ภาพสะท้อนเกี่ยวกับคุณภาพทางจุลชีววิทยาของน้ำฟอกไตในบราซิล Ⅲ

กฎหมายปัจจุบันเกี่ยวกับน้ำฟอกไตในบราซิล

เกณฑ์ที่ใช้สำหรับการประเมินการฟอกไตน้ำเกิดขึ้นจากการตระหนักรู้ของเจ้าหน้าที่ผู้มีอำนาจเกี่ยวกับความเสี่ยงที่อาจเกิดขึ้นกับผู้ป่วยที่เข้ารับการรักษา (Faria, 2011)

CISTANCHE ใช้เวลานานเท่าใดในการทำงาน?

มติของคณะกรรมการวิทยาลัย (RDC) ฉบับที่ 33/2008 กำหนดให้มีกฎระเบียบทางเทคนิคสำหรับการวางแผน การเขียนโปรแกรม การทำรายละเอียด การประเมิน และการอนุมัติระบบบำบัดน้ำและการกระจายน้ำสำหรับการฟอกไตในหน่วยงานกำกับดูแลด้านสุขภาพของบราซิล (Anvisa, 2008) .

RDC เลขที่ 11/2014 กำหนดข้อกำหนดแนวปฏิบัติที่ดีสำหรับบริการฟอกไตโดยใช้กับบริการฟอกไตทั้งหมด ไม่ว่าจะเป็นภาครัฐ เอกชน การกุศล พลเรือน หรือทหาร รวมถึงผู้ที่ทำกิจกรรมการสอนและการวิจัย นอกจากนี้ยังกำหนดด้วยว่าตัวอย่างสำหรับการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาจะถูกรวบรวมอย่างน้อยเดือนละครั้ง ณ จุดคืนวงจรการกระจายและที่จุดใดจุดหนึ่งในห้องแปรรูป นอกจากนี้ยังกำหนดว่าต้องตรวจสอบคุณภาพทางจุลชีววิทยาของน้ำทุกครั้งที่มีอาการ pyrogenic แบคทีเรียหรือสงสัยว่าติดเชื้อในผู้ป่วยที่ต้องฟอกไต- RDC ฉบับที่ 11/2014 นี้กำหนดมาตรฐานคุณภาพน้ำสำหรับการฟอกไต โดยมีการเน้นคุณลักษณะทางชีวภาพและจุลชีววิทยาไว้ในตารางที่ 1 (Anvisa, 2014)

ตารางที่ 1 - มาตรฐานคุณภาพทางชีวภาพและจุลชีววิทยาสำหรับน้ำฟอกไต

องค์การระหว่างประเทศเพื่อการมาตรฐาน (ISO) ในมาตรฐานหมายเลข 13959:2014 กำหนดให้การฟอกเลือดน้ำและการบำบัดที่เกี่ยวข้อง โดยระบุเป็นมาตรฐานคุณภาพ จำนวนจุลินทรีย์ทั้งหมดน้อยกว่า 100 CFU / มล. หรือน้อยกว่า หากเป็นเช่นนั้น ตามที่บัญญัติไว้ในกฎหมายท้องถิ่น นอกจากนี้ยังระบุระดับของเอนโดทอกซินต่ำกว่า 0.25UE / มล. หรือรองลงมาเท่าๆ กัน หากเป็นเช่นนั้น ตามที่กฎหมายท้องถิ่นกำหนด (องค์การระหว่างประเทศเพื่อการมาตรฐาน, 2014)

วิธีการทางจุลชีววิทยาแบบธรรมดาและทางเลือก

การแจงนับแบคทีเรียเฮเทอโรโทรฟิค

ถือได้ว่าเป็นเครื่องหมายเริ่มแรกของการทดสอบทางจุลชีววิทยาเมื่อกลางปี ​​ค.ศ. 1610 และในปี ค.ศ. 1665 กาลิเลโอ กาลิเลอี และแวน ลีเวนฮุก ก็ได้ประดิษฐ์กล้องจุลทรรศน์ขึ้นตามลำดับ แม้ว่าลีเวนฮุกอาจไม่ใช่คนแรกที่สังเกตแบคทีเรียและโปรโตซัว แต่เขาเป็นคนแรกที่รายงานด้วยภาพวาดและคำอธิบายของการสังเกตของเขา ในบรรดาสิ่งเหล่านี้ ในปี 1675 เขาได้บรรยายถึงสิ่งมีชีวิตที่มีอยู่ในน้ำ (Dias, 2018; Pelczar, Reid, Chan, 1980)

