สำหรับข้อมูลเพิ่มเติมกรุณาติดต่อ:Joanna.jia@wecistanche.com

คลิกที่นี่เพื่อเป็นส่วนหนึ่ง

echinacoside กระตุ้นฮอร์โมนเอสโตรเจนและเพิ่มจำนวนอสุจิได้อย่างไร?

Cistanche deserticola มีเอฟเฟกต์มากมาย คลิกที่นี่เพื่อทราบข้อมูลเพิ่มเติม

การอภิปราย

บันทึกทางชาติพันธุ์วิทยาและการศึกษาก่อนหน้าของเรา13 ยืนยันว่าCistanche tubulosa สารสกัดเพิ่มระดับฮอร์โมนเพศอย่างมีประสิทธิภาพและปรับปรุงคุณภาพของตัวอสุจิ ECH เป็นหนึ่งในสารประกอบหลักในCistanchetubulosa19,20 สามารถเพิ่มจำนวนอสุจิและเพิ่มการหลั่งของ LH และ T (รูปที่ 1) ในการศึกษานี้ เราแสดงให้เห็นว่า ECH ถูกแจกจ่ายไปยังไฮโปทาลามัส แทนที่จะเป็นอัณฑะซึ่งบ่งบอกถึงผลกระทบทางอ้อมของ ECH ต่ออัณฑะ แท้จริงแล้ว ECH ยับยั้งการทำงานของ hypothalamic AR โดยตรง การโยกย้าย AR ไปยังนิวเคลียส และการแสดงออกของยีนที่เกี่ยวข้องกับแกน HPG และยังให้การป้องกันความเสียหายจากการสืบพันธุ์ที่เกิดจาก BPA

ในการศึกษาการผลิต gonadotrophin ของมนุษย์ ระดับฮอร์โมนเพศถูกควบคุมอย่างเข้มงวดโดยแกน HPG และลูปตอบรับเชิงลบ 21 กล่าวคือ การหลั่ง T เพิ่มขึ้นอย่างเห็นได้ชัดในการตอบสนองต่อการเพิ่มขึ้นของระดับ LH ในเลือดอย่างสม่ำเสมอและต่อเนื่องเพื่อตอบสนองต่อการขาดการตอบสนองแอนโดรเจนเชิงลบต่อต่อมใต้สมองและไฮโปทาลามัส ในการศึกษานี้ ECH ได้เพิ่มการหลั่งของ LH ในสมองและต่อมใต้สมองและการผลิตฮอร์โมนเพศชายในระดับอัณฑะและ mRNA ของ LHR และ Gnrhr ในสมองและต่อมใต้สมอง (รูปที่ 1 และรูปที่ 4) ซึ่งบ่งชี้ว่า ECH อาจส่งผลต่อการตอบสนองเชิงลบของแกน HPG . ไม่น่าแปลกใจเลยที่ AR เองมีบทบาทสำคัญในการควบคุมการป้อนกลับของระดับ T และ LH22,23 กระบวนทัศน์แกน HPG ของผู้ชายมีศูนย์กลางอยู่ที่ฮอร์โมนเทสโทสเตอโรนซึ่งให้การกดขี่ความคิดเห็นเชิงลบที่ระดับของทั้งไฮโปทาลามัสและต่อมใต้สมอง24,25 การศึกษาก่อนหน้านี้ใช้ Foxg1-Cre เพื่อขจัดยีนที่น่าสนใจในต่อมใต้สมอง แต่ไม่ใช่ในมลรัฐเพื่อกำหนดความสำคัญสัมพัทธ์ของทั้งสองภูมิภาค ผลการทดลองแสดงให้เห็นว่าการส่งสัญญาณ AR ในต่อมใต้สมองของหนูเมาส์ตัวผู้นั้นสามารถจ่ายได้ในเรื่องที่เกี่ยวกับการควบคุมการหลั่ง LH ที่ขึ้นกับฮอร์โมนเทสโทสเตอโรน26 ด้วยเหตุนี้ เราจึงเลือกเน้นที่ hypothalamic AR เพื่อการศึกษาต่อ

เอ็กไคนาโคไซด์ในcistancheสามารถปกป้องตับได้

ในฐานะที่เป็นตัวรับฮอร์โมนนิวเคลียร์สเตียรอยด์ กิจกรรมของ AR ถูกควบคุมโดยสเตียรอยด์ลิแกนด์ T ซึ่งมีผลผูกพันซึ่งจะเริ่มต้นการโยกย้ายนิวเคลียร์และหน้าที่การกำกับดูแลการถอดรหัสของ AR27 ในการศึกษานี้ เราแสดงให้เห็นว่าการรักษาด้วย ECH ยับยั้งการย้าย AR จากไซโตพลาสซึมไปยังนิวเคลียสในมลรัฐ (รูปที่3). นอกจากนี้ การศึกษา PK ยังแสดงให้เห็นว่า ECH สามารถเจาะทะลุไปยังไฮโปทาลามัสได้อย่างชัดเจนมากกว่าไปยังอัณฑะ ซึ่งบ่งชี้ว่ามี ECH มากกว่าที่ข้ามผ่าน Blood-Brain Barrier ซึ่งอาจผ่านทางเอนโดไซโทซิส แทนที่จะเป็น Blood Testis Barrier นอกจากนี้เรายังแสดงให้เห็นโดยทางอ้อม ELISA ว่าความสามารถในการรวมของ ECH และ AR ที่บอกว่า ECH สามารถผูกกับ AR ได้โดยตรง สิ่งนี้ได้รับการสนับสนุนเพิ่มเติมโดยผลลัพธ์ของการสอบวิเคราะห์การเทียบท่าของโมเลกุลที่บ่งชี้ว่ามีตำแหน่งการจับสมมุติฐานสำหรับ ECH อยู่ที่ Met-894 และ Val-713 ในกระเป๋า AR (รูปที่ 5D) สิ่งนี้สนับสนุนการค้นพบของผู้อื่นที่ AR มีส่วนร่วมในการควบคุมลูปฟีดเชิงลบและการลดลงของปฏิสัมพันธ์ AR-T ในสมองส่งผลให้มีการหลั่ง LH เพิ่มขึ้น23,28,29

