การกําหนดเป้าหมายแลคเตทดีไฮโดรจีเนส A ด้วยคาเทชินทําให้เซลล์มะเร็งกระเพาะอาหาร SNU620/5FU ไวต่อ 5-ฟลูออโรราซิล ตอนที่ 1

กรุณาติดต่อoscar.xiao@wecistanche.comสําหรับข้อมูลเพิ่มเติม

นามธรรม:ความต้านทานต่อการรักษาด้วยยาต้านมะเร็งเกิดขึ้นในมะเร็งแทบทุกชนิดและกลายเป็นปัญหาสําคัญในการรักษาโรคมะเร็ง แม้ว่า 5-fluorouracil (5FU) เป็นตัวเลือกบรรทัดแรกของการรักษาด้วยยาต้านมะเร็งสําหรับมะเร็งกระเพาะอาหาร แต่ประสิทธิภาพของมันมี จํากัด เนื่องจากการดื้อยา เมื่อเร็ว ๆ นี้การเผาผลาญมะเร็งที่เปลี่ยนแปลงไปรวมถึงผลของ Warburg ซึ่งเป็นการตั้งค่าสําหรับไกลโคไลซิสมากกว่าการเกิดออกซิเดชันฟอสโฟรีเลชั่นสําหรับการผลิตพลังงานได้รับการยอมรับว่าเป็นกลไกสําคัญที่ควบคุมความต้านทานต่อเคมีบําบัด ดังนั้นเราจึงตรวจสอบกลไกโดยละเอียดและประโยชน์ที่เป็นไปได้ของสารลดน้ําตาลในเลือดในการดื้อยา 5FU ที่หลอมรวมโดยใช้เซลล์มะเร็งกระเพาะอาหารที่จัดตั้งขึ้น SNU620 และ SNU620 / 5FU SNU620/5FU ซึ่งเป็นเซลล์มะเร็งกระเพาะอาหารที่มีความต้านทานต่อ 5FU แสดงให้เห็นว่าการผลิตแลคเตทและการแสดงออกของแลคเตทสูงขึ้นมากเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องกับไกลโคไลซิสเช่น แลคเตทดีไฮโดรจีเนส A(LDHA) มากกว่าเซลล์ SNU620 หลัก เพื่อ จํากัด ไกลโคไลซิสเราตรวจสอบคาเทชินและอนุพันธ์ของมันซึ่งเป็นที่รู้จักกันต้านการอักเสบและผลิตภัณฑ์จากธรรมชาติต้านมะเร็งเนื่องจาก epigallocatechin gallate ได้รับรายงานก่อนหน้านี้ว่าเป็นผู้ยับยั้งการแสดงออกของ LDHA Catechin ซึ่งเป็นสารประกอบที่ง่ายที่สุดในหมู่พวกเขามีผลยับยั้งสูงสุดในการผลิตแลคเตทและกิจกรรม LDHA นอกจากนี้การรวมกันของ 5FUand catechin แสดงให้เห็นถึงความเป็นพิษต่อเซลล์เพิ่มเติมและทําให้เกิดการตายของเซลล์ชนิดออกซิเจนปฏิกิริยา (ROS) - เป็นสื่อกลางในเซลล์ SNU620 / 5FU ดังนั้นจากผลลัพธ์เหล่านี้เราจึงแนะนําให้ catechin เป็นผู้สมัครสําหรับการพัฒนายาเสริมแบบใหม่ที่ช่วยลดเคมีบําบัดเป็น 5FU โดย จํากัด LDHA

