R. Vesicarius L. ออกแรงกระตุ้น Nephroprotective Effect ต่อความเครียดออกซิเดชันที่เกิดจาก Cisplatin

ติดต่อ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 อีเมล:audrey.hu@wecistanche.com

Md. Mahmudul Hasan¹, ที่สุด. เซย์ลา ทัสมิน², อาเหม็ด เอ็ม. เอล-เชฮาวี³, โมนา เอ็ม. เอลซีเฮย์⁴, Md. Abu Reza¹และอาริฟูล ฮาเก^2*

เชิงนามธรรม

พื้นหลัง:ซิสพลาตินเป็นยาต้านมะเร็งที่โดดเด่น แต่การใช้ยาลดลงอย่างน่าทึ่งเนื่องจากพิษต่อไตอย่างรุนแรง R. vicarious L. เป็นผักใบที่มีความสามารถในการต้านการสร้างเส้นเลือดใหม่, ต้านการอักเสบ, ต่อต้านการงอก, ตับและไต ดังนั้น การศึกษานี้จึงได้รับการออกแบบเพื่อตรวจสอบสารสกัดจากเมทานอล (RVE) เพื่อหาผลการป้องกันไตที่เป็นไปได้

วิธีการ:ในเบื้องต้น ในหลอดทดลอง ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของ RVE ได้รับการยืนยันโดยอิงจาก 2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) ความสามารถในการกำจัดอนุมูลอิสระ หลังจากนั้น หนูหนู Swiss Albino เพศผู้ได้รับยาซิสพลาติน (2.5 มก./กก.) เป็นเวลา 5 วันติดต่อกันเพื่อกระตุ้นให้เกิดพิษต่อไต การฟื้นตัวจากภาวะไตเป็นพิษถูกพิจารณาโดยการบำบัดสัตว์ด้วย RVE (25, 50 และ 100 มก./กก.) ในช่องท้อง (ip) เป็นเวลา 5 วันติดต่อกัน หลังจากเสร็จสิ้นการรักษา หนูถูกสังเวยและเก็บไต ส่วนหนึ่งของมันถูกทำให้เป็นเนื้อเดียวกันในโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์สำหรับการประเมินระดับมาลอนไดอัลดีไฮด์ (MDA) ส่วนอื่นถูกใช้เพื่อประเมินการแสดงออกของยีน (NQO1, p53 และ Bcl-2) นอกจากนี้ ความสามารถในการทำให้เป็นกลางของไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ (H2O2) ของ RVE ได้รับการประเมินในเซลล์ HK-2 ในหลอดทดลอง ในที่สุด ไฟโตเคมิคอลที่ออกฤทธิ์ทางชีวภาพใน RVE ถูกกำหนดหาโดยใช้แก๊สโครมาโตกราฟี-แมสสเปกโตรเมทรี (GC-MS)

ผลลัพธ์:RVE แสดงฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระในหลอดทดลองในรูปแบบที่ขึ้นกับขนาดยาโดยมีค่า IC50 37.39 ± 1.89 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร

การรักษาด้วย RVE อย่างน่าทึ่ง (p < {{0}}.05)="" ลดปริมาณ="" mda="" ในเนื้อเยื่อไต="" นอกจากนี้="" การแสดงออกของยีน="" nqo,="" p53="" และ="" bcl-2="" ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ="" (p="">< 0.05)="" ในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยาเนื่องจากการบริหารให้="" rve="" rve="" อย่างมีนัยสำคัญ="" (p="">< 0.05)="" เปลี่ยนระดับ="" h2o2="" ในเซลล์="" hk-2="" ให้เกือบปกติ="" จาก="" gc-ms="" สารประกอบสิบชนิดรวมถึงสารต้านอนุมูลอิสระที่เป็นที่รู้จักสามชนิด="" "4h-pyran-4-หนึ่ง,="" 2,="" 3-ไดไฮโดร-3,5-ไดไฮดรอกซี-6-เมทิล-"="" ตรวจพบ="" "กรดเฮกซาเดคาโนอิก"="" และ="" "สควาลีน"="" สารสกัดอุดมไปด้วยอัลคาลอยด์="">

บทสรุป:โดยรวมแล้ว RVE มีผลในการป้องกันความเสียหายของไตที่เกิดจากซิสพลาติน

คำสำคัญ:Cisplatin, R. vicarious, Mice, Kidney, HK-2 cells, Oxidative stress, ยีน NQO1

Cistanche Deserticola ป้องกันโรคไต คลิกที่นี่เพื่อรับตัวอย่าง

บทนำ

ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันเป็นผลมาจากความไม่สมส่วนระหว่างการก่อตัวของชนิดออกซิเจนที่เกิดปฏิกิริยา (ROS) และกลไกการป้องกันสารต้านอนุมูลอิสระตามปกติ [1] ปฏิกิริยาทางชีวเคมีเป็นประจำ การสัมผัสกับสภาพแวดล้อมที่ไม่เอื้ออำนวยบ่อยครั้ง และการบริโภคซีโนไบโอติกที่เพิ่มขึ้นส่งผลให้มีการผลิต ROS [1] ROS ทำปฏิกิริยากับซิสเทอีนที่ตกค้างของโมเลกุลส่งสัญญาณที่ไวต่อปฏิกิริยารีดอกซ์ รวมถึงปัจจัยการถอดรหัส โปรตีนไทโรซีนฟอสฟาเตส และไคเนสของโปรตีน ดังนั้น การเกิดออกซิเดชันของกลุ่มไทออลบนสารตกค้างเหล่านี้จะนำไปสู่การเปลี่ยนแปลงของโปรตีนเป้าหมาย การกระทำทางชีวภาพ ความสามารถในการส่งสัญญาณ ภูมิคุ้มกัน และกระบวนทัศน์ที่มีชีวิต/ตายของเซลล์เสริม [2] สปีชีส์เคมีที่ประกอบด้วยออกซิเจนซึ่งมีคุณสมบัติในการเกิดปฏิกิริยาเรียกว่า ROS ซึ่งรวมถึงอนุมูลอิสระและโมเลกุลที่ไม่ใช่อนุมูลอิสระ เช่น ซูเปอร์ออกไซด์และ H2O2 ตามลำดับ [3] ความเครียดที่เกิดจากออกซิเดชันที่เกิดจาก ROS เชื่อมโยงกับสาเหตุของโรคต่างๆ รวมถึงมะเร็ง มะเร็งเม็ดเลือดขาวชนิดเฉียบพลันแบบมัยอีลอยด์ (AML) คือการเติบโตของเซลล์เม็ดเลือดที่เป็นมะเร็งภายในไขกระดูก เหตุการณ์ระดับเซลล์และระดับโมเลกุลที่อยู่ภายใต้ AML ได้แก่ ความเสียหายของดีเอ็นเอ การแพร่กระจายของโคลน การตายของเซลล์ที่เพิ่มขึ้น และความไม่แน่นอนทางพันธุกรรมเพิ่มเติม ซึ่งเป็นผลมาจากความเครียดออกซิเดชันที่เกิดจาก ROS [4] สรีรวิทยาของมนุษย์มีกลไกมากมายที่สามารถสร้างสารต้านอนุมูลอิสระเพื่อป้องกันความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันซึ่งนำไปสู่การปกป้องเซลล์จากผลกระทบที่เป็นพิษและใช้ในการป้องกันโรค [5] อย่างไรก็ตาม เซลล์พัฒนากลไกภายในเพื่อต่อต้านความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันและอนุรักษ์ ROS ที่จำเป็น [6]

