ส่วนที่ 2: ฤทธิ์ต้านการอักเสบ สารต้านอนุมูลอิสระ ให้ความชุ่มชื้น และการสร้างแอนติเมลาโนเจเนซิสของเควอซิทิน 3-O-β-D-Glucuronide ในเซลล์เคราติโนไซต์และเซลล์เมลาโนมาของมนุษย์ผ่านการกระตุ้นเส้นทาง NF-κB และ AP-1
Mar 21, 2022
สําหรับรายละเอียดเพิ่มเติมกรุณาติดต่อtina.xiang@wecistanche.com
คลิกลิงก์เพื่อเรียนรู้ part1:https://www.xjcistanche.com/news/part-1-anti-inflammatory-antioxidant-moistu-55118257.html
3. การสนทนา
ในการศึกษาที่ตีพิมพ์ก่อนหน้านี้ Q-3-G ถูกใช้เพื่อยับยั้งอาการบวมน้ําที่หูการซึมผ่านของช่องท้องและอาการบวมน้ําที่ปอด [50] ซึ่งทําหน้าที่เป็นที่มีศักยภาพสารต้านอนุมูลอิสระในเลือดที่มีไลโปโปรตีนชนิดความหนาแน่นต่ํา [42] ลดการดัดแปลงออกซิเดชันที่เกิดจาก peroxynitrite [51] ออกแรงต้านการอักเสบผลโดยการยับยั้งเส้นทางการส่งสัญญาณ JNK และ ERK ภายใต้ความท้าทายของ LPS [52] และมีคุณสมบัติต้านมะเร็งต่อเซลล์มะเร็งเต้านม [56] อย่างไรก็ตาม, ซึ่งแตกต่างจากสารประกอบแม่ที่ศึกษาอย่างกว้างขวาง,เควอซิทินประโยชน์ทางเภสัชวิทยาและกลไกของ Q-3-G ยังคงต้องสํารวจ เพื่อความรู้ที่ดีที่สุดของเราบทบาทของ Q-3-G ต่อผลการป้องกันผิวยังไม่ได้รับการอธิบายอย่างเต็มที่ ในการศึกษานี้โดยใช้การประเมินในหลอดทดลองต่างๆเรามุ่งเน้นไปที่การกําหนดลักษณะผลการป้องกันผิวของ Q-3-G ต่อ UVBor H2O2 ความเครียดและการอักเสบที่เกิดจากปฏิกิริยาออกซิเดชั่นที่เกิดจากการให้ความชุ่มชื้นแก่ผิวใน HaCaT (สายเซลล์ keratinocyte ของมนุษย์) และการสร้างเวลาลาโนเจเนซิสกิจกรรมใน B16F10 (สายเซลล์ murine melanoma)
ความมีชีวิตของเซลล์ HaCaT, B16F10 และ HEK293T ถูกกําหนดหลังการรักษาด้วย Q-3-G ในช่วงความเข้มข้นที่ไม่เป็นพิษต่อเซลล์ ผลการวิจัยพบว่าไม่มีการยับยั้งความมีชีวิตของเซลล์อย่างมีนัยสําคัญในเซลล์ HaCaT, B16F10 และ HEK293T เหนือความเข้มข้นของ Q-3-Gup ถึง 20 μM (รูปที่ 2a, 3a และ 4f) ความมีชีวิตของเซลล์ในเซลล์ HaCaT, B16F10 และ HEK293T ที่ความเข้มข้นของ O-3-G ถึง 20 μM พบว่าต่ํากว่าความเข้มข้นของเควอซิทินเมื่อใช้เพื่อตรวจสอบผลกระทบที่เป็นพิษต่อเซลล์ในเซลล์ SCC-9 และ HSC-6 (50 μM)【57】หรือความมีชีวิตของสเปิร์ม (50-100μM)【58】 อย่างไรก็ตาม Q-3-G แสดงให้เห็นว่าเป็นพิษน้อยกว่ามากเมื่อเทียบกับ aglycone [59] การขาดกลุ่ม OH ฟรีที่ตําแหน่งสามตําแหน่งอาจนําไปสู่พิษน้อยลงของ Q-3-G [29]