Steroidogenesis เป็นกระบวนการที่ควบคุมอย่างเข้มงวดและจำเป็นสำหรับการพัฒนาของการสร้างสเปิร์มโดยมีส่วนร่วมของโปรตีน steroidogenic (StAR)30 และเอ็นไซม์สเตียรอยด์ เช่น CYP11A1, CYP17A1, 3 -hydroxysteroid dehydrogenase (HSD3 ) และ 17 -hydroxysteroid dehydrogenase (HSD17 ) ซึ่งเปลี่ยนคอเลสเตอรอลเป็นฮอร์โมนเพศชาย31. เราแสดงให้เห็นว่าระดับ mRNA ของยีนที่เข้ารหัสเอนไซม์เหล่านี้เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญด้วยการบำบัดด้วย ECH ในขณะที่การแสดงออกของ StAR mRNA ไม่เปลี่ยนแปลง นี่แสดงให้เห็นว่า ECH ไม่มีผลต่อการถ่ายโอนคอเลสเตอรอลไปยังเยื่อหุ้มชั้นในของไมโตคอนเดรีย ในขณะที่อาจมีบทบาทในการส่งเสริมการแปลงคอเลสเตอรอลเป็นฮอร์โมนเพศชาย จากนั้นสรุปได้ว่าการรักษา ECH ช่วยเพิ่มจำนวนอสุจิได้อย่างมีนัยสำคัญโดยการเพิ่มการสังเคราะห์และการหลั่งฮอร์โมนเทสโทสเตอโรน

เพื่อตรวจสอบผลการป้องกันของ ECH ต่อการบาดเจ็บของตัวอสุจิ bisphenol A (BPA) ซึ่งเป็นตัวทำลายต่อมไร้ท่อภายนอกทั่วไป ถูกใช้เป็นแบบอย่างของความเสียหายต่อการสืบพันธุ์ของผู้ชายในหนูเมาส์32 การรักษาด้วย ECH สามารถกู้คืนจำนวนอสุจิ การเคลื่อนไหวของตัวอสุจิ ระดับ T และ LH ที่ลดลงโดย BPA (รูปที่ 6A, B) ได้อย่างมีประสิทธิภาพ ซึ่งบ่งชี้ว่า ECH สามารถลดอาการบาดเจ็บของตัวอสุจิได้

เมื่อเทียบกับสารเคมีที่สังเคราะห์ขึ้นเพื่อการบำบัดทดแทนฮอร์โมน ECH เป็นสารประกอบธรรมชาติที่ไม่ใช่ฮอร์โมนที่ส่งผลต่อการตอบสนองเชิงลบต่อแกน HPG ซึ่งจะเป็นการเพิ่มการหลั่งของ LH, T และคุณภาพของสเปิร์ม วิถีทางกลไกนี้อาจปกป้องระบบสืบพันธุ์เพศชาย ดังนั้นจึงถือได้ว่า ECH เป็นสารป้องกันการสืบพันธุ์ตามธรรมชาติที่อาจเกิดขึ้นได้ อย่างไรก็ตาม กฎข้อบังคับของฮอร์โมนนั้นซับซ้อนและมักจะนำไปสู่ผลที่เป็นระบบ ตามที่ระบุในรูปที่ 7 ECH เพิ่มการหลั่ง T และ LH และยับยั้งการกระตุ้น AR ซึ่งอาจนำไปสู่ผลที่ตามมาต่อสุขภาพหรือวิถีทางที่เกี่ยวข้องกับโรคอื่นๆ เช่น โรคกระดูกพรุน33 และภาวะซึมเศร้าในผู้ชาย34 ดังนั้น ผลกระทบที่ครอบคลุมของ ECH ควรเพิ่มเติม สอบสวน เมื่อนำมารวมกัน ผลลัพธ์ของเราระบุว่า ECH จับกับ AR ในไฮโปทาลามัสและยับยั้งการถ่ายโอน AR จากไซโตพลาสซึมไปยังนิวเคลียส ข้อมูลของเราแนะนำว่า ECH ผูกกับไซต์ในกระเป๋า AR ที่กรดอะมิโน Met-894 และ Val-713 นี้อาจอธิบายการเพิ่มขึ้นของระดับ T และ AR เป็นการตอบสนองอย่างเป็นระบบต่อระดับฮอร์โมนที่สมดุลโดยการส่งเสริมการหลั่ง LH และการเพิ่มการผลิต T และจำนวนอสุจิในภายหลัง (รูปที่ 8)

เอ็กไคนาโคไซด์ในcistancheสามารถต่อต้านการเกิดออกซิเดชัน

วิธีการ คำชี้แจงจริยธรรม

การศึกษานี้ดำเนินการตามแนวทางปฏิบัติสำหรับสัตว์ทดลองที่จัดตั้งขึ้นโดยกระทรวงวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยี (ปักกิ่ง ประเทศจีน) อย่างเคร่งครัด ระเบียบวิธีการทดลองทั้งหมดได้รับการตรวจสอบและอนุมัติโดยคณะกรรมการจริยธรรมของสถาบันเทคโนโลยีอันยาง สัตว์ทดลอง. หนูคุนหมิงสายพันธุ์แท้อายุสี่สัปดาห์ (22 ก–25 ก.) ได้มาจากศูนย์สัตว์ของมหาวิทยาลัยแพทย์ทหารแห่งที่สี่ (ซีอาน ประเทศจีน) สัตว์ Te ถูกเลี้ยงไว้ภายใต้สภาวะควบคุมที่อุณหภูมิ 22 องศา ± 2 องศา , ความชื้น 70 เปอร์เซ็นต์ ± 4 เปอร์เซ็นต์ ด้วยการปั่นจักรยานในที่มืดเป็นเวลา 12 ชั่วโมง และสามารถเข้าถึงอาหารและน้ำได้โดยเสรี 6

ทดลองรักษา.

