เครื่องหมายคุณภาพของ Cistanches Herba ตามความสัมพันธ์ระหว่างสเปกตรัมและผลของสารต้านอนุมูลอิสระ

เชิงนามธรรม

วัตถุประสงค์: เพื่อสร้างวิธีการวิจัยสำหรับเครื่องหมายคุณภาพ (Q-markers) ของซิแทนเชส เฮอร์บา(CH)ขึ้นอยู่กับความสัมพันธ์ระหว่างผลกระทบของสเปกตรัมต่อสารต้านอนุมูลอิสระซึ่งเป็นพื้นฐานสำหรับการศึกษาสารทางเภสัชวิทยาและการควบคุมคุณภาพ วิธีการ: ใช้โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงพิเศษ (UPLC) เพื่อสร้างโปรไฟล์ลายนิ้วมือสำหรับ CH 10 ชุด แบบจำลองความเสียหายออกซิเดชันของเซลล์ถูกสร้างขึ้นโดยใช้ H2O2 และความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระของ CH ถูกกำหนดโดยขึ้นอยู่กับความเข้มข้นในการยับยั้งครึ่งหนึ่งสูงสุดของสายพันธุ์ออกซิเจนที่เกิดปฏิกิริยา เช่นเดียวกับระดับของซูเปอร์ออกไซด์ดิสมิวเตสและคาตาเลสเป็นตัวบ่งชี้ทางเภสัชวิทยา ความสัมพันธ์ระหว่างผลกระทบของสเปกตรัมถูกสร้างขึ้นผ่านการวิเคราะห์องค์ประกอบหลัก การวิเคราะห์สหสัมพันธ์แบบเพียร์สัน และการวิเคราะห์การถดถอยกำลังสองน้อยที่สุดบางส่วน ส่วนประกอบที่ใช้งานอยู่อยู่ภายใต้การตรวจสอบทางเภสัชวิทยา ผลลัพธ์: โปรไฟล์ลายนิ้วมือสำหรับ CH ถูกสร้างขึ้นโดยใช้ UPLC โดยระบุพีคทั่วไป 17 จุด จากการวิเคราะห์ความสัมพันธ์ระหว่างสเปกตรัมและผลกระทบของสเปกตรัม มีการเลือกองค์ประกอบเก้าองค์ประกอบ ผลการตรวจสอบความถูกต้องทางเภสัชวิทยาระบุว่ากรดเจนิโพซิดิก 8-กรดอีพิโลกานิกเอชินาโคไซด์, แอกทีโอไซด์,ไอโซแอคทีโอไซด์, และทูบูโลไซด์ เอมีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระในลักษณะที่ขึ้นกับความเข้มข้น สรุป: การศึกษานี้สำรวจเครื่องหมาย Q สำหรับ CH ตามความสัมพันธ์ของสเปกตรัม-ผลกระทบของ โดยให้ข้อมูลอ้างอิงสำหรับรากฐานของสารทางเภสัชวิทยาและการปรับปรุงมาตรฐานคุณภาพ

คำสำคัญ:ซิแทนเชส เฮอร์บา- เครื่องหมาย Q;ความสัมพันธ์ระหว่างสเปกตรัมและผลกระทบของสเปกตรัม- สารต้านอนุมูลอิสระ

สารสกัดซิสแทนช์ออร์แกนิกที่มีเอไคนาโคไซด์ 30% และแอคทีโอไซด์ 12% สำหรับการทำงานของไต

