ส่วนที่ Ⅱ การเปรียบเทียบคุณสมบัติทางเคมีและกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระของส่วนต่างๆ ของ Cistanche Deserticola ที่เพาะเลี้ยงโดยใช้โครมาโตกราฟีของเหลวสมรรถนะพิเศษ-Quadrupole Time-of-Flight Mass Spectrometry และ A 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl-Based Assay

สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม:emily.li@wecistanche.com

คลิกที่นี่เพื่อรับข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับ Cistanche

ข้อมูลสเปกตรัมมวลโดยละเอียดและรูปแบบการแตกแฟรกเมนต์ที่เสนอแสดงไว้ในรูปที่ 7 โครงสร้างของ PhGs หกชนิดที่ระบุข้างต้นแบ่งออกเป็นสามมอยอิตี: กรด I-caffeic (CA), II-aglycone และ III-sugar (Glc และ Rha) . ในสเปกตรัมของ MS/MS ความบกพร่องของมวลที่สอดคล้องกับรอยแยกที่เป็นกลางของกลุ่มคาเฟอีนและสารตกค้าง Glc และ Rha ครอบงำวิถีการแตกแฟรกเมนต์ของ PhG และสร้างไอออนของชิ้นส่วนเพื่อการวินิจฉัย (รูปที่ 8) แฟรกเมนต์ไอออนที่มีลักษณะเฉพาะของ MS/MS เพิ่มเติมที่ m/z 179, 161 และ 135 เสนอแนะเพิ่มเติมว่าตัวแทนของคาเฟอีนมีอยู่ในโครงสร้างของพวกมัน การใช้คุณสมบัติการแตกแฟรกเมนต์เหล่านี้ ทำให้เราสามารถเสนอเส้นทางการแตกแฟรกเมนต์ได้อย่างมั่นใจดังนี้แอคทีโอไซด์(รูปที่ 7c) ผลิตชิ้นส่วนที่ m/z 461 โดยการสูญเสียมอยอิตี CA และจากนั้นผลิตไอออนที่ m/z 315 โดยการสูญเสีย Rha เพิ่มเติม พบ CA มอยอิตีที่ m/z 179 และชิ้นส่วนไอออนของมันถูกพบที่ m/z 161 และ m/z 135 โดยการสูญเสีย H2O และ CO2 ตามลำดับ ไอโซแอคทีโอไซด์ (รูปที่ 7d) สร้างอิออนแบบเดียวกันกับแอกทิโอไซด์ที่ m/z 461, 315, 179, 161 และ 135 20 -Acetylacteoside (รูปที่ 7e) ผลิตชิ้นส่วนที่ m/z 623 โดยการสูญเสีย acetyl และ จากนั้นสร้างไอออนที่ m/z 461, 315, 179, 161 และ 135 ซึ่งเหมือนกับรูปแบบการกระจายตัวของแอกทิโอไซด์ ในขณะเดียวกัน 20 -acetylacteoside ก็สร้างแฟรกเมนต์ที่ m/z 503 ด้วยการสูญเสียมอยอิตี CA ของมัน และต่อมาก็สูญเสียกลุ่ม Ac เพื่อผลิตไอออนที่ m/z 461 Tubuloside B (รูปที่ 6f) แสดงรูปแบบการกระจายตัวที่คล้ายคลึงกันกับ 20 -อะซิติแลคติโอไซด์ Echinacoside (รูปที่ 7a) สร้างแฟรกเมนต์ไอออนที่ m/z 623 โดยการสูญเสียของมอยอิตี CA ของมัน จากนั้นการสูญเสียตามลำดับของมอยอิตี Rha และ Glc ทำให้เกิดแฟรกเมนต์ไอออนที่ m/z 477 และ 315 แฟรกเมนต์ไอออนที่ m/z 461 ถูกสร้างขึ้นโดยการสูญเสียมอยอิตี CA และ Glc จากไอออนตั้งต้น นอกจากนี้ยังพบ CA ion ที่มีลักษณะเฉพาะที่ m/z 179, 161 และ 135 ซิสตาโนไซด์ A (รูปที่ 7b) สร้างแฟรกเมนต์ไอออนที่ m/z 637 โดยการสูญเสียมอยอิตี CA ของมัน และจากนั้นสร้างไอออนที่ m/z 491 และ 475 โดยการสูญเสียมอยอิตี Rha และ Glc เพิ่มเติมตามลำดับ ดังนั้น การใช้ UPLC-PDA-QTOF/MS ร่วมกันอาจมีส่วนสำคัญต่อการอธิบายโครงสร้างทางเคมีของสารประกอบได้อย่างแม่นยำ

2.7. ความสัมพันธ์ระหว่างคุณสมบัติของสารต้านอนุมูลอิสระและคุณสมบัติของสารต้านอนุมูลอิสระ A8

