การต่อต้านการตายของพอพโทซิสของพอดไซต์และโปรอะพอพโทซิสของเซลล์มีแซนเจียลสำหรับเทลมิซาร์แทนในการบรรเทาการบาดเจ็บของไตจากเบาหวาน

เชิงนามธรรม

ความเสียหายของ Podocyte และการขยายตัวของเซลล์ mesangial เป็นอาการทางพยาธิวิทยาที่สำคัญสองประการของการบาดเจ็บของไตในเบาหวานระยะแรก Telmisartan เป็นตัวยับยั้งตัวรับ angiotensin ประเภท 1 (AT1) สามารถปรับปรุงผลิตภัณฑ์ glycation end (AGE) ขั้นสูงหรือ angiotensin Ⅱ (Ang Ⅱ) - การบาดเจ็บของ podocyte ที่เกิดจากการหลุดออกหรือการตายของเซลล์ ในบทความปัจจุบันนี้ ก่อนอื่นเราได้ยืนยันผลการป้องกันของเทลมิซาร์แทนต่อการบาดเจ็บของไตที่เป็นเบาหวานระยะแรกในหนูที่เป็นเบาหวานชนิดที่ 1 Telmisartan ลดการสูญเสียของ podocin และยับยั้งการแสดงออกของ -SMA ซึ่งสะท้อนถึงผลการป้องกันต่อการบาดเจ็บของ podocyte และการแพร่กระจายของ mesangial ตามลำดับ ที่น่าสนใจกว่านั้นเราสังเกตเห็นผลตรงกันข้ามของ telmisartan ต่อความมีชีวิตของเซลล์และการตายของเซลล์พอดไซต์และเซลล์ mesangial ในสภาพแวดล้อมที่มีกลูโคสสูง ในหลอดทดลอง ฤทธิ์ต้านการตายของเซลล์ของเทลมิซาร์แทนต่อพอดไซต์อาจเกี่ยวข้องกับการยับยั้ง swiprosin-1 (โปรตีนที่สามารถไกล่เกลี่ยการตายของเซลล์พอดไซต์ที่เกิดจากน้ำตาลกลูโคสสูง) ในขณะที่เทลมิซาร์แทนกระตุ้นการแสดงออกของ PPAR ในระดับสูงในเซลล์ mesangial และ GW9662 (ตัวต้าน PPAR) ยับยั้งการตายของเซลล์ที่กระตุ้นด้วยเทลมิซาร์แทนบางส่วนและลดความมีชีวิตของเซลล์มีแซนเจียล นอกจากนี้ การแสดงออกของ PKC 1/TGF 1 ที่เกิดจากกลูโคสสูงในเซลล์ mesangial อาจถูกขัดขวางโดย telmisartan ข้อมูลเหล่านี้ให้กลไกระดับเซลล์ที่แม่นยำยิ่งขึ้นในการเปิดเผยผลการป้องกันของเทลมิซาร์แทนในการบาดเจ็บของไตจากเบาหวาน

คำสำคัญ

โรคไตจากเบาหวาน, พอดไซต์ (MeSH: D050199), เซลล์มีแซนเจียล, เทลมิซาร์แทน (PubChem CID: 65, apoptosis

คลิกที่นี่เพื่อซื้อผลิตภัณฑ์ Cistanche

การแนะนำ

โรคไตจากเบาหวาน (DKD) หรือที่รู้จักกันดีในชื่อโรคไตเรื้อรังที่เกิดจากเบาหวาน (DM) ชนิดที่ 1 หรือ 2 (Podgórski et al., 2019) อาจทำให้อัตราการกรองของไต (GFR) ลดลงอย่างต่อเนื่องและแย่ลงในที่สุด - โรคไตวายเรื้อรัง (Hou et al., 2018; Ruiz-Ortega et al., 2020; Expert Group of Chinese Society of Nephrology, 2021) มีสองกลไกที่น้ำตาลในเลือดสูงไกล่เกลี่ยผ่านการบาดเจ็บของไตพอดไซต์และการเปลี่ยนแปลงของเยื่อหุ้มชั้นใต้ดินของไต (GBM) ที่เกิดจากการขยายตัวหรือการแพร่กระจายของเซลล์ mesangial (Anders et al., 2018)

