การตอบสนองทางพิษวิทยาอย่างต่อเนื่องของเซลล์โมโนนิวเคลียร์ในเลือดจากบุคคลที่ไม่ได้รับการฉีดวัคซีนเข้ารับการรักษาในห้องไอซียูเนื่องจากวิกฤตโควิด-19 เป็นสิ่งสำคัญในการหลีกเลี่ยงผลลัพธ์ที่ร้ายแรง
Nov 02, 2023
เชิงนามธรรม: วัตถุประสงค์หลักของการศึกษาครั้งนี้คือเพื่อพิจารณาอิทธิพลของกิจกรรมที่เป็นพิษต่อเซลล์ของเซลล์โมโนนิวเคลียร์ในเลือด (PBMC) ต่อผลลัพธ์ของผู้ที่ไม่ได้รับการฉีดวัคซีนซึ่งมีเชื้อโควิดขั้นวิกฤต-19 ซึ่งเข้ารับการรักษาใน ICU เก็บตัวอย่างเลือดจากบุคคล 23 รายเมื่อเข้ารับการรักษา และหลังจากนั้นทุก 2 สัปดาห์เป็นเวลา 13 สัปดาห์จนกระทั่งเสียชีวิต (กลุ่มออก) (n=13) หรือออกจากโรงพยาบาล (กลุ่มผู้รอดชีวิต) (n=10) เราไม่พบความแตกต่างที่มีนัยสำคัญระหว่างกลุ่มในด้านข้อมูลทางสังคมวิทยา คลินิก หรือทางชีวเคมีที่อาจส่งผลต่อผลลัพธ์ที่เสียชีวิต อย่างไรก็ตาม ความเป็นพิษต่อเซลล์ทางเซลล์โดยตรงของ PBMC จากบุคคลในกลุ่ม Exitus ต่อเซลล์ Vero E6 ที่ติดเชื้อ SARS-CoV -2- ปลอมนั้นลดลงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเข้ารับการรักษา (−2.69-fold; p=0 0234) และหลังจาก 4 สัปดาห์ในห้อง ICU (−5.58-fold; p=0.0290) เมื่อเปรียบเทียบกับบุคคลที่รอดชีวิต และไม่มีการปรับปรุงในระหว่างการรักษาในโรงพยาบาล ในหลอดทดลอง การรักษาด้วย IL-15 ของเซลล์เหล่านี้ไม่สามารถฟื้นฟูความเป็นพิษต่อเซลล์ที่มีประสิทธิผล ณ จุดใดเวลาหนึ่งได้ จนกระทั่งเกิดผลร้ายแรง และมีการสังเกตการแสดงออกที่เพิ่มขึ้นของเครื่องหมายแสดงอาการอ่อนเพลียของระบบภูมิคุ้มกันใน NKT, CD4+ และ CD 8+ ทีเซลล์ อย่างไรก็ตาม IL-15 การรักษา PBMC จากบุคคลในกลุ่ม Survival เพิ่มความเป็นพิษต่อเซลล์อย่างมีนัยสำคัญในสัปดาห์ที่ 4 (6.18-fold; p=0.0303) ด้วยเหตุนี้ การบำบัดด้วยการปรับภูมิคุ้มกันที่อาจเอาชนะความอ่อนล้าของภูมิคุ้มกันและกระตุ้นให้เกิดฤทธิ์เป็นพิษต่อเซลล์อย่างมีประสิทธิภาพอย่างยั่งยืนอาจเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการอยู่รอดระหว่างการรักษาในโรงพยาบาลเนื่องจากวิกฤตโควิด-19
คำสำคัญ: โรคซาร์ส-โคฟ-2; โควิด-19; การตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกัน การตอบสนองของพิษต่อเซลล์ อิลลินอยส์-15
cistanche tubulosa-ปรับปรุงระบบภูมิคุ้มกัน
1. บทนำ
พบกรณีของโรคปอดบวมจากไวรัสที่ผิดปกติหลายกรณีที่เกี่ยวข้องกับการระบาดในตลาดอาหารทะเลในเมืองหวู่ฮั่น (มณฑลหูเป่ย ประเทศจีน) ในเดือนธันวาคม 2019 ไวรัสโคโรนาสายพันธุ์ใหม่เรียกว่ากลุ่มอาการทางเดินหายใจเฉียบพลันรุนแรง โคโรนาไวรัส 2 (SARS-CoV-2) อย่างรวดเร็ว แพร่กระจายไปทั่วโลกทำให้เกิดการระบาดของโรคติดเชื้อไวรัสโคโรนา 2019 (โควิด-19) [1] ตั้งแต่นั้นมา มีรายงานผู้ป่วยโรคโควิดประมาณ 626 ล้านราย-19 และมีผู้เสียชีวิตที่เกี่ยวข้อง 6.5 ล้านรายทั่วโลก (อัปเดตเมื่อเดือนตุลาคม 2022) [2] ปัจจัยเสี่ยงและการเจ็บป่วยที่แตกต่างกันอาจส่งผลต่อการลุกลามของโควิด-19 ในแต่ละบุคคล ซึ่งส่งผลต่อการเปรียบเทียบข้อมูลทางคลินิกระหว่างประเทศที่ได้รับผลกระทบตั้งแต่เริ่มมีการระบาดใหญ่ [3] อย่างไรก็ตาม มีการพิจารณาว่าอาการทางคลินิกของโควิด-19 อาจแตกต่างกันตั้งแต่การติดเชื้อที่ไม่มีอาการไปจนถึงกลุ่มอาการหายใจลำบากเฉียบพลัน (ARDS) [4] ปัจจัยเสี่ยงต่างๆ ที่เกี่ยวข้องกับความเป็นไปได้สูงที่จะเกิดรูปแบบที่รุนแรงของโควิด-19 ได้แก่ อายุที่มากขึ้น เพศชาย และการเจ็บป่วยที่เคยเกิดขึ้น เช่น เบาหวาน ความดันโลหิตสูง และ/หรือโรคอ้วน [5,6] โควิดที่รุนแรงและร้ายแรง-19 ยังเกี่ยวข้องกับไซโตพีเนีย ซึ่งส่วนใหญ่เป็น CD4+ ทีลิมโฟไซต์ เช่นเดียวกับการหมดแรงมากเกินไปของ Natural Killer (NK) และ CD8+ ทีเซลล์ ซึ่ง ส่งผลให้เกิดภาวะภูมิคุ้มกันบกพร่องซึ่งไม่สามารถกำจัดการติดเชื้อได้ นอกเหนือจากการพัฒนาของภาวะแทรกซ้อนร้ายแรง เช่น พายุไซโตไคน์และเหตุการณ์ลิ่มเลือดอุดตัน [7] สาเหตุหลักสำหรับการพัฒนารูปแบบของโรคที่รุนแรงและการเสียชีวิตในผู้ป่วยโรคโควิด-19 ได้รับการพิจารณาว่าเป็นการตอบสนองต่อการอักเสบมากเกินไป ซึ่งอาจส่งเสริมให้เกิดภาวะช็อกและ/หรือภาวะไซโตไคน์ในเลือดสูงที่มีความผิดปกติของอวัยวะหลายส่วน [4] กลุ่มอาการนี้เรียกว่าพายุไซโตไคน์ [8] และคล้ายกับโรคฮีโมฟาโกไซติกลิมโฟฮิสตีโอไซโตซิส (sHLH) ซึ่งประกอบด้วยภาวะการอักเสบมากเกินไปที่เกิดจากการติดเชื้อไวรัส [9,10] อาจเกี่ยวข้องกับข้อเท็จจริงที่ว่า SARS-CoV-2 ใช้ตัวรับของเอนไซม์ที่แปลงแอนจิโอเทนซิน 2 (ACE2) เพื่อแพร่เชื้อไปยังเซลล์เป้าหมาย การจับกันของ SARS-CoV-2 กับตัวรับ ACE2 ซึ่งแสดงออกอย่างกว้างขวางโดยเซลล์ของเนื้อเยื่อต่างๆ [11] นำไปสู่การเพิ่มขึ้นของ angiotensin II ซึ่งกระตุ้นปัจจัยนิวเคลียร์-κB (NF-κB) การกระตุ้นปัจจัยการถอดรหัสที่จำเป็นนี้จะช่วยกระตุ้นการแสดงออกของไซโตไคน์ที่ทำให้เกิดการอักเสบ คีโมไคน์ และโมเลกุลของการยึดเกาะ [12] แม้จะมีการตอบสนองต่อการอักเสบมากเกินไป แต่ดูเหมือนว่าจะไม่มีประสิทธิผลในการกำจัดการติดเชื้อ และเนื่องจากการกระตุ้นของทีเซลล์ อาจจบลงด้วยการตายของเซลล์ [13] พายุไซโตไคน์นี้สามารถทำให้เกิดภาวะต่อมน้ำเหลืองได้ [12,14] และยังลดระดับของ NK และ CD8+ ทีเซลล์ด้วยฟีโนไทป์ที่หมดแรงและการแสดงออกที่เพิ่มขึ้นของตัวรับที่ยับยั้ง เช่น NKG2A ในเซลล์ NK และ PD{{47 }} ใน CD8+ ทีเซลล์ [15,16] นอกจากนี้ การแสดงออกของเครื่องหมายการเสื่อมสภาพ เช่น CD107a มักจะลดลงบนพื้นผิวของเซลล์เหล่านี้ [15] ซึ่งพิสูจน์ให้เห็นถึงความบกพร่องในความสามารถในการกำจัดเซลล์ที่ติดเชื้อในผู้ที่เป็นโรคโควิดที่รุนแรงและวิกฤต-19 [17 ] แม้ว่าทั่วโลกจะตอบสนองอย่างรวดเร็วในการพัฒนาและบริหารจัดการวัคซีนที่มีประสิทธิผล แต่การเกิดขึ้นของสายพันธุ์ใหม่ๆ ที่อาจหลบหนีจากการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันที่เกิดจากวัคซีน ส่งผลให้การป้องกันการเจ็บป่วยตามอาการลดลงอย่างรวดเร็ว [18] ดังนั้นจึงจำเป็นต้องทำการวิจัยต่อไปเพื่อการรักษาที่มีประสิทธิภาพต่อโรคโควิด-19 มีการทดสอบการรักษาหลายวิธีเพื่อปรับปรุงสถานะของบุคคลที่เข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลเนื่องจากโรคร้ายแรงและร้ายแรง แต่ยังไม่มีการพิสูจน์ว่ามีความเฉพาะเจาะจงในการกำจัดเซลล์ที่ติดเชื้อหรือลดอัตราการติดเชื้อ [15,19] ดังนั้นการรักษาแบบประคับประคอง เช่น การบำบัดด้วยออกซิเจนและของเหลวยังคงเป็นกลยุทธ์ที่สำคัญที่สุดที่ใช้สำหรับการจัดการบุคคลเหล่านี้ [2,4,16,20] การรักษาที่ไม่เฉพาะเจาะจง เช่น คอร์ติโคสเตียรอยด์ ยังมีประโยชน์ในการควบคุมและลดการตอบสนองการอักเสบที่มากเกินไป [21,22] เมื่อเร็วๆ นี้ ยาหลายชนิดได้รับการอนุมัติจาก FDA เพื่อใช้รักษาผู้ป่วยโรคโควิดระดับเล็กน้อยถึงปานกลาง-19 เช่น โมลนูพิราเวียร์ ไนร์มาเทรลเวียร์ และริโทนาเวียร์ แต่เฉพาะในกรณีฉุกเฉินสำหรับบุคคลที่มีความเสี่ยงสูงเท่านั้น ไปสู่โรคร้ายแรง [23–26] มอลนูพิราเวียร์แสดงฤทธิ์ต้านไวรัสในวงกว้าง เนื่องจากความสามารถในการกระตุ้นการกลายพันธุ์ของ RNA โดยการรบกวนกับ RNA polymerase (RdRp) ที่ขึ้นกับ RNA ของไวรัสหลายชนิด รวมถึง RdRp ที่ใช้โดย SARS-CoV-2 สำหรับการจำลองและการถอดความ อาร์เอ็นเอจีโนม [27] การใช้ยา nirmatrelvir และ ritonavir ร่วมกันยังแสดงให้เห็นว่าสามารถหยุดการแพร่กระจายของการติดเชื้อในสัตว์ทดลองได้ โดยการยับยั้งโปรตีเอสหลักของไวรัส 3CLpro ของ SARS-CoV-2- 2 [28] อย่างไรก็ตาม จำเป็นต้องให้ยาต้านไวรัสเหล่านี้ร่วมกับมาตรการอื่นๆ เช่น วัคซีน เพื่อกระตุ้นการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันที่เป็นพิษต่อเซลล์ซึ่งสามารถกำจัดเซลล์ที่ติดเชื้อได้ เซลล์ส่วนใหญ่ที่มีฤทธิ์เป็นพิษต่อเซลล์ เช่น CD8+ ทีลิมโฟไซต์ และเซลล์ NK และ NKT จำเป็นต้องมีอินเตอร์ลิวคิน-15 (IL-15) สำหรับการทำงานและการควบคุมสภาวะสมดุลของร่างกาย [29] IL-15 เตรียมทีเซลล์ CD8+ สำหรับการกระตุ้นโดยแอนติเจนจำเพาะ และยังปรับปรุงความเป็นพิษต่อเซลล์และการแพร่กระจายของเซลล์ NK ดังนั้น IL-15 อาจปรับปรุงการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันของเซลล์โดยธรรมชาติและแบบปรับตัวต่อเซลล์ที่ติดเชื้อ [22,25] IL-15 ยังป้องกันเซลล์ NK และทีจากการตายของเซลล์โดยการควบคุมปัจจัยต้านอะพอพโทซิส เช่น Bcl-2 และควบคุมปัจจัยโปรอะพอพโทซิส เช่น GSK-3 [26] ลดลง โดยวิธีนี้จึงหลีกเลี่ยงไซโตพีเนีย ด้วยเหตุนี้ IL -15 จึงได้รับการเสนอให้เป็นไซโตไคน์ที่ปรับภูมิคุ้มกันชนิดใหม่ในการบำบัดด้วยภูมิคุ้มกันโรคมะเร็ง และได้รับการพิจารณาว่าเป็นสารเสริมในสูตรวัคซีน [26,30] การทดลองทางคลินิกระยะที่ 1 ที่มีการให้ยา IL-15 (rhIL{100}}) หรือ IL{101}} superagonist N-803 ฉีดเข้าหลอดเลือดในมนุษย์ได้แสดงให้เห็นว่าไซโตไคน์นี้อาจกระตุ้นให้เกิดการขยายตัวและ/หรือการกระตุ้นที่มีนัยสำคัญ ของ CD4+, CD8+ และ NK effector cells ในร่างกาย ดังนั้นจึงถูกนำมาใช้เพื่อรักษามะเร็งหรือการติดเชื้อไวรัส เช่น HIV [31–35] ดังนั้น การใช้สารปรับภูมิคุ้มกัน เช่น IL{107}} ที่อาจฟื้นฟูการทำงานของพิษต่อเซลล์ในบุคคลที่เข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลเนื่องจากวิกฤตโควิด{108}} จึงอาจมีประโยชน์ในการช่วยกำจัดไวรัสออกจากสิ่งมีชีวิต ในการศึกษาเชิงสังเกตและระยะยาวนี้ เราได้แสดงลักษณะเฉพาะของวิวัฒนาการของการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันที่เป็นพิษต่อเซลล์ต่อ SARS-CoV-2 ในเซลล์โมโนนิวเคลียร์ในเลือดส่วนปลาย (PBMC) ที่แยกได้จากบุคคลที่ได้รับการวินิจฉัยว่าเป็นโรคโควิด-19 ซึ่งเข้ารับการรักษาในห้องผู้ป่วยหนัก หน่วยดูแล (ICU) เนื่องจากภาวะแทรกซ้อนที่รุนแรง เช่นเดียวกับอิทธิพลของการตอบสนองนี้ต่อผลลัพธ์สุดท้ายเมื่อเปรียบเทียบกับปัจจัยเสี่ยงที่สำคัญอื่น ๆ นอกจากนี้เรายังประเมินความสามารถของเซลล์เหล่านี้ในการตอบสนองต่อการรักษาด้วย IL-15 และปรับปรุงการตอบสนองของยาต้านไวรัสที่เป็นพิษต่อเซลล์ ผลลัพธ์ที่ได้รับในการศึกษานี้อาจช่วยให้เข้าใจบทบาทของการตอบสนองของพิษต่อเซลล์ต่อผลลัพธ์ร้ายแรงของโควิด{113}} ได้ดีขึ้น และเพื่อความก้าวหน้าไปสู่การพัฒนาวิธีการรักษาแบบปรับภูมิคุ้มกันที่มีประสิทธิผลซึ่งส่งเสริมการกำจัดไวรัส
cistanche tubulosa-ปรับปรุงระบบภูมิคุ้มกัน
คลิกที่นี่เพื่อดูผลิตภัณฑ์ Cistanche Enhance Immunity
【สอบถามเพิ่มเติม】 อีเมล:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
2. วัสดุและวิธีการ
2.1. วิชาเรียน
บุคคลจำนวน 23 รายที่มีอาการป่วยเป็นโรคโควิดขั้นร้ายแรง-19 ซึ่งเข้ารับการรักษาในห้องไอซียูของ Hospital Universitario Ramón y Cajal (มาดริด ประเทศสเปน) ตั้งแต่เดือนตุลาคม 2020 ถึงเดือนเมษายน 2021 ได้รับคัดเลือกให้เข้าร่วมการศึกษานี้ ช่วงนี้ครอบคลุมการระบาดใหญ่ระลอกที่สองและสามของโควิด-19 ในสเปน (ตั้งแต่เดือนมิถุนายนถึงธันวาคม 2020 และตั้งแต่ธันวาคม 2020 ถึงมีนาคม 2021 ตามลำดับ) ผู้เข้าร่วมได้รับการสุ่มคัดเลือกเมื่อเข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลตามเกณฑ์ต่อไปนี้: การอนุญาตให้ได้รับความยินยอมเป็นลายลักษณ์อักษรหรือด้วยวาจาเพื่อเข้าร่วมในการศึกษา เข้ารักษาในโรงพยาบาลที่ห้องไอซียูเนื่องจากวิกฤตโควิด-19 โรคซาร์ส-CoV เชิงบวก-2 การทดสอบ RT-qPCR ในการตรวจเสมหะในช่องจมูก ดำเนินการที่การรักษาในโรงพยาบาลตามระเบียบการที่ได้รับการตรวจสอบภายใน ซึ่งมีอายุมากกว่า 18 ปี และไม่ได้รับการฉีดวัคซีนป้องกัน SARS-CoV-2 ในขณะที่ติดเชื้อ ตัวอย่างเลือดและข้อมูลทางคลินิกถูกรวบรวมทุก 2 สัปดาห์เป็นเวลารวม 13 สัปดาห์ และตัวอย่างเลือดได้รับการประมวลผลและเก็บรักษาด้วยการแช่แข็งจนกระทั่งถึงช่วงเวลาของการวิเคราะห์ ระยะเวลานี้คำนวณโดยคำนึงถึงระยะเวลาที่ต้องรักษาตัวในโรงพยาบาลในสเปนในช่วงที่เกิดการระบาดระลอกแรกประมาณ 35 วันโดยเฉลี่ย [36] ดังนั้นเราจึงสามารถดำเนินการสรรหาและติดตามผลได้อย่างน้อยสองรอบ หลังจากผ่านไป 13 สัปดาห์ ผู้เข้าร่วมจะถูกแบ่งออกเป็นสองกลุ่มตามผลลัพธ์สุดท้าย: ผลลัพธ์ร้ายแรง (n=13) ต่อจากนี้ไปคือ Exitus; หรือการออกจากโรงพยาบาล (n=10) ต่อจากนี้ไป การอยู่รอด
2.2. คำแถลงด้านจริยธรรม
บุคคลที่เข้าร่วมในการศึกษาครั้งนี้ได้รับคัดเลือกจาก Hospital Universitario Ramón y Cajal (มาดริด ประเทศสเปน) พวกเขาทั้งหมดให้ความยินยอมเป็นลายลักษณ์อักษรเพื่อเข้าร่วมในการศึกษาหรือเห็นความยินยอมด้วยวาจาโดยได้รับความยินยอมเป็นลายลักษณ์อักษรจากตัวแทน เพื่อหลีกเลี่ยงการจัดการเอกสารที่ปนเปื้อน พระราชบัญญัติคุ้มครองข้อมูลของสเปนและยุโรปในปัจจุบันรับประกันการรักษาความลับและการไม่เปิดเผยตัวตนของผู้เข้าร่วมทั้งหมด ระเบียบวิธีสำหรับการศึกษานี้ (CEI PI 32_2020-v2) จัดทำขึ้นตามปฏิญญาเฮลซิงกิ และได้รับการตรวจสอบและอนุมัติก่อนหน้านี้โดยคณะกรรมการจริยธรรมของ Instituto de Salud Carlos III (IRB IORG0006384) และโรงพยาบาลที่เข้าร่วม
2.3. เซลล์
เก็บเลือดครบจำนวนห้ามิลลิลิตรในหลอด EDTA Vacutainer (Becton Dickinson, มาดริด, สเปน) และประมวลผลทันทีเพื่อแยก PMBCs และพลาสมาโดย Ficoll-Hypaque (Pharmacia Corporation, North Peapack, NJ, USA) การปั่นแยกด้วยเกรเดียนต์ของความหนาแน่น จากนั้นจึง แช่แข็งไว้จนกระทั่งการวิเคราะห์ ความมีชีวิตของเซลล์หลังจากการละลายได้รับการประเมินโดยกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงและโฟลว์ไซโตเมทรี เซลล์ Vero E6 (ไตลิงเขียวแอฟริกัน) (ECACC 85020206) ได้รับการกรุณาจากดร. อันโตนิโอ อัลคามิ (CBM Severo Ochoa, มาดริด, สเปน) และเซลล์เหล่านี้ได้รับการเพาะเลี้ยงใน DMEM เสริมด้วย 10% FCS, 2 mM L- กลูตามีน และเพนิซิลลินและสเตรปโตมัยซิน 100 ยูนิต/มล. (ลอนซา บาเซิล สวิตเซอร์แลนด์)
ประโยชน์ของซิสตานช์สำหรับระบบภูมิคุ้มกันของผู้ชาย
2.4. การทดสอบการติดเชื้อ SARS-CoV-2 ปลอม
การกระทำที่เป็นพิษต่อเซลล์ต่อ SARS-CoV-2 ของ PBMC จากผู้เข้าร่วมได้รับการวิเคราะห์โดยใช้เซลล์ Vero E6 ที่ติดเชื้อไวรัส pNL4-3∆env_SARS CoV-2-S ∆19(G614)_เหริน ไวรัสนี้เข้ารหัสไกลโคโปรตีนขัดขวาง SARS-CoV-2 ด้วยการกลายพันธุ์ D614G ภายในจีโนม HIV-1 เช่นเดียวกับยีน Renilla luciferase ที่สร้างขึ้นตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [37,38] สายพันธุ์ต่างๆ ของ SARS-CoV-2 ที่มีการกลายพันธุ์ของ D614G ในโปรตีน Spike (S) เริ่มไหลเวียนในช่วงต้นของการระบาดใหญ่ และมีความโดดเด่นอย่างรวดเร็วในหลายภูมิภาค [39,40] โดยสรุป เลเยอร์เดี่ยวของ Vero E6 ติดเชื้อไวรัส pNL4-3∆env_ SARS-CoV-2-S∆19(G614)_Ren (100 ng p24 Gag/well ) เป็นเวลา 48 ชม. จากนั้นเซลล์ถูกล้างและเพาะเลี้ยงร่วมเป็นเวลา 1 ชั่วโมงด้วย PBMC จากผู้เข้าร่วม (อัตราส่วน 1:1) ที่ถูกบำบัดก่อนหน้านี้หรือไม่ใช้ IL-15 (13 นาโนกรัม/มิลลิลิตร) เป็นเวลา 48 ชั่วโมง เลือกขนาดยาของ IL-15 ที่ใช้สำหรับการศึกษานี้ โดยคำนึงถึงขนาดยาที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ซึ่งทำให้เกิดผลสูงสุดต่อการเพิ่มจำนวน NK (10–25 ng/mL) [41] และยังมีการขยายพิเศษของพิษต่อเซลล์ของหน่วยความจำ CD8+ ทีเซลล์ (น้อยกว่าหรือเท่ากับ 5 ng/mL) [42] กิจกรรมพิษต่อเซลล์ของ PBMC บนชั้นเดียวของ Vero E6 ถูกกำหนดหลังจากการกำจัดส่วนเหนือตะกอนที่มีเซลล์อยู่ในสารแขวนลอยและการแยกตัวของเซลล์ Vero E6 ออกจากจานด้วยสารละลาย trypsin-EDTA (Sigma Aldrich-Merck, Darmstadt, Germany) และ การหาปริมาณที่ตามมาของกิจกรรมแคสเปส -3 ในเซลล์เดี่ยวโดยการเรืองแสงโดยใช้ระบบการวิเคราะห์ Caspase-Glo 3/7 (Promega, Madison, WI, USA) เพื่อกำหนดว่าประชากรเซลล์ที่เป็นพิษต่อเซลล์กลุ่มใดรับผิดชอบต่อกิจกรรมนี้ PBMC ถูกรวบรวมจากส่วนลอยเหนือตะกอนและจากนั้นวิเคราะห์โดยโฟลว์ไซโตเมทรี
2.5. การวิเคราะห์โฟลว์ไซโตเมทรี
สำหรับการย้อมสีของมาร์กเกอร์ฟีโนไทป์ของพื้นผิวเซลล์ แอนติบอดีคอนจูเกตต่อไปนี้ถูกใช้: CD{{0}}PE, CD8-APC-H7, CD56-FITC และ CD1{{24 }}7a-PE-Cy7 ซื้อจาก BD Biosciences (ซานโฮเซ แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา) สำหรับการย้อมสีเครื่องหมายการหมดสภาพ มีการใช้คอนจูเกตแอนติบอดีต่อไปนี้: CD3-BV510, CD8-APC-H7, CD56-FITC และ PD1-BV650 ที่ซื้อจาก BD Biosciences รวมถึง CD4-PE ที่ซื้อจาก Immunostep SL (ซาลามันกา สเปน) และ TIGIT-AlexaFluor700 ที่ซื้อจาก Thermo Fisher (วอลแทม แมสซาชูเซตส์ สหรัฐอเมริกา) ตัวอย่างได้มาโดยใช้โฟลว์ไซโตมิเตอร์ BD LSRFortessa X-20 พร้อมซอฟต์แวร์ FACS Diva v 6.0 (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, USA) จากนั้นวิเคราะห์โดยใช้ซอฟต์แวร์ FlowJo v10.0.7 (Tree Star Inc., Ashland, OR , สหรัฐอเมริกา).