ซิสแทนเช่เป็นลำต้นเนื้อแห้งมีใบเป็นสะเก็ดของ Cistanche Deserticola YCMa หรือ Cistanche tubulosa (Schenk) Wight ซึ่งเป็นพืชในสกุล Cistanche ในวงศ์ Orobanchiaceae ได้รับการบันทึกครั้งแรกใน "Materia Medica ของ Shen Nong" และได้รับการจัดอันดับให้เป็นเกรดสูงสุด [1] มีลักษณะอบอุ่น มีรสหวานและเค็ม มันกลับไปที่ไตและเส้นเมอริเดียนของลำไส้ใหญ่ มีฤทธิ์ในการบำรุงหยางไต เติมสาระสำคัญและเลือด ทำให้ลำไส้ชุ่มชื้นและเป็นยาระบาย และเป็นยาสำคัญในการบำรุงไตและเติมสาระสำคัญ [2-3] ไตกักเก็บแก่นแท้ และแก่นแท้และเลือดมาจากแหล่งเดียวกัน หากสาระสำคัญและเลือดไม่เพียงพอ จะส่งผลต่อกิจกรรมในชีวิตโดยรวมของร่างกายมนุษย์ ไขกระดูกที่ผลิตแก่นแท้จะถูกเก็บไว้ในกระดูก และสมองคือทะเลแห่งไขกระดูก หากสาระสำคัญของไตไม่เพียงพอ กระดูกจะสูญเสียสารอาหารและสมองจะไม่เพียงพอ ส่งผลให้เกิดการเปลี่ยนแปลงของความเสื่อมของกระดูก เช่น เนื้อสัมผัสหลวม สูญเสียฟัน สูญเสียความทรงจำ ภาวะสมองเสื่อม และการทำงานของระบบภูมิคุ้มกันลดลง [4-6] Cistanche Deserticola ประกอบด้วยฟีนิลเอธานอลไกลโคไซด์ ไอริดอยด์ ลิกแนน และส่วนประกอบทางโครงสร้างอื่นๆ รวมถึงเอ็กไคนาซีไซด์ เวอร์บาสโคไซด์ ไอซอร์บาสโคไซด์ กรดเจนิปินิก และกรดอีพิสโตรยานิก 8- , ทูบูลิน เอ เป็นต้น [7] การควบคุมคุณภาพในปัจจุบันของ Cistanche Deserticola ใน "เภสัชตำรับของสาธารณรัฐประชาชนจีน" ฉบับปี 2020 กำหนดเพียงเนื้อหาของเอ็กไคนาซีไซด์และเวอร์บาสโคไซด์ ซึ่งไม่สามารถสะท้อนลักษณะการออกฤทธิ์ที่มีหลายองค์ประกอบและหลายเป้าหมายของการแพทย์แผนจีนได้อย่างสมบูรณ์ ซึ่งไม่เอื้อต่อการควบคุมและประเมินคุณภาพ

เพื่อที่จะปรับปรุงระดับการควบคุมคุณภาพของการแพทย์แผนจีนและเพิ่มประสิทธิภาพการประเมินคุณภาพของการแพทย์แผนจีน นักวิชาการ Liu Changxiao ได้เสนอแนวคิดใหม่ของเครื่องหมายคุณภาพ (Q-marker) ของการแพทย์แผนจีน [8] ในบรรดาสิ่งเหล่านั้น "ประสิทธิผล" เป็นองค์ประกอบหลักใน "หลักการห้าประการ" ของ Q-marker [9] และยังเป็นแกนหลักของการประเมินคุณภาพของยาจีนโบราณอีกด้วย

