Phenylethanoid Oligoglycosides และ Acylated Oligosugars ด้วยกิจกรรม Vasorelaxant จาก Cistanche Tubulosa
Mar 15, 2022
สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม:ali.ma@wecistanche.com
มาซายูกิ โยชิกาวะ และคณะ
เชิงนามธรรม
สารสกัดเมทานอลจากลำต้นแห้งของCistanche tubulosa(Schrenk) R. Wight พบว่ามีผลยับยั้งต่อการหดตัวที่เกิดจาก noradrenaline ในแถบหลอดเลือดแดงของหนูที่แยกได้ จากสารสกัดนี้ แยกสารประกอบฟีนิลทานอยด์ อะมิโนไกลโคไซด์, แคนคาโนไซด์ F และ G และน้ำตาลโอลิโกอะซิเลต แคนคันโนส ร่วมกับสารประกอบที่รู้จัก 14 ชนิดจากสารสกัด โครงสร้างของสารประกอบใหม่เหล่านี้ถูกกำหนดโดยอาศัยหลักฐานทางเคมีและฟิสิกส์เคมีของพวกมัน นอกจากนี้ องค์ประกอบหลัก kankanoside F kankanose echinacoside acteoside และ cistanoside F แสดงให้เห็นถึงกิจกรรมของ vasorelaxant และข้อกำหนดโครงสร้างหลายประการสำหรับกิจกรรมได้รับการชี้แจง 2006 Elsevier Ltd. สงวนลิขสิทธิ์
คลิกเพื่อผลิตภัณฑ์เอฟเฟกต์ Cistanche
บทนำ
พืชกาฝาก Orobanchaceae,Cistanche tubulosa(Schrenk) R. Wight มีการแพร่กระจายอย่างกว้างขวางในแอฟริกาเหนือ อารเบีย และประเทศในเอเชียCistanche tubulosaเช่นเดียวกับ C. salsa และ C. deserticola มีการใช้ตามธรรมเนียมเพื่อส่งเสริมการไหลเวียนโลหิตและการรักษาความอ่อนแอ, หมัน, โรคปวดเอว, ความอ่อนแอของร่างกาย และยาชูกำลัง2,3 ในระหว่างการศึกษาคุณลักษณะของเราเกี่ยวกับองค์ประกอบออกฤทธิ์ทางชีวภาพจากธรรมชาติของจีน ยา 1,4–14 เราได้รายงานการแยกและการอธิบายโครงสร้างของอิริดอยด์ 5 ชนิด ได้แก่ แคนคาโนไซด์ A–D และแคนแคนอล และโมโนเทอร์ปีนไกลโคไซด์ แคนคาโนไซด์ E ร่วมกับสารประกอบที่รู้จัก 16 ชนิดจากลำต้นของCistanche tubulosa1 ในการศึกษายาสมุนไพรนี้ มีความต่อเนื่อง พบว่าสารสกัดเมธานอลมีฤทธิ์ยับยั้งการหดตัวที่เกิดจาก noradrenaline ในแถบหลอดเลือดทรวงอกของหนูที่แยกได้ จากสารสกัดเมธานอลนี้ เรายังแยกฟีนิลทานอยด์โอลิโกไกลโคไซด์, แคนคาโนไซด์ F (1) และ G (2) และน้ำตาลโอลิโก anacylated, kankanose (3) และสารประกอบที่รู้จัก 14 ชนิด, อิชินาโคไซด์ (4), แอคทีโอไซด์ (5), ไอโซแอคทีโอไซด์ (6 ),20-อะซีติแลคติโอไซด์ (7), ทูบูโลไซด์ A (8) และ B (9), ซิสตาโนไซด์ F (10), ซาลิโดรไซด์ (11), (2R,3R)-บิวเทน-2,{{18 }}ไดออล 2-อ็อบดี-กลูโคปาราโนไซด์,เมโส-บิวเทน-2,3-ไดออล2-ObD-glucopyranoside, เอทิล bD-glucopyranoside,3-เมทิลบิวทานอล bD-glucopyranoside, ( บวก )-pinoresinol40-ObD -glucopyranoside และ ( บวก ) -syringaresinol 40-ObD-glucopyranoside เอกสารนี้กล่าวถึงการอธิบายโครงสร้างของสารประกอบใหม่ (1–3) รวมถึงผลกระทบของ thevasorelaxant ขององค์ประกอบหลัก (1, 3–6,10 และ 11) ต่อการหดตัวที่เกิดจาก noradrenalinein แยกแถบหลอดเลือดของหนูที่แยกได้โดยใช้วิธีการดั้งเดิมสำหรับ การไหลเวียนโลหิต (รูปที่ 1).
