ส่วนที่ 2: Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosides กระตุ้นการตายของเซลล์มะเร็งตับและเพิ่มผลต้านเนื้องอก

ติดต่อ:ali.ma@wecistanche.com

Pengfei Yuan, BSc1, Changshuang Fu, MSc1, Yi Yang, PhD1, Aipire Adila, PhD1, Fangfang Zhou, MSc1, Xianxian Wei, MSc1, Weilan Wang, PhD1, Jie Lv, PhD1, Yijie Li, PhD1, Lijie Xia, PhD1, และ Jinyao Li, PhD1

คลิกที่นี่เพื่อส่วนที่ 1

ผลลัพธ์

CTPG ยับยั้งการแพร่กระจายของเซลล์ HCC ในหลอดทดลอง

ส่วนประกอบของ CTPG มีคุณสมบัติและวัดปริมาณโดย HPLC โดยใช้มาตรฐานอิชินาโคไซด์และแอคทีโอไซด์ (รูปที่ 1A เสริม) ซึ่งเป็นส่วนประกอบหลักของฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์จากCistanche.18ตามเวลาการเก็บรักษาสูงสุดและพื้นที่พีค CTPG ประกอบด้วยเอไคนาโคไซด์ 28 เปอร์เซ็นต์และแอกทีโอไซด์ 9.9 เปอร์เซ็นต์ นอกจากนี้ ปริมาณพอลิแซ็กคาไรด์ใน CTPG เท่ากับ 34.8 เปอร์เซ็นต์โดยวิธีกรดฟีนอล-ซัลฟิวริก19 การทดสอบ MTT พบว่า CTPG ลดความมีชีวิตของ BEL-7404 และเซลล์ HepG2 อย่างมีนัยสำคัญในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยาและเวลา ( รูปที่ 1A) อย่างสม่ำเสมอ การงอกขยายของเซลล์ BEL-7404 ถูกยับยั้งอย่างมีนัยสำคัญโดยการบำบัด CTPG ซึ่งถูกวิเคราะห์โดยการย้อมสี Ki-67 (รูปที่ 1B) ผลของ CTPG ต่อการเพิ่มจำนวนของเซลล์ม้าม ในหลอดทดลอง ยังถูกวิเคราะห์โดยการสอบวิเคราะห์ MTT เราสังเกตว่า CTPG เพิ่มการเพิ่มจำนวนของเซลล์ม้ามในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา (รูปที่ 1C)

คลิกเพื่อชำระเงิน NZ

วิถีการส่งสัญญาณของโปรตีนไคเนสที่กระตุ้นด้วยไมโตเจน (MAPK) มีบทบาทสำคัญในการอยู่รอด ความแตกต่าง และการดื้อยาของเซลล์มะเร็งในมนุษย์20 เพื่อตรวจสอบว่าเส้นทางการส่งสัญญาณ MAPK เกี่ยวข้องกับผลการยับยั้งของ CTPG ต่อการเพิ่มจำนวนหรือไม่ ของเซลล์ HCC ระดับฟอสโฟรีเลชันของโปรตีนต่างๆ จากเส้นทางสัญญาณ MAPK ถูกวิเคราะห์ในเซลล์ HepG2 หลังการบำบัดด้วย CTPG ที่ความเข้มข้นและจุดเวลาที่ต่างกัน ฟอสโฟรีเลชันของ JNK (P-JNK) และ p38 (P-p38) เพิ่มขึ้นตามขนาดยาโดยการบำบัดด้วย CTPG ฟอสโฟรีเลชันของ ERK (P-ERK) ถูกควบคุมโดยการบำบัดด้วย CTPG 200 และ 400 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร ในขณะที่ P-ERK ถูกควบคุมเพิ่มขึ้นภายใต้การบำบัดด้วย CTPG ขนาด 600 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร (รูปที่ 1D) นอกจากนี้ ระดับของ P-JNK, P-p38 และ P-ERK ยังได้รับการควบคุมในลักษณะที่ขึ้นกับเวลา (รูปที่ 1D) ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า CTPG อาจยับยั้งการเพิ่มจำนวนของเซลล์ HCC ผ่านวิถีการส่งสัญญาณ MAPK