การวิเคราะห์ความสัมพันธ์ระหว่างเนื้อหาทั้งหมดของสารต้านอนุมูลอิสระและกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระทั้งหมดได้อธิบายไว้ในการศึกษาจำนวนมาก [33–38] จากความรู้ที่ดีที่สุดของเรา ยังขาดการศึกษาเปรียบเทียบคุณสมบัติของสารต้านอนุมูลอิสระและปริมาณ PhG ของการเพาะปลูกค. ทะเลทรายิโคลาชิ้นส่วนโดยใช้วิธีการจำแนกลักษณะที่รัดกุมดังกล่าว ผลเบื้องต้นของเนื้อหา PhG หกรายการที่อธิบายไว้ในส่วน "การวิเคราะห์เชิงปริมาณ" ถูกสรุปไว้ในตารางที่ 4 และฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ (IC50) ที่กำหนดหาโดยใช้การสอบวิเคราะห์ DPPH ตามที่อธิบายไว้ในส่วน "ความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระ" แสดงไว้ในตารางที่ 5 อันดับแรก เนื้อหาและกิจกรรมของสารต้านอนุมูลอิสระทั้งหมดของแต่ละส่วนแสดงไว้ในรูปที่ 9 เห็นได้ชัดว่ามีความแตกต่างที่ชัดเจนระหว่างส่วนต่างๆ อันที่จริง ผลลัพธ์ที่ได้บ่งชี้ว่าฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของการเพาะปลูกค. ทะเลทรายิโคลาลำต้นเปรียบได้กับลำต้นที่มีอยู่ในท้องตลาด ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดต้นกำเนิดอาจสัมพันธ์กับปริมาณ PhG ของสารสกัด ดังนั้นไฟโตเคมิคอลในสารสกัดจากลำต้นที่ปลูกค. ทะเลทรายิโคลาเสนอให้มีบทบาทสำคัญในกิจกรรมการกำจัดอนุมูล DPPH โดยรวม ผลลัพธ์ของเราชี้ให้เห็นถึงความสัมพันธ์ที่ชัดเจนระหว่างปริมาณ PhG ทั้งหมดและกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระ: r {{0}}.92, ** p <>

นอกจากนี้ ตัวอย่างบางตัวอย่างที่มีปริมาณสารต้านอนุมูลอิสระรวมสูงกว่าไม่ได้แสดงฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระสูง เช่น แกนและช่อดอก ในขณะเดียวกัน โคโรลลาซึ่งมีกิจกรรมสูงสุดในหกส่วน มีปริมาณสารต้านอนุมูลอิสระรวมต่ำกว่าแกนและช่อดอก รูปที่ 4 ตามที่อธิบายไว้ในส่วน "การวิเคราะห์เชิงปริมาณ" แสดงปริมาณสัมพัทธ์ของสารประกอบ PhG เพื่อให้เข้าใจเบื้องต้นเกี่ยวกับการมีส่วนร่วมของแต่ละบุคคล ในการศึกษานี้ ได้ทำการวิเคราะห์การถดถอยบางส่วนน้อยที่สุด (PLS) [39–41] เพื่อเปรียบเทียบความสัมพันธ์ระหว่างความอุดมสมบูรณ์ของสารต้านอนุมูลอิสระแต่ละชนิดกับฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระในหลอดทดลอง แบบจำลอง PLS ถูกสร้างขึ้นโดยใช้เนื้อหาของสารต้านอนุมูลอิสระแต่ละตัว (เป็นเมทริกซ์อธิบาย X) ในโครมาโตแกรมลายนิ้วมือที่ 330 นาโนเมตร และกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระ (เป็นเมทริกซ์การตอบสนอง Y) ของทุกส่วน แผนภาพค่าสัมประสิทธิ์และความสำคัญของตัวแปรในค่าการฉายภาพ (VIP) ที่ได้รับโดยใช้ซอฟต์แวร์ SIMCA-P plus (เวอร์ชัน 130, Umetrics, Umea, สวีเดน) แสดงไว้ในรูปที่ 10 โดยเฉพาะอย่างยิ่ง ค่าผกผันของค่า IC50 (1/IC50) ถูกเลือกให้เป็นตัวแปร Y เพื่อสร้างแบบจำลองเนื่องจากค่า IC50 ที่ต่ำกว่าแสดงถึงการมีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระที่แข็งแกร่งกว่า ตามแผนภาพค่าสัมประสิทธิ์การถดถอยที่ได้รับในรูปที่ 10A แบบจำลองการถดถอยเชิงเส้นแสดงว่าสารต้านอนุมูลอิสระทั้งหมดยกเว้นแอกทีโอไซด์มีความสัมพันธ์เชิงบวกกับ 1/IC50 แบบจำลองการสอบเทียบที่ได้รับของ PLS แสดงโดยสมการถดถอย: Y=0.50X1 บวก 0.57X2 − 0.11X3 บวก 0.32X4 บวก 0.58X5 บวก 0.24X6 ค่า VIP สะท้อนถึงความสำคัญของตัวแปรในแบบจำลอง ยิ่ง VIP มีขนาดใหญ่ ยิ่งมีความเกี่ยวข้องมากขึ้นสำหรับการจัดกลุ่มตัวอย่าง จากผลลัพธ์ของเราพบว่า 20 -acetylacteoside มีส่วนสำคัญต่อฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ (รูปที่ 10B) การค้นพบนี้สอดคล้องกับการศึกษาของ Yang et al [20]