รังสี UVB ที่มีความยาวคลื่น 280-315 นาโนเมตรแทรกซึมเข้าไปในชั้นบนของผิวหนังและมีประสิทธิภาพมากกว่า UVA และ UVC[60] รังสี UVB เป็นสาเหตุของมะเร็งผิวหนังและการตายของเซลล์ส่วนใหญ่ นอกจากนี้ ความเสียหายของเซลล์ในเซลล์ HaCaT ยังแสดงให้เห็นว่าเกิดจากการฉายรังสี UVB [61] ดังนั้นเราจึงตรวจสอบความมีชีวิตของเซลล์ HaCaT ของเซลล์ HaCaT หลังการฉายรังสี UVB เมื่อเทียบกับการรักษาด้วย Q-3-G ดังที่แสดงในรายงานก่อนหน้านี้หนึ่งในปัจจัยหลักที่นําไปสู่เซลล์เนื้อเยื่อและอวัยวะที่เสียหายคือการสัมผัส UVB [62,63] Q-3-G ฟื้นฟูความมีชีวิตของเซลล์ที่ลดลงที่เกิดจากการฉายรังสี UVB (รูปที่ 2b-d) ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่าคล้ายกับการศึกษาก่อนหน้านี้เกี่ยวกับผลกระทบและกลไกต่อความเป็นพิษต่อเซลล์ที่เกิดจาก UVB ใน HaCaT ของเควอซิทิน [64]
คลิกเธอเพื่อรับข้อมูลผลิตภัณฑ์เพิ่มเติม
การศึกษาหลายชิ้นอธิบายว่า UVB สามารถส่งเสริมการตอบสนองต่อการอักเสบอย่างรุนแรงซึ่งนําไปสู่ปัญหาในผิวหนัง [1,2,4,27] UVB กระตุ้นเอนไซม์โปรอักเสบที่สําคัญเช่น COX-2 และไซโตไคน์เช่น TNF-α.COX-2 เป็นเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องกับการอักเสบที่เกิดจากไซโตไคน์โปรอักเสบและผู้ไกล่เกลี่ย [65] ซึ่งช่วยกระตุ้นการตอบสนองการอักเสบ เนื่องจาก COX-2 ผลิต PGE-2 ผู้ไกล่เกลี่ยการอักเสบจึงทําให้เกิดการตอบสนองต่อการอักเสบ [66,67] และ TNF-α เป็นไซโตไคน์โปรอักเสบที่สําคัญ [68] ในการตอบสนองต่อการอักเสบ การตอบสนองต่อการอักเสบเหล่านี้ทําให้เกิดความเสียหายของผิวหนังซึ่งส่งผลให้ผิวแก่ก่อนวัย [69] ระดับการแสดงออกของ mRNA ของเอนไซม์อักเสบ COX-2 และไซโตไคน์โปรอักเสบ TNF-α ถูกยับยั้งโดย Q-3-G (รูปที่ 2e,) จากผลที่เผยแพร่ก่อนหน้านี้เควอซิทินยังลดการแสดงออกของยีนและการผลิต TNF-α[70] ในเรื่องคุณสมบัติของสารต้านอนุมูลอิสระการทดสอบการกําจัดขยะที่รุนแรง DPPH และ ABTS เป็นวิธีที่รวดเร็วเชื่อถือได้และทําซ้ําได้ในการประเมินในหลอดทดลองกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระของสารประกอบบริสุทธิ์และสารสกัดจากพืช [54] และมีการใช้กันอย่างแพร่หลายในวิธีการทั่วไปในการตรวจสอบกิจกรรมการกําจัดของสารประกอบธรรมชาติหรือสารสกัด [1,46,71,72] พบว่า Q-3-G ช่วยลดการเกิดปฏิกิริยาของอนุมูลอิสระทั้งในการทดสอบและโฟลว์ไซโตเมทรีในลักษณะที่ขึ้นอยู่กับความเข้มข้น ผลลัพธ์เหล่านี้สอดคล้องกับการศึกษาที่รายงานก่อนหน้านี้ ซึ่ง Q-3-G ยับยั้งการก่อตัวของ ROS ในเซลล์ pheochromocytoma PC-12 อย่างมีนัยสําคัญ [34] นอกเหนือจากการออกฤทธิ์ทางเคมีที่มีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระแล้วเรายังแสดงให้เห็นว่า Q-3-G เพิ่มระดับ Nrf2 ซึ่งเป็นหนึ่งในหน่วยงานกํากับดูแลที่สําคัญของความเครียดออกซิเดชันในเซลล์ สารประกอบหลายชนิดหรือสารสกัดจากธรรมชาติได้รับรายงานว่ามีคุณสมบัติต้านอนุมูลอิสระผ่านการส่งสัญญาณ ARE ที่ขึ้นกับ Nrf2 [46,73,74] เมื่อนํามารวมกันการค้นพบเหล่านี้บ่งชี้ว่า Q-3-G มีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ (รูปที่ 2g-j) เมลาโนโซมจากการสังเคราะห์เมลานินเกิดขึ้นในออร์แกเนลล์ภายในเซลล์ [75-77] การผลิตเมลานินมากเกินไปอาจส่งผลต่อลักษณะผิวและโรคผิวหนังที่เกี่ยวข้องกับรอยดํา เราพบว่าการรักษาด้วย O-3-G ในเซลล์ B16F10 ที่เกิดจาก cα-MSH ยับยั้งการหลั่งเมลานิน เช่นเดียวกับในงานก่อนหน้านี้เมลาโนเจเนซิสภายในเซลล์ยังถูกควบคุมโดยเมตาบอไลต์เควอซิทินและเควอซิทิน-3-โอ-β-ดี-กลูโคพรีโนไซด์ [24,78,79]
การรักษาสุขภาพผิวให้แข็งแรงนั้นต้องการความชุ่มชื้นแก่ผิวอย่างเพียงพอ และ NMFs และ HA มีบทบาทสําคัญในกระบวนการนี้ [12] FLG เป็นส่วนประกอบของเกราะป้องกันผิว ดังนั้นระดับการแสดงออกของ FLG ที่เพิ่มขึ้นอาจสัมพันธ์กับการให้ความชุ่มชื้น [80] ในการศึกษาของเราพบว่า Q-3-G มีผลต่อกิจกรรมการกักเก็บความชุ่มชื้นของผิวโดยการเพิ่ม FLG และ TGM-1 (รูปที่ 3c,d) ระดับการแสดงออกของ FLG และ TGM-1 ถูกบล็อกโดย JNK, IKKα และ IkBainhibitors (SP600125 และ Bay11-7082 ตามลําดับ) เรามุ่งเน้นไปที่เอนไซม์ที่เกี่ยวข้องกับ MAPK เนื่องจากการศึกษาของเรามีวัตถุประสงค์เพื่อกําหนดกลไกระดับโมเลกุลที่ Q-3-Gexerts มีผลในการป้องกันผิวหนัง JNK มีบทบาทสําคัญในการตายของเคราติโนไซต์ที่เกิดจากปฏิกิริยาออกซิเดชั่น-ความเครียด [81] ฟอสโฟรีเลชั่นของ c-Jun, TAK1, MKK4 และ INK เพิ่มขึ้นโดย Q-3-G นอกจากนี้ เรตินอลไม่ได้เพิ่มฟอสโฟรีเลชันของ c-Jun, TAK1, MKK4 หรือ JNK อย่างมีนัยสําคัญ ซึ่งบ่งชี้ว่ามีความแตกต่างบางประการในลักษณะการยับยั้งระหว่าง Q-3-G และเรตินอลในเส้นทางการส่งสัญญาณ AP-1 เช่นเดียวกับในผลลัพธ์ที่เผยแพร่ก่อนหน้านี้เส้นทาง JNK-c-Jun /AP-1 มีความสัมพันธ์กับผลการต่อต้าน apoptotic ของเควอซิทินเมื่อเทียบกับการศึกษาก่อนหน้านี้ [83] โดยการควบคุมเส้นทางการส่งสัญญาณ NF-kB และ AP-1 พบว่าเส้นทางเหล่านี้มีส่วนเกี่ยวข้องกับกลไกพื้นฐานของเควอซิทิน[83]. สอดคล้องกับกลไกของสารประกอบหลักผลลัพธ์ของเราแสดงให้เห็นว่าเส้นทาง NF-kB ยังรวมอยู่ในผลการป้องกันผิวของ Q-3-Gaby การกระตุ้น p50, p65, IKKα, IkBα, Akt และ Src หลังการรักษาด้วย Q-3-G ในเซลล์ HaCaT นอกจากนี้ Q-3-G ยังควบคุมกิจกรรม Luc และ NF-B-Luc ที่เป็นสื่อกลางของ AP-1 (รูปที่ 4) ผลการวิจัยเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าการส่งสัญญาณ AP-1 และ NF-kB ที่เป็นสื่อกลางของ MAPK มีส่วนทําให้คุณสมบัติการป้องกันผิวที่เป็นสื่อกลางของ Q-3-G เป็นสื่อกลาง
4. วัสดุและวิธีการ
4.1 วัสดุ
Q-3-Gwas ที่ได้รับจาก บริษัท ซิกม่าอัลดริช (เซนต์หลุยส์, มิสซูรี, สหรัฐอเมริกา) เซลล์ HaCaT, HEK293T และ B16F10 ถูกซื้อจากคอลเล็กชันวัฒนธรรมประเภทอเมริกัน (Rockville, MD, USA) เกลือไดแอมโมเนียม ABTS, DPPH, กรดแอสคอร์บิค (AA), ABTS และเรตินอลถูกซื้อจาก บริษัท ซิกม่าเคมิคอล (เซนต์หลุยส์, มิสซูรี, สหรัฐอเมริกา) เซรั่มวัวของทารกในครรภ์ (FBS), Modified Eagle Medium (DMEM) ของ Dulbecco และน้ําเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (PBS) ซื้อจาก Gibco (Grand Island, NY, USA).3-(4-5-Dimethylthiazol-2-yl)-25-diphenyltetra-sodium bromide (MTT) ซื้อจาก Amresco (บริสเบน ออสเตรเลีย) TRILzol และ PCR พรีมิกซ์ถูกซื้อจาก Bio-D Inc. (โซล, เกาหลี) ชุดการสังเคราะห์ cDNA ซื้อจาก Thermo Fisher Scientific (วอลแทม, แมสซาชูเซตส์, สหรัฐอเมริกา) ไพรเมอร์ไปข้างหน้าและย้อนกลับสําหรับ PCR (ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส) ถูกสังเคราะห์โดย Macrogen, Inc. (โซล, เกาหลี) แอนติบอดีทั้งหมดที่เกี่ยวข้องกับฟอสโฟรีเลตหรือโปรตีนเป้าหมายในรูปแบบทั้งหมดถูกซื้อจากเทคโนโลยีการส่งสัญญาณเซลล์ (เบเวอร์ลี, แมสซาชูเซตส์, สหรัฐอเมริกา)
4.2.การเพาะเลี้ยงเซลล์
เซลล์ HaCaT และ B16F10 ได้รับการเพาะเลี้ยงใน DMEM ด้วย FBS 10% และยาปฏิชีวนะ 1% (สเตรปโตมัยซินและเพนิซิลลิน) เซลล์ HEK293T ได้รับการเพาะเลี้ยงใน DMEM ด้วย FBS 5% และยาปฏิชีวนะ 1% สายเซลล์เหล่านี้ถูกบ่มเพาะใน CO 5% ที่ 37 ° C
4.3. การทดสอบความมีชีวิตของเซลล์