Podocytes เป็นเซลล์เยื่อบุผิวอวัยวะภายในที่เชี่ยวชาญ ซึ่งบุชั้นนอกของ GBM ซึ่งกระบวนการของเท้าจะประสานกันเป็นอุปสรรคในการป้องกันการสูญเสียโปรตีนในปัสสาวะ (Podgórski et al., 2019) มีการศึกษาจำนวนและ/หรือความหนาแน่นของ glomerulus แต่ละอันในผู้ป่วย DM (Papadopoulou-Marketou et al., 2017) การบาดเจ็บที่พอดไซต์มีส่วนทำให้สูญเสียคุณสมบัติการยึดเกาะและเป็นสาเหตุหลักของการพัฒนา DKD (Podgórski et al., 2019) ลักษณะเด่นอีกประการของพอโดไซต์คือพอโดไซต์ที่โตเต็มที่มีเซลล์เพิ่มจำนวนจำกัด (Podgórski et al., 2019), (Griffin et al., 2003) การสูญเสียพอดไซต์นำมาซึ่งการเพิ่มจำนวนของเซลล์ mesangial อย่างไรก็ตาม การสูญเสียจำนวนมากจะนำไปสู่การเกิดพังผืดที่ไตและการเพิ่มขึ้นของโปรตีนในปัสสาวะเนื่องจากการปฏิเสธของ GBM ที่ตามมา (Fukuda et al., 2012) การควบคุมระดับน้ำตาลในเลือดไม่ดีส่งผลให้เกิด podocytopathy (Anders et al., 2018), การเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาที่โดดเด่นด้วย podocytes hypertrophy, podocyte epithelial-mesenchymal transdifferentiation (Chang et al., 2017), podocytes detachment (Zhang et al., 2020), podocytes apoptosis ( Wang et al., 2018a) และการสูญเสีย podocytes ซึ่งนำไปสู่ความผิดปกติของ podocytes ที่ก้าวหน้าส่งผลให้ GBM หลุดออกพร้อมกับ glomerulosclerosis ที่ตามมา

เซลล์มีแซนเจียลมีผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญไม่เพียงแต่ต่อการปรับการไหลเวียนของไตและภายในไตเท่านั้น แต่ยังรวมถึงการอนุรักษ์ของโกลเมอรูไลด้วย เช่น การป้องกันเซลล์บุผนังหลอดเลือดของไตและการไหลออกของสารจากซีรั่มและของเหลวจากไมโครเวเซล (Wakisaka et al., 2021) GBM ที่หนาขึ้นและ mesangial ที่ขยายตัวเป็นความบกพร่องของไตที่สังเกตเห็นได้ชัดเจนในโรคเบาหวาน (Papadopoulou-Marketou et al., 2017) การหนาตัวของ GBM เป็นการตรวจทางจุลพยาธิวิทยาระยะแรกใน DKD และได้รับผลกระทบจากรายได้ที่ผิดปกติและการแปรผันของเมทริกซ์นอกเซลล์ที่หลั่งออกมาจากเซลล์บุผนังหลอดเลือดและพอดไซต์ (Anders et al., 2018) ภาวะน้ำตาลในเลือดสูงกระตุ้นให้เซลล์ mesangial เพิ่มจำนวนและสร้างเมทริกซ์ (Kriz et al., 2017) ผ่านการเปิดใช้งานของทรานสฟอร์มมิ่งโกรทแฟกเตอร์- (TGF) ซึ่งทำให้เกิดการกระตุ้นการถอดรหัสของเมทริกซ์คอลลาเจนโดยตรง (Ziyadeh et al., 2000) ทำให้เกิดการขยายตัวของ mesangial เมทริกซ์