ผลลัพธ์และการอภิปราย
2.1. ผลของ Vasorelaxant ของสารสกัดเมทานอลจากลำต้นของCistanche tubulosaต่อการหดตัวที่เกิดจาก noradrenaline ในหลอดเลือดแดงใหญ่ทรวงอกของหนูที่แยกได้
ดังแสดงในตารางที่ 1 สารสกัดเมทานอลจากลำต้นของCistanche tubulosa(ซื้อใน Urumqi, XinjiangProvince, China) พบว่ามีกิจกรรม vasorelaxant ต่อการหดตัวที่เกิดจาก noradrenaline ในแถบหลอดเลือดแดงที่แยกได้ขึ้นอยู่กับเวลาและความเข้มข้น (30–3{{10}} 0 แอลจี/มล.) สารสกัดเมทานอลถูกทำให้บริสุทธิ์เพิ่มเติมโดยการทำทรีตเมนต์คอลัมน์โครมาในเฟสปกติและเฟสย้อนกลับ และสุดท้าย HPLC เพื่อให้ 1 (0.016 เปอร์เซ็นต์ ), 2(0.{{31} }25 เปอร์เซ็นต์ ), 3 (0.020 เปอร์เซ็นต์ ), 4 (3.09 เปอร์เซ็นต์ ),3 5 ({{64} }.68 เปอร์เซ็นต์ ),3 6(0.096 เปอร์เซ็นต์ ),3 7 (0.017 เปอร์เซ็นต์ ),3 8 (0.052 เปอร์เซ็นต์ ),3 9 (0.0036 เปอร์เซ็นต์ ),3 10(0.025 เปอร์เซ็นต์ ),15 11 (0.044 เปอร์เซ็นต์ ),16 (2R,3R)-บิวเทน-2,{{44 }}ไดออล2-ObD-glucopyranoside (0.0087 เปอร์เซ็นต์ ),17 meso-butane-2,3-diol 2-ObD-glucopyranoside (0.0065 เปอร์เซ็นต์ ),17 ethylb-D- glucopyranoside (0.055 เปอร์เซ็นต์ ),17 3-methylbutanol bD-glucopyranoside (0.0030 เปอร์เซ็นต์ ),17 ( plus )-pinoresinol 40-ObD-glucopyranoside (0.016 เปอร์เซ็นต์ ),18 และ ( plus )-syringaresinol{{81} }ObD-glucopyranoside (0.022 เปอร์เซ็นต์ ).15
2.2. โครงสร้างของ kankanosides F (1) และ G (2)
ได้รับ Kankanoside F (1) เป็นผงสีขาวที่มีการหมุนของแสงเป็นลบ (½a -28D -44.8- ใน MeOH) สเปกตรัม IR ของ 1 แสดงแถบดูดกลืนที่156{{69} }, 1508, และ 1458 ซม.-1 กำหนดให้เป็นแถบอะโรมาติกริงและแถบดูดซับที่แรงที่ 3432, 1075 และ 1044 ซม.-1 บ่งบอกถึงโครงสร้างอะมิโนไกลโคไซด์ในแง่บวกและ FAB-MS ที่เป็นลบของ 1, พีคไอออนควอซิโมเลกุลถูกสังเกตพบที่ m/z 647 (M บวก Na) บวก และ 623 (MH) และการวิเคราะห์ FAB-MS ที่มีความละเอียดสูงเผยให้เห็นสูตรโมเลกุลของ 1 ที่จะเป็น C26H40O17 สเปกตรัม 1H และ 13C NMR (CD3OD,ตารางที่ 2) ของ 1 ซึ่งถูกกำหนดโดยการทดลอง NMR ต่างๆ 19 แสดงสัญญาณที่กำหนดให้กับทูเมทิลีนได้ [d 2.78 (2H, m, H2-7), 3.70, 4.{{ 39}} (แต่ละ 1H, ทั้ง m, H2-8)] และโปรตอนอะโรมาติกประเภท ABC แบบออร์โธและแบบคู่เมตา [d 6.56 (1H, dd, J=1.9,7.9 Hz, H-6), 6.67 (1H, d, J=7.9 Hz, H-5), 6.69 (1H, d, J=1.9 Hz, H{ {64}})] ร่วมกับกลูโคราโนสมอยอิตีสามชนิด [d 4.30 (1H, d, J=8.0 Hz, H-10), 4.37(1H, d, J=8 0 Hz, H-1000), 5.16 (1H, br s, H-100)] โครงสร้างอะมิโนไกลโคไซด์ใน 1 ถูกแสดงคุณลักษณะโดยการทดลองการเชื่อมต่อพันธะหลายเฮเทอโรนิวเคลียร์ (HMBC) ซึ่งแสดงความสัมพันธ์ระยะยาวระหว่างคู่โปรตอนและคาร์บอนที่ตามมา (H-10 และ C-8; H-100 และ C-30; H-1000 และ C-60) ดังแสดงในรูปที่ 2 เอนไซม์ deacylation ของ echinacoside (4) ซึ่งมีรายงานโครงสร้าง stereostructure สัมบูรณ์ก่อนหน้านี้ 3 กับ tannase13,14 ให้ 1 บนพื้นฐานของหลักฐานดังกล่าวข้างต้น โครงสร้างของ kankanoside F ถูกกำหนดให้เป็น 2-(3,4- ไดไฮดรอกซี ฟีนิล)เอทิล OaL-rhamnopyranosyl(1-3)[bD-glucopyranosyl(1-6)]-b- D-glucopyranoside (1)
