การระบุส่วนประกอบที่มีประสิทธิภาพหกอย่างพร้อมกันอย่างรวดเร็วใน Cistanche Tubulosa ด้วยอินฟราเรดสเปกโตรสโคปี

ติดต่อ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 อีเมล:audrey.hu@wecistanche.com

Xinhong Wang, Xiaoguang Wang และ Yuhai Guo

เชิงนามธรรม:

การกำหนดปริมาณของส่วนประกอบที่มีประสิทธิภาพหลายอย่างในโรงงานหนึ่งๆ มักจะต้องใช้ผลิตภัณฑ์จากธรรมชาติแท้ๆ เป็นจำนวนมาก ในการศึกษานี้ เราเสนอวิธีการที่รวดเร็วและไม่ทำลายสำหรับการกำหนดเอไคนาโคไซด์ เวอร์บาสโคไซด์ แมนนิทอล ซูโครส กลูโคส และฟรุกโตสพร้อมกันในCistanche tubulosaโดยใกล้อินฟราเรดสเปกโทรสโกปี (NIRS) สเปกโทรสโกปีสะท้อนแสงแบบกระจายใกล้อินฟราเรด (DRS) และโครมาโตกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง (HPLC) ถูกดำเนินการบนแบทช์ 116 ของตัวอย่าง Cistanche tubulosa ข้อมูล DRS ถูกประมวลผลโดยใช้วิธีการแก้ไขความหลากหลายปกติมาตรฐาน (SNV) และการแก้ไขการกระจายแบบทวีคูณ (MSC) ใช้การถดถอยกำลังสองน้อยที่สุดบางส่วน (PLSR) เพื่อสร้างแบบจำลองการสอบเทียบสำหรับส่วนประกอบที่น่าสนใจใน Cistanche tubulosa แบบจำลองทั้งหมดได้รับการประเมินโดยการคำนวณค่าความคลาดเคลื่อนกำลังสองเฉลี่ยรากของการสอบเทียบ (RMSEC) ค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ของการสอบเทียบ (r) ค่า r ของแบบจำลองการสอบเทียบทั้ง 6 รุ่นถูกกำหนดให้มากกว่า 0.94 แสดงว่าแต่ละรุ่นมีความน่าเชื่อถือ ดังนั้น แบบจำลอง NIR เชิงปริมาณที่รายงานในการศึกษานี้จึงมีคุณสมบัติเหมาะสมในการหาปริมาณเนื้อหาของส่วนประกอบทางยาหกชนิดในCistanche tubulosa.

คำสำคัญ: Cistanche tubulosa; โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง สเปกโทรสโกปีอินฟราเรดใกล้; สี่เหลี่ยมจัตุรัสน้อยที่สุดบางส่วน

บทนำ

Cistanche(Hoffmg. Et Link) เป็นไม้ยืนต้นในสกุล Orobanchaceae สปีชีส์ส่วนใหญ่ที่อยู่ในสกุล Cistanche ถูกใช้เป็นพืชสมุนไพรมานานนับพันปีในประเทศจีน มีชื่อเสียงในฐานะยาชูกำลังที่เหนือกว่า และได้ชื่อว่าเป็น "โสมแห่งทะเลทราย" [1,2]Cistanche tubulosaเป็นพยาธิบังคับของรากไม้ยืนต้น Tamarix Chinensis ได้รับการบันทึกไว้ในตำรับยาจีนว่าเป็นแหล่งที่มาของ Cistanches Herba (ชื่อภาษาจีน: Roucongrong) จากฉบับปี 2548 [3] การวิจัยทางเภสัชวิทยาสมัยใหม่เกี่ยวกับสายพันธุ์ Cistanche เริ่มขึ้นในทศวรรษ 1980 [4] การตรวจสอบทางเภสัชวิทยาพบว่าสารสกัดจากพืช Cistanche มีกิจกรรมที่หลากหลาย เช่น รักษาโรคไตและอาการท้องผูกในวัยชรา ความสามารถในการเรียนรู้และจดจำ ต่อต้านโรคอัลไซเมอร์ เสริมสร้างภูมิคุ้มกัน ต่อต้านวัย ต่อต้านความเหนื่อยล้า เป็นต้น . [1,5–7]. ในช่วงสามทศวรรษที่ผ่านมา การศึกษาทางเภสัชวิทยาที่ครอบคลุมและเป็นระบบได้ถูกรวมเข้ากับการตรวจสอบไฟโตเคมิคอลเพื่อให้ความกระจ่างถึงพื้นฐานด้านวัสดุของผลประโยชน์ของรากของพืช Cistanche การสำรวจเหล่านี้บ่งชี้ว่า phenylethanoid glycosides (PhGs) เป็นส่วนประกอบหลักที่มีประสิทธิภาพในพืช Cistanche ที่มีบทบาทสำคัญในการรักษาภาวะไตบกพร่อง ความอ่อนแอ [8] การต่อต้านวัย [9] และโรคอัลไซเมอร์ [10] เนื้อหาของสอง PhGs (echinacoside และ verbascoside) เป็นสิ่งจำเป็นในตำรับยาจีน ในขณะเดียวกัน คาร์โบไฮเดรต เช่น แมนนิทอล ซูโครส กลูโคส และฟรุกโตสในพืช Cistanche มีหน้าที่เป็นยาระบาย และกลุ่มคาร์โบไฮเดรตของพืช Cistanche ถูกนำมาใช้ในการรักษาอาการท้องผูก [11]