การให้ยาลดน้ำตาลในเลือดและยาลดความดันโลหิตแต่เนิ่นๆ มีประโยชน์ในการชะลอการเกิดและการพัฒนาของ DKD (Martins and Norris, 2001) แนะนำเป็นพิเศษในผู้ใหญ่ที่มีความดันโลหิตปกติที่มี DM และอัลบูมินูเรียคือตัวยับยั้งเอนไซม์ที่ทำให้เกิด angiotensin-converting (ACEI) หรือ angiotensin receptor blocker (ARB) (Liew et al., 2020) การปิดล้อมของระบบเรนิน-แองจิโอเทนซินช่วยปรับปรุงการแสดงออกของ ANGPTL2 และอินทิกรินซึ่งรักษาสิ่งกีดขวางไต (Tawfik et al., 2021) เหตุผลที่เลือก telmisartan คืออธิบายว่ามีประสิทธิภาพมากกว่ายา ARB อื่น ๆ ในการบรรเทาภาวะโปรตีนในปัสสาวะ (Naruse et al., 2019; Guo et al., 2020) นอกจากนี้ telmisartan สามารถลดความเป็นพิษต่อไตที่เกิดจากซิสพลาติน เช่น การตายของเซลล์พอดไซต์ และระดับการแสดงออกของโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับการดูดเลือดอัตโนมัติ (Malik et al., 2015) ที่น่าทึ่งคือ telmisartan มีลักษณะดังกล่าวโดยคำนึงถึงบทบาทคู่ของมันในการปิดกั้นการทำงานของตัวรับ AT1 และคุณสมบัติพิเศษของตัวรับที่กระตุ้นการทำงานของ peroxisome proliferator (PPAR) (Balakumar et al., 2012) เป้าหมายของบทความนี้คือเพื่อตรวจสอบอิทธิพลในการป้องกันของ telmisartan ต่อการบาดเจ็บของ podocyte และการขยายตัวของ mesangial ในระยะแรกของ DM ประเภท 1 ตามลำดับ

ผงซิสแตนช์

วัสดุและวิธีการ

1. สัตว์

ซื้อหนู SD ตัวผู้จาก SLRC Laboratory Animal Ltd. (เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน) หนูถูกเลี้ยงไว้ที่อุณหภูมิควบคุม 22 ± 2 องศาเซลเซียส ความชื้นสัมพัทธ์ 50–60 เปอร์เซ็นต์ 12-h light and 12-h dark cycles (light, 08:00–20 :00, ความมืด, 20: 00–08:00) และอนุญาตให้เข้าถึงอาหารแห้งมาตรฐานและน้ำประปาได้ฟรี สัตว์ทุกตัวได้รับการดูแลอย่างมีมนุษยธรรม และโปรโตคอลการทดลองได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการการดูแลสัตว์แห่งมหาวิทยาลัยแพทย์ทหารเรือ

2. รูปแบบและการรักษาโรคเบาหวาน

Weight 180–200 g male rats were treated with STZ (Sigma, Deisenhofen, Germany) to induce type 1 diabetes. STZ was dissolved in sterile citrate buffer (pH 4.5) and injected intraperitoneally (65 mg/kg body weight) within 10 min of preparation. The non-diabetic rats initially injected with STZ vehicles served as controls (group Con, n = 10). Diabetes mellitus was confirmed by measuring glucose levels in tail venous blood using a B-glucose analyzer (HemoCue, Angelholm, Sweden) 7 days later. Rats with random blood glucose levels>รวม 16.7 mmol / L ในการทดลอง

จากนั้นหนูที่เป็นเบาหวานได้รับ telmisartan (Merck, PHR 1855, 10 mg kg−1 ·d−1 po, group DM plus Tel, n=10) หรือกระสายยา (group DM, n=10) โดย gavage เป็นเวลา 4 สัปดาห์ Telmisartan ที่ใช้ในบทความนี้ได้มาจาก Sigma-Aldrich Germany, Inc. ซึ่งมีความบริสุทธิ์ 98 เปอร์เซ็นต์บวก (HPLC) วัดระดับน้ำตาลในเลือดและน้ำหนักตัวเป็นระยะ ๆ และเก็บตัวอย่างปัสสาวะสำหรับการวัดปริมาณอัลบูมินูเรียในเชิงปริมาณในกรงเมตาบอลิซึม หนูถูกสังเวยภายใต้การดมยาสลบหลังจาก 4 สัปดาห์ ไตถูกเอาออกและชั่งน้ำหนักสำหรับการวิเคราะห์ทางเนื้อเยื่อและการสกัดโปรตีน

3. อัลบูมินในปัสสาวะ

ตัวอย่างปัสสาวะถูกหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาทีเพื่อกำจัดสารที่ไม่ละลายน้ำ ส่วนเหนือตะกอนถูกแบ่งส่วนและเก็บไว้ที่ −80 องศาเซลเซียสจนกว่าจะใช้ ชุด ELISA สำหรับอัลบูมินในปัสสาวะของหนูจาก Chondrex (Redmond, WA) ถูกใช้ตามคำแนะนำของผู้ผลิต

4. อัตราการกวาดล้าง Creatinine

ชุดทดสอบ Creatinine (Nanjing Jiancheng, C011-2-1) ใช้สำหรับการตรวจหา Creatinine ในเลือดและปัสสาวะ Ccr คำนวณตามสูตร: Ccr=(ครีเอตินินในปัสสาวะ*ปริมาณปัสสาวะ 24 ชม.)/(ครีเอตินินในเลือด*24 ชม.*60 นาที/ชม.)/น้ำหนักสุดท้าย (กก.)

