การวิจัยเกี่ยวกับวิธีที่ดีที่สุดที่จะใช้สารสกัดจาก Cistanche-Cistanche,อุปทานสุขภาพ, อาหาร Cistanche

ผู้แต่ง:หลี่หยาง,ฉินยาตี้,บูเบียเจียเอียร์ ฮายลาติ,เหยาจุน,หยวนเจี๋ย,ยูหลิน

（1. คณะเภสัชศาสตร์ มหาวิทยาลัยการแพทย์ซินเจียง อุรุมชี 830011;2. วิทยาลัยการแพทย์ซินเจียงที่สอง, Klamayi 834000;3. โฮตัน ดิเชน ฟาร์มาซีอูติกาส แอนด์ ไบโอเทค จํากัด โฮตัน 848000)

นามธรรม:

วัตถุประสงค์: เพื่อสร้างวิธีการระบุและกําหนดฟีนิลเอทานอลไกลโคไซด์สี่ชนิด (echinacoside, tubuloside A, acteoside, isoacteoside) ในชิ้นส่วน cistanche สารสกัดและอาหารเพื่อสุขภาพที่เกี่ยวข้องโดย TLC และ QAMS

วิธี:

(1)TLC: ฟีนิลเอทานอลไกลโคไซด์สี่ตัวถูกระบุโดย TLC ด้วยฟิล์มโพลีเอไมด์เป็นเฟสที่อยู่กับที่และคลอโรฟอร์ม- เมทานอล - กรดอะซิติก - น้ํา (1.5∶2∶1∶7) เป็นตัวทําละลายที่กําลังพัฒนา จุดนี้ถูกตรวจพบภายใต้แสงอัลตราไวโอเลตที่ 365 นาโนเมตร

(2)การใช้ echinacoside เป็นข้อมูลอ้างอิงภายในปัจจัยการแก้ไขสัมพัทธ์สําหรับ tubuloside A, acetonide และ isoacteoside ถูกใช้ในการคํานวณเนื้อหาของแต่ละองค์ประกอบ ผลการคํานวณของวิธี QAMS ถูกเปรียบเทียบกับค่าของวิธีการมาตรฐานภายนอก

ผลลัพธ์:จุด TLC ของฟีนิลเอทานอลไกลโคไซด์ 4 จุด (echinacoside, tubuloside A, acteoside และ isoacteoside) ในชิ้นยาต้ม cistanche สารสกัดและอาหารที่มีประโยชน์ทั้งหมดมีความชัดเจนด้วยการแยกที่ดีค่า Rf ปานกลางที่เฉพาะเจาะจงที่แข็งแกร่ง ความสามารถในการทําซ้ําของ tubuloside A, acteoside และปัจจัยการแก้ไขสัมพัทธ์ isoacteoside นั้นดีและไม่มีความแตกต่างที่ชัดเจนระหว่างสองวิธีนี้

สรุป: วิธีการที่กําหนดไว้ในการศึกษานี้ง่ายถูกต้องและทําซ้ําได้ มันสามารถให้การอ้างอิงสําหรับการควบคุมคุณภาพของส่วนประกอบที่มีประสิทธิภาพของชิ้นยาต้ม cistanche สารสกัดและอาหารที่มีประโยชน์

คำ:cistanche； ชิ้นยาต้ม; ผลิตภัณฑ์ที่เกี่ยวข้องฟีเนทิลแอลกอฮอล์ไกลโคไซด์ทีแอลซี； QAMS

Cistanche deserticola Y. C. Ma. เป็นสมุนไพรกาฝากยืนต้นของตระกูล Orobanchaceae มันถูกใช้เป็นยาที่มีลําต้นเนื้อแห้งที่มีใบเป็นสะเก็ด Cistanche ได้รับการตีพิมพ์ครั้งแรกใน "Shenlong Materia Medica" และถูกระบุว่าเป็นเกรดสูงสุด มันมีรสหวานอบอุ่นในธรรมชาติเค็มและเป็นของไตและเส้นเมอริเดียนลําไส้ใหญ่ มันมีผลทําให้ลําไส้และยาระบายชุ่มชื่นไตหยางชุ่มชื่นและเป็นประโยชน์ต่อสาระสําคัญและเลือด ส่วนใหญ่ผลิตในซินเจียงหนิงเซี่ยมองโกเลียในชิงไห่กานซูและภูมิภาคแห้งแล้งอื่น ๆ ทางตะวันตกเฉียงเหนือของจีน ส่วนประกอบทางเคมีหลักของ Cistanche คือฟีนิลธานอยด์ไกลโคไซด์, อิริดอยด์, ลิกแนน, อัลคาลอยด์, โมโนเทอร์พีน, น้ําตาล, น้ํามันระเหยและธาตุอนินทรีย์ ในหมู่พวกเขา phenylethanoid glycosides (Phys) เป็นหนึ่งในองค์ประกอบทางเภสัชวิทยาหลักซึ่งมีฤทธิ์ทางเภสัชวิทยาเช่นสารต้านอนุมูลอิสระการป้องกันระบบประสาทไวรัสการเสริมสร้างภูมิคุ้มกันการต่อต้านความอิ่มตัวและการเพิ่มประสิทธิภาพความจําและการเสริมสร้างภูมิคุ้มกัน

