PartⅠQi Sui Zhu Shui Plaster ยับยั้งการส่งสัญญาณ AQP1 และ MAPK ช่วยลดความเสียหายของตับที่เกิดจากน้ำในช่องท้องที่เป็นตับแข็ง

เชิงนามธรรม

1. วัตถุประสงค์

ในปัจจุบัน การแพทย์แผนปัจจุบันยังไม่มีวิธีรักษาภาวะน้ำในช่องท้องเป็นตับแข็งเป็นพิเศษ ปูนปลาสเตอร์ Qi Sui Zhu Shui (QSZSP) ถูกนำมาใช้ในภาวะน้ำในช่องท้อง การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษากลไกการออกฤทธิ์ของ QSZSP ในการรักษาภาวะน้ำในช่องท้องจากตับแข็งและความสัมพันธ์กับ aquaporin 1 (AQP1)

2. วิธีการ

หนู 24 ตัวถูกแบ่งออกเป็นสี่กลุ่ม แต่ละกลุ่มมีหนูหกตัว ฉีดคาร์บอนเตตระคลอไรด์-น้ำมันมะกอกเข้าไปในแบบจำลอง กลุ่มควบคุมและแบบจำลองได้รับการรักษาด้วยพลาสเตอร์เจลเปล่า (2 ซม. × 2 ซม.) กลุ่มที่ได้รับ QSZSP ปริมาณต่ำได้รับการปฏิบัติด้วยพลาสเตอร์ Qi Sui Zhu Shui (1 ซม. × 1 ซม.) และกลุ่มที่ได้รับปริมาณสูง QSZSP รักษาด้วย Qi ปูนปลาสเตอร์สุ่ยจู้จุ้ย (2 ซม. × 2 ซม.) วัดการเปลี่ยนแปลงของน้ำหนักตัวและเส้นรอบวงท้อง สังเกตการเปลี่ยนแปลงทางจุลพยาธิวิทยาในตับ ไต และเยื่อบุช่องท้องในการย้อมสี HE ตรวจพบดัชนีทางชีวเคมีที่เกี่ยวข้องกับการทำงานของตับ และการเปลี่ยนแปลงการแสดงออกของ AQP1 และการเปิดใช้งานเส้นทาง MAPK ในตับ ไต และเนื้อเยื่อช่องท้องได้รับการประเมินในการย้อมสี IHC และ Western blot

3. ผลลัพธ์

หลังจากฉีดน้ำมันตับคาร์บอนเตตระคลอไรด์หนึ่งสัปดาห์ หนูทดลองในกลุ่มจำลองจะเพิ่มน้ำหนักตัวอย่างช้าๆ และเส้นรอบวงท้องของหนูจำลองยังคงเพิ่มขึ้นตามเวลา หลังจาก 16 สัปดาห์ของการสร้างแบบจำลองน้ำในช่องท้องจากตับแข็ง ตับ ไต และเยื่อบุช่องท้องได้รับความเสียหายอย่างมีนัยสำคัญ และระดับซีรัมของ TBiL, AST, ALT, Cr, BUN, K, Na และ Ca ในหนูแรทก็สูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ ( P < 0.001) และระดับ ALB ต่ำกว่าอย่างมีนัยสำคัญ (P < 0.001) กว่าในกลุ่มควบคุม หลังจากรักษาได้ 4 สัปดาห์ อาการบาดเจ็บที่ตับ ไต และช่องท้องก็ดีขึ้น ระดับ TBiL, AST, ALT, Cr, BUN, K, Na และ Ca ต่ำกว่าอย่างมีนัยสำคัญ (P < 0.001) และระดับ ALB สูงกว่ากลุ่มแบบจำลองอย่างมีนัยสำคัญ ( P < 0.001) บวกกับการแสดงออกของโปรตีน e ของ AQP1, p-ERK, p-JNK และ p-p38 พบว่าถูกยับยั้งในตับ ไต และเยื่อบุช่องท้อง

4. บทสรุป

QSZSP ยับยั้งการแสดงออกของโปรตีนของเส้นทางการส่งสัญญาณ AQP1 และ MAPK ในตับ เยื่อบุช่องท้อง และไต เพื่อบรรเทาอาการบาดเจ็บของตับ ไต และช่องท้องที่เกิดจากภาวะน้ำในช่องท้องที่เป็นตับแข็ง จึงช่วยลดการเจริญเติบโตที่ผิดปกติของเส้นรอบวงในช่องท้อง

คำหลัก

AQP1, สัญญาณ MAPK, การบาดเจ็บของตับ, น้ำในช่องท้อง,อาหารเสริม Cistanche.