5. การย้อมสีอิมมูโนฮิสโตเคมีและ TUNEL

ไตถูกตัดในไมโครโทมสไลซ์ที่ขนาด 7–8 ไมโครเมตร และแก้ไขด้วยพาราฟอร์มัลดีไฮด์ 4 เปอร์เซ็นต์ใน PBS เป็นเวลา 10 นาที มีการบล็อกด้วยบัฟเฟอร์ (PBS, 2 เปอร์เซ็นต์ BSA, 10 เปอร์เซ็นต์ FBS) เป็นเวลา 1 ชั่วโมงตามด้วยการบ่ม 10 นาทีด้วยบัฟเฟอร์ที่สอง (PBS, 0.4 เปอร์เซ็นต์ Triton) แอนติบอดีหลักที่ต่อต้าน -SMA (Servicebio, GB13044) หรือ NPHS2 (Abcam, ab229037) ได้รับการบ่มเป็นเวลา 3 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องในห้องที่มีความชื้น หลังจากการล้าง ส่วนต่าง ๆ ถูกบ่มด้วย Cy3 แพะที่ต้าน IgG (H บวก L) (Servicebio, GB21301), HRP คอนจูเกตแพะที่ต่อต้าน IgG (H บวก L) (Servicebio, GB23303) หรือ TUNEL อิมมูโนฟลูออเรสเซนต์ (Servicebio, G1501 ) ปฏิกิริยาในห้องชื้น (มืด 37 องศา 1 ชั่วโมง) จากนั้น ส่วนต่างๆ จะถูกยับยั้งด้วย DAPI (Servicebio, G1012) สำหรับการตรวจจับนิวเคลียส ในที่สุด ส่วนที่เปื้อนถูกฝังอยู่ในความต้านทานต่อของเหลวปิดผนึกดับฟลูออเรสเซนส์ และถ่ายภาพโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์ (NIKON ECLIPSE C1 ประเทศญี่ปุ่น)

สารสกัดจากซิสแตนช์

6. การเพาะเลี้ยงเซลล์

เซลล์ mesangial ของไตมนุษย์ (HRMCs) ได้มาจากห้องปฏิบัติการวิจัย ScienCell, Santiago, CA และเพาะเลี้ยงใน Mesangial Cell Medium (MsCM, ScienCell Research Laboratories) HRMCs ถูกชุบบนขวดเคลือบโพลี-แอล-ไลซีน (2 ug/cm2 ) และปลูกที่อุณหภูมิ 37 องศาในบรรยากาศที่มีความชื้นซึ่งมี CO2 5 เปอร์เซ็นต์ เซลล์ในการทดลองนี้ถูกใช้ภายใน 3-4 ตอนและได้รับการตรวจสอบเพื่อให้แน่ใจว่าเซลล์เหล่านี้แสดงลักษณะเฉพาะของเซลล์มีเซนเจียล สายเซลล์พอดไซต์ของเมาส์ MPC-5 ได้มาจาก ATCC รัฐแมรี่แลนด์ สหรัฐอเมริกา เซลล์ถูกปลูกบนคอลลาเจนชนิดที่ 1 ใน RPMI 1640 (10 เปอร์เซ็นต์ FBS) ด้วย 50 U/ml IFN- ที่ 33 องศาถึง 85 เปอร์เซ็นต์ Confluency และจากนั้นย้ายไปที่ 37 องศาโดยไม่มี IFN- เป็นเวลา 10–14 วันสำหรับความแตกต่าง

7. การทดสอบความมีชีวิตของเซลล์และการเพิ่มจำนวน

Cell Counting Kit-8 (CCK-8) ใช้เพื่อวัดการเพิ่มจำนวนเซลล์และความมีชีวิตของเซลล์ เซลล์ถูกเพาะในแต่ละหลุมของ 96-จานเพาะเลี้ยงหลุม (5 × 103 /หลุม) หลังการบำบัด 10 ul CCK-8 (Beyotime, Shanghai, China) ถูกเติมและบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส วัดค่าการดูดซับโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลท (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, United States) ที่ความยาวคลื่น 450 นาโนเมตร