ประโยชน์ของสารสกัดจาก Cistanche:

สารสกัดจาก Cistanche ทําจากเม็ด Cistanche ที่มีฤทธิ์เป็นเอนไซม์แห้งซึ่งสกัดและแยกออก มันถูกส่งออกไปยังญี่ปุ่นเกาหลีใต้มาเลเซียและตลาดต่างประเทศอื่น ๆ และใช้กันอย่างแพร่หลายในผลิตภัณฑ์ดูแลสุขภาพเครื่องสําอางและอุตสาหกรรมยา ผลิตภัณฑ์ดูแลสุขภาพที่แปรรูปจากสารสกัดจากซิสตันเช่เนื่องจากวัตถุดิบมีหน้าที่ในการดูแลสุขภาพแบบคู่ของบรรเทาความเหนื่อยล้าทางร่างกายและปรับปรุงภูมิคุ้มกัน. ในปัจจุบันยังขาดมาตรฐานการควบคุมที่สอดคล้องกันสําหรับการประเมินคุณภาพของส่วนผสมที่ใช้งานของสารสกัด Cistanche และผลิตภัณฑ์ดูแลสุขภาพและเป็นการยากที่จะรับประกันคุณภาพและความปลอดภัยของการแปรรูปและการขายในตลาด Echinacea และ verbascoside เป็นองค์ประกอบดัชนีสําหรับการระบุและการกําหนดเนื้อหาภายใต้รายการของซิสตันเช ทูบูโลซาในตํารับยาจีนฉบับปี 2020 นอกจากนี้ซิสตันเช ทูบูโลซานอกจากนี้ยังมีฟีนิลธานอยด์ไกลโคไซด์อื่น ๆ เช่น tuberosin A, salidroside, isoverbasin, cistancheoside C, cistancheoside D, auriroside, 2 ′-acetylverbasin เป็นต้นองศาที่แตกต่างกันของสารต้านอนุมูลอิสระและผลกระทบทางระบบประสาทเป็นการยากที่จะประเมินคุณภาพอย่างครอบคลุมและแม่นยําโดยใช้ echinacoside และ verbascoside เป็นตัวบ่งชี้การตรวจจับเท่านั้น มีรายงานในวรรณคดีว่าเนื้อหาของ ductaloside A และ isaveraside ใน Cistanche และ Cistanche ก็สูงขึ้นเช่นกัน โดยสูงถึง 0.29%, 0.21%, 0.06% และ 0.10% ตามลําดับ

คลิกที่นี่เพื่อทราบสิทธิประโยชน์เพิ่มเติมของ cistanche

ในบทความนี้การระบุ TLC ของ phenylethanoid glycosides 4 ตัว (echinacoside, tuberoside A, verbascoside, isorrascoside) ในชิ้นยาต้มของ Cistanche Tubulosa และผลิตภัณฑ์ที่เกี่ยวข้อง (สารสกัดผลิตภัณฑ์เพื่อสุขภาพ) และโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC) ได้รับการจัดตั้งขึ้น วิธีการประเมิน (HPLC-QAMS) วิธีการกําหนดเนื้อหาของให้การอ้างอิงสําหรับการปรับปรุงวิธีการประเมินคุณภาพของ Cistanche Tubulosa ต่อไป

1 วัสดุและวิธีการเลือกวิธีที่ดีที่สุดในการใช้ Cistanche

1.1 เครื่องมือและรีเอเจนต์

Shimadzu LC-20AT โครมาโตกราฟเหลวประสิทธิภาพสูง; Shimadzu LC-20AB โครมาโตกราฟเหลวประสิทธิภาพสูง; Agilent1260 โครมาโตกราฟเหลวประสิทธิภาพสูง; เครื่องชั่งเชิงวิเคราะห์ (AB135-S, บริษัท Mettler Toledo1o); KQ-500DE เครื่องทําความสะอาดอัลตราโซนิก

(KQ-500DE, Kunshan อัลตราโซนิกตราสาร จํากัด); เครื่องมือจํากึ่งอัตโนมัติ (CAMAG สวิตเซอร์แลนด์)