คลิกที่นี่เพื่อรับประโยชน์ของ Cistanche

การแนะนำ

โรคตับแข็งเป็นโรคทางคลินิกที่พบได้บ่อย ซึ่งเกิดจากการเปลี่ยนแปลงทางพยาธิวิทยาหลายอย่าง เช่น การเสื่อมสภาพ เนื้อร้าย การเกิดใหม่ และการขยายตัวของเนื้อเยื่อเส้นใยของเซลล์ตับ เนื่องจากปัจจัยก่อโรคต่างๆ บนเนื้อเยื่อตับที่กระทำอย่างต่อเนื่องหรือซ้ำๆ ฟังก์ชั่นลดลง [1] ไม่ทราบความชุกของโรคตับแข็งทั่วโลก ความชุกของโรคตับแข็งในสหรัฐอเมริกาอยู่ที่ประมาณ 0.15 เปอร์เซ็นต์ –0.27 เปอร์เซ็นต์ [2] 69 เปอร์เซ็นต์ของคนไม่รู้ว่าตัวเองเป็นโรคตับแข็ง และโรคเบาหวาน การดื่มสุรา ไวรัสตับอักเสบซีและไวรัสตับอักเสบบี การเป็นผู้ชายและมีอายุมากขึ้นล้วนเกี่ยวข้องกับโรคตับแข็ง [3] โดยไม่คำนึงถึงสาเหตุ ร้อยละ 50 ของผู้ป่วยโรคตับแข็งจะเกิดโรคกล้ามเนื้อหัวใจแข็ง [4] รายงานสถิติชีพแห่งชาติประจำปี 2560 ของสหรัฐอเมริกา รายงานว่า ผู้ใหญ่ประมาณ 4.5 ล้านคน หรือร้อยละ 1.8 ของประชากรผู้ใหญ่ มีโรคตับเรื้อรังและโรคตับแข็ง 41,473 คนเสียชีวิตจากโรคตับเรื้อรังและโรคตับแข็ง [5]

น้ำในช่องท้องเป็นอาการทางคลินิกที่โดดเด่นที่สุดของโรคตับแข็ง เป็นภาวะที่มีของเหลวสะสมในช่องท้องมากผิดปกติ ประมาณร้อยละ 60 ของผู้ป่วยโรคตับแข็งแบบชดเชยมีการสะสมของน้ำในช่องท้องผิดปกติภายใน 10 ปีหลังจากการวินิจฉัย อุบัติการณ์สูงและการพยากรณ์โรคที่ไม่ดีของภาวะน้ำในช่องท้องจากตับแข็ง โดยเฉพาะอย่างยิ่งภาวะน้ำในช่องท้องที่ไม่แข็งแรงสามารถทำให้เกิดภาวะแทรกซ้อนร้ายแรงมากมาย ซึ่งส่งผลกระทบร้ายแรงต่อคุณภาพชีวิตและอัตราการรอดชีวิตของผู้ป่วยโรคตับแข็ง [7]. ร้อยละ 90 ของผู้ป่วยมะเร็งตับมีความเกี่ยวข้องกับการเกิดโรคตับแข็ง [8]

ยาแผนจีน (TCM) มีผลในการยับยั้งหรือชะลอมะเร็งและมีความเป็นพิษต่ำ [9] การใช้สมุนไพรจีนในระยะยาวสามารถลดความเสี่ยงของโรคตับแข็งในผู้ป่วยโรคตับอักเสบบีเรื้อรัง [10] ปูนปลาสเตอร์ Qi Sui Zhu Shui (QSZSP) ประกอบด้วย Radix Astragali, Radix Kansui, Radix Aucklandiae, Poria, Herba Leonuri, Radix Salviae miltiorrhizae และ Pericarpium Arecae การศึกษาทางคลินิกก่อนหน้านี้พบว่าการรักษาแบบเสริม QSZSP ของผู้ป่วยที่มีภาวะน้ำในช่องท้องจากตับแข็งส่งผลให้ปัสสาวะออกได้ดีขึ้น การขับโซเดียมในปัสสาวะ 24 ชั่วโมง ลดระดับครีเอตินินและบิลิรูบินทั้งหมด ปริมาณอัลบูมินเพิ่มขึ้น อัตราการกลับเป็นซ้ำของน้ำในช่องท้องดีขึ้นหลังจาก 3 เดือนของการรักษาด้วย QSZSP อย่างต่อเนื่อง [11]. มีการศึกษาเพียงเล็กน้อยเกี่ยวกับ QSZSP และน้ำในช่องท้องจากตับแข็ง ในประวัติศาสตร์ของการวิจัยเกี่ยวกับส่วนประกอบใน QSZSP และโรคตับแข็ง เซียวจ่างเถี่ยเป็นยาเสริมในการรักษาเบื้องต้นของภาวะน้ำในช่องท้องจากตับแข็งมีความปลอดภัย [12] Salviae miltiorrhizae ช่วยบรรเทาอาการตับแข็งและความดันโลหิตสูงในพอร์ทัลได้อย่างมีนัยสำคัญ [13] จำเป็นต้องมีการศึกษาเพิ่มเติมเกี่ยวกับตัวการออกฤทธิ์ของ QSZSP ในการรักษาโรคตับแข็งในช่องท้อง

