ตอนที่หนึ่ง|การศึกษาการทำงานของระบบประสาทและภูมิคุ้มกันของ Phenylethanoid Glycosides ของสมุนไพร Cistanche ที่มีชีวิตในทะเลทรายในแบบจำลองหนูวัยหมดประจำเดือน

ส่วนที่หนึ่ง ส่วนผสมที่มีประสิทธิภาพ Phenylethanoid Glycosides ของ Cistanche ช่วยเพิ่มภูมิคุ้มกันได้อย่างไร?

สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม:Ali.ma@wecistanche.com

Shuo Tiana, Ming-san Miaoa,b,*, Xiu-min Li c,d,*, Ming Bai a, Yan-Yi Wua, Zhen-Zhen Wei

ก. ภาควิชาเภสัชวิทยา Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou, 450008, China b. ศูนย์นานาชาติสำหรับ TCMมีภูมิคุ้มกัน-เภสัชวิทยา มหาวิทยาลัยการแพทย์แผนจีนเหอหนาน เจิ้งโจว 450008 ประเทศจีน ค. โรคภูมิแพ้และภูมิคุ้มกันในเด็ก The Icahn School of Medicine ที่ Mount Sinai, New York, NY 10029 ง. ภาควิชาจุลชีววิทยาและภูมิคุ้มกันวิทยา, New York Medical College, Valhalla, NY 10595 * ผู้เขียนที่เกี่ยวข้อง

เชิงนามธรรม:

ความเกี่ยวข้องทางชาติพันธุ์วิทยา การใช้ชีวิตในทะเลทรายสมุนไพร Cistancheได้รับการบันทึกครั้งแรกใน "เซินหน่องเฮิร์บคลาสสิค" และจัดเป็นยาสมุนไพรชั้นดีในนั้นฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์เป็นองค์ประกอบที่บ่งบอกถึงการระบุและการกำหนดเนื้อหาของDesertliving Cistanche สมุนไพรในตำรับยาจีนซึ่งเป็นส่วนประกอบสำคัญอย่างหนึ่ง ในงานวิจัยนี้ เราสำรวจกลไกของฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ของDesertliving Cistanche สมุนไพรจนถึงหนูทดลองในวัยหมดประจำเดือน

จุดมุ่งหมาย:การวิจัยครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาผลของฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ของDesertliving Cistanche สมุนไพร(PGC) เกี่ยวกับ neuroendocrine-มีภูมิคุ้มกันการทำงานของกลุ่มอาการในวัยหมดประจำเดือนโดยหนูทดลองในวัยหมดประจำเดือน

วัสดุและวิธีการ

คัดเลือกหนู Wistar เพศเมีย รังไข่ด้านซ้ายของหนูทุกตัวยกเว้นในกลุ่มควบคุมที่ว่างเปล่า (BC) จะถูกลบออก และรังไข่ด้านขวาจะถูกลบออกใน 80 เปอร์เซ็นต์ การตรวจทางช่องคลอดแสดงให้เห็นการเปลี่ยนแปลงของวัฏจักรการเป็นสัดที่ผิดปกติสำหรับหนูทดลองในวัยหมดประจำเดือน และหนูจำลองในวัยหมดประจำเดือนก็ได้รับกาเกงเนียนอัน, ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ของDesertliving Cistanche สมุนไพรสูง, ปานกลาง, สารแขวนลอยต่ำคือ 450 มก./(กก. วัน), 133.33 มก./(กก. วัน), 66.67 มก./(กก. วัน), 33.33 มก./(กก. วัน); กลุ่ม BC และ Model group (MC) ได้รับน้ำกลั่นในปริมาณเดียวกับกลุ่มยาเป็นเวลา 30 วันติดต่อกัน คะแนนการออกกำลังกายในแนวนอนและแนวตั้งวัดที่ 29 วันของการให้ยา หลังจากการให้ยาครั้งสุดท้าย เลือดถูกนำออกจากหลอดเลือดแดงในช่องท้อง และวัดระดับ E2, LH, FSH, GnRH, BGP ในซีรัม และระดับ -EP ในพลาสมาตามลำดับ คำนวณดัชนีอวัยวะของต่อมไทมัส ม้าม และมดลูก วัดเนื้อหาของตัวรับฮอร์โมนเอสโตรเจน (ER) ในเนื้อเยื่อไฮโปทาลามิก ต่อมใต้สมอง และมดลูก และเนื้อหาของตัวรับแอนโดรเจน (AR) ในไฮโปทาลามิคโฮโมจีเนต การเปลี่ยนแปลงทางพยาธิวิทยาของต่อมไทมัส ม้าม มดลูก รังไข่ สังเกตได้จากการย้อมสี HE

ผลลัพธ์

เมื่อเทียบกับ MC, PGC เพิ่มกิจกรรม, ดัชนีอวัยวะ (ไธมัส, ม้าม, มดลูก), E2, T, ระดับ BGP ในซีรัม, ระดับ -EP ในพลาสมา, ระดับ AR ในมลรัฐ, ระดับ ER ในมลรัฐ, ต่อมใต้สมอง, มดลูก ในหนูทดลองในวัยหมดประจำเดือน และยังลดระดับ FSH, LH, GnRH ในซีรัม และปรับปรุงรอยโรคของมดลูกและรังไข่ในหนูทดลองในวัยหมดประจำเดือน

