ส่วนที่ 2 Phenylethanol Glycoside Liposome ยับยั้งการเปิดใช้งาน HSC ที่เหนี่ยวนำโดย PDGF ผ่านกฎระเบียบของเส้นทางส่งสัญญาณ FAKPI3KAkt
Mar 06, 2022
ติดต่อ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 อีเมล:audrey.hu@wecistanche.com
4. วัสดุและวิธีการ
4.1. วัสดุ
CPhGs (phenylethanoid glycoside จาก cistanche)ถูกซื้อมาจาก Hetian Di Chen Medical Biotechnology Co., Ltd. (ซินเจียง ประเทศจีน) เนื้อหาของechinaceaมากกว่า 35 เปอร์เซ็นต์ และแอคทีโอไซด์มากกว่า 16 เปอร์เซ็นต์ ซื้อเลซิตินจาก Shanghai Lanji Technology Co., Ltd. (เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน) 1,2-Dipalmitoyl-sn-glycerol-3-phosphocholine (DPPC) และโคเลสเตอรอลถูกจัดหาโดย Avanti Polar Lipid Inc. (Birmingham, AL, USA) Shanghai Zhongqiaoxinzhou Biotech (เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน) จัดหาเซลล์ตับหนูที่เป็นอมตะ อาหาร Eagle's medium (DMEM) ดัดแปลงของ Dulbecco ซื้อมาจาก Thermo Fisher Scientific, Inc. (Waltham, MA, USA) Fetal bovine serum (FBS) ซื้อมาจาก Gibco Life Technologies (Waltham, MA, USA) เพนิซิลลิน (100 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) และสเตรปโตมัยซิน (100 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) เป็นผลิตภัณฑ์ของ Thermo Fisher Scientific, Inc. MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl){ {13}},5-diphenyltetrazolium bromide] (5 มก./มล.) ซื้อมาจาก Sigma (Oakville, ON, Canada) กิจกรรม LDH ได้รับการประเมินโดยใช้ชุดทดสอบ LDH จาก Beijing Solar Science & Technology Co., Ltd. (ปักกิ่ง ประเทศจีน) FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit I และโพรพิเดียมไอโอไดด์ (PI)/RNase Staining Buffer ทั้งหมดซื้อมาจาก BD Biosciences (ซานดิเอโก แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา) และ rrPDGF-BB จัดทำโดย R&D Systems (มินนิอาโปลิส รัฐมินนิโซตา สหรัฐอเมริกา) น้ำยา TRIzol ถูกซื้อจาก Thermo Fisher Scientific, Inc. ชุดอุปกรณ์การสังเคราะห์ cDNA RevertAid First Strand เป็นผลิตภัณฑ์ของ Thermo Fisher Scientific, Inc. (วิลนีอุส ลิทัวเนีย) TB Green Premix Ex Taq TM II ซื้อมาจาก Takara (เมืองต้าเหลียน ประเทศจีน) สารละลาย Ripa pyrolysis จัดทำโดย Thermo Fisher Scientific, Inc. Protease inhibitor phenylmethylsulfonyl fluoride และส่วนผสม Broad-spectrum phosphatase inhibitor ที่ซื้อมาจาก Boster Biological Technology Co., Ltd. (หวู่ฮั่น ประเทศจีน) แถบโปรตีนถูกแสดงภาพโดย Pierce™ ECL Western Blotting Substrate ซึ่งจัดหาให้โดย Invitrogen (Carlsbad, CA, USA) ซื้อ IgG ต่อต้านกระต่ายด้วยเอนไซม์มะรุมจากมะรุมจาก Zhongshan JinQiao Shanghai Co., Ltd. (เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน) ชุดทดลอง Super Signal West Femto จัดทำโดย Thermo Fisher Scientific, Inc. Rabbit anti-p-actin, a-SMA, คอลลาเจน-1, FAK, PI3K, phospho-PI3K, Akt และแอนติบอดี phospho-Akt ทั้งหมดถูกซื้อจาก Beijing Bioss Antibodies Biological Co., Ltd. (ปักกิ่ง ประเทศจีน) X-3-FAK และ X-3-NC ซื้อมาจาก Shanghai GenePharma Co., Ltd. (เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน) Lipofectamine 2000 จัดทำโดย Invitrogen