3 วัสดุและ วิธีการ

3.1 โรงงาน วัสดุ.ปลูกฝังค. ทะเลทรายิโคลาได้รับการจัดเตรียมอย่างไม่เห็นแก่ตัวโดยฐานปลูก Bencao Congrong ใน Yongning County จังหวัด Ningxia และได้รับการรับรองโดย Prof. Jun Chen จากสถาบันการพัฒนาพืชสมุนไพร Chinese Academy of Medical Sciences กรุงปักกิ่งประเทศจีน หกส่วนที่แตกต่างกันของการเพาะปลูกC. ทะเลทราย ประกอบด้วยลำต้นอวบน้ำ (R1), แกนช่อดอก (R2), การงอก (R3), ดอกเตอร์ (ไม่มีเมล็ด) (R4), ก้านดอก (R5) และกลีบดอก (R6) ข้อมูลตัวอย่างโดยละเอียดแสดงไว้ในรูปที่ 11 แต่ละส่วนถูกทำให้แห้งแยกกันในเครื่องอบผ้า บดให้เป็นผง ผ่านตะแกรงตาข่าย 40- แล้วบรรจุลงในภาชนะที่มีอากาศถ่ายเทและเก็บไว้ในเครื่องดูดความชื้น ตัวอย่างบัตรกำนัลของตัวอย่างเหล่านี้ถูกฝากไว้ที่สถาบันการพัฒนาพืชสมุนไพร สถาบันวิทยาศาสตร์การแพทย์จีน ปักกิ่ง ประเทศจีน

3.2. เคมีภัณฑ์และรีเอเจนต์ Isoacteoside (Lot 130809), acteoside (Lot 130421) และ echinacoside (Lot 121027) ถูกซื้อจาก Chengdu Pure-Chem Standard Co. Ltd. (ปักกิ่ง ประเทศจีน), Cistanoside A, 20 -Acetylacteoside และ tubuloside B ถูกแยกออก และบริสุทธิ์จากการเพาะปลูกค. ทะเลทรายิโคลาในห้องปฏิบัติการของเรา ซึ่งมีความบริสุทธิ์มากกว่า 98 เปอร์เซ็นต์ (HPLC) และโครงสร้างยังได้รับการยืนยันตาม HR-MS, 1H-NMR และ 13C-NMR และเปรียบเทียบกับวรรณกรรมก่อนหน้า โครงสร้างของพวกเขาแสดงในตารางที่ 7 DPPH, L-ascorbic acid และ Trolox ถูกซื้อจาก Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) ตัวทำละลาย อะซีโตไนไตรล์ และเมทานอลเป็นเกรด HPLC จากเมอร์ค (ดาร์มสตัดท์ เยอรมนี) และกรดฟอร์มิกที่มีความบริสุทธิ์ 96 เปอร์เซ็นต์เป็นเกรด HPLC (Tedia, Fairfield, OH, USA) น้ำปราศจากไอออน (18 MΩ) ถูกเตรียมโดยน้ำกลั่นผ่านระบบ Milli-Q (Millipore, Milford, MA, USA) รีเอเจนต์และสารเคมีอื่นๆ อยู่ในระดับวิเคราะห์

3.3. การเตรียมการแก้ปัญหา

3.3.1. Standard Solutions สารละลายสต็อคมาตรฐานแบบผสมที่ประกอบด้วยเอ็กไคนาโคไซด์(501 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร), ซิสตาโนไซด์ A (64 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร), แอคทีโอไซด์ (239 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร), ไอโซแอคทีโอไซด์ (22.6 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร), 20 -อะซีติแลคติโอไซด์ (278 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) และทูบูโลไซด์ B(46.2 ไมโครกรัม) /mL) ถูกเตรียมในเมทานอล สารละลายสต็อคถูกเจือจางด้วยเมทานอลเพื่อให้ได้ชุดความเข้มข้นที่เหมาะสมซึ่งใช้เป็นสารละลายในการทำงานเพื่อพัฒนากราฟการปรับเทียบและถูกเก็บไว้ที่ 4 ◦C ก่อนใช้งาน

3.3.2. โซลูชันตัวอย่าง ผงชั่งน้ำหนักที่แม่นยำ (40 ตาข่าย 1 กรัม) ของหกส่วนที่แตกต่างกันของการเพาะปลูกค. ทะเลทรายิโคลาถูกเติมด้วยเมทานอล 50 มิลลิลิตร ตามลำดับ หลังจากแช่เป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง ของผสมจะถูกชั่งน้ำหนักและสกัดในอ่างน้ำอัลตราโซนิก (40 kHz, 250 W, Kunshan, ประเทศจีน) ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 40 นาที หลังจากเย็นตัวลง จะมีการเติมเมทานอลเพิ่มเติมเพื่อชดเชยน้ำหนักที่สูญเสียไป สารละลายทั้งหมดถูกกรองผ่านตัวกรองเมมเบรน 0.22 ไมโครเมตรก่อนการฉีด สารละลายส่วนลอย (3 ไมโครลิตร) ของสารละลายเหนือตะกอนถูกฉีดเข้าไปใน UPLC สำหรับการวิเคราะห์ สารสกัดแต่ละชนิดถูกฉีดเป็นสามเท่า

3.3.3. DPPH โซลูชั่น สารละลายสต็อคราก DPPH (5 × 10-3 โมล/ลิตร) ถูกเตรียมโดยการละลายตัวอย่าง DPPH ที่ชั่งน้ำหนักอย่างแม่นยำในเมทานอลทันทีก่อนการทดลองและได้รับการปกป้องจากแสง จากนั้น สารละลายสต็อกถูกเจือจางใหม่ด้วยเมทานอลเพื่อให้ได้สารละลายมาตรฐาน (1 × 10-4 โมล/ลิตร)