บทสรุป

PCG แต่ละขนาดสามารถต่อต้านความผิดปกติของฮอร์โมนเพศในหนูทดลองในวัยหมดประจำเดือน แก้ไขความไม่สมดุลของระดับ ER และ AR เพิ่มและฟื้นฟูผลของมดลูกและเซลล์ประสาทของ hypothalamic และปรับปรุงการทำงานของภูมิคุ้มกัน

คลิกเพื่อผลิตภัณฑ์ Cistanche และผลข้างเคียงของ cistanche 

ตัวย่อ

PGC, phenylethanoid glycosides ของสมุนไพร Desertliving Cistanche; GC, กลุ่ม Gengnian'an; PGC-HD, Phenylethanoid Glycosides ของ Desertliving Cistanche สมุนไพรกลุ่มปริมาณสูง; PGC- MD, Phenylethanoid Glycosides ของ Desertliving Cistanche สมุนไพรกลุ่มขนาดกลาง; PGC-LD, Phenylethanoid Glycosides ของกลุ่มยาสมุนไพร Desertliving Cistanche ขนาดต่ำ; แกน HPO, แกนไฮโปทาลามัส - ต่อมใต้สมอง - รังไข่; E2, เอสตราไดออล; T, ฮอร์โมนเพศชาย; FSH, ฮอร์โมนกระตุ้นรูขุมขน; LH, ฮอร์โมน Luteinizing; GnRH, ฮอร์โมนปล่อย Gonadotropin; -EP, เบต้า-เอ็นดอร์ฟิน; ER, ตัวรับเอสโตรเจน; AR, ตัวรับแอนโดรเจน; HRT, การบำบัดทดแทนฮอร์โมน; BGP โปรตีนที่ประกอบด้วยกรดแกมมา-คาร์บอกซีกลูตามิกของกระดูก

คำสำคัญ:ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ของ Desertlivingสมุนไพร Cistanche; หนูจำลองในวัยหมดประจำเดือน;การทำงานของระบบประสาทและภูมิคุ้มกัน

สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม โปรดติดต่อ:ali.ma@wecistanche.com

1. บทนำ

เมื่อประชากรสูงอายุมากขึ้น อุบัติการณ์ของภาวะหมดประจำเดือนก็เพิ่มสูงขึ้น การศึกษาบางชิ้นพบว่าอายุที่เริ่มมีอาการของโรคในวัยหมดประจำเดือนลดลงในระดับสากลและลดลงจาก 65 ปีเป็น 35 ปี ยาแผนปัจจุบันเชื่อว่ากลุ่มอาการในวัยหมดประจำเดือนหมายถึงอาการที่เกิดจากการทำงานของรังไข่ลดลง(Miao et al., 2017). ระดับฮอร์โมนเอสโตรเจนต่ำ ซึ่งทำให้เกิดการทำงานผิดปกติ เช่น ต่อมไร้ท่อ ระบบประสาท และภูมิคุ้มกัน อาการทางคลินิกที่สำคัญ ได้แก่ อาการร้อนวูบวาบ เหงื่อออก ใจสั่น นอนไม่หลับ หงุดหงิด ประจำเดือนมาไม่ปกติ โรคกระดูกพรุน และอุบัติการณ์ของโรคหัวใจและหลอดเลือด(Lobo et al., 2014; Alvarado-García, et al., 2015) ซึ่งส่งผลกระทบอย่างร้ายแรงต่อ ชีวิตของผู้หญิงวัยหมดประจำเดือน การบำบัดทดแทนฮอร์โมน (HRT) เป็นวิธีการหลักในการรักษาโรคนี้ แต่การบำบัดทดแทนฮอร์โมนเอสโตรเจนในระยะยาวอาจทำให้เกิดผลข้างเคียง เช่น โรคโคโพรฟาเจีย ความเจ็บปวดที่ขยายออกไปในเต้านม มะเร็งเยื่อบุโพรงมดลูก มะเร็งเต้านม และอุบัติการณ์ที่เพิ่มขึ้นของ โรคหัวใจและหลอดเลือดและหลอดเลือดและมีความอ่อนไหวต่อการกลับเป็นซ้ำ(Perrone et al., 2013). อาการเหล่านี้จำกัดการใช้ทางคลินิก ดังนั้นผู้คนจึงให้ความสำคัญกับปัญหาของวัยหมดประจำเดือนระยะพิเศษนี้มากขึ้นเรื่อยๆ