(1) ชิ้นยาต้มที่มีจําหน่ายในท้องตลาดของ Cistanche (S1, S2: Cistanche deserticola ต้นกําเนิดใน Alxa, ซินเจียง; S3, S4: CistancheTunulosa ต้นกําเนิดซินเจียง): ซื้อจากบริษัท เวซิสแตนช์ จํากัด.; การสกัดแอลกอฮอล์ของยาเม็ดแห้งเอนไซม์ S6: การสกัดน้ําของเม็ดแห้งที่ปิดใช้งานเอนไซม์ S7: การสกัดแอลกอฮอล์เม็ดแห้งที่ปิดใช้งานเอนไซม์ด้วยเรซิน) และผลิตภัณฑ์เพื่อสุขภาพ (S8) จัดทําโดย Xinjiang Hetian Dichen Biotechnology Co. , Ltd.

(2) สารอ้างอิง Echinacea (หมายเลขแบทช์: S-003-01904003, ความบริสุทธิ์: ≥ 98%), tuberosin A (หมายเลขแบทช์: G-066-11812016, ความบริสุทธิ์: ≥ 98%), เวอร์บาสโคไซด์ (หมายเลขแบทช์: ≥ 98%) M-011-02103019, ความบริสุทธิ์: ≥ 98%), isaveraside (หมายเลขแบทช์: Y-073-11803024, ความบริสุทธิ์: ≥ 98%): ปักกิ่ง Yingleike Technology Development Co., Ltd.

(3) เมทานอลอะซิโตไนไตรล์และกรดฟอร์มิกเป็นโครมาโตกราฟีบริสุทธิ์ คลอโรฟอร์มและกรดอะซิติกน้ําแข็งบริสุทธิ์ในเชิงวิเคราะห์ น้ําเป็นน้ําบริสุทธิ์พิเศษ

1.2 วิธีการทดลอง

1.2.1 การระบุด้วยโครมาโตกราฟีชั้นบาง ๆ

1.2.1.1 การเตรียมสารละลายทดสอบ ใช้ผงทดสอบ (ชิ้นยาต้ม Cistanche 0.5 กรัม, สารสกัดจาก Cistanche 0.2 กรัม, ผลิตภัณฑ์เพื่อสุขภาพ 0.5 กรัม), เพิ่มเมทานอล 20 มล. 50% รักษาด้วยคลื่นเสียงความถี่สูงเป็นเวลา 15 นาทีและกรอง

ตัวกรองมีความเข้มข้นถึง 2 มล. ผ่านเมมเบรนพรุนขนาด 0.45 μm และใช้เป็นสารละลายทดสอบ

1.2.1.2 การเตรียมสารละลายสารอ้างอิงมีน้ําหนัก 10 มก. ของ echinacoside, vasoside A, verbascoside และสารอ้างอิง isorrascoside อย่างแม่นยําเพิ่มเมทานอล 50% เพื่อละลายและเจือจางให้ปริมาตร 10 มล.

ขวดเป็นโซลูชันสต็อกมาตรฐานมาตรฐานเดียวอ้างอิง วัดได้อย่างแม่นยําประมาณ 2 มล. ของสารละลายสต็อกมาตรฐานเดียวของสารอ้างอิงแต่ละชนิดเพิ่มเมทานอล 50% ลงในขวดปริมาตร 10 มล. เดียวกันและผ่านเมมเบรนพรุน 0.45 μm เป็นสารละลายอ้างอิงแบบผสม

1.2.1.3 การเตรียมสารละลายตัวอย่างเชิงลบชั่งน้ําหนักวัสดุยาอื่น ๆ นอกเหนือจาก Cistanche ตามใบสั่งแพทย์ของผลิตภัณฑ์สุขภาพและทํางานตามวิธีการเดียวกันสําหรับการเตรียมสารละลายทดสอบเพื่อเตรียมสารละลายตัวอย่างเชิงลบ

1.2.2 การกําหนดเนื้อหาโดยวิธีการประเมินแบบหนึ่งทดสอบหลายแบบ

1.2.2.1 เงื่อนไขโครมาโตกราฟีคอลัมน์: INERTSIL ODS-3 (250mm×4.6mm, 5μm); เฟสมือถือ: acetonitrile (A) -0.1% สารละลายกรดฟอร์มิก (B), การไล่ระดับสี (0 ~ 12 นาที, 17% ~ 20% A; 12 ~ 30 นาที, 20% ~ 22% A; 30 ~ 35 นาที, 22% ~ 17% A); ความยาวคลื่นตรวจจับ: 330nm; อัตราการไหล: 1.0mL · นาที-1; อุณหภูมิคอลัมน์: 30 °C; ปริมาณการฉีด: 10μL