เมื่อพิจารณาจากสถานะการวิจัยในปัจจุบันที่มีความสัมพันธ์ที่ไม่ดีระหว่างมาตรฐานคุณภาพและประสิทธิภาพของยา การสำรวจเครื่องหมาย Q ของยาจีนโบราณและการสร้างมาตรฐานคุณภาพทางวิทยาศาสตร์และสมเหตุสมผลมากขึ้น จึงมีความสำคัญอย่างยิ่งในการปรับปรุงคุณภาพของยาจีนโบราณ ความสัมพันธ์ระหว่างสเปกตรัมและผลกระทบของสเปกตรัมคือการเชื่อมโยงจุดสูงสุดของโครมาโตกราฟีลายนิ้วมือของการแพทย์แผนจีนกับข้อมูลทางเภสัชพลศาสตร์ที่เฉพาะเจาะจง เพื่อค้นหาสารที่มีประสิทธิภาพของการแพทย์แผนจีน ซึ่งสะท้อนถึงคุณภาพโดยธรรมชาติของการแพทย์แผนจีน [10] การสร้างแบบจำลองทางคณิตศาสตร์ที่มีประสิทธิภาพเชิงสเปกตรัมสามารถชี้แจง QMarker ของการแพทย์แผนจีนได้จากมุมมอง "มุมมองแบบองค์รวม" โดยให้การอ้างอิงเพิ่มเติมสำหรับการควบคุมคุณภาพยาแผนจีนในภายหลัง การกำหนดมาตรฐานคุณภาพ และการคัดกรองส่วนผสมออกฤทธิ์ การศึกษานี้ใช้ลายนิ้วมือรวมกับอัตราการยับยั้งครึ่งหนึ่งของสายพันธุ์ออกซิเจนปฏิกิริยา (ROS IC50) เนื้อหาของซูเปอร์ออกไซด์ดิสมิวเตส (SOD) และคาตาเลส (CAT) เพื่อศึกษาความสัมพันธ์ระหว่างผลกระทบของสเปกตรัมของการแพทย์แผนจีน และใช้การวิเคราะห์องค์ประกอบหลัก (PCA) ) การวิเคราะห์สหสัมพันธ์แบบเพียร์สัน (PCC) และการวิเคราะห์การถดถอยกำลังสองน้อยที่สุดบางส่วน (PLS) เพื่อวิเคราะห์เครื่องหมาย Q ของ Cistanche Deserticola อย่างครอบคลุมเพื่อเป็นพื้นฐานสำหรับการควบคุมคุณภาพ

1 วัสดุ

1.1 ตัวอย่าง

ซิสตานเช่ เดซินิโกลาเก็บเกี่ยวจากเทศมณฑลยูเถียน ซินเจียง และฐานการปลูก Cistanche Deserticola Good Agricultural Practice (GAP) ในประเทศมองโกเลียใน นักวิจัย Zhang Tiejun แห่ง Tianjin Pharmaceutical Research Institute Co., Ltd. ระบุชื่อดังกล่าวว่า Cistanche tubulosa (Schenk) Wight และ Cistanche Deserticola

YC Ma ข้อมูลรายละเอียดแสดงไว้ในตารางที่ 1

1.2 ทดสอบยา

เอ็กไคนาเซียไซด์ (หมายเลขแบทช์: 111670-201907 ความบริสุทธิ์: 91.8%) และเวอร์บาสโคไซด์ (หมายเลขแบทช์: 111530-201914 ความบริสุทธิ์: 95.2%) ถูกซื้อจากสถาบันควบคุมอาหารและยาแห่งประเทศจีน ไอโซเรสโคไซด์ (หมายเลขแบทช์: 61303-13 -7), ซาลิโดรไซด์ (หมายเลขแบทช์: 10338-51-9), 8-กรดอีพิสทรีโนอิก (หมายเลขแบทช์: 82509-41-9), กรดเจนิพินิก (หมายเลขแบทช์: Z24A10X95926) , ทูเบโรซิน B (หมายเลขแบทช์: 112516-04-08), 2-acetyl eugenol glycoside (หมายเลขแบทช์: 94492-24-7) ถูกซื้อจาก Shanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd., ความบริสุทธิ์มากกว่าหรือเท่ากับ 98%; Cistanche glycoside A (หมายเลขแบทช์: MUST -20062806, ความบริสุทธิ์: 98.51%) และ vasculin A (หมายเลขแบทช์: MUST19110102, ความบริสุทธิ์: 98.57%) ถูกซื้อจาก Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd.; ซื้ออะซิโตไนไตรล์บริสุทธิ์และกรดฟอร์มิกจากโครมาโตกราฟีจากบริษัท Tianjin Concord Technology Co., Ltd. น้ำบริสุทธิ์ (Hangzhou Wahaha Group Co., Ltd.) วิตามินอี (VE, V8010, บริษัท Beijing Solarbio);

ไดเมทิลซัลฟอกไซด์ (DMSO, D2660-100ML, Sigma Company, USA); ชุดตรวจจับการเพิ่มจำนวนเซลล์ CellTiter 96® AQueous โซลูชันเดียว (G3580, บริษัท Promega, สหรัฐอเมริกา); ซื้อชุดตรวจจับ CAT (S0051), ชุดตรวจจับกิจกรรม SOD S0101M ) และชุดตรวจจับ ROS (S0033S) จาก Shanghai Biyuntian Biotechnology Co., Ltd.