NAD(P)H: quinone oxidoreductase 1 (NQO1) เป็นฟลาโวเอนไซม์ [7] ที่สามารถกระตุ้นการลดอิเล็กตรอนสองหรือสี่ตัว และใช้คุณสมบัตินี้ในการล้างพิษควินิน [8] มันสามารถปกป้องเซลล์จากความเสียหายจากออกซิเดชันโดยการรักษาวงจรรีดอกซ์ไว้ข้างๆ และโดยการลดการผลิตอนุมูลอิสระ [8] นอกจากการล้างพิษด้วยซีโนไบโอติกแล้ว NQO1 ยังเกี่ยวข้องกับการทำให้เป็นกลางด้วยซูเปอร์ออกไซด์ การปรับการเสื่อมสภาพของโปรตีอาโซม p53 [9], การยับยั้ง Bcl-2 [10] และความไวต่อการบาดเจ็บของเซลล์ที่เพิ่มขึ้น [11]

ซิสพลาตินเป็นยาต้านมะเร็งชนิดแพลตตินัมที่ได้รับการรับรองจากสำนักงานคณะกรรมการอาหารและยา (อย.) แห่งแรก [12] Cisplatin ออกแรง apoptosis โดยการกระตุ้นความเครียดออกซิเดชันและการแสดงออกที่มากเกินไปของยีนต้านมะเร็ง p53 [12] ผลข้างเคียงหลายประการรวมถึงความเป็นพิษต่อไต ความเป็นพิษต่อตับ ความเป็นพิษต่อระบบทางเดินอาหาร ความเป็นพิษต่อหู การกดประสาท และความเป็นพิษต่อระบบประสาทเป็นผลจากความเครียดออกซิเดชันที่เกิดจากซิสพลาติน [12] ผลข้างเคียงเหล่านี้ลดการใช้ซิสพลาตินได้อย่างน่าทึ่ง แม้ว่าจะมีฤทธิ์ต้านมะเร็งที่โดดเด่น Cisplatin เป็นที่รู้จักกันดีในการกระตุ้นความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันและยับยั้งยีน NQO1 ในไตของหนูทดลอง [13] ดังนั้นการค้นหาและตรวจสอบแหล่งที่มาของสารต้านอนุมูลอิสระจากธรรมชาติที่มีประสิทธิภาพจึงกลายเป็นพื้นที่แห่งความตระหนัก การรับประทานสารต้านอนุมูลอิสระจากพืช เช่น ฟลาโวนอยด์ แคโรทีนอยด์ และสารประกอบฟีนอล อาจนำไปสู่การป้องกันโรคหัวใจและหลอดเลือด ต้อกระจก และมะเร็ง [14]

R. vicarious (Polygonaceae) เป็นที่รู้จักกันในชื่อ "Takpalong/ Chukapalong/Amlabetom" ในภาษาเบงกาลี [15] มันเติบโตในพื้นที่ทะเลทรายและกึ่งทะเลทรายของเอเชีย ออสเตรเลีย และแอฟริกาเหนือ [16] เป็นพืชใกล้สูญพันธุ์ที่ได้รับการศึกษาเพียงเล็กน้อยในบังคลาเทศ ในบังคลาเทศ ผู้คนบริโภคพืชทั้งต้นเป็นผักหลังจากปรุงด้วยเกลือ เครื่องเทศต่างๆ และน้ำมัน บางครั้งคนใช้เฉพาะใบสดในสลัดผักรวมเป็นทางเลือกแทนผักกาดหอม ใบดิบมีรสเปรี้ยวเล็กน้อย แต่จะเปรี้ยวมากหลังปรุง ยิ่งกว่านั้นมักจะผสมใบจำนวนเล็กน้อยในจานปลาระหว่างการปรุงอาหารเพื่อให้มีรสเปรี้ยวเล็กน้อย

พืชชนิดนี้ถูกใช้เป็นพืชผักและสมุนไพรทั่วโลก [17] ใบและเมล็ดใช้เป็นยาแก้พิษงูและแมงป่องตามลำดับ [17] ในการรักษาพื้นบ้าน R. vicarious ถูกนำมาใช้ในการรักษาโรคตับ การย่อยอาหารไม่ดี ท้องผูก ริดสีดวงทวาร อาเจียน ท้องอืด โรคหัวใจ ปวด ม้ามผิดปกติ อาการอาหารไม่ย่อย ปวดฟัน หลอดลมอักเสบ หอบหืด หิด เม็ดเลือดขาว และเป็น ยาระบาย แก้ท้องอืด อาหารเรียกน้ำย่อย ยาชูกำลัง ยาขับปัสสาวะ ยาแก้ปวด [18] พืชชนิดนี้ประกอบด้วยสารประกอบที่มีความสำคัญทางชีววิทยามากมาย รวมทั้งฟลาโวนอยด์ แอนทราควิโนน แคโรทีนอยด์ วิตามิน ลิปิด และกรดอินทรีย์ ซึ่งเป็นที่รู้จักกันดีว่าเป็นสารต้านอนุมูลอิสระ ยาต้านจุลชีพ และสารต้านมะเร็ง [19] ทุกส่วนของพืชนี้มีเควอซิทิน (ฟลาโวนอยด์) ในปริมาณที่สูง [15] พืชชนิดนี้ประกอบด้วยวิตามินเอ 0.25 มก. วิตามินซี 1.33 มก. วิตามินอี 2.37 มก. [15] ฟลาโวนอยด์ 3.38 มก. และโพลีฟีนอล 5.66 มก. [20] ต่อน้ำหนักแห้ง 100 กรัม

Shahat และเพื่อนร่วมงาน [21] แสดงผลการต้านการสร้างเส้นเลือดใหม่และการต้านการงอกของสารเมทานอล (80 เปอร์เซ็นต์) ของสารสกัด R. vicarious ทางอากาศต่อมะเร็งตับในแบบจำลองหนู การศึกษาอื่นแสดงให้เห็นศักยภาพในการต่อต้านการสร้างเส้นเลือดใหม่ในหลอดทดลองของสารสกัด R. vicarious [22] สารสกัดจากเมทานอลของตัวแทน R. ทั้งหมดช่วยป้องกันพิษต่อตับที่เกิดจากคาร์บอนเตตระคลอไรด์ในร่างกาย [23] ฤทธิ์ต้านการอักเสบในกระต่ายเห็นได้ชัดเจนด้วยสารสกัดจากใบเมทานอลของ R. vicarious [24] การศึกษาเมื่อเร็ว ๆ นี้ [25] รายงานผลในการป้องกันไตในร่างกายของสารสกัด ethanolic R. แบบแยกส่วนต่อความเป็นพิษของ gentamicin และความเป็นพิษของโพแทสเซียม ไดโครเมต

เมื่อพิจารณาข้อมูลข้างต้นแล้ว เราจึงมุ่งที่จะตรวจสอบผลของสารสกัด R. vicarious (RVE) ในแง่ของการฟื้นตัวจากพิษต่อไตที่เกิดจากซิสพลาตินผ่านการรักษาการแสดงออกของยีน NQO1 ในแบบจำลองสัตว์

ประโยชน์ต่อสุขภาพของ cistanche: การรักษาโรคไต

วัสดุและวิธีการ

เคมีภัณฑ์และรีเอเจนต์

ซิสพลาตินและ 2, 2-ไดฟีนิล-1-พิคริลไฮดราซิล (DPPH) ถูกซื้อมาจาก SIGMA-ALDRICH (สหรัฐอเมริกา)