2.6. การตรวจหา RNAemia ของ SARS-CoV-2
RNA ทั้งหมดถูกสกัดจากตัวอย่างพลาสมาโดยใช้ชุดไวรัส QIAamp MinElute (Qiagen Iberia, มาดริด, สเปน) ในเครื่องแยกอัตโนมัติ QIAcube (Qiagen, Hilden, Germany) การตรวจจับ RNA ของ SARS-CoV-2 ดำเนินการโดยการทดสอบ RT-qPCR โดยมีเป้าหมายในยีนซองจดหมาย (E) และนิวคลีโอแคปซิด (N) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [43] ซึ่งเป็นส่วนหนึ่งของคำแนะนำชั่วคราวของอนามัยโลก องค์กร (WHO) สำหรับการตรวจวินิจฉัยโรค SARS-CoV- 2 [44] ตัวอย่างถูกพิจารณาว่าเป็นบวกสำหรับการวิเคราะห์เมื่อค่ารอบการหาปริมาณ (Cq) ต่ำกว่า 45 รอบ
ประโยชน์ของซิสตานช์สำหรับระบบภูมิคุ้มกันของผู้ชาย
2.7. การวิเคราะห์ทางสถิติ
การวิเคราะห์ทางสถิติและกราฟิกทั้งหมดดำเนินการโดยใช้ซอฟต์แวร์ GraphPad Prism เวอร์ชัน 8.4.3 (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA) การเปรียบเทียบกลุ่มดำเนินการโดยใช้การทดสอบ U-test ของ Mann–Whitney, การทดสอบอันดับแบบจับคู่คู่ของ Wilcoxon, การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว และการทดสอบการเปรียบเทียบหลายรายการของ Tukey การทดสอบที่แน่นอนของฟิชเชอร์ใช้เพื่อประเมินความแตกต่างในลักษณะทางคลินิกระหว่างทั้งสองกลุ่ม ค่าของ p < 0.{{10}}5 (สองด้าน) ถือว่ามีนัยสำคัญทางสถิติ ค่าเฉลี่ยและส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานใช้ในการคำนวณสถิติของโคเฮนโดยใช้เครื่องคำนวณขนาดเอฟเฟกต์ของ Excel [45] ขนาดเอฟเฟกต์ 0.2, 0.5, 0.8 หรือมากกว่าหรือเท่ากับ 1.2 เป็นการบ่งชี้ขนาดเอฟเฟกต์ขนาดเล็ก กลาง ใหญ่ และใหญ่มาก ตามลำดับ [46]
3. ผลลัพธ์
3.1. ลักษณะของผู้เข้าร่วม
การศึกษาเชิงสังเกตและระยะยาวนี้รวมผู้ป่วย 23 รายที่ได้รับการวินิจฉัยว่าเป็นโรคโควิด-19 ซึ่งเข้ารับการรักษาในห้อง ICU เนื่องจากมีภาวะแทรกซ้อนที่รุนแรง เก็บตัวอย่างเลือดทุกๆ 2 สัปดาห์ เป็นเวลารวม 13 สัปดาห์หรือจนกระทั่งผลลัพธ์สุดท้าย ไม่มีรายงานว่าผู้เข้าร่วมในการศึกษานี้ได้รับการฉีดวัคซีนป้องกันโควิด-19 ในขณะที่ติดเชื้อและเข้ารับการรักษาในโรงพยาบาล ลักษณะทางสังคมและประชากรที่สำคัญและทางคลินิกของผู้เข้าร่วมทั้งหมดสรุปไว้ในตารางที่ 1
ตารางที่ 1 ข้อมูลประชากรและทางคลินิกของผู้เข้าร่วมทั้งหมดจากกลุ่ม Exitus และกลุ่ม Survival ที่ได้รับคัดเลือกสำหรับการศึกษาครั้งนี้
อายุมัธยฐานของกลุ่ม Exitus คือ 65.0 ปี (IQR 62.0–69.0) ในขณะที่อายุเฉลี่ยของกลุ่ม Survival คือ 63.{{7} } ปี (IQR 59.0–68.5) ผู้เข้าร่วมส่วนใหญ่ (73.9%) เป็นผู้ชาย และ 65.2% มีโรคร่วมอย่างน้อย 1 โรค โรคร่วมที่สำคัญคือภาวะไขมันผิดปกติ (52.2%) ความดันโลหิตสูง (39.1%) และเบาหวาน (26.1%) ผู้ป่วยส่วนใหญ่ได้รับคอร์ติคอยด์ (82.6%) ยาปฏิชีวนะ (82.6%) และยาต้านการแข็งตัวของเลือด (82.6%) เป็นวิธีการรักษามาตรฐาน พวกเขายังได้รับการรักษาอื่นๆ เช่น โทซิลิซูแมบ (17.4%) และเรมเดซิเวียร์ (8.7%) อาการและอาการแสดงที่พบบ่อยที่สุดคือ โรคปอดบวม (100%) ไอและเสมหะ (87.0%) หายใจลำบาก (87.0%) และมีไข้ (87.0%) ในระหว่างการเข้าพักในห้องไอซียู ผู้ป่วย 12 ราย (92.3%) จากกลุ่ม Exitus และผู้ป่วย 10 ราย (100%) จากกลุ่ม Survival จำเป็นต้องมีเครื่องช่วยหายใจแบบรุกราน เราไม่พบความแตกต่างที่มีนัยสำคัญระหว่างทั้งสองกลุ่มในด้านข้อมูลทางสังคมและประชากรและข้อมูลทางคลินิก นอกจากนี้ เรายังวิเคราะห์ข้อมูลชีวเคมีในเลือดที่การตรวจวัดพื้นฐาน (ตัวอย่างแรก) ระหว่างทั้งสองกลุ่ม และเราไม่พบความแตกต่างที่มีนัยสำคัญระหว่างกลุ่มเช่นกัน ข้อมูลโดยละเอียดเพิ่มเติมเกี่ยวกับข้อมูลทางคลินิก การรักษาในโรงพยาบาล และข้อมูลชีวเคมีในเลือดของผู้เข้าร่วมทุกคนแสดงอยู่ในตารางเสริม S1 และ S2
3.2. ระยะเวลาการรักษาในโรงพยาบาลและห้องไอซียู
ระยะเวลานอนโรงพยาบาลเฉลี่ยอยู่ที่ 59.0 (IQR 36.0–100.0) วันในกลุ่ม Exitus และ 73 วัน 0 (IQR 44.5–90.{{20}}) วันในกลุ่มผู้รอดชีวิต (รูปที่ 1A) ระยะเวลาเฉลี่ยของการเข้าพัก ICU คือ 49.0 (IQR 25.5–82.0) วันในกลุ่ม Exitus และ 44.0 (IQR 25.0–66.5) วันในกลุ่ม Survival (รูปที่ 1B) ไม่พบความแตกต่างที่มีนัยสำคัญในพารามิเตอร์เหล่านี้ระหว่างทั้งสองกลุ่ม
ภาพที่ 1 ระยะเวลาในการนอนโรงพยาบาลและห้องไอซียู ระยะเวลาในการพักรักษาในโรงพยาบาล (A) และห้องไอซียู (B) (วัน) ในผู้ป่วยโรคโควิดขั้นวิกฤต-19 ซึ่งถูกแบ่งออกเป็นสองกลุ่มตามผลลัพธ์สุดท้าย: ผลลัพธ์ที่ร้ายแรง กลุ่ม Exitus (จุดเต็ม); หรือการพักฟื้นและออกจากโรงพยาบาล กลุ่มผู้รอดชีวิต (จุดว่าง) แต่ละจุดสอดคล้องกับบุคคลหนึ่งคน และเส้นแนวตั้งแสดงถึงค่าเฉลี่ย ±ความคลาดเคลื่อนมาตรฐานของค่าเฉลี่ย (SEM) นัยสำคัญทางสถิติระหว่างกลุ่มคำนวณโดยใช้การทดสอบ Mann – Whitney U
3.3. ระดับของเม็ดเลือดขาวลิมโฟไซต์ในเลือด
บุคคลจากกลุ่ม Exitus มีอาการ lymphopenia (<1000 cells/mm3 ) only at the time of hospitalization (t = 0), but at Week 2, all participants showed levels of lymphocytes above the threshold for lymphopenia (Figure 2). Lymphocyte count was 1.54 (p = 0.0318; Cohen's d = 1.00)- and 1.71 (p = 0.0030; Cohen's d = 3.17)-fold higher in patients from the Survival group in comparison with the Exitus group at baseline and after 4 weeks of hospitalization, respectively. Although both groups showed an increase in the levels of lymphocytes in peripheral blood during hospitalization, they remained on average 1.54-fold higher in individuals of the Survival group in comparison with the participants of the Exitus group for at least 10 weeks. In the Survival group, the lymphocyte counts steadily increased until Week 6 of hospitalization and then decreased until Week 10.
รูปที่ 2 จำนวนลิมโฟไซต์ในเลือดส่วนปลายระหว่างการรักษาในโรงพยาบาลเนื่องจากวิกฤตโควิด-19 จำนวนเม็ดเลือดขาว (เซลล์/มม3 ) ถูกกำหนดทุก 2 สัปดาห์เป็นเวลารวม 13 สัปดาห์หรือจนกระทั่งผลลัพธ์สุดท้ายในตัวอย่างเลือดจากผู้เข้าร่วมของกลุ่ม Exitus (จุดเติม) และกลุ่ม Survival (จุดว่าง) เกณฑ์ขั้นต่ำสำหรับภาวะเม็ดเลือดขาวลิมโฟพีเนียแสดงที่ 1,000 เซลล์/มม3 โดยมีเส้นประ แต่ละจุดสอดคล้องกับค่าเฉลี่ยของข้อมูล และเส้นแนวตั้งแสดงถึง SEM นัยสำคัญทางสถิติระหว่างกลุ่มคำนวณโดยใช้การทดสอบ Mann – Whitney U และภายในกลุ่มจะใช้การทดสอบ Wilcoxon U
3.4. การออกฤทธิ์ที่เป็นพิษต่อเซลล์ของ PBMC ต่อเซลล์ Vero E6 ที่ติดเชื้อ SARS-CoV เทียม-2
เราประเมินฤทธิ์เป็นพิษต่อเซลล์ของ PBMC ของผู้ป่วยที่เข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลในตัวอย่างที่ยาวโดยการหาปริมาณการกระตุ้นแคสเปส-3 ในชั้นเดียวของเซลล์ Vero E6 ที่ติดเชื้อ SARS-CoV เทียม-2 หลังจากการเพาะเลี้ยงร่วมเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ( อัตราส่วน 1:1) ความสามารถในการเป็นพิษต่อเซลล์ของ PBMC ที่แยกได้จากบุคคลในกลุ่ม Exitus ไม่มีการเปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญระหว่างการรักษาในโรงพยาบาล และยังคงต่ำอย่างต่อเนื่องจนกระทั่งเกิดผลร้ายแรง (รูปที่ 3) ฤทธิ์ที่เป็นพิษต่อเซลล์นี้ไม่เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเซลล์เหล่านี้ถูกกระตุ้นด้วย IL-15 เป็นเวลา 48 ชั่วโมง ในกลุ่มผู้รอดชีวิต กิจกรรมที่เป็นพิษต่อเซลล์ของ PBMC เพิ่มขึ้น 2.69-เท่า (p=0.0234; Cohen's d=1.12) ในตัวอย่างพื้นฐาน (t {{17} }) เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม Exitus และเพิ่มขึ้นอย่างต่อเนื่องจนถึงสัปดาห์ที่ 6 ของการเข้ารับการรักษาในโรงพยาบาล การเพิ่มขึ้นนี้แสดงให้เห็นนัยสำคัญทางสถิติในการเปรียบเทียบระหว่างกลุ่มในสัปดาห์ที่ 4 (5.58-fold; p=0.0290; Cohen's d=1.28) ตั้งแต่สัปดาห์ที่ 6 เป็นต้นไป กิจกรรมของพิษต่อเซลล์ลดลงในกลุ่ม Survival จนกระทั่งออกจากโรงพยาบาล ซึ่งเป็นไปตามการสลายตัวของจำนวนเม็ดเลือดขาวในสัปดาห์เดียวกับการรักษาในโรงพยาบาล (ดูรูปที่ 2) การรักษาด้วย IL-15 เพิ่มขึ้น 2.30- โดยเฉลี่ยกิจกรรมที่เป็นพิษต่อเซลล์ของ PBMC ของแต่ละบุคคลจากกลุ่มผู้รอดชีวิตในทุกตัวอย่างระหว่างการติดตามผล หลังจากเข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลเป็นเวลา 4 สัปดาห์ กิจกรรมที่เป็นพิษต่อเซลล์ที่เกิดจาก IL-15- เพิ่มขึ้น 6.18- เท่า (p=0.0303; Cohen's d=1.05) ใน PBMC ของ บุคคลจากกลุ่มเอาชีวิตรอด