รูปที่ 1 ผลของ CTPG ต่อการเพิ่มจำนวนของเซลล์ HCC และเซลล์ม้าม

CTPG ที่ชักนำให้เกิดวัฏจักรเซลล์ HCC ที่ S Phase

เราวิเคราะห์เพิ่มเติมว่า CTPG ยับยั้งการเพิ่มจำนวนเซลล์ HCC ผ่านการเหนี่ยวนำการจับกุมวัฏจักรของเซลล์หรือไม่ หลังการบำบัดด้วย CTPG การสะสมของเซลล์ BEL-7404 ที่เฟส S ถูกสังเกตพบในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา ในทำนองเดียวกัน CTPG ยังเหนี่ยวนำการหยุดวงจรของเซลล์ HepG2 ที่เฟส S และความถี่เพิ่มขึ้นจาก 40.66 เปอร์เซ็นต์ในกลุ่มควบคุมเป็น 61.90 เปอร์เซ็นต์ในกลุ่มที่บำบัดด้วย CTPG 600ug/mL (รูปที่ 2A) Cyclins และ cyclin-dependent kinases (CDKs) มีบทบาทสำคัญในการควบคุมและการพัฒนาการแบ่งเซลล์ โดย 21 ในจำนวนนั้นสัมพันธ์กับระยะ G2/M 22 ระดับการแสดงออกของ Cyclin D1 ลดลงตามขนาดยาโดยการบำบัดด้วย CTPG แต่ส่งเสริม G1 เป็น ความก้าวหน้าของเฟส S ระดับการแสดงออกของ Cyclin B1, CDK1 และ CDK2 ก็ลดลงเช่นกัน โปรตีนเหล่านี้สัมพันธ์กับเฟส G2/M (รูปที่ 2B) ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า CTPG ยับยั้งการเพิ่มจำนวนเซลล์ HCC โดยการเหนี่ยวนำการหยุดวงจรของเซลล์

CTPG Activated Mitochondria-Dependent Apoptosis Pathway ในเซลล์ HCC

นอกจากนี้เรายังตรวจพบว่า CTPG กระตุ้นการตายของเซลล์ในเซลล์ HCC และพบว่า CTPG ทำให้เกิดการตายของเซลล์ในเซลล์ HepG2 และ BEL-7404 ในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา (รูปที่ 3A) นอกจากนี้ ระดับการแสดงออกของ Bax และ Bcl-2 เพิ่มขึ้นและลดลงโดยการบำบัดด้วย CTPG ในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา ตามลำดับ (รูปที่ 3B) การตายของเซลล์ HepG2 ถูกกำหนดโดยการย้อมสี Hoechst 33342 หลังการรักษาด้วย CTPG เป็นเวลา 24 ชั่วโมง สัณฐานวิทยาของนิวเคลียร์สังเกตได้จากกล้องจุลทรรศน์เรืองแสงแบบกลับหัว ดังที่แสดงไว้ในรูปที่ 3C เซลล์ HepG2 ควบคุมถูกย้อมเป็นเนื้อเดียวกันในขณะที่เซลล์ HepG2 ที่บำบัดด้วย CTPG แสดงการรวมตัวของโครมาตินและการกระจายตัวในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา ซึ่งคล้ายกับเซลล์ HepG2 ที่บำบัดด้วยซิสพลาติน ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า CTPG ทำให้เกิดการตายของเซลล์ HCC

ความสมบูรณ์ของเยื่อหุ้มไมโตคอนเดรียชั้นนอกนั้นควบคุมอย่างเข้มงวดโดยตระกูล Bcl-2 และการลดลงของ Δψm ส่งเสริมการปลดปล่อยไซโตโครมคที่กระตุ้นการเรียงแคสเปสเพื่อกระตุ้นการตายของเซลล์23,24 เมื่อ Δψmลดลง JC{{3 }} โพลีเมอร์ (สารเรืองแสงสีแดง) สลายตัวเป็นโมโนเมอร์ (เรืองแสงสีเขียว).25 ดังนั้น เซลล์ Δψmof HCC ถูกตรวจพบโดยการย้อมสี JC-1 หลังการบำบัดด้วย CTPG เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ดังที่แสดงไว้ในรูปที่ 4A ความเข้มการเรืองแสงสีเขียวของช่อง FL-1 เพิ่มขึ้นตามขนาดยาโดยการบำบัดด้วย CTPG ในขณะที่ความเข้มการเรืองแสงสีแดงของช่อง FL-2 ลดลงตามขนาดยาใน BEL ทั้งสอง{ {12}} และเซลล์ HepG2 การสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์เรืองแสงแบบกลับด้านแสดงผลที่คล้ายกัน (รูปที่ 4B) ซึ่งบ่งชี้ว่า CTPG ลด Δψm ของเซลล์ HCC ต่อจากนั้น เราสังเกตว่าระดับของ cytochrome c เพิ่มขึ้นทั้งในเซลล์ BEL-7404 และ HepG2 หลังการรักษาด้วย CTPG (รูปที่ 4C) ซึ่งยืนยันเพิ่มเติมว่าการลดลงของ Δψm ในเซลล์ HCC ที่บำบัดด้วย CTPG