3.4. เงื่อนไขการวิเคราะห์ UPLC-PDA การวิเคราะห์ UPLC ถูกดำเนินการบนระบบ Waters Acquity UPLC (วอเตอร์ส, มิลฟอร์ด, แมสซาชูเซตส์, สหรัฐอเมริกา) ซึ่งประกอบด้วยเครื่องทำความร้อนคอลัมน์, ตัวจัดการตัวอย่าง, ตัวจัดการตัวทำละลายแบบไบนารี และตัวตรวจจับอาร์เรย์โฟโตไดโอด การแยกโครมาโตกราฟีดำเนินการบนคอลัมน์ Acquity UPLC BEH C18 (1.7 µm,2.1 มม. × 1{{10}}0 มม. น้ำ) โดยการตรึงเครื่องทำความร้อนคอลัมน์ที่ 30 ◦C เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยอะซีโตไนไตรล์ (A) และน้ำที่มีกรดฟอร์มิก 0.2 เปอร์เซ็นต์ (B) ที่อัตราการไหล 0.4 มล./นาที ใช้โปรแกรมการชะเกรเดียนต์ดังนี้: 5 เปอร์เซ็นต์ A ที่ 0-2 นาที, 5–15 เปอร์เซ็นต์ A ที่ 2–4 นาที, 15 เปอร์เซ็นต์ A ที่ 4-6 นาที, 15–20 เปอร์เซ็นต์ A ที่ 6–10 นาที, 20 –35 เปอร์เซ็นต์ A ที่ 10-15 นาที, 35 เปอร์เซ็นต์ A ที่ 15–18 นาที และ 35–5 เปอร์เซ็นต์ A ที่ 18–18.1 นาที จากนั้นจัดองค์ประกอบที่ 5 เปอร์เซ็นต์ A อีก 10 นาทีสำหรับการปรับสมดุลใหม่ ความยาวคลื่นการตรวจจับถูกตั้งค่าไว้ที่ 330 นาโนเมตร

3.5. การวิเคราะห์ UPLC-ESI-Q/TOF-MS เงื่อนไข เงื่อนไข UPLC เหมือนกับที่อธิบายไว้ในหัวข้อ 3.4 การวิเคราะห์ MS ดำเนินการบนเครื่องตรวจวัดมวลสาร Waters Xevo G2-XS QTOF (เทคโนโลยี Waters MS เมืองแมนเชสเตอร์ สหราชอาณาจักร) ที่ติดตั้งอินเทอร์เฟซสเปรย์ฉีด (ESI) ในโหมดไอออนลบพร้อมการสแกนสเปกตรัม MS แบบเต็มบน m/ z ช่วง 50–1200 ในแหล่งกำเนิด แรงดันไฟของเส้นเลือดฝอยคือ 2000 V อุณหภูมิแหล่งกำเนิดคือ 120 ◦C อุณหภูมิการละลาย 450 ◦C แรงดันกรวยคือ 40 V ก๊าซรูปกรวยคือ 30 L/h และอัตราการไหลของก๊าซที่ละลายในน้ำคือ 600 ลิตร/ชม. การทดลอง MS/MS ดำเนินการโดยใช้ MSE และพลังงานการชนกันคือ 20–40 V ข้อมูล MS ทั้งหมดถูกรวบรวมโดยใช้ระบบ Lock Spray เพื่อรับรองความถูกต้องของมวลและความสามารถในการทำซ้ำ [M − H]− ไอออนของลิวซีน-เอนเคฟาลินที่ m/z 554.2615 ถูกใช้เป็นมวลล็อคในโหมด ESI เชิงลบ ข้อมูลได้รับ วิเคราะห์ และประมวลผลโดยใช้ซอฟต์แวร์ Waters Mass Lynx 4.1 (Waters MS Technologies, Manchester, UK)

3.6. Offlfline DPPH Radical Scavenging Assay กิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระทั้งหมดของสารสกัดจากพืชได้รับการประเมินโดยใช้การทดสอบการกำจัดอนุมูลอิสระ DPPH แบบออฟไลน์ สารละลายตัวอย่าง (2 มล.) ที่ความเข้มข้นต่างๆ ผสมกับสารละลาย DPPH 1 × 10-4 โมล/ลิตร 2 มล. (ในเมทานอล) ตัวอย่างทั้งหมดถูกเขย่าและปล่อยให้ยืนในที่มืดที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 60 นาที การลดลงของอนุมูลอิสระ DPPH ถูกวัดโดยการอ่านค่าการดูดกลืนแสงที่ 517 นาโนเมตรเทียบกับสารเปล่า (เมทานอลที่ไม่มีตัวอย่าง) บนเครื่องอ่าน ELISA (TECAN, Growing, Austria) เมทานอล (2 มล.) เพียงอย่างเดียวถูกใช้เป็นตัวควบคุมของการทดลองนี้ ใช้ Trolox และ L-ascorbic acid เป็นกลุ่มควบคุมเชิงบวก กิจกรรมการกวาดล้างอย่างรุนแรง ( เปอร์เซ็นต์การยับยั้ง) ของตัวอย่างที่ทดสอบ ซึ่งแสดงเป็นเปอร์เซ็นต์การไล่ตาม DPPH คำนวณโดยใช้สูตรต่อไปนี้: เปอร์เซ็นต์การยับยั้ง=[(กลุ่มควบคุม − ตัวอย่าง)/Acontrol] × 100 กิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระทั้งหมดคำนวณโดยการวางแผนเปอร์เซ็นต์การยับยั้งเทียบกับความเข้มข้นของตัวอย่าง และแสดงแทนความเข้มข้นของตัวอย่างที่ต้องการเพื่อขจัด 50 เปอร์เซ็นต์ของอนุมูล DPPH (IC50) การทดสอบทั้งหมดดำเนินการเป็นสามเท่า และค่า IC50 ถูกรายงานเป็นค่าเฉลี่ย ± SD

