การศึกษาการทำงานของระบบประสาทและภูมิคุ้มกันของ Cistanche Deserticola และผลิตภัณฑ์นึ่งไวน์ข้าวในหนูทดลองที่กระตุ้นด้วยกลูโคคอร์ติคอยด์-Ⅱ

3.2.4. อิมมูโนวิทยา

การตายของเซลล์ในเซลล์ประสาทถูกควบคุมโดยยีนอะพอพโทซิสและแอนตีอะพอพโทซิสจำนวนมาก โดยส่วนใหญ่เป็นยีนที่ส่งเสริมการตายของเซลล์อย่าง Bax และยีนต้านอะพอพโทซิสของตระกูลยีน Bcl-2 Bcl-2 มีการแปลเป็นภาษาท้องถิ่นในออร์แกเนลล์ที่สร้างออกซิเจนที่เกิดปฏิกิริยา เช่น ไมโตคอนเดรีย ตาข่ายเอนโดพลาสมิก และเยื่อหุ้มนิวเคลียร์ Bcl-2 มีผลกระทบเพียงเล็กน้อยต่ออนุมูลอิสระ แต่สามารถทำได้ป้องกันความเสียหายจากออกซิเดชั่นในเซลล์- Bax ลำเลียงจากไซโตพลาสซึมไปยังเยื่อหุ้มไมโตคอนเดรีย เปลี่ยนโครงสร้างเยื่อหุ้มไมโตคอนเดรีย และส่งเสริมการปล่อยไซโตโครม c และการเหนี่ยวนำของการตายของเซลล์

CISTANCHE TUBULOSA ธรรมชาติสำหรับการปรับปรุงการทำงานทางเพศ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

มีการแสดงออกในไซโตพลาสซึมของต่อมหมวกไตของโปรตีน Bax และ Bcl-2 การย้อมสีแสดงให้เห็นอนุภาคสีเหลืองทั้งหมด เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม BC ความหนาแน่นเชิงแสงโดยเฉลี่ยของโปรตีน Bax ในกลุ่ม MC เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the average optical density in the CD-LD and WCD-LD groups decreased significantly (P < 0.01) (Figure 5(a)).

รูปที่ 5(b) แสดงให้เห็นว่าเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม BC ความหนาแน่นเชิงแสงโดยเฉลี่ยของโปรตีน Bcl-2 ในกลุ่ม MC ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and CD-HD groups increased significantly (P < 0.01), while those of the WCD-MD and CD-MD groups increased (P < 0.05).

โปรตีนแคสเปส-3 ส่วนใหญ่อยู่ในไซโตพลาสซึมในรูปแบบดั้งเดิมในเนื้อเยื่อปกติและมีการแสดงออกต่ำ สัญญาณเชิงบวกคือสีเหลืองอ่อนหรือสีเหลืองอมน้ำตาล เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม BC การแสดงออกของแคสเพส-3 ในกลุ่ม MC เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the expression of caspase-3 in the WCD-HD and WCD-MD groups increased (P < 0.05) (Figure 5(c)).

ในเนื้อเยื่อปกติ การแสดงออกของยีน Fas ลดลง และสัญญาณเชิงบวกสำหรับการผสมพันธุ์ ในแหล่งกำเนิด จะเป็นสีเหลืองอมน้ำตาล ดังที่แสดงในรูปที่ 5 (d) เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม BC ความหนาแน่นทางแสงเฉลี่ยของโปรตีน Fas ในกลุ่ม MC เพิ่มขึ้น ( P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and WCD-LD groups improved (P < 0.05) (Figure 5(d)).

โปรตีน FasL ส่วนใหญ่อยู่ในเยื่อหุ้มเซลล์หรือไซโตพลาสซึม และสัญญาณเชิงบวกของโปรตีนจะเป็นสีน้ำตาล เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม BC ความหนาแน่นทางแสงเฉลี่ยของยีน FasL ในกลุ่ม MC เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density of the FasL gene in the WCD-HD, WCD-MD, CDHD, and CD-MD groups increased significantly (P < 0.01) (Figure 5(e)).