นอกจากนี้ ยังได้ Kankanoside G (2) เป็นผงสีขาวที่มีการหมุนของแสงเป็นลบ (½a-26D-350-ใน MeOH)สเปกตรัม IR ของ 2 แสดงแถบดูดกลืนที่3432, 1709, 1638, 1518, 1447, และ 1040 ซม.-1, กำหนดให้เป็นไฮดรอกซิล, เอสเทอร์คาร์บอนิลที่ถูกคอนจูเกต, และหน้าที่ของอีเทอร์และวงแหวนอะโรมาติก สูตรโมเลกุล C29H36O14 ของ 2 ถูกกำหนดหาจาก FAB-MS ที่เป็นบวกและลบ [m/z 631 (M บวก Na) บวกและ 607(MH)-] และโดย FAB-MS ที่มีความละเอียดสูง การดีไซเลชันของเอนไซม์ของ 2 กับแทนเนสให้ผลผลิตซิสตาโนไซด์ G(12) ซึ่งมีการรายงานโครงสร้างสามมิติแบบสัมบูรณ์ก่อนหน้านี้ 16 ในการไฮโดรไลซิสแบบอัลคาไลน์ของ 2 ที่มีโพแทสเซียมไฮดรอกไซด์ในน้ำ 10 เปอร์เซ็นต์ (KOH) —50 เปอร์เซ็นต์ในน้ำ 1,4-ไดออกเซน (1:1, ปริมาตร/ปริมาตร), กรดคาเฟอีนถูกจำแนกโดยการวิเคราะห์ด้วย HPLC 1H และ 13C NMR (CD3OD, Table2) สเปกตรัม 19 ของ 2 บ่งชี้การมีอยู่ของฟังก์ชันต่อไปนี้: 4-ส่วนไฮดรอกซีฟีนิลเอทิลแอลกอฮอล์ {ทูเมทิลีน [d 2.82 (2H, m, H2-7), 3.70, 3.96 ( 1H แต่ละตัว ทั้ง m, H2-8)] และ A2B อะโรมาติกโปรตอนแบบออร์โธ-คัปเปิล A2B2-} [d 6.65, 7.03 (2H แต่ละตัว, ทั้งคู่ d, J=8.6 Hz,H{ {62}},5 และ H-2,6)]} และกลูโคราโนสมอยอิตีสองชนิด [d4.33 (1H, d, J=7.9 Hz, H-10), 5.19 (1H, br s, H-100)]ร่วมกับ caffeoyl moiety {ทรานส์โอเลฟิน [d 6.29,7.56 (อันละ 1H, ทั้งสอง d, J=15.9 Hz, H{{84) }} และ H-7)] และไดไฮดรอกซีเบนซีนชนิดไดไฮดรอกซีเบนซีน [d 6.78 (1H, d,J=8.3 Hz, H-5), 6.89 (1H, dd, J {{ 96}}.9, 8.3 Hz, H-6),7.04 (1H, d, J=1.9 Hz, H-2)]} ในการทดลอง HMBC ในวันที่ 2 สังเกตความสัมพันธ์ระยะยาวระหว่าง 60-โปรตอน [d 4.36 (1H, dd, J=6.1, 11.6 Hz),4.50 (dd, J {{ 119}}.8, 11.6 เฮิรตซ์)] และคาฟเฟโออิลคาร์บอนิลคาร์บอน (dC 169.1) ดังนั้น, โครงสร้างของแคนคาโนไซด์ G ถูกกำหนดหาเป็น 4-ไฮดรอกซีฟีนิล-OaL-rhamnopyranosyl(1 ! 3)-(6-O-caffeoyl)-bD-กลูโคปาราโนไซด์ (2)
2.3. โครงสร้าง Kankanose (3)
Kankanose (3), ½a- 27D-353- (MeOH) ได้รับมาในรูปของผงสีขาวเช่นกัน สเปกตรัมอินฟราเรดของ 3 แสดงแถบการดูดซึมที่ 343{{30}}, 1702, 1639, 1611, 1458, และ1071 ซม.-1, กำหนดเป็น หน้าที่ของไฮดรอกซิล เอสเทอร์คอนจูเกต คาร์บอนิล และอีเทอร์ และวงแหวนอะโรมาติก FAB-MS ของไอออนบวกและลบของ 3 แสดงพีคไอออนโมเลกุลเสมือนที่ m/z 673 (M บวก Na) บวกและm/z 649 (MH) ตามลำดับ FAB-MS ที่มีความละเอียดสูงเท่ากับ 3 แสดงสูตรโมเลกุลเป็น C27H38O18 ไฮโดรไลซิสแบบอัลคาไลน์ของ 3 ที่มี 10 เปอร์เซ็นต์ KOH–50 เปอร์เซ็นต์ในน้ำ 14-กรดคาเฟอีนที่ปลดปล่อยไดออกเซน ซึ่งถูกระบุโดยการวิเคราะห์ HPLC ร่วมกับน้ำตาลโอลิโก การไฮโดรไลซิสของกรดของน้ำตาลโอลิโกนี้ด้วย 1.0 Mhydrochloric acid (HCl) ที่ปลดปล่อย L-rhamnose และ D-glucose ซึ่งถูกระบุโดยการวิเคราะห์ HPLC โดยใช้เครื่องตรวจจับการหมุนด้วยแสง 1,13,14 1H และ 13CNMR (CD3OD, ตารางที่ 3) spectra19 ของ 3 แสดงสัญญาณที่กำหนดให้กับมอยอิตีไตรแซ็กคาไรด์ {d [5.11 (d,J=3.4 Hz), 4.57 (d, J=7.9 Hz), ของผสมรูปแบบ a และ b ของ H{ {52}} (ca. 1:1)], 4.25, 4.27 (ทั้ง d, J=7.7 Hz, H-1000),5.13, 5.18 (ทั้ง br s, H{{66 }})} ร่วมกับกลุ่มคาเฟอีน [d 6.28, 6.29 (ทั้ง d, J=15.9 Hz, H-9), 6.78 (d,J=8.0 Hz, H -5), 6.96 (dd, J=2.0, 8.0 Hz, H-6), 7.06(d, J=2.0 Hz, H{{90} }), 7.60 (d, J=15.9 Hz, H-7)] ในการทดลอง HMBC บน 3 ความสัมพันธ์ระยะยาวถูกสังเกตพบระหว่าง 40-โปรตอน [d 5.04, 4.99 (ทั้ง dd,J=9.5, 9.8 Hz)] และคาฟเฟโออิลคาร์บอนิลคาร์บอน (dC168.53 , 168.65). บนพื้นฐานของหลักฐานที่กล่าวถึงข้างต้น โครงสร้างของแคนกาโนสถูกอธิบายเป็น bea-L-rhamnopyranosyl(1-3)[bD-glucopyranosyl(1-6)]-O-(4- O-caffeoyl)-D-glucopyranose (3).
