ตอนที่Ⅱ:การแยกไดกลีโคไซด์ที่ถูกแทนที่ด้วย Phenylpropanoid ใหม่จาก Cistanche Salsa และกิจกรรมการยับยั้งการไม่ผลิตใน Macrophage
Mar 04, 2022
ติดต่อ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 อีเมล:audrey.hu@wecistanche.com
3-หมู่เมทิลบิวทีนิล ซึ่งเป็นโครงสร้างย่อยของอะไกลโคน ได้รับการเสนอแนะโดยความสัมพันธ์แบบ COZY ของ H-2 กับ H-1a และ H-1b และความสัมพันธ์ของ HMBC ระหว่าง H{{ 4}} และ H-5 และคาร์บอนโอเลฟินิก ที่ kC 120.7 (C-2) และ 136.4 (C-3) มอยอิตีน้ำตาลสองชนิดถูกสร้างขึ้นโดยการวิเคราะห์สเปกตรัมของ NMR และการวิเคราะห์สเปกตรัมของ HPLC ของกรดไฮโดรไลเสต ด้วยรูปแบบชิ้นส่วน MS การกำหนดค่าสัมบูรณ์ของพวกมันถูกกำหนดให้เป็น D-glucose และ L-rhamnose โดยใช้การวิเคราะห์ HPLC ของกรดไฮโดรไลเสต [17] มอยอิตีน้ำตาลเหล่านี้ถูกกำหนดให้เป็น -กลูโคสและอาร์ฮัมโนสโดยค่าคงที่คัปปลิ้งของโปรตอนอะโนเมอร์ สเปกตรัม 1H-1H COZY แสดงความสัมพันธ์ตามลำดับจาก H-13 ถึง H-63 และจาก H-133 ถึง H-633 (รูปที่ 4)
โปรตอนกลูโคสที่ลดระดับลงที่ kH 4.70 (H-43) เสนอให้มีการแทนที่อะซิลในกลูโคส จากสเปกตรัม HMBC ความสัมพันธ์ระหว่าง H-43 และ C-9333 ยืนยันตำแหน่งของสารแทนที่คาเฟอีน ความสัมพันธ์ของ HMBC ระหว่าง H-13 และ C-1 (kC 64.5) และระหว่าง H-33 (kH 3.68) และ C-133 (kC 101.2) เสนอตำแหน่งของแต่ละหมู่แทนที่ . ดังนั้น, โครงสร้างของ 6 ถูกกำหนดหาเป็น 3-เมทิลบิวทีนิล-O- -L-rhamnopyranosyl-(1→3)-4-O-(E)-caffeoyl- -D- กลูโคส-pyranoside และชื่อ cistansalside B.
Cistansalside C (12) ซึ่งเป็นผงอสัณฐานสีน้ำตาล ถูกกำหนดให้มีสูตรโมเลกุลของ C26H38O13 โดย (บวก )-HR-ESI-QTOF-MS ซึ่งแสดงจุดสูงสุดที่ m/z 581.2213 [M บวก Na] บวก (calcd . สำหรับ C26H38O13Na, 581.2205). ไอออนที่มีลักษณะเฉพาะที่ m/z 163 ชี้ให้เห็นว่ามีหมู่แทนที่คาเฟอีนอยู่ในโครงสร้าง แฟรกเมนต์ไอออนที่ m/z 325 และ m/z 471 บ่งชี้ว่ามีหน่วย rhamnose และหน่วยกลูโคส
การเปรียบเทียบสเปกตรัม NMR ของ 12 กับสเปกตรัม 6 แสดงให้เห็นว่ามีความคล้ายคลึงกันยกเว้นโครงสร้าง aglycone ในสเปกตรัม NMR ของ 12 คาร์บอนพาราฟินสองชนิดที่ kC 380 (C-2) และ 24.4 (C-3) ถูกสังเกตพบแทนโอเลฟินิกคาร์บอน 2 ชนิดที่ kC 12{{16 }}.7 (C-2) และ 136.4 (C-3) ใน aglycone ของ 6 กลุ่ม germinal methyl (kH 0.88) ใน aglycone ของ 12 ถูกเลื่อนขึ้น เทียบกับ H-4 และ H-5 (kH 1.71 และ 1.63) ใน aglycone ของ 6 (ตารางที่ 2) แอกไกลโคนของ 12 ถูกเสนอให้เป็นหมู่ 3-เมทิล บิวทิล ซึ่งได้รับการยืนยันโดยสเปกตรัม 1H และ COZY NMR พีคของหมู่3-เมทิลบิวทิลถูกสังเกตพบที่ 3.81 (1H, m, H-1a), 3.48 (1H, m, H-1b), 1.71 (1H, m , H-3), 1.44 (2H, m, H-2) และ 0.88 (H-4, 5)
มอยอิตีน้ำตาลสองชนิดได้รับการยืนยันอีกครั้งโดยการวิเคราะห์ HPLC ของกรดไฮโดรไลเสตและการวิเคราะห์สเปกตรัม NMR รวมทั้งรูปแบบชิ้นส่วน MS การกำหนดค่าแบบสัมบูรณ์ของน้ำตาลถูกระบุเป็น D-glucose และ L-rhamnose โดยใช้การวิเคราะห์ HPLC ของกรดไฮโดรไลเสต [17] A -glucose moiety และ a-rhamnose moiety ได้รับการยืนยันโดยค่าคงที่การควบคู่ของโปรตอน anomeric สเปกตรัม 1H-1H COZY แสดงความสัมพันธ์ตามลำดับจาก H-13 ถึง H-53 จาก H-133 ถึง H-333 และจาก H{{11} } ถึง H-433 (รูปที่ 4)
ตำแหน่งของหมู่แทนที่ได้รับการยืนยันโดยวิธีการวิเคราะห์ HMBC ในสเปกตรัม HMBC ความสัมพันธ์ระหว่าง H-13 และ C-1 (kC 67.2) ระหว่าง H-33 (kH 3.68) และ C-133 (kC 101.2) และระหว่าง H-43 (kH 4.70) และ C-9333 (kC 165.7) ถูกตรวจพบ ดังนั้น, โครงสร้างของ 12 ถูกสร้างเป็น 3-เมทิล บิวทิล-OaL-rhamnopyranosyl-(1→3)-4-O-(E)-caffeoyl- -D-glucose-pyranoside และ ชื่อ cistansalside C.
