การศึกษาอิทธิพลของภูมิคุ้มกันในหนู

หากต้องการเรียนรู้ข้อมูลเพิ่มเติมกรุณาติดต่อdavid.wan@wecistanche.com

ชายสองคนในสามสิบคนDBA/2NCrl(D2N) หนูที่ใช้เป็นตัวควบคุมความเครียดในการวิเคราะห์ข้อมูลเบื้องหลังของDBA/2N-MDXหนูนำเสนอด้วยการค้นพบที่ผิดปกติซึ่งบ่งชี้ว่ามีการติดเชื้อ กรณีที่ 1: หนูเมาส์ D2N เพศผู้อายุ 4-สัปดาห์พบรอยโรคของคราบพลัคสีขาวที่ไตด้านซ้าย (ไม่มีอาการทางคลินิก) และทำการตรวจทางพยาธิวิทยาของไต พบการแทรกซึมของเซลล์อักเสบซึ่งส่วนใหญ่เป็นนิวโทรฟิลในท่อและคั่นระหว่างไตด้านซ้ายและตรวจพบ Staphylococcus aureus (S.aureus) จากส่วนไตด้านซ้าย ดังนั้นจึงวินิจฉัยว่ามีรอยโรคที่ไตซ้ายเป็นหนองtubulointerstitialโรคไตอักเสบที่เกิดจากการติดเชื้อ S. aureus กรณีที่ 2: ตรวจพบตอติคอลลิสด้านซ้ายที่น้ำหนักลดในหนูเมาส์ D2N เพศผู้อายุ 9-สัปดาห์ การประเมินทางจุลพยาธิวิทยาพบว่ามีการอักเสบที่บริเวณคอหอยของท่อยูสเตเชียนและการอักเสบเป็นหนองของหูชั้นกลางและหูชั้นในด้านซ้ายที่มีฝีและกระจุกเป็นไมโครโคโลนีแกรมบวก เชื้อ S. aureus ตรวจพบจากการเพาะพันธุ์ไม้กวาดของช่องหูชั้นนอกทั้งสองข้าง เป็นผลให้กรณีของ torticollis นี้เกิดจาก S. aureus-suppurative otitis media และอินเทอร์เน็ต S. aureus เป็นที่รู้จักกันดีว่าเป็นเชื้อก่อโรคฉวยโอกาสที่มีศักยภาพที่จะทำให้เกิดโรคหนองในสัตว์ทดลองที่มีภูมิคุ้มกันบกพร่องบ่อยครั้ง อย่างไรก็ตาม ตามความรู้ของเรา กรณีของการติดเชื้อ S. aureus ที่นำเสนอร่วมกับตอติคอลลิสในหนูเมาส์ D2N นั้นไม่มีการรายงาน