ลักษณะของโรคต่างๆ เช่น "อวัยวะภายใน" "การแข็งตัวของเลือดในวัยชรา" "โรคลิลลี่" "กลุ่มอาการซึมเศร้า" และ "การไม่เชื่อฟัง" ที่บันทึกไว้ในการแพทย์แผนจีนนั้นคล้ายคลึงกับอาการหมดประจำเดือนทางการแพทย์แผนปัจจุบัน อยู่ในหมวดหมู่ของอาการต่างๆ ก่อนและหลังวัยหมดประจำเดือน "Suwen: Shanggu Tianzhen Lun" กล่าวว่า "ช่อง Ren อ่อนแอเมื่อคนอายุ 49 ปีและเรือสัญจรจะลดลง สาระสำคัญที่กระตุ้นทางเพศหมดลง และปรากฏการณ์อื่น ๆ ดังนั้นผู้หญิงจึงสูญเสียหน้าที่ของ ตัวอ่อน" และสาระสำคัญที่กระตุ้นทางเพศก็เปลี่ยนไปโดยสาระสำคัญของไต ดังนั้นการแพทย์แผนจีน (TCM) เชื่อว่าเชื้อโรคหลักของโรคนี้คือภาวะไตวาย (Peng, 2014) การศึกษายังแสดงให้เห็นว่าการลดลงของการทำงานของรังไข่เป็นสาเหตุของโรคไตและอาการอ่อนเปลี้ยเพลียแรงในคำศัพท์เฉพาะของ TCM การลดลงของระดับ E2, LH, FSH เป็นการแสดงออกของอาการอ่อนเปลี้ยเพลียแรงของไต (Liu et al., 2010) และการศึกษาพบว่ายาที่เติมในไตส่วนใหญ่มีผลการรักษาที่ดีขึ้นในกลุ่มอาการหมดประจำเดือน (จางและ Miao, 2011; Cao et al., 2016; Wang et al., 2016; Tian et al., 2017;) ดังนั้น เราจึงต้องเข้าใจบทบาทของ "ภาวะไตพร่อง" ในคำศัพท์ TCM ว่าเป็นสาเหตุหลักในการรักษาทางคลินิก และเน้นเป้าหมายหลักของการเติมเต็มไต จากการศึกษาพบว่าการเติมไต ยาจีนสามารถควบคุมความผิดปกติของแกน HPO ชะลอการแก่ของรังไข่ ควบคุมระบบประสาท-ต่อมไร้ท่อ-ภูมิคุ้มกัน ปรับปรุงภูมิคุ้มกัน และป้องกันโรคกระดูกพรุน (Shi, et al., 2007) รวมถึงผลกระทบอื่นๆ

สมุนไพร Cistanche ที่อาศัยอยู่ในทะเลทรายเป็นลำต้นเนื้อแห้งและมีเกล็ดCistanche deserticoLa YCหม่าหรือCistanche tubulosa(Schenk) ไวต์ เป็นพืชสมุนไพรที่เป็นกาฝากยืนต้น มีผลในการเติมไต เติมเอสเซ้นส์และเลือด คลายลำไส้เพื่อบรรเทาอาการท้องผูก และผลกระทบอื่น ๆ ชีวิตในทะเลทรายสมุนไพร Cistancheนิยมใช้ในยาจีนโบราณเพื่อบำรุงไตและเสริมสร้างหยาง ซึ่งเรียกว่า "โสมทะเลทราย" การวิจัยสมัยใหม่แสดงให้เห็นว่ามีผลในการต่อต้านวัย ช่วยเพิ่มภูมิคุ้มกันของร่างกาย ช่วยเพิ่มความสามารถในการเรียนรู้และความจำ ฤทธิ์ต้านการอักเสบ และต้านความเมื่อยล้า และอื่นๆ (Li, et al., 2010) องค์ประกอบทางเคมีของสมุนไพร Desertliving Cistanche นั้นซับซ้อน และเนื้อหาของ phenylethanoid glycosides นั้นสูงที่สุดในวัสดุยาดั้งเดิม มันยังเป็นหนึ่งในองค์ประกอบสำคัญของ Desertlivingสมุนไพร Cistancheเพื่อออกแรงคล้ายแอนโดรเจนและคุณสมบัติของภูมิคุ้มกัน(Zhao and Pan, 2013). และ PGC สามารถปรับปรุงความผิดปกติของฮอร์โมนเพศ (E2, T, FSH, LH) ในหนูวัยหมดประจำเดือน และมีผลการรักษาที่ดีต่อหนูในวัยหมดประจำเดือน ดูการศึกษาที่เกี่ยวข้อง (Tian et al.,2017)

ในปัจจุบัน งานวิจัยเกี่ยวกับกลุ่มอาการในวัยหมดประจำเดือนมุ่งเน้นไปที่ระบบต่อมไร้ท่อ ระบบประสาท การทำงานของภูมิคุ้มกัน ฯลฯ แต่ความผิดปกติของการควบคุมต่อมไร้ท่อและภูมิคุ้มกันเป็นสาเหตุหลักของกลุ่มอาการในวัยหมดประจำเดือน (Wang et al., 1999; Zhang และ Wang, 2544). การศึกษานี้ตรวจสอบผลของ PGC ต่อหนูทดลองในวัยหมดประจำเดือนจากมุมมองของการทำงานของต่อมไร้ท่อและภูมิคุ้มกัน

2. วัสดุและวิธีการ

2.1 สัตว์ทดลอง

หนูเพศเมีย Wistar (210~230g) ถูกซื้อจาก Shandong Lukang Pharmaceutical Co., Ltd. หมายเลขใบอนุญาตสัตว์: 0017216 ใบรับรองห้องปฏิบัติการหมายเลข SYXK (เหอหนาน) 2010-001 หนูทั้งหมดถูกเลี้ยงด้วยอาหารและน้ำฟรีในกรงพลาสติกที่ 22±2 องศา ความชื้นสัมพัทธ์ 50 เปอร์เซ็นต์ -60 เปอร์เซ็นต์ และเลี้ยงสัตว์เป็นเวลาหนึ่งสัปดาห์ก่อนการทดลอง

