะกระตุ้น M1-แบบคลาสสิกเหมือนกับแมคโครฟาจ ซึ่งได้แก่ Interferon- , IFN- ） หรือการกระตุ้นด้วย Lipopolysaccharide (LPS) ดังนั้นจึงส่งเสริม TAM เพื่อสร้างปัจจัยการอักเสบและการทำลายเซลล์ของเซลล์มะเร็ง M2-เช่น macrophages สามารถกระตุ้นโดย Th2 cytokines เช่น IL-4 เพื่อผลิตปัจจัยต้านการอักเสบจำนวนมาก ซึ่งส่งเสริมการพัฒนาของมะเร็งเต้านมโดยตรง [19] ดังนั้น การย้อนกลับหรือการยับยั้งโพลาไรเซชันของ M2-เช่น macrophages จึงเป็นกลยุทธ์ของการบำบัดด้วยภูมิคุ้มกันสำหรับมะเร็งเต้านม Arg-1 เป็นเครื่องหมายของ M2-เช่น macrophages และการแสดงออกที่มากเกินไปนั้นสัมพันธ์กับการพยากรณ์โรคที่ไม่ดีในผู้ป่วยมะเร็ง [20]

สมุนไพรจีน cistanche-Antitumor

CD163 เป็นตัวบ่งชี้เฉพาะของ M2-เช่น macrophages [21] ซึ่งเกี่ยวข้องกับการแพร่กระจายของเนื้องอก CD163 บวก TAM กระตุ้นการเปลี่ยนแปลงของเยื่อบุผิว-เมเซนไคมอล (EMT) และส่งเสริมการย้ายถิ่นของเซลล์มะเร็ง [22] ผลการศึกษานี้บ่งชี้ว่าสารสกัดจาก Cistanche Deserticola Deserticola มีบทบาทในการควบคุมภูมิคุ้มกันในระดับหนึ่ง โดยยับยั้งการแสดงออกของ Arg-1 และ CD163 ซึ่งเป็นเครื่องหมายพื้นผิวของ M2-เช่น macrophages และยับยั้งโพลาไรเซชันประเภท M2-ของมาโครฟาจ PPAR เป็นเซ็นเซอร์เมตาบอลิซึมที่ควบคุมสภาวะสมดุลของไขมันในเลือดผ่านการกระตุ้นการทำงานของกรดไขมันและอนุพันธ์ของกรดไขมันต่างๆ (เช่น กรดปาล์มิติก) [23] PPAR เกี่ยวข้องกับโพลาไรเซชัน M2 ของแมคโครฟาจ PPAR ได้กลายเป็นตัวควบคุมหลักของโพลาไรเซชัน M2 ในแมคโครฟาจ [24] PPAR Ligands มีผลยับยั้งการเจริญเติบโตของเนื้องอกในร่างกายอย่างมาก [25] Fizz1 และ Ym1 ต่างก็เป็นยีน M2-เช่น macrophage marker และ Fizz1 และ Ym1 มีส่วนเกี่ยวข้องกับการเกิดพังผืดระหว่างการซ่อมแซมเนื้อเยื่อ [26] M2-เช่นมาโครฟาจสร้าง CCL24 จำนวนมากในหลอดทดลอง [27] และการแสดงออกที่เพิ่มขึ้นของ CCL24 สามารถส่งเสริมการเพิ่มจำนวนของเนื้องอก การย้ายถิ่น และการบุกรุก [28] IRF4 เป็นสมาชิกของครอบครัว IRF มันมีส่วนร่วมในกระบวนการโพลาไรเซชัน M2 ของแมคโครฟาจ และทำหน้าที่เป็นตัวควบคุมเชิงลบของสัญญาณตัวรับแบบ Toll-like โดยการรวมกับโมเลกุลอะแดปเตอร์ MyD88 [29] MGL2 เป็นสมาชิกของมาโครฟาจในตระกูล Lectin ของกาแลคโตสชนิด C และยังแสดงออกในมาโครฟาจที่ถูกกระตุ้นภายใต้เงื่อนไขการเปิดใช้งานทางเลือก [30] ผลการศึกษานี้บ่งชี้ว่าสารสกัดจาก Cistanche Deserticola Deserticola ยับยั้ง PPAR ของยีนที่เกี่ยวข้องกับ M2 เช่น macrophage การแสดงออกของ Fizz1, Ym1, CCL24, IRF4 และ MGL2 ยับยั้งโพลาไรเซชันชนิด M2 ของ macrophages ซึ่งบ่งชี้ว่า Epimedium สามารถทำหน้าที่ได้อย่างมีประสิทธิภาพ ตัวยับยั้ง M2 เช่นแมคโครฟาจ มีหลักฐานมากขึ้นเรื่อยๆ ที่บ่งชี้ว่า M2-เช่นมาโครฟาจสามารถส่งเสริมการแพร่กระจายและการเจริญเติบโตของมะเร็ง [31] สื่อที่มีเงื่อนไขจาก M2-เช่น แมคโครฟาจสามารถจำลองสภาพแวดล้อมจุลภาคของเนื้องอก และกระตุ้นการย้ายถิ่นและการเจริญเติบโตของเนื้องอก ซึ่งคล้ายกับมาโครฟาจที่แยกได้จากเนื้องอกร้าย [12] IL-4 สามารถส่งเสริมโพลาไรเซชันของมาโครฟาจไปยังชนิด M2 และส่งเสริมการเพิ่มจำนวนของเนื้องอกและการสร้างเส้นเลือดใหม่ [18] การศึกษานี้แสดงให้เห็นถึงความสัมพันธ์ระหว่างโพลาไรเซชันของแมคโครฟาจกับฤทธิ์ต้านมะเร็งของ Cistanche Deserticola Deserticola สื่อที่มีเงื่อนไขจาก IL-4-มาโครฟาจที่เปิดใช้งานส่งเสริมการย้ายถิ่นและการเจริญเติบโตของเซลล์ 4T1 และหลังจากการแทรกแซงร่วมกับ Cistanche Deserticola กลับผลที่ส่งเสริมเนื้องอกที่เปิดใช้งาน M2-นี้ ซึ่งบ่งชี้ว่า IL{{55} }โพลาไรเซชัน M2 ที่เปิดใช้งานถูกกำจัดโดย Cistanche Deserticola