8. การย้อมสีภาคผนวก V และการย้อมสีโพรพิเดียมไอโอไดด์

เซลล์ถูกชุบและเติบโตจนถึงจุดบรรจบกันที่ 60 เปอร์เซ็นต์ จากนั้นบำบัดด้วยกลูโคสสูง (50 มิลลิโมล/ลิตร) หรือเทลมิซาร์แทน หลังจาก 96 ชั่วโมง เซลล์ที่เก็บรวบรวมถูกล้างด้วย PBS เย็นและแขวนลอยใหม่ในบัฟเฟอร์สำหรับจับ ภาคผนวก V-FITC และ PI (eBioscience, ซันติอาโก, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา) ถูกเพิ่มลงในสารแขวนลอยของเซลล์ตามคำแนะนำของผู้ผลิต และตัวอย่างฟลูออเรสเซนซ์จำนวน 10,000 เซลล์ได้รับการวิเคราะห์โดยโฟลว์ไซโตเมทรีที่ดำเนินการด้วย FACScan ( Becton, Dickinson และ Company, Franklin, NJ, สหรัฐอเมริกา)

9. การซับแบบตะวันตก

เยื่อหุ้มสมองของไต, HRMCs และ MPC-5 ถูกทำให้เป็นเนื้อเดียวกันในสารรีเอเจนต์การสกัดโปรตีนจากเนื้อเยื่อหรือเซลล์ (Beyotime) ที่เสริมด้วยสารยับยั้งโปรตีเอสและฟอสฟาเตส (เมอร์ค, สถานีไวท์เฮาส์, นิวเจอร์ซีย์, สหรัฐอเมริกา) ตัวอย่างถูกแยกบน SDS PAGE ร้อยละ 10 และถ่ายโอนไปยังเมมเบรนไนโตรเซลลูโลส (Pall Corporation, NY, United States) เมมเบรนถูกบล็อกด้วยซีรั่มอัลบูมินจากวัว 5 เปอร์เซ็นต์และลบล้างด้วยแอนติบอดี Anti-PKC 1 (เทคโนโลยีการส่งสัญญาณของเซลล์ 46,809), anti-swiprosin-1 (Abcam, ab24368), TGF- 1 (Abcam, ab215715), Tubulin (Beyotime, AT819) และ GAPDH (Beyotime, AF5009 ) ถูกใช้ที่ความเข้มข้น 1:1000 มองเห็นโปรตีนโดยใช้แอนติบอดีทุติยภูมิที่ต่อต้านหนูหรือกระต่ายที่เชื่อมต่อด้วย IRDye (Rockland, Limerick, PA, สหรัฐอเมริกา) ที่ 1: 5,000 โดยใช้ระบบภาพ ODYSSEY INFRARED (LI-COR) ในการวิเคราะห์ผลลัพธ์

10. การวิเคราะห์ทางสถิติ

การประมวลผลข้อมูลวิเคราะห์โดย Origin 6.1 (OriginLab, Northampton, MA) และแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ± SD ของการทดลองอิสระอย่างน้อยสามครั้ง นัยสำคัญทางสถิติถูกกำหนดโดยใช้ ANOVA ค่า p < 0.05 ถือว่ามีนัยสำคัญทางสถิติ