2.2 วัสดุและรีเอเจนต์

MANUSCRIPT โซเดียมคาร์บอกซีเมทิลเซลลูโลส Tianjin Hengxing Chemical Reagent Manufacturing Co. , Ltd. หมายเลขแบทช์: 20120418; โพแทสเซียมเบนซิลเพนิซิลลินสำหรับการฉีด, Huabei China Pharmaceutical Co., Ltd., ข้อมูลจำเพาะ: 4 ล้านหน่วย, หมายเลขการผลิต: c1206807; สารละลายฟอร์มาลดีไฮด์ (Analytical Pure), Yantai Shuangshuang Chemical Co., Ltd., หมายเลขการผลิต: 20130902; คลอรัลไฮเดรต, สถาบันวิจัยเคมี Tianjin Guangfu Fine, หมายเลขชุด 20120827; หนู E2, T, FSH, LH, GnRH, AR, ER, BGP, -EP ELISA กล่องรีเอเจนต์การตรวจจับ, R&D, หมายเลขล็อต: 20140101A

2.3 ยาทดลอง

มีการเผยแพร่วิธีการเตรียมการเฉพาะและการตรวจหาเนื้อหาของ PGC แล้ว ดูวรรณกรรมและเนื้อหา 66.47 เปอร์เซ็นต์ (Tian et al., 2017) Gengnian Capsule ส่วนผสม: Rehmannia, Rehmannia glutinosa, Alisma, Ophiopogon japonicas, Scrophulariaceae, Cortex Moutan, Poria, Mother of Pearl, Curculigo, Schisandra, Magnet, Shouwu Vine, Uncaria, Floating Wheat, Polygonum multiflorum ข้อบ่งใช้: บำรุงหยินและหยาง, ขจัดปัญหาและทำให้จิตใจสงบ, ใช้สำหรับวัยหมดประจำเดือนที่มีเหงื่อออกวูบวาบ, หูอื้อเวียนศีรษะ, หงุดหงิดและนอนไม่หลับ ข้อมูลจำเพาะ: 0.3g ต่อแคปซูล การใช้และปริมาณ: รับประทานครั้งละ 3 แคปซูล 3 ครั้งต่อวัน องค์กรการผลิต: Shanxi Tianxing Pharmaceutical Co., Ltd. หมายเลขชุดการผลิต: 121104 หมายเลขอนุมัติ: National Medicine Zhunzi Z14021848

2.4 เครื่องมือทดลอง

เปิดห้องทดสอบกิจกรรม Chengdu Taimeng Software Co., Ltd. รุ่น OFT-100; กล้องจุลทรรศน์แบบใช้มอเตอร์ บริษัท Japan OLYMPUS รุ่น BX61; เครื่องอ่านไมโครเพลท บริษัท American BIO-RAD รุ่น: 680; X3R เครื่องหมุนเหวี่ยงเย็นความเร็วสูง USA Mercury Technology Co., Ltd.

2.5 การเตรียมและการจัดกลุ่มแบบจำลองสัตว์

เอาหนูแปดสิบตัวที่มีน้ำหนัก {0}} ก. และหนู 12 ตัวถูกสุ่มเลือกเป็นกลุ่ม BC และหนูที่เหลือถูกใช้สำหรับแบบจำลองสัตว์ในวัยหมดประจำเดือน วิธีการเตรียมหนูทดลองในวัยหมดประจำเดือน วิธีการวรรณกรรมอ้างอิง (Miao et al., 2015) นำรังไข่ด้านซ้ายออกโดยสมบูรณ์ 80 เปอร์เซ็นต์ของรังไข่ด้านขวาถูกนำออก เลี้ยงอย่างระมัดระวังหลังการผ่าตัดและเพื่อป้องกันการติดเชื้อให้ฉีดเพนิซิลลิน 20U/กก. (0.1 มล.) โดยฉีดเข้ากล้าม 3 วันติดต่อกัน วันละครั้ง หลังจากการผ่าตัด 5 วัน การตรวจทางช่องคลอดของหนูจะทำทีละครั้ง วันละครั้ง และติดต่อกันเป็นเวลา 5 วัน หนูที่มีปฏิกิริยาเป็นสัดถูกทิ้ง หนูที่ตัดรังไข่หกสิบตัวถูกสุ่มและแบ่งออกเป็น 5 กลุ่มเท่าๆ กันเพื่อใช้ในการทดลอง ได้แก่ กลุ่มต้นแบบ (MC) กลุ่ม Gengnian'an (GC) Phenylethanoid Glycosides ของ Desertliving Cistanche herb high (PGC-HD) ขนาดกลาง (PGC- MD) กลุ่มขนาดต่ำ (PGC-LD)