1.2.2.2 การเตรียมสารละลายสารอ้างอิง ใช้ echinacoside, tuberosin A, verbascoside และสารอ้างอิง isorrascoside ประมาณ 10 มก. ชั่งน้ําหนักอย่างถูกต้องและวางไว้ในขวดปริมาตร 10 มล. ตามลําดับโดยใช้ 50%

ละลายเมทานอลและทําขึ้นเพื่อทําเครื่องหมายเขย่าให้เข้ากันเพื่อให้ได้สารละลายสต็อกมาตรฐานเดียวของสารอ้างอิงที่มีความเข้มข้น 1.008, 1.011, 1.012 และ 1.012 mg · mL-1 ตามลําดับ วัดปริมาณที่เหมาะสมของสารละลายสต็อกมาตรฐานเดียวของสารอ้างอิงแต่ละชนิดอย่างแม่นยําวางไว้ในขวดปริมาตรขนาด 10 มล. เดียวกันเพิ่มเมทานอล 50% ลงในเครื่องหมายเขย่าให้เข้ากันและเตรียมส่วนผสมที่มีความเข้มข้น 201.60, 50.55, 101.20, 50.60μg · mL-1 สารละลายอ้างอิงถูกส่งผ่านเมมเบรนพรุน 0.45μm

1.2.2.3 การเตรียมสารละลายทดสอบ

(1) สารละลายทดสอบชิ้นยาต้ม Cistanche: ชั่งน้ําหนักประมาณ 1.0 กรัมของผงชิ้นยาต้ม Cistanche (ผ่านตะแกรงหมายเลข 4) ชั่งน้ําหนักอย่างถูกต้องเพิ่ม 25 มล. ของเมทานอล 50% เขย่าให้เข้ากันชั่งน้ําหนักและ ultrasonically (กําลังไฟ 250w, ความถี่ 35kHz) 40 นาทีปล่อยให้เย็นชั่งน้ําหนักอีกครั้งเสริมน้ําหนักที่ลดลงด้วยเมทานอล 50% เขย่าให้เข้ากันกรองผ่านกระดาษกรอง และนําตัวกรองผ่านเมมเบรนพรุนขนาด 0.45 μm

(2)วิธีการแก้ปัญหาของสารสกัดจาก Cistanche สําหรับการทดสอบ: ใช้ผงของสารสกัดจาก Cistanche (S5: เกล็ดแห้งที่มีฤทธิ์เป็นเอนไซม์ที่มีฤทธิ์จากแอลกอฮอล์, S6: เกล็ดแห้งที่มีฤทธิ์ของเอนไซม์ที่สกัดด้วยน้ํา, S7: เกล็ดแห้งที่มีฤทธิ์เป็นเอนไซม์ที่สกัดด้วยแอลกอฮอล์ด้วยเรซิน) ประมาณ 0.2 กรัม ชั่งน้ําหนักและเตรียมสารละลายทดสอบของสารสกัด Cistanche อย่างแม่นยําตามวิธีการภายใต้ "(1)" (3)โซลูชันการทดสอบผลิตภัณฑ์ดูแลสุขภาพ: นําผลิตภัณฑ์ดูแลสุขภาพ 10 รายการชั่งน้ําหนักอย่างถูกต้องบดละเอียดคํานวณน้ําหนักแท็บเล็ตเฉลี่ยชั่งน้ําหนัก 1 เม็ด (ประมาณ 0.5 กรัม) อย่างถูกต้องและเตรียมผลิตภัณฑ์ดูแลสุขภาพตามวิธีการภายใต้" (1)" โซลูชันการทดสอบ

2 ผลลัพธ์และการวิเคราะห์การเลือก Cistanche ที่ดีที่สุด

1.1 เครื่องมือและรีเอเจนต์

2.1 การระบุด้วยโครมาโตกราฟีบางชั้น

ตามการทดสอบโครมาโตกราฟีชั้นบาง (กฎทั่วไป 0502) ให้วาด 2 μL ของสารละลายมาตรฐานเดี่ยวของสารอ้างอิงอ้างอิงสารละลายอ้างอิงแบบผสมสารละลายทดสอบและสารละลายตัวอย่างเชิงลบตามลําดับและชี้ไปที่สารละลายโพลีอะคริลาไมด์เดียวกัน

บนแผ่นฟิล์มเอมีนให้ใช้คลอโรฟอร์ม - เมทานอล - น้ําแข็งกรดอะซิติก - น้ํา (1.5: 2: 1: 7) เป็นตัวแทนที่กําลังพัฒนาพัฒนาพัฒนานําออกมาแห้งและตรวจสอบภายใต้แสงอัลตราไวโอเลต (365 นาโนเมตร) ผลการตรวจ สารทดสอบพบจุดฟลูออเรสเซนต์ที่มีสีเดียวกันที่ตําแหน่งที่สอดคล้องกันบนโครมาโตแกรมของสารอ้างอิง และไม่มีการรบกวนเมื่อเป็นลบ ดังแสดงในรูปที่ 1