ทรัพยากรป่าของCistanche tubulosaส่วนใหญ่กระจายอยู่ในพื้นที่โดยรอบทะเลทราย Taklamakan ในเขตปกครองตนเองซินเจียงตอนใต้ในประเทศจีน คล้ายกับสายพันธุ์อื่นๆ อีกหลายชนิดที่ใช้เป็นยาแผนโบราณของจีน (TCMs) C. tubulosa มีคุณค่าทางเศรษฐกิจอย่างมากและเกือบจะสูญพันธุ์ในถิ่นที่อยู่ตามธรรมชาติของมันเนื่องจากมีการเก็บสะสมมากเกินไป การเพาะปลูก C. tubulosa เริ่มขึ้นใน 1990s ในประเทศจีนเพื่อให้แน่ใจว่ามีการจัดหาวัตถุดิบสำหรับ Cistanches Herba รวมทั้งปกป้องทรัพยากรพืชป่า ณ ปี 2017 C. tubulosa ที่เพาะปลูกเกือบ 13,000 เฮคแตร์มีอยู่ในจังหวัด Hotan ในซินเจียง [12,13] ความก้าวหน้าทางเทคโนโลยีการปลูกจำเป็นต้องขยายการเพาะปลูกรวมทั้งปรับปรุงคุณภาพของซิสแทนเช่ ทูบูโลซ่า

จุดประสงค์หลักของการเพาะปลูกCistanche tubulosaคือการผลิต Cistanches Herba ซึ่งอุดมไปด้วยส่วนประกอบที่มีประสิทธิภาพเหล่านั้น อย่างไรก็ตาม เนื้อหาของส่วนประกอบที่มีประสิทธิภาพใน Cistanches Herba เช่น PhGs และ oligosaccharides อาจได้รับผลกระทบอย่างมากจากหลายปัจจัยในระหว่างการผลิต [12,13] ควรมีการสำรวจระบบตรวจจับคุณภาพของ C. tubulosa แบบเรียลไทม์ ดังนั้นจึงจำเป็นต้องพัฒนาวิธีปริมาณงานสูงเพื่อเติมเต็มความต้องการในการวิเคราะห์ตัวอย่างจำนวนมากภายในระยะเวลาอันสั้น ตามเนื้อผ้า การกำหนดองค์ประกอบที่มีประสิทธิผลหลักเหล่านั้น เช่น PhGs และคาร์โบไฮเดรต ใน C. tubulosa มักจะทำได้โดยใช้โครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูง (HPLC) [14,15] แม้ว่าจะมีความถูกต้องและเชื่อถือได้ แต่ก็ใช้เวลานานและลำบากในการรวบรวมและประมวลผลข้อมูล นอกจากนี้ ยังต้องใช้เวลาและความพยายามอย่างมากในการเตรียมตัวอย่างที่มักจะเกี่ยวข้องกับการทำให้เป็นผง การสกัด และการกรองของการสอบวิเคราะห์ HPLC ดังนั้นจึงจำเป็นต้องมีหลักการที่ชัดเจนและเครื่องมือที่ใช้งานง่ายเพื่อให้ได้ข้อมูลจำนวนมาก โชคดีที่อินฟราเรดสเปกโทรสโกปี (NIRS) ถูกใช้อย่างกว้างขวางในการประเมินผลิตภัณฑ์ทางการเกษตร [16] อาหาร [17] ตัวอย่างทางการแพทย์ [18] และผลิตภัณฑ์ยา [19] เพราะมันรวดเร็วและไม่ทำลายล้าง ดังนั้น NIRS สามารถตรงกับข้อกำหนดสำหรับการวัด TCM อย่างมีประสิทธิภาพ และไม่น่าแปลกใจเลยที่ NIRS ถูกนำไปใช้กับการระบุเชิงคุณภาพ [20,21] และการหาปริมาณของสารประกอบ [22] ใน TCM