แชนเนล และต่อมา CHIP28 ถูกเปลี่ยนชื่อเป็น aquaporins [14, 15] aquaporins สิบสามตัว (AQP0-AQP12) ได้รับการระบุ [16–18] Aquaporins มีสามไอโซฟอร์ม ประเภทย่อยที่หนึ่งขนส่งเฉพาะโมเลกุลของน้ำ ประเภทย่อยที่สองขนส่งโมเลกุลของน้ำ ยูเรีย กลีเซอรอล ฯลฯ และประเภทย่อยที่สามขนส่งช่องทางเปิดอย่างต่อเนื่องโดยไม่มีการใช้พลังงานหรือการควบคุม [19–21] Aquaporin 1 (AQP1) อยู่ในประเภทย่อยแรก ซึ่งมีอยู่ในรูปแบบ tetramer และยอมให้มีเฉพาะโมเลกุลของน้ำเท่านั้นที่จะขนส่งผ่านเมมเบรน และเป็นช่องทางน้ำอิสระ [22, 23] ตับ เยื่อบุช่องท้อง และไตเป็นอวัยวะที่อยู่ใกล้ชิดกัน และ AQP1 จะกระจายไปที่ตับ เยื่อบุช่องท้อง และไต [24] ปริมาณน้ำในร่างกายมนุษย์คือร้อยละ 70 ของน้ำหนักตัว และการผลิต-การดูดซึม-การขับน้ำที่ผิดปกติในช่องท้องเป็นปัจจัยสำคัญในการก่อตัวของน้ำในช่องท้อง [19] AQP1 เป็นหนึ่งในอะควาพอรินที่เกี่ยวข้องกับการขนส่งโมเลกุลของน้ำเท่านั้น ภาวะท้องมานในตับแข็งนำไปสู่การสะสมของของเหลวในตับมากขึ้น และของเหลวส่วนเกินจะถูกถ่ายโอนไปยังเยื่อบุช่องท้อง ซึ่งไม่สามารถดูดน้ำกลับคืนได้เพียงพอ และท้ายที่สุดจะทำให้ไตดูดซึมน้ำกลับเพิ่มขึ้น ดังนั้น AQP1 อาจเป็นตัวกลางที่สำคัญในการศึกษา การเผาผลาญของน้ำในช่องท้อง

ในขั้นต้น โรคตับแข็งทำให้การทำงานของตับลดลงและเพิ่มการสะสมของของเหลวในช่องท้องและช่องทรวงอก ทำให้เกิดน้ำในช่องท้อง [25] น้ำในช่องท้องเกิดขึ้นทั่วไปในโรคตับแข็ง [6] Ascites คือการสะสมของเหลวที่ผิดปกติในช่องท้อง [6] ภาวะน้ำในช่องท้องที่เป็นตับแข็งสามารถนำไปสู่ความผิดปกติของไตได้ [26] ในสมมติฐานการขยายตัวของหลอดเลือดแดงส่วนปลาย ไตมีส่วนเกี่ยวข้องกับน้ำในช่องท้องทั้ง 5 ระยะ [27] ด้วยการเชื่อมโยงการแสดงออกของ AQP1 ในตับ เยื่อบุช่องท้อง และไต เราเสนอแกน "ตับ-ช่องท้อง-ไต" ในน้ำในช่องท้องที่เป็นตับแข็ง และแนะนำว่ามันมีบทบาทสำคัญในการก่อตัวของน้ำในช่องท้องที่เป็นตับแข็ง มีรายงานว่า AQP1 ถูกควบคุมโดยสารยับยั้ง MEK1/2 ในเซลล์เกลีย [28] ในเซลล์มะเร็งต่อมลูกหมาก ระดับการแสดงออกของโปรตีน AQP1 จะถูกควบคุมโดย p38MAPK [29] ในเซลล์เยื่อหุ้มปอดของมนุษย์ peptidoglycan ยับยั้งการควบคุม p38 MAPK ของการแสดงออกของโปรตีน AQP1 [30] ดังนั้นเส้นทาง MAPK จะเป็นทิศทางของการเปลี่ยนแปลง AQP1 ในแกน "ตับ-ช่องท้อง-ไต"

บทบาทของ QSZSP ในการรักษาภาวะน้ำในช่องท้องจากตับแข็งและความสัมพันธ์กับ AQP1 ยังไม่ได้รับการรายงาน เราคาดการณ์ว่าแกน "ตับ-ช่องท้อง-ไต" เป็นแกนการทำงานของเมแทบอลิซึมของน้ำที่มีอะควาโพรินเป็นวัสดุพื้นฐานทั่วไป ซึ่งมีส่วนร่วมใน "การผลิต-การดูดซึม-การตัดออก" ของของเหลวในช่องท้อง และมีบทบาทสำคัญในการก่อตัว ของน้ำในช่องท้องตับแข็ง เส้นทาง MAPK อาจไกล่เกลี่ยกฎระเบียบ QSZSP ของ AQP1 ดังนั้น ในการศึกษานี้ เราจึงทำการรักษาหนูที่มีภาวะตับแข็งในหลอดทดลองด้วย QSZSP สังเกตการเปลี่ยนแปลงทางจุลพยาธิวิทยาในตับ ไต และเยื่อบุช่องท้อง และประเมินการเปลี่ยนแปลงในการแสดงออกของ AQP1 และการกระตุ้นทางเดิน MAPK ในตับ ไต และช่องท้อง เนื้อเยื่อเพื่ออธิบายผลของ QSZSP ในการรักษาภาวะน้ำในช่องท้องและกลไกของมัน