4.2. การเตรียม CPhG Liposomes
เลซิติน DPPC และโคเลสเตอรอล (1:2:2, m/m/m) ถูกละลายในส่วนผสมของคลอโรฟอร์มและเมทานอล (2:1 v/v) หมุนเพื่อสร้างฟิล์มที่ 49-50 องศา และCPhGs(phenylethanoid glycoside จาก cistanche)(250 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ถูกเติมในภายหลัง สารละลายที่ทำปฏิกิริยาถูกหมุนและให้ไฮเดรตอย่างต่อเนื่อง และเยื่อฟอสโฟลิปิดถูกถ่ายโอนไปในน้ำเพื่อสร้างไลโปโซม CPG กระบวนการไลโปโซมที่ถูกห่อหุ้มถูกทำซ้ำตามวิธีการข้างต้น เพื่อให้ได้ไลโปโซมที่สม่ำเสมอ ไลโปโซมที่ถูกห่อหุ้มถูกอัดรีด 5 ครั้งด้วยเมมเบรนที่มีรูพรุนขนาด 0.45 卩m และกรอง 18-20 ครั้งด้วยเมมเบรน 0.22 卩m ไลโปโซม CPG ถูกเก็บไว้ที่ 4 องศา การกระจายขนาดอนุภาควัดโดยเครื่องวิเคราะห์ขนาดอนุภาคด้วยเลเซอร์ รูปร่างของอนุภาคถูกสังเกตโดยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่าน และประสิทธิภาพการบรรจุยาและการห่อหุ้มถูกกำหนดโดย HPLC
4.3. In Vitro Release จาก CPG Liposome และ CPhGs(phenylethanoid glycoside จาก cistanche)
โปรไฟล์การปลดปล่อยในหลอดทดลองของ CPG liposomes และCPhGs(phenylethanoid glycoside จาก cistanche) โดยใช้วิธีเมมเบรนฟอกไต ตัวอย่างทั้งหมด 5 มล. ของแต่ละตัวอย่างถูกถ่ายโอนไปยังถุงฟอกไตด้วยการตัดน้ำหนักโมเลกุล Da 14,000 Da ถุงไตเทียมถูกจุ่มลงใน 20{{10 }} mL ของสารละลายบัฟเฟอร์ PBS (pH=6.0) สั่นที่ 37 องศา ตัวกลางสำหรับการปลดปล่อย (3 มล.) ถูกถอนออกและแทนที่ด้วยสารละลายบัฟเฟอร์ isopycnic PBS (pH=6.0) ที่ช่วงเวลาที่กำหนดไว้ (0.5,1, 2, 4, 8,12,16, 24 และ 48 ชม). ความเข้มข้นของอิชินาโคไซด์ในไลโปโซม CPG และCPhGsในสื่อเผยแพร่ถูกกำหนดโดย
เอชพีแอลซี การปล่อยสะสม ( เปอร์เซ็นต์ ) ของ CPG liposomes และCPhGs(phenylethanoid glycoside จาก cistanche) คำนวณโดยใช้สมการ (1) ดังต่อไปนี้
โดยที่ Cn คือความเข้มข้นของยาในตัวกลางสำหรับการปลดปล่อยที่จุดสุ่มตัวอย่างที่ n V คือปริมาตรของตัวกลางที่ปล่อยออกมา และ W คือขนาดยาทั้งหมด
เพื่อทำความเข้าใจลักษณะการปลดปล่อยหลอดแก้วของCPhG(phenylethanoid glycoside จาก cistanche) ไลโปโซมและCPhGsมีการใช้แบบจำลองที่แตกต่างกันสามแบบเพื่อให้พอดีกับข้อมูลการปลดปล่อยที่ได้รับ: (a) แบบจำลองจลนพลศาสตร์แบบไม่มีลำดับขั้น (b) แบบจำลองจลนศาสตร์อันดับที่หนึ่ง และ (c) แบบจำลอง Higuchi ที่ให้ไว้ในสมการ (2)-(4) :
โดยที่ Mt/Mo คือเศษส่วนของเคอร์คูมินที่ปล่อยออกมาจากตัวอย่าง ณ เวลา t และ k คือค่าคงที่การปลดปล่อยของแบบจำลองต่างๆ ค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์คำนวณเพื่อแสดงระดับความเหมาะสมระหว่างแบบจำลองการปลดปล่อยและข้อมูล
4.4. ความเป็นพิษต่อเซลล์
สำหรับ HSCs ความหนาแน่น 1 x 105 เซลล์/มล. ถูกชุบในเพลต96-หลุมและปล่อยให้เติบโตในชั่วข้ามคืนที่ 37 องศาในตู้ฟัก CO2 5 เปอร์เซ็นต์ ความมีชีวิตชีวาของเซลล์ได้รับการทดสอบในช่วงกว้างของCPhGความเข้มข้นของไลโปโซม (117.79,58.90, 29.45, 14.72, 7.36, 3.68,1.84, 0.92 และ 0.46 卩g/mL) เพื่อตรวจหาความมีชีวิตชีวาของเซลล์ทดสอบและคำนวณค่า IC50 จากนั้น เซลล์ถูกบ่มที่ 37 องศาเป็นเวลา 4 ชั่วโมงด้วย 20 ไมโครลิตรของ MTT (5 มก./มล. ในสารละลาย PBS) ผลิตภัณฑ์ MTT-Product สีม่วงถูกละลายใน DMSO 150 卩L และ Multiskan Spectrum Absorbance Reader (Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA) ใช้เพื่อวัดตัวดูดซับที่ 490 นาโนเมตร สูตรต่อไปนี้ (สมการ (5)) ใช้เพื่อคำนวณเปอร์เซ็นต์ความมีชีวิตของเซลล์:
4.5. ความเป็นพิษของเซลล์ของ CPhG ไลโปโซมบน HSCs
เซลล์ถูกเพาะเข้าไปในเพลต 6-หลุม และความเป็นพิษของ HSC ถูกวัดโดยใช้ชุดตรวจจับ LDH เซลล์ถูกเคลือบที่ความหนาแน่น 2 x 105 เซลล์/หลุมในจาน 6-หลุมที่ 37 องศาในตู้ฟักที่มี CO2 5 เปอร์เซ็นต์ หลังจากการเจริญเติบโตในชั่วข้ามคืน เซลล์ได้รับการรักษาด้วยCPhGไลโปโซม (29.45, 14.72 และ 7.36 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ตัวควบคุมเปล่า (สื่อ DEME) ได้รับการดูแลพร้อมกัน หลังจาก 24 ชั่วโมง เซลล์ถูกรวบรวมโดยทริปซินและการหมุนเหวี่ยง เซลล์แต่ละกลุ่มได้รับการจัดการอย่างเคร่งครัดตามคำแนะนำของชุดคิท จากนั้นคำนวณอัตราการรั่วไหลของ LDH ของของไหลจากการเพาะเลี้ยงเซลล์
4.6. การวิเคราะห์การตายของเซลล์
เซลล์ถูกเพาะเลี้ยงในเพลต 6-หลุมที่มีความหนาแน่น 2 x 105 เซลล์/หลุมที่ 37 องศาในตู้ฟักที่มีคาร์บอนไดออกไซด์ 5 เปอร์เซ็นต์ หลังจากการเจริญเติบโตในชั่วข้ามคืน เซลล์ได้รับการรักษาด้วยCPhGไลโปโซม (29.45, 14.72 และ 7.36 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) และจากนั้นการตายแบบอะพอพโทซิสของ HSC ถูกวัดโดยใช้ชุดตรวจหาอะพอพโทซิสของ FITC Annexin V ความเข้มข้นมีพื้นฐานอยู่บน IC50 ที่กำหนดหาจากการสอบวิเคราะห์ความเป็นพิษต่อเซลล์ ตัวควบคุมเปล่า (สื่อ DEME) ได้รับการดูแลพร้อมกัน หลังจาก 24 ชั่วโมง เซลล์ถูกรวบรวมโดยทริปซินและการหมุนเหวี่ยง และล้างด้วย PBS และแขวนลอยในบัฟเฟอร์การจับ 500 ไมโครลิตร จากนั้น เซลล์ถูกย้อมด้วย Annexin V-FITC 5 卩L และ PE 5 卩L เซลล์ถูกฟักที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาทีในความมืด และวัดอัตราการตายด้วย FACSCalibur Cytometer (Becton Dickinson, San Jose, CA, US)
4.7. การวิเคราะห์การจับกุมวัฏจักรของเซลล์
HSC (2 X 105 เซลล์/2 มล./หลุม) ถูกบำบัดเป็นเวลา 24 ชั่วโมงด้วยCPhGไลโปโซมที่ 29.45, 14.72 และ 7.36 ^g/mL ในเพลต 6-หลุม ตัวควบคุมเปล่า (สื่อ DEME) ได้รับการดูแลพร้อมกัน เซลล์ถูกเก็บเกี่ยวและล้างด้วย PBS 1 มล. และตรึงด้วยเอทานอล 75 เปอร์เซ็นต์ในชั่วข้ามคืนที่ 4 องศา จากนั้นเซลล์ถูกหมุนเหวี่ยงและแขวนลอยใหม่อีกครั้งในสารละลาย 500 ของโพรพิเดียม ไอโอไดด์ (PI)/บัฟเฟอร์การย้อมสี RNase ที่ 37 องศาเป็นเวลา 30 นาทีในความมืด สุดท้าย เซลล์ถูกวัดโดยใช้ FACSCalibur Cytometer (Becton Dickinson) สัดส่วนของเซลล์ในเฟส G0/G1, S และ G2/M ของวัฏจักรเซลล์ถูกวิเคราะห์โดยซอฟต์แวร์ FACS Diva (Becton Dickinson)
4.8. ผลกระทบของCPhG(phenylethanoid glycoside จาก cistanche) ไลโปโซมบนเส้นทางการส่งสัญญาณ PDGF Mediated FAK และ PI3K/Akt
4.8.1. การทดสอบการแพร่กระจาย