คำ:5-ฟลูออโรราซิล;chemoresistant;ไกลโคไลซิส;แลคเตทดีไฮโดรจีเนส; คาเทชิน

โปรดคลิกที่นี่เพื่อทราบข้อมูลเพิ่มเติม

1. บทนํา

ความก้าวหน้าที่โดดเด่นได้รับความสําเร็จในการรักษาโรคมะเร็งกระเพาะอาหารด้วยการผ่าตัดเนื้องอกหลักและเคมีบําบัดแบบผสมผสานที่ใช้ 5-fluorouracil (5FU) เช่น epirubicin, cisplatin และ fluorouracil และ docetaxel, oxaliplatin และ 5FU[1,21 จนถึงปัจจุบัน 5FU อะนาล็อกของ uracil ที่บล็อกการสังเคราะห์ดีเอ็นเอโดยการยับยั้ง thymidylate synthase [3] ยังคงเป็นยาเคมีบําบัดที่ใช้กันทั่วไปในการรักษามะเร็งกระเพาะอาหาร [1, A4]. อย่างไรก็ตาม ประสิทธิภาพทางคลินิกของเคมีบําบัดไม่เป็นที่น่าพอใจเนื่องจากการกําเริบของโรคของมะเร็งปฐมภูมิหรือระยะแพร่กระจายที่เกี่ยวข้องกับการดื้อยา [1,5]

Cistanche สามารถปรับปรุงภูมิคุ้มกันได้

กระบวนการของเซลล์หลายอย่างถือเป็นกลไกสําคัญที่อยู่เบื้องหลังการชันสูตรพลิกศพ รวมถึงการกระตุ้นหรือยับยั้งยา, เครื่องจักรซ่อมแซมความเสียหายของดีเอ็นเอ, การปรับเปลี่ยนเป้าหมายของยา, การยับยั้งเส้นทาง apoptotic และ autophagy ที่เพิ่มขึ้น [6,7] มะเร็งมีความแตกต่างกันและมะเร็งหลายชนิดใช้ทั้งไกลโคไลซิสและออกซิเดชั่นฟอสโฟรีเลชั่นสําหรับการเผาผลาญพลังงาน [8] อย่างไรก็ตาม มีรายงานว่าการตั้งโปรแกรมเมตาบอลิซึมใหม่ โดยเฉพาะอย่างยิ่งแอโรบิกไกลโคไลซิสที่ผิดปกติ เป็นผู้เล่นหลักในการพัฒนาความต้านทานต่อยาเคมีบําบัด รวมถึง 5FU ในมะเร็งกระเพาะอาหาร [9] แลคเตทดีไฮโดรจีเนส A (LDHA) และไพรูเวตดีไฮโดรจีเนสไคเนส (PDKs) เป็นที่รู้จักกันในฐานะหน่วยงานกํากับดูแลที่สําคัญของแอโรบิกไกลโคไลซิสที่ผลิตแลคเตทจากไพรูเวต[10,11] การรวมกันของไดคลอโรอะซิเตทซึ่งเป็นสารยับยั้ง PDK ที่จัดตั้งขึ้นจะคืนความไวต่อ 5FU [12] นอกจากนี้ LDHA ซึ่งเป็นเอนไซม์สําคัญที่เร่งการเปลี่ยนไพรูเวตเป็นแลคเตทได้รับการรายงานว่าเป็นเป้าหมายที่เป็นไปได้สําหรับการรักษามะเร็งกระเพาะอาหาร [13,14] การล้มล้างการแสดงออกของ LDHA ในเซลล์มะเร็งยับยั้งการเกิดเนื้องอกผ่านการหายใจของไมโตคอนเดรียที่เพิ่มขึ้นและลดความมีชีวิตของเซลล์ [15] สารยับยั้ง LDHA หลายชนิด เช่น FX11, PSTMB และ GSK 2837808A ลดระดับ ATP และสร้างความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชั่น และในที่สุดก็ทําให้เซลล์ apoptotic ตาย [16-18] แม้ว่าการศึกษาแสดงให้เห็นว่าการยับยั้ง LDHA โดย microRNA-34a ได้กู้คืนความต้านทานต่อ 5FU ในมะเร็งลําไส้ใหญ่ [19] แต่ไม่มีการศึกษาก่อนหน้านี้รายงานผลของสารยับยั้ง LDHA ทางพันธุกรรมหรือเภสัชวิทยาต่อเคมีบําบัด