การศึกษานี้แสดงให้เห็นถึงความสัมพันธ์ระหว่างโพลาไรเซชันของแมคโครฟาจกับฤทธิ์ต้านมะเร็งของ Cistanche Deserticola Deserticola สื่อที่มีเงื่อนไขจาก IL-4-แมคโครฟาจที่เปิดใช้งานส่งเสริมการย้ายถิ่นและการเจริญเติบโตของเซลล์ 4T1 และหลังจากการแทรกแซงร่วมกับ Cistanche Deserticola กลับผลที่กระตุ้นเนื้องอกที่กระตุ้น M2-นี้ ซึ่งบ่งชี้ว่า IL{{7} }โพลาไรเซชัน M2 ที่เปิดใช้งานถูกกำจัดโดย Epimedium การศึกษานี้พบว่าสารสกัดจาก Cistanche Deserticola ยับยั้งการย้ายถิ่นของเซลล์และการก่อตัวของโคโลนีของมะเร็งเต้านมโดยการควบคุมโพลาไรเซชันของมาโครฟาจในหลอดทดลอง ซึ่งบ่งชี้ว่าการรักษามะเร็งเต้านมของ Cistanche Deserticola อาจเกี่ยวข้องกับการควบคุมของสภาพแวดล้อมจุลภาคของเนื้องอก และ Epimedium อาจทำหน้าที่เป็น ตัวควบคุมสภาพแวดล้อมขนาดเล็กของเนื้องอกที่บริเวณการแพร่กระจายโดยมีอิทธิพลต่อแมคโครฟาจ ซึ่งให้ข้อมูลเชิงลึกเกี่ยวกับกลไกใหม่สำหรับการทำงานต่อต้านเนื้องอกของ Cistanche Deserticola โดยเผยให้เห็นถึงกลไกที่มีศักยภาพใหม่ของ Cistanche Deserticola สำหรับการรักษามะเร็ง ซึ่งอาจช่วยลดอัตราการเกิดของ มะเร็งและการเสียชีวิตที่เกี่ยวข้องกับมะเร็ง ในอนาคต ทีมวิจัยจะสำรวจผลกระทบของ Cistanche Deserticola ต่อการเจริญเติบโตและการแพร่กระจายของมะเร็งเต้านมหลังจากยับยั้ง M2 โพลาไรเซชันของ macrophages ในร่างกาย เพื่ออธิบายเพิ่มเติมเกี่ยวกับกลไกการต่อต้านเนื้องอกของ Cistanche Deserticola และเป็นพื้นฐานสำหรับการประยุกต์ใช้ทางคลินิก Cistanche Deserticola ในการรักษาโรคเนื้องอก