1.3 เครื่องมือ

Waters H-class-PDA โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงพิเศษ (Waters Company, USA); เครื่องชั่งอิเล็กทรอนิกส์ Sartorius BT25S (บริษัท Sartorius ประเทศเยอรมนี); เครื่องหมุนเหวี่ยงเดสก์ท็อปความเร็วสูง H1650 (Hunan Xiangyi Laboratory Instrument Development Co., Ltd.); สเปคตร้าแมกซ์ M5

เครื่องอ่านไมโครเพลท (Meigu Molecular Instrument Co., Ltd.); WYS-41กล้องจุลทรรศน์ชีวภาพ XDY (Tianjin Micro-Instrument Optical Instrument Co., Ltd.)

1.4 เซลล์

เซลล์ไตของตัวอ่อนมนุษย์ HEK 293 ถูกนำมาใช้ในการทดลองนี้และซื้อจากธนาคารเซลล์ของ Chinese Academy of Sciences

2 วิธี

2.1 การจัดทำแผนที่ลายนิ้วมือ

2.1.1 การเตรียมสารละลายทดสอบ: ชั่งน้ำหนักวัสดุยา Cistanche Deserticola 2 กรัม เติมน้ำ ความร้อน และกรดไหลย้อน 10 เท่า 3 ครั้ง ครั้งละ 1 ชั่วโมง ปั่นเหวี่ยงที่ 10 ×105r·นาที-1 เป็นเวลา 15 นาที (รัศมีแรงเหวี่ยงคือ 300 มม.) รวมส่วนลอยเหนือตะกอนและทำให้เข้มข้นเพื่อสร้างสารละลายสต๊อกที่มีความเข้มข้นของมวล 100 มก.·มล.-1 เจือจาง 10 ครั้ง และกรองผ่านเมมเบรนกรองที่มีรูพรุนขนาดเล็ก 0.22 µm เพื่อให้ได้ค่าดังกล่าว

2.1.2 การเตรียมสารละลายอ้างอิงแบบผสม

รับประทาน 8-กรดอีปิสทริชินิก, ซาลิโดรไซด์, เอชินาซีไซด์, ซิสแทนชี่ ไกลโคไซด์ เอ, กรดเจนิพินิก, เวอร์บาสโคไซด์, แอนโธไซยาโนไซด์ เอ, ไอซอร์บาสโคไซด์ และ 2'-อะซิติล ยูจีนอล สารอ้างอิงไกลโคไซด์และแอนจิโอไซด์ B ถูกวัดในปริมาณที่เหมาะสมและชั่งน้ำหนักอย่างแม่นยำ เติมสารละลายเมทานอล 50% เพื่อละลายและเตรียมสารละลายอ้างอิงแบบผสมที่มีความเข้มข้นของมวล 20 µg·mL–1

2.1.3 เงื่อนไขโครมาโตกราฟี

ACQUITY UPLC®BEH C18 คอลัมน์ (100 มม. × 2.1 มม., 1.7 ไมโครเมตร); เฟสเคลื่อนที่คืออะซีโตไนไตรล์ (A) ~ 0.1% สารละลายกรดฟอร์มิก (B), โปรแกรมการชะล้างแบบเกรเดียนต์ (0 ~ 6 นาที, 5% ~ 8% A ; 6~10 นาที, 8%~15%A ; 10~13 นาที, 15%~19%เอ, 13~20 นาที, 19%~25%เอ); ความยาวคลื่นการตรวจจับคือ 237 นาโนเมตร; อัตราการไหลคือ 0.4 มล.·นาที –1; อุณหภูมิของคอลัมน์คือ 40 องศา ; ปริมาตรการฉีดคือ 3 µL