การปล่อยไซโตโครมซีสามารถกระตุ้นแคสเปสของ initiator-9 เพื่อกระตุ้นการตายของเซลล์ 26 ผลลัพธ์ของการทดสอบ Western blot ชี้ให้เห็นว่าระดับของแคสเปสแยก-3 -7 และ{{4} } เพิ่มขึ้นในขณะที่ระดับของ caspase ที่แยกออก-8 ไม่เปลี่ยนแปลง (รูปที่ 5) แคสเปสที่ถูกกระตุ้น-3สามารถตัดแยกเอ็นไซม์ซ่อมแซมดีเอ็นเอของโพลี (ADP-ไรโบส) โพลีเมอเรส (PARP) เพื่อป้องกันการซ่อมแซมดีเอ็นเอและสะสมความเสียหายของดีเอ็นเอ27 นอกจากนี้เรายังสังเกตเห็นระดับ PARP ที่ถูกแยกซึ่งมีการควบคุมขึ้น บทบาทของแคสเปสคาสเคดในอะพอพโทซิสของเซลล์ HCC ที่ถูกเหนี่ยวนำโดย CTPG ถูกกำหนดเพิ่มเติมโดยการใช้ตัวยับยั้งแคสเปส (Z-VAD-FMK) และตัวยับยั้งแคสเปส-3 (Ac-DEVD-CHO) ตามลำดับ Z-VAD-FMK ย้อนกลับการตายแบบอะพอพโทซิสของ BEL-7404 และเซลล์ HepG2 ที่เหนี่ยวนำโดย CTPG อย่างมีนัยสำคัญ (รูปที่ 1B เสริม) ในทำนองเดียวกัน Ac-DEVD-CHO ยังย้อนกลับการตายแบบอะพอพโทซิสของเซลล์ HepG2 ที่เหนี่ยวนำโดย CTPG (รูปที่ 1C เพิ่มเติม) อย่างมีนัยสำคัญ ผลการทดลองแสดงให้เห็นว่า CTPG ทำให้เกิดการตายของเซลล์ HCC โดยวิถีที่ขึ้นกับไมโตคอนเดรีย

CTPG ระงับการย้ายเซลล์ HCC ในหลอดทดลอง

การย้ายเซลล์มะเร็งถือเป็นหนึ่งในกระบวนการที่สำคัญในการแพร่กระจายของเนื้องอก เพื่อตรวจสอบว่า CTPG ส่งผลต่อการย้ายเซลล์ HCC หรือไม่ การเคลื่อนที่ของเซลล์ HepG2 ถูกประเมินโดยการทดสอบการรักษาบาดแผล ดังที่แสดงไว้ในรูปที่ 6A และ B การย้ายเซลล์ HepG2 ถูกยับยั้งอย่างมีนัยสำคัญโดยการบำบัดด้วย CTPG ในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา ตระกูล MMP และ VEGF มีบทบาทสำคัญในการย้ายเซลล์เนื้องอก28 หลังการรักษาด้วย CTPG เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ระดับของ MMP-2 และ VEGF ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (รูปที่ 6C) ซึ่งบ่งชี้ว่า CTPG อาจระงับการบุกรุกและการแพร่กระจาย ของ คสช.

CTPG ปรับปรุงภูมิคุ้มกันของหนู

มีรายงานว่าCistancheทะเลทรายพอลิแซ็กคาไรด์มีภูมิคุ้มกันฟังก์ชั่นรวมทั้งส่งเสริมการเพิ่มจำนวนของเซลล์ลิมโฟไซต์และกระตุ้นมาโครฟาจ เซลล์ 29T และเซลล์บีเป็นเซลล์ลิมโฟไซต์หลัก ซึ่งเป็นสื่อกลางในการตอบสนองภูมิคุ้มกันของเซลล์และร่างกายตามลำดับ CTPG มีปริมาณพอลิแซ็กคาไรด์ 34.8 เปอร์เซ็นต์ ดังนั้นเราจึงตรวจสอบผลกระทบของ CTPG ต่อการเพิ่มจำนวนของเซลล์ T และเซลล์ B ดังที่แสดงไว้ในรูปที่ 2A เพิ่มเติม CTPG เพิ่มการงอกขยายของทีเซลล์และบีเซลล์อย่างมีนัยสำคัญในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา แม้ในการมีอยู่ของซิสพลาติน สิ่งที่น่าสนใจคือ CTPG ยับยั้งการตายของเซลล์ม้ามที่เกิดจากซิสพลาติน (รูปที่ 2B เสริม) อย่างมีนัยสำคัญ ซึ่งบ่งชี้ว่า CTPG สามารถบรรเทาผลข้างเคียงของซิสพลาตินต่อระบบภูมิคุ้มกันของหนูเมาส์ได้

