ซิสทานช์ โททัล ไกลโคไซด์ มีผลต่อการดมกลิ่นหรือไม่?

ติดต่อ:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

ผลของซิสทานเช่ โททัล ไกลโคไซด์ต่อเซลล์หุ้มจมูกของหนู และการหลั่งของปัจจัยเกี่ยวกับระบบประสาท

Li Chuangfeng, Guo Jinyu, Zhang Xu, Liu Yunnan

อาการบาดเจ็บที่ไขสันหลัง (SCI) เป็นการบาดเจ็บที่ส่วนกลางระบบประสาทคิดเป็น {{0}}.2 เปอร์เซ็นต์ —0.5 เปอร์เซ็นต์ของการบาดเจ็บทั้งหมด ในกระดูกสันหลังหักร้อยละ 16-40 มีความซับซ้อนจากอาการบาดเจ็บที่ไขสันหลัง มักทำให้ทุพพลภาพขั้นรุนแรง นำไปสู่ความยากลำบากในชีวิตประจำวันที่ส่งผลต่อคุณภาพชีวิตของผู้ป่วย และสร้างภาระใหญ่แก่ครอบครัวและสังคมดมกลิ่นเซลล์ห่อหุ้ม (OECs) เป็นกาวประสาทชนิดพิเศษ เซลล์พลาสม่าสามารถย้ายเข้าสู่สมองได้ด้วยดมกลิ่นแอกซอนของเส้นประสาทและสามารถหลั่งโกรทแฟคเตอร์ได้หลายอย่าง เช่น NGF, GDNF, BDNF, NT-3, neuropeptide-Y และ S-100 เนื่องจากลักษณะเหล่านี้ของดมกลิ่นเซลล์หุ้มฉนวน OEC ถือเป็นหนึ่งในเซลล์เมล็ดที่มีแนวโน้มว่าจะปลูกถ่ายเซลล์เพื่อซ่อมแซม SCI ปัจจุบันการรักษา SCI ด้านเวชศาสตร์ฟื้นฟูเป็นหลักโดยอาศัยการฟื้นฟูแบบองค์รวมเป็นหลัก เพื่อที่จะหาวิธีที่มีประสิทธิภาพมากขึ้น การวิจัยต่อไปนี้ได้ดำเนินการเกี่ยวกับผลกระทบของcistancheทั้งหมดไกลโคไซด์ใน OEC:

Cistanche Total glycoside สำหรับเซลล์ห่อหุ้มกลิ่น

1 วัสดุและวิธีการ

1.1 วัสดุทดลอง

หนู Wistar (จัดทำโดย Animal Center of Inner Mongolia University);cistancheทั้งหมดไกลโคไซด์, DMEM/F12 medium, fetal calf serum (FCS), poly-D-lysine, arabinoside (Ara-C), trypsin, D -Hanks solution, rabbit anti-p75NGFR (Santa Cruz), ELISA kit (Promega), cell incubator (Thermo-HEPA Class 100), กล้องจุลทรรศน์แบบเฟสคอนทราสต์แบบกลับหัว (Olympus CKX41, Japan), โต๊ะทำงานที่สะอาดเป็นพิเศษ (Suzhou Antai Air Technology Co., Ltd.) บริษัท SW-CJ-2FD), เอนไซม์ เครื่องวิเคราะห์ฉลาก (Wellscan MKH), โฟลว์ไซโตมิเตอร์ ฯลฯ

1.2 วิธีการวิจัย

1.2.1 วัฒนธรรม OEC การทำให้บริสุทธิ์ และการระบุ: หนู Wistar ถูกสังเวยโดยการตัดหัวและแช่ในไวน์เป็นเวลา 5 นาที กะโหลกศีรษะด้านหน้าถูกเปิดออกเผยให้เห็นดมกลิ่นหลอดไฟ ทั้งสองดมกลิ่นหลอดไฟถูกเอาออกอย่างสมบูรณ์ภายใต้กล้องจุลทรรศน์แบบผ่า ล้างในสารละลายดีแฮงค์ ตัดดมกลิ่นหลอดไฟด้วยกรรไกรขนาดเล็ก เติมตับอ่อนร้อยละ 0.25 เปอร์เซ็นต์ 2 มล. และฟักที่อุณหภูมิ 37 องศาเป็นเวลา 20 นาที เพิ่มอาหารเลี้ยงเชื้อ D MEM/F12 ที่มีซีรั่มลูกวัว 10 เปอร์เซ็นต์ ลงในหลอดปั่นแยก 2 มล. การย่อยอาหารสิ้นสุดลงตรงกลาง ปิเปตบัสดูดเนื้อเยื่อที่ย่อยไม่สมบูรณ์ที่ 800 รอบต่อนาทีและหมุนเหวี่ยงเป็นเวลา 5 นาที ทิ้งส่วนเหนือตะกอน ในที่สุดก็ใช้สื่อที่ปรับสภาพแล้ว (20 เปอร์เซ็นต์ FCS บวก 20|i, mol/LForskolin บวก 20|ig/mlBPE บวก DMEM /F12) ทำให้กลายเป็นสารแขวนลอยเซลล์เดียว lx 107ml ฉีดวัคซีนในขวดเพาะเลี้ยงเซลล์เคลือบโพลีไลซีน วาง ในตู้อบ 37 องศา 5 เปอร์เซ็นต์ CO2 แล้วเติม Arc Purification ที่ 36 ชม. ใช้ anti-p75E ของกระต่ายและแอนติบอดีรอง IgG รองแพะต้านกระต่าย IgG ที่ติดฉลาก FITC สำหรับการระบุเซลล์อิมมูโนฮิสโตเคมีและการสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง

1.2.2 ใช้ MTT และโฟลว์ไซโตเมทรีเพื่อกำหนดผลกระทบของซิสแทนเช่ โททัล ไกลโคไซด์บนดมกลิ่นห่อหุ้มเซลล์: ฉีดวัคซีนที่เพาะเลี้ยงและทำให้บริสุทธิ์ดมกลิ่นการหุ้มเซลล์ในจานหลุม 96-หลุมที่ 1X106 และเติมซิสแทนเช่ โททัล ไกลโคไซด์(ความเข้มข้นของการดำเนินการคือ Ijig/ml, 10 มก./มล., 100 มก./มล.) วัดค่า OD และวัดไซโตเมตรีการไหลของเซลล์หลังจากผ่านไป 24 ชม. ตั้งค่ากลุ่มควบคุมและซิสทานเช่ โททัล ไกลโคไซด์กลุ่มความเข้มข้นที่แตกต่างกัน: กลุ่ม A (กลุ่มควบคุม): อาหารเลี้ยงเชื้อที่มีเซรั่มใช้เป็นตัวควบคุมเชิงลบ กลุ่ม บี (ซิสแทนเช่ โททัล ไกลโคไซด์กลุ่มความเข้มข้นต่ำ: llig/ml); กลุ่ม C (กลุ่มความเข้มข้นปานกลางของซิสแทนเช่รวมไกลโคไซด์: L10jxg/MK); กลุ่มดี (ซิสแทนเช่ โททัล ไกลโคไซด์กลุ่มที่มีความเข้มข้นสูง: 100|xg/mlo): 15 หนูในแต่ละกลุ่ม

1.2.3 การหาปริมาณปัจจัย neurotrophic ใน supernatant โดย ELISA: เพาะเชื้อที่เพาะเลี้ยงและทำให้บริสุทธิ์ดมกลิ่นการหุ้มเซลล์ใน6-เพลตหลุมที่ 1x106, addซิสแทนเช่ โททัล ไกลโคไซด์(ความเข้มข้นเดียวกับด้านบน) หลังจาก 24 ชั่วโมงและดำเนินการเป็นเวลา 24 ชั่วโมง และรวบรวมส่วนเหนือตะกอนแยกจากกัน บันทึกไว้ที่ -80 ยาว เนื้อหาของปัจจัยการเจริญเติบโตของเส้นประสาทในของเหลวถูกกำหนดโดยวิธี ELISA

1.3 การวิเคราะห์ทางสถิติ

ข้อมูลในการศึกษานี้ถือเป็นข้อมูลการวัด และข้อมูลที่ได้รับจะแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ± ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน และใช้ซอฟต์แวร์ทางสถิติ SPSS 110 สำหรับการวิเคราะห์ทางสถิติ ข้อมูลที่ได้รับจะถูกวิเคราะห์โดยการวิเคราะห์ความแปรปรวนและ P<0.05 indicates="" that="" there="" is="" a="" significant="">