2.1.4 การเลือกจุดสูงสุดอ้างอิง

ในโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงพิเศษ (UPLC) ของ Cistanche Deserticola พีคที่มีอัตราส่วนพื้นที่พีคที่ใหญ่ที่สุด เวลาคงอยู่ปานกลาง และการแยกที่ดีได้รับเลือกเป็นพีคอ้างอิงของสเปกตรัมลายนิ้วมือ

2.1.5 การทบทวนระเบียบวิธี

การทดสอบความแม่นยำ: นำตัวอย่าง T1 และเตรียมสารละลายทดสอบตามวิธีตามข้อ 2.1.1 ฉีดตัวอย่างต่อเนื่อง 6 ครั้ง แล้วบันทึกลายนิ้วมือ ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่าพื้นที่พีคสัมพัทธ์ RSD ของแต่ละพีคคือ 0.10%~4.61% และระยะเวลาการเก็บรักษาสัมพัทธ์ RSD อยู่ที่ 0.08%~1.32% ซึ่งบ่งชี้ว่าเครื่องมือมีคุณภาพดี ความแม่นยำ

การทดสอบความสามารถในการทำซ้ำ: นำตัวอย่าง T1 และเตรียมสารละลายทดสอบ 6 ตัวอย่างพร้อมกันตามวิธีภายใต้ 2.1.1 และฉีดตัวอย่างอย่างต่อเนื่อง ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่าพื้นที่พีคสัมพัทธ์ RSD ของแต่ละพีคของโครมาโตกราฟีคือ 1.35%~4.80% และเวลาคงอยู่สัมพัทธ์ RSD คือ 0.10%~1.80% ซึ่งตรงตามข้อกำหนดของลายนิ้วมือและแสดงให้เห็นว่าความสามารถในการทำซ้ำ ของเครื่องดนตรีก็ดี

การทดสอบความเสถียร: นำตัวอย่าง T1 และเตรียมสารละลายทดสอบตามวิธีภายใต้ 2.1.1 ฉีดตัวอย่างเพื่อการทดสอบที่ 0, 2, 4, 8 และ 12 ชั่วโมง และบันทึกลายนิ้วมือ RSD ที่คำนวณได้ของพื้นที่พีคสัมพัทธ์ของแต่ละพีคของโครมาโตกราฟีคือ 0.53%~4.82% และ RSD ของเวลาคงอยู่สัมพัทธ์คือ 0.09%~2.17% ซึ่งตรงตามข้อกำหนด ของลายนิ้วมือและระบุว่าผลิตภัณฑ์ทดสอบมีความคงตัวภายใน 12 ชั่วโมง

2.2 งานวิจัยเกี่ยวกับฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของ Cistanche Deserticola

2.2.1 การเตรียมสุราแม่ Cistanche Deserticola

นำเหล้าแม่ตามข้อ 2.1.1 กรองฆ่าเชื้อ แล้วเจือจางด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อตามความเข้มข้นที่ต้องการก่อนนำไปใช้

2.2.2 Cistanche Deserticola และการควบคุมเชิงบวก

ผลของ VE ต่อการมีชีวิตของเซลล์ HEK 293 ถูกตั้งค่าเป็นกลุ่มปกติ (สารแขวนลอยของเซลล์), กลุ่มการบริหารยา Cistanche Deserticola (25, 50, 100, 200, 400 µg·mL–1), กลุ่ม VE (20, 40, 60 , 80, 100 ไมโครโมล·L–1) ตั้งค่า 6 หลุมที่ซ้ำกันสำหรับแต่ละความเข้มข้น เพาะเลี้ยงเป็นเวลา 24 ชั่วโมง เติมรีเอเจนต์สารละลายเดี่ยว CellTiter 96® AQueous 20 ไมโครลิตรลงในแต่ละหลุมเพื่อตรวจหาความมีชีวิตของเซลล์ เพาะเลี้ยงต่อเป็นเวลา 2 ชั่วโมง และใช้เครื่องอ่านไมโครเพลทเพื่อตรวจจับความมีชีวิตของเซลล์ที่ 490 นาโนเมตร ค่าการดูดกลืนแสง (OD) ของแต่ละหลุมถูกนำมาใช้ในการคำนวณอัตราการรอดชีวิตของเซลล์ตามสูตร (1) อัตราการรอดชีวิต (%)=(กลุ่มทดลอง OD/กลุ่มว่าง OD) × 100% (1)