อ้างอิง

อ้างอิง

[1] ผู้ทำงานร่วมกันด้านปัจจัยเสี่ยงมะเร็ง GBD 2019 ภาระทั่วโลกของมะเร็งที่เกิดจากปัจจัยเสี่ยง 2010-19: การวิเคราะห์อย่างเป็นระบบสำหรับการศึกษาภาระโรคทั่วโลก 2019 [J] มีดหมอ พ.ศ. 2565 400(10352): 563-591.

[2] Yin L, Duan JJ, Bian XW และคณะ การแบ่งชนิดโมเลกุลของมะเร็งเต้านมแบบ Triple-negative และความคืบหน้าในการรักษา [J] มะเร็งเต้านม Res, 2020, 22(1): 61.

[3] Medeiros B, Allan A L. กลไกระดับโมเลกุลของการแพร่กระจายของมะเร็งเต้านมไปยังปอด: มุมมองทางคลินิกและการทดลอง [J] Int J Mol Sci, 2019, 20(9): 2272.

[4] Pathria P, Louis TL, Varner J A. การกำหนดเป้าหมายมาโครฟาจที่เกี่ยวข้องกับเนื้องอกในมะเร็ง [J] Trends Immunol, 2019, 40(4): 310-327

[5] Shen MJ, Chen YB, Xu LJ และคณะ การแทรกซึมที่เพิ่มขึ้นของมาโครฟาจไปยังเซลล์มะเร็งปอดที่ทนต่อรังสีทำให้เกิดการพัฒนาความต้านทานเพิ่มเติมของเซลล์เนื้องอกต่อผลกระทบที่เป็นพิษต่อเซลล์ของเซลล์ NK [J] Int J Oncol, 2018, 53(1): 317-328.

[6] Tariq M, Zhang JQ, Liang GK และคณะ โพลาไรเซชันของมาโครฟาจ: กลยุทธ์ต่อต้านมะเร็งเพื่อกำหนดเป้าหมายมาโครฟาจที่เกี่ยวข้องกับเนื้องอกในมะเร็งเต้านม [J] เจ เซลล์ ไบโอเคม, 2017, 118(9): 2484-2501.

[7] ผลกระทบของ Ma Li ของ Cistanche Deserticola glycoside ต่อ stromal cell-derived factor-1 (SDF-1) และ CXCR ตัวรับของมัน-4 ในหนูที่มีภาวะหลอดเลือดสมองส่วนกลางตายเฉียบพลัน [D] Nanjing : มหาวิทยาลัยการแพทย์แผนจีนหนานจิง, 2014

[8] Hao Fuliang ผลกระทบและกลไกของ Cistanche Deserticola glycoside ต่อการซ่อมแซมและการรักษาข้อบกพร่องของกะโหลกกระต่าย [D] Shijiazhuang: Hebei Medical University, 2013

[9] He J, Zang SL, Liu N และคณะ Epimedium polysaccharides ลดความเป็นพิษต่อเม็ดเลือดโดยการลดความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชั่นและเสริมการทำงานของภูมิคุ้มกันในหนูทดลองแบบจำลองของความล้มเหลวของไขกระดูกที่เกิดจากเบนซีน [J] Biomed Pharmacother, 2020, 125: 109908.