Creatinine Colorimetric Assay Kit (รหัสผลิตภัณฑ์ – 700,460) ซื้อมาจาก Cayman Chemical (USA) Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM), fetal bovine serum (FBS) และยาปฏิชีวนะ (10,000 U/mL penicillin และ 10,000 ug/mL streptomycin) ซื้อมาจาก Gibco (Gibco Laboratories, สหรัฐอเมริกา). ROS-Glo™ H2O2 Assay kit และ GoTaq® qPCR Master Mix ได้รับมาจาก Promega (สหรัฐอเมริกา) Reverse-transcription kit TIAN- Script M-MLV ซื้อมาจาก TIANGEN (จีน) และไพรเมอร์จาก IDT (Integrated DNA Technologies, Malaysia) สารเคมีและรีเอเจนต์อื่นๆ ทั้งหมดที่ใช้ในการทดลองนี้เป็นระดับการวิเคราะห์

การเก็บตัวอย่างและการเตรียมสารสกัด

พืชทดแทนของ R. สดถูกซื้อจากตลาดท้องถิ่นที่ Sonadigi, Rajshahi, บังคลาเทศ ตัวอย่างพืชได้รับการระบุและรับรองความถูกต้องโดย Dr. Ahmad Humayan Kabir ภาควิชาพฤกษศาสตร์ มหาวิทยาลัยราชชาฮี ประเทศบังกลาเทศ ตัวอย่างตามใบสำคัญเลขที่ 00095 ถูกเก็บไว้ในห้องสมุนไพรของภาควิชาพฤกษศาสตร์ มหาวิทยาลัยราชชาฮี ชิ้นส่วนทางอากาศของโรงงานได้รับการทำความสะอาด ตากให้แห้งที่ 37 องศา บดให้เป็นผงหยาบโดยใช้เครื่องอบแห้งแบบอิเล็กทรอนิกส์ และเก็บไว้ในภาชนะที่ปิดสนิทที่อุณหภูมิ 4 องศา ผงละเอียด (10 กรัม) ถูกละลายในเมทานอล (500 มล.) เนื้อหาถูก sonicated (Soni-prep 150, China) ที่ 20 kHz เป็นเวลา 10 นาที การกรองสารสกัดได้ดำเนินการโดยใช้กระดาษกรองใยแก้ว (Macherey NAGEL, GmBH, เยอรมัน) กับเครื่องกรอง DURAN (เยอรมัน) สุดท้าย สิ่งกรองถูกทำให้เข้มข้นโดยใช้เครื่องทำแห้งแช่แข็ง (VirTis Benchtop Pro, SP SCIENTIFIC, USA) ในที่สุดสารสกัดก็มีชื่อว่า RVE

การทดสอบฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระในหลอดทดลอง

ความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระในหลอดทดลองของ RVE ดำเนินการตามการกำจัด DPPH ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [26] โดยมีการดัดแปลงเพียงเล็กน้อย ความสามารถในการกำจัดอนุมูล DPPH ของ RVE ได้รับการประเมินโดยพิจารณาจากการแปลงสีม่วงของ DPPH เป็นสีเหลือง ของผสมปฏิกิริยาในแต่ละหลอดไมโครเครื่องปั่นแยก (2 มล.) ประกอบด้วย 950 ไมโครลิตร สารละลายเมทานอลของอนุมูล DPPH (0.1 มิลลิโมลาร์) และ 50 ไมโครลิตร RVE จากความเข้มข้นที่แตกต่างกันห้าชนิด (200, 500, 1000, 2000 และ 4000 ไมโครกรัม /mL เมทานอล) เพื่อให้ความเข้มข้นสุดท้ายเป็น 10, 25, 50, 100 และ 200 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร หลอดอื่นที่มี 50 ไมโครลิตรเมทานอลและ 950 ไมโครลิตรสารละลายเมทานอลของ DPPH ถูกเก็บไว้เป็นตัวควบคุม หลอดทดลองถูกทิ้งไว้ 30 นาทีในที่มืด การดูดกลืนแสงของของผสมถูกถ่ายที่ 517 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ GENESYS 10S UV-VIS (Thermo SCIENTIFIC, USA) สุดท้าย เปอร์เซ็นต์ของกิจกรรมการกวาดล้างอย่างรุนแรง (RSA) คำนวณจากการเปลี่ยนสีของ DPPH โดยใช้เปอร์เซ็นต์ของสูตรต่อไปนี้ RSA=[(ADPPH − ARVE)/ADPPH] × 100 โดยที่ ADPPH คือการดูดกลืนแสงของสารละลาย DPPH (ตัวควบคุม) และ ARVE คือค่าการดูดกลืนแสงของสารละลาย RVE ความเข้มข้นที่ RVE ทำให้เกิด RSA 50 เปอร์เซ็นต์ถูกเรียกว่าเป็นค่า IC50 และคำนวณโดยใช้กราฟแสดงเปอร์เซ็นต์ RSA เทียบกับความเข้มข้น RVE ต่างๆ ที่ใช้

สัตว์ทดลองและการออกแบบทดลอง

หนูเมาส์ Swiss Albino เพศผู้อายุ 42 วัน (น้ำหนักตัว 30–32 กรัม) เคยชินกับสภาพเป็นเวลา 1 สัปดาห์ก่อนเริ่มการทดลองในห้อง (อุณหภูมิประมาณ 25 ± 2 องศาและความชื้น ~ 50 เปอร์เซ็นต์ รอบมืด/แสง 12 ชั่วโมง) น้ำดื่มและอาหารได้รับการจัดเตรียมโดยอิสระ

หนูถูกสุ่มแยกออกเป็นแปดกลุ่ม (n {{0}}) กลุ่มแรก (กลุ่มควบคุม) ถูกบำบัดด้วย 0.2 มล. ของ NaCl 0.9 เปอร์เซ็นต์ สี่กลุ่มถัดไปถูกบำบัดด้วยซิสพลาตินที่ 2.5 มก./กก. เป็นเวลา 5 วัน ในช่วงเวลา 24 ชั่วโมง หลังจากการบริหารให้ซิสพลาติน กลุ่มหนึ่ง (กลุ่มที่สอง) ถูกปล่อยทิ้งไว้โดยไม่มีการบำบัดเพิ่มเติมและกำหนดให้เป็นกลุ่มควบคุมที่เครียด กลุ่มที่สาม, ที่สี่และห้าถูกบำบัดเพิ่มเติมด้วย RVE ที่ 25, 50 และ 100 มก./กก. ตามลำดับเป็นเวลา 5 วัน อีกสามกลุ่มได้รับการบำบัดด้วย RVE เท่านั้นที่ 25, 50 และ 100 มก./กก. ตามลำดับเป็นเวลา 5 วัน Cisplatin และ RVE ถูกละลายในน้ำกลั่น การรักษาทั้งหมดได้รับการฉีดเข้าช่องท้อง หลังจาก 24 ชั่วโมงของการรักษาครั้งสุดท้าย สัตว์เหล่านี้ถูกทำการุณยฆาตตามการเคลื่อนตัวของปากมดลูก [25] จากนั้นเปิดช่องท้องด้วยกรรไกร เก็บเลือดหลังจากเจาะหัวใจ และเก็บไตโดยใช้คีมคีบ เลือดถูกตรวจสอบระดับของครีเอตินีนในซีรัม ไตได้รับการประเมินระดับ malondialdehyde และการแสดงออกของยีน