โพลีฟีนอลชาเขียว ได้แก่ คาเทชิน (CA), epicatechin (EC), แกลโลคาเตชิน (GC), epigallocatechin(EGC), epicatechin-3-gallate (ECG) และ epigallocatechin-3-gallatechin (EGCG) ส่งเสริมสุขภาพของมนุษย์โดยการป้องกันและรักษาโรคต่าง ๆ รวมถึงการอักเสบ เบาหวาน โรคหัวใจและหลอดเลือด และมะเร็ง [20,21] ในบรรดาโพลีฟีนอล EGCG ช่วยเพิ่มความไวต่อเคมีบําบัด 5FU ในเซลล์มะเร็งลําไส้ใหญ่และทวารหนักและเซลล์มะเร็งตับโดยการกระตุ้นวิถี AMPK และจํากัดต้นกําเนิดของมะเร็ง [22,23] นอกจากนี้ EGCG ยังได้รับรายงานว่ายับยั้ง LDHA โดยการปราบปรามการแสดงออกในมะเร็งเต้านมและมะเร็งตับอ่อน [24,25]

ในการศึกษานี้เราตั้งสมมติฐานว่า CA อาจเป็นผู้สมัครสําหรับยาเสริมสําหรับการลดความต้านทานต่อ 5FU ในเซลล์มะเร็งกระเพาะอาหาร มีการตรวจสอบว่าผลการยับยั้งของ CA และ / หรือการใช้ร่วมกับ 5FU ในกิจกรรม LDHA ทําให้เกิดปฏิกิริยาของไมโตคอนเดรียชนิดออกซิเจนปฏิกิริยา (ROS) และการตายของเซลล์ apoptotic ในเซลล์ที่ดื้อต่อ 5FU