รูปที่ 1 โครมาโตแกรม TLC ของชิ้น cistanche สารสกัดผลิตภัณฑ์เพื่อสุขภาพ

หมายเหตุ: จากซ้ายไปขวา ได้แก่ echinacoside, tuberoside A, verbascoside, isaveraside, สารอ้างอิงผสม, ชิ้นยาต้มของ Cistanche (S1 ~ S4), สารสกัดจาก Cistanche (S5 ~ S7), ผลิตภัณฑ์ดูแลสุขภาพ (S8), ตัวอย่างเชิงลบของผลิตภัณฑ์สุขภาพ (S8)

2.2 การกําหนดเนื้อหาโดยวิธีการประเมินแบบหนึ่งทดสอบหลายแบบ

2.2.1 การทดสอบความจําเพาะ

ใช้ 10 μL ของสารละลายอ้างอิงแบบผสมและสารละลายทดสอบแต่ละชนิด แล้วฉีดและวิเคราะห์ตามเงื่อนไขโครมาโตกราฟีภายใต้ 1.2.2.1 ความละเอียดระหว่างจุดสูงสุดเป้าหมายและส่วนประกอบที่อยู่ติดกันในโซลูชันอ้างอิงและโซลูชันการทดสอบมากกว่า 1.5 และความจําเพาะนั้นดี และโครมาโตแกรมแสดงในรูปที่ 2

2.2.2 การตรวจสอบความสัมพันธ์เชิงเส้น

วาดสารละลายอ้างอิงแบบผสม 0.5, 1, 2.5, 5 และ 10 มล. อย่างแม่นยําภายใต้ "1.2.1.2" ใส่ในขวดปริมาตร 10 มล. ทําขึ้นเพื่อทําเครื่องหมายด้วยเมทานอล 50% และเขย่าให้เข้ากันเพื่อให้ได้ชุดส่วนผสมที่มีความเข้มข้น

รวมสารละลายอ้างอิง ปิเปต 10 μL อย่างถูกต้องตามลําดับ และฉีดตัวอย่างตามเงื่อนไขโครมาโตกราฟีภายใต้ "1.2.2.1" เพื่อวัดพื้นที่สูงสุด เพื่อ

นั่งในแนวตั้งวาดเส้นโค้งการถดถอยและคํานวณการถดถอยเชิงเส้น ผลการวิจัยพบว่า r ทั้งหมดมากกว่า 0.9993 และฟีเนทิลไกลโคไซด์ทั้งสี่แสดงความสัมพันธ์เชิงเส้นที่ดีกับพื้นที่สูงสุดภายในช่วงเชิงเส้นที่สอดคล้องกันดังแสดงในตารางที่ 1

รูปที่ 2 สเปกตรัม HPLC ของสารอ้างอิงและสารตัวอย่าง

1. เอจินาโคไซด์;2.  ทูบูโลไซด์ A;3. แอคทีโอไซด์;4. ไอโซคเตโอไซด์

โน้ต:

A. โครมาโตแกรมของสารอ้างอิงผสม

B. โครมาโตแกรมของชิ้นเอกสาร Cistanche;

C. โครมาโตแกรมของสารสกัดจาก Cistanche;

D. โครมาโตแกรมของผลิตภัณฑ์เสริมอาหารเพื่อสุขภาพ

ตารางที่ 1 ผลลัพธ์ของความสัมพันธ์เชิงเส้นของส่วนประกอบ 4 รายการ

2.2.3 การทดสอบความแม่นยํา

ปิเปต 10 μL ของสารละลายอ้างอิงแบบผสมอย่างแม่นยําภายใต้ "1.2.1.2" ฉีดและวัด 6 ครั้งอย่างต่อเนื่องตามเงื่อนไขโครมาโตกราฟีภายใต้ "1.2.2.1" บันทึกพื้นที่สูงสุดและคํานวณ RSD ผลลัพธ์ RSD ของพื้นที่สูงสุดของ echinacoside, tuberosin A, verbascoside และ isoverascoside อยู่ที่ 0.79%, 1.24%, 0.59% และ 0.42% ตามลําดับ (n=6) ซึ่งบ่งชี้ว่าความแม่นยําของเครื่องมือนั้นดี