เราประเมินผลการกระตุ้นภูมิคุ้มกันของ CTPG ต่อหนูเพิ่มเติม หลังการฉีด ip, sc injection และ ig ของ CTPG (200 และ 400 มก./กก.) ไม่มีการเปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญในสถานะของหนูเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มที่ไม่ได้รับการรักษา น้ำหนักตัวของหนูเมาส์ยังไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างกลุ่มที่ได้รับ CTPG และกลุ่มที่ไม่ได้รับการรักษา (รูปที่ 7A) ดัชนีหัวใจ ตับ ม้าม ปอด ไต และต่อมไทมัสของหนูทดลองมีความคล้ายคลึงกันในทุกกลุ่ม ยกเว้นดัชนีม้ามของหนูในกลุ่มที่ฉีด CTPG ip 400 มก./กก. (ตารางที่ 1) ผลการวิจัยชี้ให้เห็นว่าปริมาณ CTPG ที่เลือกไม่มีผลข้างเคียงในหนูทดลอง

ม้ามเป็นอวัยวะป้องกันภูมิคุ้มกันที่สำคัญในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม และการพัฒนาของมันส่งผลโดยตรงต่อการทำงานของภูมิคุ้มกันของแต่ละบุคคลและความสามารถในการต้านทานโรค ดัชนีอวัยวะภูมิคุ้มกันสะท้อนถึงการพัฒนาและการทำงานของภูมิคุ้มกันของอวัยวะภูมิคุ้มกัน ม้ามประกอบด้วยเซลล์ภูมิคุ้มกันหลายชนิด รวมถึงทีเซลล์ บีเซลล์ เซลล์นักฆ่าตามธรรมชาติ (เซลล์ NK) มาโครฟาจ เซลล์เดนไดรต์ (DCs) และอื่นๆ ซึ่งมีบทบาทสำคัญในระบบภูมิคุ้มกัน3{{2} } มีรายงานว่าโพลีแซ็กคาไรด์สามารถเพิ่มจำนวนเซลล์ภูมิคุ้มกันเพื่อเพิ่มภูมิคุ้มกันของร่างกายได้31 เนื่องจากการฉีด ip ของ CTPG ทำให้ดัชนีม้ามเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (เพิ่มขึ้น 0.55 เท่า) เราจึงวิเคราะห์ตัวเลขต่างๆ เพิ่มเติม เซลล์ภูมิคุ้มกันในม้าม ผลการวิจัยพบว่าการฉีด ip ของ CTPG เพิ่มจำนวนทีเซลล์อย่างมีนัยสำคัญ (CD3 บวก CD19− เซลล์) (เพิ่มขึ้น {{10}}.49 เท่า), บีเซลล์ (CD3−CD19 บวกเซลล์) (เพิ่มขึ้น 0.49 ครั้ง) และเซลล์ NK (CD3−CD19−CD49b บวกเซลล์) (เพิ่มขึ้น 1.63 เท่า) เปรียบเทียบกับกลุ่มที่ไม่ถูกบำบัด CD4 plus และ CD8 plus T cells เป็นชนิดย่อยหลักของ T cells มีบทบาทสำคัญในการตอบสนองภูมิคุ้มกันของเซลล์ที่จำเพาะต่อแอนติเจน 32 ดังนั้นเราจึงวิเคราะห์จำนวนและสถานะการเปิดใช้งานของ CD4 plus และ CD8 plus T เซลล์ใน ม้าม. ผลการวิจัยพบว่าการฉีด ip ของ CTPG ไม่เพียงแต่เพิ่มจำนวน CD4 plus และ CD8 plus T cells อย่างมีนัยสำคัญ (เพิ่มขึ้น 0.55 และ 0.34 เท่าตามลำดับ) แต่ยังเพิ่มสถานะการเปิดใช้งานของ CD4 plus T cells (CD4 บวก CD44 บวกเซลล์) (เพิ่มขึ้น 0.84 เท่า) (รูปที่ 7B) ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า CTPG มีฟังก์ชันเสริมภูมิคุ้มกัน