2. ผลลัพธ์

2.1. ลักษณะไกลโคไลติกของเซลล์ที่ทนต่อ 5FU

การแพร่กระจายที่เพิ่มขึ้นเป็นลักษณะของเคมีบําบัดรวมถึงเซลล์มะเร็งที่ดื้อต่อ 5FU [26,27] อันดับแรกเรายืนยันความต้านทานต่อเซลล์ 5FU และอัตราการเติบโตในระยะยาวของเซลล์ SNU620 และ SNU620 / 5FU เมื่อเซลล์เหล่านี้ถูกเพาะเลี้ยงด้วยความเข้มข้นที่ระบุของ 5FU เป็นเวลา 48 ชั่วโมงปริมาณโดยประมาณที่ก่อให้เกิดการยับยั้งการเจริญเติบโต 50% (Gl50) ในเซลล์ SNU620 /5FU (100.63 uM) นั้นสูงกว่าที่ทําให้ GIso ในเซลล์ SNU620 ของผู้ปกครอง (28.88 μM) (รูปที่ 1A และรูปเสริม S1) นอกจากนี้ อัตราการเติบโตของเซลล์ SNU620/5FU ยังเร็วกว่าเซลล์ SNU620 (รูปที่ 1B และรูปเสริม S2) เนื่องจาก chemoresistance และลักษณะที่เติบโตอย่างรวดเร็วอาจเกี่ยวข้องกับคุณสมบัติไกลโคไลติกที่เพิ่มขึ้นในเซลล์มะเร็งกระเพาะอาหาร [28] อัตราการเป็นกรดนอกเซลล์ (ECAR) และอัตราการใช้ออกซิเจน (OCR) จึงถูกวัดในทั้งสองเซลล์ในที่ที่มี oxamate ซึ่งเป็นสารยับยั้งไกลโคไลซิสที่รู้จักกันดีหรือไม่ ผลการวิจัยแสดงให้เห็นว่าเซลล์ SNU620/5FU หลั่งแลคเตทได้มากกว่าเซลล์ SNU620 ที่หลั่งออกมาอย่างมีนัยสําคัญ และทําให้สื่อเพาะเลี้ยงเป็นกรดในเวลาต่อมา (รูปที่ 1C และรูปเสริม S3) อย่างไรก็ตามไม่พบการเปลี่ยนแปลงที่สําคัญใน OCR ระหว่างเซลล์เหล่านี้ (รูปที่ 1D) มีการวัดระดับการแสดงออกของ mRNA และโปรตีนของ LDHA นิพจน์ LDHA ในเซลล์ SNU620/5FU สูงกว่าในเซลล์ SNU620 (รูปที่ 1E, F) นอกจากนี้เรายังตรวจสอบระดับ mRNA และการแสดงออกของโปรตีนของไอโซไทป์ PDK และพบว่าเซลล์ PDK2 และ PDK3 มีเซลล์ SNU620/5FU สูงกว่าในเซลล์ SNU620 (รูปเสริม S4A, B) ฟอสโฟรีเลชั่นของหน่วยย่อย E1α ของ pyruvate dehydrogenase (PDHA1) ซึ่งเพิ่มขึ้นโดย PDKs ก็ได้รับการประเมินเช่นกัน และพบว่าในเซลล์ SNU620/5FU สูงกว่าในเซลล์ SNU620(รูปเสริม S4C) นอกจากนี้เรายังใช้ oxamate เป็นสารยับยั้ง LDHA เพื่อเอาชนะความต้านทาน 5FU ในเซลล์ SNU620 / 5FU สารประกอบนี้ยับยั้งการเจริญเติบโตของเซลล์ทั้งในเซลล์ SNU620 และ SNU620/5FU (รูปเสริม S5) นอกจากนี้การรักษาร่วมกับเซลล์ oxamate และ 5FU ยับยั้งการเจริญเติบโตของเซลล์เมื่อเทียบกับการรักษาเฉพาะบุคคลด้วยเซลล์ oxamate หรือ 5FUin SNU620 / 5FU (รูปที่ 1G) ข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าเซลล์ SNU620/5FU แสดง LDHA อย่างมาก และการยับยั้งการทํางานของ LDHA สามารถเอาชนะความต้านทานของเซลล์ SNU/5FU ต่อ 5FU ได้

รูปที่ 1 จากผลลัพธ์พบว่าเซลล์ที่ดื้อต่อฟลูออโรราซิล (5FU) 5 เซลล์มีลักษณะไกลโคไลติกสูง:(A)SNU620 และ SNU620/5FU เซลล์ได้รับการรักษาด้วยความเข้มข้นที่ระบุของ 5FU เป็นเวลา 48 ชั่วโมง ความมีชีวิตของเซลล์เหล่านี้ได้รับการประเมินผ่านการทดสอบ MTT(B) ระดับการเจริญเติบโตของเซลล์ SNU620 และ SNU620 / 5FU ถูกวัดในแต่ละวันเป็นเวลา 4 วันด้วยการทดสอบ MTT (C, D) SNU620 และเซลล์ SNU620 / 5FU ได้รับการรักษาด้วย oxamate (5mM) หรือไม่เป็นเวลา 24 ชั่วโมงและค่า ECAR และ OCR ได้รับการประเมินโดยเครื่องวิเคราะห์ Seahorse XF (E, F) ตรวจพบการแสดงออกของ LDHA ในเซลล์ SNU620 และ SNU620 /5FU ผ่านการวิเคราะห์ qRT-PCR และ Western blot (G) เซลล์ SNU620 และ SNU620/5FU ได้รับการรักษาด้วย oxamate (25 mM) และ/หรือ 5FU (10μM) เป็นเวลา 48 ชั่วโมง ผลลัพธ์จะแสดงเป็นค่าเฉลี่ย± SEM**p<0.01><><><0.01，and ##=""><0.001, compared="" with="" the="" respective="" control.="" ecar,="" extracellular="" acidification="" rates;="" ocr,="" oxygen="" consumption="" rates;="" ldha,="" lactate="" dehydrogenase="" a.="" the="" experiments="" were="" independently="" performed="" in="">