คลิกที่นี่เพื่อเรียนรู้เพิ่มเติมเกี่ยวกับ Cistanche

Staphylococcus aureus (MRSA) ที่ดื้อต่อ methicillin เกิดขึ้นในหนูทดลองที่ศูนย์สัตวศาสตร์ในห้องปฏิบัติการของวิทยาลัยการแพทย์ป้องกันราชอาณาจักรในปี 2561 และMRSAแยกจากหนูในห้องหนูอื่นหลังจากนั้นด้วย ในเชื้อ MRSA ที่แยกได้เหล่านี้ การพิมพ์ระดับโมเลกุล เช่น การพิมพ์ลำดับ Multi-locus (MLST), การพิมพ์ Staphylococcus aureus Protein A(spa), การพิมพ์ SCCmec และการพิมพ์ coagulase ถูกดำเนินการสำหรับการกำหนดหาจีโนไทป์ของพวกมัน ไอโซเลททั้งหมดเปิดเผยจีโนไทป์ที่เหมือนกัน (ST1, สปา t1784, SCCmec type IV และ coagulase type VII) ซึ่งบ่งชี้ว่าไอโซเลตนั้นเป็นโคลนที่เหมือนกัน ก่อนการเกิดขึ้นของ MRSA ในปี 2561 ไม่มีการแยกตัวแยกที่มีจีโนไทป์ดังกล่าว ณ สถานที่นี้ สันนิษฐานว่าโคลน MRSA ถูกนำเข้ามาในสถานที่นี้ผ่านทางมนุษย์หรือสัตว์ทดลอง STl1 เป็นเชื้อ MRSA ที่ชุมชนได้มาเป็นครั้งแรกที่กู้คืนจากเด็กในสหรัฐอเมริกา อย่างไรก็ตาม ST1 นั้นได้รับการฟื้นฟูจากมนุษย์และสัตว์ทั่วโลกในปัจจุบัน ในญี่ปุ่น สายพันธุ์ ST1 และ SCCMec ประเภท IV ถูกแยกออกจากมนุษย์และแมว ซึ่งบ่งชี้ว่า ST1 นั้นติดต่อระหว่างคนและสัตว์ สายพันธุ์ MRSA ที่มีจีโนไทป์เหล่านี้แต่ยังมีสปา tl784 ได้รับการฟื้นฟูจากมนุษย์แล้ว ปัจจุบัน ความแตกต่างระหว่าง MRSA ที่โรงพยาบาลได้รับ MRSA ที่ชุมชนได้มา และ MRSA ที่เกี่ยวข้องกับปศุสัตว์มีความคลุมเครือมากกว่า ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าหนูอาจทำหน้าที่เป็นแหล่งกักเก็บเชื้อ MRSA

ในการบำบัดด้วยภูมิคุ้มกันมะเร็งเมื่อเร็วๆ นี้ กิจกรรมของโมเลกุล เช่น PD-1 ถูกยับยั้งเพื่อเพิ่มการออกฤทธิ์ของเซลล์ภูมิคุ้มกันในการต้านมะเร็ง แม้จะมีผลการรักษาสูง แต่ก็มีบางกรณีที่โรคภูมิต้านตนเองพัฒนาขึ้นในการบำบัดด้วยภูมิคุ้มกันมะเร็ง ที่นี่ เราได้สร้างระบบที่สามารถย่อยสลาย PD-1 ในลักษณะเฉพาะเวลาในเซลล์ที่เพาะเลี้ยงและหนูโดยใช้ระบบ SMAh degron. PD-1-โปรตีนหลอมรวม SMASh ในเซลล์ Jurkat และ CD3 บวกเซลล์ม้ามลดลง 1 วันหลังจากการบริหารให้ Asunaprevir(ASV) หรือ Grazoprevir(GRV) ซึ่งเป็นสารยับยั้ง NS3/4A protease การเจริญเติบโตของเซลล์มะเร็งชนิดอะดีโนคาร์ซิโนมาของ MC-38 ที่ฉีดวัคซีนในหนูเมาส์ PD-1-cherry-SMASh knockin(KI) ที่มี ASV ถูกยับยั้งเมื่อเปรียบเทียบกับหนูเมาส์ชนิดพันธุ์ป่า (WT) และหนู KI ที่ไม่ถูกบำบัด ยิ่งไปกว่านั้น หนู WT ที่ปลูกถ่ายด้วยเซลล์ไขกระดูก KI หลังจากการฉายรังสีที่เป็นอันตรายถึงชีวิตอาจปฏิเสธเซลล์ MC-38 ที่มี GRV หนู KI มีสุขภาพดีและไม่แสดงอาการของโรคภูมิต้านตนเอง เราแนะนำว่าการใช้ระบบ degron ในสิ่งมีชีวิตนั้นคาดว่าจะไม่เพียงแต่ทำให้การศึกษาทางชีววิทยาต่างๆ ก้าวหน้าไปเท่านั้น แต่ยังรวมถึงการรักษาโรคด้วย