การทดลองที่ 1 สุ่มแบ่งหนูออกเป็นหกกลุ่ม โดยแบ่งเป็นหนูเจ็ดกลุ่มในแต่ละกลุ่ม (n=7) ECH (CAS: 82854-37-3; Chengdu Preferred Biotechnology Co., Ltd, Sichuan, China) ได้รับการดูแลโดยใช้ท่อทางเดินอาหาร และฮอร์โมน testosterone propionate (TP, CAS: 57-85-2; KingYork, Tianjin, China) ให้โดยการฉีดเข้ากล้ามวันละครั้งเป็นเวลา 14 วันตามการออกแบบการทดลองต่อไปนี้: กลุ่มควบคุม: น้ำเกลือปกติ (10มล./กก.), กลุ่ม ECH(L) (5 มก./กก.), กลุ่ม ECH(M) ( 20 มก./กก.), กลุ่ม ECH(H) (80 มก./กก.), TP (15 มก./กก.) และเอ็นซาลูตาไมด์ (ตัวยับยั้ง AR วันละครั้งทุกวัน ๆ เป็นเวลา 14 วัน; 20 มก./กก.; CAS: 915087-33-1; อะลาดิน , เซียงไฮ้ประเทศจีน). หลังจากการรักษา 2 สัปดาห์ หนูทดลองถูกทำให้หมดความรู้สึกด้วยไดเอทิล อีเทอร์ เพื่อเก็บตัวอย่างเลือดเพื่อวิเคราะห์ระดับฮอร์โมน จากนั้นหนูจะถูกผ่าเพื่อแยกไฮโปทาลามัส เอนเซฟาลอน บวกกับต่อมใต้สมอง อัณฑะ และคอดาอีพิดิไดมิส ตัวอย่างของ cauda epididymis ถูกใส่ในน้ำเกลือปกติที่มี BSA 5 เปอร์เซ็นต์สำหรับการประเมินคุณภาพของตัวอสุจิ และ hypothalamus, encephalon plus pituitary และอัณฑะถูกแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวและเก็บไว้ที่ −80 องศาเพื่อทำการตรวจสอบต่อไป การทดลองที่ 2 สุ่มแบ่งหนูออกเป็น 10 กลุ่ม กลุ่มละ 5 ตัว ECH (20 มก./กก.) ถูกบริหารให้ทางปากและหนูเมาส์ในแต่ละกลุ่มถูกดมยาสลบด้วยไดเอทิล อีเทอร์ที่จุดเวลา 0.5 ชม., 1 ชม., 1.5 ชม., 2 ชม., 2.5 ชม., 3 ชม., 4 ชม., 6 ชม., 9 ชม. และ 12 ชม. หลังการบริหารให้ การเก็บตัวอย่าง เก็บพลาสม่าและหัวใจถูกเปิดเผย การให้น้ำเกลือปกติเข้าไปในช่องด้านซ้ายโดยใช้เครื่องฉีดจนกว่าตับและปอดจะลวก รวบรวมไฮโปธาลามิและอัณฑะ 10 อันเพื่อหาความเข้มข้นของเนื้อเยื่อของ ECH การทดลองที่ 3 สุ่มแบ่งหนูเมาส์ออกเป็น 4 กลุ่ม โดยแบ่งเป็น 7 กลุ่มในแต่ละกลุ่ม ECH และ BPA (CAS: 80-05-7; Aladdin, Shanghai, China) ถูกบริหารให้โดยใช้สายยางในกระเพาะอาหารวันละครั้งเป็นเวลา 6 สัปดาห์ตามการออกแบบการทดลองต่อไปนี้: กลุ่มปกติ (น้ำมันข้าวโพด, 10 มล./กก., bw/ d) กลุ่มแบบจำลอง: กลุ่ม BPA (BPA 200 มก./กก. bw/d น้ำมันข้าวโพด) และกลุ่มทดลอง: กลุ่ม BPA บวก ECH (BPA 200 มก./กก. ECH 20 มก./กก.) หลังจาก 42 วันของการรักษา หนูทดลองถูกวางยาสลบด้วยไดเอทิล อีเทอร์ และเก็บตัวอย่างเลือดเพื่อวิเคราะห์ระดับฮอร์โมน Te testis และ cauda epididymis ถูกแยกและรวบรวม ใช้หลอดน้ำอสุจิสำหรับการประเมินคุณภาพของตัวอสุจิ และอัณฑะถูกแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวและเก็บไว้ที่ −80 องศาเพื่อทำการตรวจสอบต่อไป

การกำหนด ของ อสุจิ คุณภาพ. อสุจิ ระงับ การตระเตรียม. Cauda epididymides ถูกสับเป็นน้ำเกลือปกติ 5 มล. มี BSA 5 เปอร์เซ็นต์และฟักเป็นเวลา 5 นาทีที่ 37 องศาเพื่อให้เนื้อหากระจายไปในตัวกลาง

จำนวนอสุจิ: ตามวิธีการที่อธิบายโดย Yokoi (2003) สารแขวนลอยตัวอสุจิที่เจือจาง (1:10; v/v; ตัวอสุจิแขวนลอย/10 เปอร์เซ็นต์เมทานอล) ถูกถ่ายโอนไปยังห้องนับแต่ละห้องของฮีโมไซโตมิเตอร์ และได้รับอนุญาตให้ยืนเป็นเวลา 5 นาทีแล้วนับด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง (Nikon, Instruments Inc., Japan) ด้วยกำลังขยาย X200