3.7. UPLC-PDA ควบคู่กับการทดสอบ DPPH ก่อนคอลัมน์ ในการศึกษานี้ หลังจากผสมสารละลาย DPPH 2 มล. (3 × 10−3 โมล/ลิตร) และสารละลายตัวอย่าง 1 มล. (12 มก./มล.) ของส่วนต่างๆ ของ C. deserticola ที่เพาะปลูกผสมกัน UPLC-PDA ถูกนำมาใช้เพื่อเพิ่มเติม คัดกรองโปรไฟล์ของสารต้านอนุมูลอิสระและระบุส่วนประกอบของสารต้านอนุมูลอิสระโดยการตรวจจับการเปลี่ยนแปลงในจุดสูงสุดที่มีลักษณะเฉพาะของสารละลายตัวอย่างก่อนและหลังปฏิกิริยากำจัดอนุมูลอิสระ DPPH สำหรับส่วนต่าง ๆ ของพืชที่ต่างกัน, ส่วนเติม 10 ไมโครลิตรของสารละลายตัวอย่างก่อนและหลังการสอบวิเคราะห์ DPPH ถูกฉีดแยกกันเข้าไปในระบบ UPLC ภายใต้สภาวะเดียวกันกับที่ได้อธิบายไว้ในส่วนที่ 3.4 หลังจากที่สารละลายตัวอย่างถูกผสมกับสารละลาย DPPH การเปลี่ยนแปลงในพีคที่มีลักษณะเฉพาะของสารละลายตัวอย่างถูกตรวจพบที่ 330 นาโนเมตร

3.8. การวิเคราะห์ข้อมูล. ข้อมูลการวิเคราะห์แสดงเป็นค่าเฉลี่ย ± ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (SD) ของการวัดอิสระสามเท่า การวิเคราะห์สหสัมพันธ์แบบ Bivariate ดำเนินการเพื่อศึกษาความสัมพันธ์ระหว่างเนื้อหา PhG ทั้งหมดและกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระโดยการกำหนดค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์แบบเพียร์สัน (r) โดยใช้สถิติ IBM SPPS (เวอร์ชัน 19; International Business Machines Corp., New York, NY, USA) ค่า IC50 ยังคำนวณโดยการวิเคราะห์ probit โดยใช้สถิติ SPPS 19 อัตราการขจัดอนุมูลอิสระ DPPH และเนื้อหา PhG ทั้งหมดถูกวางแผนโดยใช้ OriginPro 8.5.1 (Origin Lab Corp., Northampton, MA, USA) การถดถอยกำลังสองน้อยที่สุด (PLS) บางส่วนถูกกำหนดโดยใช้ซอฟต์แวร์ SIMCA-P plus (เวอร์ชัน 13.0, Umetrics, Umea, สวีเดน)

4. บทสรุป

ส่วนต่างๆ ของ C. deserticola ที่ปลูก ซึ่งเป็นยาสมุนไพรที่ใช้กันอย่างแพร่หลาย ได้รับการตรวจสอบคุณภาพ ประการแรก ลายนิ้วมือลักษณะเฉพาะของหกส่วนต่าง ๆ ของการเพาะปลูกCistancheทะเลทรายตัวอย่างถูกสร้างขึ้นและประเมินผลโดยใช้ SES และการวิเคราะห์เนื้อหาของสารประกอบเครื่องหมายหกตัวพร้อมกัน ประการที่สอง การหาปริมาณสารประกอบหลักหกชนิดโดยใช้ UPLC แสดงให้เห็นลักษณะการกระจายของสารประกอบเหล่านี้ในส่วนต่างๆ อย่างไรก็ตาม ผลลัพธ์ไม่สามารถเกี่ยวข้องโดยตรงกับฤทธิ์ของยาสมุนไพรได้ ดังนั้นจึงจำเป็นต้องมีวิธีการที่ดีกว่าในการกำหนดคุณภาพและกิจกรรมของตัวอย่าง C. deserticola ที่เพาะปลูกพร้อมกัน อันดับแรก เราใช้การทดสอบการกำจัดอนุมูล DPPH แบบออฟไลน์เพื่อประเมินกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระของการเพาะปลูกCistancheทะเลทรายสารสกัดและพบกิจกรรมสูงสุดในสารสกัดก้าน นอกจากนี้ UPLC-PDA ควบคู่ไปกับการทดสอบ DPPH ก่อนคอลัมน์เพื่อคัดกรองและประเมินสารต้านอนุมูลอิสระในการปลูกCistancheทะเลทรายสารสกัดจากลำต้น วิธีนี้ไม่เพียงแต่ให้ข้อมูลทางเคมีมากขึ้น แต่ยังให้ข้อมูลสารต้านอนุมูลอิสระบางอย่างที่สามารถใช้ในการระบุและประเมินยาสมุนไพร ประการที่สอง ส่วนประกอบออกฤทธิ์ในสารสกัดต้นกำเนิดถูกแยกและระบุโดยใช้ UPLC-PAD-QTOF/MS เพื่อยืนยันจำนวนและตำแหน่งของหมู่แทนที่ และเพื่อปรับปรุงความถูกต้องของการวิเคราะห์เชิงโครงสร้าง ในที่สุด ความสัมพันธ์ระหว่างส่วนประกอบทางเคมีกับฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระในหลอดทดลองถูกสร้างและตรวจสอบโดยใช้แบบจำลอง PLS