รูปที่ 3 ความเป็นพิษต่อเซลล์โดยตรงของ PBMC ที่แยกได้จากผู้ป่วยที่เข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลที่มีภาวะวิกฤตโควิด-19 ความสามารถเป็นพิษต่อเซลล์ของ PBMC จากแต่ละกลุ่มของ Exitus (จุดเติม) และกลุ่ม Survival (จุดว่าง) ถูกวัดโดยการหาปริมาณการออกฤทธิ์ของแคสเปส-3 ในชั้นเดียวของเซลล์ Vero E6 ที่ติดเชื้อ SARS-CoV ชนิดเทียม-2 หลังจากการเพาะเลี้ยงร่วม (1:1) เป็นเวลา 1 ชั่วโมงในสภาวะพื้นฐาน (เส้นสีเทา) หรือหลังการรักษาด้วย IL-15 เป็นเวลา 48 ชั่วโมง (เส้นสีดำ) แต่ละจุดสอดคล้องกับค่าเฉลี่ยของข้อมูล และเส้นแนวตั้งแสดงถึง SEM นัยสำคัญทางสถิติระหว่างกลุ่มคำนวณโดยใช้การทดสอบ Mann – Whitney U และภายในกลุ่มจะใช้การทดสอบ Wilcoxon U
3.5. ระดับของเซลล์ NK และ NKT
ระดับของเซลล์ที่มีฟีโนไทป์ที่เป็นพิษต่อเซลล์ได้รับการวิเคราะห์ใน PBMC ที่ได้รับการเพาะเลี้ยงร่วมกับเซลล์ Vero E6 ที่ติดเชื้อ SARS-CoV เทียม-2 เราไม่พบความแตกต่างที่มีนัยสำคัญระหว่างระดับของเซลล์ที่มีฟีโนไทป์ NK (CD3-CD56+) ระหว่างบุคคลทั้งสองกลุ่ม แม้หลังการรักษาด้วย IL-15 (รูปที่ 4A) การแสดงออกของเครื่องหมายการลดขนาด CD107a บนพื้นผิวของเซลล์เหล่านี้ยังคงไม่เปลี่ยนแปลงในบุคคลจากกลุ่ม Exitus แม้ว่าการแสดงออกนี้จะเพิ่มขึ้นอย่างต่อเนื่องจากสัปดาห์ที่ 4 จนกระทั่งออกจากโรงพยาบาลในกลุ่ม Survival แต่ความแตกต่างนี้ไม่ได้รับนัยสำคัญทางสถิติเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม Exitus (รูปที่ 4B) การบำบัดด้วย IL-15 ไม่ได้ปรับเปลี่ยนการแสดงออกของ CD107a ในเซลล์เหล่านี้อย่างมีนัยสำคัญ จากสัปดาห์ที่ 4 PBMC จากแต่ละกลุ่มของทั้งสองกลุ่มแสดงการเพิ่มขึ้นของระดับเซลล์ที่มีฟีโนไทป์ NKT (CD3+CD56+) ซึ่งเป็น 417-สูงกว่าใน PBMC จาก บุคคลของกลุ่ม Exitus ในสัปดาห์ที่ 6 แม้ว่าความแตกต่างนี้จะไม่บรรลุนัยสำคัญ (p=0.0571; Cohen's d=3.15) (รูปที่ 5A) การเพิ่มขึ้นนี้สูงขึ้นเล็กน้อยเมื่อเซลล์ได้รับการบำบัดด้วย IL-15 ในทั้งสองกลุ่ม แม้ว่าข้อมูลจะไม่ถึงนัยสำคัญทางสถิติเช่นกัน (รูปที่ 5A) การแสดงออกของ CD107a ไม่มีการเปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญระหว่างทั้งสองกลุ่มหรือหลังการบำบัดด้วย IL-15 (รูปที่ 5B)
รูปที่ 4 ระดับของเซลล์ NK ใน PBMC จากบุคคลที่เข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลด้วยโรคโควิดขั้นวิกฤต-19 (A) ระดับรวมของเซลล์ NK (CD3-CD56+) และ (B) การแสดงออกของเครื่องหมายการลดแกรนูล CD107a ในเซลล์เหล่านี้ได้รับการประเมินใน PBMC ในสภาวะพื้นฐาน (เส้นสีเทา) หรือหลังการบำบัดด้วย IL-15 เป็นเวลา 48 ชั่วโมง (เส้นสีดำ) หลังจากการเพาะเลี้ยงร่วม (1:1) กับเซลล์ Vero E6 ที่ติดเชื้อ SARS-CoV ปลอม-2 เป็นเวลา 1 ชั่วโมง แต่ละจุดสอดคล้องกับค่าเฉลี่ยของข้อมูล และเส้นแนวตั้งแสดงถึง SEM นัยสำคัญทางสถิติระหว่างกลุ่มคำนวณโดยใช้ Mann – Whitney U-test และภายในกลุ่มใช้ Wilcoxon U-test
รูปที่ 5 ระดับของเซลล์ NKT ใน PBMC จากบุคคลที่เข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลด้วยโรคโควิดขั้นวิกฤต-19 ระดับทั้งหมดของเซลล์ NKT (CD3+CD56+) (A) และการแสดงออกของเครื่องหมายการลดแกรนูล CD107a ในเซลล์เหล่านี้ (B) ได้รับการประเมินในสภาวะพื้นฐาน (เส้นสีเทา) หรือหลังการบำบัดด้วย IL{ {5}} เป็นเวลา 48 ชั่วโมง (เส้นสีดำ) หลังจากการเพาะเลี้ยงร่วม (1:1) เป็นเวลา 1 ชั่วโมงกับเซลล์ Vero E6 ที่ติดเชื้อ SARS-CoV ปลอม-2 แต่ละจุดสอดคล้องกับค่าเฉลี่ยของข้อมูล และเส้นแนวตั้งแสดงถึง SEM นัยสำคัญทางสถิติระหว่างกลุ่มคำนวณโดยใช้การทดสอบ Mann – Whitney U และภายในกลุ่มจะใช้การทดสอบ Wilcoxon U
3.6. ระดับของซีดี8+ ทีเซลล์
จำนวน CD8 ได้รับการปรับปรุง 2.07- เท่า (p=0.0409; Cohen's d=0.94) ในตัวอย่างพื้นฐาน (t=0) ของกลุ่ม Exitus ในการเปรียบเทียบ กับกลุ่มผู้รอดชีวิต และระดับเหล่านี้ยังคงคงที่จนกระทั่งเกิดผลร้ายแรง (รูปที่ 6A) IL-15 ไม่ได้ก่อให้เกิดผลประโยชน์ที่มีนัยสำคัญต่อระดับของประชากรเซลล์นี้ ในกลุ่ม Survival CD8+ ทีเซลล์ลดลง 1.51- เท่าโดยเฉลี่ยเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม Exitus (รูปที่ 6A) การแสดงออกของ CD107a ลดลง 1.53- เท่า (p=0.0313) ที่สัปดาห์ที่ 4 ใน CD8+ ทีเซลล์จากแต่ละกลุ่มของกลุ่ม Exitus และยังคงไม่เปลี่ยนแปลงจนกระทั่งเสียชีวิต ผล. การบำบัดด้วย IL-15 แสดงให้เห็นประโยชน์เล็กน้อยในการแสดงออกของเครื่องหมายการลดแกรนูลนี้ แต่ความแตกต่างนี้ไม่มีนัยสำคัญ (รูปที่ 6B) ในกลุ่มผู้รอดชีวิต ยังมีการลดลงของการแสดงออกของ CD107a ใน CD8+ ทีเซลล์ในสัปดาห์ที่ 4 และจากนั้นก็เพิ่มขึ้นเป็นต้นไป แต่ไม่มีนัยสำคัญเกิดขึ้นก่อนหรือหลังการรักษาด้วย IL{{26 }} (รูปที่ 6B)
รูปที่ 6 ระดับของ CD8+ ทีเซลล์ใน PBMC จากบุคคลที่เข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลด้วยโรคโควิดขั้นวิกฤต-19 (A) ระดับรวมของทีเซลล์ CD8+ (CD3+CD8+) และ (B) การแสดงออกของเครื่องหมายการลดแกรนูล CD107a ในเซลล์เหล่านี้ได้รับการประเมินใน PBMC ในสภาวะพื้นฐาน (สีเทา เส้น) หรือหลังการรักษาด้วย IL-15 เป็นเวลา 48 ชั่วโมง (เส้นสีดำ) หลังจากการเพาะเลี้ยงร่วมกัน (1:1) กับเซลล์ Vero E6 ที่ติดเชื้อ SARS-CoV ปลอม-2 เป็นเวลา 1 ชั่วโมง แต่ละจุดสอดคล้องกับค่าเฉลี่ยของข้อมูล และเส้นแนวตั้งแสดงถึง SEM นัยสำคัญทางสถิติระหว่างกลุ่มคำนวณโดยใช้การทดสอบ Mann – Whitney U และภายในกลุ่มจะใช้การทดสอบ Wilcoxon U
3.7. ระดับของเครื่องหมายแสดงการหมดแรง
ระดับการแสดงออกของมาร์กเกอร์การหมดแรงทางภูมิคุ้มกัน PD-1 (โปรตีนการตายของเซลล์ที่ถูกโปรแกรมไว้) และ TIGIT (ที เซลล์ อิมมูโนรีเซพเตอร์ที่มีโดเมน Ig และ ITIM) ถูกวิเคราะห์โดยโฟลว์ไซโตเมทรีในทีเซลล์ CD4+ และเซลล์ที่เป็นพิษต่อเซลล์จาก ผู้เข้าร่วมทั้งหมด ตัวอย่างที่ได้รับ ณ เวลาที่เข้ารับการรักษาในโรงพยาบาล (t=0) จนถึงสัปดาห์ที่ 6 ของการรักษาในโรงพยาบาลได้รับการวิเคราะห์ เนื่องจากขาดตัวอย่างที่สามารถหาได้หลังจากเวลานี้ CD4+ และ CD8+ ทีเซลล์จากแต่ละกลุ่มของกลุ่ม Exitus แสดงระดับ PD-1 ที่เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ 1.72 (p=0.0095; Cohen's d {{ 11}}.87)- และ 2.92-พับ (p=0.0317; Cohen's d=2.07) หลังการรักษาในโรงพยาบาล 4 สัปดาห์ ตามลำดับ เมื่อเปรียบเทียบกับบุคคลจาก กลุ่มผู้รอดชีวิต (รูปที่ 7A, B, กราฟด้านซ้าย) ในเซลล์ NKT ระดับของ TIGIT เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญจากเวลาที่เข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลจนถึง 6 สัปดาห์ของการรักษาในโรงพยาบาลในบุคคลจากกลุ่ม Exitus และระดับเหล่านี้เพิ่มขึ้น 1.76-เท่า (p=0.0357 ; Cohen's d=0.33) หลังจากเข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลเป็นเวลา 2 สัปดาห์ เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มผู้รอดชีวิต (รูปที่ 7C กราฟด้านขวา)
ไม่มีความแตกต่างที่มีนัยสำคัญระหว่างกลุ่มถูกสังเกตพบในระดับการแสดงออกของเครื่องหมายการหมดแรงเหล่านี้ในเซลล์ NK (รูปที่ 7D)
รูปที่ 7 ระดับการแสดงออกของเครื่องหมายแสดงอาการหมดแรงใน PBMC จากบุคคลที่เข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลด้วยอาการวิกฤตโควิด-19 ระดับการแสดงออกของ PD-1 และ TIGIT ใน CD4+ ทีเซลล์ (A), CD8+ ทีเซลล์ (B), เซลล์ NKT (C) และเซลล์ NK (D) แต่ละจุดสอดคล้องกับค่าเฉลี่ยของข้อมูล และเส้นแนวตั้งแสดงถึง SEM นัยสำคัญทางสถิติระหว่างกลุ่มคำนวณโดยใช้การทดสอบ Mann – Whitney U และภายในกลุ่มจะใช้ ANOVA
3.8. ปริมาณของ SARS-CoV-2 RNAemia ในพลาสมา
การมีอยู่ของ RNA จาก SARS-CoV-2 ได้รับการวิเคราะห์ในพลาสมาของบุคคลทั้งหมดในตัวอย่างพื้นฐาน (t=0) และไม่ได้รับผลลัพธ์ที่เป็นบวกจากผู้เข้าร่วมรายใด โดยมีค่า Cq ต่ำกว่าขีดจำกัด ของการตรวจจับเชิงบวก 45 รอบ
4. การอภิปราย