รูปที่ 2 ผลกระทบของ CTPG ต่อวัฏจักรเซลล์ในเซลล์ HCC

การรวมกันของ CTPG และ Cisplatin ที่แสดงฤทธิ์ต้านเนื้องอกที่มีศักยภาพบนแบบจำลองหนูเมาส์เนื้องอก H22

เป็นที่ยอมรับกันโดยทั่วไปว่าเคมีบำบัดหรือรังสีรักษาสามารถนำไปสู่การพยากรณ์โรคที่ไม่ดีและทำให้เกิดเหตุการณ์ไม่พึงประสงค์มากมาย ซึ่งอาจเกิดจากการกดภูมิคุ้มกันของระบบภูมิคุ้มกันและความเสียหายต่อเนื้อเยื่อและอวัยวะปกติ โพลีแซ็กคาไรด์จาก TCM มีผลเสริมภูมิคุ้มกันและบรรเทาความเสียหายของอวัยวะภูมิคุ้มกันและเซลล์ภูมิคุ้มกันที่เกิดจากเคมีบำบัด เช่น chitosan33 และ Lycium barbarum polysaccharides34 ผลข้างต้นแสดงให้เห็นว่า CTPG สามารถบรรเทาผลข้างเคียงของ cisplatin ต่อระบบภูมิคุ้มกัน ดังนั้น ผลของการต้านเนื้องอกของ CTPG ที่รวมกับซิสพลาตินจึงถูกประเมินในแบบจำลองหนูเมาส์ที่เป็นเนื้องอก H22 ดังที่แสดงไว้ในรูปที่ 8A, CTPG เพียงอย่างเดียว, ซิสพลาตินเพียงอย่างเดียว และการรวมกันของ CTPG และซิสพลาติน (CTPG บวกกับซิสพลาติน) ยับยั้งการเจริญของเนื้องอก H22 อย่างมีนัยสำคัญเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม CTPG ร่วมกับซิสพลาตินแสดงผลการยับยั้งที่แข็งแกร่งกว่าของ CTPG และซิสพลาตินเพียงอย่างเดียว ในวันที่ 20 ปริมาตรเนื้องอกในกลุ่มควบคุม ซิสพลาตินเพียงอย่างเดียว CTPG เพียงอย่างเดียวและกลุ่ม CTPG บวกกับพลาติน cis อยู่ที่ประมาณ 1707.8, 722.5, 1033.8 และ 367.5 มม. 3 ตามลำดับ ในวันเดียวกัน เนื้องอกถูกรวบรวมเพื่อการสังเกตด้วยสายตา (รูปที่ 8B) และการเปรียบเทียบน้ำหนัก (รูปที่ 8C) CTPG ร่วมกับซิสพลาตินแสดงผลการรักษาที่ดีกว่าบนแบบจำลองหนูเมาส์ที่เป็นเนื้องอก H22 กว่า CTPG หรือซิสพลาตินเพียงอย่างเดียว น้ำหนักเนื้องอกในกลุ่ม CTPG บวกกับ cispla tin ต่ำกว่าในกลุ่มอื่นๆ ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าฤทธิ์ต้านเนื้องอกของ CTPG และซิสพลาตินส่งผลให้เกิดผลเสริมฤทธิ์กัน

วัดน้ำหนักตัวของหนูเพื่อสะท้อนสถานะสุขภาพของหนู น้ำหนักตัวลดลงอย่างเห็นได้ชัดหลังการรักษาด้วยซิสพลาติน ซึ่งบ่งชี้ถึงความเป็นพิษต่อระบบอย่างรุนแรงที่เกิดจากซิสพลาติน35 ในการเปรียบเทียบ CTPG ร่วมกับซิสพลาตินช่วยลดน้ำหนักตัวที่เกิดจากซิสพลาตินได้อย่างมีนัยสำคัญ ในขณะที่ CTPG เพียงอย่างเดียวไม่มีผลอย่างมีนัยสำคัญต่อน้ำหนักตัวของหนูทดลอง (รูปที่ 8D) แยกอวัยวะต่าง ๆ รวมทั้งม้าม หัวใจ ตับ ปอด ไต และต่อมไทมัส เพื่อคำนวณดัชนีอวัยวะ เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มที่ไม่ได้รับการรักษา ดัชนีม้ามลดลงอย่างมีนัยสำคัญและเพิ่มขึ้นโดยซิสพลาตินและ CTPG ตามลำดับ CTPG plus cisplatin กู้คืนดัชนีม้ามเมื่อเปรียบเทียบกับ cisplatin เพียงอย่างเดียว ดัชนีอวัยวะอื่นไม่พบความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญในทุกกลุ่ม (ตารางที่ 2)