Cistansalside D (17) ซึ่งเป็นผงสีน้ำตาลอสัณฐานถูกกำหนดให้มีสูตรโมเลกุลของ C31H38O14 โดยโหมดบวกที่มีความละเอียดสูง ESI-QTOF-MS ซึ่งแสดงค่าสูงสุดของไอออนบวกที่ m/z 657.2147 [M บวก Na] บวก (คำนวณสำหรับ C31H38O14Na, 657.2154) Fragment ions ได้แก่ [M บวก H x Aglycone x Rha x Acetyl Glc] บวกไอออนที่ m/z 147 a [M บวก H x Aglycone x Rha] บวกไอออนที่ m/z 351 และ a [M บวก H x Aglycone] บวกไอออนที่ m/z 497 ยังตรวจพบ ไอออนที่มีลักษณะเฉพาะที่ m/z 147 บ่งชี้ว่ามีหมู่แทนที่คูมาโรอิลอยู่ในโครงสร้าง แฟรกเมนต์ไอออนที่ m/z 351 และ m/z 497 ชี้ให้เห็นถึงการมีอยู่ของหน่วยแรมโนสและหน่วยกลูโคสที่ถูกแทนที่ด้วยอะเซทิล
Cistansalside จากcistanche สมุนไพร
สเปกตรัม 13C-NMR เปิดเผยการมีอยู่ของอะตอมของคาร์บอน 31 อะตอม โปรตอนอะโนเมอร์สองตัวที่ kH 4.61 (1H, m, H-13) และ 4.60 (1H, s, H{{10}}) ถูกสังเกตพบในสเปกตรัม 1H และ HSQC . สเปกตรัม 1H-NMR ระบุการมีอยู่ของกลุ่มเมทิลที่ 1.97 (3H, s, acetyl-CH3), ทรานส์โอเลฟินที่ kH 7.55 (1H, d, J=15.9 Hz, H{{ 25}}) และ 6.34 (1H, d, J=15.9 Hz, H-8333) และวงแหวนเบนซีนแทนที่พาราสองวงที่ kH 7.53 (2H, d, J=6 9 Hz, H-3333, 5333) และ 6.79 (2H, d, J=6.9 Hz, H-2333, 6333)/ kH 6.98 (2H, d, J {{5) 0}}.0 Hz, H-2, 6) และ 6.65 (2H, d, J=8.0 Hz, H-3, 5) (ตารางที่ 2) . จากสเปกตรัม HMBC NMR ความสัมพันธ์ระหว่างคาร์บอนิลคาร์บอนที่ kc 165.5 (C-9333) และ H-8333 และระหว่าง H-2333, 6333 และ C-7333 (kc 145.4) แนะนำหมู่ (E)-คูมาโรอิล ความสัมพันธ์ของ HMBC ระหว่างพีคเมทิลโปรตอนและคาร์บอนิลคาร์บอนที่ kc 169.0 ยืนยันการมีอยู่ของกลุ่มอะเซทิล
แนะนำกลุ่ม 4-ไฮดรอกซีฟีนิลตามความสัมพันธ์ของ HMBC ระหว่าง H-3, 5 และคาร์บอนอะโรมาติกชนิดควอเทอร์นารีที่ kC 155.6 (C-4) และ 128.6 (C-1) . หมู่ไฮดรอกซิเลตเอทิลได้รับการยืนยันโดยสัญญาณ COZY NMR ที่ kH 2.66 (2H, t, J=6.1 Hz, H-7), 3.90 (1H, m, H-8a ) และ 3.54 (1H, m, H-8b) ความสัมพันธ์ของ HMBC ระหว่าง H-7 และ C-1 (kC 128.6) และ C-2, 6 (kC 129.7) เสนอแนะ 4-หมู่ไฮดรอกซีฟีนิลเอทิล เป็นโครงสร้างย่อยของอะไกลโคน
มอยอิตีน้ำตาลสองชนิดที่แนะนำจากรูปแบบชิ้นส่วนของ MS ได้รับการยืนยันอีกครั้งโดยการวิเคราะห์ HPLC ของกรดไฮโดรไลเสตและสเปกตรัม NMR ดี-กลูโคสและแอล-แรมโนสถูกอธิบายโดยการใช้การวิเคราะห์ HPLC ของกรดไฮโดรไลเสต [17] A -glucose moiety และ a-rhamnose moiety ถูกกำหนดขึ้นโดยค่าคงที่การคัปปลิ้งของโปรตอนอะโนเมอร์ สเปกตรัม 1H-1H COZY แสดงความสัมพันธ์ตามลำดับจาก H-13 ถึง H-53 และจาก H-133 ถึง H-633 (รูปที่ 4)
จากสเปกตรัม 1H-NMR การเปลี่ยนแปลงดาวน์ฟิลด์ของ H-23 (kH 4.69) และ H-43 (kH 4.80) เสนอตำแหน่งแทนที่อะซิลในกลูโคส การเชื่อมต่อระหว่างกลูโคสและกลุ่มเอซิลสองกลุ่มได้รับการยืนยันโดยความสัมพันธ์ของ HMBC ระหว่าง H-43 (kH 4.80) และ C-9333 และระหว่าง H-23 และคาร์บอนิลคาร์บอนของกลุ่มอะเซทิล (kC 169.0 ). ตำแหน่งของอะไกลโคนและแรมโนสถูกกำหนดโดยความสัมพันธ์ของ HMBC ระหว่าง H-33 (kH 3.95) และ C-1333 และระหว่าง H-8 และ C-13 ดังนั้น โครงสร้างของ 17 ถูกกำหนดให้เป็น 4-ไฮดรอกซีฟีนิลเอทิล-2-O-อะซีติล-O- -L-rhamnopyranosyl-(1→3)-4-O-(E)- coumaroyl- -D-glucopyranoside และชื่อ cistansalside D
Cistansalside E (18) ถูกแยกออกมาเป็นผงสีน้ำตาลอสัณฐาน สูตรโมเลกุลถูกกำหนดให้เป็น C31H38O14 โดยข้อมูล 13C-NMR และค่าสูงสุดของ ESI-QTOF-MS ความละเอียดสูงในโหมดบวกที่ m/z 657.2166 [M บวก Na] บวก (คำนวณสำหรับ C31H38O14Na, 657.2154) นอกจากนี้ แฟรกเมนต์ไอออนซึ่งรวมถึง caffeoyl ion ที่ m/z 163, an [M plus H x Aglycone x Rha] บวก ion ที่ m/z 367 และ [M บวก H x Aglycone]ion ที่ m/z 513 ก็ถูกตรวจพบเช่นกัน แฟรกเมนต์ไอออนชี้ให้เห็นถึงการมีอยู่ของหน่วยแรมโนสและหน่วยกลูโคสที่ถูกแทนที่ด้วยอะเซทิล
สเปกตรัม 1H-NMR เสนอให้มีโปรตอนสองตัวที่ kH 4.63 (1H, d, J=8.2 Hz, H-13) และ 4.60 (1H, s, H-133 ) และโปรตอนกลูโคสที่ถูกแทนที่ด้วยอะซิลสองตัวที่ kH 4.71 (1H, dd, J=8.9, 8.2 Hz, H-23) และ 4.81 (1H, dd, J=9.7 , 9.5 Hz, H-43). สเปกตรัม 1H และ HMBC เสนอแนะการมีอยู่ของหมู่อะซีติลที่ kH 1.94 (3H, s, อะซีติล-CH3), มอยอิตี (E)-คาเฟอีนอออิลที่ kH 7.48 (1H, d, J=15.9 Hz, H-7333), 7.02 (1H, d, J=1.6 Hz, H-2333), 6.98 (1H, dd, J=8.1, 1.6 Hz, H-6333), 6.76 (1H,d, J=8.1 Hz, H-5333) และ 6.21 (1H, d, J=15.9 Hz, H{ {67}}) และวงแหวนเบนซินแบบแทนที่โมโนที่ kH 7.29 (2H, m, H-3, 5), 7.21 (2H, m, H-2, 6) และ 7.20 (1H, ม. H-4) (ตารางที่ 2) หมู่ฟีนิลเมทิล ซึ่งเป็นโครงสร้างย่อยของอะไกลโคน ถูกเสนอโดยความสัมพันธ์ของ HMBC ระหว่าง H-7 (2H, kH 2.80, m) และ C-1 (kC 138.8) และระหว่าง H-7 และ C -2, 6 (kC 128.9) และสัญญาณ COZY NMR ของ H-7 ที่มี H-8a (1H, kH 3.99, m) และ H-8b (1H, kH 3.63, ม.).