2.6 วิธีการกำหนดรูปแบบยา

(1) ปริมาณของ PGC-HD, PGC-MD, PGC-LD คือ 133.33 มก./กก., 66.67 มก./กก. และ 33.33 มก./กก. (ปริมาตรการบริหาร 1 มล./100 กรัม) ตามลำดับ วิธีการกำหนดค่า: ชั่งน้ำหนัก PGC 1333.3 มก., 666.7 มก., 333.3 มก. ให้ละลายด้วยน้ำกลั่นเล็กน้อยก่อน จากนั้นจึงเติมน้ำกลั่นเป็น 100 มล. และผสมให้เข้ากัน นั่นคือ PGC-HD, PGC-MD, PGC- ที่ต้องการ แอลดี ช่วงล่าง (2) ขนาดยาของ GC คือ 450 มก./กก. และปริมาณการให้ยาเท่ากับข้างต้น ซึ่งเท่ากับ 10 เท่าของขนาดยาทางคลินิก วิธีกำหนดค่า: นำ Gengnian Capsule 15 แคปซูล ละลายด้วยน้ำกลั่นเล็กน้อยก่อน จากนั้นตั้งเป็น 100 มล. แล้วผสมให้เข้ากัน นี่คือการระงับ GC ที่ต้องการ

2.7 วิธีการบริหาร

สัตว์แต่ละกลุ่มได้รับยาที่สอดคล้องกันในวันที่ 10 หลังการผ่าตัด กลุ่ม GC ถูกบริหารให้ด้วย Gengnian Capsule Suspension 450 มก./กก. และ PGC-HD, PGC-MD, PGC-LD ถูกบริหารให้ตามลำดับด้วย PGC-HD, PGC-MD, PGC-LD ช่วงล่างซึ่งคือ 133.33 มก./กก., 66.67 มก. /กก. 33.33มก./กก. กลุ่ม BC และ MC ถูกบริหารให้ตามลำดับด้วยน้ำกลั่นในปริมาณเท่ากัน วันละครั้งเป็นเวลา 30 วัน

2.8 การทดสอบภาคสนาม

หนูในแต่ละกลุ่มได้รับการทดสอบคะแนนการออกกำลังกายในแนวนอนและแนวตั้งที่ 29 วันของการบริหาร เครื่องทดลองเป็นกล่องเปิดทรงลูกบาศก์สูง 40 ซม. ยาว 80 ซม. กว้าง 80 ซม. ผนังรอบข้างและพื้นผิวด้านล่างเป็นสีดำ และพื้นผิวด้านล่างประกอบด้วยพื้นที่เท่ากัน 25 ช่วงตึก ซึ่งแบ่งด้วยเส้นสีขาว ในระหว่างการทดลอง หนูถูกวางในช่องสี่เหลี่ยมของช่องเปิด และคะแนนกิจกรรมในแนวนอนของหนูที่ผ่านพื้นผิวด้านล่างภายใน 5 นาที (ช่องสี่เหลี่ยมที่กรงเล็บทั้งสี่เข้ามา) ถูกสังเกต และคะแนนกิจกรรมแนวตั้ง ของจำนวนขาหลังที่ถูกสร้างขึ้น (อุ้งเท้าสองข้างว่างหรือปีนกำแพง) อุจจาระจะต้องถูกกำจัดออกให้หมดหลังจากการทดลองแต่ละครั้ง และวัดหนึ่งครั้งหลังจากให้ยา 2 ชั่วโมง การทดลองนี้ดำเนินการในห้องที่เงียบสงบ

2.9 การกำหนดระดับของ E2, T, LH, FSH, GnRH, BGP ในซีรัมและระดับของ -EP ในพลาสมา

หนูในแต่ละกลุ่มหลังจากให้ยาครั้งสุดท้าย 2 ชั่วโมง (อดอาหาร 12 ชั่วโมง) ยาสลบช่องท้อง เลือดถูกถ่ายจากหลอดเลือดแดงในช่องท้อง แยกซีรั่มและพลาสมา (4 องศา , 3500 รอบต่อนาที, 10 นาที) เก็บไว้ในตู้เย็น ที่ -80 องศา การใช้การทดสอบอิมมูโนดูดซับที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์วัดระดับของ E2, T, LH, FSH, GnRH, BGP ในซีรัม และระดับของ -EP ในพลาสมา วิธีการใช้งานเฉพาะได้ดำเนินการตามคำแนะนำ

2.10 การหาค่า ER และ AR ในเนื้อเยื่อไฮโปทาลามัส ต่อมใต้สมอง และมดลูก

หลังจากรับเลือดจากหลอดเลือดแดงในช่องท้องแล้ว หนูก็ถูกสังเวย นำไฮโพทาลามัส ต่อมใต้สมอง และมดลูกออกจากร่างกาย ไฮโปทาลามัส ต่อมใต้สมอง และ 1/2 มดลูกถูกทำให้เป็นเนื้อเดียวกัน วิธีการทำให้เป็นเนื้อเดียวกันมีดังนี้: บล็อกเนื้อเยื่อถูกล้างในน้ำแข็งเย็น 0 โซเดียมคลอไรด์ 9 เปอร์เซ็นต์ เอาเลือดออก และใช้กระดาษกรองเพื่อทำให้เนื้อเยื่อแห้ง ชั่งน้ำหนักเนื้อเยื่อ และตัดเป็น หลอดแก้วที่เป็นเนื้อเดียวกัน และทำให้เป็นเนื้อเดียวกันโดยเติมโซเดียมคลอไรด์ 0.9 เปอร์เซ็นต์ที่เย็นไว้ล่วงหน้า (อัตราส่วนของเนื้อเยื่อและ 0.9 เปอร์เซ็นต์โซเดียมคลอไรด์คือ 1:9) ใส่หลอดทำให้เป็นเนื้อเดียวกันแบบมือถือด้านซ้ายลงในภาชนะที่มีส่วนผสมของน้ำแข็งและน้ำ ใส่มือขวาเข้าไปในปลอกในแนวตั้งและหมุนขึ้นและลงหลายครั้ง (6~8 นาที) บดให้เต็มที่ ทำให้เนื้อเยื่อเป็นเนื้อเดียวกัน เครื่องปั่นแยก (4 องศา , 3500 รอบต่อนาที, 10 นาที) และเก็บไว้ที่ -80 องศา C ในตู้เย็น ปริมาณ ER ในเนื้อเยื่อ hypothalamus ต่อมใต้สมองและมดลูกที่เป็นเนื้อเดียวกันและเนื้อหา AR ใน homogenates ของ hypothalamus ถูกกำหนดโดยการทดสอบ immunosorbent ที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ (ELISA) ตามคำแนะนำ