โปรเจสเตอโรน (P4) ถูกหลั่งจากรกเพื่อรักษาการตั้งครรภ์และทำหน้าที่เป็นตัวควบคุมภูมิคุ้มกัน Glucocorticoid เป็นอีกชนิดหนึ่งภูมิคุ้มกัน-regulatoryสเตียรอยด์เพื่อควบคุมการอักเสบ ในการศึกษานี้ เซลล์โมโนนิวเคลียร์ในเลือดของมนุษย์ (PBMCs) ถูกปลูกถ่ายลงในหนูเมาส์ NOG เพื่อกระตุ้นการติดสินบนกับโฮสต์-โรค (GVHD) และใช้สำหรับการเปรียบเทียบระหว่างผลกระทบของ P4 และคอร์ติซอล (COR) PBMC ถูกกระตุ้นในการมีอยู่ของความเข้มข้นต่างๆ ของ P4 หรือ COR และเซลล์ถูกวิเคราะห์โดยโฟลว์ไซโตเมทรี (FCM) ส่วนของPBMCsถูกปลูกถ่ายในหนูเมาส์ NOG และฉีด P4 หรือ COR เข้าไปในหนูสองครั้งต่อสัปดาห์ หลังจาก 28 วัน ทำการวิเคราะห์ FCM และอิมมูโนฮิสโตเคมี ผลที่ได้คือ P4 ที่มีความเข้มข้นสูงยับยั้งการกระตุ้นทีเซลล์ในหลอดทดลอง ในขณะที่การยับยั้งไม่ดำเนินต่อไปหลังจากการกำจัด การปราบปรามของการกระตุ้นทีเซลล์นั้นน้อยกว่าในการรักษาด้วย COR เมื่อเทียบกับ P4 และอาการอ่อนแรงของทีเซลล์นั้นเด่นชัดกว่า P4-หนูที่ถูกฉีดมีเซลล์ม้ามมากขึ้น โดยเฉพาะอย่างยิ่ง CD8 ทีเซลล์ เมื่อเปรียบเทียบกับหนูเมาส์ควบคุม อย่างไรก็ตาม การแสดงออกที่ต่ำกว่าของ CD25 การแทรกซึมของเซลล์ T ของมนุษย์เข้าไปในปอดและตับน้อยลง และน้อยลงGVHDสังเกตอาการ. ในทางกลับกัน จำนวนของ splenocytes โดยเฉพาะอย่างยิ่งทีเซลล์ในหนูเมาส์ที่ฉีด COR นั้นลดลงอย่างมีนัยสำคัญ และเซลล์ที่ถูกกระตุ้น/เซลล์หมดแรงมีมากมาย ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า P4 ชอบที่จะคงทีเซลล์ไว้เมื่อเปรียบเทียบกับ COR ในหลอดทดลอง

บิล Helicobacter hepaticus และ Helicobacter เรียกว่าเชื้อโรคที่ทำให้เกิดโรคตับอักเสบและลำไส้ใหญ่อักเสบในหนูทดลอง การมีอยู่ของเคสที่เป็นบวกหลายรายยังคงได้รับการยืนยันเป็นประจำทุกปีในสถานอำนวยความสะดวกสำหรับสัตว์ทดลองในญี่ปุ่น ควรใช้เนื้อหาใน Cecal หรืออุจจาระสดเป็นตัวอย่างสำหรับการทดสอบ PCR ของ H. hepaticus และ H. bilis

เมื่อเร็ว ๆ นี้ สารเคมีในการขนส่งและการจัดเก็บ DNA และ RNA ได้รับการผลิตโดยผู้ผลิตหลายราย คาดว่ารีเอเจนต์เหล่านี้จะแก้ปัญหาในการขนส่งตัวอย่างที่ใช้สำหรับการทดสอบ PCR ให้หมดไป ดังนั้นในการศึกษานี้ ประโยชน์ของสารกักเก็บกรดนิวคลีอิกจึงถูกตรวจสอบโดยการทดสอบ PCR ของเฮลิโคแบคเตอร์โดยใช้เนื้อหาของลำไส้ใหญ่ส่วนต้นที่เก็บรักษาไว้โดยใช้รีเอเจนต์การคงสภาพกรดนิวคลีอิก เป็นผลให้ตัวอย่างที่เก็บไว้เป็นเวลา 7 วันโดยใช้สารละลายเก็บรักษาสามารถตรวจพบเฮลิโคแบคเตอร์ที่ระดับเดียวกับตัวอย่างสด จากข้างต้น มีข้อเสนอแนะว่าในการทดสอบ PCR ของ Helicobacter แม้ว่าการขนส่งจะใช้เวลาหลายวัน ก็ยังสามารถทำการทดสอบได้อย่างแม่นยำสูงโดยการขนส่งตัวอย่างที่แช่ในน้ำยากักเก็บกรดนิวคลีอิกโดยเที่ยวบินแช่เย็น