CTPG ร่วมกับ Cisplatin ช่วยเพิ่มภูมิคุ้มกันของหนูเนื้องอก

ผลลัพธ์ข้างต้นแสดงให้เห็นว่า CTPG ช่วยเพิ่มภูมิคุ้มกันของหนูและยับยั้งการตายของเซลล์ม้ามที่เกิดจากซิสพลาติน เราตรวจสอบเพิ่มเติมว่าฤทธิ์ต้านเนื้องอกของ CTPG ร่วมกับซิสพลาตินมีความสัมพันธ์กับภูมิคุ้มกันที่เพิ่มขึ้นหรือไม่ ในกระบวนการของการเกิดเนื้องอกและการพัฒนา ระบบภูมิคุ้มกันของร่างกายมีบทบาทสำคัญในการเฝ้าระวังภูมิคุ้มกัน และภูมิคุ้มกันของเซลล์ที่อาศัยเซลล์ T ก็มีบทบาทสำคัญ เซลล์ CD4 บวก T มีหน้าที่ในการช่วยภูมิคุ้มกันของเซลล์และการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันของร่างกาย และ CD8 บวก T เซลล์เป็นเซลล์เอฟเฟกต์หลักของการตอบสนองทางภูมิคุ้มกัน ซึ่งสามารถฆ่าเซลล์เป้าหมายโดยเฉพาะและมีบทบาทสำคัญในการสร้างภูมิคุ้มกันเนื้องอกและภูมิคุ้มกันต้านไวรัส32 ม้ามของหนูเมาส์ที่มีเนื้องอกถูกรวบรวมเพื่อตรวจหาจำนวนทีเซลล์และบีเซลล์โดยโฟลว์ไซโตเมทรี ความถี่และจำนวนของทีเซลล์ซึ่งรวมถึง CD4 บวกและ CD8 บวกทีเซลล์ในกลุ่ม CTPG บวกซิสพลาตินสูงกว่ากลุ่มควบคุมอย่างมีนัยสำคัญ (เพิ่มขึ้น 0.55 และ 0.7 เท่า ตามลำดับ) และกลุ่มซิสพลาติน (เพิ่มขึ้น 0.92 และ 1.16 เท่าตามลำดับ) (รูปที่ 9A และ B) เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม CTPG เพียงอย่างเดียวยังเพิ่มจำนวน CD4 plus และ CD8 plus T เซลล์บางส่วนด้วย แม้ว่าจะไม่มีความแตกต่างที่มีนัยสำคัญ ความถี่และจำนวนของเซลล์ B ไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญในทุกกลุ่ม

เซลล์ต้านจากมัยอีลอยด์ (MDSCs) และเซลล์ T ควบคุม (Tregs) ขยายตัวในเนื้องอกและยับยั้งการตอบสนองของภูมิคุ้มกันต้านเนื้องอก พวกมันยับยั้งการกระตุ้นและการขยายตัวของ CD4 บวกทีเซลล์, การทำงานของเอฟเฟกเตอร์ทีเซลล์, การกระตุ้นและ/หรือการเพิ่มจำนวนและการสร้างไซโตไคน์ของ CD4 plus และ CD8 บวกทีเซลล์, การเพิ่มจำนวนบีเซลล์และการผลิตอิมมูโนโกลบูลินและสวิตช์คลาส, ฟังก์ชันที่เป็นพิษต่อเซลล์ของ NK และทีเซลล์นักฆ่าตามธรรมชาติ (NKT) และฟังก์ชันและการเจริญเต็มที่ของ DCs36-38 ความถี่และจำนวนของ MDSC (CD11b บวก Gr-1 บวก ), มาโครฟาจ (CD11b บวก Gr{ {9}}−) และ Tregs (Treg ธรรมชาติ: CD4 บวก CD25 บวก Foxp3 plus ; Tregs ที่เหนี่ยวนำ: CD4 บวก CD25−Foxp3 บวก ) ในม้ามของหนูที่เป็นเนื้องอกถูกวิเคราะห์โดยโฟลว์ไซโตเมทรี เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม ความถี่และจำนวนของ MDSCs ลดลงอย่างมีนัยสำคัญหลังการฉีดด้วยซิสพลาตินเพียงอย่างเดียว (ลดลง 1.56 เท่า) หรือร่วมกับ CTPG (ลดลง 0.62 เท่า) จำนวนของ CD11b บวก Gr-1− มาโครฟาจยังลดลงอย่างมีนัยสำคัญแม้ว่าความถี่ของพวกมันจะไม่เปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญ (รูปที่ 9C) นอกจากนี้ การบำบัดด้วย CTPG เพียงอย่างเดียวและ CTPG ร่วมกับซิสพลาตินช่วยลดความถี่ของ Tregs ที่เหนี่ยวนำได้อย่างมีนัยสำคัญ (ลดลง 0.33 และ 0.37 เท่า ตามลำดับ) (รูปที่ 9D) ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าผลต้านเนื้องอกของ CTPG ร่วมกับซิสพลาตินอาจสัมพันธ์กับภูมิคุ้มกันที่เพิ่มขึ้นซึ่งมีลักษณะเฉพาะโดยจำนวนทีเซลล์ที่เพิ่มขึ้นและจำนวน MDSC และ Tregs ที่ลดลง