มอยอิตีน้ำตาลสองชนิดได้รับการยืนยันอีกครั้งโดยการวิเคราะห์ HPLC ของกรดไฮโดรไลเสตและการวิเคราะห์สเปกตรัม NMR การกำหนดค่าแบบสัมบูรณ์ของน้ำตาลได้รับการอธิบายโดยใช้การวิเคราะห์ HPLC ของกรดไฮโดรไลเสต ซึ่งได้รับการยืนยันว่าเป็น D-glucose และ L-rhamnose [17] มอยอิตี -glucose และ -rhamnose moiety ถูกจัดตั้งขึ้นโดยค่าคงที่การคัปปลิ้งของโปรตอนอะโนเมอร์ สเปกตรัม 1H-1H COZY แสดงความสัมพันธ์ตามลำดับจาก H-13 ถึง H-53 จาก H-133 ถึง H-233 และจาก H{{11} } ถึง H-333 (รูปที่ 4)
จากสเปกตรัม HMBC ความสัมพันธ์ระหว่าง H{{0}} และ C-8 (kC 69.4) ระหว่าง H-23 กับคาร์บอนิลคาร์บอนของกลุ่มอะเซทิล (kC 169.1) ระหว่าง H-33 (kH 3.95) และ C-133 (kC 102.0) และระหว่าง H-43 (kH 4.81) และ C-9333 (kC 165.6) ยืนยันตำแหน่งของหมู่แทนที่ใน โครงสร้าง. ดังนั้น โครงสร้างของ 18 ถูกกำหนดหาเป็นฟีนิลเอทิล-2-O-อะซีติล-OaL-rhamnopyranosyl-(1→3)-4-O-(E)-caffeoyl- -D-glucopyranoside และ ชื่อ cistansalside E.
หมู่แทนที่ทรานส์-ซินนาโมอิลส่วนใหญ่ถูกไอโซเมอร์กับซิส-ไอโซฟอร์มในหลอดทดลอง มีรายงานว่าแสงจะเปลี่ยนอนุพันธ์ของกรดทรานส์-ซินนามิกเป็นซิส-ไอโซฟอร์ม [18,19] สมดุลของการแปลงทรานส์-ซิสของหมู่แทนที่ซินนาโมอิลถูกสังเกตพบเพื่อรักษาประมาณ 70 เปอร์เซ็นต์ของไอโซเลตในทรานส์-ไอโซฟอร์ม สำหรับโปรตอนโอเลฟินในรูปแบบ cis พีคที่ประมาณ 6.90 ppm(d, J=12~13 Hz, H-7333) และ 5.80 ppm (d, J=12~13 Hz, H-8333) สามารถกำหนดได้ในสเปกตรัม 1H-NMR ในขณะที่พีคที่ประมาณ 7.55 ppm (d, J=15.8 Hz, H-7333) และ 6.40 ppm (d, J { {28}}.8 Hz, H-8333) ถูกสังเกตพบสำหรับการแปลงสภาพ [20] ในสเปกตรัม 1H-NMR ของของผสมทรานส์-ซิส พีคของโปรตอนโอเลฟินิกสองตัว (H-7333 และ H-8333) ถูกสังเกตพบในอัตราส่วน 7:3 (ทรานส์:ซิส) พีค 13C-NMR ของรูปแบบ cis คล้ายกับจุดยอดของทรานส์ฟอร์ม
ส่วนผสมที่มีประสิทธิภาพจาก cistanche: acteosides
ไอโซเลตทั้งหมดได้รับการทดสอบสำหรับผลการยับยั้งของพวกมันต่อการผลิต NO ที่เกิดจาก LPS ใน RAW
ไอโซเลตทั้งหมดได้รับการทดสอบสำหรับผลการยับยั้งของพวกมันต่อการผลิต NO ที่เหนี่ยวนำโดย LPS ในเซลล์ RAW 264.7 เด็กซาเมทาโซนถูกใช้เป็นกลุ่มควบคุมเชิงบวก และ IC50 ของมันคือ 7.0 uM ของสารประกอบที่ทดสอบแล้ว สารประกอบ 5 (IC50 42.7 o 6.6 uM), 11 (IC50 37.3 o 2.2 uM), 13 (IC50 40.{{2{{ 24}}}} o 4.0 uM) และ 18(IC50 27.9 o 0.8 uM) แสดงฤทธิ์การยับยั้งในระดับปานกลางต่อการสังเคราะห์ NO ที่เหนี่ยวนำได้ ในขณะที่สารประกอบอื่นๆ ไม่ออกฤทธิ์ในการสอบวิเคราะห์นี้ (IC50 ค่า > 100 uM) เพื่อตรวจสอบว่าสารประกอบเหล่านี้มีความเป็นพิษต่อเซลล์หรือไม่ วัดความมีชีวิตของเซลล์โดยใช้การสอบวิเคราะห์ MTT ด้วยเหตุนี้ จึงไม่มีสิ่งใดแสดงความเป็นพิษต่อเซลล์ที่มีนัยสำคัญ (รูปที่ S6-1 เพิ่มเติม) สารประกอบทั้งสี่นี้ได้รับการคัดเลือกเพื่อประเมินการมีฤทธิ์ในการยับยั้งของพวกมันเทียบกับวิถี NF-λB ในเซลล์ RAW 264.7 ที่กระตุ้นด้วย LPS การกระตุ้นเซลล์ RAW 264.7 ด้วย LPS ทำให้เกิดฟอสโฟรีเลชั่นของ I入B และ NF-入B (p65) หลังจากการฟักตัว 0.5 ชั่วโมง ฟอสโฟรีเลชันของ NF- 入 B (p65) ลดลงอย่างมีนัยสำคัญโดยการปรับสภาพด้วยสารประกอบ 11, 13 และ 18 ดังที่แสดงโดยการวิเคราะห์แบบตะวันตก (รูปที่ 5) ดังนั้น สารประกอบ 11, 13 และ 18 อาจออกฤทธิ์ต้านการฉีดผ่านการยับยั้ง NF-入B ในมาโครฟาจ
รูปที่ 5ผลของสารประกอบสี่ชนิดต่อฟอสโฟรีเลชันของ I入B และ NF-入B (p65) ในเซลล์ RAW 264.7 ที่กระตุ้นด้วย LPS (A) รอยเปื้อนแบบตะวันตกดำเนินการใน LPS และเซลล์ RAW 264.7 ที่บำบัดด้วยตัวอย่าง (B, C) สัญญาณอิมมูโนบล็อกถูกหาปริมาณโดยใช้ซอฟต์แวร์ Molecular Analyst/PC densitometry (Bio-Rad, Richmond, CA, USA) มีรายงานการวิเคราะห์เดนซิโตเมตริกของไอโซฟอร์มฟอสโฟรีเลต NF- 入 B ในเซลล์ RAW 264.7 ถูกทำให้เป็นมาตรฐานสำหรับเนื้อหาของ -actin
3. วัสดุและ วิธีการ
3.1. การทดลองทั่วไป ขั้นตอน
การหมุนด้วยแสงวัดด้วยโพลาริมิเตอร์แบบดิจิตอล Jasco P-2000 (Jasco, Tokyo, Japan) UV spectra ถูกบันทึกบน Chirascan plus Circular Dichroism spectrometer (Chirascan, APL, UK) สเปกตรัมอินฟราเรดบันทึกโดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ Jasco FT/IR-4200 ความละเอียดสูงด้วยสเปรย์อิเล็กโตรสเปรย์ไอออไนเซชัน quadrupole-time-of-flight mass spectrometry (HR-ESI-qTOF-MS) ที่มีความละเอียดสูง ดำเนินการบน Agilent 6530 Accurate-Mass Q-TOF LC/MS ที่ติดตั้ง Agilent 1260 Infinity series (Agilent Technologies, Inc. , Palo Alto, CA, USA) และคอลัมน์ที่ใช้คือคอลัมน์ Jasco SFCpak Crest C18T-5 (id 150 4.6 mm, 5 um) MassHunter Workstation Software ใช้สำหรับเก็บข้อมูล