ซิสแทนเช ตูบูโลซา

การอภิปราย

Telmisartan เป็นตัวบล็อกตัวรับ AT1 แบบเลือกที่ถูกนำมาใช้ทางคลินิกเพื่อลดความดันโลหิตสูงและการขับโปรตีนในปัสสาวะในผู้ป่วยความดันโลหิตสูง (Baden et al., 2008; Mann et al.,2009) การทดลองทางคลินิกหลายชิ้นชี้ให้เห็นว่า telmisartan มีประสิทธิภาพในการลดโปรตีนในปัสสาวะในผู้ป่วยที่มี macroalbuminuria และชะลอการเริ่มต้นและการลุกลามของโรคไตจากเบาหวาน (Makino et al., 2005; Nakamura et al., 2010; Fujita et al., 2011; Schmieder et al. ., 2554). ในการศึกษาปัจจุบัน การรักษาด้วยยาเทลมิซาร์แทนทางปากในหนูเบาหวานที่เกิดจาก STZ ช่วยป้องกันการเริ่มต้นของความผิดปกติในระยะเริ่มต้นในไตและโดยรวม รวมถึงการลดลงของน้ำหนักตัว ระดับน้ำตาลในเลือด และโปรตีนในปัสสาวะ ผลลัพธ์เหล่านี้ยืนยันว่า telmisartan มีการป้องกัน renoprotection ในหนูที่เป็นโรคไตจากเบาหวานระยะเริ่มต้น ที่สำคัญกว่านั้น การศึกษานี้พบว่าผลการป้องกันของ telmisartan ต่อ glomeruli เบาหวานนั้นสะท้อนให้เห็นในฤทธิ์ต้าน apoptotic และ pro-apoptotic ต่อ podocytes และ mesangial ตามลำดับ

ผลิตภัณฑ์ขั้นสุดท้ายไกลเคชั่นขั้นสูง (AGE) อาจทำให้ DNA ของพอดไซต์บาดเจ็บและการหลุดออกบางส่วนจากการกระตุ้นของแกน Ang II-AT1R ดังนั้นจึงเป็นการจัดหาคุณสมบัติที่เป็นประโยชน์ที่เป็นนวัตกรรมของ telmisartan ใน DKD (Fukami et al., 2013) ในโรคของไตที่มีโปรตีนยูริกระดับต่ำ normotensive การรักษาด้วย telmisartan ในระยะแรกของโรค ลดทอนความเสียหายของไตและท่อคั่นระหว่างหน้า (Villa et al., 2011) และเส้นทางหลายเส้นทางอาจเชื่อมโยงกับผลที่ตามมาของ pleiotropic รวมถึงการส่งสัญญาณปัจจัยการเจริญเติบโต, เป้าหมายของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมของการส่งสัญญาณ rapamycin, การแพร่ของโปรตีน, ทางเดิน Wnt-beta catenin และการส่งสัญญาณการขาดออกซิเจน (Villa et al., 2011)

เมื่อเร็ว ๆ นี้ เรารายงานว่า swiprosin-1 (Wang et al., 2018b) ซึ่งเป็นอีกชื่อหนึ่งของโดเมน EF-hand ที่มี 2 (EFhd2) มีส่วนสำคัญในการพัฒนา DKD ที่เริ่มต้นขึ้นหลังจากการปฐมนิเทศ ในขณะที่มันตั้งอยู่ ในพอดไซต์ของโกลเมอรูลัสของหนู Swiprosin-1 ขาด apoptosis ของพอดไซต์ที่ขึ้นกับไมโตคอนเดรียที่ปรับปรุงให้ดีขึ้นซึ่งกระตุ้นโดยน้ำตาลในเลือดสูงหรือกลูโคสสูงผ่านทางเส้นทางการส่งสัญญาณ p38 MAPK ที่นี่ เรายังพบว่า telmisartan ยับยั้งน้ำตาลในเลือดสูงหรือการแสดงออกของ swiprosin ที่เกิดจากน้ำตาลกลูโคสสูง-1 ทั้งในร่างกายและในหลอดทดลอง ซึ่งบ่งชี้ว่าฤทธิ์ต้านการตายของเซลล์ของ telmisartan ต่อ podocytes อาจเกี่ยวข้องกับการควบคุมของ swiprosin{ {12}} นิพจน์