2.4. ผลของ Vasorelaxant ขององค์ประกอบหลัก (1, 3–6,10, 11) จากCistanche tubulosaต่อการหดตัวที่เกิดจาก noradrenaline และ K plus สูงในหลอดเลือดแดงใหญ่ทรวงอกของหนูที่แยกได้
ตามที่แสดงในตารางที่ 4 และรูปที่ 3 ผลการยับยั้งขององค์ประกอบหลัก kankanoside F (1) และ kankanose (3), echinacoside (4), acteoside (5), isoacteoside (6), cistanoside F (10) และ salidroside ( 11) ในการหดตัวที่เกิดจาก noradrenaline ในหลอดเลือดแดงใหญ่ทรวงอกของหนูที่แยกได้ เป็นผลให้สารประกอบ 3–5 และ 10มีหมู่คาเฟอีนในตำแหน่ง 40-ยับยั้งการหดตัว เวลาและ/หรือความเข้มข้นขึ้นอยู่กับ (10–100 lM) อย่างมีนัยสำคัญ ในขณะที่ 6 มี 60- มอยอิตี O-caffeoyl มีฤทธิ์อ่อนกว่า 4 และ 5 ในทางกลับกัน สารประกอบ 1 ที่มีกลุ่ม catechol แสดงการยับยั้งที่มีนัยสำคัญ แต่ 11 กับกลุ่มฟีนอลไม่แสดงผลดังกล่าว ผลลัพธ์เหล่านี้ทำให้เราพบว่ามอยอิตี 40-O-caffeoyl และมอยอิตี 10-O-dihydroxyphenethyl มีความจำเป็นสำหรับการออกฤทธิ์ของหลอดเลือดที่แข็งแรง ในทางกลับกัน สารประกอบ 1, 3–6 และ 10 (100 lM) ไม่แสดงผลใดๆ ต่อการหดตัวที่เกิดจากโพแทสเซียมเคชั่นที่มีความเข้มข้นสูง (K plus สูง) ที่แตกต่างจากนิเฟดิพีน ซึ่งเป็นตัวป้องกันแคลเซียมแชนเนลที่ขึ้นกับแรงดันไฟฟ้าใน เนื้อเยื่อเดียวกัน (ไม่แสดงข้อมูล) การค้นพบนี้ชี้ให้เห็นว่าองค์ประกอบที่ออกฤทธิ์เหล่านี้ยับยั้งการหดตัวผ่านทางช่องแคลเซียมที่ดำเนินการโดยตัวรับ แต่ไม่ใช่ผ่านทางช่องแคลเซียมที่ขึ้นกับแรงดันไฟฟ้า เมื่อเร็ว ๆ นี้ Iizuka และคณะรายงานว่า phenylethanoid, forsythiaside จากผลของ Forsythia suspensa ยับยั้งการหดตัวที่เกิดจาก noradrenaline ในการเตรียมแหวน aortic ของหนูแรท และแนะนำว่าการยับยั้งโดย forsythiaside ของการหดตัวที่เกิดจาก noradrenaline ส่วนหนึ่งเป็นผลมาจากการลดลงของ noradrenaline แคลเซียมที่ไหลเข้า20 อย่างไรก็ตาม ในการศึกษานี้ ผลของสารคลายเครียดขององค์ประกอบออกฤทธิ์ถูกสังเกตได้โดยประมาณ 30 นาทีหลังจากการเติม noradrenaline ในวิธีที่แตกต่างจากของ prazosin ซึ่งเป็นตัวรับ adrenaline a1-receptor ชุดรูปแบบของการกระทำขององค์ประกอบที่ใช้งานอยู่จำเป็นต้องได้รับการศึกษาเพิ่มเติม
3. ทดลอง
3.1. ขั้นตอนการทดลองทั่วไป
เครื่องมือต่อไปนี้ถูกใช้เพื่อให้ได้มาซึ่งข้อมูลทางกายภาพ: การหมุนจำเพาะ, Horiba SEPA-300 โพลาริมิเตอร์แบบดิจิตอล (l=5 ซม.); ยูวีสเปกตรัม, Shimadzu UV-1600สเปกโตรมิเตอร์; สเปกตรัมอินฟราเรด, สเปกโตรมิเตอร์ Shimadzu FTIR-8100; 1H NMR สเปกตรัม, JEOL JNM-LA500(500 MHz) สเปกโตรมิเตอร์; สเปกตรัม 13C NMR, JEOLJNM-LA500 (125 MHz) สเปกโตรมิเตอร์ที่มีเตตราเมทิลไซเลนเป็นมาตรฐานภายใน FABMS และ HR-FAB MS, JEOL JMS-SX 102A แมสสเปกโตรมิเตอร์; HPLCdetector, Shimadzu RID-6ดัชนีการหักเหของแสงและเครื่องตรวจจับ UV–vis SPD 10A คอลัมน์ HPLC, YMC-PackODS-A (250 · 4.6 มม. id) และ (250 · 20 มม. id) ถูกใช้เพื่อวัตถุประสงค์ในการวิเคราะห์และเตรียมการตามลำดับ
เงื่อนไขการทดลองต่อไปนี้ถูกใช้สำหรับโครมาโตกราฟี: ซิลิกาเจลคอลัมน์โครมาโตกราฟีแบบเฟสปกติ, ซิลิกาเจล BW-200 (Fuji Silysia Chemical,Ltd, 150–350 mesh); คอลัมน์โครมาโตกราฟีแบบซิลิกาเจลแบบย้อนกลับ, Chromatorex ODS DM1020T (FujiSilesia Chemical, Ltd, 100–200 mesh); TLC, เพลต TLC ที่เคลือบไว้ล่วงหน้าด้วยซิลิกาเจล 60F254 (เมอร์ค, 0.25 มม.)(เฟสปกติ) และซิลิกาเจล RP-18 F254S (เมอร์ค,0.25 มม.) (เฟสกลับด้าน); HPTLC แบบย้อนกลับ, แผ่น TLC ที่เคลือบไว้ล่วงหน้าด้วยซิลิกาเจล RP-18 WF254S(Merck, 0.25 มม.); การตรวจจับทำได้โดยการฉีดพ่นด้วย 1 เปอร์เซ็นต์ Ce (SO4) 2–10 เปอร์เซ็นต์ในน้ำ H2SO4 ตามด้วยการให้ความร้อน