Cistanche ช่วยเพิ่มภูมิคุ้มกัน

การอภิปราย

มีรายงานว่า TCM สามารถกระตุ้นการตายของเซลล์เนื้องอกต่างๆ ได้ผ่านวิถีทางต่างๆ รวมทั้งตัวรับความตายจากภายนอก, ไมโทคอนเดรียภายในและเอนโดพลาสมิกเรติคิวลัม (ER) ความเครียดจากการศึกษาก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่าการหักเหของ N-butanol ของ Brassica rapa L. เหนี่ยวนำ อะพอพโทซิสของเซลล์มะเร็งปอด A549 16 และสารสกัดเอธานอลของ Pleurotus ferulae ที่ปลูกและในป่าทำให้เกิดการตายของเซลล์ H22 ผ่านทางเดินที่ขึ้นกับความเครียดของ ER และไมโตคอนเดรีย 17 เรายังรายงานว่า CTPG ยับยั้งการเจริญเติบโตของเมลาโนมา B16-F10 เซลล์และ มะเร็งหลอดอาหาร Eca-109 เซลล์ผ่านการชักนำให้เกิดการตายของเซลล์โดยอาศัยวิถีทางไมโตคอนเดรียที่ขึ้นกับไมโตคอนเดรีย13เอไคนาโคไซด์เป็นสารประกอบสำคัญที่มีกิจกรรมทางชีวภาพมากมายใน PhGs มีรายงานว่า echinacoside ออกแรงต้านการแพร่กระจายและ proapoptotic ในสายเซลล์ HepG2 HCC ผ่านการลดการแสดงออกของ TREM2 และการส่งสัญญาณ PI3K/AKT40 ในการศึกษานี้ เราพบว่า CTPG ยับยั้งการเจริญเติบโตของ HCC HepG2 และ BEL ของมนุษย์{{18 }} เซลล์ผ่านการกระตุ้นเส้นทางการส่งสัญญาณ MAPK และการชักนำให้เกิดการตายของเซลล์โดยวิถีทางที่ขึ้นกับไมโตคอนเดรีย Bax และ Bcl-2 มีบทบาทสำคัญในวิถีการตายของเซลล์ที่ขึ้นกับไมโตคอนเดรีย24 ที่นี่ เราพบว่า CTPG เพิ่มการแสดงออกของ Bax และลดการแสดงออกของ Bcl-2 ใน HepG2 และ BEL{{25 }} เซลล์ซึ่งส่งผลให้ลดลง Δψและปล่อยไซโตโครมคเพื่อกระตุ้นการเรียงแคสเปส ระดับของ caspase ที่แยกออก-9 และ caspase ที่แยกออก-3 ที่มีการควบคุมเพิ่มขึ้นถูกสังเกตหลังจากการรักษาด้วย CTPG ในขณะที่ระดับของ caspase แยก-8 ไม่ได้เปลี่ยนแปลงโดยการรักษาด้วย CTPG ซึ่งบ่งชี้ว่าการตายของเซลล์ของ เซลล์ HepG2 และ BEL-7404 ที่เหนี่ยวนำโดย CTPG ไม่ได้ถูกสื่อกลางโดยวิถีการส่งสัญญาณภายนอก อย่างไรก็ตาม การศึกษาก่อนหน้านี้ของเราพบว่า CTPG ชักนำให้เกิดการตายของเซลล์ H22 ผ่านวิถีทางภายในและภายนอก 15 ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า CTPG อาจยับยั้งการเติบโตของเซลล์เนื้องอกผ่านเป้าหมายและวิถีทางที่หลากหลาย