สารสกัดจากซิสแตนช์

วัสดุและวิธีการ

1. ผู้สำเร็จราชการ

รีเอเจนต์ที่ใช้มีดังนี้: คาร์บอนเตตระคลอไรด์ (C805332) จาก Macklin, น้ำมันมะกอกจาก Yihai Kerry Golden Dragon Fish Cereals, Oils and Foodstuffs Co., Ltd. (จีน), ไซลีนและเอธานอลสัมบูรณ์จาก National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd. (จีน), eosin (E8090) และเรซินที่เป็นกลาง (G8590) จาก Solarbio (จีน) และ hematoxylin (G1004) จาก Service

2. กระบวนการฉาบปูน Qi Sui Zhu Shui

ปูนปลาสเตอร์ Qi Sui Zhu Shui ประกอบด้วย Radix Astragali, Radix Kansui, Radix Aucklandiae, Poria, Herba Leonuri, Radix Salviae miltiorrhizae และ Pericarpium Arecae ยาจีน 7 ชนิดข้างต้นซื้อจากโรงพยาบาลในเครือแห่งแรกของมหาวิทยาลัยการแพทย์แผนจีนกว่างซี ตามข้อกำหนดของ "ตำรับยาจีน" ฉบับปี 2010

เติมน้ำ 12 มล. ลงใน Radix Astragali, Poria และ Herba Leonuri 1 กรัมและแช่ไว้ 30 นาที สกัดน้ำซ้ำ 3 ครั้ง ครั้งละ 1.5 ชั่วโมง จากนั้นนำสารสกัดมารวมกันและกรอง . เอทานอล 85 เปอร์เซ็นต์ 6 มล. เติมลงใน Radix Kansui, Radix Aucklandiae, Radix Salviae miltiorrhizae และ Pericarpium Arecae 1 กรัม แช่นาน 30 นาที สกัดกรดไหลย้อนซ้ำ 2 ครั้ง ครั้งละ 1.5 ชั่วโมง จากนั้นนำสารสกัดมารวมกันและ กรอง สารสกัดทั้งสองข้างต้นรวมกันและทำให้แห้งภายใต้สุญญากาศเพื่อเตรียมผงแห้ง เบสประกอบด้วย SodiuM อะคริเลต 60 เปอร์เซ็นต์ คาร์โบเมอร์ 30 เปอร์เซ็นต์ อะลูมิเนียมไกลซิเนต 10 เปอร์เซ็นต์ และกลีเซอรีน 6 เท่า สารเพิ่มการแทรกซึมประกอบด้วย Azone 50 เปอร์เซ็นต์และโพรพิลีนไกลคอล 50 เปอร์เซ็นต์ ผสมเบส สารเพิ่มการแทรกซึม และผงแห้ง ใช้ Coater (RK-200, Tianjin Ruikang Babu Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd.) ที่ผลิต QSZSP ไฮโดรเจลเพสต์เตรียมโดยเครื่องเคลือบไฮโดรเจล RK-200 (Tianjin Ruikang Babu Pharmaceutical Biotechnology Co.) แต่ละเม็ดของผลิตภัณฑ์นี้มี Astragalus methylase (C41H68O14) ใน Radix Astragali ไม่น้อยกว่า 0.6932 มก. และ Euphorbia grandis dienol (C30H50O) ใน Radix Kansui ไม่น้อยกว่า 1.4766 มก.

3. สัตว์

สัตว์จากมหาวิทยาลัย Gorges สามแห่ง คือหนู 24 ตัว เพศผู้ น้ำหนัก 200∼250 กรัม ถูกเลี้ยงภายใต้เงื่อนไขที่ไม่มีเชื้อโรคเฉพาะ (ปลอดเชื้อโรคเฉพาะ, SPF) สภาพแวดล้อมในการให้อาหารคือ 22–26 องศา , 50 เปอร์เซ็นต์ –60 เปอร์เซ็นต์ของความชื้นสัมพัทธ์ การสร้างแบบจำลองจะเริ่มในอีกสองสัปดาห์ คาร์บอนเตตระคลอไรด์-น้ำมันมะกอกในสัดส่วน 4:6 ขนาดยาฉีดเข้าช่องท้อง 3 มล./กก. น้ำหนักตัว และให้ฉีดสัปดาห์ละสองครั้ง (สี่วันและเจ็ดวัน) เป็นเวลาสิบเอ็ดสัปดาห์ สำหรับกลุ่มควบคุม ได้รับการฉีดไอโซโทนิกเข้าทางช่องท้องของน้ำมันมะกอกในปริมาณที่เท่ากัน วัดน้ำหนักและเส้นรอบวงท้องก่อนฉีดแต่ละครั้ง ในช่วงเวลาดังกล่าว น้ำกลั่นที่มีแอลกอฮอล์ทางการแพทย์ 75 เปอร์เซ็นต์ถูกใช้เพื่อเตรียมน้ำดื่มที่มีความเข้มข้น 10 เปอร์เซ็นต์สำหรับหนู ในที่สุด ภายในสี่สัปดาห์ของการรักษา น้ำหนักตัว (ตารางที่ 1) และเส้นรอบวงท้อง (ตารางที่ 2) ของหนูถูกวัดสองครั้งต่อสัปดาห์เป็นเวลา 15 สัปดาห์