ผลการวิจัยพบว่า CD และ WCD สามารถทำได้ทำให้เกิดการตายของเซลล์ในเซลล์อักเสบและลดความเสียหายของต่อมหมวกไตโดยส่งเสริมการแสดงออกของโปรตีน FasL และจับกับโปรตีน Fas, กระตุ้นโปรตีนแคสเปส-3 และกระตุ้นแคสเคด เอฟเฟ็กต์ของกลุ่ม WCD-HD นั้นดีที่สุด

3.3. การกำหนดฟังก์ชันภูมิคุ้มกัน

3.3.1. ดัชนีอวัยวะภูมิคุ้มกัน

เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม BC ค่าสัมประสิทธิ์ต่อมไทมัสและดัชนีม้ามของกลุ่ม MC ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (P< 0.01). Compared to the MC group, the WCD-MD group had the greatest difference (P < 0.05). The thymus coefficient was almost back to the normal level. For the spleen index, the WCDMD, WCD-LD, and CD-MD groups showed significant differences compared with that of the MC group (P < 0.01) (see Figure 6). Therefore, WCD and CD treatment could protect the immune organs, and the effects of WCD were better.

CISTANCHE TUBULOSA ธรรมชาติสำหรับการปรับปรุงการทำงานทางเพศ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

3.3.2. การตรวจหากลุ่มย่อยของ T Lymphocyte ในเลือดส่วนปลาย

เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ CD4+ ในจตุภาคซ้ายบนและเซลล์ CD8+ ในจตุภาคขวาล่างใน BC และกลุ่มยาแต่ละกลุ่มสูงกว่าเปอร์เซ็นต์ในกลุ่ม MC เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม BC อัตราส่วนของ CD4+ThCD8+ ลดลงอย่างมีนัยสำคัญในกลุ่ม MC (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the ratio of CD4+ThCD8+ increased significantly in the PC group, the WCD group, and the CD-HD group (P < 0.01) (Figure 7).

3.3.3. การกำหนดระดับของ IL-10, IL-6, IL-2, TNF-Α และ IFN-C ในซีรั่ม

รูปที่ 8 แสดงให้เห็นว่าเมื่อเปรียบเทียบกับระดับของกลุ่ม BC ระดับของ IL-6, TNF- และ IFN-c เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (P< 0.01). The level of IL-10 and IL-2 decreased in the MC group. Compared to that of the MC group, the level of IL-6, TNF-α, and IFN-c decreased and IL-10 and IL-2 increased in serum in each of the drug groups. The effect of WCD was better than the effect of CD, especially in the WCD-MD group, in which the effect was close to that of the PC group.

3.3.4. ผลการทดลองสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์เนื้อเยื่อ Lymus

รูปที่ 9 แสดงให้เห็นว่าในกลุ่ม BC มีลิมโฟไซต์จำนวนมาก ลิมโฟไซต์และเรติคูโลไซต์ถูกจัดเรียงอย่างหลวมๆ ตรงกลางโดยมีไทโมไซต์ทรงกลมหรือวงรีกระจัดกระจาย ไม่มีเนื้อตาย ไม่มีการแทรกซึมของเซลล์อักเสบ และไม่มีการเปลี่ยนแปลงที่ผิดปกติ

กลุ่ม MC แสดงเนื้อเยื่อเนื้อร้ายของน้ำเหลืองจำนวนมาก โดยมีการจัดเรียงของเซลล์เม็ดเลือดขาวและเรติคูโลไซต์ที่ไม่เป็นระเบียบตรงกลาง ไธโมไซต์กลมหรือวงรีหายไป เซลล์เสื่อมหรือเนื้อร้ายอย่างเห็นได้ชัด และมีการแทรกซึมของเซลล์อักเสบโดยมีการเปลี่ยนแปลงทางพยาธิวิทยาที่ผิดปกติ

ในกลุ่มซีดี ลักษณะทางสัณฐานวิทยาของลิมโฟไซต์กลับมาเป็นปกติ และการจัดเรียงของลิมโฟไซต์ส่วนกลางและเรติคูโลไซต์เกือบจะเป็นปกติ ไทโมไซต์ทรงกลมหรือรูปไข่หายดีแล้ว แต่ยังมีลิมโฟไซต์ที่เสื่อมหรือตายจำนวนเล็กน้อยและเซลล์อักเสบที่แทรกซึมอยู่จำนวนเล็กน้อย