การวัดค่าครีเอตินีนในเลือด

ครีเอตินินในซีรัมวัดโดยใช้ Creatinine Colorimetric Assay Kit-700,460 (Cayman Chemical, USA) ตามโปรโตคอลของผู้ผลิตที่ให้มาพร้อมกับชุดอุปกรณ์

การวัดค่าเปอร์ออกซิเดชันของไขมันในไต

Malondialdehyde (MDA) เป็นผลิตภัณฑ์สุดท้ายของการเกิดออกซิเดชันของไขมันในเนื้อเยื่อไต และมักถูกวัดเป็นตัวบ่งชี้การผลิต ROS อย่างไรก็ตาม วัดระดับ MDA ในเนื้อเยื่อไตตามการศึกษาก่อนหน้านี้ [27] ในตอนแรก เนื้อเยื่อไตถูกทำให้เป็นเนื้อเดียวกันในโซเดียม ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (0.1 โมลาร์, pH 7.4) สารละลายของปฏิกิริยาซึ่งประกอบรวมด้วยกรดไธโอบาร์บิทูริก 0.8 เปอร์เซ็นต์ (1.5 มล.), 8.1 เปอร์เซ็นต์ SDS (200 ไมโครลิตร), 20 เปอร์เซ็นต์ (pH 3.5) กรดอะซิติก (1.5 มล.) และ dH2O (600 ไมโครลิตร) ถูกเติมลงใน 100 ไมโครลิตรของเนื้อเยื่อที่ทำให้เป็นเนื้อเดียวกัน จากนั้นของผสมถูกบ่มที่ 95 องศาเป็นเวลา 1 ชั่วโมง หลังจากการทำให้เย็นลง ของผสมถูกหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 กรัมเป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 องศาและการดูดกลืนแสงของส่วนลอยเหนือตะกอนถูกวัดที่ 532 นาโนเมตรด้วยมาตรฐาน 1, 1, 3, 3- เตตระเมทอกซีโพรเพน ปริมาณโปรตีนทั้งหมดถูกวัดโดยใช้ชุดทดสอบ Bradford Protein Assay (BIO-RAD, USA) และโดยการเปรียบเทียบกับ albumin มาตรฐานของ bovine serum albumin (BSA) ความเข้มข้นของลิพิดเปอร์ออกไซด์แสดงเป็นระดับนาโนโมล (นาโนโมลาร์) ของ MDA ต่อมิลลิกรัม (มก.) ของโปรตีน

ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสแบบเรียลไทม์ (PCR แบบเรียลไทม์)

PCR แบบเรียลไทม์ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [28, 29] แยก RNA ทั้งหมดจากเนื้อเยื่อไตโดยใช้รีเอเจนต์ TRIzol® (Invitrogen) ตามโปรโตคอลที่ผู้ผลิตจัดหา จากนั้น RNA ที่แยกได้ (1 ug) ถูกแปลงเป็น cDNA ประการแรก นำเฮกซาเมอร์สุ่ม 2 ไมโครลิตร (10 ไมโครโมลาร์), 2 ไมโครลิตร dNTP (10 มิลลิโมลาร์), 1 ไมโครกรัม RNA และ H2O ที่ปราศจากนิวคลีเอสถึง 15 ไมโครลิตร ถูกถ่ายและบ่มเป็นเวลา 5 นาทีที่ 70 องศา ส่วนผสมถูกวางบนน้ำแข็งทันทีเป็นเวลา 2 นาที จากนั้น 4 ไมโครลิตรของบัฟเฟอร์สายที่ 1 (5x) และ 1 ไมโครลิตร M-MLV ทรานสคริปเทสถูกเติมในแต่ละหลอดและบ่มเป็นเวลา 10 นาทีและ 50

ขั้นต่ำที่ 25 องศา และ 42 องศา ตามลำดับ สุดท้าย เอ็นไซม์ M-MLV reverse-transcriptase ถูกปิดใช้งานโดยการบ่มของผสมที่ 95 องศาเป็นเวลา 5 นาที ผลิตภัณฑ์ cDNA ที่สังเคราะห์ขึ้นอยู่ภายใต้ PCR แบบเรียลไทม์สำหรับการหาปริมาณของการแสดงออกของยีน NQO1, p53 และ Bcl-2 โดยใช้ไพรเมอร์จำเพาะ (ตารางที่ 1 ) แต่ละปฏิกิริยา (10 ไมโครลิตร) ถูกดำเนินการในสามเท่าซึ่งประกอบด้วย 5 ไมโครลิตร GoTaq qPCR Master Mix (2x) (Promega, USA), 0.5 μL (10 mM) ของไพรเมอร์แต่ละตัว, น้ำที่ปราศจากนิวคลีเอส 3 ไมโครลิตร และ 1 ไมโครลิตร cDNA ในจานปฏิกิริยา 48-หลุม การหมุนเวียนความร้อนดำเนินการโดยใช้เครื่อง PCR แบบเรียลไทม์ (Eco™ Real-Time PCR System, Illumine®, USA) โดยมีเงื่อนไขการปั่นจักรยานดังต่อไปนี้: 95 องศาเป็นเวลา 10 นาที ตามด้วย 40 รอบที่ 95 องศาเป็นเวลา 30 วินาที 50 องศาเป็นเวลา 30 วินาที และ 72 องศาเป็นเวลา 25 วินาที ความจำเพาะของปฏิกิริยา PCR ได้รับการยืนยันโดยการวิเคราะห์เส้นโค้งหลอมเหลวที่ 95 องศาเป็นเวลา 15 วินาที, 45 องศาเป็นเวลา 15 วินาที และ 95 องศาเป็นเวลา 15 วินาที ความจำเพาะของปฏิกิริยา PCR ได้รับการยืนยันโดยการวิเคราะห์เส้นโค้งหลอมเหลวที่ 95 องศาเป็นเวลา 15 วินาที, 45 องศาเป็นเวลา 15 วินาที และ 95 องศาเป็นเวลา 15 วินาที การหาปริมาณสัมพัทธ์ของการแสดงออกของยีนดำเนินการโดยใช้ยีน GAPDH ภายในตัวเป็นตัวควบคุมตามวิธี ΔΔCq

การเพาะเลี้ยงเซลล์และการรักษา

สายเซลล์เยื่อบุผิวท่อใกล้เคียงไตของมนุษย์ เซลล์ HK-2 ถูกคงรักษาไว้ใน DMEM ที่เสริมด้วย FBS 10 เปอร์เซ็นต์และยาปฏิชีวนะ (50 U/mL ของ penicillin และ 50 ug/mL streptomycin) ในตู้ฟักที่มี CO2 5 เปอร์เซ็นต์และ 95 เปอร์เซ็นต์ความชื้น 37 องศา