2.11 การคำนวณดัชนีอวัยวะ

หนูในแต่ละกลุ่มหลังจากให้ยาครั้งสุดท้าย 2 ชั่วโมง (อดอาหาร 12 ชั่วโมง) หนูถูกสังเวย และเอาไธมัส ม้าม มดลูก และเนื้อเยื่อรังไข่ที่เหลือ 20 เปอร์เซ็นต์ ชั่งน้ำหนักเปียก และ คำนวณดัชนีอวัยวะของต่อมไทมัส ม้าม มดลูก สูตรมีดังนี้:

: ดัชนีอวัยวะ=น้ำหนักอวัยวะเปียก (มก.)/ มวลกายของหนู (ก.)

2.12 การสังเกตสัณฐานวิทยาของมดลูก รังไข่ ต่อมไทมัส ม้าม และการวัดความหนาของต่อมไทมิกและก้อนเนื้อในม้าม

ต่อมไทมัส ม้าม มดลูก และรังไข่ถูกตรึงในสารละลายฟอร์มาลดีไฮด์ 10 เปอร์เซ็นต์ ฝังในพาราฟิน แบ่งส่วน ย้อม HE และการเปลี่ยนแปลงทางจุลกายวิภาคภายใต้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง ใช้ไมโครมิเตอร์วัดความหนาของต่อมไทมัสที่จุดที่หนาที่สุดและแคบที่สุดของหนูแต่ละตัวในแต่ละกลุ่มทดลอง ค่าเฉลี่ยคือความหนาของไทมัสคอร์เทกซ์ พื้นฐานของไมโครมิเตอร์ถูกวางไว้บนก้อนม้ามตรงกลาง การหาความหนาของม้ามทั้งสองข้างโดยให้หลอดเลือดแดงส่วนกลางเป็นศูนย์ และค่าเฉลี่ยคือความหนาของม้าม

2.13 การวิเคราะห์ทางสถิติ

การวิเคราะห์ข้อมูลใช้ SPSS210 ชุดข้อมูลสถิติทางการแพทย์ในการประมวลผลข้อมูลทางสถิติ และข้อมูลมาตรวิทยาจะแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ± —ค่าเบี่ยงเบนมาตรฐาน (x±s) การเปรียบเทียบระหว่างกลุ่มต่างๆ ใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนปัจจัยเดียว . วิธี LSD ใช้สำหรับการทดสอบความแปรปรวนเป็นเนื้อเดียวกัน วิธี Games-Howell ใช้สำหรับการทดสอบความแปรปรวนที่ไม่เท่ากัน และการทดสอบ Ridit ใช้สำหรับข้อมูลเกรด

3. ผลการทดลอง

3.1 ผลกระทบของพฤติกรรมต่อหนูทดลองในวัยหมดประจำเดือน

จากรูปที่ 1(A,B). จะเห็นได้ว่าเมื่อเทียบกับ BC คะแนนการเคลื่อนที่ในแนวนอนและแนวตั้งของหนูกลุ่ม MC ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (P<0.01), which="" reflected="" the="" curiosity="" of="" the="" rats="" about="" the="" unfamiliar="" environment.="" compared="" with="" mc,="" each="" group="" could="" increase="" the="" horizontal="" exercise="" score="" of="" rats=""><0.01), and="" the="" pgc-hd,="" pgc-md,="" pgc-ld="" significantly="" increased="" the="" vertical="" movement="" score="" of="" rats=""><0.05). the="" pgc-ld="" group="" had="" the="" tendency="" to="" increase="" the="" vertical="" motion="" integral="" of="">

<0.01);" alt=" Effect of behavior on perimenopausal model rats. In A and B, which " a"="" represents="" that="" there="" is="" a="" significant="" difference="" between="" the="" mc="" group="" and="" the="" bc="" group="" (p=""><0.01);" width="795" height="537" border="0" vspace="0" style="width: 795px; height: 537px;">