โดยสรุป เป็นครั้งแรกที่เราได้เปรียบเทียบโปรไฟล์องค์ประกอบทางเคมีและกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระของส่วนต่างๆ ของตัวอย่าง C. deserticola ที่เพาะปลูก การค้นพบนี้มีความสนใจเป็นพิเศษเนื่องจากยังไม่มีรายงานการแจกจ่ายสารประกอบ PhG ปริมาณ PhG และการมีส่วนร่วมของสารต้านอนุมูลอิสระในส่วนต่างๆ ของตัวอย่าง C. deserticola ที่เพาะปลูก จนถึงการศึกษาในปัจจุบัน นอกจากนี้ การวิเคราะห์ PLS ได้รับการจัดตั้งขึ้นครั้งแรกเพื่อให้เข้าใจเบื้องต้นเกี่ยวกับการมีส่วนร่วมของ PhG หกรายต่อกิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระ แนวทางนี้อาจให้ข้อมูลเชิงลึกใหม่แก่เราเกี่ยวกับการประเมินคุณภาพที่ครอบคลุมของ C. deserticola ที่เพาะเลี้ยง สุดท้าย งานนี้แสดงถึงรายงานฉบับแรกเกี่ยวกับความสัมพันธ์ที่ชัดเจนระหว่างกิจกรรมการกำจัดอนุมูล DPPH กับเนื้อหา PhG ทั้งหมดของส่วนต่างๆ จาก C. deserticola ที่เพาะปลูก (r=0.92) ในบรรดาส่วนต่างๆ เหล่านี้ พบว่าลำต้นอุดมไปด้วย PhGs และมีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระที่แข็งแกร่ง โดยเฉพาะอย่างยิ่ง ส่วนที่ถูกทิ้งของ C. deserticola ที่ปลูกแล้วยังมีสารประกอบออกฤทธิ์ทางชีวภาพบางชนิดและอาจใช้เป็นอาหารเสริมทางเลือก เราหวังว่าผลลัพธ์นี้จะให้ข้อมูลที่เป็นประโยชน์สำหรับการใช้ C. deserticola ที่เพาะปลูกในอนาคต ตามความรู้ของเรา นี่เป็นรายงานฉบับแรกเกี่ยวกับการระบุอย่างรวดเร็วและการหาปริมาณสารต้านอนุมูลอิสระตามธรรมชาติในส่วนต่างๆ ของการเพาะปลูกCistancheทะเลทรายโดยใช้ UPLC-PAD-QTOF/MS วิธี DPPH ออฟไลน์ และวิธี UPLC-PAD-pre-columnDPPH จากผลลัพธ์ของเรา วิธีการที่พัฒนาขึ้นที่นี่สามารถเป็นเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพและมีความหมายสำหรับการควบคุมคุณภาพอย่างครอบคลุมของยาสมุนไพรที่ซับซ้อน ในประเทศของเรา ภายใต้การนำของความคิดริเริ่ม "หนึ่งแถบ หนึ่งเส้นทาง" พืชผลแบบดั้งเดิมที่มีประโยชน์ต่อสุขภาพนี้สามารถนำมาใช้เพื่อออกแบบผลิตภัณฑ์ใหม่ที่มีการใช้งานทั่วโลก

รับทราบ

ผู้เขียนขอขอบคุณการสนับสนุนทางการเงินของ Chinese Academy of Medical Sciences (CAMS) Innovation Fund for Medical Sciences (CIFMS) (หมายเลข 2016-I2M-1-012) และ NationalNatural Science Foundation of China (หมายเลข 31570344).

ผลงานของผู้เขียน

Yue Shi และ Xiaoming Wang เข้าร่วมในการออกแบบการวิจัย Xiaoming Wang, Jinfang Wang, Huanyu Guan, Rong Xu, Xiaomei Luo, Meifeng Su, Xiaoyan Chang, Wenting Tan และ Jun Chen รับผิดชอบในการทดลอง Yue Shi, Xiaoming Wang และ Jinfang Wang ทำการวิเคราะห์ข้อมูล Yue Shi และ Xiaoming Wang มีส่วนร่วมในการเขียนและแก้ไขต้นฉบับ ความขัดแย้งทางผลประโยชน์: ผู้เขียนประกาศว่าไม่มีความขัดแย้งทางผลประโยชน์

อ้างอิง

วัง, ต.; จาง X.; Xie, W. Cistanche deserticola YC Ma, "Desert Ginseng": บทวิจารณ์ เป็น. เจ. ชิน. เมดิ. 2555, 40, 1123–1141. [CrossRef] [PubMed]

2. หลี่ Z.; หลิน, เอช.; Gu, L.; เกา เจ.; Tzeng, C. Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): หนึ่งในของขวัญทางเภสัชกรรมที่ดีที่สุดของการแพทย์แผนจีน ด้านหน้า. ฟา. 2016, 7, 41. [CrossRef] [PubMed]