2.2. CA ระงับกิจกรรม LDHA

การผลิตแลคเตทได้รับการวิเคราะห์ด้วย CA และอนุพันธ์รวมถึง EC, GC, EGC และ EGCG ในเซลล์ SNU620 / 5FU เมื่อเทียบกับอนุพันธ์เหล่านี้ CA ลดการผลิตแลคเตทได้อย่างมีประสิทธิภาพมากขึ้น (รูปที่ 2A) นอกจากนี้ในหลอดทดลองกิจกรรม LDHA ตามที่พูดได้รับการยืนยันและ CA แสดงผลการยับยั้งที่แข็งแกร่งต่อกิจกรรม LDHA มากกว่าอนุพันธ์ (รูปที่ 2B) ผลการยับยั้งของ CA ต่อกิจกรรม LDHA และ LDHB ในหลอดทดลองถูกวัดในลักษณะที่ขึ้นอยู่กับขนาดยา CA ยับยั้งกิจกรรม LDHA โดยไม่ส่งผลกระทบต่อกิจกรรม LDHB (รูปที่ 2C, D) นอกจากนี้ กิจกรรม LDHA และ LDHB ยังถูกวัดด้วย EGCG ซึ่งเป็นที่ทราบกันดีว่ายับยั้งการทํางานของ LDHA และพบว่ามีการลดขนาดยาลงตามขนาดยา (รูปเสริม S6A, B) นอกจากนี้ กิจกรรม LDHA และ LDHB ภายในเซลล์ยังได้รับการประเมินด้วยความเข้มข้นที่ระบุของ CA ในเซลล์ SNU620/5FU CA ยับยั้งการทํางานของ LDHA ในลักษณะที่ขึ้นอยู่กับขนาดยาในผลลัพธ์ในหลอดทดลอง แต่ไม่ใช่กิจกรรม LDHB (รูปที่ 2E, F) ระดับการแสดงออกของโปรตีนของ p-PDHA1, PDK2, PDK3 และ LDHA ยังถูกวัดในเซลล์ SNU620/5FU หลังการรักษาด้วย CA (รูปเสริม S7) และเราสังเกตเห็นว่าสิ่งเหล่านี้ไม่ได้รับผลกระทบจากการรักษานี้ ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า CA ควบคุมกิจกรรม LDHA โดยไม่ส่งผลกระทบต่อการแสดงออก

2.3. โหมดการทํางานของการยับยั้ง LDHA โดย CA

ในการวิเคราะห์กลไกการยับยั้งของกิจกรรม LDHA บน CA และอนุพันธ์เราได้ทําการสร้างแบบจําลองโมเลกุลของปฏิสัมพันธ์ที่มีผลผูกพันระหว่าง recombinant LDHA และ CA ของมนุษย์ (รูปที่ 3A, B) ผลการวิจัยพบว่า CA อาจโต้ตอบกับสารตกค้างของ T94, A95, Q99, R105, S136, R168, H192 และ T247 ของ LDHA ในหมู่พวกเขา R105, S136 และ R168 มีความสําคัญสําหรับการผูกวัสดุพิมพ์ (pyruvate) ดังนั้นเราจึงสันนิษฐานว่า CA อาจรบกวนไซต์ที่มีผลผูกพันกับวัสดุพิมพ์ ในทางตรงกันข้าม EGCG ถูกผูกมัดกับ LDHA ผ่านไซต์อื่น เพื่อตรวจสอบโหมดการทํางานของการยับยั้ง LDHA โดย CA เพิ่มเติมแผนการ Michaelis-Menten และ Lineweaver-Burk ได้รับการยืนยันด้วยความเข้มข้นต่างๆของ pyruvate และ CA กิจกรรม LDHA เพิ่มขึ้นในลักษณะที่ขึ้นอยู่กับปริมาณ pyruvate อย่างไรก็ตามมันถูกย้อนกลับโดยการเพิ่มขึ้นของ CA ดังนั้นผลลัพธ์ของแผนการของ Michaelis-Menten และ Lineweaver-Burk แสดงให้เห็นว่า CA เป็นตัวยับยั้งที่ไม่สามารถแข่งขันได้สําหรับ LDHA (รูปที่ 3C, D) นอกจากนี้ ข้อมูลการวัดความร้อนจากการไทเทรตแบบไอโซเทอร์มอล (ITC) ยังแสดงให้เห็นว่า CA ผูกมัดทางกายภาพกับ LDHA ด้วยค่า Kd ที่ 197 uM(รูปเสริม S8) ผลลัพธ์เหล่านี้ให้ข้อมูลเชิงลึกที่ CA ระงับกิจกรรม LDHA ผ่านการผูกไซต์ที่มีผลผูกพันกับสารตั้งต้นของ LDHA