2.2.3 Cistanche Deserticola ในการเหนี่ยวนำ H2O2

ผลของ ROS ต่อเซลล์ HEK 293 เซลล์ถูกแบ่งออกเป็นกลุ่มปกติ (เซลล์แขวนลอย) และกลุ่มการบริหารให้ Cistanche Deserticola (6.25, 12.5, 25, 50, 100 µg·mL–1 Cistanche Deserticola และ 60 µm·L–1 H2O2) และเพาะเลี้ยง 24 ชั่วโมง ทำตามขั้นตอนของชุดตรวจจับ ROS เพื่อดำเนินการในภายหลัง สังเกตการย้อมสีของเซลล์โดยตรงผ่านกล้องจุลทรรศน์ และใช้เครื่องอ่านไมโครเพลทเพื่อตรวจจับความเข้มของแสงเรืองแสงของแต่ละกลุ่ม การตั้งค่าพารามิเตอร์ใช้ความยาวคลื่นการกระตุ้น 488 นาโนเมตร และความยาวคลื่นการปล่อย 525 นาโนเมตร การทดลองซ้ำสามครั้ง

2.2.4 คู่ Cistanche Deserticola

ผลของ H2O2 ต่อ SOD ในเซลล์ HEK 293 เซลล์ถูกแบ่งออกเป็นกลุ่มปกติ (เซลล์แขวนลอย), กลุ่มแบบจำลอง (60 µm·L–1 H2O2), กลุ่ม VE (60 µm·L–1 VE และ 60 µm·L–1 H2O2), กลุ่มการบริหารให้ Cistanche Deserticola (100 µg·mL–1 Cistanche Deserticola และ 60 µm·L–1 H2O2) เก็บเซลล์หลังจากการเพาะเลี้ยง 24 ชั่วโมง เติมสารละลายการเตรียมตัวอย่าง SOD เพื่อแยกเซลล์ และปั่นแยกที่ 4 องศาและ 12000 r·นาที{{22} } นาที (รัศมีการปั่นแยกคือ 300 มม.) นำส่วนลอยเหนือตะกอนเป็นตัวอย่างที่จะทดสอบ และทำตามขั้นตอนของชุดตรวจจับ SOD เพื่อการทำงานครั้งต่อไป การทดลองซ้ำสามครั้ง

2.2.5 Cistanche Deserticola ในการเหนี่ยวนำ H2O2

ผลกระทบของ CAT ต่อเซลล์ HEK 293 ได้รับการปฏิบัติตามวิธีการใน 2.2.4 และจัดกลุ่มออกเป็นกลุ่ม หลังการบำบัด ให้เติมสารละลายสลายสลาย ปั่นแยกที่ 4 องศาและ 12000 r·นาที-1 เป็นเวลา 10 นาที (รัศมีแรงเหวี่ยงคือ 300 มม.) นำส่วนลอยเหนือตะกอน และปฏิบัติตาม ทำตามขั้นตอนของชุดตรวจจับ CAT เพื่อดำเนินการต่อไป . การทดลองซ้ำสามครั้ง

2.2.6 การวิเคราะห์ทางสถิติ

ซอฟต์แวร์ SPSS 26.0 ใช้สำหรับการวิเคราะห์ทางสถิติ ข้อมูลแต่ละกลุ่มแสดงด้วย (±±() วิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียวกับข้อมูลที่สอดคล้องกับการแจกแจงแบบปกติ หากความแปรปรวนเท่ากัน จะใช้วิธีผลต่างที่มีนัยสำคัญน้อยที่สุด หากความแปรปรวนเป็น ไม่สม่ำเสมอ ใช้วิธีการ T3 ของ Dunnett ใช้สำหรับการสร้างกราฟ และ P<0.05 was considered as a statistically significant difference.