2 ผลลัพธ์

2.1 ผลกระทบของcistancheไกลโคไซด์ทั้งหมดบนดมกลิ่นห่อหุ้มเซลล์

2.1.1 ผลการกำหนดวิธีเมทิลออกซาโซลิล เตตราโซล (MT): กลุ่ม A: 0.617±0.149; กลุ่ม B: 0.589±0.147; กลุ่ม C: 0.761±0.138; กลุ่ม D: 0.732±0.234 เปรียบเทียบระหว่างซิสทานเช่ โททัล ไกลโคไซด์ group (B) and Control group (A), P>0.05 ความแตกต่างไม่มีนัยสำคัญซิสทานเช่ โททัล ไกลโคไซด์10 มก./มล., กลุ่มความเข้มข้น 100 มก./มล. (C, D) เปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม (A) P<0.05, the="" difference="" is="">

2.1.2 ผลลัพธ์ของการกำหนดโฟลว์ไซโตเมทรีแสดงในรูปที่ 1 เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมซิสแทนเช่ โททัล ไกลโคไซด์กลุ่มสูงกว่ากลุ่มควบคุม และเปอร์เซ็นต์ของเซลล์ apoptotic ต่ำกว่ากลุ่มควบคุม

2.2 ผลลัพธ์การทดสอบอิมมูโนดูดซับที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ (ELISA)

ผลการทดสอบแสดงให้เห็นว่าเนื้อหาของปัจจัย neurotrophic ที่ได้มาจากเซลล์เกลีย (GDNF): ก่อนการให้ยา: 302.1±16.6 pg/ml, กลุ่ม A: 340.5±13.2pg/ml; กลุ่ม B: 333.2±23.6pg/ml; กลุ่ม C: 355.2±17.6pg/ml; กลุ่มดี; 379.2±15.3pg/มล. เมื่อเทียบกับการบริหารล่วงหน้า เนื้อหา GDNF เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม (A) เนื้อหา GDNF ของซิสทานเช่ โททัล ไกลโคไซด์กลุ่มความเข้มข้น 100 มก./มล. (D) เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ

3 การอภิปราย

ความยากในการงอกใหม่ของซอนเป็นหนึ่งในสาเหตุหลักที่ทำให้ยากต่อการฟื้นตัวหลังจากได้รับบาดเจ็บที่ไขสันหลัง OEC มีบทบาทในการสร้างเซลล์ประสาทส่วนกลางขึ้นใหม่ซึ่งเซลล์ประเภทอื่นยากที่จะแทนที่ ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมาการวิจัยของดมกลิ่นเซลล์ห่อหุ้มกลายเป็นจุดร้อนดมกลิ่นเซลล์ห่อหุ้มเป็นเซลล์เกลียชนิดพิเศษที่มีลักษณะของเซลล์ชวานและแอสโทรไซต์ มีต้นกำเนิดมาจากดมกลิ่นเมมเบรนชั้นใต้ดินและกระจายอยู่ทั่วไปบนพื้นผิวของดมกลิ่นเมือก,ดมกลิ่นเส้นประสาทและดมกลิ่นหลอดไฟ มีความสามารถในการแบ่งแยกและสร้างใหม่ได้ตลอดชีวิตและสามารถติดตามดมกลิ่นแอกซอนเพื่อย้ายเข้าสู่สมอง แอกซอนของดมกลิ่นเส้นประสาทสามารถผ่านรอยต่อระหว่างระบบประสาทส่วนปลายกับระบบประสาทส่วนกลางได้ทุกๆ 30-60 วัน และเติบโตใหม่เป็นดมกลิ่นปลอกและสร้างการเชื่อมต่อ synaptic4.ดมกลิ่นเซลล์ห่อหุ้มสามารถหลั่งโกรทแฟคเตอร์ได้หลายอย่าง เช่น NGF, BDNF, GDNF, NT-3, neuropeptide-Y และ S-100 การศึกษาพบว่าปัจจัยการเจริญเติบโตของเส้นประสาท (NGF) สามารถป้องกันเซลล์ประสาทนิวเคลียสสีแดงเกี่ยวกับกระดูกสันหลังจากการฝ่อและเสริมสร้างระบบทางเดินไขสันหลังอักกระดูกและส่งเสริมการงอกใหม่ของทางเดินเส้นประสาทไขสันหลังนิวเคลียส ทั้ง neurotrophic factor ที่ได้รับจากสมอง (BDNF) และ neurotrophin-3 (NT-3) สามารถป้องกันการตายของเซลล์ไขสันหลังนิวเคลียสในหนูที่โตเต็มวัยที่มีอาการบาดเจ็บ axotomized และช่วยชีวิตเซลล์ประสาทที่กำลังจะตาย และส่งเสริมการงอกใหม่ของแอกซอน P นอกจากนี้,ดมกลิ่นเซลล์หุ้มฉนวนยังแสดงปัจจัยอื่นๆ บนเยื่อหุ้มเซลล์ เช่น ปัจจัยการยึดเกาะของเซลล์ประสาท (N-CAM) ซึ่งเกี่ยวข้องกับการยึดเกาะของเซลล์และการเติบโตของซอน เนื่องจากลักษณะเหล่านี้ของดมกลิ่นเซลล์หุ้มฉนวน OEC ถือเป็นหนึ่งในเซลล์เมล็ดที่มีแนวโน้มว่าจะปลูกถ่ายเซลล์เพื่อซ่อมแซม SCI