TCM มีการใช้กันอย่างแพร่หลายในการรักษามะเร็งผ่านเส้นทางสัญญาณที่หลากหลายโดยมีหรือไม่มีผลข้างเคียงเล็กน้อย41 เส้นทางการส่งสัญญาณ MAPK สัมพันธ์อย่างใกล้ชิดกับการเกิดขึ้น การบุกรุก และการแพร่กระจายของเซลล์เนื้องอก ซึ่งส่วนใหญ่เกี่ยวข้องกับเส้นทาง p38 ทางเดิน JNK/SAPK และวิถีทาง ERK1/220 การกระตุ้น p38 และ JNK สามารถกระตุ้นการตายของเซลล์ แต่การกระตุ้นของ ERK1/2 สามารถต้าน apoptotic หรือ pro-apoptotic ขึ้นอยู่กับคุณสมบัติของเซลล์42 มีรายงานว่า CHM เหนี่ยวนำให้เกิดการตายของเซลล์ เซลล์เนื้องอกโดยการเปิดใช้งานเส้นทาง p38, JNK หรือ ERK MAPK43,44 เราพบว่า CTPG ควบคุมระดับฟอสโฟรีเลตของ p38, JNK และ ERK ขึ้น ซึ่งแนะนำว่าเส้นทางการส่งสัญญาณ MAPK อาจเกี่ยวข้องกับการตายของเซลล์ HCC ที่เกิดจาก CTPG

เคมีบำบัดและรังสีรักษาสามารถทำให้เกิดเหตุการณ์ไม่พึงประสงค์ต่างๆ รวมถึงการกดภูมิคุ้มกันของระบบภูมิคุ้มกัน เพื่อปรับปรุงประสิทธิภาพทางคลินิกของเคมีบำบัด โพลีแซคคาไรด์จากธรรมชาติได้รับการอนุมัติให้ใช้เป็นสารเสริมในการรักษามะเร็ง มีรายงานว่าการรวมกันของ lentinan และสารเคมีบำบัด tegafur ปรับปรุงประสิทธิภาพทางคลินิกของผู้ป่วยมะเร็งหลอดอาหารโดยการเสริมสร้างการทำงานของภูมิคุ้มกันของผู้ป่วย ในการศึกษาก่อนหน้านี้ของเรา ผลการยับยั้ง CTPG ในร่างกาย ต่อการเจริญเติบโตของเนื้องอกมีความสัมพันธ์กับไม่ เฉพาะฤทธิ์ต้านเนื้องอกโดยตรงเท่านั้น แต่ยังรวมถึงฟังก์ชันการเสริมสร้างภูมิคุ้มกันด้วย13,15 ฟังก์ชันการเสริมสร้างภูมิคุ้มกันของ CTPG อาจสัมพันธ์กับปริมาณโพลีแซ็กคาไรด์ ที่นี่ ผลของการต้านเนื้องอกในร่างกายของ CTPG บวกกับซิสพลาตินถูกตรวจสอบ ในแบบจำลองเมาส์เนื้องอก H22 CTPG บวก cisplatin ไม่เพียงแต่แสดงฤทธิ์ต้านเนื้องอกที่ดีที่สุดเท่านั้น แต่ยังลดผลข้างเคียงของซิสพลาตินด้วย CTPG plus cisplatin ช่วยเพิ่มภูมิคุ้มกันของหนูที่มีเนื้องอกโดยการเพิ่มจำนวนของ CD4 plus และ CD8 plus T เซลล์ และลดจำนวน MDSCs และ Tregs ซึ่งมีส่วนร่วมในสภาพแวดล้อมจุลภาคที่ยับยั้งการเกิดเนื้องอก ส่งเสริมการเติบโตของเนื้องอก และยับยั้งการตอบสนองของภูมิคุ้มกัน .46 จำนวนที่เพิ่มขึ้นของทีเซลล์อาจได้รับการแก้ไขด้วยการเพิ่มจำนวนของพวกมันที่ส่งเสริมโดย CTPG และการตายของเซลล์ที่ลดลงซึ่งป้องกันโดย CTPG อย่างไรก็ตาม กลไกของ CTPG ในการลดจำนวน MDSC และ Tregs จำเป็นต้องได้รับการตรวจสอบเพิ่มเติม

โดยสรุป CTPG กระตุ้นการตายของเซลล์ HCC ผ่านทั้งเส้นทางการส่งสัญญาณที่ขึ้นกับไมโตคอนเดรียและ MAPK ในหลอดทดลอง และยับยั้งการเติบโตของ HCC ผ่านผลต้านเนื้องอกโดยตรงและการเพิ่มภูมิคุ้มกันทางอ้อมร่วมกับซิสพลาติน CTPG อาจทำหน้าที่เป็นผู้ที่มีศักยภาพในการรักษา HCC

เม็ด cistanche

สำหรับข้อมูลเพิ่มเติมกรุณาคลิกที่ภาพ