สายพันธุ์ HSC (1 X 105 เซลล์/มล.) ถูกเคลือบในเพลต 96-หลุม และปล่อยให้เติบโตในชั่วข้ามคืนที่ 37 องศาในตู้ฟัก CO2 5 เปอร์เซ็นต์ หลังจากการเพาะเลี้ยงเซลล์ 24 ชั่วโมง เซลล์ถูกสุ่มแบ่งออกเป็นห้ากลุ่มต่อไปนี้: กลุ่มควบคุมว่าง (เพาะเลี้ยงใน DMEM ที่มี FBS 10 เปอร์เซ็นต์เท่านั้น), PDGF-BB (เพาะเลี้ยงใน DMEM ที่มี PDGF-BB 50 ไมโครกรัม/ลิตร) เอCPhGการแทรกแซงของไลโปโซม (กระตุ้นด้วยอาหารที่มี PDGF-BB 24 ชั่วโมง 50 昭/มล.) จากนั้น เซลล์ถูกบำบัดด้วยไลโปโซม CPhG 29.45,14.72 และ 7.36 Rg/มล. เซลล์ถูกเพาะเลี้ยงอย่างต่อเนื่องเป็นเวลา 24 ชั่วโมง, 48 ชั่วโมงและ 72 ชั่วโมงในตู้อบที่ 37 องศาเป็นเวลา 4 ชั่วโมงด้วย MTT 20 rL (5 มก./มล. ในสารละลาย PBS) ผลิตภัณฑ์ MTT-ฟอร์มาซานสีม่วงถูกละลายใน 150 rL ของ DMSO และประเมินโดยการวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 490 นาโนเมตรในเครื่องอ่านสเปกตรัมการดูดกลืนแสง Multiskan (Thermo Fisher Scientific, Inc.) และคำนวณ IC50 ตัวอย่าง Quadruplicate ถูกรันสำหรับแต่ละความเข้มข้นในการทดลองอิสระสี่การทดลอง สูตรต่อไปนี้ (สมการ (6)) คำนวณเปอร์เซ็นต์ความมีชีวิตของเซลล์:
4.8.2. ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอร์ตามเวลาจริงเชิงปริมาณ (qRT-PCR)
เซลล์ถูกเพาะเข้าไปในจาน {0}}หลุมที่มีความหนาแน่น 1 X 105 เซลล์/มล. วิธีการจัดกลุ่มนี้เหมือนกับวิธีก่อนหน้านี้ หลังจาก 24 ชั่วโมง RNA ทั้งหมดถูกสกัดจากเซลล์ที่เพาะเลี้ยงโดยรีเอเจนต์ TRIzol วัดความเข้มข้นและความบริสุทธิ์ของ RNA ที่ 260/280 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์แบบอัลตราไวโอเลตตามอัตราส่วน OD260/OD280 มาตรฐานที่ 1.8-2.0 ปฏิกิริยาการถอดรหัสแบบย้อนกลับถูกคัดลอกแบบย้อนกลับจาก RNA โดยใช้ชุดการสังเคราะห์ cDNA ของ RevertAid First Strand TB Green Premix Ex TaqTM II ถูกใช้เพื่อวัดการแสดงออกของยีน qRT-PCR ดำเนินการโดยใช้ระบบ ABI QuantStudio™6 Flex Real-Time PCR (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) ลำดับไพรเมอร์ถูกสังเคราะห์โดย Sangon Biotech (เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน) (ตารางที่ 4)
4.8.3. การวิเคราะห์ Western Blot
โปรตีนทั้งหมดที่สกัดจาก HSC ในกลุ่มต่างๆ ถูกเตรียมตามที่บรรยายไว้ก่อนหน้านี้ โดยสังเขป โปรตีนที่คล้ายคลึงกันถูกแยกออกโดยใช้โซเดียม โดเดซิล ซัลเฟต-โพลีอะคริลาไมด์ เจล อิเล็กโทรโฟรีซิส (SDS-PAGE) 10 เปอร์เซ็นต์ จากนั้นจึงถ่ายโอนไปยังเมมเบรนโพลีไวนิลลิดีนฟลูออไรด์ (PVDF) (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Baden-Wuerttemberg, Germany) จากนั้น เยื่อหุ้ม PVDF ถูกบล็อกใน 3 เปอร์เซ็นต์ BSA และบ่มข้ามคืนที่ 4 ◦C ด้วยแอนติบอดีปฐมภูมิ วันถัดไป IgG ต้านกระต่ายของแพะที่ติดฉลาก HRP (1:25,000 การเจือจาง; 1 ชั่วโมง) ถูกเติม แถบโปรตีนถูกแสดงภาพผ่านเพียร์ซ™ ECL Western Blotting Substrate และทำภาพโดยใช้ FluorChem E Imaging System (Protein Simple, San Francisco, CA, USA) ซึ่งถูกทำให้เป็นมาตรฐานด้วย -actin เป็นตัวควบคุมภายใน
4.8.4. FAK การทดสอบการแสดงออกมากเกินไป