ในการศึกษานี้ เนื้อหาขององค์ประกอบที่มีประสิทธิภาพ 6 ชนิด ได้แก่ อิไคนาโคไซด์ เวอร์บาสโคไซด์ แมนนิทอล ซูโครส กลูโคส และฟรุกโตส ในกลุ่มตัวอย่าง C. tubulosa 116 ชุดที่เก็บรวบรวมจากจังหวัดโฮตันในซินเจียงระหว่างปี 2556-2558 ถูกกำหนดโดย HPLC ก่อน หลังจากนั้น แบบจำลองการสอบเทียบของส่วนประกอบทั้งหกนี้ถูกสร้างขึ้นด้วยวิธีถดถอยกำลังสองน้อยที่สุด (PLSR) บางส่วน จากนั้น โมเดลเหล่านี้ได้รับการตรวจสอบด้วยค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์และข้อผิดพลาดในการทำนายในชุดการสอบเทียบ ผลการวิจัยพบว่าวิธีการที่พัฒนาขึ้นนี้สามารถใช้เป็นวิธีการที่เชื่อถือได้สำหรับการวิเคราะห์เชิงปริมาณของ C. tubulosa

ผลลัพธ์

การวิเคราะห์ HPLC

เนื้อหาของอิไคนาโคไซด์และเวอร์บาสโคไซด์ถูกกำหนดหาโดยวิธี HPLC-UV ที่กำหนดไว้อย่างดีในวรรณคดี [3,23] และคาร์โบไฮเดรตสี่ชนิด (แมนนิทอล ซูโครส กลูโคส และฟรุกโตส) ถูกกำหนดหาโดยวิธี HPLC-ELSD ที่กำหนดไว้อย่างดีใน วรรณกรรม [24] สำหรับตัวอย่างทั้งหมด 116 ตัวอย่าง วิธีการเตรียมตัวอย่างและการกำหนดตัวอย่างได้อธิบายไว้ในส่วนที่ 3.1 และ 3.3 รูปที่ 1 แสดงโครมาโตแกรมลักษณะเฉพาะของมาตรฐานผสม จะเห็นได้ว่าองค์ประกอบที่มีประสิทธิภาพทั้งหกถูกแยกจากกัน ดังนั้นจึงสามารถหาปริมาณได้ วิธี HPLC ถูกตรวจสอบความถูกต้องก่อนการทดสอบตัวอย่าง ผลลัพธ์หลักของวิธี HPLC แสดงอยู่ในตารางที่ 1 ความสัมพันธ์เชิงเส้นที่น่าพอใจ (r=0.9998) และการฟื้นตัว (98.5 เปอร์เซ็นต์) ของวิธีการกำหนดเอไคนาโคไซด์แสดงในผลลัพธ์ ผลลัพธ์เหมือนกับผลลัพธ์ทั้งหมด ห้าองค์ประกอบ จึงสามารถกำหนดเนื้อหาขององค์ประกอบที่มีประสิทธิภาพทั้งหกได้อย่างถูกต้อง ช่วงเนื้อหาที่กำหนดทั้งหมดได้สรุปไว้ในตารางที่ 1