[10] Hua Ciyi, Shi Youyang, Xie Ying และคณะ ความคืบหน้าการวิจัยเกี่ยวกับกลไกของ Cistanche Deserticola สารออกฤทธิ์ในการรักษามะเร็งเต้านม [J] ยาสมุนไพรจีน, 2022, 53 (20): 6593-6600

[11]Chen Xiaolei, Tang Lijian, Li Qinglin Study on the anti-proliferation of breast cancer cells by Cistanche Deserticola and frazil extracts in vitro [J] China Pharmacy, 2007, 18 (15): 1124-1127

[12] Xu F, Cui WQ, Wei Y และคณะ Astragaloside IV ยับยั้งการลุกลามของมะเร็งปอดและการแพร่กระจายโดยการปรับโพลาไรเซชันของมาโครฟาจผ่านการส่งสัญญาณ AMPK [J] J Exp Clin Cancer Res, 2018, 37(1): 207.

[13] Britt KL, Cuzick J, Phillips KA. ขั้นตอนสำคัญสำหรับการป้องกันมะเร็งเต้านมที่มีประสิทธิภาพ [J] ณัฐ เรฟ กรกฎ, 2020, 20(8): 417-436.

[14] Hao Feifei, Tian Sisheng Exploration of the "Yang Dominating Yin Following" in Malignant Tumor Metastasis Based the Theory of Gasification [J] Shi Zhen Guoyi Guoyao, 2021, 32 (1): 164-166

[15] Denk D, Petrocelli V, Conche C และคณะ การขยายตัวของทีเมมโมรี่สเต็มเซลล์ที่มีภูมิคุ้มกันต่อต้านเนื้องอกที่เหนือกว่าโดยไมโตฟากีที่เหนี่ยวนำโดยยูโรลิทิน เอ [J] ภูมิคุ้มกัน พ.ศ. 2565 55(11): 2059-2073

[16] Hinshaw DC, Shevde LA. สภาพแวดล้อมจุลภาคของเนื้องอกจะปรับเปลี่ยนการลุกลามของมะเร็งโดยกำเนิด [J] มะเร็ง Res, 2019, 79(18): 4557-4566

[17] DeNardo DG, Ruffell B. Macrophages ในฐานะผู้ควบคุมภูมิคุ้มกันของเนื้องอกและการบำบัดด้วยภูมิคุ้มกัน [J] ณัฐ เรฟ อิมมูนอล, 2019, 19(6): 369-382

[18] Dong R, Gong YL, Meng W และคณะ การมีส่วนร่วมของการยับยั้งโพลาไรเซชันของแมคโครฟาจ M2 ในผลกระทบทางเคมีป้องกันที่เป็นสื่อกลางของเฟนเรติไนด์ต่อมะเร็งลำไส้ [J] กรกฎ เล็ตต์, 2017, 388: 43-53 [19] Jiménez-Garcia L, Herránz S, Luque A และอื่น ๆ บทบาทที่สำคัญของ p38 MAPK ใน IL-4-ทำให้เกิดการเปิดใช้งานทางเลือกของมาโครฟาจทางช่องท้อง [J] Eur J Immunol, 2015, 45(1): 273-286.

[20] Ma ZG, Lian J, Yang M และคณะ การแสดงออกมากเกินไปของ Arginase-1 เป็นตัวบ่งชี้ถึงการพยากรณ์โรคที่ไม่ดีในผู้ป่วยมะเร็งลำไส้ใหญ่ [J] Pathol Res Pract, 2019, 215(6): 152383.