เซลล์ถูกแบ่งออกเป็นกลุ่มควบคุมขนาดกลางปกติ, กลุ่มกระตุ้น PDGF-BB, กลุ่มกระตุ้น PDGF-BB บวก X-3-กลุ่ม FAK, การกระตุ้น PDGF-BB บวกกลุ่ม X-3-NC, PDGF -BB กระตุ้นบวก X-3-FAK plusCPhGกลุ่มไลโปโซม และการกระตุ้น rrPDGF-BB บวก X-3-NC plusCPhGกลุ่มไลโปโซม สายพันธุ์ HSC (1 × 105 เซลล์/มล.) ถูกเคลือบในเพลต6-หลุมและปล่อยให้เติบโตในชั่วข้ามคืนที่ 37 ◦C ในตู้ฟัก CO2 5 เปอร์เซ็นต์ ในวันถัดไป PDGF-BB (เพาะเลี้ยงใน DMEM ที่มี PDGF-BB 50 ไมโครกรัม/ลิตร) ถูกเติมและเพาะเลี้ยง ในวันที่สาม pEX-3-FAK และ X-3-NC ถูกเจือจางในตัวกลางที่ปราศจากยาปฏิชีวนะ ผสมกับไลโปเฟคตามีน 2000 ให้เข้ากันดี และปล่อยให้ยืนที่อุณหภูมิ 37 ◦C เป็นเวลา 20 นาที ก่อนที่จะเติม ไปยังแต่ละหลุมของเซลล์ที่อุณหภูมิ 37 ◦C หลังจากการบ่มเป็นเวลา 5 ชั่วโมง สื่อที่มีซีรัม 10 เปอร์เซ็นต์ถูกแทนที่เป็นเวลา 48 ชั่วโมง และในวันที่ห้า ตัวกลางถูกแทนที่ด้วยความเข้มข้น 29.45 ไมโครกรัม/มิลลิลิตรของ CPhG ไลโปโซมเป็นเวลา 24 ชั่วโมง จากนั้น แต่ละหลุมจะถูกรวบรวมในวันที่สอง สาม ห้า และหก และตรวจพบการแสดงออกของโปรตีนยีน FAK, PI3K, Akt, p-PI3K และ p-Akt
4.9. การวิเคราะห์ทางสถิติ
ข้อมูลแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ± ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (SD) ซอฟต์แวร์ SPSS 16.0 (IBM, New York, NY, USA) ใช้สำหรับการวิเคราะห์ทางสถิติ ความสำคัญของความแตกต่างคำนวณโดยการทดสอบ ANOVA ทางเดียวและตามด้วยการทดสอบ LSD สมการการละลายยาถูกติดตั้งโดย Origin 8.5 (OriginLab, Northampton, MA, USA)
5. สรุปผลการวิจัย
โดยสรุป ผลลัพธ์ของเราแสดงให้เห็นว่าCPhG(phenylethanoid glycoside จาก cistanche) ไลโปโซมยับยั้งการกระตุ้น HSCs อย่างมีนัยสำคัญ ทำให้การพัฒนาของการเกิดพังผืดในตับอ่อนลงอย่างเห็นได้ชัดโดยการเพิ่มการตายของเซลล์และควบคุมวัฏจักรของเซลล์ใน HSC การยับยั้งเส้นทางการส่งสัญญาณ FAK/PI3K/Akt อาจเป็นกลไกพื้นฐานที่CPhGไลโปโซมป้องกันโรคตับเรื้อรังที่เกี่ยวข้องกับพังผืด การค้นพบนี้ให้ข้อมูลเชิงลึกที่แปลกใหม่เกี่ยวกับกลไกของการกำหนดสูตรยาใหม่นี้ในฐานะสารต้านไฟโบรเจนิกสำหรับการรักษาในอนาคตของการเกิดพังผืดในตับ อย่างไรก็ตาม กลไกพื้นฐานนั้นซับซ้อนกว่าที่อธิบายไว้ที่นี่ และผลลัพธ์ของเราไม่ได้ยกเว้นการมีส่วนร่วมที่เป็นไปได้ของอุปกรณ์อื่นๆ ที่เกิดจากCPhGไลโปโซมเพื่อรักษาพังผืดในตับ
ผลงานของผู้เขียน:TL, JZ, S.-PY, LM และ S.-LZ คิดและออกแบบการทดลอง S.-LZ, S.-PY, TL, JZ, X.-TM และ X.-YY วิเคราะห์ข้อมูล S.-LZ และ JZ เขียนต้นฉบับ TL, LM และ JZ ตรวจทานต้นฉบับ ผู้เขียนทั้งหมดอ่านและได้รับการอนุมัติต้นฉบับสุดท้าย.
เงินทุน:งานวิจัยนี้ได้รับทุนจากมูลนิธิวิทยาศาสตร์ธรรมชาติแห่งชาติของจีน ทุนสนับสนุนหมายเลข 81560628
รับทราบ:งานนี้ได้รับการสนับสนุนทางการเงินจากมูลนิธิวิทยาศาสตร์ธรรมชาติแห่งชาติของจีน (หมายเลข 8156140127) ผู้เขียนขอขอบคุณอย่างจริงใจต่อ Jun Zhao และ Xin Wang สำหรับการปรับปรุงการเขียนบทความนี้
ผลประโยชน์ทับซ้อน:ผู้เขียนรายงานว่าไม่มีการประกาศที่น่าสนใจ
อ้างอิง
1. จาง H.; ซัน, ดี.; วังจี.; Cui, S .; ฟิลด์ ร.ร.; หลี่ เจ.; Zang, Y. Alogliptin บรรเทาอาการพังผืดของตับผ่านการปราบปรามของเซลล์ตับ stellate ที่เปิดใช้งาน ไบโอเคมี. ชีวฟิสิกส์ ความละเอียด คอมมูนิตี้ 2019,511, 387-393. [ข้ามอ้างอิง]
2. Parola, ม.; Pinzani, M. พังผืดของตับ: พยาธิสรีรวิทยา เป้าหมายของการเกิดโรค และปัญหาทางคลินิก มล. ด้านการแพทย์ 2019, 65, 37-55. [CrossRef] [PubMed]