Cistanche tubulosa
3.2. วัสดุปลูก
ลำต้นแห้งของCistanche tubulosaถูกซื้อที่อุรุมชี มณฑลซินเจียง ประเทศจีน ในเดือนมกราคม 2548 ผ่าน EishinTrading Co., Ltd โอซาก้า ประเทศญี่ปุ่น ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้า1
3.3. การสกัดและการแยกตัว
เศษส่วน {{0}} (590 มก.), 2-1 (466 มก.), 2-3 (3931 มก.), 3-3(3610 มก.), 3-4 (190 มก.), 4-5 [=echinacoside (4, 2595 มก.,0.44 เปอร์เซ็นต์ )], 4-6 (1635 มก.), 5-2 (1114 มก.), {{ 20}} (306 มก.), 5-4(347 มก.), 5-5 (=4, 1620 มก., 2.03 เปอร์เซ็นต์ ) และ 5-6 (1453 มก.) ได้รับจาก สารสกัดเมทานอลของลำต้นCistanche tubulosaตามที่รายงานไว้ก่อนหน้านี้ 1 เศษส่วน 1–2(590 มก.) ถูกทำให้บริสุทธิ์โดย HPLC [MeOH/H2O (35:65,v/v)] เพื่อให้ 3-methylbutanol bD-glucopyranoside(18 มก.) , 0.0030 เปอร์เซ็นต์ ), ( บวก )-pinoresinol 40-ObD-glucopyr anoside (96 มก., 0 016 เปอร์เซ็นต์ ) และ ( บวก )-syringaresinol 40-O bD-glucopyranoside (129 mg, 0.022 เปอร์เซ็นต์ ) ร่วมกับ cistanochlorin (21 mg, {{ 76}}.{{80}}035 เปอร์เซ็นต์ ) เศษส่วน 2-1 (466 มก.)ถูกแยกโดย HPLC [MeOH/H2O (5:95, v/v)] togive (2R,3R)-บิวเทน-2,{{40 }}ไดออล 2-ObD-glucopyranoside(12 มก., {{{108}}4}}.0087 เปอร์เซ็นต์ ), (2R, 3S)-บิวเทน-2,3-ไดออล 2-ObD กลูโคราโนไซด์ (9 มก., 0.0065 เปอร์เซ็นต์ ) และเอทิล bD -gluco pyranoside (76 mg, 0.055 เปอร์เซ็นต์ ) ร่วมกับ uridine(0.0069 เปอร์เซ็นต์ ) เศษส่วน 2-2 (535 มก.) ถูกทำให้บริสุทธิ์โดย HPLC[MeOH/H2O (5:95, v/v)] เพื่อให้ได้ซาลิโดรไซด์ (11, 41 มก.,0.022 เปอร์เซ็นต์ ) ร่วมกับสารต้านไรด์ (15 มก., 0.0079 เปอร์เซ็นต์) และ6-deoxycatalpol (214 มก., 0.11 เปอร์เซ็นต์ ) เศษส่วน 2-3(535 มก.) ถูกแยกโดย HPLC [MeOH/H2O (5:95,v/v)] เพื่อให้ 11 (17 มก., 0.022 เปอร์เซ็นต์) ร่วมกับกลูโร (110 มก., 0.14 เปอร์เซ็นต์) และ bartsioside (164 มก., 0.21 เปอร์เซ็นต์ )เศษส่วน 3-3 (510 มก.) ถูกควบคุมด้วย HPLC [MeOH/H2O (40:60, v/v)] เพื่อให้แอกทีโอไซด์ (5, 257 มก., 0.31 เปอร์เซ็นต์) isoacteoside (6, 79 มก., 0.096 เปอร์เซ็นต์ ) และ 20-acetylacteoside(7, 14 มก., 0.017 เปอร์เซ็นต์) เศษส่วน 3-4 (190 มก.) ถูกทำให้บริสุทธิ์เพิ่มเติมโดย HPLC [MeOH/H2O (40:60, v/v)] เพื่อให้ Kankanoside G (2, 17 มก., 0.0029 เปอร์เซ็นต์ ) และทูบูโลไซด์ B(9, 21 มก., 0.0036 เปอร์เซ็นต์ ). เศษส่วน 4-6 (75 มก.) ถูกทำให้บริสุทธิ์โดย HPLC [MeOH/H2O (35:65, v/v)] เพื่อให้ได้ 5 (18 มก.,0.065 เปอร์เซ็นต์) เศษส่วน 5-2 (1114 มก.) อยู่ภายใต้ HPLC[MeOH/H2O (10:90, v/v)] เพื่อให้ 2 (24 มก., 0.030 เปอร์เซ็นต์ ) เศษส่วน 5-3 (306 มก.) คือ ทำให้บริสุทธิ์โดย HPLC [MeOH/H2O (15:85, v/v)] เพื่อให้แคนคาโนไซด์ F (1, 13 มก.,0.016 เปอร์เซ็นต์) เศษส่วน 5-4 (347 มก.) อยู่ภายใต้ HPLC[MeOH/H2O (10:90, v/v)] เพื่อให้แคนแคนโนส (3, 30 มก.,0.038 เปอร์เซ็นต์) และซิสตาโนไซด์ F (10, 20 มก., 0.025 เปอร์เซ็นต์ ). เศษส่วน5-6 (530 มก.) ถูกทำให้บริสุทธิ์โดย HPLC [MeOH/H2O (35:65,v/v)] เพื่อให้ได้ 4 (185 มก., 0.62 เปอร์เซ็นต์ ), 5 (91 มก., 0.30 เปอร์เซ็นต์ ) และทูบูโลไซด์ A (8, 16 มก., 0.052 เปอร์เซ็นต์ )
3.3.1. แคนคาโนไซด์ เอฟ (1).