การวิเคราะห์ NIRS

รูปที่ 2 แสดงสเปกตรัม NIR (4000–10,000 cm-1 ) ของตัวอย่าง C. tubulosa ยอดการดูดกลืนที่มีนัยสำคัญปรากฏขึ้นจาก 4000 ซม.-1 ถึง 7500 ซม.-1 ในทุกตัวอย่าง ในขณะที่ความผันผวนเล็กน้อยปรากฏขึ้นจาก 7500 ซม.-1 ถึง 10,000 ซม.-1 การเบี่ยงเบนพื้นฐานของสเปกตรัม NIR เกิดขึ้นเนื่องจากตัวอย่างได้รับผลกระทบจากปัจจัยต่างๆ เช่น ขนาดอนุภาคและสี (รูปที่ 2A) การปรับสภาพทางคณิตศาสตร์ของสเปกตรัมถูกนำมาใช้เพื่อลดอิทธิพลของข้อมูลที่ไม่จำเป็นในระดับหนึ่ง การปรับสภาพทางคณิตศาสตร์รวมถึงการมาแรก (ที่มาที่ 1) ที่มาที่สอง (ที่มาที่ 2 ) ความหลากหลายปกติมาตรฐาน (SNV) และการแก้ไขการกระจายแบบทวีคูณ (MSC) รูปที่ 2B แสดงที่มาที่ 2 ของสเปกตรัม NIR ของ C. tubulosa และการแปรผันที่สำคัญที่เกิดขึ้นจากสามภูมิภาค 4000–4500 cm-1, 5000–5500 cm-1 และ 7000–7500 cm-1 นั้นสังเกตเห็นได้ชัด .

การสร้างแบบจำลองการสอบเทียบเชิงปริมาณ

การถดถอยกำลังสองน้อยที่สุดบางส่วน (PLSR) เป็นวิธีการสร้างแบบจำลองแบบคลาสสิกและมีการใช้กันอย่างแพร่หลายในแบบจำลองเชิงปริมาณเนื่องจากผลลัพธ์คุณภาพสูง ข้อดีของ PLSR ได้แก่ ความสามารถในการพยากรณ์ที่ดีและความเรียบง่ายสัมพัทธ์ PLSR ยังถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในการสร้างแบบจำลองการสอบเทียบเชิงปริมาณของ TCM [25] ตามสเปกตรัม NIR ที่ปรับสภาพแล้ว และแบบจำลองการวิเคราะห์เชิงปริมาณ NIR สำหรับส่วนประกอบที่มีประสิทธิผลหกองค์ประกอบใน C. tubulosa ถูกสร้างโดยใช้วิธี PLSR ที่มีข้อมูลการวิเคราะห์ HPLC เป็นค่าที่แท้จริง ตัวอย่าง 116 ตัวอย่างถูกสุ่มแบ่งเป็นชุดสอบเทียบและการตรวจสอบความถูกต้องด้วยอัตราส่วน 3:1 สภาวะที่เหมาะสมที่สุดสำหรับการสอบเทียบได้รับการคัดเลือกโดย RMSEC ต่ำและค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์สูง

การเลือก Wave Band สำหรับรุ่นการปรับเทียบ

การเลือกแถบคลื่นที่เหมาะสมเป็นขั้นตอนสำคัญสำหรับการสร้างแบบจำลองการสอบเทียบ ในการศึกษานี้ เปรียบเทียบช่วงสเปกตรัม NIR 4000–7500 cm-1 (แนะนำโดยซอฟต์แวร์วิเคราะห์ TQ) และ 4000–10,000 ซม.-1 พบว่าช่วงนี้ไม่เหมาะสมสำหรับการสอบเทียบในช่วงเวลาระหว่าง 4000 ซม.-1 และ 7500 ซม.-1 จากตารางที่ 2 ดังนั้น ในการศึกษาปัจจุบัน ช่วงสเปกตรัมสำหรับองค์ประกอบทางเคมีหกองค์ประกอบคือ ทั้งหมดถูกเลือกจากช่วงตั้งแต่ 4000 ถึง 10,000 ซม.-1 โดยการเปรียบเทียบประสิทธิภาพของ RMSEC และค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์