2.2.4 การทดสอบความสามารถในการทําซ้ํา

ใช้ผงทดสอบชุดเดียวกัน 6 ชุด (S3, S6, S8) ชั่งน้ําหนักอย่างถูกต้องเตรียมสารละลายทดสอบตาม "1.2.1.3" วัดตามเงื่อนไขโครมาโตกราฟีภายใต้ "1.2.2.1" และบันทึกพื้นที่ Peak เนื้อหาของส่วนประกอบทั้ง 4 และ RSDs จะถูกคํานวณ ผลลัพธ์จะแสดงในตารางที่ 2 ซึ่งบ่งชี้ว่าวิธีการนี้มีความสามารถในการทําซ้ําที่ดี

ตารางที่ 2 การทดสอบซ้ําๆ

2.2.5 การทดสอบความเสถียร

วาดสารละลายทดสอบ 10 μL อย่างแม่นยํา (S3, S6, S8) วัดตามเงื่อนไขโครมาโตกราฟีภายใต้ "1.2.2.1" และฉีดตัวอย่างที่ 0, 2, 4, 6, 8, 12 และ 24 ชั่วโมงตามลําดับสําหรับการวัด ผลลัพธ์ RSDs (n=7) ของพื้นที่สูงสุดของ echinacoside, analoside A, verascoside และ isaveraside ในตัวอย่าง (S3) คือ 1.28%, 1.82%, 1.52% และ 1.56% ตามลําดับ RSDs (n=7) ของพื้นที่สูงสุดของส่วนประกอบทั้งสี่ในตัวอย่าง (S8) คือ 1.38%, 1.57%, 1.73% และ 2.49% ตามลําดับ และ RSDs (n=7) ของพื้นที่สูงสุดของส่วนประกอบทั้งสี่ในตัวอย่าง (S8) คือ 1.63%, 0.92%, 1.85% และ 2.24% ซึ่งบ่งชี้ว่าสารละลายทดสอบมีความเสถียรภายใน 24 ชั่วโมง

2.2.6 การทดสอบการกู้คืน

ชั่งน้ําหนักผง 9 ผงของผลิตภัณฑ์ทดสอบ (S3, S6, S8) ที่มีเนื้อหาที่ทราบชั่งน้ําหนักอย่างถูกต้องและเตรียมสารละลายทดสอบตามวิธีการภายใต้ "1.2.2.3" สัดส่วนเพิ่มจํานวนหนึ่งของสารละลายอ้างอิงของส่วนประกอบทั้งสี่ฉีดและวัดตามเงื่อนไขโครมาโตกราฟีภายใต้ "1.2.2.1" บันทึกพื้นที่สูงสุดคํานวณอัตราการกู้คืนและ RSD และผลลัพธ์จะแสดงในตารางที่ 3

ตารางที่ 3 ผลลัพธ์ของอัตราการกู้คืนตัวอย่าง（n=3）

2.2.7 การคํานวณปัจจัยการแก้ไขสัมพัทธ์

ปัจจัยการแก้ไขสัมพัทธ์คํานวณโดยวิธีการแก้ไขแบบหลายจุดตามสูตร fi/s=fi/fs=(Wi×AS)/(WS×Ai) โดยที่ fi/s เป็นปัจจัยการแก้ไขสัมพัทธ์ระหว่างส่วนประกอบที่จะทดสอบและการอ้างอิงภายใน Ai, AS เป็นพื้นที่สูงสุดของส่วนประกอบที่จะวัดและการอ้างอิงภายใน ตามลําดับและ Wi และ WS คือปริมาณของส่วนประกอบที่จะวัดและการอ้างอิงภายในตามลําดับ

ใช้ echinacoside เป็นข้อมูลอ้างอิงภายในใช้สารละลายอ้างอิงแบบผสม 1, 2, 2, 5, 5, 10, 15, 20 และ 30 μL เพื่อแปลงเป็นปริมาตรการฉีดและฉีดและวัดตามเงื่อนไขโครมาโตกราฟีภายใต้ "1.2.2.1" วัดปัจจัยการแก้ไขสัมพัทธ์ (fi/s) ของ ductoside A (B), verbascoside (C), isaveraside (D) และ echinacoside การอ้างอิงภายใน (A) และใช้ค่าเฉลี่ยเป็นการแก้ไขสัมพัทธ์สําหรับการหาปริมาณ RSD ของปัจจัยการแก้ไขสัมพัทธ์ที่คํานวณที่ 7 จุดถูกตรวจสอบ ผลการวิจัยพบว่า RSD ของปัจจัยการแก้ไขสัมพัทธ์ของส่วนประกอบที่ทดสอบทั้งสามและ echinacoside อ้างอิงภายในทั้งหมดน้อยกว่า 3% ดังแสดงในตารางที่ 4

ตารางที่ 4 ปัจจัยการแก้ไขสัมพัทธ์ (fi/s) ของส่วนประกอบ 3 ส่วนและการอ้างอิงภายใน echinacoside