ก่อนหน้านี้เราได้พัฒนาสายพันธุ์ E.coli ที่กลายพันธุ์โดยมีการเกาะติดพื้นผิวที่เป็นของแข็งในหลอดทดลองเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญโดยการดัดแปลงยีนที่ตอบสนองต่อภาวะขาดสารอาหาร เพื่อประเมินการทำงานร่วมกันระหว่างสายพันธุ์ E. coli ที่เสริมการยึดเกาะ (AEEs) และสภาพแวดล้อมในลำไส้ในร่างกาย เราประเมินความสามารถในการตั้งรกรากของพวกมันในทางเดินลำไส้โดยการฉีดวัคซีนในหนูทดลอง

ก่อนการทดลองประเมิน เราแปลง AEE ด้วยพลาสมิดที่แสดงลูซิเฟอเรสสำหรับการแสดงภาพภายในร่างกาย ตามที่ได้รับการฉีดวัคซีนทางปากในหนูที่อดอาหารและเก็บอุจจาระทุกสองสามวัน จำนวนการถ่ายทอดสดAEEsประมาณการโดยการวัด CFU จากอุจจาระที่เก็บรวบรวม

ผลที่ได้ เมื่อเปรียบเทียบกับสายพันธุ์ควบคุม AEE มีมากในอุจจาระนานกว่าหนึ่งสัปดาห์ ซึ่งบ่งชี้ว่ามีการตั้งอาณานิคมในลำไส้เพิ่มขึ้น จากการสังเกตการแปลของลูซิเฟอเรสการเรืองแสงโดยการถ่ายภาพแบบไม่รุกรานโดยใช้ IVIS ยังพบว่า AEE มีแนวโน้มที่จะตั้งรกรากที่ลำไส้ใหญ่ส่วนต้นและลำไส้ใหญ่

[วัตถุประสงค์] ปัจจุบัน [Pasteurella]โรคปอดบวมได้รับการจัดประเภทใหม่เป็น Rodentibacter สกุลใหม่ ในจำนวนนี้ R.pneumotropicus และ R. Healy เป็นเป้าหมายหลักในการเฝ้าติดตามทางจุลชีววิทยาในหนู เราได้แยกเชื้อ Rodentibacter sp ออกมาจำนวนหนึ่ง ที่ไม่สามารถระบุได้ว่าเป็นสัตว์จำพวกหนู ในการศึกษานี้ เราศึกษาลักษณะของ Rodentibacter sp. แยกโดยเน้นที่ความรุนแรงของแบคทีเรีย [วิธีการ] Rodentibacter sp. ที่แยกได้จากหลอดลมของหนูเพื่อใช้ในการศึกษา การจัดลำดับจีโนมแบบร่างได้ดำเนินการบนซีเควนเซอร์รุ่นต่อไป จากนั้นจึงคาดการณ์ยีนที่เกี่ยวข้องกับความรุนแรง ในการทดลองกับสัตว์ หนู Rag2 ถูกใช้สำหรับ Rodentibacter sp. การติดเชื้อ|ผลลัพธ์| โดยการจัดลำดับจีโนมแบบร่าง ยีนที่กำหนดรหัสสารพิษ RTX เฉพาะได้ถูกระบุใน Rodentibacter sp. ลำดับโปรตีนของสารพิษ RTX มีความคล้ายคลึงกับลำดับโปรตีนที่ผลิตโดย Enterobacteriaceae มากกว่าโดย Pasteurellaceae ในการทดลองกับสัตว์ หนู Rag 2 ที่ติดเชื้อเกือบทั้งหมดได้รับการยืนยันว่าเป็นโรคปอดบวมหรือภาวะโลหิตเป็นพิษร้ายแรง แม้ว่าจะไม่สามารถระบุเชื้อ R. pneumotropicus และ R. heylii ได้ แต่สปีชีส์ที่เกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิดนี้อาจเป็นอันตรายถึงชีวิตต่อสัตว์ที่มีภูมิคุ้มกันบกพร่องเมื่อมีปัจจัยความรุนแรงเช่น RTX toxin