ความอยู่รอดของอสุจิ: สารแขวนลอยตัวอสุจิทั้งหมด 20 ไมโครลิตรถูกผสมกับคราบอีโอซิน-นิโกรซินในปริมาตรที่เท่ากันเป็นเวลา 2 นาที; สเปิร์มที่ไม่เปื้อนถูกนับด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงที่กำลังขยาย 200 เท่า

การเคลื่อนที่ของอสุจิ: นำอสุจิจำนวน 10 ไมโครลิตรไปวางบนสไลด์แก้ว และบันทึกว่าเคลื่อนที่หรือไม่เคลื่อนที่ก็ได้ภายใต้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงที่กำลังขยาย 200 เท่า

การกำหนด ของ ฮอร์โมน ระดับ ระดับของฮอร์โมนเทสโทสเตอโรน (T) และ LH ถูกหาปริมาณในซีรัม เอนเซฟาลอนบวกกับต่อมใต้สมอง และอัณฑะ homogenates โดยใช้ชุดตรวจทางภูมิคุ้มกัน (RIA) (สถาบันเทคโนโลยีชีวภาพปักกิ่งชิโน-สหราชอาณาจักร ปักกิ่ง ประเทศจีน) โดยสรุป แอนติบอดีต้านฮอร์โมนเทสโทสเตอโรนหรือแอนติ-LH IgG (100 ไมโครลิตร) และ 125-แอนติบอดีต้านเมาส์ที่คอนจูเกต I ถูกเติมลงในตัวอย่างหรือมาตรฐาน (100 ไมโครลิตร) และผสมบนเครื่องโยกข้ามคืนที่ 4 องศา หลังจากล้างสามครั้งด้วย PBS-Tween 20 (500 ไมโครลิตร) ของผสมถูกหมุนเหวี่ยง (3500 รอบต่อนาที/นาที) ที่ 4 องศาเป็นเวลา 15 นาที ค่า CPM ของตะกอนถูกประเมินโดยเครื่องมือ radioimmunoassay (Beijing Sino-western Technology Co. Ltd, CN202M/KZ4GC-1200, Beijing, China) และคำนวณความเข้มข้นของ T และ LH ตามสูตรของมาตรฐาน เส้นโค้ง ค่าสัมประสิทธิ์การแปรผันของ T และ LH คือ 2.8 เปอร์เซ็นต์ และ 3.2 เปอร์เซ็นต์ ในกลุ่มตัวอย่าง และ 2.1 เปอร์เซ็นต์ และ 2.8 เปอร์เซ็นต์ ในกลุ่มมาตรฐาน ตามลำดับ

การกำหนด ของ ยีน สำนวน โดย เรียลไทม์ เชิงปริมาณ พีซีอาร์ Total RNA แยกได้จากอัณฑะแช่แข็งและเอนเซฟาลอน บวกกับเนื้อเยื่อต่อมใต้สมองโดยใช้ชุด RNA Simple Total RNA (Tiangen, Beijing, China) PCR แบบเรียลไทม์เชิงปริมาณ (q RT-PCR) ดำเนินการเพื่อขยาย cDNA โดยใช้ 2 × SYBR Green I PCR Master Mix (Vazyme, Nanjing, China) ขั้นตอน PCR ประกอบด้วย 95 องศาเป็นเวลา 30 วินาทีตามด้วย 35 รอบ 95 องศาเป็นเวลา 15 วินาที 58 องศาเป็นเวลา 30 วินาทีและ 72 องศาเป็นเวลา 30 วินาที การวิเคราะห์เส้นโค้งหลอมเหลวดำเนินการกับผลิตภัณฑ์ PCR เพื่อตรวจสอบความจำเพาะของไพรเมอร์และความบริสุทธิ์ของผลิตภัณฑ์ เส้นโค้งการแยกตัวถูกดำเนินการสำหรับแต่ละเพลตเพื่อยืนยันการผลิตผลิตภัณฑ์เดียว คำนวณความอุดมสมบูรณ์สัมพัทธ์ของแต่ละ mRNA ไพรเมอร์ PCR ที่ใช้สำหรับการศึกษาแสดงไว้ในตารางที่ 2

ทางทิศตะวันตก ซับ สำหรับการวิเคราะห์การแสดงออกของ AR การสกัดและแยกโปรตีนไซโตพลาสมิกและนิวเคลียสได้ดำเนินการโดยใช้ชุดสกัดโปรตีนไซโตพลาสซึมและนิวเคลียร์ (Beyotime, Nanjing, China) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ความเข้มข้นของโปรตีนไซโตพลาสซึมและนิวเคลียสได้รับการประเมินโดยใช้ Bradford Protein Assay Kit (Beyotime, Jiangsu, China) ตัวอย่างโปรตีน (80 ไมโครกรัม) ถูกรันบนเจล SDS-PAGE 12 เปอร์เซ็นต์และ 5 เปอร์เซ็นต์ และถ่ายโอนไปยังเมมเบรน PVDF หลังจากการปิดกั้น เยื่อหุ้มถูกบ่มด้วยแอนติบอดีต้าน AR IgG (1:1,000; ไบออส; ปักกิ่งประเทศจีน) และแอนติบอดีต้าน GAPDH ของหนูเมาส์ (1:1,000; Wuhan Boster ชีวภาพ

เทคโนโลยี, หวู่ฮั่น, ประเทศจีน) หรือเมาส์โพลีโคลนัลแอนติ-Lamin b1 แอนติบอดีเป็นเวลา 2 ชั่วโมง เมมเบรนถูกล้างสามครั้งด้วย TBST และบ่มด้วยแอนติบอดีต้านเมาส์ IgG ของกระต่ายที่คอนจูเกต HRP (1:5,000; Bioss; Beijing China) สัญญาณถูกแสดงภาพโดยใช้ ChemiDoc Imaging System (ถนน-3,500 เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน)