ผงสีขาว ½a{0}}D -44.8- (c0.50, MeOH) FAB-MSm/z ประจุบวกความละเอียดสูง: คำนวณสำหรับ C26H40O17Na (M บวก Na) บวก , 647.2163 พบ: 647.2160 UV [MeOH, นาโนเมตร (log e)]: 224 (3.83),283 (3.37) IR (KBr): 3432, 2940, 1560, 1508, 1458,1075, 1044 ซม.-1 1H NMR (500 MHz, CD3OD) d: กำหนดไว้ในตารางที่ 2. ข้อมูล 13C NMR (125 MHz, CD3OD) dC: กำหนดไว้ในตารางที่ 2 Positive-ion FAB-MS m/z: 647(M บวก Na) บวก ไอออนลบ FAB-MS m/z: 623 (MH), 477 (M-C6H11O4)-, 623 (M-C6H11O5)-, 623(M-C12H21O9)--
3.3.2. แคนคาโนไซด์ จี (2).
ผงสีขาว ½a{0}}D -35.0-(c 0.80, MeOH) FAB-MSm/z ประจุบวกความละเอียดสูง: คำนวณสำหรับ C29H36O14Na (M บวก Na) บวก , 631.2003. พบ: 631.1996 UV [MeOH, nm (log e)]: 329 (4.10).IR (KBr): 3432, 2924, 1709, 1638, 1518, 1447, 1264,1040 cm-1 1H NMR (500 MHz, CD3OD) d: ให้ไว้ในตารางที่ 2 ข้อมูล 13C NMR (125 MHz, CD3OD) dC: กำหนดไว้ในตารางที่ 2 Positive-ion FAB-MS m/z: 631 (M บวก Na) บวก .Negative-ion FAB-MS m/z: 607 (MH)-, 461(M-C6H11O4)
3.3.3. คันกาโนเสะ (3).
ผงสีขาว ½a{0}}D -35.3- (c0.50, MeOH) FAB-MSm/z ประจุบวกความละเอียดสูง: คำนวณสำหรับ C27H38O18Na (M บวก Na) บวก , 673.1956 พบ: 673.1959 UV [MeOH, นาโนเมตร (log e)]: 219 (4.10),247 (3.96), 333 (4.21) IR (KBr): 3430, 2962, 1702,1639, 1611, 1458, 1264, 1071 ซม.-1 1H NMR(500 MHz, CD3OD) d: กำหนดไว้ในตารางที่ 3 ข้อมูล 13C NMR (125 MHz, CD3OD) dC: กำหนดไว้ในตารางที่ 3 Positive-ion FAB-MS m/z: 673 (M บวก Na) บวก ไอออนลบ FABM-Sm/z: 649 (MH), 487 (M-C9H8O3)-, 325(M-C15H18O8)-
Cistanche tubulosa
3.4. การสลายตัวของเอนไซม์ 2 และ 4 กับแทนเนส
สารละลาย 2 (4.8 มก., 0.008 มิลลิโมล) ใน H2O (1.0 มล.) ถูกทรีทด้วยแทนเนส (3.7 มก. จาก Aspergillus oryzae , Wako Pure Chemical Ind., Ltd, โอซาก้า, ญี่ปุ่น)และกวนสารละลายที่ 37 องศาเป็นเวลา 24 ชั่วโมง AfterEtOH ถูกเติมไปยังของผสมของปฏิกิริยา ตัวทำละลายถูกกำจัดออกภายใต้ความดันที่ลดลงและเรซิดิวถูกทำให้บริสุทธิ์โดย HPLC [MeOH/H2O (35:65, v/v)] เพื่อให้ซิสตาโนไซด์ G (12, 2.8 มก., 80 เปอร์เซ็นต์ ).16 ผ่าน ขั้นวิธีที่คล้ายคลึงกัน สารละลาย 4 (9.2 มก., 0.012 มิลลิโมล) ใน H2O (2.0 มล.) ถูกบำบัดด้วยแทนเนส (7.5 มก.) และสารละลายถูกกวนผสมที่ 37 องศา เป็นเวลา 24 ชั่วโมง การเพิ่มประสิทธิภาพของของผสมปฏิกิริยาตามที่บรรยายไว้ข้างต้นให้เรซิดิว ซึ่งถูกทำให้บริสุทธิ์โดย HPLC [MeOH/H2O (15:85, v/v)] เพื่อให้ 1 (4.7 มก., 62 เปอร์เซ็นต์)
3.5. ไฮโดรไลซิสของอัลคาไลน์และกรด 2 และ 3