การทดสอบการวัด H2O2

ระดับ H2O2 ในเซลล์ HK-2 ถูกประเมินโดยใช้ ROS- Glo™ H2O2 Assay kit (Promega, USA) ตามโปรโตคอลที่จัดทำโดยผู้ผลิตชุดอุปกรณ์ เซลล์ HK-2 (1000 เซลล์) ใน 70 ไมโครลิตร DMEM ถูกใส่ลงในหลุมของไมโครไทเตอร์เพลต 96-หลุม หลังจากปล่อยให้เซลล์ยึดติดบนพื้นผิวผนัง DMEM 10 ไมโครลิตรจากหลุมของไมโครไทเทอร์เพลตถูกแทนที่ด้วยซิสพลาติน 10 ไมโครลิตร (25 ไมโครโมลาร์ใน DMEM) และเก็บไว้ในตู้ฟักเป็นเวลา 12 ชั่วโมง จากนั้น 10 ไมโครลิตร RVE ถูกเติมเพื่อทำให้ความเข้มข้นสุดท้าย 125, 250 และ 500 ไมโครกรัม/มิลลิลิตรใน DMEM และบ่มต่อไปอีก 12 ชั่วโมง หลังจากนั้น สารละลายพื้นผิว 20 ไมโครลิตร H2O2 และ 100 ไมโครลิตร ROS-Glo™ ถูกเพิ่มลงในแต่ละหลุม ปฏิกิริยาถูกบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 20 นาที สุดท้าย วัดการเรืองแสงโดยใช้ GloMax Luminometer (Promega, USA)

การวิเคราะห์ GC-MS

การวิเคราะห์ GC-MS ของ RVE (ละลายในเมทานอล) ถูกดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [30] โดยใช้ GCMS- QP2020 (SHIMADZU) ที่ประกอบรวมด้วยเครื่องเก็บตัวอย่างอัตโนมัติ (AOC{ {5}}s), เครื่องฉีดอัตโนมัติ (AOC-20i) และ Gas Chromatograph (GC-2010 Plus) ที่เชื่อมต่อกับแมสสเปกโตรมิเตอร์ที่ติดตั้ง SH-Rxi{{1{{ 37}}}}Sil MS capillary column (30 ม. × 0.25 µm ID × 0.25 µm DF) ฮีเลียมของก๊าซพาหะถูกรักษาไว้ที่อัตราการไหลคงที่ที่ 1.72 มล./นาที และปริมาตรการฉีด 5 ไมโครลิตรถูกควบคุมด้วยอัตราส่วนการแยกส่วน 10:1 อุณหภูมิของหัวฉีดอยู่ที่ 220 องศา อุณหภูมิของแหล่งกำเนิดไอออน 280 องศา อุณหภูมิเตาอบถูกตั้งโปรแกรมไว้ที่ 80 องศา (ค้างไว้ 2 นาที) โดยเพิ่มขึ้น 5 องศาต่อนาทีเป็น 150 องศา (เวลาคงค้าง 5.0 นาที) จากนั้น 5 องศา / นาที ถึง 280 องศา สิ้นสุดด้วยอุณหภูมิความร้อน 8 นาทีที่ 280 องศา มวลสเปกตรัมถูกถ่ายที่ 1.5 kV ด้วยช่วงการสแกน 0.5 วินาที และสุ่มตัวอย่างที่ช่วง 45–350 m/z ความล่าช้าของตัวทำละลายคือตั้งแต่ 0 ถึง 3 นาที และเวลาการทำงานของ GC-MS ทั้งหมดคือ 55 นาที ความเข้มข้นสัมพัทธ์ของสารประกอบที่ตรวจพบถูกวัดโดยการเปรียบเทียบพื้นที่พีคเฉลี่ยกับพื้นที่ทั้งหมด การตีความมวลสเปกตรัมใน GC-MS ดำเนินการโดยใช้ฐานข้อมูลสถาบันมาตรฐานและเทคโนโลยีแห่งชาติ (NIST) ซึ่งรวมถึง NIST08, NIST08 และ NIST14

การวิเคราะห์ทางสถิติ

การวิเคราะห์ทางสถิติดำเนินการโดย ANOVA ตามการทดสอบ T3 ของ Dunnett โดยใช้ซอฟต์แวร์ IBM SPPS (เวอร์ชัน 20) ข้อมูลถูกพูดชัดแจ้งเป็นค่าเฉลี่ย ± ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (SD) การเปรียบเทียบที่สำคัญได้รับการพิจารณาที่ p<0.05. all="" of="" the="" graphs="" were="" prepared="" using="" microsoft="" excel="" (version="">

ผลลัพธ์

การทดสอบฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระในหลอดทดลอง

แม้ว่าก่อนหน้านี้จะมีรายงาน RVE ว่ามีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ แต่เราได้ตรวจสอบฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดของเราอีกครั้งโดยใช้ความสามารถในการกำจัดอนุมูลอิสระ DPPH RVE ถูกทำให้เป็นกลางโดยขึ้นกับขนาดยา DPPH (รูปที่ 1) RVE เผยฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ ในหลอดทดลอง และค่า IC50 ที่คำนวณได้ของ RVE คือ 37.39 ± 1.89 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร

การวัดค่าครีเอตินีนในเลือด

ระดับครีเอตินีนในเลือดในหนูเมาส์มีนัยสำคัญ (p < {0}}.05)="" เพิ่มขึ้นหลังการให้ซิสพลาติน="" (ตารางที่="" 2)="" การรักษาด้วย="" rve="" อย่างน่าทึ่ง="" (p="">< 0.05)="" ทำให้ระดับครีเอตินีนดีขึ้นในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา="" (ตารางที่="">

การวัดค่าเปอร์ออกซิเดชันของไขมันในไต

เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม ซิสพลาติน (p < {0}}.05)="" ได้เพิ่มเนื้อหา="" mda="" ในเนื้อเยื่อไตของหนูอย่างมาก="" (ตารางที่="" 3)="" ในทางตรงกันข้าม="" การรักษาด้วย="" rve="" อย่างมาก="" (p="">< 0.05)="" ทำให้="" mda="" กลับคืนสู่สภาพปกติเกือบปกติในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา="" (ตารางที่="">

PCR แบบเรียลไทม์

ซิสพลาตินอย่างมีนัยสำคัญ (p <{0}}.05) ลดการแสดงออกของ="" nqo1="" mrna="" ลง="" 0.15-พับและเพิ่ม="" p53="" และ="" bcl-2="" mrna="" นิพจน์โดย="" 24="" และ="" 4.2-เท่า="" ตามลำดับ="" (รูปที่="" 2)="" rve="" อย่างมาก="" (p="">< 0.05)="" ลดการแสดงออกของ="" nqo1,="" p53="" และ="" bcl-2="" mrna="" ในรูปแบบที่ขึ้นกับขนาดยา="" (รูปที่="" 2)="" เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มที่บำบัดด้วยซิสพลาตินเพียงกลุ่มเดียว="" การแสดงออกของ="" nqo1="" mrna="" เพิ่มขึ้น="" 3.57,="" 6.36="" และ="" 9.28-เท่าที่="" 25,="" 50="" และ="" 100="" มก./กก.="" rve="" ตามลำดับ="" (รูปที่="" 2a)="" อีกครั้ง="" การแสดงออกของ="" p53="" mrna="" ลดลง="" 0.63,="" 0.46="" และ="" 021-เท่าที่="" rve="" 25,="" 50="" และ="" 100="" มก./กก.="" ตามลำดับ="" (รูปที่="" 2b)="" การแสดงออกของ="" bcl-2="" mrna="" ยังลดลง="" 0.71,="" 0.40="" และ="" 0="" 32-เท่าที่="" 25,="" 50="" และ="" 100="" มก./กก.="" rve="" ตามลำดับ="" (รูปที่="" 2c)="" แต่ไม่พบการเปลี่ยนแปลงที่มีนัยสำคัญ="" (p=""> 0.05) ในระดับการแสดงออกของยีน NQO1, p53 และ Bcl-2 เนื่องจากการรักษาด้วย RVE (รูปที่ 3)