เซลล์ B16F10 ถูกเพาะที่เซลล์ 2×10° ต่อหลุมในแผ่น 96 หลุมเป็นเวลา 24 ชั่วโมง มีการเพิ่มความเข้มข้นที่แตกต่างกันของ Q-3-G (0-20 μM) เข้าไป จากนั้นพวกมันจะถูกบ่มเป็นเวลา 48 ชั่วโมง เซลล์ HaCaT ถูกชุบในแผ่น 96 หลุมและเซลล์ถูกเพาะที่ 6×10 ° เซลล์ / มล. หลังจากการบ่มข้ามคืนเซลล์จะถูกบ่มด้วยความเข้มข้นที่แตกต่างกันของ Q-3-G (0-20 μM) เป็นเวลา 24 ชั่วโมง เซลล์ HEK293T ถูกเพาะที่ 6×10 ° เซลล์ / มล. ในแผ่น 96 หลุมเป็นเวลา 24 ชั่วโมงจากนั้นได้รับการรักษาด้วย Q-3-G (0-20 μM) เซลล์บ่มเพาะได้รับการรักษาด้วยสารละลาย MTT ขนาด 10μL/well และหลังจาก 3 ชั่วโมงได้รับการรักษาด้วยสารละลายหยุด MTT 100 μL การใช้การทดสอบ MTT แบบเดิมเพื่อความมีชีวิตของเซลล์ที่วัดได้ [84] การดูดกลืนแสงที่ 570 นาโนเมตรถูกวัดโดยใช้เครื่องอ่าน (BioTek Instruments, Winooski, VT, USA)
4.4.mRNA การวิเคราะห์โดย RT-PCR กึ่งเชิงปริมาณและ PCR แบบเรียลไทม์เชิงปริมาณ
เซลล์ HaCaT ได้รับการรักษาด้วย Q-3-G (5-30 μM) หรือเรตินอล (10ug / mL) เป็นเวลา 12 h.RNA ถูกตกตะกอนโดยใช้ TRI รีเอเจนต์ตามที่รายงานก่อนหน้านี้ [85] ชุดการสังเคราะห์ cDNA ถูกใช้เพื่อสังเคราะห์ดีเอ็นเอเสริม RT-PCR ดําเนินการโดยใช้ไพรเมอร์แบบย้อนกลับและไปข้างหน้าที่เฉพาะเจาะจง ไพรเมอร์สําหรับ RT-PCR และ PCR แบบเรียลไทม์แสดงอยู่ในตารางที่ 1
4.5. การทดสอบ DPPH
การทดสอบ DPPH ถูกใช้เพื่อประเมินความสามารถในการกําจัดอย่างรุนแรงของ Q-3-G เมทานอลถูกใช้เพื่อละลาย DPPH ให้มีความเข้มข้นสุดท้าย 250 μM จากนั้น 475 มล. ของ DPPHwas
ทําปฏิกิริยากับ Q-3-G (0-40 μM) หรือ AA (500 mM) ที่ 500 มล. ที่ 37 ° C เป็นเวลา 30 นาที การควบคุมเชิงบวกคือ AA การกําหนดเอฟเฟกต์การกําจัด DPPH และการคํานวณได้ดําเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [86]
4.6.การทดสอบ ABTS
การทดสอบ ABTS ดําเนินการตามที่รายงานก่อนหน้านี้ [72] สั้น ๆ ปริมาณที่เท่ากันของสารละลาย ABTS 7.4 mM และสารละลายโพแทสเซียมเปอร์ซัลเฟต 2.4 mM ถูกผสมและเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องข้ามคืนเพื่อสร้างไอออนบวกที่รุนแรง ABTS โซลูชัน ABTS ถูกเพิ่มเข้าไปในแผ่นเพลต 96 หลุมแต่ละหลุมด้วยการเพิ่ม Q-3-G (0-40 μM) หรือ AA (500 mM) ต่อหลุม ส่วนผสมถูกบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 30 นาทีจากนั้นวัดการดูดซับที่ 730 นาโนเมตร
4.7. การทดสอบ ROS ของเซลล์โดย Flow Cytometry