องค์ประกอบทางเคมีของCistancheส่วนใหญ่ประกอบด้วย phenylethanoid glycosides, iridoids, ส่วนประกอบที่ระเหยได้, lignans, polysaccharides และ alkaloids จากการศึกษาพบว่าCistancheและส่วนประกอบทางเคมีของมันมีผลในการป้องกันระบบประสาท เติ้งและคณะ ศึกษาผลของ tubulosa B ต่อการตายของเซลล์ SH-SY5Y ที่เกิดจากปัจจัยเนื้อร้ายของเนื้องอก (TNF) ผลการวิจัยพบว่าหลังจาก 100ug/ เซลล์ประสาท SH-SY5Y หลังจาก 36 ชั่วโมงของการรักษาด้วย TNF โดย L มีลักษณะเฉพาะของการตายของเซลล์ ในขณะที่การรักษา tubulin B เป็นเวลา 2 ชั่วโมงสามารถลดการตายของเซลล์ที่เกิดจาก TNF ได้อย่างมีนัยสำคัญ นอกจากนี้ การศึกษายังแสดงให้เห็นว่า phenylethanoid glycosides สามารถยับยั้งการตายของเซลล์เม็ดพลาสติกในหนูน้อยได้โดยการยับยั้ง caspase-3 และ caspase-8 และกับ C57 mouse black ที่เกิดจาก methyl phenyl tetrahydropyridine (MPTP) ความเสียหายของเซลล์ประสาทโดปามีนที่มีคุณภาพมีผลในการป้องกัน ไม่เพียงแค่นั้น แต่Cistancheยังสามารถบรรเทาความเสียหายต่างๆ เช่น การขาดเลือดกลับคืนของระบบประสาท การทดลองการบาดเจ็บของสมองขาดเลือดในหนูทดลองแสดงให้เห็นว่าช่วงกล้ามเนื้อหัวใจตาย 24 ชั่วโมงและ 48 ชั่วโมงหลังขาดเลือดในกลุ่มภาวะขาดเลือดในสมองกลับคืนสู่สภาพปกติคือ 72.98 เปอร์เซ็นต์ และ 60.45 เปอร์เซ็นต์โดยเฉลี่ย ในทางตรงกันข้ามcistancheรวมกลุ่มไกลโคไซด์ขนาดใหญ่ กลาง และต่ำ (250.0mg·kg/d; 125.0mg·kg/d; 62.5mg·kg/d) ตามลำดับ สามารถทำให้สมองของหนูทดลองได้ หลังจากขาดเลือดในสมอง-กลับ 24 ชั่วโมง ขนาดของกล้ามเนื้อหัวใจตายลดลงเหลือ 25.94 เปอร์เซ็นต์ 25.81 เปอร์เซ็นต์ และ 31.13 เปอร์เซ็นต์ และขนาดกล้ามเนื้อในสมองลดลงเหลือ 22.14 เปอร์เซ็นต์ 20.06 เปอร์เซ็นต์ และ 22.27 เปอร์เซ็นต์ หลังจาก 48 ชั่วโมง มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างทั้งสอง โดยแสดงผลการยับยั้งที่มีนัยสำคัญต่อการตายของเซลล์ประสาท