ประสิทธิภาพสูงของเหลว โครมาโตกราฟี (เอชพีแอลซี) การทดสอบ เก็บเลือดในหลอดแก้วเฮปาริไนซ์ พลาสมาถูกแยกออกโดยการหมุนเหวี่ยงทันทีที่ 6,000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 10 นาที และเก็บไว้ที่ -20 องศาสำหรับการทดลองต่อไป ตัวอย่างไฮโปทาลามัสและอัณฑะจากแต่ละจุดเวลาถูกรวมกลุ่มและทำให้เป็นเนื้อเดียวกันด้วยเมทานอล หลังจากการปั่นเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาที ที่ 4 องศา เป็นเวลา 10 นาที, ส่วนลอยเหนือตะกอนถูกทำให้เข้มข้นโดย N₂และส่วนที่เหลืออยู่ถูกละลายใน 50 ไมโครลิตรของเมทานอลและกรองผ่านตัวกรอง 0.45 ไมโครเมตร ของเหลวกรองตัวอย่างสิบไมโครลิตรถูกฉีดเข้าไปในระบบ HPLC เพื่อการวิเคราะห์

เส้นโค้งมาตรฐานประกอบด้วยตัวอย่างที่มี ECH 50, 100, 250, 500 และ 750 ng/mL (Chengdu Pufei De Biotech Co., Ltd, Sichuan, China) ตัวอย่างการควบคุมคุณภาพพลาสมาที่ถูกแทงด้วย ECH 75ng/mL (ต่ำ), 150 ng/ mL (ปานกลาง) และ 300 ng/mL (สูง) ของ ECH ถูกเตรียมขึ้นเพื่อวัดความแม่นยำและความแม่นยำของวิธีการ

โครมาโตกราฟีถูกดำเนินการด้วยระบบ HPLC (D2{{10}}00 ซีรีส์ Elite, Hitachi, Japan) ควบคู่กับเครื่องตรวจจับ UV (L-2400, Hitachi, Japan) ทำการแยกในคอลัมน์ Thermo-C18 (250 มม. × 4.6 มม. id, 4.6 µm อนุภาค) ที่ 25 องศา เฟสเคลื่อนที่เป็นเกรเดียนท์ที่เตรียมจากกรดฟอสฟอริก 0.1 เปอร์เซ็นต์ที่มีไตรเมทิลลามีน 0.04 เปอร์เซ็นต์ (ส่วนประกอบ A) และเมทานอล (ส่วนประกอบ B) การไล่ระดับสีเชิงเส้นเป็นดังนี้: 70–90 เปอร์เซ็นต์ A ตลอด 0-2 นาที, 60–70 เปอร์เซ็นต์ A ในช่วง 2-6 นาที, 55–60 เปอร์เซ็นต์ B ตลอด 6–8 นาที จากนั้นกลับสู่ 90 เปอร์เซ็นต์ A ที่ ทันที 8 นาที อัตราการไหลคือ 0.8 มล./นาที เครื่องตรวจจับรังสียูวีทำงานที่ 332 นาโนเมตร พื้นที่พีคได้รับการประเมินเป็นการวัดเชิงวิเคราะห์

เภสัชจลนศาสตร์ การศึกษา ใน หนู การแทรกซึมของ ECH ไปยังไฮโปทาลามัสและอัณฑะต้องได้รับการวิเคราะห์ทางเภสัชจลนศาสตร์ด้วยซอฟต์แวร์ยาและสถิติ (ยาและสถิติ คณะกรรมการวิชาชีพเภสัชวิทยาทางคณิตศาสตร์ของจีน) พารามิเตอร์ทางเภสัชจลนศาสตร์ถูกกำหนดโดยใช้วิธีการแบบไม่แบ่งส่วนตามทฤษฎีโมเมนต์ทางสถิติ พารามิเตอร์ทางเภสัชจลนศาสตร์เบื้องต้นรวมถึงค่าคงที่เวลาสูงสุด (T_max) ความเข้มข้นสูงสุด (C_max), ค่าคงที่อัตราการกำจัด (Kจ) การกำจัดครึ่งชีวิต (T_0.5) พื้นที่ใต้เส้นโค้ง (AUC_0–12) ปริมาณการกระจายที่ชัดเจน (Vc) และการกวาดล้าง (CL) ได้รับมาสำหรับการวิเคราะห์เพิ่มเติม อัตราส่วนสมอง/พลาสมาคำนวณจาก AUC_0-tค่าของพลาสมาและสมอง

ECH-โอวัลบูมิน (อีซีเอช-โอวีเอ) สังเคราะห์ และ บัตรประจำตัว ECH ทั้งหมด 9.8 มก. และบิวเทนไดออลแอนไฮไดรด์ 1.0 มก. ถูกละลายในไพริดีน 2 มล. ผสมเป็นเวลา 12 ชั่วโมงด้วยการกวนที่อุณหภูมิห้อง ของผสมถูกทำให้เข้มข้นโดย N₂และส่วนที่เหลือถูกรวมกับ 10.8 มก. ของN-ไฮดรอกซีซัคซินิไมด์ (NHS) และไดไซโคลเฮกซิลคาร์โบไดอิไมด์ (DCC) 19.3 มก. และละลายใน 4 มล.N, N-ไดเมทิลฟอร์มาไมด์ (DMF) เป็นเวลา 12 ชั่วโมงด้วยการกวนที่อุณหภูมิห้อง หลังจากการปั่นเหวี่ยงที่ 2,000 กรัม เป็นเวลา 5 นาทีที่ 4 องศา , ส่วนลอยเหนือตะกอนถูกเติมไปยัง 5 มล. ของ PBS โดยที่ 14.4 มก. โอวัลบูมิน (OVA) ถูกละลาย ของผสมใหม่ถูกกวนผสมเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่ 4 องศา จากนั้น สารละลายปฏิกิริยาถูกฟอกเพื่อต้าน PBS เป็นเวลาสามวัน การมีอยู่ของ ECH-OVA ได้รับการยืนยันโดย UV spectra (Shimadzu Scientifc Instruments, Inc. Columbia, MD USA) ที่ความยาวคลื่นตั้งแต่ 190 ถึง 400 นาโนเมตร รวมถึงการทำให้เสียสภาพ PAGE