3. Gu, C.; ยาง X.; Huang, L. Cistanches Herba: การทบทวนเภสัชวิทยา ด้านหน้า. ฟา. 2559, 7, 289. [CrossRef] [PubMed]

4. Xu, X.; จาง Z.; วัง W.; เหยา H.; Ma, X. ผลการรักษาของ Cistanoside A ต่อการเผาผลาญกระดูกของหนูที่ตัดรังไข่ โมเลกุล 2017, 22, 197. [CrossRef] [PubMed]

5. วัง, ดี.; วัง H.; Gu, L. กิจกรรมยากล่อมประสาทและการปรับปรุงความรู้ความเข้าใจของ Cistanche สมุนไพรจีนโบราณ Evid.-Based Complement. ทางเลือก เมดิ. 2017, 2017, 1–9. [CrossRef] [PubMed]

6. Xue, Z.; Yang, B. Phenylethanoid Glycosides: ความก้าวหน้าของการวิจัยในด้านพฤกษเคมี, กิจกรรมทางเภสัชวิทยาและเภสัชจลนศาสตร์ โมเลกุล 2016, 21, 991. [CrossRef] [PubMed]

7. เจียง วาย.; Tu, P. การวิเคราะห์องค์ประกอบทางเคมีในสายพันธุ์ Cistanche เจ. โครมาโตกร์. พ.ศ. 2552, 1216, 2513-2522 [CrossRef] [PubMed]

8. Xiong, Q.; Kadota, S.; Tani, T. ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของ phenylethanoids จาก Cistanche deserticola ไบโอล. เภสัช. วัว. 2539, 19, 1580–1585. [CrossRef] [PubMed]

9. แม่ Z .; ยาง Z.; หลี่, พี.; Li, C. การหาค่า Phenylethanoid Glycosides แปดชนิดพร้อมกันในสายพันธุ์ต่างๆ ของสกุล Cistanche โดยโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง เจ. ลิค. โครมาโตก. ญาติ. เทคโนโลยี 2551, 31, 2838–2850. [ข้ามอ้างอิง]

10. เจียง วาย.; หลี่ SP; วัง YT; เฉิน XJ; Tu, PF Differentiation ของ Herba Cistanches ด้วยลายนิ้วมือด้วยการตรวจจับมวลสารโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง-ไดโอดอาร์เรย์ เจ. โครมาโตกร์. 2552, 1216, 2156–2162. [CrossRef] [PubMed]

11. ลู ดี.; จางเจ.; ยาง Z.; หลิวเอช.; หลี่เอส.; วู, บี.; Ma, Z. การวิเคราะห์เชิงปริมาณของ Cistanches Herba โดยใช้โครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูงควบคู่ไปกับการตรวจจับอาร์เรย์ไดโอดและแมสสเปกโตรเมตรีความละเอียดสูงรวมกับวิธีเคมี เจ. ก.ย. วิทย์. 2013, 36, 1945–1952. [CrossRef] [PubMed]

12. เพลง Q.; หลี่ เจ.; หลิว X .; จาง, วาย.; Guo, L.; เจียง, วาย.; เพลง Y.; Tu, P. การใส่ยัติภังค์ออนไลน์แบบโฮมเมดของการสกัดของเหลวด้วยแรงดัน โครมาโตกราฟีการไหลแบบปั่นป่วน และโครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูง Cistanche deserticola เป็นกรณีศึกษา เจ. โครมาโตกร์. 2559, 1438, 189–197. [CrossRef] [PubMed]

13. ฮันแอล.; ป๋องเย๋ยดอม, ม.; หลิวอี.; จาง, วาย.; Li, W. ลักษณะโครงสร้างและการระบุไอออนของ Phenylethanoid Glycosides จาก Cistanches deserticola YC Ma โดย UHPLC/ESI–QTOF–MS/MS ไฟโตเคม ก้น 2555, 23, 668–676. [CrossRef] [PubMed]

14. เจิ้ง, เอส.; เจียง X.; วูแอล.; วัง Z .; Huang, L. การเลือกปฏิบัติทางเคมีและทางพันธุกรรมของ Cistanches Herba จาก UPLC-QTOF/MS และบาร์โค้ด DNA PLOS ONE 2014, 9, 1–11. [CrossRef] [PubMed]

15. เพลง Y.; เพลง Q.; หลี่ เจ.; จาง N.; จ้าว Y.; หลิว X .; เจียง, วาย.; Tu, P. กลยุทธ์แบบบูรณาการเพื่อแยกความแตกต่างในเชิงปริมาณระหว่างดอกคาโมไมล์ Cistanche Deserticola และ C. tubulosa โดยใช้โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง-ไฮบริดสามเท่า-เชิงเส้นดักจับไอออนแมสสเปกโตรเมตรี เจ. โครมาโตกร์. 2016, 1429, 238–247. [CrossRef] [PubMed]

16. นิว, วาย.; หยิน, L.; หลัวเอส.; ดง เจ.; วัง H.; ฮาชิ, วาย.; Chen, S. การระบุสารต้านอนุมูลอิสระใน Flos Chrysanthemi โดย HPLC-DAD-ESI/MSN และ HPLC ควบคู่ไปกับระบบสร้างอนุพันธ์ภายหลังคอลัมน์ ไฟโตเคม ก้น 2013, 24, 59–68. [CrossRef] [PubMed]