4. การรักษาและการสุ่มตัวอย่าง

หนูจำนวน 24 ตัวถูกแบ่งออกเป็นสี่กลุ่ม แต่ละกลุ่มมีหนูหกตัว หนูทุกตัวได้รับการกำจัดขนทางหน้าท้อง และพื้นที่การกำจัดขนคือ 3 ซม. × 3 ซม. กลุ่มควบคุม (Con) ได้รับการปฏิบัติด้วยพลาสเตอร์เจลเปล่า (2 ซม. × 2 ซม.) กลุ่มโมเดล (Mod), พลาสเตอร์เจลเปล่า (2 ซม. × 2 ซม.); กลุ่มยา QSZSP ขนาดต่ำ พลาสเตอร์ Qi Sui Zhu Shui (1 ซม. × 1 ซม.); และกลุ่มยาขนาดสูง QSZSP พลาสเตอร์ Qi Sui Zhu Shui (2 ซม. × 2 ซม.) นำไปใช้กับผิวหนังหน้าท้องของหนูที่มีขนดกวันละครั้งเป็นเวลา 6 ชั่วโมงเป็นเวลา 4 สัปดาห์ ฉีดคาร์บอนเตตระคลอไรด์-น้ำมันมะกอกเข้าใต้ผิวหนังที่หลังสัปดาห์ละครั้งระหว่างการรักษาเพื่อป้องกันการกลับเป็นซ้ำของโรคตับแข็ง หลังจากสี่สัปดาห์ สัตว์เหล่านี้ถูกฆ่าโดยการวางยาสลบและการเอาเลือดออก หากสัตว์ไม่ตาย สัตว์จะถูกทำให้สลบจนตายด้วยการใช้ยาเพนโทบาร์บิทัลโซเดียมเกินขนาด (100 มก./กก.) หลังจากการดมยาสลบ สัตว์เหล่านี้ตายโดยไม่หายใจหรือไม่มีการเต้นของหัวใจ วิธีการใช้กระดาษกรองเพื่อให้ได้น้ำในช่องท้อง เลือดจากหลอดเลือดแดงใหญ่ในช่องท้องจะถูกรวบรวมและหมุนเหวี่ยง และรวบรวมซีรั่ม เนื้อเยื่อตับ เนื้อเยื่อไต และเยื่อบุช่องท้องในปริมาณที่เหมาะสมจะถูกตัดออกและตรึงด้วยพาราฟอร์มัลดีไฮด์ 4 เปอร์เซ็นต์ นอกจากนี้ เนื้อเยื่อของตับ เยื่อบุช่องท้อง และไตถูกเก็บไว้ในตู้เย็นอุณหภูมิต่ำพิเศษที่ −80 องศา ตับ ไต และเนื้อเยื่อช่องท้องของหนูที่ถูกทำให้แห้งและถูกฝังอยู่ในขี้ผึ้ง ชิ้นส่วนถูกแช่แข็งที่อุณหภูมิ −20 องศา และตัดให้มีความหนา 3 ไมโครเมตร ใช้อ่างน้ำเพื่อยืดส่วนต่าง ๆ ส่วนต่าง ๆ ติดกับสไลด์ และส่วนต่าง ๆ ถูกเก็บไว้ที่ 4 องศาเพื่อสำรอง

ผงซิสแตนช์

5. การย้อมสี Hematoxylin และ Eosin (HE)

ชิ้นส่วนถูกย้อมด้วยสารละลายเฮมาทอกซีลินเป็นเวลา 4 นาที ตามด้วยการล้างด้วยน้ำประปาไหลเป็นเวลา 2 นาที 15 วินาที จากนั้น ส่วนต่างๆ จะถูกย้อมด้วยสารละลายอีโอซินเป็นเวลา 3 นาที ทำความสะอาดด้วยเอทานอล 80 เปอร์เซ็นต์ และ 95 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ ครั้งละ 30 วินาที จากนั้นชิ้นส่วนจะถูกล้างในไซลีนเป็นเวลา 3 วินาทีและติดตั้งด้วยยาหม่องที่เป็นกลาง หลังจากการย้อมสี ส่วนต่างๆ จะถูกสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์ และใช้ Leica Application Suite เพื่อรวบรวมและวิเคราะห์ส่วนที่เกี่ยวข้องของตัวอย่าง

6. การวิเคราะห์ทางชีวเคมี

หลังจากที่ตัวอย่างซีรั่มถูกละลายที่อุณหภูมิ 4 องศา ตัวอย่างซีรั่มจะถูกตรวจพบโดยเครื่องวิเคราะห์ชีวเคมีอัตโนมัติ Shenzhen Mindray BS420 และความเข้มข้นของ TBiL, AST, ALT, ALB, Cr, BUN, K, Na และ Ca ถูกกำหนดด้วยเครื่อง Shenzhen Mairui ( เซินเจิ้น ประเทศจีน) ชุดจับคู่ทางชีวเคมี