หมายเหตุ: A: Echinacea, B: Tuberoside A, C: Verbasin, D: Isaveraside

2.2.8 ความสามารถในการทําซ้ําของปัจจัยการแก้ไขสัมพัทธ์

โครมาโตกราฟของเหลวประสิทธิภาพสูงสามตัว ได้แก่ Shimadzu LC-20AT, Shimadzu LC-20AB, Agilent1260 และ INERTSILODS-3 (250 มม.×4.6 มม., 5μm), XBridgeC18 ได้รับการตรวจสอบตามลําดับ

ผลกระทบของคอลัมน์โครมาโตกราฟีสามคอลัมน์ (250 มม. ×4.6 มม., 5μm) และ Agilent C18 (250 มม.×4.6 มม., 5μm) ต่อปัจจัยการแก้ไขสัมพัทธ์ และการคํานวณ RSD ผลลัพธ์ทั้งหมดน้อยกว่า 3% ซึ่งบ่งชี้ว่าปัจจัยการแก้ไขสัมพัทธ์ที่กําหนดไว้ในของเหลวประสิทธิภาพสูงที่แตกต่างกัน โครมาโตกราฟเฟสและคอลัมน์โครมาโตกราฟีที่แตกต่างกันสามารถทําซ้ําได้ผลลัพธ์จะแสดงในตารางที่ 5

ตารางที่ 5 ปัจจัยการแก้ไขสัมพัทธ์（fi/s）ของ 3 ส่วนประกอบและ echinacoside โดยเครื่องมือที่แตกต่างกันและคอลัมน์ HPLC ที่แตกต่างกัน

หมายเหตุ: A: Echinacea, B: Tuberoside A, C: Verbasin, D: Isaveraside

2.2.9 การวางตําแหน่งของจุดสูงสุดของโครมาโตกราฟีของส่วนประกอบที่จะวัด

ตามเวลาการเก็บรักษาที่ได้รับภายใต้ "2.2.8" ให้คํานวณค่าการเก็บรักษาสัมพัทธ์ของส่วนประกอบที่จะทดสอบและ echinacoside อ้างอิงภายใน (ri/s= tRi/tRs โดยที่ tRi และ tRs คือเวลาเก็บรักษา) และ RSD ผลลัพธ์ RSD ของค่าการเก็บรักษาสัมพัทธ์ของส่วนประกอบที่จะทดสอบทั้งหมดน้อยกว่า 5% ซึ่งบ่งชี้ว่าค่าการเก็บรักษาสัมพัทธ์มีความเสถียรและสามารถใช้สําหรับตําแหน่งของจุดสูงสุดของโครมาโตกราฟีของส่วนประกอบที่จะทดสอบได้ ผลลัพธ์จะแสดงในตารางที่ 6

2.2.10 การเปรียบเทียบผลการวัดระหว่างวิธีการทดสอบหนึ่งครั้งและวิธีการประเมินหลายวิธีและวิธีการมาตรฐานภายนอก

ชั่งน้ําหนักตัวอย่างแต่ละชุดอย่างแม่นยําเตรียมสารละลายทดสอบตามรายการ "1.2.1.3" วาดสารละลายอ้างอิงแบบผสมและสารละลายทดสอบ 10 μL อย่างแม่นยําและฉีดตัวอย่างตามเงื่อนไขโครมาโตกราฟีภายใต้ "1.2.2.1" บันทึกพื้นที่สูงสุดของส่วนประกอบทั้งสี่และใช้วิธีการมาตรฐานภายนอกและวิธีการประเมินแบบหนึ่งการวัดหลายแบบที่กําหนดไว้ (Wi= fi / s×Ws×Ai / As) เพื่อคํานวณเนื้อหาของส่วนประกอบทั้งสี่ตามลําดับ ผลลัพธ์จะแสดงในตารางที่ 7 ซอฟต์แวร์ SPSS 26.0 ถูกใช้เพื่อวิเคราะห์ผลลัพธ์ของสองวิธีโดยการทดสอบ t, P > 0.05 ซึ่งบ่งชี้ว่าไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสําคัญระหว่างเนื้อหาที่วัดโดยวิธีมาตรฐานภายนอกและเนื้อหาที่คํานวณโดยวิธีการทดสอบครั้งเดียวการประเมินหลายวิธีซึ่งบ่งชี้ว่าสามารถใช้วิธีการวัดครั้งเดียวและการประเมินหลายวิธีสําหรับชิ้นยาต้ม Cistanche deserticola , การวิจัยการควบคุมคุณภาพของสารออกฤทธิ์ในสารสกัดและผลิตภัณฑ์เพื่อสุขภาพ