การเลือกจำนวนปัจจัยที่เหมาะสมที่สุดสำหรับแบบจำลองการสอบเทียบ

PLSR อธิบายจำนวนความแปรปรวนสูงสุดของข้อมูลโดยการลดมิติข้อมูลสเปกตรัมโดยการคำนวณปัจจัย ปัญหา "ความไม่เพียงพอ" เกิดขึ้นเนื่องจากข้อมูลไม่เพียงพอซึ่งเป็นผลมาจากปัจจัยจำนวนจำกัด อย่างไรก็ตาม การเลือกปัจจัยที่มากกว่าค่าที่เหมาะสมที่สุดในแบบจำลองจะทำให้เกิดปัญหา "ความไม่เพียงพอ" หรือ "ความมากเกินไป" จะลดพลังการทำนายของแบบจำลองที่สร้างขึ้น [22] รูปที่ 3 แสดงความสัมพันธ์ระหว่าง RMSECV และตัวประกอบสำหรับสารประกอบทั้งหก ดังนั้นเราจึงเลือกปัจจัยเหล่านั้นที่สอดคล้องกับค่าต่ำสุดของ RMSECV การเลือกปัจจัยที่เหมาะสมที่สุดสำหรับแบบจำลองการสอบเทียบแสดงไว้ในตารางที่ 3

การเลือกการปรับสภาพสเปกตรัมสำหรับแบบจำลองการปรับเทียบ

ปัจจัยที่มีอิทธิพลที่สำคัญที่สุดอีกประการหนึ่งสำหรับแบบจำลองการสอบเทียบคือการปรับสภาพสเปกตรัมซึ่งมีเป้าหมายเพื่อลดอิทธิพลของการกระเจิงและการเบี่ยงเบนของเส้นฐาน เพิ่มอัตราส่วนสัญญาณต่อสัญญาณรบกวน และขจัดความแปรผันที่ผิดปกติ การแก้ไขการกระเจิงแบบทวีคูณ (MSC) และวิธีการแปรผันปกติมาตรฐาน (SNV) ถูกนำมาใช้เพื่อขจัดอิทธิพลของการกระเจิงของรังสีตามธรรมเนียมปฏิบัติ เพื่อแก้ไขผลกระทบของการเบี่ยงเบนพื้นฐาน สเปกตรัมอนุพันธ์ที่ 1 และ 2 ถูกเปรียบเทียบและเลือกที่มาที่ 2 [26] เพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่ต้องการ เราปรับสเปกตรัมให้เรียบด้วยอัลกอริธึมตัวกรอง Savitzky–Golay (SG) ก่อนการหาแหล่งที่มาเพื่อป้องกันการขยายสัญญาณรบกวน ตารางที่ 3 แสดงข้อมูลเกี่ยวกับการปรับสภาพสเปกตรัมและผลลัพธ์สำหรับแบบจำลองการปรับเทียบ

การประเมินแบบจำลองที่จัดตั้งขึ้น

แบบจำลองการสอบเทียบ NIRS ที่ดีควรมีค่า RMSEC และ RMSEP ต่ำ รวมทั้งค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์สูง (r) และความแตกต่างเล็กน้อยระหว่าง RMSEC และ RMSEP [27–29] แบบจำลองการสอบเทียบของสารประกอบที่เลือกหกชนิดถูกสร้างขึ้นตามขั้นตอนที่กล่าวถึงข้างต้น (ตารางที่ 3) ค่า RMSEC และ r สำหรับชุดสอบเทียบของ echinacoside คือ 27.6 และ 0.9808 ตามลำดับ พารามิเตอร์ประสิทธิภาพของแบบจำลองสารประกอบเคมีอื่นๆ แสดงไว้ในตารางที่ 3 ซึ่งเราสามารถสรุปได้ว่าแบบจำลองที่สร้างขึ้นนั้นให้ผลลัพธ์การทำนายที่น่าพอใจ และสามารถใช้สำหรับการวิเคราะห์เชิงปริมาณอย่างรวดเร็วของ C. tubulosa แผนภาพการกระจายของสารเคมีหกชนิดแสดงไว้ในรูปที่ 4 เพื่อทำให้แบบจำลองการสอบเทียบมีความชัดเจนและสังเกตได้ชัดเจนยิ่งขึ้น ดังที่แสดงในรูปที่ 4 ความแตกต่างเล็กน้อยเกิดขึ้นระหว่างค่าการทำนายและค่าที่วัดได้ เนื่องจากจุดส่วนใหญ่ถูกกระจายรอบเส้นโค้งถดถอยด้วยสมการเป็น y=x ดังนั้นจึงสังเกตการแสดงการทำนายที่ยอดเยี่ยมในรูปที่ 4