1D (1H และ 13C) และ 2D (1H-1H COSY, HSQC, HMBC, NOESY) NMR สเปกตรัมได้รับด้วย Jeol LA 300 (Jeol, Tokyo, Japan), Bruker AVANCE-400, Bruker AVANCE-500, Bruker AVANCE-600 และ Bruker AVANCE 800 HD สเปกโตรมิเตอร์ร่วมกับไครโอโพรบ (Bruker, Ettlingen, Germany) DMSO-d6 (ห้องปฏิบัติการไอโซโทปเคมบริดจ์ ใน Cistanche Andover, MA, USA) ถูกใช้เป็นตัวทำละลาย NMR และพีคอ้างอิง (kH 2.50 และ kC 39.5) โครมาโตกราฟีแบบคอลัมน์ (CC) ดำเนินการโดยใช้ Sephadex LH-20 (25–100 um; Pharmacia, Uppsala, Sweden) หรือ Kieselgel 60 silica gel (40–63 um, 230–400 mesh, Art. 9385; Merck, Darmstadt , เยอรมนี). โครมาโตกราฟีแบบชั้นบาง (TLC) ถูกดำเนินการบนเพลต F254 ซิลิกาเจล Kieselgel 60 ที่เคลือบไว้ล่วงหน้า (ศิลปะ 5715; เมอร์ค) ตรวจพบจุดบน TLC โดยใช้หลอด UV ที่ 254 นาโนเมตร และ 365 นาโนเมตร (VL-4.LC, 365/254; Vilber Lourmat, Torcy, France) โครมาโตกราฟีของเหลวแรงดันปานกลาง (MPLC) ดำเนินการบนคอลัมน์ซิลิกา flash RediSep 120 กรัม (Isco, Lincoln, NE, USA) และ Kiesegel 60 ซิลิกาเจล (40–63 um, 230–400 mesh, Art. 9385; Merck) โดยใช้ สหาย Combiflash (อิสโก) ระบบโครมาโตกราฟีของเหลวแรงดันสูง (HPLC) คือ Gilson HPLC ที่ติดตั้งปั๊ม Gilson 321 และเครื่องตรวจจับ UV.VIS 151 (Gilson, Middleton, WI, USA) โดยใช้คอลัมน์ ODS กึ่งเตรียมการ (Luna 5 um C18 (2) 100 Å, id 250: 10 mm, 5 um, Phenomenex Inc., Torrance, CA, USA; Hypersil GOLD™ aQ 175 Å, id 250: 10 mm, 5 um, Thermo Scientific™, Hennigsdorf, Germany; Inno C18 คอลัมน์ 120 Å, id 250: 10 mm, 5 um, Young Jin Biochrom Co., Ltd., Seongnam, Korea) ระบบ RP-HPLC เชิงวิเคราะห์คือระบบพันธมิตร Waters 2695 ที่มีตัวตรวจจับ a996 Photodiode Array (PDA) (Waters Corp, Milford, MA, USA) และคอลัมน์ที่ใช้คือคอลัมน์ Hypersil™ BDS C18 (130 Å, id 150: 4.6 มม., 5 um, Thermo Scientific™). ซื้อกรดฟอร์มิกจาก Daejung Chemicals & Metals Co., Ltd. (โซล ประเทศเกาหลี) ซื้อตัวทำละลายเกรด HPLC จาก Fisher Scientific Korea Ltd. (โซล ประเทศเกาหลี) ซื้อ H2SO4, Na2CO3 และตัวทำละลายระดับแรกสำหรับการสกัด การแยกส่วน และการแยกจาก Daejung Chemical & Metals Co. Ltd. (โซล ประเทศเกาหลี) ซื้อ L- และ D-cysteine methyl ester hydrochloride และ o-tolylisothiocyanate จาก Tokyo Chemical Industry (โตเกียว ประเทศญี่ปุ่น)
3.2. ปลูก วัสดุ
พืชทั้งหมดของซิสแทนเช่ ซัลซ่าซึ่งรวบรวมจากชินจังอุยกูร์ นำเข้าผ่าน Daerim Pharmaceutical Wholesale Company (ชองจู ประเทศเกาหลี) พวกเขาถูกระบุโดย Prof. Dr. Jehyun Lee (มหาวิทยาลัย Dongguk กรุงโซล ประเทศเกาหลี) ตัวอย่างใบสำคัญ (SNUPH2016-03) ถูกฝากไว้ที่ Herbarium of Medicinal Plant Garden, College of Pharmacy, Seoul National University
3.3. การสกัดและ การแยกตัว
พืชทั้งแห้งของซิสแทนเช่ ซัลซ่า(5.7 กก.) ถูกสับและสกัดสามครั้งด้วย MeOH (20 ลิตร) ที่อุณหภูมิห้องด้วยโซนิเคชันเป็นเวลา 99 นาที หลังจากการกำจัดตัวทำละลายในสุญญากาศ สารสกัดที่ยังไม่ผ่านกระบวนการใดๆ (1.35 กก.) ถูกแขวนลอยใน H2O (5 ลิตร) จากนั้นจึงแบ่งส่วนด้วย EtOAc (5 ลิตร) เรซิดิว EtOAc (55.3 กรัม) ถูกแยกออกเป็น 16 ส่วนย่อย (E01-16) บนโครมาโตกราฟีแบบซิลิกาเจลที่ชะด้วย CHCl3/MeOH (50:1–0:1, ระบบการไล่ระดับสีแบบขั้น)
E08 (611.7 มก.) ถูกนำไปยังโครมาโตกราฟีของเหลวความดันปานกลางแบบซิลิกาเจล (25 ก.) และชะด้วย CHCl3/MeOH (18:1–0:1, ระบบการไล่ระดับสีแบบขั้น) และ ให้ 11 เศษส่วน (E08a-k) จาก E08g, สารประกอบ 13 (0.7 มก.) และ 18 (0.6 มก.) ถูกทำให้บริสุทธิ์โดยใช้คอลัมน์ Luna 5 um HPLC และการชะไอโซเครติกด้วย 28 เปอร์เซ็นต์ aq เอ็มซีเอ็น. การทำให้บริสุทธิ์ด้วย HPLC (Hypersil GOLD, 25 เปอร์เซ็นต์ aq. MeCN) ของ E08h (138.5 มก.) สารประกอบที่ตกแต่งแล้ว 7 (10.6 มก.), 8 (17.2 มก.), 14 (13.4 มก.) และ 17 (4.9 มก.)