ในโปรแกรมการพัฒนาเทคโนโลยีขั้นพื้นฐานของ NBRP (2018-2019) เราได้จัดลำดับจีโนมของแบคทีเรียที่ทำให้เกิดโรคในหนูและดำเนินการRNAseqของโปรโตซัวในหนูทดลอง เพื่อพัฒนาการตรวจ PCR สำหรับสิ่งมีชีวิตเหล่านี้ เราใช้ผลลัพธ์เหล่านี้เพื่อวิเคราะห์ Rodentibacter spp. และโปรโตซัวในหนูร่วมกับมหาวิทยาลัยเกียวโต (NBRP Rat) ที่นี่ เรารายงานผลการทดสอบในตัวอย่างหนู [วิธีการ] ลำดับยีน 16S rRNA ที่ประมาณ 1.5 kbp ถูกอ่านโดย PCR สำหรับหนูหกตัวที่แยกได้จาก Rodentibacter spp. และลำดับจีโนมแบบร่างของหนึ่งไอโซเลต (#25) ถูกกำหนดโดยใช้ Illumina HiSeq 2500 PCR ของเนื้อหาในหนู cecal คือ ดำเนินการตามผลลัพธ์ RNAseq ของโปรโตซัวของเมาส์ [ผลลัพธ์] ลำดับยีน 16S rRNA ของไอโซเลททั้งหมดเหมือนกัน และถูกระบุว่าเป็น Rodentibacter Ratti โดยการวิเคราะห์ OTU การหาลำดับของไอโซเลต #25 ยังเปิดเผยว่าสายพันธุ์นี้คือ R. Ratti.PCR สำหรับโปรโตซัวของหนูให้ผลในเชิงบวกสำหรับอะมีบาในหนู ไม่พบผลลัพธ์ที่เป็นบวกสำหรับ TrichomonasPCRบนตัวอย่างหนู [การสนทนา] หนูแยกเชื้อ Rodentibacter spp. ที่ตรวจสอบในรายงานนี้คือ ร.รัตติ ทั้งหมด สิ่งสำคัญคือต้องระวังการปรากฏตัวของ R. Ratti เมื่อทำการทดสอบ Rodentibacter ในหนูแรท ตัวอย่างอุจจาระของหนูบางตัวมีผลบวกต่ออะมีบา PCR ของหนูเมาส์ นี่เป็นขั้นตอนแรกในการพัฒนา PCR เพื่อตรวจหาโปรโตซัวในหนู

สิ่งมีชีวิต Rodentibacter 'Pasteurella pneumotropica' เป็นแบคทีเรียที่ทำให้เกิดโรคโดยฉวยโอกาสที่เป็นสาเหตุของโรคทางเดินหายใจในหนูและหนู ก่อนหน้านี้จัดอยู่ในสกุล Pasteurella และหลายสายพันธุ์ถูกเสนออย่างไม่แน่นอนว่าเป็นไบโอไทป์ ในปี 2560 พวกเขาได้รับการจัดระเบียบใหม่เป็นสกุล Rodentibacter สายพันธุ์ MaM และ MaR แยกได้จากหนูและหนูตามลำดับประมาณปี 1980 ในการศึกษานี้ เรากำหนดลำดับจีโนมของทั้งสองสายพันธุ์และเปรียบเทียบกับสกุล Rodentibacter วัสดุและเมธอดIสายพันธุ์ MaM และ MaR ได้มาจากสถาบันโรคติดเชื้อแห่งชาติ (NIAID)