3.2 ผลของดัชนีอวัยวะที่เกี่ยวข้องต่อหนูทดลองในวัยหมดประจำเดือน

จากรูปที่ 2 (A, B, C) เราจะเห็นว่าเมื่อเทียบกับ BG ดัชนีอวัยวะของต่อมไทมัส ม้าม และมดลูกในกลุ่ม MC ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (P<0.01), which="" indicates="" that="" the="" thymus,="" spleen,="" and="" uterus="" appeared="" to="" shrink="" in="" perimenopausal="" model="" rats="" caused="" by="" incomplete="" removal="" of="" the="" ovary.="" compared="" with="" mc,="" the="" organ="" index="" of="" the="" thymus="" and="" spleen="" of="" the="" perimenopausal="" model="" rats="" were="" increased="" significantly="" in="" each="" drug="" group=""><0.01). the="" pgc-hd,="" pgc-md,="" and="" gc="" groups="" increased="" the="" uterine="" index="" of="" the="" perimenopause="" model="" rats=""><0.01). pgc-md="" increased="" the="">ดัชนีมดลูกของหนูในวัยหมดประจำเดือนรุ่นอย่างมีนัยสำคัญ(P<0.05).>

3.3 ผลของตัวบ่งชี้ทางชีวเคมีในหนูทดลองในวัยหมดประจำเดือน

ดังแสดงในรูปที่ 3 (A, B, C, D) เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม BC ระดับของ E2 และ T ในกลุ่มซีรั่มในกลุ่ม MC ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (P<0.01), and="" the="" levels="" of="" lh="" and="" fsh="" were="" significantly="" increased=""><0.01), which="" indicating="" that="" incomplete="" removal="" of="" the="" ovary="" into="" perimenopausal="" model="" rats="" leads="" to="" the="" sex="" hormone="" disorder,="" the="" perimenopausal="" model="" rats="" was="" successfully="" replicated.="" compared="" with="" the="" mc="" group,="" each="" drug="" group="" could="" significantly="" increase="" levels="" of="" e2,="" t="" in="" serum="" and="" reduce="" levels="" of=""><0.01); pgc-md,="" gc="" group="" could="" significantly="" reduce="" the="" elevated="" of="" lh="" levels=""><0.01), pgc-hd="" could="" significantly="" reduce="" the="" level="" of="" lh=""><0.05); pgc-ld="" could="" reduce="" the="" level="" of="" lh.="" from="" fig.="" 3="" (e,="" f),="" compared="" with="" the="" bc="" group,="" the="" level="" of="" gnrh="" of="" the="" mc="" group="" in="" serum="" was="" significantly="" increased,="" and="" the="" level="" of="" β-ep="" in="" plasma="" was="" significantly="" decreased=""><0.01), it="" is="" indicated="" that="" incomplete="" ovarian="" ablation="" leads="" to="" a="" sex="" hormone="" disorder="" in="" the="" perimenopausal="" model="" rats,="" and="" the="" related="" hormones="" secreted="" by="" the="" hypothalamus="" were="" also="" disordered="" due="" to="" negative="" feedback="" regulation.="" compared="" with="" the="" mc="" group,="" the="" level="" of="" gnrh="" in="" each="" drug="" group="" was="" significantly="" reduced=""><0.01); the="" level="" of="" β-ep="" was="" significantly="" increased="" in="" pgc-hd,="" pgc-md,="" gc=""><0.01), the="" level="" of="" β-ep="" in="" plasma="" were="" significantly="" elevated="" in=""><>

<0.01);" alt="Effect of biochemical indicators in perimenopausal model rats. In A, B, C, D, E, and F, which " a"="" represents="" that="" there="" is="" a="" significant="" difference="" between="" the="" mc="" group="" and="" the="" bc="" group="" (p=""><0.01);" width="690" height="744" border="0" vspace="0" style="width: 690px; height: 744px;">

3.4 ผลของระดับ BGP ในซีรัมในหนูทดลองในวัยหมดประจำเดือน

จากรูปที่ 4 จะเห็นได้ว่าระดับ BGP ในซีรัมในกลุ่ม MC ต่ำกว่ากลุ่ม BC อย่างมีนัยสำคัญ (P<0.01), indicating="" that="" the="" level="" of="" bgp="" in="" perimenopausal="" model="" rats="" with="" incomplete="" ovaries="" was="" reduced.="" compared="" with="" the="" mc="" group,="" the="" bgp="" levels="" in="" the="" pgc-hd,="" pgc-md,="" pgc-ld,="" gc="" group="" was="" increased="" significantly=""><>

<0.01)" alt=" Effect of BGP levels in serum in perimenopausal model rats. In Fig.4, which " a"="" represents="" that="" there="" is="" a="" significant="" difference="" between="" the="" mc="" group="" and="" the="" bc="" group="" (p=""><0.01)" width="700" height="455" border="0" vspace="0" style="width: 700px; height: 455px;">

3.5 ผลกระทบของ ER, AR ในหนูทดลองในวัยหมดประจำเดือน

ดังจะเห็นได้จากรูปที่ 5 ที่เปรียบเทียบกับกลุ่ม BC ระดับ ER และ AR ในหนูทดลองในวัยหมดประจำเดือนลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (P<0.01), it="" indicated="" that="" the="" hormone="" receptors="" in="" the="" body-related="" tissues="" of="" the="" perimenopausal="" model="" rats="" caused="" by="" incomplete="" ovariectomy="" were="" reduced,="" which="" reduced="" the="" biological="" effects="" of="" estrogen="" and="" androgen.="" as="" shown="" in="" fig.="" 5="" (a,="" b,="" c),="" compared="" with="" the="" mc="" group,="" each="" drug="" group="" could="" significantly="" increase="" the="" level="" of="" er="" in="" the="" hypothalamus,="" pituitary,="" and=""><0.01); from="" fig.="" 5(d),="" the="" levels="" of="" ar="" in="" the="" hypothalamic="" in="" the="" pgc-hd,="" pgc-md,="" gc="" group="" were="" significantly="" increased=""><>