E09 (1.15 ก.) ถูกทำให้บริสุทธิ์เพิ่มเติมบนคอลัมน์ซิลิกา-MPLC (20 ก.) ที่ชะด้วย CHCl3/MeOH (10:1–0:1, ขั้นตอน- ระบบเกรเดียนต์) ให้ 11 เศษส่วน (E09a-k) E09e (398.7 มก.) อยู่ภายใต้ Sephadex LH-20 (MeOH) และให้ผลแปดส่วนย่อย (E09e1-8) ต่อมา E09e6 ถูกทำให้บริสุทธิ์โดยใช้คอลัมน์ Hypersil GOLD HPLC (22 เปอร์เซ็นต์ aq. MeCN) เพื่อให้ได้สารประกอบ 11 (0.4 มก.) จาก E09e7,สารประกอบ 5 (0.6 มก.) ถูกทำให้บริสุทธิ์โดยการชะแบบไอโซเครติกจากคอลัมน์ Luna 5 um HPLC ที่มี 40 เปอร์เซ็นต์ aq มีโอ.
E10 (1.20 ก.) ถูกแยกออกเป็นเศษส่วนเก้าส่วน (E10ai) บนคอลัมน์ Sephadex LH-20 ที่ชะด้วย MeOH จาก E10ก. (147.5 มก.), สารประกอบ 4 (13.4 มก.), 9 (8.0 มก.) และ 15 (5.0 มก.) ถูกแยกเดี่ยวโดยการแยก HPLC (Inno, 23 เปอร์เซ็นต์ aq. MeCN) เศษส่วน E10h (470.0 มก.) ถูกทำให้บริสุทธิ์บนคอลัมน์ Hypersil GOLD โดยการชะแบบไอโซเครติก (40 เปอร์เซ็นต์ aq. MeOH) เพื่อให้ผลผลิตเป็นสารประกอบ 1 (3.8 มก.), 10 (42.1 มก.) และ 16(3.0 มก.)
E11 (2.96 กรัม) ถูกนำไป Sephadex LH-20 ที่ชะด้วย MeOH เพื่อให้เศษส่วนเก้าส่วน (E11a-i) E11e ถูกคั่นด้วยคาร์ทริดจ์ Sep-Pak C18 ที่ชะล้างแบบเป็นขั้นตอนด้วย 10 เปอร์เซ็นต์ , 20 เปอร์เซ็นต์ , 30 เปอร์เซ็นต์ , 50 เปอร์เซ็นต์ และ 100 เปอร์เซ็นต์ของสารละลาย MeOH เพื่อให้ผลผลิตเจ็ดเศษส่วน (E11e1-7) ที่ตามด้วย Luna 5 um HPLC (28 เปอร์เซ็นต์ aq. MeCN) เพื่อให้สารประกอบ 3 (3.4 มก.), 6 (1.4 มก.) และ 12 (1.2 มก.)
E12 (19.0 ก.) อยู่ภายใต้ซิลิกา MPLC (120 ก.) โดยใช้ระบบการไล่ระดับสีแบบขั้น CHCl3/MeOH เพื่อให้เศษส่วนหกส่วน (18:1–0:1 , E12a-f). E12f ถูกโครมาโตกราฟีบนคอลัมน์ Sephadex LH-20 (MeOH) โดยได้เศษส่วนเจ็ดส่วน (E12f1-7) การทำให้บริสุทธิ์ด้วย HPLC (Hypersil GOLD, 25 เปอร์เซ็นต์ aq. MeCN) ของสารประกอบที่ตกแต่งแล้ว E12f7 2 (3.3 มก.) ตัวทำละลายทั้งหมดที่ใช้สำหรับ HPLC คือบัฟเฟอร์กรดฟอร์มิก 0.05 เปอร์เซ็นต์ อัตราการไหลของน้ำทั่วไปสำหรับโครมาโตกราฟี HPLC และ MPLC คือ 3 และ 40 มล./นาที ตามลำดับ
3.4.ลักษณะนิสัย
Cistansalside A (5): ผงอสัณฐานสีน้ำตาล; [ |20 x33.7 (c 0.1, MeOH); UV(MeOH) Amax nm (log e) 332 (3.18); IR (เรียบร้อย) vmax 3359, 1748, 1705, 1602, 1516 cmx1; ข้อมูล 1H-NMR (800 MHz) และ 13C-NMR(200 MHz) ดูตารางที่ 2; HRMS (ESI-TOF) m/z [M บวก Na] บวก 645.2146 (คำนวณสำหรับ C30H38O14Na, 645.2154)
Cistansalside B (6): ผงอสัณฐานสีน้ำตาล; [ |20 x72.9 (c 0.1, MeOH); UV(MeOH) Amax nm (log e) 333 (3.32); IR (เรียบร้อย) vmax 3400, 1705, 1603, 1516 cmx1; ข้อมูล 1H-NMR (500 MHz) และ 13C-NMR (125 MHz) ดูตารางที่ 2; HRMS (ESI-TOF) m/z [M บวก Na] บวก 579.2054 (คำนวณสำหรับ C26H36O13Na, 579.2048)
Cistansalside C (12): ผงอสัณฐานสีน้ำตาล; [ |20 x61.6 (c 0.1, MeOH); UV(MeOH) Amax nm (log e) 337 (3.25); IR (เรียบร้อย) vmax 3359, 1704, 1602, 1508 cmx1; ข้อมูล 1H-NMR (800 MHz) และ 13C-NMR (200 MHz) ดูตารางที่ 2; HRMS (ESI-TOF) m/z [M บวก Na] บวก 581.2213 (คำนวณสำหรับ C26H38O13Na, 581.2205)
Cistansalside D (17): ผงอสัณฐานสีน้ำตาล; [ |20 x51.1 (c 0.1, MeOH); UV(MeOH) Amax nm (log e) 221 (3.53), 315 (3.52); IR (เรียบร้อย) vmax 3358, 1746, 1722, 1603, 1516, 1232, 1157, 1039 cmx1; ข้อมูล 1H-NMR(400 MHz) และ 13C-NMR (75 MHz) ดูตารางที่ 2; HRMS (ESI-TOF) m/z [M บวก Na] บวก 657.2147 (คำนวณสำหรับ C31H38O14Na, 657.2154)
Cistansalside E (18): ผงอสัณฐานสีน้ำตาล; [ |20 x59.2 (c 0.1, MeOH); UV(MeOH) Amax nm (log e) 336 (3.22); IR (เรียบร้อย) vmax 3370, 1741, 1712, 1602, 1231, 1157 cmx1; ข้อมูล 1H-NMR (800 MHz) และ 13C-NMR(200 MHz) ดูตารางที่ 2; HRMS (ESI-TOF) m/z [M บวก Na] บวก 657.2166 (คำนวณสำหรับ C31H38O14Na, 657.2154)
3.5.HPLC-QTOF-MS การวิเคราะห์
การวิเคราะห์โครมาโตกราฟี-แมสสเปกโตรเมทรีถูกดำเนินการบนระบบ Agilent 1260 Infinity series LC (Agilent Technologies, Inc., USA) คอลัมน์วิเคราะห์คือคอลัมน์ SFCpak Crest C18T-5 (id 15{{10}} : 4.6 mm, 5 um, Jasco, Japan) เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยกรดฟอร์มิก 0.1 เปอร์เซ็นต์ (v/v) ใน MeCN (A) และน้ำ (B) โดยใช้การชะแบบเกรเดียนท์ 0–35 นาที (23 เปอร์เซ็นต์ A), 35–45 นาที ( 23–28 เปอร์เซ็นต์ A), 45–75 นาที (28 เปอร์เซ็นต์ A) และ 75–80 นาที (90 เปอร์เซ็นต์ A) อัตราการไหลของน้ำถูกเก็บไว้ที่ 0.3 มล./นาที วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 320 นาโนเมตร เงื่อนไขของแหล่ง ESI มีดังนี้ อัตราการเป่าแห้งของก๊าซ (N2) อัตราการไหล 10 ลิตร/นาที อุณหภูมิก๊าซแห้ง 350 องศา ; เครื่องพ่นยาขยายหลอดลม 30 psig; อัตราการไหลของก๊าซฝัก 12.0 ลิตร/นาที; อุณหภูมิก๊าซฝัก 350 องศา ; เส้นเลือดฝอย 4000 V; พายกวาดล้าง 60 โวลต์; ขั้ว RF, 750 V; แรงดันแฟรกเมนต์ 180 V; โหมดบวก ระบบดำเนินการภายใต้ซอฟต์แวร์เวิร์กสเตชัน Masshunter ช่วงมวลตั้งไว้ที่ m/z 50–1000