ทางอ้อม ELISA (iELISA). ไมโครไทเทอร์เพลตถูกเคลือบด้วย ECH-OVA (2 ไมโครกรัม/100 ไมโครลิตร) และบ่มข้ามคืนที่ 4 องศา จานถูกล้างสามครั้งด้วย PBST และสองครั้งด้วย PBS และ 5 เปอร์เซ็นต์ PBSM (PBS ที่มีนมพร่องมันเนย 5 เปอร์เซ็นต์) ถูกเติมเพื่อปิดกั้นตำแหน่งที่ไม่ถูกผูกไว้ที่ 37 องศาเป็นเวลา 2 ชั่วโมง หลังจากล้างเพลตด้วย PBST และ PBS หลุมถูกแบ่งออกเป็น 4 กลุ่ม; กลุ่มทดลอง 1 ไมโครกรัม AR โปรตีนทั้งหมด/100 ไมโครลิตร; กลุ่มบวก แอนติบอดีต้าน OVA ของกระต่าย (1:1,000); กลุ่มเชิงลบ, อัลบูมินในซีรัมวัว 1 ไมโครกรัม; และกลุ่มว่างที่มี PBS หลังจากการฟักไข่เป็นเวลา 1.5 ชั่วโมง เพลตถูกล้าง และ 100 ไมโครลิตร/หลุมของ IgG ที่คอนจูเกต HRP ของกระต่าย (1:1,000) ถูกเติมไปยังกลุ่มบวก 100 ไมโครลิตร/หลุมของสารต้าน AR ถูกเติม (1:1,000) ให้กับกลุ่มอื่นๆ หลังจากการบ่มเป็นเวลา 1.5 ชั่วโมง, IgG ที่คอนจูเกต HRP ของกระต่าย (1:5,000) ของกระต่ายถูกเติมลงในเพลต หลังจากการฟักไข่ที่ 37 องศาเป็นเวลา 1 ชั่วโมง จานถูกล้างสามครั้งด้วย PBST และสองครั้งด้วย PBS เพิ่ม TMB และฟักเป็นเวลา 10 นาทีในที่มืดที่อุณหภูมิห้องและ 2 MH₂ดังนั้น₄ถูกเติมเพื่อหยุดปฏิกิริยา อ่านค่าการดูดกลืนแสงที่ความยาวคลื่น 450 นาโนเมตร

โมเลกุล เทียบท่า ทำการศึกษาการเทียบท่าระดับโมเลกุลเพื่อตรวจสอบโหมดการจับของสารประกอบ ECH กับตัวรับแอนโดรเจนของมนุษย์ (AR) โดยใช้ Autodock vina 1.1.2 โครงสร้างสามมิติ (3D) ของ AR (PDB ID: 2YHD) ถูกดาวน์โหลดจาก Protein Data Bank โครงสร้าง 3 มิติของ ECH ได้มาจากซอฟต์แวร์ ChemBioDraw Ultra 14.0 และ ChemBio 3D Ultra 14.0 แพ็คเกจ AutoDockTools 1.5.6 ถูกใช้เพื่อสร้างไฟล์อินพุตการเทียบท่า ตารางการค้นหาของ AR ถูกระบุว่าเป็น center x: 36.141, center y: 8.513 และ center z:

21.304 ด้วยขนาดขนาด x: 15 ขนาด y: 15 และขนาด z: 15 ค่าความละเอียดถี่ถ้วนถูกตั้งค่าเป็น 20 สำหรับ Vina docking พารามิเตอร์เริ่มต้นจะถูกใช้หากไม่มีการกล่าวถึง ท่าที่ทำคะแนนดีที่สุดซึ่งตัดสินโดยคะแนนการเทียบท่าของ Vina ได้รับการคัดเลือกและวิเคราะห์ด้วยสายตาโดยใช้ซอฟต์แวร์ PyMOL 1.7.6

ข้อมูล การวิเคราะห์ และ สถิติ วิธีการ วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้ซอฟต์แวร์ทางสถิติ SPSS 190 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) ใช้ ANOVA ทางเดียวเพื่อเปรียบเทียบระหว่างกลุ่มต่างๆ ได้ทำการทดสอบเปรียบเทียบความแตกต่างที่มีนัยสำคัญระหว่างกลุ่มโดย Tukey ผลลัพธ์แสดงเป็นค่าเฉลี่ย±ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (SD) โดยใช้ซอฟต์แวร์ Graph Pad Prism v.7 (GraphPad Software, Inc, California, USA)

จริยธรรม การอนุมัติ และ ยินยอม ถึง มีส่วนร่วม. ได้รับการอนุมัติทางจริยธรรมสำหรับการศึกษาครั้งนี้จากคณะกรรมการจริยธรรมของสถาบันเทคโนโลยีอันยาง

เอ็กไคนาโคไซด์ในcistancheรักษาได้โรคไต

อ้างอิง

1. Cano, SN, Misra, M. & Ackerman, KE Exercise, การฝึก, และแกน hypothalamic-pituitary-gonadal ในผู้ชายและผู้หญิง

ด้านหน้า. หอม. ความละเอียด47, 27–43 (2016).