3.6 ผลของสัณฐานวิทยาทางพยาธิวิทยาของมดลูกในหนูทดลองในวัยหมดประจำเดือน

ตามการเปลี่ยนแปลงของเยื่อบุโพรงมดลูก ต่อม และชั้นกล้ามเนื้อของหนูในแต่ละกลุ่ม เกณฑ์กึ่งปริมาณถูกนำมาใช้เพื่อจำแนกจุลพยาธิวิทยาออกเป็นสี่ระดับคือ "-, บวก, บวก, บวก, บวก บวก บวก " จากการทดสอบของ Ridit จะเห็นได้จากรูปที่ 6 และ Tab.1 ที่เปรียบเทียบกับ BC มดลูกของ MC มีการเปลี่ยนแปลงทางพยาธิวิทยาอย่างมีนัยสำคัญ (P<0.01). compared="" with="" mc,="" each="" drug="" group="" could="" significantly="" improve="" the="" pathological="" tissue="" lesions="" of="" the="" uterus(p=""><>

3.7 ผลของสัณฐานวิทยาทางพยาธิวิทยาต่อเนื้อเยื่อรังไข่ในหนูทดลองในวัยหมดประจำเดือน

ตามการเปลี่ยนแปลงของรูขุมรังไข่ corpus luteum เซลล์แกรนูโลซา และหลอดเลือดในระดับต่างๆ ในกลุ่มทดลอง และใช้เกณฑ์กึ่งเชิงปริมาณเพื่อจำแนกลักษณะทางสัณฐานวิทยาของเนื้อเยื่อทางพยาธิวิทยาออกเป็น 4 ระดับ ได้แก่ "-, บวก , บวก , พลัส พลัส พลัส " จากการทดสอบ Ridit จะเห็นได้จากรูปที่ 7 และ Tab.2 ที่เปรียบเทียบกับกลุ่ม BC รังไข่ของกลุ่ม MC มีรอยโรคทางพยาธิวิทยาที่สำคัญ (P<0.01). compared="" with="" the="" mc="" group,="" each="" drug="" group="" could="" significantly="" improve="" the="" pathological="" changes="" of="" ovarian=""><>

<0.01). compared="" with="" the="" mc="" group,="" each="" drug="" group="" could="" significantly="" improved="" the="" pathological="" changes="" of="" ovarian=""><0.01). fig.="" 7.="" effect="" of="" pathological="" morphology="" of="" ovary="" tissue="" in="" perimenopausal="" model="" rats.="" (a):="" histopathology="" of="" the="" ovary="" (he="" ×="" 100);"="" alt="ACCEPTED ACCEPTED MANUSCRIPT criteria were adopted to classify the pathological tissue morphology into four levels: " -,="" +,="" ++,="" +++".="" based="" on="" the="" ridit="" test,="" it="" can="" be="" seen="" from="" fig.="" 7="" and="" tab.2="" that="" compared="" with="" the="" bc="" group,="" the="" ovary="" of="" the="" mc="" group="" showed="" significant="" pathological="" lesions=""><0.01). compared="" with="" the="" mc="" group,="" each="" drug="" group="" could="" significantly="" improved="" the="" pathological="" changes="" of="" ovarian=""><0.01). fig.="" 7.="" effect="" of="" pathological="" morphology="" of="" ovary="" tissue="" in="" perimenopausal="" model="" rats.="" (a):="" histopathology="" of="" the="" ovary="" (he="" ×="" 100);"="" width="544" height="571" border="0" vspace="0" style="width: 544px; height: 571px;">

3.8 ผลของสัณฐานวิทยาของเนื้อเยื่อต่อมไทมัสในหนูทดลองในวัยหมดประจำเดือน

จากรูปที่ 8 จะเห็นได้ว่าความหนาของต่อมไทมัสในกลุ่ม MC ลดลงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับกลุ่ม BC (P<0.01), which="" indicating="" that="" the="" thymus="" atrophy="" was="" observed="" in="" the="" perimenopausal="" model="" rats.="" compared="" with="" the="" mc="" group,="" all="" groups="" could="" significantly="" increase="" the="" thymus="" cortical=""><>

3.9 ผลของสัณฐานวิทยาของเนื้อเยื่อม้ามต่อหนูทดลองในวัยหมดประจำเดือน

ดังจะเห็นได้จากรูปที่ 9 ที่เปรียบเทียบกับ BC ปริมาตรของก้อนม้ามของกลุ่ม MC ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (P<0.01), which="" indicates="" that="" the="" spleen="" atrophy="" was="" observed="" in="" the="" perimenopausal="" model="" rats.="" compared="" with="" mc,="" the="" level="" of="" splenic="" nodules="" volume="" was="" significantly="" increased="" in="" pgc-hd,="" pgc-md,="" gc=""><>