17. เฉิน LX; หูดีเจ; ลำ เซาท์แคโรไลนา; จีแอล.; วู, D.; จ้าวเจ.; ยาว ZR; หยาง WJ; แฟน บี.; Li, SP การเปรียบเทียบฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของส่วนต่างๆ จากดอกเบญจมาศหิมะ (Coreopsis tinctoria Nutt.) และการระบุสารต้านอนุมูลอิสระตามธรรมชาติโดยใช้โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงควบคู่ไปกับการตรวจจับอาร์เรย์ไดโอดและแมสสเปกโตรเมตรีและ 2,20 -azinobis({ {4}}กรดเอทิลเบนไธอะโซลีน-ซัลโฟนิก) การสอบวิเคราะห์ที่มีไดแอมโมเนียมเป็นเบสเป็นเบส เจ. โครมาโตกร์. 2016, 1428, 134–142. [ผับเมด]

18. ฟู, ม.; Xu, Y.; เฉิน Y.; วู เจ.; ยู, วาย.; ซู, บี.; อัน, เค.; Xiao, G. การประเมินสารฟลาโวนอยด์ที่ออกฤทธิ์ทางชีวภาพและกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระใน Pericarpium Citri Reticulate (Citrus reticulata "Chachi") ระหว่างการเก็บรักษา เคมีอาหาร. 2017, 230, 649–656. [CrossRef] [PubMed]

19. จาง X.; ซู, ม.; จางเจ.; วูแอล.; หลิว เจ.; Si, J. การระบุและประเมินส่วนประกอบต้านอนุมูลอิสระในดอกไม้ของ Chimonanthus ห้าชนิด Ind. พืชผล. แยง. 2017, 102, 164–172. [ข้ามอ้างอิง]

20. หยาง เจ.; หูเจ .; เรน่า เค.; กะ, เอส.; Du, N. ความสัมพันธ์ระหว่างโครงสร้างกับกิจกรรมของ phenylethanoid glycosides ในพืชของ Cistanche salsa ต่อฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ เจ. ชิน. เมดิ. มาเตอร์ 2552, 32, 1067–1069.

21. เขา W.; ฝาง ต.; Tu, P. ความคืบหน้าการวิจัยเกี่ยวกับกิจกรรมทางเภสัชวิทยาของ echinacoside จีน เจ. ชิน. มาเตอร์ เมดิ. 2552, 34, 476–479.

22. หลี่ วาย.; เฉินเจ .; หลี่, วาย.; Li, P. การระบุและการหาปริมาณของสารกำจัดอนุมูลอิสระในดอกตูมของสายพันธุ์ Lonicera โดยการทดสอบ HPLC-DPPH แบบออนไลน์ร่วมกับการพ่นไอออนด้วยไฟฟ้าแบบไอออนไนเซชันควอดรูโพล Time-of-flight tandem mass spectrometry ไบโอเมด โครมาโตก. 2012, 26, 449–457. [CrossRef] [PubMed]

23. เหยา H.; เฉิน Y.; เรือ.; หูเจ .; หลี่เอส.; หวาง, L.; หลิน เจ.; Lin, X. การคัดกรองและการวิเคราะห์เชิงปริมาณของสารต้านอนุมูลอิสระในผลของ Livistona Chinensis R. Br โดยใช้ HPLC-DAD-ESI MS ควบคู่ไปกับการทดสอบ DPPH ก่อนคอลัมน์ เคมีอาหาร. 2555, 135, 2802–2807. [CrossRef] [PubMed]

24. วัง Y.; ห่าว H.; วังจี.; ตู, พี.; เจียง, วาย.; เหลียง, วาย.; ได, L.; ยาง H.; ไล, แอล.; เจิ้งซี.; และคณะ แนวทางในการระบุเมตาโบไลต์ตามลำดับของฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ทั่วไป เอ็กไคนาโคไซด์ โดยอิงตามเวลาดักโครมาโตกราฟีของเหลวของการวิเคราะห์มวลของเที่ยวบิน ทาลันต้า 2009, 80, 572–580. [CrossRef] [PubMed]

25. ฉี, ม.; Xiong, A.; หลี่, พี.; หยาง, คิว; ยาง L.; Wang, Z. การระบุแอกทีโอไซด์และเมแทบอไลต์ที่สำคัญในปัสสาวะของหนูโดยโครมาโตกราฟีของเหลวสมรรถนะสูงรวมกับสเปกโตรเมตรีแมสสเปกโตรเมตรีแบบควบคู่ด้วยอิเล็กโตรสเปรย์ไอออไนซ์สี่เท่า เจ. โครมาโตกร์. ข 2013, 940, 77–85. [CrossRef] [PubMed]

26. หลี่ ว.; ซัน, X.; เพลง H.; ดิง เจ.; ใบ, เจ.; Chen, Q. HPLC/Q-TOF-MS-Based Identification of Absorbed Constituents and their Metabolites in Rat Serum and Urine After การบริหารช่องปากของสารสกัด Cistanche Deserticola เจ. อาหารวิทย์. 2015, 80, H2079–H2087. [CrossRef] [PubMed]

27. หลี่ วาย.; โจว, จี.; ซิง, เอส.; ซิง, เอส.; ตู, พี.; Li, X. การระบุเมตาโบไลต์ของ Echinacoside ที่ผลิตโดยแบคทีเรียในลำไส้ของมนุษย์โดยใช้เครื่องวัดมวลสารโครมาโตกราฟีของเหลวแบบ Ultraperformance-Quadrupole Time-of-Flight Mass Spectrometry เจ. อากริก. อาหาร. เคมี. 2015, 63, 6764–6771. [CrossRef] [PubMed]