ในกลุ่ม WCD และกลุ่ม PC ลักษณะทางสัณฐานวิทยาของลิมโฟไซต์ได้รับการซ่อมแซมได้ดีขึ้น ลิมโฟไซต์และเรติคูโลไซต์ที่อยู่ตรงกลางเรียงตัวกันดี ไธโมไซต์ทรงกลมหรือวงรีเกือบจะเป็นปกติ แต่ยังมีลิมโฟไซต์ที่แทรกซึมและเสื่อมจำนวนเล็กน้อย

3.4. การแสดงออกของยีนโปรตีน CaM

ค่า RQ (CaM mRNA -actin mRNA) ได้รับการพิจารณาเพื่อตรวจสอบการแสดงออกของ CaM mRNA RQ ของกลุ่ม BC คือ 1 การแสดงออกของ CaM mRNA ในไฮโปทาลามัสในกลุ่ม MC เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (P< 0.01), while the value decreased in the WCD-HD, WCD-MD, WCDLD, and CD-HD groups (P < 0.05) (Figure 10). The expression of CaM mRNA in the hypophysis in the MC group was lower than that in the BC group (P < 0.01). The expression in the WCD-HD, WCD-MD, WCD-LD, CD-HD, and CD-LD groups increased (P < 0.05), and the effect in the WCD groups was better than the effect in the CD groups.

4. การอภิปราย

เภสัชตำรับจีน [2] บันทึกว่า CD และ WCD สามารถใช้เป็นยาต้มในคลินิกได้ หลังจากนึ่งด้วยไวน์ข้าวแล้วต่อต้านริ้วรอยและปรับสภาพผลของไตหยางได้รับการปรับปรุง เราตรวจพบการเปลี่ยนแปลงเชิงปริมาณในฐานสารเคมีในระหว่างกระบวนการนึ่งไวน์ข้าวผ่าน UPLC-QqQ-MS ไอริดอยด์ไกลโคไซด์ไม่เสถียรและปริมาณของไกลโคไซด์เหล่านี้ลดลง แม้จะตรวจไม่พบก็ตาม เนื้อหาของฟีนิลเอทานอลไกลโคไซด์ก็เปลี่ยนไปเช่นกัน ซึ่งอาจกระตุ้นให้เกิดการเปลี่ยนแปลงทางเภสัชพลศาสตร์และผลทางคลินิก

CISTANCHE TUBULOSA ธรรมชาติสำหรับการปรับปรุงการทำงานทางเพศ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

แบบจำลองภาวะขาดไตแบบคลาสสิกถูกจำลองโดยการฉีดคอร์ติโคสเตอโรนใต้ผิวหนัง [19] คอร์ติโคสเตอโรนเกินขนาดสามารถยับยั้งความลับของ CRH ในไฮโปทาลามัสได้ ในขณะเดียวกันความลับของ ACTH ก็ถูกยับยั้งเช่นกัน ระดับฮอร์โมนคอร์เทกซ์ต่อมหมวกไตลดลง การทำงานของแกน HPA จึงลดลง ความผิดปกติของแกน HPA เป็นลักษณะทั่วไปของภาวะขาดไตหยาง [20] จากนั้นหนูจะแสดงอาการ "พร่อง" และอาการจะสอดคล้องกับอาการขาดไตในคลินิก

ในกลุ่ม MC ระดับ CRH, ACTH, T และ CORT ในซีรั่มของหนูลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (P< 0.01). After being treated by CD and WCD, the content of CRH, ACTH, T, CORT, and cortisol all increased to some degree, and the effect of WCD-MD was the best, almost equal to that in the PC group. These results indicated that the relative hormone balance in the HPA axis had been destroyed in the MC group, CD and WCD could improve the functional recovery of abnormal adrenal axis hormone levels, but the effect of WCD was better.