การติดเชื้อ SARS-CoV-2 อาจก่อให้เกิดอาการทางคลินิกหลายอย่างของเชื้อ COVID-19 ตั้งแต่การติดเชื้อที่ไม่มีอาการไปจนถึงโรคร้ายแรง ร้ายแรง หรือแม้กระทั่งถึงแก่ชีวิต [4] แม้ว่าการฉีดวัคซีนโดยทั่วไปของประชากรจะช่วยลดรูปแบบที่รุนแรงของโรคได้อย่างมาก แต่การเกิดขึ้นของสายพันธุ์ใหม่ของ SARS-CoV-2 กำลังเพิ่มจำนวนบุคคลที่เป็นโรคโควิดขั้นวิกฤต-19 และจำเป็นต้อง เข้ารักษาในโรงพยาบาลเนื่องจากการติดเชื้อที่รุนแรง [47,48] ดังนั้นจึงยังคงเป็นสิ่งสำคัญอันดับแรกในการพัฒนากลยุทธ์การป้องกันและการรักษาที่อาจหลีกเลี่ยงการพัฒนารูปแบบวิกฤตของโควิด-19 และผลลัพธ์ที่ร้ายแรงในผู้ป่วยที่เข้ารับการรักษาในโรงพยาบาล มีการอธิบายว่าผู้สูงอายุที่มีโรคร่วมมีความเสี่ยงสูงที่จะเป็นโรคโควิดที่รุนแรงและวิกฤต{{1{{30}}} [49] ในสเปน ผู้ทำนายการเสียชีวิตเนื่องจากโควิดที่สำคัญที่สุด-19 คือผู้ชายที่มีอายุมากกว่า 50 ปีซึ่งมีโรคร่วม เช่น ความดันโลหิตสูงและเบาหวาน [36] ในการศึกษาของเรา ผู้เข้าร่วมส่วนใหญ่ของทั้งสองกลุ่มนำเสนอคุณลักษณะเหล่านี้ โดยไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างข้อมูลทางสังคมประชากร ทางคลินิก หรือทางชีวเคมี ที่อาจส่งผลต่อความรุนแรงของโรคหรือผลลัพธ์ที่ร้ายแรง อันที่จริง ทั้งสองกลุ่มแสดงระดับพารามิเตอร์ทางชีวเคมีที่เพิ่มขึ้นซึ่งสัมพันธ์กับความเสี่ยงที่สูงขึ้นของผลลัพธ์ที่ไม่ดีของโควิด-19 เช่น C-reactive Protein (CRP) และแลคเตตดีไฮโดรจีเนส (LDH) [50–56 ] ในทางกลับกัน แม้ว่าจะมีรายงานว่าบุคคลที่เป็นโรคโควิดขั้นรุนแรง-19 อาจตรวจพบโรคซาร์ส-CoV-2 RNAnemia [54] ได้ ซึ่งสัมพันธ์กับความเสี่ยงที่เพิ่มขึ้นของการเสียชีวิต [55] ไม่มีผู้เข้าร่วมในการศึกษาของเราที่นำเสนอ RNA ที่ตรวจพบได้ในซีรั่ม ดังนั้นเราจึงไม่สามารถสร้างความสัมพันธ์ระหว่างไวรัส viremia ที่ตรวจพบได้กับผลลัพธ์ที่ร้ายแรง สุดท้ายนี้ โควิด-19 แสดงระยะเวลาที่ต้องพักรักษาตัวในโรงพยาบาลและอัตราการเสียชีวิตที่สูงกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับโรคติดเชื้ออื่นๆ ที่ต้องเข้ารับการรักษาในห้องไอซียู เช่น โรคปอดบวมจากชุมชน (CAP) หรือภาวะติดเชื้อในกระแสเลือด [56] และคาดการณ์ไว้ในปี 35 โดยเฉลี่ยสำหรับบุคคลที่เข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลในสเปนในช่วงที่เกิดการระบาดระลอกแรก [36] ในการศึกษาของเรา ระยะเวลาเฉลี่ยของการพักรักษาในโรงพยาบาลมีความคล้ายคลึงกันระหว่างทั้งกลุ่ม Exitus และ Survival (59.0 และ 73.0 วัน ตามลำดับ) และ 50% ของผู้เข้าร่วมทั้งหมดพักอยู่ใน ICU มากกว่า 40 วัน ดังนั้นจึงจำเป็นต้องพิจารณาปัจจัยที่แตกต่างอื่นๆ เพื่ออธิบายผลลัพธ์การเสียชีวิตในกลุ่ม Exitus และการฟื้นตัวในกลุ่ม Survival
ประโยชน์ของ Cistanche Tubulosa-เสริมสร้างระบบภูมิคุ้มกัน
Lymphopenia ยังถือเป็นปัจจัยเสี่ยงต่อความรุนแรงของโรคที่เกี่ยวข้องกับการอยู่โรงพยาบาลนานขึ้น [57] ในการศึกษาของเรา 73.9% ของผู้เข้าร่วมทั้งกลุ่ม Exitus และ Survival มีจำนวนเม็ดเลือดขาวต่ำ อย่างไรก็ตาม ระดับของลิมโฟไซต์ทั้งหมดสูงกว่าโดยเฉลี่ยในผู้เข้าร่วมกลุ่ม Survival เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม Exitus ซึ่งเป็นไปตามข้อสังเกตก่อนหน้าที่ว่าบุคคลที่เสียชีวิตเนื่องจากโควิด-19 พัฒนาภาวะต่อมน้ำเหลืองโตรุนแรงมากขึ้นเมื่อเวลาผ่านไป เมื่อเปรียบเทียบกับผู้ที่รอดชีวิต [58] และลิมโฟไซต์เหล่านี้มักจะแสดงฟีโนไทป์ที่หมดแรง ซึ่งส่งผลให้ ภูมิคุ้มกันบกพร่องอย่างค่อยเป็นค่อยไป [15,16] เนื่องจากการตอบสนองของยาต้านไวรัสที่เป็นพิษต่อเซลล์ที่มีประสิทธิผลเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการควบคุมการติดเชื้อไวรัส รวมถึง SARS-CoV-2 [17] การสร้างภูมิคุ้มกันใหม่จึงมีความสำคัญอย่างยิ่งต่อการฟื้นตัวจากโควิด-19 การเร่งการสร้างภูมิคุ้มกันขึ้นมาใหม่นั้นขึ้นอยู่กับการขยายตัวของเซลล์เม็ดเลือดขาวส่วนปลายในสภาวะสมดุล ซึ่งอาจเป็นกลยุทธ์ที่ดีในการปรับปรุงผลลัพธ์ของบุคคลที่เข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลเนื่องจากโควิดขั้นรุนแรง-19 [58] IL-15 เป็นไซโตไคน์ที่จำเป็นสำหรับการทำงานและสภาวะสมดุลของ CD8+ ทีเซลล์, NK และเซลล์ NKT [29] และได้รับการเสนอให้เป็นการบำบัดด้วยภูมิคุ้มกันแบบใหม่สำหรับโรคต่างๆ เช่น มะเร็ง และการติดเชื้อเอชไอวี [26,30,35,59]. ดังนั้น ในการศึกษานี้ เราประเมินว่าการรักษาในหลอดทดลองด้วย IL-15 สามารถปรับปรุงการตอบสนองของพิษต่อเซลล์ใน PBMC ของบุคคลที่เข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลที่มีภาวะโควิดที่รุนแรงและวิกฤต-19 หรือไม่ ในขณะที่การติดเชื้อดำเนินไป เพื่อที่จะตรวจสอบความถูกต้องของการรักษา ในฐานะผู้สมัครเพื่อกระตุ้นการสร้างภูมิคุ้มกันใหม่ในช่วงโควิด-19 จากการประเมินขนาดยา เราสังเกตเห็นการเพิ่มขึ้นโดยรวมของการตอบสนองที่เป็นพิษต่อเซลล์ต่อเซลล์เป้าหมายที่ติดเชื้อ SARS-CoV เทียม-2 ใน PBMC ของบุคคลที่รอดชีวิตจากโควิด-19 หลังจากเข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลโดยเฉลี่ย 44 วัน ห้องไอซียู การตอบสนองที่เป็นพิษต่อเซลล์นี้เพิ่มขึ้นอย่างมีประสิทธิผล 2.3-เท่าโดยเฉลี่ยเมื่อรักษาด้วย IL-15 ในทุกตัวอย่างที่รวบรวมในระหว่างการติดตามผล โดยสัปดาห์ที่ 6 ของการเข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลเป็นจุดเปลี่ยนที่ลิมโฟไซต์ทั้งสองนับ และกิจกรรมพิษต่อเซลล์เริ่มลดลงจนกระทั่งออกจากโรงพยาบาล แม้จะมีลักษณะทางสังคมและประชากร คลินิก และชีวเคมีที่คล้ายคลึงกัน และต้องเข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลมาเกือบระยะเวลาเท่ากัน (รวม 59 วัน โดย 49 วันอยู่ในห้องไอซียู) ซึ่งเป็นกลุ่มบุคคลที่ไม่รอดจากโควิด{{34} } แสดง PBMC ที่ไม่ตอบสนองต่อหน้าเซลล์เป้าหมายที่ติดเชื้อ แม้ว่าพวกมันจะถูกกระตุ้นด้วย IL-15 ก็ตาม ระดับลิมโฟไซต์ทั้งหมดอยู่เหนือเกณฑ์ของภาวะลิมโฟพีเนียในบุคคลจากกลุ่มนี้ตั้งแต่สัปดาห์ที่ 2 ของการรักษาในโรงพยาบาล อย่างไรก็ตาม ระดับเหล่านี้ไม่ได้เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในช่วงเวลาที่เข้ารับการรักษาในโรงพยาบาล และไม่มีการตรวจพบการตอบสนองของไวรัสที่มีประสิทธิผล แม้ว่าจะมี IL{37}} ในขนาดยาที่ตรวจวิเคราะห์ก็ตาม การไม่มีการตอบสนองต่อ IL-15 ได้รับการอธิบายไว้สำหรับการติดเชื้อเรื้อรังอื่นๆ เช่น ไวรัสภูมิคุ้มกันบกพร่องในมนุษย์ (HIV) ไวรัสตับอักเสบซี (HCV) ไวรัสตับอักเสบบี (HBV) และไวรัสทีลิมโฟโทรปิกของมนุษย์ (HTLV) ซึ่งภาวะภูมิคุ้มกันบกพร่องอาจส่งผลต่อการแสดงออกของตัวรับจำเพาะของ IL-15, CD122 ใน CD8+ ทีเซลล์ [60] ทำให้พวกมันไม่ตอบสนองต่อการกระตุ้นสภาวะสมดุลนี้ ความอ่อนล้าของระบบภูมิคุ้มกันซึ่งเป็นลักษณะของโรคโควิด-19 ไม่เพียงแต่พบในเซลล์ CD8+ ทีเซลล์เท่านั้น แต่ยังพบในเซลล์พิษต่อเซลล์ประเภทอื่นๆ ด้วย เช่น เซลล์ NK และ NKT [15,16] ดังนั้น การไม่มีการตอบสนองต่อ IL-15 ใน PBMC จากกลุ่ม Exitus อาจเกี่ยวข้องกับการอ่อนเพลียของภูมิคุ้มกันที่เพิ่มขึ้น ซึ่งไม่สามารถเอาชนะได้ด้วยการรักษาด้วย IL-15 เพียงอย่างเดียวในขนาดยาที่ตรวจวิเคราะห์ นอกจากนี้ยังพบสิ่งนี้ในการทดลองทางคลินิกระยะที่ 1 ซึ่งการบำบัดด้วย IL-15 เพียงอย่างเดียวไม่ได้ผลแม้จะมีการขยายตัวอย่างมากของเซลล์พิษต่อเซลล์ [31,32] ดังนั้น การบำบัดด้วยต้นทุนกระตุ้นอื่นๆ มีความจำเป็นเพื่อกระตุ้นการตอบสนองที่มีประสิทธิผลในบุคคลเหล่านี้ เช่น สารยับยั้งจุดตรวจทางภูมิคุ้มกันหรือโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่มุ่งเป้าไปที่เซลล์ที่ติดเชื้อ เพื่อปรับปรุงความเป็นพิษต่อเซลล์ของเซลล์ที่ขึ้นกับแอนติบอดี (ADCC)