2.4. CA กระตุ้นความต้านทาน 5FU ผ่านการลดกิจกรรม LDHA

เราประเมินผลพิษต่อเซลล์ของ CA ต่อเซลล์ SNU620 และ SNU620/5FU และพบว่า CA ยับยั้งการเจริญเติบโตในเซลล์ทั้งสองกลุ่ม (รูปที่ 4A) เพื่อตรวจสอบว่าการยับยั้งการเจริญเติบโตเกี่ยวข้องกับการปราบปรามกิจกรรม LDHA การแสดงออกของ LDHA ถูกยกเลิกโดยกรดไรโบนิวคลีอิกกิ๊บสั้น (shRNA) สําหรับ LDHA (shLDHA) และการแสดงออกของมันถูกกู้คืนโดย transfection LDHA ที่แสดงพลาสมิด (รูปเสริม S9A, B) ในเซลล์ SNU620/5FU ที่ติดเชื้อ shLDHA การผลิตแลคเตทและความมีชีวิตของเซลล์ไม่ได้เปลี่ยนแปลงอย่างชัดเจนโดยการรักษา CA เมื่อเทียบกับเซลล์ที่ถ่ายสําเนาจําลอง (รูปที่ 4B, C) นอกจากนี้ผลการยับยั้งการเจริญเติบโตของ CA เพิ่มขึ้นจากการฟื้นตัวของการแสดงออกของ LDHA ในเซลล์ LDHA-knockdown SNU620 /5FU (รูปที่ 4D) นอกจากนี้เซลล์ SNU620 และ SNU620 / 5FU ได้รับการตรวจหลังจากการรักษา CA และ 5FU เป็นรายบุคคลหรือทั้งสองอย่างรวมกัน การรักษาร่วมกับ CA และ 5FU ยับยั้งการเจริญเติบโตของเซลล์ SNU620/5FU อย่างมีนัยสําคัญ (รูปที่ 4E) นอกจากนี้ยังมีการตรวจสอบผลการรวมกันของ CA และ 5FU ในเซลล์อื่น ๆ อีกหลายสายเช่น AGS มะเร็งกระเพาะอาหารของมนุษย์มะเร็งตับอ่อน Panic-1, MIA PaCa-2 และมะเร็งลําไส้ใหญ่ LS174T และเซลล์ RKO เมื่อเทียบกับ SNU620 และ SNU620 / 5FUcells การผลิตแลคเตทและการแสดงออกของ LDHA แสดงให้เห็นถึงความสัมพันธ์ที่ดีต่อกัน และคุณสมบัติไกลโคไลติกเหล่านี้ค่อนข้างสูงใน SNU620/5FU, AGS และ RKO(รูปเสริม S10A, B) นอกจากนี้การรักษาแบบผสมผสานของ CA และ 5FU ยังช่วยลดความมีชีวิตของเซลล์ได้อย่างมากเมื่อเทียบกับการรักษา 5FU เพียงครั้งเดียวในเซลล์ไกลโคไลติกรวมถึง AGS และ RKO (รูปเสริม S10C) อย่างไรก็ตาม การรักษาร่วมกับ CA และ 5FU ไม่ได้ยับยั้งการเจริญเติบโตอย่างมีนัยสําคัญในเซลล์ SNU620, Panic-1, MIA PaCa-2 และ LS174T ซึ่งแสดงการแสดงออกของ LDHA ต่ํา ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าผลการแพ้ของ CA ต่อเซลล์ที่ดื้อต่อ 5FU อาจเกี่ยวข้องกับผลการยับยั้งต่อกิจกรรม LDHA