การเพิ่มจำนวนเซลล์ mesangial และการสะสมโปรตีนเมทริกซ์นอกเซลล์ที่มากเกินไปได้รับการยืนยันว่ามีส่วนช่วยในการพัฒนา DKD (Lee et al., 2004) การศึกษาก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่ากลูโคสที่สูงสามารถกระตุ้นการแสดงออกของเมทริกซ์โปรตีนนอกเซลล์ mesangial ภายใต้น้ำตาลในเลือดสูง (Taniguchi et al., 2013) โดยทั่วไปจะใช้ -SMA เพื่อแยกความแตกต่างของเซลล์ mesangial จากเซลล์ไตอื่นในหนูเบาหวานที่เกิดจาก STZ และการแสดงออกของ -SMA ที่เพิ่มขึ้นอาจเป็นเครื่องหมายของการเปลี่ยนแปลงฟีโนไทป์ของเซลล์ mesangial จากระยะที่ไม่ได้กระตุ้นไปสู่ระยะเจริญที่หลั่งสารคัดหลั่ง (Niu et al., 2014). ที่นี่ เราพบว่า telmisartan ลดการแสดงออก -SMA ใน glomerulus เบาหวาน นอกจากนี้ยังมีรายงานว่าการเพิ่มจำนวนเซลล์ mesangial มีผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญต่อการเกิดโรคของ DKD (Zeng et al., 2013) ผลลัพธ์ของเราในการศึกษานี้สะท้อนให้เห็นถึงผลกระทบของภาวะซึมเศร้าตามเวลาและปริมาณของ telmisartan ต่อการเพิ่มจำนวนเซลล์ mesangial ที่เกี่ยวข้องกับลักษณะ proapoptotic

หลักฐานทางคลินิกแนะนำว่า telmisartan มีประสิทธิภาพมากกว่า losartan ในการแก้ไขภาวะโปรตีนในปัสสาวะในผู้ป่วยความดันโลหิตสูงที่เป็น DKD ซึ่งอาจเกี่ยวข้องกับความสามารถในการทำให้ PPAR บางส่วนเจ็บปวด (Bichu et al., 2009) นอกจากนี้ การเปลี่ยนแปลงที่เป็นประโยชน์เหล่านี้ เช่น การป้องกันการฝ่อของไตและพังผืดของเทลมิซาร์แทนนั้นเชื่อมโยงกับการแสดงออกของ TGF 1 ที่ลดลงและยีนไซโตไคน์ที่มีการอักเสบและโปรไฟโบรติกอื่น ๆ ลดลงผ่านการกระตุ้น PPAR /HGF (Kusunoki et al., 2012) ซึ่งเป็นอิสระต่อกัน ของการปิดล้อมตัวรับ Ang II type 1 ที่นี่ เรายังพบการแสดงออกของยีน PPAR ของ telmisartan ที่เปิดใช้งานอย่างเฉพาะเจาะจงในเซลล์ mesangial และผลของ pro-apoptotic ที่เกิดจาก telmisartan ต่อเซลล์ mesangial สามารถบรรเทาได้ด้วยตัวยับยั้ง PPAR

PKC 1 เป็นหนึ่งในตระกูลของซีรีน-ทรีโอนีนไคเนสที่แสดงออกอย่างกว้างขวาง ซึ่งทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงของเซลล์ที่หลากหลายโดยฟอสโฟรีเลชั่นเฉพาะสารตั้งต้น (Newton, 1995) มีรายงานว่าไม่เพียงเพิ่มกิจกรรมของ PKC แต่ยังพบระดับ mRNA ของมันในการตรวจชิ้นเนื้อโรคไตจากเบาหวาน (Langham et al., 2008) การแสดงออกและการเปิดใช้งาน PKC ที่เกิดจากน้ำตาลในเลือดสูงมีผล pleiotropic ในเซลล์ mesangial รวมถึงการส่งเสริมการสะสมโปรตีน ECM ที่มากเกินไป (Brownlee, 2001) การศึกษาแสดงให้เห็นว่าการยับยั้ง PKC ลดทอนไฮเปอร์เซลล์ของไตและการขยายตัวของเมทริกซ์นอกเซลล์ในหนู db/db และความผิดปกติของไตในหนู STZ (Ishii et al., 1996; Koya et al., 2000) ในทำนองเดียวกัน ตัวยับยั้ง PKC ยังลดทอนปัจจัยการเจริญเติบโตที่ได้จากเกล็ดเลือด (PDGF) ซึ่งขับเคลื่อนด้วยการเพิ่มจำนวนเซลล์ mesangial และการผลิตคอลลาเจน (Tokuyama et al., 2011) ในการศึกษาของเรา telmisartan ลดการควบคุมของ PKC 1 mRNA และการแสดงออกของโปรตีนในเซลล์ mesangial ที่กระตุ้นน้ำตาลในเลือดสูง นอกจากนี้ การแสดงออกของ TGF 1 ในเซลล์ mesangial ที่ถูกเหนี่ยวนำโดยกลูโคสสูงยังสามารถยับยั้งได้ด้วย telmisartan