7. การย้อมสีอิมมูโนฮิสโตเคมี

ตรวจสอบการแสดงออกของโปรตีนของ AQP1 ในตับ เยื่อบุช่องท้อง และเนื้อเยื่อไตโดยวิธีอิมมูโนฮิสโตเคมี สไลด์ถูกอบที่อุณหภูมิ 65 องศาเป็นเวลา 1 ชั่วโมง แช่ในไซลีนเป็นเวลา 30 นาที และไฮเดรตในแอลกอฮอล์ไล่ระดับสี สารละลายบัฟเฟอร์ Tris-EDTA 1 มิลลิโมลาร์ (G1203, Servicebio) ใช้สำหรับการซ่อมแซม 18 นาทีที่ 125 องศาและ 103 kPa บ่มด้วย H2O2 3 เปอร์เซ็นต์ (National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd., China) เป็นเวลา 10 นาที บ่มด้วย เซรั่มแพะ 10 เปอร์เซ็นต์ (SL038, Solarbio) เป็นเวลา 30 นาที และไทเทรตด้วยแอนติบอดีปฐมภูมิ AQP1 (PAB45863, Bioswamp) การเจือจางเยื่อบุช่องท้อง 1: 250 และการเจือจางตับและไต 1: 400 ที่ 4 องศาเซลเซียสข้ามคืน ชิ้นส่วนถูกถ่ายโอนจาก 4 องศาไปยังอุณหภูมิห้องและทิ้งไว้ 45 นาที บำบัดด้วย Max Vision TM HRPPolymer anti-Rabbitsecondary antibody (KIT-5020, MXB) เป็นเวลา 60 นาทีที่ 37 องศา รักษาด้วย DAB (DA1010, Solarbio) จนกว่าส่วนต่างๆ จะเปลี่ยนสี แช่ส่วนสลับกัน, ฮีมาทอกซิลิน 3 นาที, แอลกอฮอล์ 75 เปอร์เซ็นต์ 5 นาที, แอลกอฮอล์ 85 เปอร์เซ็นต์ 5 นาที, แอลกอฮอล์ 95 เปอร์เซ็นต์ 5 นาที, แอลกอฮอล์ 100 เปอร์เซ็นต์ 10 นาที, ไซลีน 10 นาที ส่วนซีลเรซินที่เป็นกลาง ระบบภาพ Leica Application Suite ใช้เพื่อจับภาพส่วนที่เกี่ยวข้องของตัวอย่าง นิวเคลียสถูกย้อมด้วยสีน้ำเงินด้วยฮีมาทอกซีลิน และ DAB แสดงสีเหลืองน้ำตาลเป็นบวก

8. ตะวันตก ซับ

วิเคราะห์ระดับโปรตีนของ p38, p-p38, ERK1/2, p-ERK1/2, JNK1/2/3, p-JNK1/2/3 และ AQP1 ในตับ เยื่อบุช่องท้อง และเนื้อเยื่อไตโดย Western blot . ตัวอย่างเนื้อเยื่อถูกทำให้เป็นเนื้อเดียวกันใน RIPA lysate (R0010, Solarbio) ที่มีตัวยับยั้งโปรตีเอสที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส และหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 กรัม เป็นเวลา 15 นาที วัดความเข้มข้นของโปรตีนโดยใช้ BCA Protein Assay Kit (PC0020, Solarbio) โปรตีน (20 มก.) ถูกแยกโดยโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต-โพลีอะคริลาไมด์เจลอิเล็กโทรโฟรีซิส 12 เปอร์เซ็นต์และถ่ายโอนไปยังเยื่อโพลีไวนิลิดีนฟลูออไรด์ (IPVH00010, มิลลิพอร์) เมมเบรนถูกบล็อกด้วยนมพร่องมันเนย 5 เปอร์เซ็นต์เป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องในน้ำเกลือ Tris-buffered และบ่มด้วยแอนติบอดีปฐมภูมิต่อ p-ERK1/2 (ab214036), JNK1/2/3 (ab208035), p-JNK1/2/ 3 (ab76572) และ p-p38 (ab47363) จาก Abcam (สหราชอาณาจักร) และ ERK1/2 (MAB37123), p38 (PAB37381), AQP1 (PAB45863) และ GAPDH (PAB36269) จาก Bioswamp (จีน) ในชั่วข้ามคืนที่ 4 ระดับ . แอนติบอดี GAPDH (PAB36269, Bioswamp) ถูกเลือกเป็นข้อมูลอ้างอิงภายใน อัตราส่วนการเจือจางแอนติบอดีปฐมภูมิทั้งหมดคือ 1:1000 จากนั้นเยื่อจะถูกล้างด้วยน้ำเกลือ Tris-buffered และบ่มในแอนติบอดีทุติยภูมิ IgG ที่ต้านกระต่ายจากแพะ (SAB43714, Bioswamp, 1: 20000) เป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง การมองเห็นภูมิคุ้มกันถูกมองเห็นโดยปฏิกิริยาการวัดสีโดยใช้ Immobilon Western HRP (WBKLS0500, Millipore) เมมเบรนถูกสแกนด้วยเครื่องวิเคราะห์เคมิลูมิเนสเซนซ์อัตโนมัติ (Tanon 5200, Tanon)