2.3 การวิเคราะห์ความสัมพันธ์แบบสเปกตรัมของสารต้านอนุมูลอิสระ Cistanche Deserticola

2.3.1 PCA พื้นที่พีคของพีคทั่วไปของ Cistanche Deserticola 10 ชุดที่สร้างลายนิ้วมือถูกทำให้เป็นมาตรฐานด้วยค่า Z และทำเป็นเมทริกซ์ข้อมูลลำดับ 10×17 ซึ่งนำเข้าสู่ซอฟต์แวร์ SPSS 26.0 สำหรับพีซีเอ

2.3.2 พีซีซี

SPSS 26.0 ถูกนำมาใช้เพื่อทำการวิเคราะห์ไบวาเรียตเพื่อศึกษาความสัมพันธ์ด้านประสิทธิภาพของสเปกตรัมระหว่างลายนิ้วมือของ Cistanche Deserticola และสารต้านอนุมูลอิสระ การทดสอบนัยสำคัญดำเนินการโดยใช้การทดสอบสองด้าน (T) โดยมี P<0.05 as the standard for statistically significant differences.

2.3.3 กรุณา

นำเข้าผลการทดลองของพื้นที่พีคที่ได้มาตรฐานและสารต้านอนุมูลอิสระของ Cistanche Deserticola ลงในซอฟต์แวร์ SIMCA-P 14.1 ตั้งค่าพื้นที่พีคเป็นตัวแปร X และตั้งค่าดัชนีเภสัชพลศาสตร์เป็นตัวแปร Y เพื่อทำ PLS

2.4 การตรวจสอบฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของ Cistanche Deserticola Q-marker

2.4.1 การเตรียมสารละลายแม่ของสารออกฤทธิ์ ชั่งน้ำหนักกรดเจนิปินิก, 8-กรดอีพิสทริชนิก, เอชินาซีไซด์, เวอร์บาสโคไซด์, ไอโซเรบาสโคไซด์ และแอนโทไซยาโนไซด์ A ในปริมาณที่เหมาะสมอย่างแม่นยำ และเติม DMSO เพื่อละลายพวกมันลงในสารละลายอ้างอิง 10 มิลลิโมล·ลิตร-1

2.4.2 ผลของสารออกฤทธิ์ต่อความเป็นพิษต่อเซลล์ HEK 293

หลังจากการบ่มเซลล์ HEK 293 เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ให้เติมสารละลายสารออกฤทธิ์ที่มีความเข้มข้นต่างกันต่ำกว่า 2.4.1 ลงในแต่ละหลุม (0.781, 1.563, 3.125, 6.25, 12.5, 25, 50, 100 µmol·L–1 ) 100 ไมโครลิตร การกระตุ้นอย่างต่อเนื่อง

หลังจากเซลล์ถูกบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมง รีเอเจนต์สารละลายเดี่ยว CellTiter 96® AQueous ถูกเติมเพื่อตรวจหาความมีชีวิตของเซลล์

2.4.3 ผลความเสียหายต่อต้านอนุมูลอิสระของสารออกฤทธิ์ต่อเซลล์ H2O2- ที่เหนี่ยวนำ HEK 293

เซลล์จะถูกจัดกลุ่มดังนี้: กลุ่มปกติ กลุ่มแบบจำลอง และกลุ่ม VE จะถูกจัดกลุ่มตาม 2.2.4 กลุ่มการทดลอง (0.781, 1.563, 3.125 µm·L–1 องค์ประกอบกิจกรรมและ 60 µm·L–1 H2O2) เพาะเลี้ยงเป็นเวลา 24 ชั่วโมง ตรวจวัดระดับ ROS ภายในเซลล์ SOD และปริมาณเอนไซม์ CAT ตามวิธีข้อ 2.2.3, 2.2.4 และ 2.2.5 ตามลำดับ

บริการสนับสนุนของ Wecistanche

อีเมล:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/โทรศัพท์:+86 15292862950

เลือกซื้อรายละเอียดข้อมูลจำเพาะเพิ่มเติม:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-ร้านค้า