วัสดุและวิธีการ

การเตรียมตัวอย่าง

ตัวอย่าง C. tubulosa หนึ่งร้อยสิบหกตัวอย่างถูกรวบรวมจากจังหวัด Hotan ในเขตปกครองตนเองซินเจียง ตั้งแต่ปี 2013 ถึง 2015 ตัวอย่างทั้งหมดได้รับการปลูกฝัง แต่ถูกรวบรวมในช่วงการเจริญเติบโตที่แตกต่างกัน น้ำหนักสดของตัวอย่างอยู่ระหว่าง 20 ก. ถึง 1,000 ก. หลังจากการอบแห้งด้วยแสงแดด ตัวอย่างที่แห้งแล้วจะถูกบดและร่อนผ่าน60-ตะแกรงตาข่าย [3,23]

การรวบรวมข้อมูลสเปกโตรสโคปี NIR

สเปกตรัม NIR ของตัวอย่างถูกรวบรวมที่ช่วง 8 ซม.-1 เหนือบริเวณสเปกตรัม 4000–10,000 ซม.-1 ด้วยระบบ Antaris MXFT-NIR (Thermo Scientific, Madison, WI, USA) มาพร้อมกับอะแดปเตอร์สะท้อนใยแก้วนำแสงแบบมือถือ แต่ละสเปกตรัมได้มาจากการสแกนเฉลี่ย 64 ครั้ง ตัวอย่างทั้งหมดได้รับอนุญาตให้สมดุลกับอุณหภูมิห้อง (25 . C) ก่อนการสแกนสเปกตรัม NIR เพื่อให้แน่ใจว่าตัวอย่างได้รับการวิเคราะห์ที่อุณหภูมิเดียวกัน ความชื้นในห้องปฏิบัติการถูกเก็บไว้ที่ระดับแวดล้อม

การเก็บรวบรวมข้อมูล HPLC

การเตรียมการสกัด

สกัดผง C. tubulosa หนึ่งกรัมด้วยเมทานอล 50 เปอร์เซ็นต์ 50 มล. ในขวดทรงกรวยที่มีอัลตราโซนิเคชั่น (500 W, 40 kHz) เป็นเวลา 30 นาที สารสกัดถูกเก็บไว้ที่ 4 ◦C ส่วนลอยเหนือตะกอนของสารสกัดถูกกรองเพื่อให้ได้ตัวอย่างสำหรับการวิเคราะห์ HPLC [3,23]

การหาค่าเอไคนาโคไซด์และเวอร์บาสโคไซด์พร้อมกันด้วย HPLC-UV

การวิเคราะห์โครมาโตกราฟีของเหลวดำเนินการบนระบบ Shimadzu UHPLC (Shimadzu, Kyoto, Japan) ซึ่งประกอบด้วยหน่วยนำส่งตัวทำละลาย LC-20ADXR สองชุด, ปั๊ม LC-20AD, เครื่องเก็บตัวอย่าง SIL-20ACXRauto , เตาอบคอลัมน์ CTO-20AC, ตัวตรวจจับ SPD-M20A DAD, DGU-20A3R degasser และตัวควบคุม ICBM-20A

คอลัมน์ Grace Prevail Carbohydrate ES (150 × 2.1 มม., 2.7 มม.) ที่ใช้สำหรับการแยกสารด้วยโครมาโตกราฟีจะคงไว้ที่อุณหภูมิ 35 ◦C เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยอะซีโตไนไตรล์ (A) และ 0.1 เปอร์เซ็นต์กรดฟอร์มิกในน้ำ (B) และถูกนำส่งหลังจากโปรแกรมเกรเดียนต์ดังนี้: 0–7 นาที, เกรเดียนท์เชิงเส้นที่ 10–20 เปอร์เซ็นต์ A; 7–15 นาที 20 เปอร์เซ็นต์ A; และ 15-20 นาที ความลาดชันเชิงเส้น 20-10 เปอร์เซ็นต์ A อัตราร่วมของเฟสเคลื่อนที่คือ 0.4 มล./นาที การเฝ้าติดตามด้วยรังสียูวีถูกดำเนินการที่ 330 นาโนเมตร