H₂O₂การทดสอบการวัด

ในการทดสอบการวัด H2O2 H₂O₂ระดับถือว่าได้สัดส่วนกับการเรืองแสง การบริหารให้ซิสพลาตินอย่างมีนัยสำคัญ (p < {{0}}.05)="" เพิ่มระดับ="" h2o2="" ขึ้น="" 2.2-เท่า="" (รูปที่="" 4)="" การรักษาด้วย="" rve="" ลดลงอย่างมาก="" (p="">< 0.05)="" ระดับ="" h2o2="" 0.25,="" 0.38="" และ="" 0.49-="" เท่าที่="" 125,="" 250="" และ="" 500="">

การวิเคราะห์ GC-MS

สารประกอบทั้งหมด 10 ชนิด (ตารางที่ 4 และรูปที่ 5) ซึ่งรวมถึง "ไอโซบอร์นอล, pentamethyldisilanyl ether (sesquiterpene alcohol)", "ไทมีน (ไพริมิดีน นิวคลีโอเบส)", "4H-Py-ran-4-หนึ่ง, 2,{{ 8}}ไดไฮโดร-3,5-ไดไฮดรอกซี-6-เมทิล- (ซาโปนิน)", "กรดเฮกซาเดคาโนอิก, เมทิลเอสเทอร์ (กรดไขมันเมทิลเอสเทอร์)", "9,12- Octadecadienoic acid, methyl ester (fatty acid methyl ester)", "9-Octadecenoic acid (Z)-, methyl ester (fatty acid methyl ester)", "Methyl stearate (fatty acid methyl ester)", "ไดไอโซคทิลพทาเลต (ester)", "13-Docosenamide, (Z)- (alkaloid)" และ "Squalene (tri-terpene)" ตรวจพบใน RVE

ประโยชน์ของ cistanche tubolosa: ลดไขมันในเลือด

การอภิปราย

สารต้านอนุมูลอิสระจากธรรมชาติและสารสังเคราะห์ได้รับการศึกษาอย่างละเอียดถี่ถ้วนและเปิดเผยว่าสามารถใช้ป้องกันหรือแก้ไขความเป็นพิษในสรีรวิทยาของสัตว์ได้ [31] สารเสริมสารต้านอนุมูลอิสระเป็นส่วนประกอบที่พัฒนาขึ้นโดยการสังเคราะห์ทางเคมีหรือโดยการสกัดจากอาหารธรรมชาติ แต่มีองค์ประกอบไม่เหมือนกันกับสารต้านอนุมูลอิสระที่มีอยู่ในอาหาร [5] ดังนั้น ความคิดเห็นจะถูกแยกออกจากกันเมื่อเวลาผ่านไปว่าสารต้านอนุมูลอิสระสังเคราะห์ให้ประโยชน์ต่อสุขภาพเช่นเดียวกับสารต้านอนุมูลอิสระตามธรรมชาติหรือไม่ [32] ความต้องการลดการใช้สารต้านอนุมูลอิสระสังเคราะห์เสริมและแสวงหาแหล่งสารต้านอนุมูลอิสระจากธรรมชาติที่มีประสิทธิผลทางเลือก ราคาถูก ทดแทนได้จากธรรมชาติ และอาจปลอดภัยกว่า

กลไกที่สำคัญที่สุดอย่างหนึ่งคือวิถีนิวเคลียสอีรีทรอยด์-2ปัจจัยที่เกี่ยวข้อง-2 (Nrf2) ซึ่งโดยทั่วไปจะปกป้องเซลล์จากความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันที่เกิดจากความเครียดจากภายนอกหรือภายในร่างกาย [27] สารต้านอนุมูลอิสระที่มีประสิทธิภาพกระตุ้นการแสดงออกของ Nrf2 ซึ่งเคลื่อนที่ต่อไปในนิวเคลียสและจับกับองค์ประกอบตอบสนองต่อสารต้านอนุมูลอิสระ (ARE) ที่กระตุ้นการแสดงออกของยีนล้างพิษระยะที่ 2 และยีนต้านอนุมูลอิสระ NQO1 [33, 34] NQO1 แสดงออกอย่างกว้างขวางและแตกต่างกันในลักษณะจำเพาะเนื้อเยื่อ NQO1 เป็นฟลาโวโปรตีนสารต้านอนุมูลอิสระในเซลล์ที่กระตุ้น 2-การลดอิเล็กตรอนของควิโนนให้เป็นไฮโดรควิโนน ส่งผลให้เกิดการล้างพิษของอิเล็กโตรไฟล์และคาดว่าจะมีการปั่นจักรยานรีดอกซ์ [35] จากการศึกษาก่อนหน้านี้ [36], -lapachone เปิดใช้งาน NQO1 ซึ่งเพิ่มระดับ NAD ภายในเซลล์และปกป้องไตจากการบาดเจ็บเฉียบพลันที่เกิดจากซิสพลาติน

เป็นที่ทราบกันดีว่าซิสพลาตินก่อให้เกิดความเสียหายในเมมเบรนกรองไตผ่านความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน การอักเสบ และการตายของเซลล์ ซึ่งส่งผลให้อัตราการกรองไตลดลงและสูญเสียการซึมผ่านของเมมเบรนตามปกติ [37] ดังนั้นระดับครีเอตินีนในซีรัมจึงเพิ่มขึ้น creatinine ในซีรัมเป็นหนึ่งในตัวบ่งชี้การทำงานของไตที่อาจเกิดขึ้น การรักษาด้วย Cisplatin เพิ่มเนื้อหา MDA ในเนื้อเยื่อไตซึ่งเป็นผลิตภัณฑ์รองของ lipid peroxidation และรายงานนี้คงที่กับการศึกษาก่อนหน้านี้ [27, 35, 37, 38] การรักษาด้วย RVE ช่วยลดปริมาณ MDA ในเนื้อเยื่อไตได้อย่างมีนัยสำคัญ ในขณะเดียวกัน ระดับครีเอตินีนก็ลดลงเช่นกัน ซึ่งบ่งชี้ถึงผลการรักษาของ RVE

นอกจากนี้ การแสดงออกของ NQO1 ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ และการแสดงออก p53 และ Bcl-2 เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญหลังจากการสัมผัสกับซิสพลาติน ในแง่ของการแสดงออกของ NQO1 และ p53 ในร่างกาย ผลลัพธ์ของเราสอดคล้องกับการศึกษาก่อนหน้า [13] การศึกษาเมื่อเร็วๆ นี้ [39] แสดงให้เห็นว่าซิสพลาตินลดการแสดงออกของ Bcl-2 ในไตของหนูทดลองอย่างมีนัยสำคัญ แต่เราพบว่าการแสดงออกที่เพิ่มขึ้นอย่างน่าประหลาดใจ ความแตกต่างนี้อาจเป็นผลมาจากความแตกต่างของขนาดยา [40] เนื่องจากโมฮาเหม็ดและเพื่อนร่วมงาน [39] ใช้ 8 มก./กก. เป็นเวลา 12 วัน ในขณะที่เราใช้ 2.5 มก./กก. เพียง 5 วัน การศึกษาอื่น [41] ระบุว่าซิสพลาตินอาจเพิ่มการแสดงออกของ Bcl-2 ในขนาดยาที่ไม่เป็นพิษต่อเซลล์ อีกครั้ง การแสดงออกของ Bcl ที่เพิ่มขึ้น-2 ทำให้เซลล์ไวต่อความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน [40]