2. Papadopoulos, V. & Miller, WL บทบาทของไมโตคอนเดรียในสเตียรอยด์ดีที่สุด ปฏิบัติ ความละเอียด ค. อ. 26, 771–790 (2012).

3. โรเน่ MBet อัล. การระบุโปรตีนที่ซับซ้อนของไมโตคอนเดรียซึ่งขับเคลื่อนการนำเข้าคอเลสเตอรอล การค้ามนุษย์ และการเผาผลาญอาหารไปสู่ฮอร์โมนสเตียรอยด์มล. เอ็นโดครินอล 26, 1868–1882 (2012).

4. Shibari, S. , Ylonen, H. & Palme, R. การขับถ่ายและการวัดสารคอร์ติโคสเตอโรนและฮอร์โมนเทสโทสเตอโรนในวอลลุ่มธนาคาร (Myodes glareolus)พล. คอมพ์ เอ็นโดครินอล 243, 39–50 (2017).

5. โอฮาร่า แอล.et อัล. การส่งสัญญาณของตัวรับแอนโดรเจนต่อมใต้สมองควบคุมโปรแลคติน แต่ไม่ใช่ gonadotrophins ในหนูตัวผู้PloS หนึ่ง. 10, e0121657 (2015).

6. Amador, AG, Parkening, TA, Beamer, WG, Bartke, A. & Collins, ตัวรับ TJ อัณฑะ LH และระดับฮอร์โมนหมุนเวียนในเมาส์สามรุ่นสำหรับโรคที่สืบทอด (Tfm/y, lit/lit และ hyt/hyt)เอ็นโดครินอล ประสบการณ์ 20, 349–58 (1986).

7. Bulldan, A. , Dietze, R. , Shihan, M. & Scheiner-Bobis, G. การส่งสัญญาณฮอร์โมนเพศชายที่ไม่ใช่แบบคลาสสิกผ่าน ZIP9 ช่วยกระตุ้นการแสดงออกของ claudin และการสร้างทางแยกที่แน่นในเซลล์ Sertoliเซลล์. สัญญาณ. 28, 1075–85 (2016).

8. Walker, WH การส่งสัญญาณฮอร์โมนเพศชายและการควบคุมการสร้างสเปิร์มการสร้างอสุจิ 1, 116–20 (2011).

9. Cao, C. & Kindscher, K. The Medicinal Chemistry of Echinacea Species (ed. Kindscher, K. ) 127–145 (Springer, 2016).

10. Jiang, ZH, Jian, W. , Li, XP & Zhang, XY Echinacoside และ Cistanchetubulosa (Schenk) R. Wight ช่วยแก้ไข bisphenol A ที่เกิดจากอัณฑะและความเสียหายของตัวอสุจิในหนูผ่านแกน gonad ควบคุมเอนไซม์ steroidogenicJ. เอธโนฟาร์มาคอล 193, 321–328 (2016).

11. Chiou, SY, Sung, JM, Huang, PW & Lin, SD Antioxidant, antidiabetic และ antihypertensive properties ของสารสกัดจากดอก Echinacea purpurea และอนุพันธ์ของกรดคาเฟอีนโดยใช้ใน หลอดแก้ว โมเดลJ. เมดิ. อาหาร. 20, 171–179 (2017).

12. Ross, SM Echinacea purpura: สารสกัดที่เป็นเอกสิทธิ์ของ echinacea purpura แสดงให้เห็นว่าปลอดภัยและมีประสิทธิภาพในการป้องกันโรคหวัดโฮลิสท์ พยาบาล ปฏิบัติ 30, 54–57 (2016).

13. วังต.et อัล. Cistanche tubulosaสารสกัดเอทานอลไกล่เกลี่ยระดับฮอร์โมนเพศของหนูโดยการเหนี่ยวนำของเอ็นไซม์สเตียรอยด์อัณฑะ

ยา. ไบโอล.54, 1–7 (2015).

14. Hotaling, JMet อัล. ความแตกต่างทางด้านประชากรศาสตร์และเศรษฐกิจและสังคมระหว่างผู้ชายที่ต้องการประเมินภาวะมีบุตรยากและผู้ที่ต้องการทำหมันด้วยการผ่าตัด: จากการสำรวจระดับชาติเรื่องการเติบโตของครอบครัวบียู อินเตอร์ 116, 288–292 (2015).

15. Jodar, M. , Solerventura, A. & Oliva, R. Semen โปรตีโอมิกส์และภาวะมีบุตรยากของผู้ชายJ. โปรตีโอมิกส์. องค์กร/

16. เราะห์มาน MSet อัล. Bisphenol-A มีผลต่อภาวะเจริญพันธุ์ของผู้ชายผ่านโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับภาวะเจริญพันธุ์ในตัวอสุจิวิทย์. ตัวแทน 5, 9169 (2015).

17. Xi, W.et อัล. ผลของการรับสารบิสฟีนอล เอ ปริกำเนิดและหลังคลอดต่อวงจรควบคุมที่แกนต่อมใต้สมอง-ต่อมใต้สมอง-ต่อมใต้สมองของหนู CD-1ทำซ้ำ ท็อกซิคอล 31, 409–17 (2011).

18. วิสเนียสกี้, พี.et อัล. การได้รับสารบิสฟีนอลเอ (BPA) ของผู้ใหญ่ในหนู Wistar จะลดคุณภาพของตัวอสุจิด้วยการหยุดชะงักของแกน hypothalamic-pituitary-testicularพิษวิทยา. 329, 1–9 (2015).

19. Wang, T. , Zhang, X. และ Xie, W.Cistanche deserticolaYC Ma "โสมทะเลทราย": บทวิจารณ์เป็น. J. คาง. เมดิ. 40, 1123–1141 (2012).