ตารางที่ 6 ค่าการเก็บรักษาแบบสัมพัทธ์（rฉัน/วินาที）ของ 3 ส่วนประกอบและ echinacoside โดยเครื่องมือที่แตกต่างกันและคอลัมน์ HPLC ที่แตกต่างกัน

หมายเหตุ: A: Echinacea, B: Tuberoside A, C: Verbasin, D: Isaveraside

3 บทสรุปของการเลือกวิธีที่ดีที่สุดในการทาน Cistanche

เพื่อปรับปรุงประสิทธิภาพของการระบุและวิธีการระบุตัวตนที่หลากหลายการทดสอบนี้ได้เพิ่มสององค์ประกอบคือ ductoside A และ isaveraside บนพื้นฐานของการทดสอบการระบุตัวตนภายใต้รายการของ Cistanche deserticola ในตํารับยาจีนรุ่นปี 2020 เงื่อนไขการพัฒนาของตํารับยาถูกนํามาใช้: เมทานอล - กรดอะซิติกน้ําแข็ง - น้ํา = 2:1:7 พบว่าระดับการแยกของ echinacoside และ tuberoside A ไม่สามารถตอบสนองความต้องการได้และการทดสอบการคัดกรองระยะนิ่งและตัวแทนที่กําลังพัฒนาได้ดําเนินการตามลําดับ

ใช้แผ่นฟิล์มโพลีเอไมด์, ซิลิกาเจล G แผ่นบางชั้น, ซิลิกาเจล H แผ่นบางชั้นเป็นเฟสนิ่ง, อะซิโตน-เมทานอล-น้ําแข็ง-กรดอะซิติก-น้ํา=1:2:1:7, เมทานอล-น้ําแข็งอะซิติกกรด-น้ํา=4:1: 5. เอทิลอะซิเตท:เอทานอล=6:4, n-butanol-ethanol-water=4:1:5, ไตรคลอโรมีเทน-เมทานอล-น้ําแข็ง-กรดอะซิติก-น้ํา=1.5:2:1:7 ผลลัพธ์การใช้แผ่นฟิล์มโพลีเอไมด์เป็นเฟสที่อยู่กับที่, คลอโรฟอร์ม-เมทานอล-กรดอะซิติก-น้ํา=1.5∶2∶1∶7, จุดที่ชัดเจน, การแยกดี, ค่า Rf อยู่ในระดับปานกลาง, และการทําซ้ําได้ดี. ลักษณะส่วนผสมที่รวดเร็วและแม่นยํา วิธีการประเมินแบบการวัดผลแบบหนึ่งผลแบบหลายหน่วยเป็นวิธีการควบคุมคุณภาพแบบซิงโครนัสแบบซิงโครนัสแบบหลายดัชนีซึ่งส่วนใหญ่ใช้ในการกําหนดส่วนประกอบโครงสร้างที่คล้ายกันในการแพทย์แผนจีนเดียว ส่วนประกอบทั้งสี่ที่วัดได้ในการทดลองนี้มีโครงสร้างที่คล้ายกันและความยาวคลื่นการดูดซับสูงสุดที่คล้ายคลึงกัน (Echinacea glycosides ที่ 330nm, tuberoside A331nm, verbascoside 330nm, isorrascoside 327nm) ดังนั้นวิธีนี้จึงสามารถใช้ได้ การใช้ echinacoside เป็นข้อมูลอ้างอิงภายในปัจจัยการสอบเทียบที่จัดตั้งขึ้นมีความสามารถในการทําซ้ําที่ดีในระบบโครมาโตกราฟีและคอลัมน์โครมาโตกราฟีที่แตกต่างกันและไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสําคัญระหว่างผลลัพธ์ของเนื้อหาของวิธีการประเมินแบบหนึ่งการวัดหลายแบบและวิธีการมาตรฐานภายนอกซึ่งบ่งชี้ว่าวิธีการนั้นเป็นไปได้และแม่นยําและสามารถใช้ในสารอ้างอิงได้ ถ้ามันยากที่จะได้รับหรือมีราคาแพงก็สามารถบรรลุตัวชี้วัดหลายอย่างของ Cistanche deserticola

ส่วนผสมจะถูกกําหนดพร้อมกัน

ตารางที่ 7 เนื้อหาของแต่ละองค์ประกอบ（%，n=3）

โดยสรุปการจัดตั้งวิธีการระบุฟีนิลธานอยด์ไกลโคไซด์สี่แห่งใน Cistanche โดยทีแอลซีและการกําหนดเนื้อหาในการทดสอบเดียวที่มีการประเมินหลายครั้งนั้นถูกต้องเชื่อถือได้ง่ายรวดเร็วและเป็นไปได้สูง มันมีความสําคัญทางวิทยาศาสตร์ในทางปฏิบัติและคุณค่าการใช้งาน