การปรับสัดส่วนของสมาชิกในครอบครัว Bcl-2 เป็นหนึ่งในกลไกหลักที่ FasThFasL เป็นสื่อกลางในวิถีทางของตัวรับความตาย และตระกูล Bcl-2 ควบคุมวิถีทางของไมโตคอนเดรีย [21] ปัจจัยยับยั้งการตายของเซลล์ Bcl-2 และปัจจัยที่กระตุ้นการตายของเซลล์ เช่น Bax ล้วนอยู่ในตระกูล Bcl-2 [22] การตายของเซลล์อาจถูกกำหนดโดยอัตราส่วนสัมพัทธ์ของปัจจัยยับยั้งการตายของเซลล์และปัจจัยที่กระตุ้นการตายของเซลล์ [23] ไมโตคอนเดรียมีหน้าที่เป็นจุดตรวจส่วนกลางสำหรับการตายของเซลล์หลายรูปแบบ [24] การศึกษาปัจจุบันแสดงให้เห็นว่า CD-MD และ WCD สามารถอนุมานการแสดงออกของ Bax และเพิ่ม Bcl-2 เป็นปรับปรุงการขาดไตหยาง- Fas เป็นตัวรับความตายที่สำคัญที่ทำให้เกิดการตายของเซลล์โดย ligation กับ Fas ligand (FasL) [25] การแสดงออกของ Fas และ FasL ในกลุ่ม MC เพิ่มขึ้น ในขณะที่การแสดงออกนี้เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในกลุ่ม WCD-MD (P< 0.01) compared with the MC group. Both FasThFasL and BaxThBcl-2 systems transduce apoptotic signals to the caspase family [26]. Caspase-3 is one of the pivotal proteinases that initiate cell apoptosis. The activation of caspase-3 indicates that apoptosis enters an irreversible stage [27]. The expression of caspase-3 in the MC group increased and increased significantly in the WCD-HD and WCD-MD groups (P < 0.05).

การขาดการทำงานของระบบภูมิคุ้มกันเป็นอาการที่สำคัญประการหนึ่งของภาวะขาดไตและหยาง [28] ในการศึกษานี้ เราพบว่าดัชนีของม้ามและต่อมไทมัสของกลุ่ม WCD-MD ฟื้นตัวอย่างมีนัยสำคัญ (P< 0.01, P < 0.05). The immune response of the immune system is regulated mainly by the Th subgroups [29]. IL-2 is the growth factor for T cells, secreted by T cells and macrophages, participates in inflammatory regulation, regulates immunity, and increases infection resistance [30]. The level of IL-2 in the MC group decreased (P < 0.01), and after treatment with CD and WCD, the level of IL-2 recovered. IL-6 and TNF-α are proinflammatory cytokines. Increased levels of IL-6 and TNF-α cytokines cause cytokine imbalances and exacerbate inflammation. The levels of IL-6 and TNF-α increased in the MC group, while after treatment, the levels of IL-6 and TNF-α decreased. T cells are divided into CD4 cells and CD8 cells, and the CD4+ThCD8+ ratio can be used as an important index of immune regulation [31]. CD4+ThCD8+ in the MC group decreased (P < 0.01), while in the WCD and CDHD groups increased (P < 0.01).

แกน HPA เป็นระบบกำกับดูแลที่สำคัญที่สุด เนื่องจากควบคุมการหลั่งกลูโคคอร์ติคอยด์และระบบต่อมไร้ท่อ เพื่อรักษาหน้าที่การหลั่งของต่อมหมวกไต [32] การแสดงออกของ CaM mRNA ที่มากเกินไปในเนื้อเยื่อไฮโปทาลามัสสัมพันธ์กับการขาดหยางในไต CD และ WCD สามารถปิดกั้นช่องแคลเซียม ยับยั้งการแสดงออกของ CaM mRNA ในไฮโปทาลามัส และลดการไหลเข้าของแคลเซียม ซึ่งช่วยลดกิจกรรมที่ซับซ้อนของ Ca2+·CaM

การก่อตัวของภาวะขาดไตเป็นกระบวนการพัฒนาของโรคเรื้อรัง ไตไม่ใช่แนวคิดทางกายวิภาคเพียงอย่างเดียวอีกต่อไป และเป็นคำทั่วไปสำหรับระบบภูมิคุ้มกันและระบบประสาทต่อมไร้ท่อและระบบทางเดินปัสสาวะ เครือข่าย Neuroendocrine-immune (NEI) เป็นระบบการกำกับดูแลแบบบูรณาการที่สำคัญ [33] CD และ WCD สามารถควบคุมการทำงานของแกน HPAT และปรับปรุงการฟื้นตัวของภาวะขาดไตหยาง ผลลัพธ์นี้เป็นพื้นฐานการทดลองสำหรับการป้องกันทางคลินิกและการรักษาภาวะขาดไตหยาง