(Manabu Saito --> Yasushi Ami -->ฟูมิโอะ อิเกะ) ทั้งสองสายพันธุ์เติบโตโดยการเพาะเลี้ยงของเหลวเพื่อแยก DNA ของจีโนม และกำหนดลำดับจีโนมโดยใช้ Illumina Hiseq 2500 และ PacBio Sequel [ผลลัพธ์] จากลำดับยีน 16S rRNA สายพันธุ์ MaM ถูกระบุว่าเป็น R.pneumotropicus และสายพันธุ์ MaR อย่าง รัตติ. นอกจากนี้ ยังได้กำหนดลำดับจีโนมที่สมบูรณ์ (2,213,961 bp) ของสายพันธุ์ MaR (จำนวนของโอเปอรอน rRNA คือ 6 และจำนวนยีนประมาณว่า 2,063) [การสนทนา สายพันธุ์ MaM และ MaR ถูกใช้เป็นมาตรฐานในการระบุ 'Pasteurella pneumotropica' ในญี่ปุ่น จากการวิเคราะห์นี้ เราได้กำหนดสายพันธุ์ของทั้งสองสายพันธุ์ดังนี้ สายพันธุ์ MaM คือ R.pneumotropicus และสายพันธุ์ MaR คือ R.ratti ผลลัพธ์เหล่านี้แสดงให้เห็นว่า R. Ratti สามารถแยกได้จากหนูในญี่ปุ่นอย่างน่าทึ่ง

Clostridium pili for me(CP) ไวต่อการติดเชื้อในสัตว์ทดลองหลายชนิด รวมทั้งหนูและหนู และแสดงการติดเชื้อที่ไม่มีอาการ ยกเว้นในสัตว์ที่มีภูมิคุ้มกันบกพร่อง ถือเป็นการวินิจฉัยแยกโรคที่สำคัญในการดูแลรักษาสัตว์ และเป็นที่ทราบกันดีว่าส่งผลต่อข้อมูลการทดลองจากการศึกษาในสัตว์ทดลอง Serodiagnosis (ELISA, IFA) และ PCR มักใช้ในการวินิจฉัย CP เนื่องจากการแยกสารอาหารในอาหารเทียมทำได้ยากสำหรับ CP อย่างไรก็ตาม การมีอยู่ของแอนติบอดีที่ไม่จำเพาะเจาะจงซึ่งบ่งชี้ถึงการทำปฏิกิริยาข้ามกับ CP โดยใช้ serodiagnosis ได้รับการรายงานและมักพบในกรณีที่คล้ายกันในสถานประกอบการของเรา นอกจากนี้ วิธี PCR ยังมีข้อจำกัดในฐานะวิธีการวินิจฉัยที่เชื่อถือได้พร้อมการตรวจสอบเป็นระยะ เนื่องจาก CP ตรวจไม่พบในอุจจาระหลังจากเพิ่มระดับแอนติบอดี เมื่อเร็ว ๆ นี้เราได้ตรวจสอบวิธีการที่แตกต่างกันโดยเก็บอุจจาระจากสัตว์ทุกเดือน เราใช้การทดสอบ PCR สำหรับ CP ที่ไม่ได้รับผลกระทบจากอิทธิพลของแอนติบอดี ซึ่งเป็นการวินิจฉัยที่เชื่อถือได้มากขึ้นโดยใช้อุจจาระที่เก็บรักษาไว้อย่างต่อเนื่อง ในรายงานนี้ เราแสดงตัวอย่างล่าสุด (แอนติบอดีที่ไม่จำเพาะเจาะจง) เพื่อนำไปสู่การตรวจสอบกระแสที่กำลังพัฒนาในบริษัทของเรา