นอกจากนี้ เรายังพิจารณาประเภทเซลล์ที่เกี่ยวข้องเป็นหลักในการพัฒนาการตอบสนองของพิษต่อเซลล์ที่เพิ่มขึ้นนี้ในกลุ่มบุคคลที่รอดชีวิตจากโควิด-19 มีการแสดงให้เห็นว่าการมีซีดี8+ ทีเซลล์ที่ใช้งานได้เป็นสิ่งจำเป็นในการปกป้องแบบจำลองสัตว์จากการพัฒนาของเชื้อโควิดชนิดรุนแรง-19 [61,62] นอกจากนี้ การไม่มีการตอบสนองของพิษต่อเซลล์ที่เป็นสื่อกลางโดยซีดี8-ได้รับการแต่งตั้งให้เป็นปัจจัยสำคัญในการเพิ่มความไวของผู้สูงอายุที่จะเกิดโรคโควิดที่รุนแรงหรือวิกฤต-19 [63] น่าแปลกที่ระดับของ CD8+ ทีเซลล์อยู่ที่ 2.07- เท่า (p=0.0409) สูงกว่าในกลุ่ม Exitus ในขณะที่เข้ารับการรักษาในโรงพยาบาล (t=0) และพวกเขายังคงพัฒนาจนถึงผลลัพธ์ที่ร้ายแรง เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มผู้เอาชีวิตรอด แม้ว่าบุคคลจากกลุ่ม Exitus แสดงให้เห็นว่าจำนวนเม็ดเลือดขาวเกินเกณฑ์ของ lymphopenia เล็กน้อย แต่ระดับเหล่านี้ยังคงไม่เปลี่ยนแปลงเกือบตลอดเวลาที่พวกเขาเข้ารับการรักษาในโรงพยาบาล ยิ่งไปกว่านั้น มีการอธิบายไว้ว่าภาวะลิมโฟพีเนียอาจนำไปสู่รูปแบบของการปราบปรามและการกระตุ้นที่มีอยู่ร่วมกันซึ่งมีการสูญเสียทีเซลล์ส่วนปลายไปพร้อมกันกับการเพิ่มจำนวนที่รุนแรงของกลุ่มทีเซลล์ CD8+ [64,65] สิ่งนี้จะคำนึงถึงระดับที่เพิ่มขึ้นเล็กน้อยของ CD8+ ทีเซลล์ที่สังเกตพบใน PBMC ของผู้เข้าร่วมจากกลุ่ม Exitus ตั้งแต่สัปดาห์ที่ 6 ของการรักษาในโรงพยาบาลเป็นต้นไป แม้ว่าระดับรวมของลิมโฟไซต์ยังคงไม่เปลี่ยนแปลงและสูงกว่าเกณฑ์ของภาวะลิมโฟพีเนีย ยังบ่งชี้ถึงการลดลงของ CD4+ ทีเซลล์อีกด้วย อย่างไรก็ตาม CD8+ ทีเซลล์เหล่านี้แสดงฤทธิ์ที่เป็นพิษต่อเซลล์ต่ำ ตามที่ถูกกำหนดโดยการแสดงออกที่ต่ำของมาร์กเกอร์การลดแกรนูล CD107a บนผิวเซลล์ ในขณะที่การแสดงออกของมาร์กเกอร์นี้เพิ่มขึ้นใน CD8+ ทีเซลล์จาก ผู้เข้าร่วมกลุ่ม Survival ตั้งแต่สัปดาห์ที่ 4 เป็นต้นไป การแสดงออกของ CD107a ถือเป็นตัวชี้วัดทางชีวภาพเพื่อประเมินความสามารถในการเป็นพิษต่อเซลล์ [66] และได้รับการอธิบายว่าลดลงบนพื้นผิวของเซลล์ที่แยกได้จากบุคคลที่เป็นโรคโควิด-19 เมื่อเปรียบเทียบกับผู้บริจาคที่มีสุขภาพดีและไม่ติดเชื้อ [15 ]
ดังนั้น การแสดงออกที่เพิ่มขึ้นของ CD107a บนพื้นผิวของทีเซลล์ CD8+ อย่างน้อยก็อาจอธิบายการมีส่วนร่วมของเซลล์เหล่านี้บางส่วนต่อฤทธิ์ของพิษต่อเซลล์ที่เพิ่มขึ้นที่สังเกตพบใน PBMC ของผู้เข้าร่วมจากกลุ่มผู้รอดชีวิต นอกจากนี้ เราสังเกตเห็นการแสดงออกที่เพิ่มขึ้นของเครื่องหมายแสดงการหมดแรง PD-1 ในทั้งเซลล์ CD4+ และ CD8+ ทีจากบุคคลในกลุ่ม Exitus ซึ่งอาจมีส่วนทำให้พิษต่อเซลล์ลดลงด้วย กิจกรรมและการตอบสนองต่อ IL-15 ของเซลล์เหล่านี้ ประชากรเซลล์อื่นๆ อาจเกี่ยวข้องกับฤทธิ์เป็นพิษต่อเซลล์ที่ติดเชื้อ SARS-CoV-2- เทียม เช่น เซลล์ NK และ NKT เช่นเดียวกับที่เกิดขึ้นกับการติดเชื้อเฉียบพลันรุนแรงอื่นๆ เซลล์ NK อาจถูกคัดเลือกไปยังบริเวณที่ติดเชื้อ SARS-CoV-2 [67] ซึ่งจะอธิบายจำนวนเซลล์ NK หมุนเวียนที่ลดลงซึ่งพบในผู้เข้าร่วมทั้งหมด นอกจากนี้ พายุไซโตไคน์ที่พัฒนาขึ้นในช่วงโควิดที่รุนแรงและวิกฤต-19 อาจส่งผลให้สถานะผิดปกติของเซลล์ NK ที่จะแสดงออกถึงตัวรับจุดตรวจสอบการยับยั้งในระดับสูง เช่น NKG2A หรือ PD-1 [68] ในการศึกษาของเรา ระดับของเซลล์ NK ระหว่างทั้งสองกลุ่มมีความคล้ายคลึงกันจนถึงสัปดาห์ที่ 6 ซึ่งผู้เข้าร่วมกลุ่ม Survival มีการเพิ่มขึ้นอย่างต่อเนื่องจนกระทั่งออกจากโรงพยาบาล สิ่งนี้มีความสัมพันธ์กับการแสดงออกที่เพิ่มขึ้นของ CD107a ซึ่งมีความเกี่ยวข้องในเซลล์ NK ด้วยการหลั่งไซโตไคน์ที่เพิ่มขึ้นและการสลายของเซลล์เป้าหมายที่ดีขึ้น [7,69] แม้ว่าเปอร์เซ็นต์ของเซลล์ NK ที่แสดงเครื่องหมายการเปิดใช้งานเช่น CD107a ได้รับการอธิบายว่าเป็น ในผู้ป่วยโรคโควิด-19 ได้น้อยกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมที่ดีต่อสุขภาพ [70] ในทางกลับกัน แม้ว่าระดับของเซลล์ NKT จะถูกทำให้เพิ่มขึ้นอย่างมากในกลุ่มการอยู่รอดตั้งแต่สัปดาห์ที่ 6 เป็นต้นไป การแสดงออกของ CD107a ยังคงแทบไม่เปลี่ยนแปลง ในขณะที่พวกมันแสดงระดับที่เพิ่มขึ้นของเครื่องหมายการหมดแรง TIGIT บนพื้นผิวเซลล์ที่เพิ่มขึ้นอย่างต่อเนื่องจนกระทั่งสัปดาห์ที่ 6 ของการเข้ารับการรักษาในโรงพยาบาล . ข้อจำกัดที่สำคัญที่สุดประการหนึ่งของการศึกษาของเราคือขนาดตัวอย่างที่ลดลง อย่างไรก็ตาม พบว่ามีนัยสำคัญทางสถิติระหว่างกลุ่มในพารามิเตอร์ที่สำคัญหลายประการ ซึ่งแสดงให้เห็นขนาดผลกระทบที่ใหญ่หรือใหญ่มากเมื่อคำนวณความแตกต่างที่รวมกลุ่มระหว่างกลุ่ม
cistanche tubulosa-ปรับปรุงระบบภูมิคุ้มกัน
5. สรุปผลการวิจัย
โดยสรุป การสนับสนุนที่สำคัญที่สุดของการศึกษานี้ในการต่อสู้กับภูมิคุ้มกันวิทยาที่เกิดจากการติดเชื้อ SARS-CoV-2 คือการยืนยันว่าความสามารถในการต้านไวรัสที่บกพร่องของ PBMC ดูเหมือนจะเป็นปัจจัยสำคัญในการลุกลามของการติดเชื้อ COVID ที่ถึงแก่ชีวิต{ {2}} เหนือกว่าปัจจัยทางสังคมประชากรศาสตร์ คลินิก และชีวเคมีอื่นๆ ด้วยซ้ำ ดังนั้น การใช้การรักษาแบบปรับภูมิคุ้มกันที่อาจเพิ่มความเป็นพิษต่อเซลล์อาจส่งผลให้ได้รับผลลัพธ์เชิงบวกในระหว่างการรักษาในโรงพยาบาลเนื่องจากวิกฤตโควิด-19 การออกฤทธิ์ที่เป็นพิษต่อเซลล์ที่เพิ่มขึ้นซึ่งอาศัย IL-15 เป็นสื่อกลางในบุคคลจากกลุ่มผู้รอดชีวิตไม่น่าจะขึ้นอยู่กับระดับที่เพิ่มขึ้นของเซลล์ที่เป็นพิษต่อเซลล์ แต่ขึ้นอยู่กับความสามารถทางภูมิคุ้มกันของเซลล์เหล่านี้เพื่อตอบสนองต่อสิ่งเร้าดังกล่าว ดังนั้น การตรวจติดตามการแสดงออกของเครื่องหมายแสดงอาการอ่อนเพลียและการตอบสนองต่อสิ่งเร้าทางสภาวะสมดุล เช่น IL-15 ของประชากรเซลล์เหล่านี้ในบุคคลที่เข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลอาจมีประโยชน์ในฐานะตัวบ่งชี้ทำนายผลลัพธ์ที่ร้ายแรงเพื่อเริ่มต้นมาตรการเพิ่มเติมเพื่อป้องกัน มัน. ดังนั้น การศึกษาเชิงสังเกตนี้เป็นการพิสูจน์แนวคิดที่ว่าการใช้ IL-15 ในบุคคลที่เข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลด้วยโรค COVID-19 สามารถปรับปรุงการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันของไวรัสได้ แม้ว่าสิ่งกระตุ้นนี้เพียงอย่างเดียวจะไม่ได้ผลในบุคคลที่ไม่ตอบสนอง เซลล์เนื่องจากภูมิคุ้มกันอ่อนล้าหรือวิถีการส่งสัญญาณ IL-15R บกพร่อง ซึ่งจำเป็นในการป้องกันภาวะอ่อนเพลีย [71] แม้ว่าเซลล์เหล่านี้จะแสดงจำนวนเม็ดเลือดขาวเกินเกณฑ์ของภาวะลิมโฟพีเนียก็ตาม จำเป็นต้องมีการศึกษาเพิ่มเติมกับประชากรจำนวนมากขึ้นเพื่อประเมินการรวมกันของขนาดที่เพิ่มขึ้นของ IL-15 กับสารปรับภูมิคุ้มกันอื่นๆ เช่น สารยับยั้งจุดตรวจภูมิคุ้มกันหรือโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่มุ่งเป้าไปที่เซลล์ที่ติดเชื้อ เพื่อช่วยฟื้นฟูและเพิ่มการตอบสนองของไวรัสในระหว่างรูปแบบวิกฤตของโควิด -19.
อ้างอิง
1. อัทซ์ร็อดท์ ซีแอล; มักโนเจีย, I.; แม็กคาร์ธี, RDP; โอลด์ฟิลด์, TM; ปอ เจ.; ตา, KTL; สเต็ปป์ ฯพณฯ; Clements, TP A Guide to COVID-19: การระบาดใหญ่ทั่วโลกที่เกิดจากไวรัสโคโรนาสายพันธุ์ใหม่ SARS-CoV-2 ก.พ. เจ. 2020, 287, 3633–3650. [CrossRef] [PubMed]
2. แดชบอร์ด WHO Corona Virus (COVID-19) เข้าถึงได้ทางออนไลน์: https://covid19.who.int/ (เข้าถึงเมื่อ 18 ตุลาคม 2565)
3. คาปาลโบ ค.; อะเซติ, อ.; ซิมมาโก ม.; บอนฟินี ร.; ร็อคโค ม.; ริชชี่ อ.; นาโปลี ค.; ร็อคโค ม.; อัลฟอนซี, ว.; เท็กกี, อ.; และคณะ ระยะชี้แจงของการแพร่ระบาดของโควิด-19 ในภาคกลางของอิตาลี: เส้นทางการดูแลแบบบูรณาการ นานาชาติ เจ. สิ่งแวดล้อม. ความละเอียด 2020, 17, 3792. [CrossRef] [PubMed]
4. หวาง ค.; วังย.; หลี่เอ็กซ์.; เรน, ล.; จ้าวเจ.; หูย.; จาง ล.; แฟน ก.; ซู เจ.; กูเอ็กซ์.; และคณะ ลักษณะทางคลินิกของผู้ป่วยที่ติดเชื้อไวรัสโคโรนาสายพันธุ์ใหม่ 2019 ในเมืองอู่ฮั่น ประเทศจีน มีดหมอ 2020, 395, 497–506 [CrossRef] [PubMed]
5. เฮย์บาร์ เอช.; คาเซมเนีย, ก.; Rahim, F. โรคเรื้อรังที่เป็นเหตุและการติดเชื้อโควิด-19: การทบทวนที่ล้ำสมัย Jundishapur J. โรคเรื้อรัง แคร์ 2020, 9, e103452. [CrossRef] 6. ฮาเหม็ด เอสเอ็ม; เอลคาทิบ, WF; ไครัลลา, AS; Noreddin, AM พลวัตทั่วโลกของ clades SARS-CoV-2 และความสัมพันธ์กับระบาดวิทยาของ COVID-19 วิทยาศาสตร์ ตัวแทน 2021, 11, 8435. [CrossRef]
7. เออร์ดินซ์ บ.; ซาห์นี ส.; Gotlieb, V. อาการทางโลหิตวิทยาและภาวะแทรกซ้อนของโควิด-19 โฆษณา คลินิก. ประสบการณ์ ยา 2021, 30, 101–107. [ครอสอ้างอิง]
8. หู บ.; หวาง ส.; หยิน แอล. พายุไซโตไคน์และโควิด-19 เจ.เมด. วิโรล. 2021, 93, 250–256. [ครอสอ้างอิง]
9. รามอส-กาซาลส์, ม.; บริโต-เซรอน, ป.; โลเปซ-กิลเลอร์โม, อ.; คามาชตา, แมสซาชูเซตส์; Bosch, X. กลุ่มอาการเม็ดเลือดแดงในผู้ใหญ่ มีดหมอ 2014, 383, 1503–1516 [ครอสอ้างอิง]
10. เมธา ป.; แมคออลีย์ DF; บราวน์ ม.; ซานเชซ อี.; แททเทอร์ซอลล์ อาร์เอส; แมนสัน เจเจ; ในนามของ HLH Across Specialty Collaboration สหราชอาณาจักร ข้ามความพิเศษ โควิด-19: พิจารณากลุ่มอาการไซโตไคน์สตอร์มและกดภูมิคุ้มกัน มีดหมอ 2020, 395, 1033–1034 [ครอสอ้างอิง]
11. หลี่ ม.-ย.; หลี่ ล.; จาง ย.; วัง X.-S. การแสดงออกของยีนตัวรับของเซลล์ SARS-CoV-2 ACE2 ในเนื้อเยื่อของมนุษย์ที่หลากหลาย ติดเชื้อ โรค ความยากจน 2020, 9, 45. [CrossRef]