3. วู YJ; วู YC; เฉิน IF; วู YL; จวง CW; หวาง HH; Kuo, SM Reparative Effects ของ Astaxanthin-Hyaluronan Nanoaggregates ต่อ Retrorsine-CCl(4) - Induced Liver Fibrosis and Necrosis. โมเลกุล 2018,23, 726. [CrossRef] [PubMed]
4. วัง Y.; ซัน, วาย.; Zuo, L.; วัง Y.; Huang, Y. ASICla ส่งเสริมการกระตุ้นเซลล์ตับที่กระตุ้นระดับน้ำตาลกลูโคสและ PDGF โดยการกระตุ้น autophagy ผ่านวิถีการส่งสัญญาณ CaMKKp/ERK ท็อกซิคอล เลตต์. 2019, 300,1-9. [CrossRef] [PubMed]
5. Gupta, G.; Khadem, F.; Uzonna, JE บทบาทของเซลล์ตับ stellate (HSC) ที่ได้มาจากไซโตไคน์ในการอักเสบของตับและภูมิคุ้มกัน Cytokine 2018. [CrossRef] [PubMed]
6. Fu, C.; หลี่ เจ.; Aspire, A.; เซีย, L.; หยาง, วาย; เฉิน Q.; เลเวล, เจ.; วัง X .; หลี่ เจ.Cistanche tubulosaฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ทำให้เกิดการตายของเซลล์ในเซลล์ Eca-109 ผ่านทางวิถีที่ขึ้นกับไมโตคอนเดรีย ออนคอล เลตต์. 2019,17, 303-313. [CrossRef] [PubMed]
7. คุณ SP; แม่แอล.; จ้าวเจ.; จาง SL; Liu, T. Phenylethanol Glycosides จากCistanche tubulosaระงับการกระตุ้นเซลล์ตับและยับยั้งการนำเส้นทางการส่งสัญญาณใน TGF-beta1/smad เป็นสารที่มีศักยภาพในการต่อต้านโรคตับแข็ง โมเลกุล 2016,21,102. [CrossRef] [PubMed]
8. คุณ SP; จ้าวเจ.; แม่แอล.; Tudimat, ม.; จาง SL; Liu, T. ผลการป้องกันของ phenylethanoid glycosides จากCistanche tubulosaเกี่ยวกับการเกิดพังผืดของตับที่เกิดจากอัลบูมินในซีรัมของวัวในหนูแรท ดารุ เจ. ฟาร์ม. วิทย์. 2015, 23, 52. [CrossRef] [PubMed]
9. เกา XL; วัง, ม.; Liu, L. ประสิทธิภาพกับดักและการดูดซับโปรลิโพโซมสี่ชนิด เจ ซิน เจียง เมด ม. 2007, 8, 787-790.
10. หลี่ PY; ดู่ SY; ลู, วาย.; Chen, XN ระบบนำส่งยากาวชีวภาพและการประยุกต์ใช้ในการแพทย์แผนจีน คาง. เจ เมเตอร์. เมดิก้า 2017, 42, 4687-4693.
11. หลี่ วาย.; ลู, A.; ยาว, ม.; Cui, L.; เฉิน Z .; Zhu, L. Nitroimidazole Derivatives รวม liposomes สำหรับการนำส่งยาที่เกิดจากภาวะขาดออกซิเจนและเพิ่มประสิทธิภาพในการรักษาในการปลูกถ่ายซีโนกราฟของเนื้องอกที่ได้รับจากผู้ป่วย แอคตาไบโอเมเตอร์ 2019, 83, 334-348. [CrossRef] [PubMed]
12. Tang, H.-X.; จ้าว T.-W.; เจิ้ง, ต.; เซิง, วาย.-เจ.; เจิ้ง, H.-S.; จาง, Y.-S. ระบบนำส่งยาไลโปโซมที่กำหนดเป้าหมายไปที่ตับและความก้าวหน้าของการวิจัยโรคตับ โลกชิน. เจ. ไดเจสท์. 2559, 24,4238. [ข้ามอ้างอิง]
13. โจว BH; ตาล PP; เจีย LS; จ้าว WP; วัง เจซี; Wang, การมีส่วนร่วมของเส้นทางการส่งสัญญาณ HW PI3K/AKT ในการตายของเซลล์ที่เกิดจากฟลูออไรด์ใน C2C12cells Chemosphere 2018,199, 297-302. [CrossRef] [PubMed]
14. เจีย, วาย.; กวน Q.; Guo, Y.; Du, C. Echinacoside กระตุ้นการเพิ่มจำนวนเซลล์และป้องกันการตายของเซลล์ในเซลล์เยื่อบุผิว MODE-K ของเยื่อบุผิวโดยการเพิ่มการควบคุมของการแสดงออกของปัจจัยการเจริญเติบโตที่เปลี่ยนแปลง -p1 เจ. ฟาร์ม. วิทย์. 2012, 118, 99-108. [ข้ามอ้างอิง]
15. หลิน, ล.-ว.; Hsieh, M.-T.; ไจ, F.-H.; วัง W.-H.; วู ซี.-อาร์. ฤทธิ์ต้านโนซิเซ็ปทีฟและต้านการอักเสบที่เกิดจากCistanche deserticolaในหนู เจ. เอธโนฟาร์มาคอล. 2002, 83, 177-182. [ข้ามอ้างอิง]