9. การวิเคราะห์ทางสถิติ

การวิเคราะห์ทางสถิติดำเนินการโดยใช้ซอฟต์แวร์ SPSS 23.0 ข้อมูลทั้งหมดแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ± ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (SD) ทำการเปรียบเทียบระหว่างสองกลุ่มโดยใช้การทดสอบค่าทีตัวอย่างอิสระ ใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนแบบทางเดียวเพื่อเปรียบเทียบความแตกต่างระหว่างกลุ่มตั้งแต่สามกลุ่มขึ้นไป และใช้การทดสอบความแตกต่างที่มีนัยสำคัญน้อยที่สุดของฟิชเชอร์หลังการทดสอบ (LSD) สำหรับการเปรียบเทียบแต่ละกลุ่ม ค่าของ P < 0.05 ถือว่ามีนัยสำคัญทางสถิติ

ผลกระทบของ Cistanche

อ้างอิง

[1] D. Schuppan และ NH Afdhal, "โรคตับแข็ง," The Lancet, vol. 371 เลขที่ 9615 หน้า 838–851, 2008

[2] B. Sharma และ S. John, โรคตับแข็งในตับ. StatPearls, StatPearls Publishing LLC., Treasure Island, FL, USA, 2022

[3] S. Scaglione, S. Kliethermes, G. Cao, et al., "ระบาดวิทยาของโรคตับแข็งในสหรัฐอเมริกา: การศึกษาตามประชากร" Journal of Clinical Gastroenterology, vol. 49 ไม่ 8, หน้า 690–696, 2015.

[4] LA Lyssy และ MP Soos โรคกล้ามเนื้อหัวใจขาดเลือด StatPearls, StatPearls Publishing LLC., Treasure Island, FL, USA, 2022

[5] A. Sharma และ S. Nagalli โรคตับเรื้อรัง StatPearls, StatPearls Publishing LLC., Treasure Island, FL, USA, 2022

[6] FA Rochling และ RK Zetterman, "Management of ascites," Drugs, vol. 69 ไม่ 13 หน้า 1739–1760, 2009

[7] R. Planas, S. Montoliu, B. Ballest´e, et al., "ประวัติธรรมชาติของผู้ป่วยที่เข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลเพื่อจัดการกับน้ำในช่องท้องที่เป็นตับแข็ง" Clinical Gastroenterology and Hepatology, vol. 4 ไม่ 11, หน้า 1385–1394, 2549

[8] A. Zanetto, E. Campello, F. Pelizzaro และ F. Farinati, "การเปลี่ยนแปลงห้ามเลือดในผู้ป่วยโรคตับแข็งและมะเร็งเซลล์ตับ: หลักฐานทางห้องปฏิบัติการและผลกระทบทางคลินิก" Liver International: วารสารทางการของสมาคมนานาชาติเพื่อการศึกษา ของตับ พ.ศ. 2565

[9] Z. Yi, Q. Jia, Y. Lin, et al., "กลไกของ Elian granules ในการรักษารอยโรคระยะก่อนเป็นมะเร็งของมะเร็งกระเพาะอาหารในหนูผ่านทางเส้นทางการส่งสัญญาณ MAPK ตามเภสัชวิทยาของเครือข่าย" Pharmaceutical Biology, vol . 60 ไม่ 1, หน้า 87–95, 2022.

[10] ZJ Hou, JH Zhang, X. Zhang, et al., "การแพทย์แผนจีนระยะยาวร่วมกับการรักษาด้วยยาต้านไวรัส NA ในอุบัติการณ์ของโรคตับแข็งในผู้ป่วยตับอักเสบบีเรื้อรังในสภาพแวดล้อมจริง: การศึกษาย้อนหลัง" หลักฐาน - การแพทย์ทางเลือกและทางเลือกพื้นฐาน: eCAM, vol. 2020, Article ID 3826857, 8 หน้า, 2020

[11] HZ Qiu Hua และ D. Mao, "ผลของการใช้จุด TCM ร่วมกับ QiSuiZuShui-paste ต่อคุณภาพชีวิตในผู้ป่วยที่มีภาวะน้ำในช่องท้องทนไฟของโรคตับแข็ง" วารสารการแพทย์แผนจีนแบบบูรณาการและการแพทย์แผนตะวันตกเกี่ยวกับการย่อยอาหาร ฉบับที่ 17 ไม่ 5, หน้า 306–309, 2009.

[12] F. Xing, Y. Tan, G.-J. Yan, et al., "ผลของ cataplasm สมุนไพรจีน Xiaozhang Tie ต่อน้ำในช่องท้องที่เป็นตับแข็ง" Journal of Ethnopharmacology, vol. 139 ไม่ 2, หน้า 343–349, 2012.