อย่างไรก็ตาม นักวิทยาศาสตร์ชาวเยอรมันได้สังเกตการเติบโตของอาณานิคมในมันฝรั่งต้ม ซึ่งมีลักษณะเฉพาะของการเพาะเลี้ยงจุลินทรีย์และการพัฒนาอาหารเลี้ยงเชื้อ โคช์สเป็นผู้ริเริ่มการเพาะเลี้ยงจุลินทรีย์ในตัวกลางที่เป็นของแข็ง เขาตั้งชื่อวุ้นว่าเป็นสารที่สกัดจากสาหร่ายที่สามารถแข็งตัวได้ที่อุณหภูมิห้อง Richard Petri พัฒนาแผ่นกระจกสำหรับวางอาหารเลี้ยงเชื้อ (Jay, 2001; Pelczar, Reid, Chan, 1996)

หลังจาก 200 ปีของการค้นพบสิ่งมีชีวิตในน้ำโดยลีเวนฮุก, หลุยส์ ปาสเตอร์, โรเบิร์ต คอช, ธีโอบาลด์ สมิธ และนักวิทยาศาสตร์อีกสองสามคนที่เกี่ยวข้องกับสิ่งมีชีวิตขนาดเล็กจิ๋วที่มีโรคต่างๆ โจเซฟ ลิสเตอร์ในปี พ.ศ. 2421 ได้รับการเพาะเลี้ยงแบคทีเรียบริสุทธิ์ครั้งแรกโดยใช้การเจือจางแบบอนุกรมในตัวกลางที่เป็นของเหลว (Pelczar, Reid, Chan, 1980)

ในช่วงปลายศตวรรษที่ 19 มีการใช้เทคนิคการเพาะปลูกเพื่อวิเคราะห์คุณภาพน้ำดื่ม สำหรับการวิเคราะห์เชื้อ E. coli และโคลิฟอร์มอื่นๆ การเพาะเลี้ยงน้ำซุปโดยใช้ตัวเลขที่เป็นไปได้มากที่สุด (MPN) กลายเป็นวิธีการหลัก เช่นเดียวกับอาหารเลี้ยงเชื้อวุ้นหรืออาหารแข็งของ Koch สำหรับการนับทั้งหมด ซึ่งทั้งสองอย่างนี้ได้ผ่านการดัดแปลงเล็กน้อย ในปี 1950 มีการใช้ตัวกรองเมมเบรนสำหรับการแจงนับแบคทีเรีย (Pelczar, Reid, Chan, 1996; Sartory, Watkins, 1999)

MNP นั้นเรียบง่ายแต่ต้องใช้เวลาในการวิเคราะห์นานกว่า (สูงสุด 5 วัน) ในขณะที่ผลลัพธ์โดยสันนิษฐานในการกรองเมมเบรนจะเกิดขึ้นหลังจากระยะฟักตัว 3-5 วัน (Anvisa, 2019) สำหรับตัวกลางที่เป็นของแข็ง หนึ่งในตัวเลือกประกอบด้วยวุ้นนับคราบจุลินทรีย์ (PCA) ตัวกลางที่มีสารอาหารต่ำ และไม่เหมาะสำหรับการฟื้นฟูแบคทีเรียที่ถูกตรึงอยู่ในน้ำอยู่แล้ว อาจใช้อาหารเลี้ยงเชื้อที่มีคุณค่าทางโภชนาการต่ำได้เช่นกัน เนื่องจากสามารถฟื้นฟูแบคทีเรียได้จำนวนมาก แต่ไม่ใช่ประชากรที่มีชีวิตทั้งหมด (Sartory, Watkins, 1999) 2A Agar (R2A) ของ Reasoner คือตัวอย่างของอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีคุณค่าทางโภชนาการต่ำ และเป็นที่แนะนำมากที่สุดสำหรับการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาของน้ำ (USP, 2017)

ปัจจุบันมีวิธีการทางจุลชีววิทยาทั่วไปหลายวิธี เช่น วิธีเพลท การกรองเมมเบรน และการใช้หลายหลอดโดยกระบวนการ MNP (Anvisa, 2019) แม้ว่าพวกเขาจะเรียบง่าย มีประสิทธิภาพ และประหยัด แต่ก็มีข้อจำกัดบางประการ: การคัดเลือกอาหารเลี้ยงเชื้อต่ำ ความแปรปรวนของการตอบสนองทางชีวภาพ และผลลัพธ์ล่าช้าในการตรวจหาจุลินทรีย์ ทำให้เสียเวลาในการกำหนดมาตรการป้องกันเพื่อลดการบาดเจ็บของผู้ป่วย (Anvisa , 2562)