สารละลาย 2 และ 3 (แต่ละ 3.5 มก.) ใน 50 เปอร์เซ็นต์ในน้ำ 1,4-ไดออกเซน (1.0 มล.) ถูกบำบัดด้วย KOH ในน้ำ 10 เปอร์เซ็นต์ (1.{{30}} มล.) และทั้งหมดถูกกวนผสมที่ 37 C เป็นเวลา 1 ชั่วโมงตามลำดับ การกำจัดตัวทำละลายภายใต้แรงดันที่ลดลงทำให้ของผสมปฏิกิริยา ซึ่งถูกนำไปยังการวิเคราะห์ด้วย HPLC [คอลัมน์: YMC-Pack ODS-A,250 · 4.6 มม. id; เฟสเคลื่อนที่: MeOH/H2O (30:70, v/v); การตรวจจับ: UV (254 นาโนเมตร); อัตราการไหล: 1.0 มล./นาที] เพื่อระบุกรดคาเฟอีน (tR: 13.1 นาที) จากนั้นของผสมปฏิกิริยาจาก 3 ถูกละลายใน 1 โมลาร์ HCl (2.0 มล.)และให้ความร้อนภายใต้การไหลย้อนเป็นเวลา 3 ชม. หลังจากการทำให้เย็นลง ของผสมของปฏิกิริยาถูกสกัดด้วย EtOAc ชั้นน้ำได้รับการวิเคราะห์ HPLC ภายใต้สภาวะต่อไปนี้ ตามลำดับ: คอลัมน์ HPLC, KaseisorbLC NH2-60-5, 250 · 4.6 มม. id (Tokyo Kasei Co., Ltd, Tokyo, Japan); การตรวจจับการหมุนด้วยแสง [ShodexOR-2 (Showa Denko Co., Ltd, Tokyo, Japan); โมบายเฟส, CH3CN/H2O (85:15, v/v); อัตราการไหล 0.8 มล./นาที] การระบุ L-rhamnose และ D-glucose ที่มีอยู่ในชั้นที่เป็นน้ำได้ดำเนินการโดยการเปรียบเทียบเวลาการคงอยู่และการหมุนด้วยแสงกับตัวอย่างของแท้เหล่านั้น tR: 9.9 นาที (L-rhamnose, การหมุนด้วยแสงเชิงลบ) และ 17.9 นาที (D-glucose, การหมุนด้วยแสงเป็นบวก)
3.6. กิจกรรม Vasorelaxant
3.6.1. การเตรียมเนื้อเยื่อ
หนู Sprague–Dawley เพศผู้น้ำหนัก 250–350 ก. เสียสละโดยการตัดหลอดเลือดแดงทั้งหลอดเลือดแดงภายใต้การดมยาสลบ และหลอดเลือดแดงใหญ่ทรวงอกที่แยกออกมาและตัดเป็นเกลียว (2–3 มม. ·15–2{{25) }} มม.) สารละลายเกลือทางสรีรวิทยาประกอบด้วย NaCl(118.0 mM), KCl (4.7 mM), KH2PO4 (1.2 mM), MgSO4(1.2 mM), CaCl2 (2.5 mM), NaHCO3 (25.0 mM) และ D-glucose (10.0 mM) สารละลายถูกเติมอากาศด้วยส่วนผสมของก๊าซคาร์บอนไดออกไซด์ A95 เปอร์เซ็นต์ O2–5 เปอร์เซ็นต์ และเก็บไว้ที่ 37 องศา เพื่อตรวจสอบการตอบสนองทางกล การเตรียมแต่ละครั้งถูกระงับในอ่างล้างอวัยวะ (6 มล.) และอยู่ภายใต้ภาระเริ่มต้นประมาณ 1 กรัม อนุญาตให้ใช้ช่วงสมดุลหนึ่งชั่วโมงก่อนเริ่มการทดลอง การหดตัวถูกวัดแบบมีมิติเท่ากันโดยใช้ทรานสดิวเซอร์แรง-ดิสเพลสเมนต์ (AD Instruments) และบันทึกลงบนโพลีกราฟ
3.6.2. ผลการยับยั้งต่อการหดตัวที่เกิดจาก dl-noradrenaline หรือ K plus สูง
หลังจากการปรับสมดุล ดล-นอร์-อะดรีนาลีน (ความเข้มข้นสุดท้าย: 1 ลิตรโมลาร์) หรือ 3 โมลาร์ KCl(0.1 มล., ความเข้มข้นสุดท้ายของ K บวก : 54 มิลลิโมลาร์) ถูกเติมลงในอ่าง เนื้อเยื่อถูกล้างสามครั้งและปรับสมดุลใหม่หลังจากการหดตัวถึงระดับสูงสุด การหดตัวอย่างต่อเนื่องเกิดขึ้นอีกครั้งโดยการเพิ่ม dl-noradrenaline หรือ KCl จากนั้นใช้สารประกอบทดสอบที่ 10-100 lM (noradrenaline) หรือ 100 lM ( K สูงบวก ) การตอบสนองการหดตัวก่อนการใช้ตัวอย่างทดสอบสูญเปล่าเป็น 100 เปอร์เซ็นต์ ใช้ Prazosin hydrochloride และ nifedipine เป็นสารประกอบอ้างอิง
3.6.3. การวิเคราะห์ทางสถิติ.