[13] H. Wang, XP Chen และ FZ Qiu, "Salviae miltiorrhizae ช่วยรักษาโรคตับแข็งและความดันโลหิตสูงในพอร์ทัลโดยการยับยั้งไนตริกออกไซด์ในหนูที่เป็นตับแข็ง" โรคตับและตับอ่อนระหว่างประเทศ: HBPD INT ฉบับที่ 2 ไม่ 3, หน้า 391–396, 2003.

[14] BM Denker, BL Smith, FP Kuhajda และ P. Agre, "Identification, purification, and partial characterization of a novel Mr 28,000 integral membrane protein from erythrocytes and renal tubules," Journal of Biological Chemistry ฉบับ 263 เลขที่ 30 หน้า 15634–15642, 1988

[15] P. Agre, S. Sasaki และ MJ Chrispeels, "Aquaporins: a family of water channel proteins," The American Journal of Physiology, vol. 265 ไม่ 3, หมายเลขบทความ F461, 1993

[16] AS Verkman, MO Anderson และ MC Papadopoulos, "Aquaporins: เป้าหมายยาที่สำคัญแต่เข้าใจยาก" Nature Reviews Drug Discovery, vol. 13 ไม่ 4, หน้า 259–277, 2014.

[17] Z. Draelos, "Aquaporins: บทนำสู่ปัจจัยสำคัญในกลไกของความชุ่มชื้นของผิว" The Journal of Clinical andAesthetic dermatology, vol. 5 ไม่ 7, หน้า 53–56, 2012.

[18] AS Verkman, "มากกว่าช่องทางน้ำ: บทบาทเซลล์ที่ไม่คาดคิดของ aquaporins" Journal of Cell Science, vol. 118 ไม่ 15 หน้า 3225–3232, 2548

[19] M. Suzuki และ S. Tanaka, "โครงสร้างและหน้าที่ที่หลากหลายของสัตว์น้ำที่มีกระดูกสันหลัง," Seikagaku The-Journal of Japanese Biochemical Society, vol. 86 ไม่ 1, หน้า 41–53, 2014.

[20] AD Sales, CH Lobo, AA Carvalho, AA Moura และ APR Rodrigues, "ทบทวนโครงสร้าง หน้าที่ และการแปลของ aquaporins: ความหมายที่เป็นไปได้ของพวกเขาในการเก็บรักษา gamete ด้วยความเย็น" พันธุศาสตร์และการวิจัยระดับโมเลกุล ฉบับที่ 12 ไม่ 4, หน้า 6718–6732, 2013.

[21] J. von B¨ulow, "Aquaporins--ช่องน้ำในเยื่อหุ้มเซลล์และเป้าหมายในการรักษา," Medizinische Monatsschrift fur Pharmazeuten, vol. 36 ไม่ 3 หน้า 86–94 2013

[22] A. Yool, "Functional domains of aquaporin-1: key to physiology, and targets for drug Discovery," Current Pharmaceutical Design, vol. 13 ไม่ 31 หน้า 3212–3221, 2007

[23] G. Benga, "โปรตีนช่องทางน้ำที่ค้นพบครั้งแรก, ภายหลังเรียกว่า aquaporin 1: ลักษณะโมเลกุล, หน้าที่, และความหมายทางการแพทย์," Molecular Aspects of Medicine, vol. 33 ไม่ 5-6, หน้า 518–534, 2012

[24] MYS Kalani, AS Filippidis และ HL Rekate, "Hydrocephalus and aquaporins: the role of aquaporin-1," Acta Neurochirurgica Supplementum, vol. 113, หน้า 51–54, 2012.

[25] NJ Shah, OY Mousa, K. Syed และ S. John, Acute on Chronic Liver Failure, StatPearls Publishing LLC., Treasure Island, FL, USA, 2022

[26] JS Pedersen, F. Bendtsen และ S. Møller, "การจัดการน้ำในช่องท้องจากโรคตับแข็ง" ความก้าวหน้าในการรักษาโรคเรื้อรัง ฉบับที่ 6 ไม่ 3, หน้า 124–137, 2015.

[27] DV Garbuzenko และ NO Arefyev, "แนวทางปัจจุบันในการจัดการผู้ป่วยที่มีภาวะน้ำในช่องท้องจากตับแข็ง" World Journal of Gastroenterology, vol. 25 ไม่ 28 หน้า 3738–3752, 2019

หรง เจิ้น จาง 1 หยิน หลิว 1 หมิน ลี่ 2 หย่ง หลิน ฮวง 3 และ เจิน เหิง ซอง 3

1 แผนกตับวิทยา โรงพยาบาลในเครือแห่งแรกของ Guangxi University of Chinese Medicine เมืองหนานหนิง ประเทศจีน

2 แผนกห้องปฏิบัติการทางการแพทย์ โรงพยาบาลในเครือแห่งแรกของมหาวิทยาลัยการแพทย์แผนจีนกว่างซี เมืองหนานหนิง ประเทศจีน

3 ภาควิชาตับวิทยา Guangxi University of Chinese Medicine เมืองหนานหนิง ประเทศจีน