16. หลี่ ต.-ม.; Huang, H.-C.; ซู, C.-M.; โฮ T.-Y.; วู, C.-M.; เฉิน W.-C.; ฟง, ย.-ค.; Tang, C.-H.Cistanche deserticolaสารสกัดช่วยเพิ่มการสร้างกระดูกในเซลล์สร้างกระดูก เจ. ฟาร์ม. ฟา. 2012, 64, 897-907. [CrossRef] [PubMed]
17. เหลียง, เอช.; ยูเอฟ; ตอง Z.; Huang, Z. ผลกระทบของซิสตันเชส เฮอร์บาสารสกัดที่เป็นน้ำต่อการสูญเสียมวลกระดูกในหนูที่ตัดรังไข่. อินเตอร์ เจ โมล. วิทย์. 2011, 12, 5060-5069. [ข้ามอ้างอิง]
18. ลู เอ็ม.-ซี. การศึกษาผลของยากล่อมประสาทของซิสทานเช เดซิติโกลาเจ. เอธโนฟาร์มาคอล. 1998, 59, 161-165. [ข้ามอ้างอิง]
19. Cai, R.-L.; ยาง M.-H.; ชิ, วาย.; เฉินเจ .; Li, Y.-C.; Qi, Y. Antifatigue activity ของสารสกัดที่อุดมด้วย phenylethanoid จากCistanche deserticola. ไฟโตเธอร์. ความละเอียด 2010, 24, 313-315. [ข้ามอ้างอิง]
20. เกิง X.; เทียน, X.; ตู, พี.; Pu, X. ผลกระทบต่อระบบประสาทของ echinacoside ในรูปแบบ MPTP ของเมาส์ของโรคพาร์กินสัน ยูโร เจ. ฟาร์มาคอล. 2007, 564, 66-74. [ข้ามอ้างอิง]
21. โมริกาวะ ต.; แพน, ย.; Ninomiya, K.; อิมูระ เค.; มัตสึดะ, H.; Yoshikawa, ม.; หยวน, ดี.; Muraoka, O. Acylated phenylethanoid aminoglycosides ที่มีฤทธิ์ป้องกันตับจากพืชทะเลทราย Cistanche tubulosa1 ไบโอออร์ก. เมดิ. เคมี. 2010, 18, 1882-1890. [CrossRef] [PubMed]
22. หยาง F.-R.; เหวิน D.-S.; ฝาง บ.-ว.; ลู เจ.-เอส.; Meng, L. การป้องกันสารสกัดจาก Cistanche salsa ต่อการเกิดพังผืดในตับที่เกิดจาก Carbon Tetrachloride ในหนู คาง. ยาสมุนไพร. 2556, 5,199—204.
23. หลี่, ม.; หลี่, วาย.; หลิว W.; หลี่อาร์.; ฉิน C.; หลิว N.; Han, J. การเตรียม Cistanche phenylethanoid glycosides liquid prolipo somes: สูตรที่เหมาะสมที่สุด, ลักษณะเฉพาะ, และ prolipo ยาหยดบางชนิด ในหลอดทดลอง และการประเมินในร่างกาย ยูโร เจ. ฟาร์ม. วิทย์. 2016, 93, 224-232. [CrossRef] [PubMed]
24. เออร์เกน ซี.; นีเอมิทซ์ PM; เฮย์มันน์, F.; เบาเออร์, ม.; เกรมส์, เอฟ.; โพล่า อาร์.; ฟาน บลัวส์, แอล.; สตอร์ม, จี.; Kiessling, F.; Trautwein, C.; และคณะ การเกิดพังผืดของตับส่งผลต่อคุณสมบัติการกำหนดเป้าหมายของระบบการนำส่งยาไปยังชุดย่อยของมาโครฟาจ ในร่างกาย วัสดุชีวภาพ 2019, 206, 49-60 [CrossRef] [PubMed]
25. หลี่, ม.; ดู่, ค.; Guo, N.; เต็ง Y.; เม้ง X.; ซัน, เอช.; หลี่เอส.; ได้.; Gallons, H. การออกแบบองค์ประกอบและการประยุกต์ใช้ไลโปโซมทางการแพทย์ ยูโร เจ เมด เคมี. 2019,164, 640-653. [ข้ามอ้างอิง]
26. ปาลิวัล, ส.; ติลัค, อ.; ชาร์มา เจ.; เดฟ, วี.; ชาร์, เอส.; Verma, K.; ตาก,เค.; เรดดี้, KR; Sadhu, V. Flurbiprofen-loaded ethanolic liposome อนุภาคสำหรับการใช้งานด้านชีวการแพทย์ เจ. ไมโครไบโอล. วิธีการ 2019,161, 18-27. [CrossRef] [PubMed]
27. ซาไก-คาโตะ, เค.; โยชิดะ, K.; อิซึทสึ, K.-I. ผลของประจุที่พื้นผิวต่อไลโปโซมภายในเซลล์ที่ขึ้นกับขนาด เคมี. สรีรวิทยา ไขมัน 2019. [CrossRef] [PubMed]
28. จู้เจ.; วังคิว; หลี่เอช.; จางเอช.; จู้, วาย.; Omari-Siaw, E.; ซัน, ค.; เหว่ย Q.; เติ้ง, ว.; ยู, เจ.; และคณะ Galangin-loaded ลิโพโซมที่กำหนดเป้าหมายไปที่ตับ: การเพิ่มประสิทธิภาพและประสิทธิภาพในการป้องกันตับ เจ. ยาเดลิฟ. วิทย์. เทคโนโลยี 2018, 46, 339-347. [ข้ามอ้างอิง]