อย่างไรก็ตาม การแสดงออกของ p53 นั้นต่ำในสภาวะทางสรีรวิทยาปกติ แต่คาดว่าจะได้รับการควบคุมเมื่อบำบัดด้วยซิสพลาตินเนื่องจากสารเคมีบำบัดที่มีแพลตตินัมนี้กระตุ้นวิถีอะพอพโทติกที่ขึ้นกับ p53 เมื่อเรารักษาหนูด้วยซิสพลาติน p53 เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในไตของหนูเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม โปรโต-ออนโคยีน Bcl-2 อีกตัวหนึ่งมีความสัมพันธ์กับระดับการแสดงออกของ NQO1 การเลียนแบบการแสดงออกของ p53 เรายังพบว่าระดับ Bcl- 2 เพิ่มขึ้นด้วยการรักษาด้วยซิสพลาติน แต่จะครอบคลุมอีกครั้งอย่างมีนัยสำคัญเมื่อทำการรักษาด้วย RVE สิ่งนี้เป็นไปได้ ในการตอบสนองต่อความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน ยีน p53 จะถูกกระตุ้นและส่งผลให้เกิดการจับกุมวงจรเซลล์ การชราภาพ หรือการตายของเซลล์ [6] ด้วยการล้างพิษ การแสดงออกของ NQO1 มากเกินไปมักจะสัมพันธ์กับการตายของเซลล์มะเร็ง [10] แม้ว่ากลไกพื้นฐานของการตายของเซลล์และการแสดงออกของ NQO1 ที่มากเกินไปยังคงเป็นที่ถกเถียงกันอยู่ นอกจากนี้ ในมะเร็งตับ การแสดงออกของ NQO1 มากเกินไปจะลดการแสดงออกของ Bcl-2 [10] Proto-oncogene Bcl- 2 ยังมี p53 เช่นความสัมพันธ์กับนิพจน์ NQO1 p53 เป็นปัจจัยการถอดรหัสเฉพาะลำดับที่ได้รับการกระตุ้นโดยความเครียดของเซลล์หลายประเภท [42] ในขณะที่การแสดงออกของ Bcl-2 ที่มากเกินไปทำหน้าที่เป็นตัวทำให้รูขุมขนไมโตคอนเดรียช่วยให้ปล่อย cytochrome-c เมื่อความเครียดออกซิเดชัน [12] ในกรณีของเรา เราตรวจสอบการตอบสนองของยีนทั้งสองด้วยการรักษาด้วยซิสพลาตินในเนื้อเยื่อไตปกติ และพบว่าการแสดงออกที่เพิ่มขึ้น การรักษาด้วย RVE เปลี่ยนการแสดงออกของ p53 และ Bcl-2 ให้เกือบปกติในรูปแบบที่ขึ้นกับขนาดยา การยกเลิกนิพจน์ Bcl-2 ประเภทนี้ยังแสดงโดยใช้ ROS scavenger Trolox [43] นอกจากนี้ ระดับ H2O2 ยังเพิ่มขึ้นอย่างเห็นได้ชัดในเซลล์ HK-2 เนื่องจากการบำบัดด้วยซิสพลาตินในหลอดทดลอง หลังการรักษาด้วย RVE ระดับ H2O2 กลับคืนสู่สภาพปกติอย่างมีนัยสำคัญ อาจเป็นเพราะผลของการบำบัดด้วย RVE ที่เพิ่มการแสดงออกของ NQO1 [44] ซึ่งป้องกันความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน [6]

โครมาโตแกรม GC-MS ยืนยันการมีอยู่ของสารประกอบ 10 ชนิดใน RVE ในกลุ่มเหล่านี้ "4H-Pyran- 4-หนึ่ง, 2, 3-ไดไฮโดร-3,5-ไดไฮดรอกซี-6-เมทิล-", "กรดเฮกซาเดคาโนอิก" และ " สควาลีน" เป็นสารต้านอนุมูลอิสระที่รู้จักกันดี[45–47] สารประกอบทั้งสามนี้อาจมีผลในการป้องกันไตที่เสริมฤทธิ์กัน การศึกษาก่อนหน้านี้ยังรายงานเกี่ยวกับการชักนำให้เกิดการแสดงออกของ NQO1 โดยวิตามินเอ [48] วิตามินซี [49] วิตามินอี [50] ฟลาโวนอยด์ [51] และโพลีฟีนอล [50] ดังนั้น รายงานนี้จึงแนะนำการชี้แจงว่าสารสกัดเฉพาะนี้ประกอบด้วยวิตามินเอ วิตามินซี วิตามินอี ฟลาโวนอยด์ และโพลีฟีนอลหรือไม่

บทสรุป

การค้นพบโดยรวมชี้ให้เห็นว่า RVE มีประสิทธิภาพทางสรีรวิทยาในการปกป้องไตจากความเสียหายที่เกิดจากซิสพลาติน ดังนั้นจึงเป็นเรื่องสำคัญที่จะต้องอธิบายให้กระจ่างถึงสารประกอบที่แน่นอนซึ่งมีหน้าที่ในการบรรเทาพิษต่อไตที่เกิดจากซิสพลาติน ซึ่งอาจเป็นประโยชน์ต่อการใช้งานของมนุษย์

สารสกัดจากซิสแทนเช่ทูโบโลซ่า

รับทราบ

ผู้เขียนรู้สึกขอบคุณสภาวิจัยวิทยาศาสตร์และอุตสาหกรรมแห่งบังคลาเทศ (BCSIR) สาขาราชชาฮีที่ให้การสนับสนุนห้องปฏิบัติการเพื่อหาปริมาณอาร์เอ็นเอ

ผลงานของผู้เขียน

MMH ดำเนินการออกแบบทดลอง ทดลอง วิเคราะห์ข้อมูลและเตรียมการ การเขียนและแก้ไขต้นฉบับ การแก้ไขและร่างต้นฉบับ MST & MME ทำการทดลองและวิเคราะห์ข้อมูล AME & MAR มีส่วนร่วมในการกำกับดูแลและทรัพยากร AH มีหน้าที่รับผิดชอบในการกำหนดแนวคิด การกำกับดูแล ทรัพยากร และการแก้ไขต้นฉบับ ผู้เขียนทั้งหมด

ได้ทบทวนต้นฉบับ ผู้เขียนอ่านและอนุมัติต้นฉบับสุดท้าย

เงินทุน

งานปัจจุบันได้รับทุนจากโครงการสนับสนุนนักวิจัยของมหาวิทยาลัย Taif (TURSP - 2020/75) มหาวิทยาลัย Taif เมือง Taif ประเทศซาอุดีอาระเบีย

ความพร้อมใช้งานของข้อมูลและวัสดุ

ข้อมูลที่เกี่ยวข้องทั้งหมดมีอยู่และสามารถให้ตามคำขอกับผู้เขียนที่เกี่ยวข้อง

ประกาศ

การอนุมัติจริยธรรมและการยินยอมให้เข้าร่วม

จริยธรรมในการดำเนินการทดลองนี้ได้รับการอนุมัติโดย Institutional Animal, Medical Ethics, Biosafety และ Biosecurity Committee (IAMEBBC), Institute of Biological Sciences (IBSc), University of Rajshahi และจัดทำภายใต้บันทึกหมายเลข 31/{{1} }IAMEBBC/IBSc. วิธีการทั้งหมดได้ดำเนินการตามแนวทางและระเบียบที่คณะกรรมการจริยธรรมดังกล่าวกำหนดไว้ การศึกษานี้ดำเนินการตามแนวทาง ARRIVE (การวิจัยในสัตว์: การรายงานการทดลองใน Vivo) "ความยินยอมในการเข้าร่วม" ไม่สามารถใช้กับการศึกษานี้ได้