การหาค่าแมนนิทอล ซูโครส กลูโคส และฟรุกโตสพร้อมกันด้วย HPLC-ELSD

HPLC ถูกดำเนินการบนระบบ LC ซีรีส์ Agilent 1100 (พาโลอัลโต, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา) ซึ่งประกอบด้วยเครื่องกำจัดแก๊ส aG1322A, ปั๊มควอเทอร์นารี G1311A, เครื่องเก็บตัวอย่างอัตโนมัติ G1311A, ตัวควบคุมอุณหภูมิคอลัมน์ G1316A และตัวตรวจจับ G1315B DAD

คอลัมน์ Sigma Prevail Carbohydrate ES (4.6 × 250 มม., 5 µm) ถูกใช้สำหรับการแยกสารด้วยโครมาโตกราฟีและคงไว้ที่อุณหภูมิคอลัมน์ที่ 25 ◦C เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยอะซีโตไนไทรล์และน้ำ (77:23, ปริมาตร/ปริมาตร) และพันธมิตรไอโซเครติกที่ให้อัตราร่วม 0.7 มล./นาที น้ำทิ้งถูกตรวจสอบโดยใช้เครื่องตรวจจับการกระเจิงแสงระเหย (ELSD) พร้อมพารามิเตอร์ที่ผิดนัด [23,24]

การประมวลผลข้อมูล

TQ Analyst (เวอร์ชัน 80, Thermo Scientific, Madison, WI, USA) ใช้เพื่อดำเนินการแบ่งชุดสอบเทียบและการตรวจสอบความถูกต้อง การปรับสภาพทางคณิตศาสตร์ของสเปกตรัม การสร้างแบบจำลองการสอบเทียบ และการคำนวณอื่นๆ Origin (เวอร์ชั่น 9.1) ถูกใช้เพื่อสร้างตัวเลข

บทสรุป

กิตติกรรมประกาศ: งานนี้ได้รับการสนับสนุนโดยโครงการวางแผนวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติของจีน (2015BAD29B00-04)

ผู้เขียนร่วม: Xinhong Wang คิดและออกแบบการทดลอง Xinhong Wang และ Xiaoguang Wang ทำการทดลอง Xinhong Wang และ Yuhai Guo เขียนบทความนี้

ความขัดแย้งทางผลประโยชน์: ผู้เขียนประกาศว่าไม่มีความขัดแย้งทางผลประโยชน์

อ้างอิง

1. เจียง, วาย.; Tu, PF การวิเคราะห์องค์ประกอบทางเคมีในสายพันธุ์ cistanche เจ. โครมาโตกร์. 2552, 1216, 2513-2522 [CrossRef] [PubMed]

2. ซู, ร.; เฉินเจ .; เฉิน, S.-L.; หลิว, T.-N.; Zhu, W.-C.; Xu, J. Cistanche deserticola Ma เพาะปลูกเป็นพืชใหม่ในประเทศจีน ยีนต์. ทรัพยากร วิวัฒนาการของพืช 2551, 56, 137–142. [ข้ามอ้างอิง]

3. กองบรรณาธิการคณะกรรมการเภสัชตำรับจีน. ตำรับยาจีน ฉบับปี 2548; สื่ออุตสาหกรรมเคมี: ปักกิ่ง จีน 2005; เล่ม 1, น. 90.