12. เจียง ย.; รูบิน, ล.; เป็ง ต.; หลิว ล.; ซิง, เอ็กซ์.; ลาซาโรวิซี่ ป.; Zheng, W. Cytokine พายุในโรคโควิด-19: ตั้งแต่การติดเชื้อไวรัสไปจนถึงการตอบสนองทางภูมิคุ้มกัน การวินิจฉัย และการรักษา นานาชาติ เจ. ไบโอล. วิทยาศาสตร์ 2022, 18, 459–472. [CrossRef] [PubMed]
13. จ้าน ย.; แคร์ริงตัน, อีเอ็ม; จาง ย.; ไฮน์เซล ส.; Lew, AM ชีวิตและความตายของทีเซลล์ที่ถูกกระตุ้น: พวกมันแตกต่างจากเซลล์ทีไร้เดียงสาอย่างไร? ด้านหน้า. อิมมูนอล. 2017, 8, 1809. [CrossRef] [PubMed]
14. หวง ไอ.; Pranata, R. Lymphopenia ในโรคติดเชื้อไวรัสโคโรนาชนิดรุนแรง-2019 (โควิด-19): การทบทวนอย่างเป็นระบบและการวิเคราะห์เมตา เจ. การดูแลผู้ป่วยหนัก 2020, 8, 36. [CrossRef] [PubMed]
15. เจิ้ง ม.; เกาย.; วังก.; ซองก.; หลิว ส.; อาทิตย์ ด.; ซูย.; Tian, Z. ความเหนื่อยล้าจากการทำงานของเซลล์เม็ดเลือดขาวต้านไวรัสในผู้ป่วยโควิด-19 เซลล์ โมล อิมมูนอล. 2020, 17, 533–535. [ครอสอ้างอิง]
16. รา ม.-ส.; จอง, HW; เกาะเจ.-H.; ชอย เอสเจ; ซอ ไอ.-H.; ลี เจเอส; สา ม.; คิม อาร์คันซอ; จู อี.-เจ.; อัน เจวาย; และคณะ PD-1-แสดงออกถึง SARS-CoV-2-CD เฉพาะ8+ ทีเซลล์นั้นไม่หมดลง แต่ทำงานได้ในผู้ป่วยที่เป็นโรค COVID-19 ภูมิคุ้มกัน 2021, 54, 44–52. [ครอสอ้างอิง]
17. วิกอน, ล.; ฟูเอร์เตส ด.; การ์เซีย-เปเรซ เจ.; ตอร์เรส ม.; โรดริเกซ-โมรา ส.; มาเตออส อี.; โคโรนา ม.; ซาเอซ-มาริน, เอเจ; มาโลร.; นาวาร์โร ค.; และคณะ การตอบสนองของพิษต่อเซลล์ที่บกพร่องใน PBMC จากผู้ป่วยโรคโควิด-19 เข้ารับการรักษาใน ICU: ตัวชี้วัดทางชีวภาพเพื่อทำนายความรุนแรงของโรค ด้านหน้า. อิมมูนอล. 2021, 12, 665329. [CrossRef]
18. ใคร คำแถลงชั่วคราวเกี่ยวกับการพิจารณาตัดสินใจสำหรับการใช้วัคซีนป้องกันโควิด-19 ตัวแปรที่อัปเดต สามารถดูออนไลน์: https://www.who.int/news/item/17-06-2022-interim-statement-on-decision-making-considerations-for-the-use-of variety-updated-covid{{15} }วัคซีน (เข้าถึงเมื่อวันที่ 15 สิงหาคม 2565)
19. มิชรา SK; Tripathi, T. อัปเดตหนึ่งปีเกี่ยวกับการระบาดใหญ่ของโควิด-19: ตอนนี้เราอยู่ที่ไหนแล้ว แอคต้า ทรอป. 2021, 214, 105778. [CrossRef] 20. Li, X.; เกิง ม.; เป็ง ย.; เม้ง ล.; Lu, S. พยาธิกำเนิดภูมิคุ้มกันระดับโมเลกุลและการวินิจฉัยโรคโควิด-19 เจ ฟาร์มา. ก้น 2020, 10, 102–108. [ครอสอ้างอิง]
21. กลุ่มทีอาร์ซี. เด็กซาเมทาโซนในผู้ป่วยที่เข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลด้วยโรคโควิด-19 น. ภาษาอังกฤษ เจ.เมด. 2021, 384, 693–704. [ครอสอ้างอิง]
22. โจว เอ็กซ์.; ยูเจ.; เฉิง เอ็กซ์.; จ้าว บ.; มันยัม GC; จาง ล.; ชลันส์, เค.; หลี่ ป.; วังเจ.; ซัน, เอส.-ซี. เดอูบิควิติเนส Otub1 ควบคุมการกระตุ้นการทำงานของทีเซลล์ CD8+ และเซลล์ NK โดยควบคุมไพรมิ่งที่อาศัยสื่อกลางของ IL-15- แนท. อิมมูนอล. 2019, 20, 879–889. [ครอสอ้างอิง]
23. Parums, DV สถานะปัจจุบันของการรักษาด้วยยาต้านไวรัสแบบรับประทานสำหรับการติดเชื้อ SARS-CoV-2 ในผู้ป่วยที่ไม่อยู่ในโรงพยาบาล ยา วิทยาศาสตร์ มอนิท. 2022, 28, จ935952-1 [CrossRef] [PubMed]
24. Couzin-Frankel, J. ยาต้านไวรัสอาจเปลี่ยนแนวทางของการแพร่ระบาดได้ เช้า. รศ. โฆษณา วิทยาศาสตร์ 2021, 12, 799–800. [CrossRef] [PubMed]
25. มุนทาเซลล์ อ.; โอโชอา พิธีกร; คอร์เดโร, ล.; เบอร์ราออนโด, พี.; เดเซริโอ, AL-D.; คาโบ ม.; โลเปซ-โบเตต ม.; Melero, I. กำหนดเป้าหมายไปที่จุดตรวจ NK-cell สำหรับการบำบัดด้วยภูมิคุ้มกันโรคมะเร็ง สกุลเงิน ความคิดเห็น. อิมมูนอล. 2017, 45, 73–81. [CrossRef] [PubMed]
26. ม.ล. ปาติดาร์.; ยาดาฟ น.; Dalai, SK Interleukin 15: ไซโตไคน์สำคัญสำหรับการบำบัดด้วยภูมิคุ้มกัน ปัจจัยการเจริญเติบโตของไซโตไคน์ ฉบับปรับปรุง 2016, 31, 49–59 [ครอสอ้างอิง]
27. คาบิงเกอร์ ฟ.; สติลเลอร์, ซี.; ชมิทโซวา, เจ.; ดีเนมันน์, ค.; โคคิช ก.; ฮิลเลน, HS; โฮบาร์ทเนอร์, ซี.; Cramer, P. กลไกของการกลายพันธุ์ที่เกิดจากเชื้อ SARS-CoV-2 ที่เกิดจากมอลนูพิราเวียร์ แนท. โครงสร้าง โมล ไบโอล 2021, 28, 740–746. [CrossRef] [PubMed]
28. ฮุง ย.-ป.; ลี เจ.-ซี.; ชิว ช.-ว.; ลี ซี.-ซี.; ไช่, P.-J.; Hsu, I.-L.; โค ว.-ซี. การบำบัดด้วยนิรมาเทรลเวียร์/ริโทนาเวียร์แบบรับประทานสำหรับโรคโควิด-19: รุ่งอรุณในความมืดมิดใช่ไหม? ยาปฏิชีวนะ 2022, 11, 220. [CrossRef]
29. กัว ย.; ลวน, ล.; ปาติล, NK; Sherwood, ER วิทยาภูมิคุ้มกันวิทยาของ IL-15/IL-15R complex ในฐานะสารต้านเนื้องอกและสารต้านไวรัส ปัจจัยการเจริญเติบโตของไซโตไคน์ ฉบับปรับปรุง 2017, 38, 10–21 [ครอสอ้างอิง]
30. จาง ส.; จ้าวเจ.; ไป๋เอ็กซ์.; แฮนด์ลีย์ ม.; Shan, F. ผลกระทบทางชีวภาพของ IL-15 ต่อเซลล์ภูมิคุ้มกันและศักยภาพในการรักษามะเร็ง นานาชาติ อิมมูโนฟาร์มาคอล 2021, 91, 107318. [CrossRef]
31. วาลด์มันน์ TA; ดูบัวส์ ส.; มิลโควิช นพ.; Conlon, KC IL-15 ในการบำบัดด้วยภูมิคุ้มกันบำบัดแบบผสมผสานสำหรับโรคมะเร็ง ด้านหน้า. อิมมูนอล. 11 พ.ย. 2020 868 [ครอสอ้างอิง]
32. ดูบัวส์ เอสพี; มิลโควิช นพ.; เฟลเชอร์, เท็กซัส; พิททาลูกา ส.; ซู-อัลเบิร์ต เจ.; ไบรอันต์, BR; เปทรัส, มินนิโซตา; เปเรรา ห้างหุ้นส่วนจำกัด; มึลเลอร์ เจอาร์; ชิห์ เจเอช; และคณะ IL ระยะสั้น-15 ที่ได้รับการฉีดเข้าเส้นเลือดอย่างต่อเนื่องนำไปสู่การขยายตัวอย่างมากของเซลล์ NK ที่มีประสิทธิภาพ: ผลกระทบสำหรับการบำบัดร่วมกับแอนติบอดีต่อต้านเนื้องอก เจ. ภูมิคุ้มกัน. มะเร็ง 2021, 9, e002193 [ครอสอ้างอิง]
33. คอนลอน, เคซี; พอตเตอร์ เอล; พิททาลูกา ส.; ลี, ซี.-ซีอาร์; มิลโควิช นพ.; เฟลเชอร์, เท็กซัส; ดูบัวส์ ส.; ไบรอันต์, BR; เปทรัส ม.; เปเรรา ห้างหุ้นส่วนจำกัด; และคณะ IL15 โดยการฉีดยาเข้าเส้นเลือดดำอย่างต่อเนื่องแก่ผู้ป่วยผู้ใหญ่ที่มีเนื้องอกแข็งในการทดลองระยะที่ 1 ที่ชักนำให้เกิดกลุ่มย่อย NK-Cell แบบดราม่า คลินิก. มะเร็ง Res 2019, 25, 4945–4954. [ครอสอ้างอิง]
34. โรมี ร.; คูลีย์ ส.; เบอร์เรียน-เอลเลียต MM; เวสเตอร์เวลต์, พี.; เวอร์เนริส, ม.ร.; วากเนอร์ เจนัว; ไวสดอร์ฟ ดีเจ; บลาซาร์, BR; อุสตุน ค.; เดอฟอร์, เต; และคณะ การศึกษาทางคลินิกระยะที่ 1 ครั้งแรกในมนุษย์ของ IL-15 superagonist complex ALT-803 เพื่อรักษาอาการกำเริบหลังการปลูกถ่าย เลือดแอม เจ. ฮีมาทอล. 2561, 131, 2515–2527. [CrossRef] [PubMed]
35. มิลเลอร์ เจเอส; เดวิส แซดบี; เฮลเกสัน อี.; ไรล์ลี่ ค.; ธอร์เคลสัน, อ.; แอนเดอร์สัน เจ.; ลิมา, โนวาสโกเชีย; จอร์สตัด ส.; ฮาร์ต จีที; ลี เจเอช; และคณะ ผลกระทบด้านความปลอดภัยและไวรัสวิทยาของ IL-15 superagonist N-803 ในผู้ที่ติดเชื้อ HIV: การทดลองระยะที่ 1 แนท. ยา 2022, 28, 392–400. [CrossRef] [PubMed]
36. เบเรนเกอร์ เจ.; ไรอันพี.; โรดริเกซ-บาโญ, เจ.; จาร์ริน, I.; คาร์ราตาลา เจ.; ปาชอน เจ.; อิลเลสกัส ม.; อาร์ริบา เจอาร์; มูนอซ, EA; กิล ดิวาสสัน, พี.; และคณะ ลักษณะและการพยากรณ์การเสียชีวิตของผู้ป่วยที่เข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลด้วยโรคโควิดติดต่อกันจำนวน 4,035 ราย-19 ในสเปน คลินิก. ไมโครไบโอล ติดเชื้อ 2020, 26, 1525–1536. [ครอสอ้างอิง]
37. เจ. การ์เซีย-เปเรซ; ซานเชซ-ปาโลมิโน ส.; เปเรซ-โอลเมดา ม.; เฟอร์นันเดซ บ.; Alcami, J. กลยุทธ์ใหม่ที่ใช้ไวรัส recombinant เป็นเครื่องมือในการประเมินความไวของยาของไวรัสโรคภูมิคุ้มกันบกพร่องของมนุษย์ประเภท 1 J. Med วิโรล. 2550, 79, 127–137. [CrossRef] [PubMed]
38. อู๋เอ็กซ์.; หลิวย.; เล่ยเอ็กซ์.; หลี่ ป.; มิ, ด.; เรน, ล.; กัว ล.; กัวร.; เฉิน ต.; หู เจ.; และคณะ การศึกษาคุณลักษณะของไกลโคโปรตีนขัดขวางของ SARS-CoV-2 ต่อการเข้าของไวรัสและปฏิกิริยาข้ามของภูมิคุ้มกันกับ SARS-CoV แนท. ชุมชน 2020, 11, 1–12. [CrossRef] [PubMed]
39. โวลซ์ อี.; ฮิลล์, วี.; แมคโครน เจที; ราคา ก.; ยอร์เกนเซ่น, ด.; โอทูล, Á.; เซาท์เกตเจ.; จอห์นสัน อาร์.; แจ็คสัน บี.; นาสซิเมนโต FF; และคณะ การประเมินผลกระทบของ SARS-CoV-2 การกลายพันธุ์แบบขัดขวาง D614G ต่อความสามารถในการแพร่เชื้อและการเกิดโรค เซลล์ 2021, 184, 64–75 [ครอสอ้างอิง]
40. คอร์เบอร์ บ.; ฟิสเชอร์, ดับเบิลยูเอ็ม; กนาคารัน ส.; ยุนฮ.; ธีเลอร์ เจ.; อับฟอเลเรอร์, ว.; เฮงการ์ทเนอร์ น.; จอร์จี อีอี; ภัตตาชารยา ต.; โฟลีย์บี.; และคณะ การติดตามการเปลี่ยนแปลงในกลุ่ม SARS-CoV-2 ที่เพิ่มขึ้นอย่างรวดเร็ว: หลักฐานที่แสดงว่า D614G เพิ่มการติดเชื้อของไวรัส COVID-19 เซลล์ 2020, 182, 812–827 [ครอสอ้างอิง]