29. Ezhilarasan, D.; Sokal, E.; Najimi, M. พังผืดในตับ: ถึงเวลาแล้วที่จะต้องไปกับเป้าหมายการรักษาเฉพาะเซลล์ตับ stellate โรคตับอ่อนตับอ่อน. อินเตอร์ 2018,17,192-197. [ข้ามอ้างอิง]
30. โมห์เรล บีเอ็ม; ณัฐตไม, ก.; บราวน์, ก.; ฟลอเรียน เอ็มซี; ไรอัน, ม.; Vogel, ม.; Bliederhaeuser, C.; โซลเลอร์, K.; หัวเรือ DR; Abdollahi, A. กลไกเฉพาะเซลล์ต้นกำเนิดทำให้มั่นใจได้ถึงความเที่ยงตรงของจีโนมภายใน HSCs และเมื่ออายุมากขึ้นของ HSCs ตัวแทนเซลล์ 2015,13, 2412-2424. [ข้ามอ้างอิง]
31. บรี อาร์.; การเคลื่อนไหว O.; ฟรานเซส, D.; การ์เซีย-มอนซอน, C.; วาร์กัส เจ.; Fernandez-Velasco, M.; Bosca, L.; คาซาโด, ม.; มาร์ติน-ซานซ์, พี; Agra, N. PGE2 กระตุ้นการตายของเซลล์ตับ stellate และลดการเกิดพังผืดของตับในหนูเมาส์โดยการปรับลด miR-23a-5p และ miR-28a-5p ไบโอชิม. ชีวฟิสิกส์ แอคตาไบโอฟิส. รวม การสังเคราะห์แสง 2018,1864, 325-337. [CrossRef] [PubMed]
32. ลอริดเซ่น, FKB; เซ่น, TL; Rapin, N.; อัสลาน, ดี.; วิลเฮล์มสัน AS; Pundhir, S.; Rehn, ม.; พอล, เอฟ.; Giladi, A.; Hasemann, มิสซิสซิปปี; และคณะ ความแตกต่างในสถานะวัฏจักรเซลล์รองรับความแตกต่างของการถอดรหัสในช่อง HSC ตัวแทนเซลล์ 2018, 24, 766-780. [CrossRef] [PubMed]
33. El-Lakkany, นิวเม็กซิโก; เอล-มาดาวี, WH; Seif El-Din, SH; ฮัมมัม โอเอ; โมฮาเหม็ด SH; เอซซาท เอสเอ็ม; ซาฟาร์ MM; Saleh, S. Rosmarinic acid ลดทอนการเกิด fibrogenesis ของตับผ่านการปราบปรามของการกระตุ้น/การเพิ่มจำนวนของเซลล์ตับ stellate และการเหนี่ยวนำของ apoptosis เอเชี่ยนแพค เจ. ทรอป. เมดิ. 2017,10, 444-453. [CrossRef] [PubMed]
34. เฉิน XX; จาง XY; ดิง, YZ; หลี่ X .; กวน, XM; หลี่เอช.; เฉิง, ม.; Cui, XD ผลกระทบของเซลล์ต้นกำเนิดบุผนังหลอดเลือดต่อการเพิ่มจำนวนและการทำงานทางชีวภาพของเซลล์ตับ stellate ภายใต้ความเครียดเฉือน คาง. เจ. แอพพ์. ฟิสิออล 2018, 34, 404-407.
35. จาง อาร์.; หลิน XH; หลิว HH; หม่าม๊า ม.; เฉินเจ .; เฉินเจ .; เกา DM; ชุย เจเอฟ; Chen, RX เปิดใช้งานเซลล์ตับ stellate ส่งเสริมความก้าวหน้าของมะเร็งตับที่ตกค้างหลังความร้อนจากการอยู่รอดของ autophagic ไปสู่การเพิ่มจำนวน อินเตอร์ เจ. Hyperthermia 2019, 36, 253-263. [CrossRef] [PubMed]
36. พาร์ค, SY; เลอ คอนเนตทิคัต; สูง KY; ชอย DH; Cho, EH Succinate กระตุ้นการสร้างพังผืดในตับโดยส่งเสริมการกระตุ้น การเพิ่มจำนวน และการย้ายถิ่น และยับยั้งการตายของเซลล์ตับ ไบโอเคมี. ชีวฟิสิกส์ ความละเอียด คอมมูนิตี้ 2018, 496, 673-678. [CrossRef] [PubMed]
37. Tsukada, S.; พาร์สันส์, CJ; Rippe, RA กลไกการเกิดพังผืดในตับ คลินิก ชิม. แอคตา 2006, 364, 33-60 [ข้ามอ้างอิง]
38. Copple, BL; Roth, K. 2.16一กลไกของตับพังผืด. ในพิษวิทยาที่ครอบคลุม ฉบับที่ 3; แมคควีน แคลิฟอร์เนีย เอ็ด.; เอลส์เวียร์: อ็อกซ์ฟอร์ด, สหราชอาณาจักร, 2018; น. 397^08.
39. Breitkopf, K.; ร้อยเอ็ด CV; สวิตซ่า, ฉัน.; วิคเคิร์ต, แอล.; Floege, เจ.; รูปแบบการแสดงออกของ Gressner, AM ของ PDGF-A, -B, -C และ -D และตัวรับ PDGF a และ |3 ในเซลล์ stellate ตับของหนูแรทที่ถูกกระตุ้น (HSC) ไซโตไคน์ 2005, 31, 349-357 [ข้ามอ้างอิง]