3.6.กรด ไฮโดรไลซิส
สารประกอบถูกไฮโดรไลซ์โดยใช้ 1 N H2SO4 (100 uL) ให้ความร้อนด้วยอ่างน้ำที่ 90 องศาเป็นเวลา 2 ชั่วโมง จากนั้นถูกทำให้เป็นกลางด้วยสารละลายเอเควียส Na2CO3 ที่อิ่มตัว หลังจากที่สารละลายถูกทำให้แห้งภายใต้กระแสของ N2, ผลิตภัณฑ์และน้ำตาลมาตรฐาน (D-Glc, L-Glc, L-Rha) ถูกละลายในไพริดีน (100 uL) ที่มี L-cysteine methyl ester ไฮโดรคลอไรด์ (0.5 มก.) ตัวอย่างแอล-แรมโนสถูกละลายในไพริดีน (100 uL) ที่มีดี-ซิสเทอีน เมทิล เอสเทอร์ ไฮโดรคลอไรด์ (0.5 มก.) หลังจากนั้นก็ให้ความร้อน 60 องศาเป็นเวลา 1 ชั่วโมง สารละลายถูกบำบัดด้วยโอ-โทไลลิโซไธโอไซยาเนต 1 ยูลิตร (1.11 มก.) ซึ่งถูกให้ความร้อนอีกครั้งที่ 60 องศาเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ส่วนผสมสุดท้ายแต่ละชนิดถูกวิเคราะห์โดยตรงโดย RP-HPLC เชิงวิเคราะห์ (คอลัมน์ Hypersil™ BDS C18, 17 เปอร์เซ็นต์ aq. MeCN, 0.8 มล./นาที, 40 นาที, 35 องศา) tR ของพีคที่ 21.9 และ 40.4 นาทีใกล้เคียงกับอนุพันธ์ไทโอคาร์บาโมอิล ไทอาโซลิดีนของ D-glucose และ L-rhamnose ตามลำดับ
3.7. เซลล์ วัฒนธรรม
Murine macrophages, RAW 264.7, ได้มาจากสถาบันวิจัยวิทยาศาสตร์ชีวภาพและเทคโนโลยีชีวภาพแห่งเกาหลี (Daejeon, Korea) และเติบโตในอาหาร RPMI ที่มี 10 เปอร์เซ็นต์ของ fetal bovine serum และ 100 U/mL penicillin/streptomycin sulfate เซลล์ถูกบ่มในบรรยากาศ CO2 ที่มีความชื้นร้อยละ 5 ที่ 37 องศา
3.8.ยาและเคมีภัณฑ์
RPMI, penicillin และ streptomycin ถูกซื้อจาก HyClone (Logan, UT, USA) ซื้อเซรั่มอัลบูมินจากวัวและ LPS จากซิกมา (เซนต์หลุยส์ รัฐมิสซูรี สหรัฐอเมริกา)
3.9.การวัดการไม่ผลิต
ความเข้มข้นของไนไตรต์ในอาหารเลี้ยงเชื้อถูกวัดเป็นตัวบ่งชี้การผลิต NO ตามปฏิกิริยา Griess เซลล์ถูกเพาะที่ 2: 105 เซลล์/หลุมในจานเพาะเลี้ยง 96-หลุม หลังจากการบ่มเซลล์ RAW 264.7 ล่วงหน้าเป็นเวลา 18 ชั่วโมง เซลล์ถูกบำบัดก่อนด้วยสารประกอบ (50 uM, 10 uM, 5 uM หรือ 1 uM) และกระตุ้นด้วย LPS (500 ng/mL) เป็นเวลา 24 ชม. สารประกอบทดสอบที่ละลายใน DMSO เซลล์ยังถูกบำบัดด้วย DMSO 0.05 เปอร์เซ็นต์ในฐานะกลุ่มควบคุมกระสายยา เซลล์ RAW 264.7 (2: 105 เซลล์/หลุม) ถูกเพาะเลี้ยงในเพลต 96-หลุมโดยใช้ RPMI ที่ไม่มีฟีนอลแดงและปรับสภาพด้วยตัวอย่างเป็นเวลา 0.5 ชั่วโมง การผลิต NO ของเซลลูลาร์ถูกเหนี่ยวนำโดยการเติม LPS ความเข้มข้นสุดท้าย 500 นาโนกรัม/มิลลิลิตรและการฟักตัว 24 ชั่วโมง หลังจากการบ่ม ตัวกลางที่ปรับสภาพแล้ว 100 uL ถูกผสมกับปริมาตรของสารทำปฏิกิริยา Griess ที่เท่ากันและบ่มเป็นเวลา 15 นาที การดูดกลืนแสงของของผสมที่ 540 นาโนเมตรถูกวัดด้วยเครื่องอ่านไมโครเพลท ELISA (เกณฑ์มาตรฐาน, Bio-Rad Laboratories, ริชมอนด์, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา) ค่าที่ได้รับถูกเปรียบเทียบกับค่าความเข้มข้นมาตรฐานของโซเดียมไนไตรต์ที่ละลายใน RPMI และคำนวณความเข้มข้นของไนไตรต์ในตัวกลางที่ปรับสภาพของเซลล์ที่ได้รับการบำบัดด้วยตัวอย่าง
3.10.3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium Bromide (MTT) การทดสอบเพื่อความอยู่รอดของเซลล์
เซลล์ถูกเพาะเข้าไปในเพลต {{0}}หลุมที่ความหนาแน่น 5: 104 เซลล์/หลุม และบ่มด้วยตัวกลางที่ปราศจากซีรัมต่อหน้าตัวอย่าง สารประกอบทดสอบที่ละลายใน DMSO เซลล์ยังถูกบำบัดด้วย DMSO 0.05 เปอร์เซ็นต์ในฐานะกลุ่มควบคุมกระสายยา หลังจากการบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมง, 10 uL MTT (5 มก./มล. ในน้ำเกลือ) ถูกเติมและการบ่มถูกดำเนินต่อไปอีก 4 ชั่วโมง Mitochondrial succinate dehydrogenase ในเซลล์ที่มีชีวิตจะเปลี่ยน MTT เป็นผลึกฟอร์มาซานที่มองเห็นได้ในระหว่างการฟักตัว จากนั้นคริสตัลฟอร์มาซานถูกละลายในไดเมทิลซัลฟอกไซด์และวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 540 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลทแบบไมโครเพลทที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ที่เชื่อมโยงกับการทดสอบด้วยเอนไซม์ (ELISA) (เกณฑ์มาตรฐาน, Bio-Rad Laboratories) ความมีชีวิตของเซลล์สัมพัทธ์ถูกคำนวณโดยเปรียบเทียบกับการดูดกลืนแสงของกลุ่มควบคุมที่ไม่ถูกบำบัด การทดลองทั้งหมดดำเนินการเป็นสามเท่า
3.11.การวิเคราะห์ภูมิคุ้มกัน