20. Li, Y. , Zhou, G. , Peng, Y. , Tu, P. & Li, X. การคัดกรองและการระบุสารเมตาโบไลต์ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ทั่วไปสามชนิดจาก Cistanches Herba โดยแบคทีเรียในลำไส้ของมนุษย์โดยใช้ UPLC/Q-TOF-MS .J. Pharmaceut ไบโอม. 118, 167–176 (2016).

21. Matsumoto, AM Andropause ผลกระทบทางคลินิกของการลดลงของระดับฮอร์โมนเพศชายในซีรัมเมื่ออายุมากขึ้นในผู้ชายJ. เจรอนทอล A. ไบโอล. วิทย์. เมดิ. วิทย์. 57, M76–M99 (2002).

22. อลูจา, เอ.et อัล. ปฏิกิริยาระหว่างความหุนหันพลันแล่น เทสโทสเตอโรน โกลบูลินที่จับกับฮอร์โมนเพศ และยีน CAG รีเซพเตอร์แอนโดรเจนฟิสิออล พฤติกรรม 147, 91–96 (2015).

23. Walters, KA, Simanainen, U. & Handelsman, DJ Molecular ให้ข้อมูลเชิงลึกเกี่ยวกับการกระทำของแอนโดรเจนในฟังก์ชันการสืบพันธุ์ของเพศชายและเพศหญิงจากแบบจำลองที่น่าพิศวงของตัวรับแอนโดรเจนฮึ่ม ทำซ้ำ อัปเดต. 16, 543–558 (2010).

24. Sar, M. , Lubahn, DB, French, FS & Wilson, EM การแปลอิมมูโนฮิสโตเคมีคัลของตัวรับแอนโดรเจนในหนูและเนื้อเยื่อของมนุษย์วิทยาต่อมไร้ท่อ 127, 3180–3186 (1990).

25. เหลียง YQet อัล. ผลของฮอร์โมนโปรเจสเตอโรนต่อโปรไฟล์การแสดงออกของการถอดรหัสของยีนที่เกี่ยวข้องกับแกน hypothalamic-pituitary-gonadal และ hypothalamic-pituitary-adrenal ในช่วงแรกของการพัฒนา zebrafish (Daniorerio)เคมี 128, 199–206 (2015).

26. O'Hara, L. & Smith, LB ตัวรับแอนโดรเจนมีบทบาทในการสร้างสเปิร์มและภาวะมีบุตรยากดีที่สุด. ปฏิบัติ ความละเอียด ค. อ. 29, 595–605 (2015).

27. Lindzey, J. , Kumar, MV, Grossman, M. , Young, C. & Tindall, DI กลไกระดับโมเลกุลของการกระทำของแอนโดรเจนวิตามิน หอม. 49, 383–432 (1994).

28. จำเป็นต้องมีฟังก์ชัน Holdcraft, RW & Braun, RE ตัวรับแอนโดรเจนในเซลล์ Sertoli สำหรับการแยกขั้วของสเปิร์มเดี่ยวการพัฒนา. 131, 459–467 (2004).

29. Holdcraft, RW & Braun, RE การควบคุมฮอร์โมนของการสร้างสเปิร์มอินเตอร์ J. แอนดรอล 27, 335–342 (2004).

30. Luu-The, V. การประเมินการทำงานของสเตียรอยด์และการทำงานของเอนไซม์สเตียรอยด์J. สเตียรอยด์ ไบโอเคมี. มล. ไบโอล. 137, 176–182 (2013).

31. Ye, L. , Su, ZL & Ge, RS Inhibitors ของฮอร์โมนเทสโทสเตอโรนและเอนไซม์กระตุ้นการเผาผลาญโมเลกุล 16, 9983–10001 (2011).

32. Khan, D. & Ahmed, SA ระเบียบ Epigenetic ของเซลล์ที่ไม่ใช่ต่อมน้ำเหลืองโดย Bisphenol A ซึ่งเป็นตัวทำลายต่อมไร้ท่อรุ่น: ผลกระทบที่อาจเกิดขึ้นสำหรับการควบคุมภูมิคุ้มกันด้านหน้า. เอ็นโดครินอล 6, 91 (2015).

33. Mohamad, NV, Soelaiman, IN & Chin, KY บทวิจารณ์สั้น ๆ เกี่ยวกับฮอร์โมนเพศชายและสุขภาพกระดูกคลินิก Interv ริ้วรอยก่อนวัย 11, 1317 (2016).

34 Akerman, J. Kovac, JR & Lipshultz, การบำบัดด้วยฮอร์โมนเพศชาย LI ช่วยเพิ่มความเป็นอยู่ที่ดีและสุขภาพจิตสกุลเงิน. ความคิดเห็น. ระบบทางเดินปัสสาวะy. (2017).

รับทราบ

งานนี้ได้รับการสนับสนุนโดย Program for Science and Technology Innovation Talents in Universities of Henan Province (18HASTIT035) HASTIE, Construction Program of Modern Biological Technology Research Institute of Anyang Institute of Technology และ The Key Constructions Program (2015SD0018) of International Cooperation Base in S&T มณฑลส่านซี ประเทศจีน

ผลงานของผู้เขียน

Zhi-hui Jiang และ Bo Zhou ออกแบบงานวิจัย ทำการวิจัย วิเคราะห์ข้อมูล และเขียนบทความ Xin-ping Li และ Gordon M. Kirby ออกแบบการวิจัยและวิเคราะห์ข้อมูล Xiao-Ying Zhang ออกแบบงานวิจัย

ข้อมูลเพิ่มเติม

การแข่งขันความสนใจ:ผู้เขียนประกาศไม่มีผลประโยชน์ที่แข่งขันกัน

สำนักพิมพ์ บันทึก: Springer Nature ยังคงเป็นกลางเกี่ยวกับการอ้างสิทธิ์ในเขตอำนาจศาลในแผนที่ที่เผยแพร่และการสังกัดสถาบัน