ค่าแสดงเป็นค่าเฉลี่ย± SEM สำหรับการวิเคราะห์ทางสถิติ ใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียวตามด้วยการทดสอบของ Dunnett สำหรับการวิเคราะห์เปรียบเทียบหลายรายการ ค่าความน่าจะเป็น (p) น้อยกว่า0.05 ถือว่ามีนัยสำคัญ
รับทราบ
งานวิจัยนี้ได้รับการสนับสนุนโดยโครงการ COE ครั้งที่ 21 โครงการ Academic Frontier Project และทุนสนับสนุนการวิจัยทางวิทยาศาสตร์จากกระทรวงศึกษาธิการ วัฒนธรรม กีฬา วิทยาศาสตร์ และเทคโนโลยีของญี่ปุ่น
อ้างอิงและหมายเหตุ
1. บทความนี้อยู่ในอันดับที่ 19 ในซีรี่ส์ 'Bioactive Constituents from Chinese Natural Medicines' สำหรับกระดาษหมายเลข 18 ดู Xie, H.; โมริกาวะ ต.; มัตสึดะ, H.; นากามูระ เอส.; มูราโอกะ โอ.; โยชิกาว่า, เอ็ม. เคม. เภสัช. วัว. 2549, 54, 669–675.
2. Namba, T. ในสารานุกรมของ Wakan-Yaku (ยาจีน - ญี่ปุ่นดั้งเดิม) พร้อมรูปภาพสี; โฮคุริวฉะ: โอซาก้า, 1994; เล่มที่ 2
3. โคบายาชิ H.; โอกุจิ, เอช.; ทากิซาวะ น.; มิยาเสะ, ต.; อุเอโนะ A.; Usmanghani, K.; อาหมัด, เอ็ม. เคม. เภสัช. วัว. 2530, 35, 3309–3314.
4. มัตสึดะ H.; โมริกาวะ ต.; เต๋า เจ.; อุเอดะ เค; โยชิกาว่า, เอ็ม. เคม. เภสัช. วัว. 2002, 50, 208–215.
5. โมริกาวะ ต.; มัตสึดะ, H.; Toguchida, I.; อุเอดะ เค; โยชิกาวะ, เอ็มเจ แนท. แยง. 2545, 65, 1468–1474.
6. เต๋า เจ.; โมริกาวะ ต.; Toguchida, I.; อันโด, เอส.; มัตสึดะ, H.; Yoshikawa, M. Bioorg. เมดิ. เคมี. 2545, 10, 4005–4012.
7. โมริกาวะ ต.; เต๋า เจ.; อันโด, เอส.; มัตสึดะ, H.; โยชิกาวะ, เอ็มเจ แนท. แยง. 2546, 66, 638–645.
8. เต๋า เจ.; โมริกาวะ ต.; อันโด, เอส.; มัตสึดะ, H.; โยชิกาว่า, เอ็ม. เคม. เภสัช. วัว. 2546, 51, 654–662.
9. มัตสึดะ H.; โมริกาวะ ต.; Xie, H .; Yoshikawa, M. Planta Med. 2547, 70, 847–855.
10. ซัน, บี.; โมริกาวะ ต.; มัตสึดะ, H.; ทิวตระกูล, H.; วู LJ; ฮาริมะ, เอส.; โยชิกาวะ, เอ็มเจ แนท. แยง. 2547, 67, 1464–1469.
11. โมริกาวะ ต.; ซัน, บี.; มัตสึดะ, H.; วู LJ; ฮาริมะ, เอส.; โยชิกาว่า, เอ็ม. เคม. เภสัช. วัว. 2547, 52, 1194–1199.
12. Xie, H.; วัง, ต.; มัตสึดะ, H.; โมริกาวะ ต.; Yoshikawa, ม.; ตานี, ต. เคมี. เภสัช. วัว. 2548, 53, 1416–1422.
13. โมริกาวะ ต.; Xie, H .; มัตสึดะ, H.; โยชิกาวะ, เอ็มเจ แนท. แยง. 2549, 69, 881–886.
14. โมริกาวะ ต.; Xie, H .; มัตสึดะ, H.; วัง, ต.; โยชิกาว่า, เอ็ม. เคม. เภสัช. วัว. 2549, 54, 506–513.
15. โคบายาชิ เอช.; Karasawa, H.; มิยาเสะ, ต.; ฟุกุชิมะ, เอส. เคม. เภสัช. วัว. 2528, 33, 1452–1457.
16. คาราซาวา, เอช.; โคบายาชิ, H.; ทากิซาวะ น.; มิยาเสะ, ต.; Fukushima, S. Yakugaku Zasshi 1986, 106, 721–724.
17. คิตาจิมะ เจ.; อิชิกาว่า, ต.; ทานากะ, วาย. เคม. เภสัช. วัว. 1998, 46, 1643–1646.
18. ชิบะ, ม.; Hisada, S.; Nishibe, S.; Thieme, H. Phytochemistry 1980, 19, 335–336.
19. สเปกตรัม NMR 1H และ 13C ของ 1–3 ถูกกำหนดด้วยความช่วยเหลือของการเพิ่มประสิทธิภาพที่ไม่มีการบิดเบือนโดยการถ่ายโอนโพลาไรซ์ (DEPT) สเปกโตรสโกปีสหสัมพันธ์ตัวกรองควอนตัมคู่ (DQF COSY) และความเชื่อมโยงกันหลายควอนตัมเฮเทอโรนิวเคลียร์ (HMQC) การเชื่อมต่อหลายพันธะเฮเทอโรนิวเคลียร์ (HMBC) การทดลอง
20. อีซูกะ ต.; Nagai, M. Yakugaku Zasshi 2005, 125, 219–224.