การแสดงออกของโปรตีนถูกประเมินโดย western blotting ตามขั้นตอนมาตรฐาน Briefly, RAW264.7 เซลล์ถูกเพาะเลี้ยงในจานเพาะเลี้ยง 6{{20}} มม. (2: 106/มล.) ตามด้วยการปรับสภาพของสารประกอบ 50 uM . เซลล์ถูกล้างสองครั้งใน PBS ที่เย็นจัด (pH 7.4) เซลล์เม็ดถูกแขวนลอยใหม่ในบัฟเฟอร์การสลายบนน้ำแข็งเป็นเวลา 15 นาที และเศษเซลล์ถูกกำจัดออกโดยการหมุนเหวี่ยง ความเข้มข้นของโปรตีนถูกกำหนดโดยใช้รีเอเจนต์การทดสอบโปรตีน Bio-Rad ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ผสมโปรตีน (20–30 ไมโครกรัม) 1:1 กับ 2: บัฟเฟอร์ตัวอย่าง (กลีเซอรอล 20 เปอร์เซ็นต์, SDS 4 เปอร์เซ็นต์, 10 เปอร์เซ็นต์ 2- ME, โบรโมฟีนอลสีน้ำเงิน 0.05 เปอร์เซ็นต์ และทริส 1.25 โมลาร์ [pH 6.8]) โหลดลงบนเจล SDS-PAGE 8 หรือ 15 เปอร์เซ็นต์ และทำงานที่ 150 V เป็นเวลา 90 นาที โปรตีนจากเซลล์ถูกถ่ายโอนไปยังเยื่อ Immunoblot polyvinylidene difluoride (Bio-Rad) โดยใช้ระบบถ่ายโอนกึ่งแห้ง Bio-Rad ตามคำแนะนำของผู้ผลิต จากนั้นเยื่อหุ้มเซลล์ถูกฟักในชั่วข้ามคืนด้วยแอนติบอดีปฐมภูมิ p-NF-入B, NF-入B, pI入B และ -actin ตามลำดับ (Abcam, Cambridge, UK) ในน้ำเกลือ Tris-buffered ที่มีนมไขมันต่ำ 5 เปอร์เซ็นต์และ Tween 0.1 เปอร์เซ็นต์ 20. วันรุ่งขึ้น รอยเปื้อนถูกล้างสามครั้งด้วยน้ำเกลือ Tris-buffered (0.1 เปอร์เซ็นต์ Tween 20) และฟักเป็นเวลา 1 ชั่วโมงด้วยแอนติบอดีต้าน IgG รองที่คอนจูเกต HRP (เจือจาง 1:2000–1 :20,000). blots ถูกล้างอีกครั้งสามครั้งด้วยน้ำเกลือ Tris-buffered (0.1 เปอร์เซ็นต์ Tween 20) และแถบอิมมูโนรีแอคทีฟได้รับการพัฒนาโดยใช้สารตั้งต้นเคมีเรืองแสง ECL Plus (Amersham Biosciences, Piscataway, NJ, USA)
3.12.การวิเคราะห์ทางสถิติ
ข้อมูลการทดลองแสดงเป็นค่าเฉลี่ย o SEM ระดับของนัยสำคัญทางสถิติถูกกำหนดโดยการวิเคราะห์ความแปรปรวน (ANOVA) ตามด้วยการทดสอบ t ของ Dunnett สำหรับการเปรียบเทียบหลายรายการ p ค่าที่น้อยกว่า 0.05 ถือว่ามีนัยสำคัญ
สารสกัดจากซิสทานเช่ ซัลซ่า
4. บทสรุป
ในการศึกษานี้ เราแยกและอธิบายโครงสร้างของไกลโคไซด์ที่ถูกแทนที่ด้วยฟีนิลโพรพานอยด์ใหม่ห้าชนิด ซึ่งมีชื่อว่าซิสแทนซัลไซด์ AE (5, 6, 12, 17 และ 18) นอกเหนือจากการแยกและการระบุสารประกอบที่รู้จัก 13 ชนิด โดยใช้กลยุทธ์การจำลองแบบ สารประกอบที่รู้จักถูกกำหนดให้เป็น lipedoside AI (1) [21], 23-acetylacteoside (2) [22], isocistanoside C (3) [15], osmanthuside B (4) [21], epimeridinoside A ( 7) [15], ซิสตาโนไซด์ ดี (8) [23], ซัลซาไซด์ บี (9) [6], ทูบูโลไซด์ อี (10) [16], ซิสตาโนไซด์ เอ็ม (11) [15], ไอโซมาร์ไทโนไซด์ (13) [24], ซัลซาไซด์ C (14) [6], จิโอโนไซด์ C (15) [25] และซัลซาไซด์ F (16) [6] โครงสร้างของพวกเขาถูกกำหนดขึ้นโดยการวิเคราะห์ข้อมูลทางสเปกโตรสโกปีที่ครอบคลุมและโดยการเปรียบเทียบกับข้อมูลที่รายงานในวรรณคดี ได้รับการยืนยันว่าโครงสร้างที่คาดการณ์ไว้เบื้องต้นของไกลโคไซด์ที่ถูกแทนที่ด้วยฟีนิลโพรพานอยด์ถูกจับคู่อย่างถูกต้องกับโครงสร้างจริงของพวกมัน
ประโยชน์ของสารสกัด Cistanche salsa
อ้างอิง
1. ชิมามูระ H.; มิยาซาว่า, ม.; เอโนโมโตะ, K.; นากามูระ, S.-I.; Kameoka, H. การปราบปรามกิจกรรมกระตุ้น SOS ของ Trp-P-1 โดยกรดไขมันจาก Cistanche salsa ในการทดสอบ Salmonella Typhimurium TA1535/pSK1002 umu แนท. แยง. เลตต์. 1997, 10, 261–265. [ข้ามอ้างอิง]
2. จอน อี.; ชุง, K.-S.; อัน, เอช.-เจ. ผลการต่อต้านการแพร่กระจายของ Cistanches salsa ต่อความก้าวหน้าของ Prostatic Hyperplasia อ่อนโยน สามารถ. เจ. ฟิสิออล. ฟา. 2016, 94, 104–111. [CrossRef] [PubMed]
3.Xu, C.; เจีย, X.; ซู, ร.; วัง Y.; โจว Q.; Sun, S. การเลือกปฏิบัติอย่างรวดเร็วของ Herba Cistanches โดยการพิมพ์ลายนิ้วมืออินฟราเรดแบบหลายขั้นตอนร่วมกับการสร้างแบบจำลองอิสระที่นุ่มนวลของการเปรียบเทียบระดับ (SIMCA) สเปกตรัม Acta Part A โมล ไบโอมอล SpectrosCistanche2013, 114, 421–431. [CrossRef] [PubMed]
4. เจียง วาย.; หลี่ SP; วัง YT; เฉิน XJ; Tu, PF Differentiation ของ Herba Cistanches โดยลายนิ้วมือด้วยการตรวจจับมวลสารของเหลวโครมาโตกราฟี-ไดโอดอาร์เรย์ที่มีประสิทธิภาพสูง เจ. โครมาโตกร์. 2552, 1216, 2156–2162. [CrossRef] [PubMed]
5. โคบายาชิ H.; Karasawa, H.; มิยาเสะ, ต.; Fukushima, S. การศึกษาองค์ประกอบของ Cistachis Herba V. การแยกตัวและโครงสร้างของ Phenylpropanoid Glycosides ใหม่สองชนิด, Cistanosides E และ F. Chem เภสัช. วัว. 2528, 33, 1452–1457. [ข้ามอ้างอิง]
6.Lei, L.; เจียง, วาย.; หลิว X.-M.; ตู, P.-F.; วู L.-J.; เฉิน, F.-K. Glycosides ใหม่จาก Cistanche salsa เฮลฟ์ ชิม. แอคตา 2007, 90, 79–85. [ข้ามอ้างอิง]
7. Kartbaeva, EB; ซาคิโปวา ZB; อิบราจิโมวา, LN; คัปซาลยาโมวา EN; Ternynko, II การศึกษาองค์ประกอบสารประกอบฟีนอลิกของ Cistanche salsa (CA Mey) G. Beck ที่กำลังเติบโตในสาธารณรัฐคาซัคสถาน เจ เคม. เภสัช. ความละเอียด 2015, 7, 120–122.