4. โคบายาชิ, H.; Komatsu, J. องค์ประกอบของ cistanchE herba (1). Yakugaku Zasshi 1983, 103, 508–511. [CrossRef] [PubMed]

5. เพลง ZH; เล่ยแอล.; Tu, PF ความก้าวหน้าในการวิจัยกิจกรรมทางเภสัชวิทยาในพืชที่มีกลิ่นฉุน ลิงค์เป็นต้น. คาง. ตราด. สมุนไพร. ยาเสพติด 2546, 34, 473–476

6. Xiong, Q.; Kadota, S.; ตานี, ต.; Namba, T. ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของ phenylethanoids จาก Cistanche deserticola ไบโอล. เภสัช. วัว. 2539, 19, 1580–1585. [CrossRef] [PubMed]

7. ซวน, GD; Liu, CQ Research เกี่ยวกับผลของ phenylethanoid glycosides (PEG) ของ Cistanche deserticola ต่อการต่อต้านริ้วรอยในหนูสูงวัยที่เกิดจาก D-galactose เจ. ชิน. เมดิ. มาเตอร์ 2551, 31, 1385–1388.

8. ซาโต้ ต.; Kozima, S.; โคบายาชิ, K.; Kobayashi, H. การศึกษาทางเภสัชวิทยาเกี่ยวกับ Cistachis Herba I. ผลขององค์ประกอบของ Cistanchis Herba ต่อพฤติกรรมทางเพศและการเรียนรู้ในหนูที่มีความเครียดเรื้อรัง ยาคุกาคุ ซาชิ 1986, 105, 1131–1144. [ข้ามอ้างอิง]

9. Shen, CY; เจียง เจจี; ยาง L.; วัง DW; Zhu, W. สารออกฤทธิ์ต่อต้านริ้วรอยจากสมุนไพรและอาหารเสริมที่ใช้ในยาจีนโบราณ: กลไกทางเภสัชวิทยาและนัยสำหรับการค้นพบยา บรา เจ. ฟาร์มาคอล. 2016, 11, 1395–1425. [CrossRef] [PubMed]

10. หลี่ N.; วังเจ .; หม่า เจ.; Gu, Z.; เจียงซี.; Yu, L.; Fu, X. ผลทางประสาทของการบำบัดด้วย Cistanches Herba ต่อผู้ป่วยโรคอัลไซเมอร์ระดับปานกลาง ชัดเจน อาหารเสริมตาม ทางเลือก เมดิ. 2558, 2558. [CrossRef] [PubMed]

11. เกา JY; เจียง, วาย.; ได, เอฟ.; ฮัน ZL; หลิว HY; เบ้า Z .; จาง TM; Tu, PF ศึกษาองค์ประกอบยาระบายใน Cistanche deserticola YC Ma. มด คาง. เมดิ. 2015, 17, 307–310.

12. ตู, PF; เฉิน QL; เจียง, วาย.; กัว วายเอช; หยาง เท็กซัส; วัง XY; ไอร์คาน, ม.; หลี่ XB; ดู่, วาย.; น่าน, ZD; และคณะ เทคนิคการเพาะปลูก Cistanche tubulosa และโฮสต์ Tamarix spp. มด คาง. เมดิ. 2015, 17, 349–358.

13. ตู, PF; เจียง, วาย.; กัว วายเอช; เทียน YZ; หลี่ XB; วัง XY; เหว่ย เจ.; เฉิน QL; Aierkan, M. การพัฒนาอุตสาหกรรมนิเวศวิทยาของ cistanches herba เพื่อส่งเสริมอารยธรรมทางนิเวศวิทยาของภูมิภาคทะเลทรายตะวันตก มด คาง. เมดิ. 2015, 17, 297–301.

14. ลู DY; จาง JY; หยาง จี; หลิว HM; หลี่เอส.; วู บีเจ; Ma, ZG การวิเคราะห์เชิงปริมาณของ cistanches herba โดยใช้โครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูงควบคู่ไปกับการตรวจจับอาร์เรย์ไดโอดและแมสสเปกโตรเมตรีความละเอียดสูงรวมกับวิธีเคมี เจ. ก.ย. วิทย์. 2013, 36, 1945–1952. [CrossRef] [PubMed]Molecules 2017, 22, 843 9 จาก 9

15. เจียง, วาย.; หลี่ SP; วัง YT; เฉิน XJ; Tu, PF การแยกความแตกต่างของ herba cistanches ด้วยลายนิ้วมือด้วยการตรวจจับมวลสารโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง-ไดโอดอาร์เรย์ เจ. โครมาโตกร์. 2552, 1216, 2156–2162. [CrossRef] [PubMed]

    ---