41. นันดาโกปาล น.; อาลี อลาสกา; โคมาล อลาสก้า; ลี เอส.-เอช. บทบาทที่สำคัญของวิถีทาง IL -15 – PI3K – mTOR ในการทำงานของเอฟเฟกต์เซลล์นักฆ่าตามธรรมชาติ ด้านหน้า. อิมมูนอล. 2014, 5, 187. [CrossRef]
42. โรเซนธาล ร.; โกรเปอร์, ค.; บรักซี, ล.; อดามินา ม.; เฟเดอร์-เมงกัส, ซี.; ซาแจค ป.; อิซซี่ ก.; บอลลี ม.; เวเบอร์, ดับบลิวพี; เฟรย์ ดีเอ็ม; และคณะ การตอบสนองที่แตกต่างกันต่อ IL-2, IL-7 และ IL-15 ไซโตไคน์ของสายรีเซพเตอร์ทั่วไปโดยทีเซลล์ที่เป็นพิษต่อเซลล์ในเลือดที่จำเพาะต่อแอนติเจนหรือ CD8+ จากผู้ให้ที่มีสุขภาพดีและ ผู้ป่วยมะเร็งผิวหนัง เจ. ภูมิคุ้มกัน. 2552, 32, 252–261. [ครอสอ้างอิง]
43. คอร์แมน, VM; ลันท์ โอ.; ไกเซอร์ ม.; โมเลนแคมป์ ร.; ไมเยอร์ อ.; ชู, DKW; ไบลเกอร์, ต.; บรูนิก ส.; ชไนเดอร์ เจ.; ชมิดต์ มลรัฐ; และคณะ การตรวจหาไวรัสโคโรนาสายพันธุ์ใหม่ 2019 (2019-nCoV) โดย RT-PCR แบบเรียลไทม์ Eurosurveillance 2020, 25, 2000045 [CrossRef] [PubMed]
44. ใคร การทดสอบวินิจฉัยโรค SARS-CoV-2: คำแนะนำชั่วคราว 11 กันยายน 2020; องค์การอนามัยโลก: เจนีวา สวิตเซอร์แลนด์ 2020
45. เบกเกอร์ แอลเอ ขนาดเอฟเฟกต์ (ES); มหาวิทยาลัยโคโลราโด โคโลราโดสปริงส์: โคโลราโดสปริงส์, โคโลราโด, สหรัฐอเมริกา, 2000
46. โคเฮน เจ. การวิเคราะห์กำลังทางสถิติสำหรับพฤติกรรมศาสตร์; เลดจ์: Abingdon, UK, 1988 [CrossRef]
47. โมเรโน-เปเรซ โอ.; ริเบส ฉัน.; บอยซ์, ว.; มาร์ติเนซ-การ์เซีย, ม.; โอเตโร-โรดริเกซ ส.; เรอุส ส.; ซานเชซ-มาร์ติเนซ ร.; รามอส, เจเอ็ม; ชิโก-ซานเชซ ป.; เมริโน อี. ผู้ป่วยที่เข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลด้วยโรคโควิดที่ก้าวหน้า-19: ลักษณะทางคลินิกและผู้ทำนายผลลัพธ์ที่ไม่ดี นานาชาติ เจติดเชื้อ โรค 2022, 118, 89–94. [CrossRef] [PubMed]
48. ลี CM; ลีอี.; พาร์ก, ยินดี; โช พีจี; ซอง ค.-ช.; คิม อีเอส; ปาร์ค ส.-ว. การติดเชื้อโควิดที่ก้าวหน้า-19 ในช่วงระยะเวลาที่โดดเด่นของตัวแปรเดลต้า: จำเป็นต้องได้รับการดูแลเป็นรายบุคคลตามสถานะการฉีดวัคซีน เจ.เกาหลีเมด. วิทยาศาสตร์ 2022, 37, e252. [CrossRef] [PubMed]
49. เอจาซ เอช.; อัลสรานี, อ.; ซาฟาร์, อ.; ฮาเวด, เอช.; จูไนด์, เค.; อับดุลลา AE; อะโบซาลิฟ, KO; อาเหม็ด ซ.; Younas, S. COVID-19 และโรคร่วม: ผลกระทบเชิงลบต่อผู้ป่วยที่ติดเชื้อ เจติดเชื้อ สาธารณสุข 2020, 13, 1833–1839. [CrossRef] [PubMed]
50. อาเซเวโด้ RB; โบเตลโญ่ บีจี; เดอ ฮอลแลนดา, JVG; เฟอร์เรรา, เลเวล; เดออันดราด, LZJ; เอย, SSML; เมลโล, TDS; Muxfeldt, ES COVID-19 และระบบหัวใจและหลอดเลือด: บทวิจารณ์ที่ครอบคลุม เจ. ฮัม. ความดันโลหิตสูง 2021, 35, 4–11. [ครอสอ้างอิง]
51. จาง เจเจ; ลี แคนซัส; อ่างทอง LW; ลีโอ, วายเอส; ยังเยาว์วัย พ.ศ. ปัจจัยเสี่ยงต่อโรคร้ายแรงและประสิทธิภาพการรักษาในผู้ป่วยที่ติดเชื้อโควิด-19: การทบทวนอย่างเป็นระบบ การวิเคราะห์เมตา และการวิเคราะห์การถดถอยเมตาดาต้า คลินิก. ติดเชื้อ โรค 2020, 71, 2199–2206. [ครอสอ้างอิง]
52. เคอร์มาลี ม.; คัลซา อาร์เคด; พิไล, ก.; อิสมาอิล, ซ.; Harky, A. บทบาทของตัวชี้วัดทางชีวภาพในการวินิจฉัยโรคโควิด-19–การทบทวนอย่างเป็นระบบ วิทยาศาสตร์ชีวิต 2020, 254, 117788. [CrossRef]
53. มาลิก ป.; ปาเทล, ม.; เมธา ด.; พาเทล น.; เคลการ์ ร.; อัครมาห์ ม.; กาบริโลฟ เจแอล; Sacks, H. Biomarkers และผลลัพธ์ของการเข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลช่วงโควิด-19: การทบทวนอย่างเป็นระบบและการวิเคราะห์เมตา บีเอ็มเจ อีวิด. แพทย์ประจำบ้าน 2021, 26, 107–108. [ครอสอ้างอิง]
54. หลี่ย.; ชไนเดอร์ น.; เมธา, อ.; ซาด-เฟลด์แมน ม.; เคย์ส KR; เจนติลี, ม.; ชาร์แลนด์, นอร์ทแคโรไลนา; กอนเย่, อลาบามา; กัชเทโรวา, I.; คันนา ฮ่องกง; และคณะ ไวรัส SARS-CoV-2 มีความเกี่ยวข้องกับวิถีทางโปรตีโอมิกที่แตกต่างกันและคาดการณ์ผลลัพธ์ของโควิด-19 เจ.คลิน. สอบสวน 2021, 131, e148635. [ครอสอ้างอิง]
55. โรดริเกซ-เซอร์ราโน, ดาเอ; รอย-วัลเลโฮ อี.; ครูซ NDZ; รามิเรซ น.; โรดริเกซ-การ์เซีย, เซาท์แคโรไลนา; อาเรวาลิลโล-เฟอร์นันเดซ น.; กัลวาน-โรมัน, เจเอ็ม; การ์เซีย-โรดริโก LF; เวก้า-พิริส, ล.; ลาโน พิธีกร; และคณะ การตรวจหา SARS-CoV-2 RNA ในซีรัมมีความสัมพันธ์กับความเสี่ยงต่อการเสียชีวิตที่เพิ่มขึ้นในผู้ป่วยโควิดที่เข้ารับการรักษาในโรงพยาบาล-19 วิทยาศาสตร์ ตัวแทน 2021, 11, 13134. [CrossRef]
56. เซราฟิม RB; โปโว ป.; ซูซา-ดันตัส, วี.; คาลิล เอซี; Salluh, JI หลักสูตรทางคลินิกและผลลัพธ์ของผู้ป่วยอาการวิกฤตที่ติดเชื้อโควิด-19: การทบทวนอย่างเป็นระบบ คลินิก. ไมโครไบโอล ติดเชื้อ 2021, 27, 47–54. [CrossRef] [PubMed]
57. หลิว เอ็กซ์.; โจว เอช.; โจว ย.; วูเอ็กซ์.; จ้าว ย.; ลู ย.; ตาล ว.; หยวน ม.; ติง เอ็กซ์.; โซ, เจ.; และคณะ ปัจจัยเสี่ยงที่เกี่ยวข้องกับความรุนแรงของโรคและระยะเวลาในการพักรักษาตัวในโรงพยาบาลในผู้ป่วยโควิด-19 เจติดเชื้อ 2020, 81, e95–e97. [ครอสอ้างอิง]
58. หลัว XH; จู้ย.; เหมาเจ.; Du, วิทยาภูมิคุ้มกันวิทยาของทีเซลล์ RC และพายุไซโตไคน์ของโควิด-19 สแกน เจ. อิมมูนอล. 2021, 93, e12989. [CrossRef] [PubMed]
59. ฮาร์วูด โอ.; O'Connor, S. ศักยภาพในการรักษาของ IL-15 และ N-803 ในการติดเชื้อ HIV/SIV ไวรัส 2021, 13, 1750 [CrossRef] [PubMed]
60. ชิน ฮ.; Wherry, EJ CD8 T เซลล์ทำงานผิดปกติระหว่างการติดเชื้อไวรัสเรื้อรัง สกุลเงิน ความคิดเห็น. อิมมูนอล. 2007, 19, 408–415. [ครอสอ้างอิง]
61. แมคมาฮาน ค.; ยูเจ.; เมอร์คาโด, เอ็นบี; ลูส ค.; ทอสตานอสกี้, LH; จันทรเชการ์, อ.; หลิว เจ.; ปีเตอร์ ล.; อัตโย ค.; จู้ อ.; และคณะ ความสัมพันธ์ของการป้องกัน SARS-CoV-2 ในลิงแสม ธรรมชาติ 2021, 590, 630–634. [ครอสอ้างอิง]
62. จ้วง จ.; ลายเอ็กซ์.; ซัน เจ.; เฉิน ซ.; จาง ซ.; ได เจ.; หลิว ด.; หลี่ย.; หลี่ เอฟ.; วังย.; และคณะ การทำแผนที่และบทบาทของการตอบสนองของทีเซลล์ในหนูที่ติดเชื้อ SARS-CoV-2 เจ.ประสบการณ์ ยา 2021, 218, e20202187. [ครอสอ้างอิง]
63. เวสต์ไมเออร์ เจ.; ปานิสกากิ, ก.; คาราโคเซ่, Z.; เวอร์เนอร์ ต.; ซัทเทอร์, เค.; ดอล์ฟ ส.; โอเวอร์เบ็ค ม.; ลิมเมอร์, อ.; หลิว เจ.; เจิ้งเอ็กซ์.; และคณะ การตอบสนองของทีเซลล์ที่เป็นพิษต่อเซลล์บกพร่อง8+ ในผู้ป่วยโรคโควิดสูงอายุ-19 MBio 2020, 11, จ02243-20 [ครอสอ้างอิง]
64. แลง เอจี; ลอเรนซ์, อ.; เดลบาริโอ, IDM; ดาส, อ.; ปลา ม.; โมนิน, ล.; มูโนซ-รุยซ์, ม.; แมคเคนซี่ ดร.; เฮย์เดย์ TS; ฟรานโกส กิยอร์นา, I.; และคณะ ลายเซ็นภูมิคุ้มกันแบบไดนามิกของ COVID-19 มีการเชื่อมโยงกับการพยากรณ์โรคที่ไม่ดี แนท. ยา 2020, 26, 1623–1635. [ครอสอ้างอิง]
65. คูริ-เซอร์บันเตส, ล.; ปัมเพนา, MB; เม้ง ว.; โรเซนเฟลด์ น.; อิตต์เนอร์, ซีเอจี; ไวส์แมน, อาร์คันซอ; อักเยคัม อาร์เอส; แมทธิว ดี.; แบ็กซ์เตอร์ AE; เวลลา, ลุยเซียนา; และคณะ การทำแผนที่ที่ครอบคลุมของการก่อกวนทางภูมิคุ้มกันที่เกี่ยวข้องกับโรคโควิดที่รุนแรง-19 วิทยาศาสตร์ อิมมูนอล. 2020, 5, eabd7114. [ครอสอ้างอิง]
66. อัคตัส อี.; คูชุกเซเซอร์, UC; บิลจิก, ส.; เออร์เทน ก.; Deniz, G. ความสัมพันธ์ระหว่างการแสดงออกของ CD107a กับฤทธิ์ของพิษต่อเซลล์ เซลล์ อิมมูนอล. 2552, 254, 149–154. [ครอสอ้างอิง]
67. บียอร์กสตรอม, NK; สตรุนซ์ บ.; ลุงเกรน, H.-G. เซลล์นักฆ่าตามธรรมชาติในการสร้างภูมิคุ้มกันต้านไวรัส แนท. สาธุคุณอิมมูนอล. 2022, 22, 112–123. [CrossRef] [PubMed]
68. ความผิดปกติของเซลล์ Bi, J. NK ในผู้ป่วยโรคโควิด-19 เซลล์ โมล อิมมูนอล. 2022, 19, 127–129. [CrossRef] [PubMed]
69. อัลเตอร์ ก.; มาเลนฟองต์, เจเอ็ม; Altfeld, M. CD107a เป็นเครื่องหมายการทำงานในการระบุกิจกรรมของเซลล์นักฆ่าตามธรรมชาติ เจ. อิมมูนอล. วิธีการ 2004, 294, 15–22 [CrossRef] [PubMed]
70. กุสติน เจเอ็น; Jones, D. Immunopathology of Hyperinflammation ในโควิด-19 เช้า. เจ.คลิน. ปทุม. 2021, 191, 4–17. [CrossRef] [PubMed]
71. เขาค.; โจว ย.; หลี่ ซ.; ฟารุก, แมสซาชูเซตส์; อัจมาล, ฉัน.; จาง เอช.; จาง ล.; เต๋า ล.; ยาวเจ.; ดู่, บ.; และคณะ การแสดงออกร่วมกันของ IL-7 ปรับปรุงการบำบัดเซลล์ CAR T ที่ใช้ NKG2D กับมะเร็งต่อมลูกหมากโดยเพิ่มการขยายตัวและยับยั้งการตายของเซลล์และความอ่อนเพลีย มะเร็ง 2020, 12, 1969 [CrossRef]