[21] Tao SF, Chen Q, Lin C และคณะ Linc00514 ส่งเสริมการแพร่กระจายของมะเร็งเต้านมและโพลาไรเซชัน M2 ของมาโครฟาจที่เกี่ยวข้องกับเนื้องอกผ่านทางเส้นทางการส่งสัญญาณ Notch ที่เป็นสื่อกลาง Jagged1- [J] J Exp Clin Cancer Res, 2020, 39(1): 191.

[22] Wei C, Yang CG, Wang SY และคณะ ครอสทอล์คระหว่างเซลล์มะเร็งและมาโครฟาจที่เกี่ยวข้องกับเนื้องอกเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการแพร่กระจายของมะเร็งลำไส้ใหญ่และทวารหนักที่อาศัยเซลล์ mesenchymal หมุนเวียน [J] มะเร็งมอล, 2019, 18(1): 64.

[23] Francque S, Szabo G, Abdelmalek MF และคณะ โรคตับอักเสบจากแอลกอฮอล์ที่ไม่มีแอลกอฮอล์: บทบาทของตัวรับที่กระตุ้นการทำงานของ peroxisome proliferator [J] Nat Rev Gastroenterol Hepatol, 2021, 18(1): 24-39

[24] Tian Y, Yang CM, Yao QY และคณะ Procyanidin B2 เปิดใช้งาน PPAR เพื่อกระตุ้น M2 โพลาไรเซชันในมาโครฟาจของเมาส์ [J] Immunol หน้า 2019 10: 1895

[25] Takada I, Makishima M. Peroxisome proliferator-activated receptor agonists and antagonists: การทบทวนสิทธิบัตร (ปัจจุบัน 2014-) [J] ความคิดเห็นของผู้เชี่ยวชาญ Ther Pat, 2020, 30(1): 1-13

[26] Okuzumi S, Miyata J, Kabata H และคณะ TLR7 agonist ยับยั้งการอักเสบที่อาศัยเซลล์ต่อมน้ำเหลืองแต่กำเนิดในกลุ่มที่ 2 ผ่านทาง IL-27-การผลิตมาโครฟาจคั่นระหว่างหน้า [J] Am J Respir Cell Mol Biol, 2021, 65(3): 309-318.

[27] Makita N, Hizukuri Y, Yamashiro K และคณะ IL-10 ปรับปรุงฟีโนไทป์ของมาโครฟาจ M2 ที่เกิดจาก IL-4 และให้ความสามารถในการเพิ่มการย้ายถิ่นของอีโอซิโนฟิล [J] Int Immunol, 2015, 27(3): 131-141.

[28] Jin L, Liu WR, Tian MX และคณะ CCL24 ก่อให้เกิดมะเร็ง HCC ผ่านทางเส้นทางการสร้างเส้นเลือดใหม่ RhoB-VEGFA-VEGFR2 และบ่งชี้ถึงการพยากรณ์โรคที่ไม่ดี [J] Oncotarget, 2017, 8(3): 5135-5148

[29] Satoh T, Takeuchi O, Vandenbon A และคณะ แกน Jmjd3-Irf4 ควบคุมโพลาไรเซชันของมาโครฟาจ M2 และการตอบสนองของโฮสต์ต่อการติดเชื้อพยาธิ [J] ณัฐ อิมมูนอล, 2553, 11(10): 936-944.

[30] Raes G, Brys L, Dahal BK และคณะ Macrophage galactose type C-type lectins เป็นตัวบ่งชี้ใหม่สำหรับ macrophages ที่เปิดใช้งานทางเลือกซึ่งเกิดจากการติดเชื้อปรสิตและการอักเสบของทางเดินหายใจ [J] J Leukoc Biol, 2005, 77(3): 321-327.

[31] Mantovani A, Allavena P, Sica A และอื่น ๆ การอักเสบที่เกี่ยวข้องกับมะเร็ง [J]. ธรรมชาติ, 2551, 454(7203): 436-444.