ทั้งตัวรับ AT1 และ AT2 ซึ่งเป็นที่รู้จักกันดีในชื่อตัวรับโปรตีน G ที่จับคู่กับทรานส์เมมเบรน 7 ตัว ได้รับการโคลนและแสดงภาพประกอบทางเภสัชวิทยา (Touyz and Berry, 2002) ตัวรับ AT1 สามารถเป็นปฏิปักษ์แบบเลือกได้โดย telmisartan ในขณะที่ตัวบล็อกตัวรับ AT1 สามารถกระตุ้นการแสดงออกของตัวรับ AT2 (Touyz และ Berry, 2002) การศึกษาแสดงให้เห็นว่าตัวรับ AT1 มีอิทธิพลโดยการยับยั้งการเติบโตของเซลล์ และกระตุ้นการตายของเซลล์ (Horiuchi et al., 1997; Touyz et al., 1999) ยิ่งไปกว่านั้น ตัวรับ AT2 กระตุ้นการตายของเซลล์ในรูปแบบเฉพาะผ่านการส่งสัญญาณ apoptotic ที่ใช้สื่อกลาง p38 MAPK (Miura และ Karnik, 2000) ในเอกสารปัจจุบันของเรา การแสดงออกของ AT1 และ AT2 mRNA ไม่เปลี่ยนแปลงในเซลล์ mesangial ที่เพาะเลี้ยงซึ่งกระตุ้นด้วย telmisartan หรือน้ำตาลในเลือดสูง ดังนั้นการตายของเซลล์ mesangial ที่เกิดจาก telmisartan และการแสดงออกที่ลดลงของ PKC 1 อาจไม่ถูกสื่อกลางโดยตัวรับ AT1 และ AT2

แคปซูล Cistanche

โดยสรุป เทลมิซาร์แทนลดทอนการบาดเจ็บของไตส่วนต้นในหนูเบาหวานชนิดที่ 1 โดยการยับยั้งการตายของเซลล์พอดไซต์และส่งเสริมการตายของเซลล์ mesangial ฤทธิ์ต้านอะพอพโทซิสของเทลมิซาร์แทนในพอดไซต์อาจเกี่ยวข้องกับการยับยั้งการแสดงออกของสวิพรอซิน-1 ในขณะเดียวกัน ฤทธิ์ของโปรอะพอพโทซิสต่อเซลล์มีแซนเจียลก็มีส่วนสัมพันธ์บางส่วนกับผลที่ก่อปฏิกิริยาต่อ PPAR นอกจากนี้ เทลมิซาร์แทนยังคัดเลือกปิดกั้นการแสดงออกของ PKC 1/TGF 1 ในเซลล์มีแซนเจียล แต่ไม่อยู่ในพอดไซต์ การศึกษาขั้นสูงจำเป็นต้องอธิบายถึงผลตรงข้ามแต่เป็นประโยชน์ของเทลมิซาร์แทนต่อพอดไซต์และเซลล์มีแซนเจียล และกลไกระดับโมเลกุลพื้นฐาน

Xin Wei 1, Yabin Ma2, Ya Li 3, Wenzhao Zhang4, Yuting Zhong5, Yue Yu6, Li-Chao Zhang5, Zhibin Wang4 และ Ye Tu2

1 ภาควิชาเภสัชกรรมคลินิก, โรงพยาบาลซินหัว, โรงเรียนแพทย์มหาวิทยาลัยเซี่ยงไฮ้เจียวทง, เซี่ยงไฮ้, จีน,

2 ภาควิชาเภสัชกรรม Shanghai East Hospital, Tongji University, Shanghai, China,

3 ภาควิชาเภสัชกรรมคลินิก, ศูนย์ทดลองทางคลินิก, โรงพยาบาลในเครือแห่งแรกของมหาวิทยาลัยการแพทย์แห่งแรกแห่งมณฑลซานตง และโรงพยาบาลเฉียนฝอซานแห่งมณฑลซานตง เมืองจี่หนาน ประเทศจีน

4 แผนกอายุรกรรมวิกฤต, คณะวิสัญญีวิทยา, Naval Medical University, Shanghai, China,

5 แผนกเภสัชกรรม, โรงพยาบาลการแพทย์แผนจีนเทศบาลนครเซี่ยงไฮ้, เซี่ยงไฮ้, จีน,

6 สถาบันโรคหลอดเลือด, Shanghai TCM-Integrated Hospital, Shanghai, China