ในการศึกษานี้ความเข้มข้นต่างๆ ของซิสแทนเช่ โททัล ไกลโคไซด์ถูกนำไปใช้กับ OEC วิธี MTT และการวัดโฟลว์ไซโตเมทรียืนยันว่า 10 มก./มล. 100 มก./มลซิสแทนเช่ โททัล ไกลโคไซด์สามารถส่งเสริมการแพร่กระจายของดมกลิ่นห่อหุ้มเซลล์ ผลของโฟลว์ไซโตเมทรีพบว่าซิสแทนเช่ โททัล ไกลโคไซด์สามารถส่งเสริมการแพร่กระจายของดมกลิ่นห่อหุ้มเซลล์ ส่วนใหญ่ส่งเสริมการงอกของวัฏจักร G1 ของดมกลิ่นเซลล์อสุจิและลดเซลล์ apoptotic ลงอย่างมาก ดังนั้น,ซิสทานเช่ โททัล ไกลโคไซด์ไม่เพียงแต่ส่งเสริมการแพร่ขยายของดมกลิ่นห่อหุ้มเซลล์ แต่ยังเพิ่มกิจกรรมของเซลล์และยับยั้งการตายของเซลล์ การทดสอบอิมมูโนดูดซับที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์พิสูจน์ให้เห็นว่าซิสทานเช่ โททัล ไกลโคไซด์สามารถส่งเสริมการหลั่งของ GDNF ได้อย่างมีนัยสำคัญโดยดมกลิ่นห่อหุ้มเซลล์ ผลลัพธ์ข้างต้นเป็นพื้นฐานการทดลองสำหรับการประยุกต์ใช้ทางคลินิกของซิสทานเช่ โททัล ไกลโคไซด์.

อ้างอิง

[1] Qiu Weihong, Zhu Hongxiang, Zhang Baixiang, และคณะ ปัจจัยที่มีผลต่อคุณภาพชีวิตของผู้ป่วยบาดเจ็บไขสันหลังในระหว่างการพักฟื้น [J] Chinese Journal of Rehabilitation Medicine, 2009, 4(24): 313.

[2] Richter MW, Fletcher PA, Liu J และอื่น ๆ ลามิน่าโพรเพียและดมกลิ่นเซลล์หุ้มฝักตัววัวแสดงการรวมตัวและการย้ายถิ่นที่แตกต่างกัน และส่งเสริมการแตกหน่อของซอนในไขสันหลังที่มีรอยโรค[J] เจ Neurosci,2005.25(46):10700 -10711.

[3] Fairless R, Bamet SC. เซลล์รับกลิ่น: บทบาทในการซ่อมแซมระบบประสาทส่วนกลาง[J.Int J Biochem Cell Biol. 2005,37(4):693-699.

[4] Chen X, Fang H. Schwob JE. Multipotency ของการทำให้บริสุทธิ์ เซลล์ฐานกลูโคสที่ปลูกถ่ายในดมกลิ่นเยื่อบุผิว[J]. เจคอมป์ Neurol,2004, 46914):457-474.

[5] ลา พี, โจนส์ แอล. Tuszynski MH. BDNF-แสดงเซลล์มารอสโตรมอล; สนับสนุนการเจริญเติบโตของแกนซอนอย่างกว้างขวางที่บริเวณที่มีอาการบาดเจ็บที่ไขสันหลัง[J] ประสบการณ์ Neurol, 2005,191(2):344—360.

[6] เติ้งเอ็ม, Zhao JY, Ju XD และอื่น ๆ ผลการป้องกันของ tubulosa B ต่อการตายของเซลล์ที่เกิดจาก TNF ในเซลล์ประสาท[J] Acta Pharmacol บาป,2004,25(102 1276

[7] TianXue-Fei, ผู่เซียวปิงฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์จากCistanchesซัลซ่ายับยั้งการตายของเซลล์ที่เกิดจาก 1-เมทิล-4-ฟีนิลไพริดิเนียมไอออนในเซลล์ประสาท[J] เจ เอธโนฟาร์มาคอล,2005,97 (1):59.

[8] Geng X, เพลง L.Pu X, et al. ฤทธิ์ป้องกันระบบประสาท