รูปที่ 2 Catechin(CA) ยับยั้งกิจกรรม LDHA แต่ไม่ใช่การแสดงออก:(A)การผลิตแลคเตทของ SNU620/5FU ถูกวัดหลังจากการรักษาด้วยอนุพันธ์ CA (10 μM) เป็นเวลา 24 ชั่วโมง(B)กิจกรรม LDHA ในหลอดทดลองได้รับการประเมินเมื่อการรักษาด้วยอนุพันธ์ CA (10 uM) และ oxamate (20 mM);(C, D)ในหลอดทดลอง, กิจกรรม LDHA และ LDHB ถูกประเมินด้วยความเข้มข้นที่ระบุของ CA (E, F) เซลล์ได้รับการรักษาด้วยความเข้มข้นที่ระบุของ CA เป็นเวลา 24 ชั่วโมง กิจกรรม LDHA และ LDHB ภายในเซลล์ถูกวัดโดยใช้ไลเสตของเซลล์เป็นแหล่งเอนไซม์ ผลลัพธ์จะแสดงเป็นค่าเฉลี่ย± SEM **p<0.01><0.001, compared="" to="" the="" control="" (1st=""><><0.01,and><0.001,compared to="" the="" negative="" control="" (second="" column).ldha,="" lactate="" dehydrogenase="" a;="" ldhb,="" lactate="" dehydrogenase="" b.="" the="" experiments="" were="" independently="" performed="" in="">

รูปที่ 4 ความมีชีวิตของเซลล์ถูกยับยั้งโดยการรักษาร่วมกับเซลล์ catechin (CA) และ 5-fluorouracil (5FU) ในเซลล์ที่ดื้อต่อ 5FU:(A) viabilities ของเซลล์ SNU620 และ SNU620/5FU ได้รับการประเมินหลังการรักษาด้วยความเข้มข้นที่ระบุของ CA เป็นเวลา 48 ชั่วโมง(B)SNU620/5FU-pLKO.1 และเซลล์ SNU620/5FU-shLDHA ได้รับการรักษาด้วย CA(10 μM) เป็นเวลา 24 ชั่วโมง การผลิตแลคเตทถูกวัดในสื่อวัฒนธรรมของเซลล์ SNU620/5FU-pLKO.1 และ SNU620/5FU-shLDHA;(C, D)SNU620/5FU-pLKO.1, SNU620/5FU-shLDHA, SNU620/5FU-shLDHA+EV และเซลล์ SNU620/5FU-shLDHA+LDHA#2 ได้รับการรักษาด้วยความเข้มข้นที่ระบุของ CA เป็นเวลา 48 ชั่วโมง ความมีชีวิตของเซลล์ถูกวัดโดยใช้การทดสอบ MTT เซลล์ SNU620 และ SNU620 / 5FU ได้รับการรักษาด้วย CA (10 μM) และ / หรือ 5FU (10μM) เป็นเวลา 48 ชั่วโมง ความไวต่อเซลล์เหล่านี้ถูกวัดผ่านการทดสอบ MTT ผลลัพธ์จะแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ±SEM*p<><0.01,and**><><0.05, ##=""><0.01, and="" ##t=""><0.001, compared="" with="" the="" respective="" control.="" the="" experiments="" were="" independently="" performed="" in="">

บทความนี้สกัดจาก Int. J. Mol. วิทย์. 2021, 22, 5406 https://doi.org/10.3390/ijms22105406 https://www.mdpi.com/journal/ijms