8. Liu, J.-Y.; Guo, Z.-G.; Zeng, Z.-L. ปรับปรุงการสะสมของ phenylethanoid glycosides โดยการป้อนสารตั้งต้นเพื่อการเพาะเลี้ยงเชื้อ Cistanche salsa ไบโอเคมี. อังกฤษ จ. 2007, 33, 88–93. [ข้ามอ้างอิง]
9. Maruyama, S.; อากาซากะ ต.; ยามาดะ เค.; Tachibana, H. Cistanche salsa extract ทำหน้าที่คล้ายกับโปรตีนที่ถูกผูกไว้
polysaccharide-K (PSK) กับสายพันธุ์ของเซลล์ต่างๆ เจ. ตราดิษฐ์. เมดิ. 2551, 25, 166–169.
10. เทียน, X.-F.; ปู, X.-P. Phenylethanoid glycosides จาก Cistanches salsa ยับยั้งการตายของเซลล์ที่เกิดจาก 1-methyl-4-phenylpyridinium ion ในเซลล์ประสาท เจ. เอธโนฟาร์มาคอล. 2548, 97, 59–63. [CrossRef] [PubMed]
11.มิเชล ต.; ฮาลาบาลากิ, ม.; Skaltsounis, AL New Concepts, Experimental Approaches, and Dereplication Strategies for the Discovery of Novel Phytoestrogens from Natural Sources. แพลนตา เมด. 2013, 79, 514–532. [CrossRef] [PubMed]
12.เด เมเดรอส แอลเอ; อาบรู, แอลเอ็ม; นีลเส็น, A.; Ingmar, H.; เสน, TO; นีลเส็น, เคเอฟ; Rodrigues-Filho, E. การแยกตามการจำลองแบบนำ depsides theaflavins ST และ lecanora DF จากเชื้อรา endophytic Setophoma sp. ไฟโตเคมี 2015, 111, 154–162. [CrossRef] [PubMed]
13.Rakotondraibe, LH; Rasolomampianina, R.; ปาร์ค, H.-Y.; หลี่ เจ.; Slebodnik, C.; โบรดี้, พีเจ; บลาเซียก, LC; ฮิลล์อาร์.; TenDyke, K.; เชน, วาย.; และคณะ สารต้านการงอกขยายและต้านพลาสโมเดียมจากสปีชีส์สเตรปโตไมซิสที่เลือก ไบโอออร์ก. เมดิ. เคมี. เลตต์. 2015, 25, 5646–5649. [CrossRef] [PubMed]
14.เจียง วาย.; หลิว, F.-J.; วัง Y.-M.; หลี่, เอช.-เจ. การแยกการจำลองแบบนำการจำลองของซาโปนินไตรเทอร์พีนอยด์ตับชนิดใหม่จากซีโลเซียซีเมนโดยวิธีโครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูงควบคู่ไปกับการทำไอออนไนซ์แบบอิเล็กโตรสเปรย์ควบคู่สี่ส่วน–เวลาของflight แมสสเปกโตรเมทรี เจ. ฟาร์ม. ไบโอเมด ก้น 2017, 132, 148–155. [CrossRef] [PubMed]
15.จาง เจ.; หลี่ ค.; เช, วาย.; วู เจ.; วัง Z .; Cai, W. ; หลี่, วาย.; แม่ Z .; Tu, P. กลยุทธ์ LTQ-Orbitrap สำหรับการแพทย์แผนจีนกำหนดเป้าหมายการค้นพบชั้นเรียน การระบุตัวตน และการวิจัย omics ของเธอ: กรณีศึกษาเกี่ยวกับ phenylethanoid glycosides ใน Herba Cistanches สามสายพันธุ์ที่แตกต่างกัน โฆษณา RSC 2015, 5, 80816–80828. [ข้ามอ้างอิง]
16. Yoshizawa, F.; เดยามะ, ต.; ทากิซาว่า, น.; Usmanghani, K.; Ahmad, M. องค์ประกอบของ Cistanche tubulosa (Schrenk) Hook ฉ. ครั้งที่สอง การแยกตัวและโครงสร้างของไกลโคไซด์ Phenylethanoid ใหม่และ Neolignan Glycoside ใหม่ เคมี. เภสัช. วัว. 2533, 38, 2470-2473 [ข้ามอ้างอิง]
17. ทานากะ ต.; นากาชิมะ, ต.; อุเอดะ ต.; Tomii, K.; Kouno, I. การเลือกปฏิบัติที่ง่ายดายของ Aldose Enantiomers โดย HPLCistancheChem แบบย้อนกลับเฟส เภสัช. วัว. 2550, 55, 899–901. [CrossRef] [PubMed]
18. Wong, วิสคอนซิน; Guo, D.; วัง, XL; หยิน ZQ; เซีย, บี.; Li, N. การศึกษากรด cis-cinnamic ใน Arabidopsis thaliana พืช Physiol. ไบโอเคมี. 2548, 43, 929–937. [CrossRef] [PubMed]
19.Kahnt, G. Trans-Cis-Equilibrium ของ Hydroxycinnamic Acids ในระหว่างการฉายรังสีของสารละลายในน้ำที่ pH ต่างกัน ไฟโตเคมี 1967, 6, 755–758 [ข้ามอ้างอิง]