ในความพยายามที่จะลดข้อจำกัดเหล่านี้ จึงได้มีการพัฒนาวิธีการทางจุลชีววิทยาทางเลือกเพื่อให้การทดสอบมีคุณภาพในระดับที่สูงขึ้น มีความไวมากขึ้น และให้ผลลัพธ์เร็วขึ้น ช่วยให้สามารถดำเนินการแก้ไขได้ตั้งแต่เนิ่นๆ (Anvisa, 2019)

แบคทีเรียเอนโดท็อกซิน

Theodor Billroth ในปี 1865 ใช้คำว่า pyrogen เพื่อหมายถึงสารที่ทำให้เกิดไข้ (Kikkert, Groot, Aarden, 2008; Medical Staff Conference, 1978) การศึกษาของ Richard Pfeiffer เกี่ยวกับอหิวาตกโรคในปี พ.ศ. 2435 ซึ่งได้รับการสนับสนุนจาก Robert Koch อุทิศให้เขาเป็นบิดาของเอนโดทอกซินสำหรับการค้นพบของเขา (Rietschel, Cavaillon, 2003)

ในปี ค.ศ. 1942 ได้มีการเพิ่มการทดสอบไพโรเจนโดยวิธี in vivo ใน American Pharmacopoeia ในฉบับที่ 12 (Mc Closky et al., 1943) นับตั้งแต่รวมการทดสอบนี้ มีการใช้กันอย่างแพร่หลายในการประเมินการปนเปื้อนของไพโรเจนในยาทางหลอดเลือดดำ (Kikkert, Groot, Aarden, 2008) อย่างไรก็ตาม เฉพาะในปี 1976 เท่านั้นที่การทดสอบนี้รวมอยู่ในเภสัชตำรับของบราซิล (Navega et al., 2015)

การทดสอบขึ้นอยู่กับการวัดการตอบสนองไข้ของกระต่ายหลังจากฉีดสารละลายทดสอบทางหลอดเลือดดำ และใช้การตีความผลลัพธ์เพื่อระบุลักษณะการควบคุมทางชีวภาพ (Anvisa, 2019) อย่างไรก็ตาม มีข้อจำกัดบางประการ เช่น การจัดการสัตว์ ความแปรปรวนทางชีวภาพ และประเด็นด้านจริยธรรม ลักษณะเหล่านี้สนับสนุนให้นักวิจัยพัฒนาวิธีการทางเลือกสำหรับการทดสอบไพโรเจนในสิ่งมีชีวิต (Kikkert, Groot, Aarden, 2008) ในการวิจัยของพวกเขา Levin และ Bang (1964) อ้างโดย Kikkert, Groot และ Aarden (2008) สังเกตว่า Escherichia coli endotoxic ทำให้เกิดการแข็งตัวของเลือดในเม็ดเลือดแดงของปู Limulus polyphemus

การทดสอบ Limulus Amebocyte Lysate (LAL) ถูกเพิ่มเข้าไปใน American Pharmacopoeia ในปี 1980 ในขณะที่การทดสอบถูกรวมอยู่ในเภสัชตำรับของบราซิลในปี 1996 เท่านั้น (Farmacopéia, 1996; USP, 1980) การทดสอบ LAL มีสองประเภท ประเภทแรกคือการทดสอบการแข็งตัวของเลือดแบบกึ่งปริมาณ ซึ่งขึ้นอยู่กับการก่อตัวของเจล วิธีที่สองคือการวัดแสงซึ่งเป็นการทดสอบเชิงปริมาณ ซึ่งสามารถแบ่งออกเป็นวิธีโครโมจีนิกตามการพัฒนาของสี และวิธีการวัดความขุ่นซึ่งขึ้นอยู่กับการพัฒนาของความขุ่น (Anvisa, 2019)

อย่างไรก็ตาม การทดสอบ LAL มีข้อจำกัดบางประการ เช่น ความแปรปรวนของเทคนิคการวิเคราะห์ และข้อผิดพลาดที่เกิดขึ้นกับเครื่องมือที่ใช้ ซึ่งทำให้คุณภาพการวิเคราะห์ลดลง ในบริบทนี้ ควรใช้วิธีทางเลือกอื่นที่ขจัดข้อจำกัดเหล่านี้ (Anvisa, 2019; Charles River, 2017 ; เลมกรูเบอร์ และคณะ 2011)