รายละเอียดผู้แต่ง

1ห้องปฏิบัติการอณูชีววิทยาและวิทยาศาสตร์โปรตีน ภาควิชาพันธุวิศวกรรมและเทคโนโลยีชีวภาพ คณะชีวิตและธรณีศาสตร์ มหาวิทยาลัยราชชาฮี ราชชาฮี 6205 บังกลาเทศ 2Molecular Pathology Laboratory, Institute of Biological Sciences, University of Rajshahi, Rajshahi 6205, บังคลาเทศ. 3ภาควิชาเทคโนโลยีชีวภาพ วิทยาลัยวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัย Taif ตู้ ปณ. 11099 อัฏฏออิฟ 21944 ซาอุดีอาระเบีย 4ภาควิชาพันธุศาสตร์ คณะเกษตร มหาวิทยาลัยอเล็กซานเดรีย อเล็กซานเดรีย 21545 อียิปต์

อ้างอิง

1. Bagchi K, Puri S. อนุมูลอิสระและสารต้านอนุมูลอิสระในด้านสุขภาพและโรค: บทวิจารณ์ East Mediterr Health J. 1998;4:350–60.

2. เกาะ EM, Lee EK, Song CH, Song J, Chung HY, Chae CH, et al. Ferulate ซึ่งเป็นส่วนประกอบสำคัญของจมูกข้าวสาลี ช่วยเยียวยาความไม่สมดุลของ PTK/ PTP ที่เกิดจากความเครียดออกซิเดชันและการหยุดทำงานของ PP2A สารพิษ 2018;34(4):333–41.

3. ฮัสซัน เอไอ, อิบราฮิม RY โปรไฟล์ทางพันธุกรรมบางอย่างในตับของ Ehrlich ทำให้หนูที่เป็นเนื้องอกในช่องท้องภายใต้ความเครียดจากการฉายรังสี J Radiat Res Appl วิทย์ 2014;7(2):188–97.

4. Zhou FL, Zhang WG, Wei YC, Meng S, Bai GG, Wang BY, และคณะ การมีส่วนร่วมของความเครียดออกซิเดชันในการกำเริบของมะเร็งเม็ดเลือดขาวชนิดเฉียบพลันแบบมัยอีลอยด์ เจ ไบโอล เคม. 2010;285(20):15010–5.

5. Pham-Huy LA, He H, Pham-Huy C. อนุมูลอิสระ สารต้านอนุมูลอิสระในโรคและสุขภาพ Int J Biomed วิทย์ 2008;4:89–96.

6. Srijiwangsa P, Na-Bangchang K. บทบาทของ NAD (P) H-quinone oxidoreductase 1 (NQO1) ต่อการลุกลามของมะเร็งและเคมีบำบัด เจ คลีน เอ็กซ์พี ออนคอล 2017;6:1–6.

7. Siegel D, Yan C, Ross D. NAD (P) H: quinone oxidoreductase 1 (NQO1) ในความไวและความต้านทานต่อ quinones ต้านเนื้องอก ไบโอเคมี ฟาร์มาคอล. 2012;83(8):1033–40.

8. Dinkova-Kostova AT, Talalay P. NAD (P) H: quinone acceptor oxidoreductase 1 (NQO1) เอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระอเนกประสงค์และ cytoprotection ที่หลากหลายเป็นพิเศษ Arch Biochem Biophys. 2010;501(1):116–23.

9. Cullen JJ, Hinkhouse MM, Grady M, Gaut AW, Liu J, Zhang YP และอื่น ๆ การยับยั้ง Dicumarol ของ NADPH: quinone oxidoreductase กระตุ้นการยับยั้งการเจริญเติบโตของมะเร็งตับอ่อนผ่านกลไกที่อาศัย superoxide-mediated มะเร็ง Res. 2003;63(17):5513–20.

10. Zhang X, Han K, Yuan DH, Meng CY. การแสดงออกที่มากเกินไปของ NAD (P) H: quinone oxidoreductase 1 ยับยั้งการเพิ่มจำนวนเซลล์มะเร็งตับและทำให้เกิดการตายของเซลล์โดยการกระตุ้นวิถี AMPK/PGC-1 ดีเอ็นเอ เซลล์ ไบโอล. 2017;36(4):256–63.

11. Zeekpudsa P, Kukongviriyapan V, Senggunprai L, Sripa B, Prawan A. การปราบปราม NAD (P) H-quinone oxidoreductase 1 เพิ่มความอ่อนแอของเซลล์มะเร็งท่อน้ำดีต่อสารเคมีบำบัด J Exp Clin Cancer Res. 2014;33(1):1– 13

12. Dasari S, Tchounwou PB. Cisplatin ในการรักษามะเร็ง: กลไกการออกฤทธิ์ของโมเลกุล เออ เจ. ฟาร์มาคอล. 2014;740:364–78.

13. Zhu X, Jiang X, Li A, Zhao Z, Li S. S-Allylmercaptocysteine ​​ช่วยลดความเป็นพิษต่อไตที่เกิดจากซิสพลาตินผ่านการปราบปรามของการตายของเซลล์ ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน และการอักเสบ สารอาหาร 2017;9(2):166.

14. Matkowski A. พืชในหลอดทดลองเพื่อผลิตสารต้านอนุมูลอิสระ—บทวิจารณ์ เทคโนโลยีชีวภาพ Adv. 2008;26(6):548–60.

15. El-Bakry AA, Mostafa HAM, Alam EA ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของ Rumex vicarious L. ในระยะการเจริญเติบโตทางพืช Asian J Pharm Clin Res. 2012;5:111–7.

16. Rechinger KH. Rumex (Polygonaceae) ในออสเตรเลีย: การพิจารณาใหม่ นุตเซีย. 1984;5:75– 122.

17. Shahat AA, Alsaid MS, Alyahya MA, Higgins M, Dinkova-Kostova AT NAD (P) H: ฤทธิ์กระตุ้น Quinone oxidoreductase 1 ของพืชสมุนไพรบางชนิดในซาอุดิอาระเบีย แพลนตา เมด. 2013;79(06):459–64.

18. El-Hawary SA, Sokkar NM, Ali ZY, Yehia MM. โพรไฟล์ของสารออกฤทธิ์ทางชีวภาพของ Rumex vicarious L. J Food Sci. 2011;76(8): C1195–202.

19. Barbosa-Filho JM, Alencar AA, Nunes XP, Tomaz AC, Sena-Filho JG, Athayde- Filho PF และอื่น ๆ แหล่งที่มาของ alpha-, beta-, gamma-, delta- และ epsilon-carotenes: การทบทวนในศตวรรษที่ยี่สิบ รศ.ยกทรง 2008;18(1):135–54.

20. Laouini SE, Ouahrani MR. การตรวจไฟโตเคมิคอล สารต้านอนุมูลอิสระในหลอดทดลอง และฤทธิ์ต้านแบคทีเรียของสารสกัด Rumex vicarious L. วิทยาศาสตร์ศึกษา Res: Chem Chem Engi เทคโนโลยีชีวภาพอาหาร Ind. 2017;18:367–76.