วิธีทางจุลชีววิทยาทางเลือก

วิธีการทางจุลชีววิทยาทางเลือกเป็นที่ต้องการเมื่อพยายามเอาชนะข้อจำกัดของวิธีการทั่วไป ในบทสรุปที่แตกต่างกัน วิธีการทางเลือกจะถูกจัดประเภทเป็นเชิงคุณภาพ เชิงปริมาณ หรือการระบุตัวตน (Anvisa, 2019; PDA, 2013; USP, 2017)

เภสัชตำรับของบราซิลเน้นวิธีการหลัก: ตามความมีชีวิต, ตามการเติบโต และตามส่วนประกอบของเซลล์ (Anvisa, 2019) วิธีการทางจุลชีววิทยาทางเลือกประเภทหลักและเทคโนโลยีตามลำดับได้อธิบายไว้ในตารางที่ 2

ตารางที่ 2 - วิธีการทางจุลชีววิทยาทางเลือกประเภทหลักและเทคโนโลยีที่เกี่ยวข้อง

แม้ว่าการใช้วิธีทางเลือกที่รวดเร็วจะมีความสำคัญไม่เพียงแต่ให้ความเป็นไปได้ในการดำเนินการแก้ไขแบบเรียลไทม์เท่านั้น แต่ยังรวมถึงความปลอดภัยของผู้ป่วยที่มากขึ้นด้วย มีการศึกษาเพียงไม่กี่ชิ้นที่ดำเนินการเพื่อแสดงให้เห็นถึงความสามารถในการนำไปประยุกต์ใช้ในด้านการวิเคราะห์น้ำที่ผ่านการฟอกไต (Anvisa, 2019) . รีเพิล และคณะ (2011) ประเมินความสามารถในการนำไปใช้ของโซลิดเฟสไซโตเมทรี ซึ่งเปิดเผยโดยกล้องจุลทรรศน์เอพิฟลูออเรสเซนซ์ และสังเกตพบความสัมพันธ์สูงระหว่างวิธีการทั่วไปกับวิธีการทางเลือก

การประยุกต์ใช้ไซโตเมทรีเฟสโซลิดในการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาของน้ำฟอกไตมีแนวโน้มที่ดี เนื่องจากนอกจากจะเชื่อถือได้แล้ว ยังเป็นวิธีที่รวดเร็ว เนื่องจากใช้เวลาในการวิเคราะห์ประมาณสามชั่วโมง และแนะนำให้ใช้ในการตรวจสอบไม่เพียงแต่คุณภาพน้ำเท่านั้น แต่ยังรวมถึงการฟอกไตด้วย ของไหล (Canaud, 2011; Riepl et al., 2011)

ไซโตเมทรีนอกจากจะเป็นวิธีการที่รวดเร็วแล้ว ยังทำให้สามารถตรวจจับจุลินทรีย์ที่ไม่สามารถเพาะเลี้ยงได้อีกด้วย จุลินทรีย์เหล่านี้มีหน้าที่รับผิดชอบในความแตกต่างของผลลัพธ์ระหว่างการทดลองในห้องปฏิบัติการกับจุลินทรีย์ในน้ำจริง พวกมันไม่สามารถแบ่งตัวและก่อตัวเป็นอาณานิคมได้ แม้ว่าพวกมันจะมีกลไกการเผาผลาญและยังมีชีวิตอยู่ก็ตาม แบคทีเรียจำนวนมากโดยเฉพาะแกรมลบมีความสามารถนี้ สายพันธุ์ Mycobacterium สามารถเน้นได้ว่าเป็น VNC ที่มีศักยภาพ (Anvisa, 2019; Joux, Lebaron, 2000; Díaz et al., 2010; Sandle, 2015)

เทคนิคที่ใช้ส่วนประกอบของเซลล์ เช่น การวิเคราะห์ 16S rDNA PCR ก็เป็นเทคนิคที่น่าหวังเช่นกัน เนื่องจากไม่ขึ้นอยู่กับการเพาะเลี้ยง ดังนั้นจึงสามารถตรวจจับจุลินทรีย์ที่มีชีวิตที่ไม่สามารถเพาะปลูกได้ (Anvisa, 2019; Gomila et al., 2010; Gomila, Ramirez, Lalucat, 2007 ).