เพื่อตรวจสอบการก่อตัวของ ROS ภายในเซลล์มีการใช้สีย้อมที่ไวต่อการเกิดออกซิเดชัน 2 ', 7'-ไดคลอโรไดไฮโดรฟลูออเรสเซนไดอะซิเตท (DCFDA) เซลล์ HaCaT สัมผัสกับรังสียูวีจากนั้นเซลล์จะถูกเก็บเกี่ยวและ resuspended ด้วย 300 ul PBS กับ 20 μM DCFDA เป็นเวลา 30 นาทีที่ 37 °Cในที่มืด เซลล์ถูกล้างด้วย PBS และการเรืองแสงถูกวัดที่ 485/535 นาโนเมตรโดย Beckman CytoFLEX Flow Cytometer (Beckman Coulter, Brea, CA, USA)
4.8.การวิเคราะห์ Blot ตะวันตก
เซลล์ HaCaT ถูกเพาะที่ความหนาแน่น 6× 10° เซลล์/มล. หลังจากฟักตัวข้ามคืนความเข้มข้นที่แตกต่างกันของ Q-3-G (0-10 μM) หรือเรตินอล (10 μg / mL) จะถูกเพิ่มและบ่มต่อไปเป็นเวลา 24 ชั่วโมง การเตรียมโปรตีนและไลเสตทั้งเซลล์ดําเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [87] แอนติบอดีจําเพาะถูกใช้เพื่อตรวจจับรูปแบบทั้งหมดและรูปแบบฟอสโฟรีเลตของ Jun, JNK, MKK4, TAK1, p50, p65, IKKα, IkBα, Src และ Akt ซึ่งมองเห็นได้ด้วยรีเอเจนต์ chemiluminescence [88]
4.9. การวิเคราะห์เนื้อหาและการหลั่งของเมลานิน
เซลล์ B16F10 ถูกเพาะที่ความหนาแน่น 2×10° เซลล์/มล. เป็นแผ่น 12 หลุมและบ่มข้ามคืน สื่อวัฒนธรรมถูกเปลี่ยนสําหรับสื่อสดเสริมด้วย Q-3-G (10-20 μM) หรืออาร์บูติน (1 mM) การผลิตเมลานินถูกกระตุ้นด้วย a-MSH (100 nM) เป็นเวลา 48 ชั่วโมง สําหรับการทดสอบการหลั่งเมลานินความหนาแน่นของแสงที่ 475 นาโนเมตรถูกวัด หลังจากนั้นเซลล์จะถูกเก็บเกี่ยวเพื่อกําหนดคอนทีนเมลานินภายในเซลล์โดยใช้บัฟเฟอร์ไลซิสเพื่อสลายเซลล์และอัดเม็ดโดยการปั่นแยก (12,000 รอบต่อนาที 5 นาที) เม็ดเซลล์เข้มข้นละลายในบัฟเฟอร์ละลาย 100 มล. (1 M NaOH, 10% DMSO) และละลายที่ 55 °C การดูดกลืนแสงวัดที่ 405 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านความหนาแน่นทางแสง [89]
4.10.การฉายรังสี UVB
เซลล์ HaCaT ถูกเพาะที่ความหนาแน่น 1×105 เซลล์/มล. ลงในแผ่น 6 หลุมโดยใช้ MEM ที่ปราศจากซีรั่มและอยู่ภายใต้ความอดอยาก 24 ชั่วโมง เซลล์ HaCaT ได้รับการรักษาล่วงหน้าด้วย G-3-Q เป็นเวลา 30 นาทีจากนั้นการฉายรังสี UVB จากนั้นเซลล์ HaCaT จะถูกล้างด้วย PBS และสัมผัสกับการฉายรังสี UVB (UVBLamp BLX-312, Vilber Lourmat, ฝรั่งเศส) พลังงานของการฉายรังสี UVB คือ 30 mJ / cm2²【 90 】
4.11.H2O2 การรักษา
เซลล์ HaCaT ถูกเพาะเป็นแผ่น 6 หลุมและอยู่ภายใต้ MEM ที่ปราศจากเซรั่มที่ปราศจากเซรั่ม 24 ชั่วโมง เซลล์ถูกปรับสภาพด้วยความเข้มข้นที่แตกต่างกันของ Q-3-G (5-10 μM และหลังจาก 30 นาทีถูกบ่มด้วย H2O2 (500 μM) เป็นเวลา 12 ชั่วโมง
4.12. การทดสอบยีนของนักข่าวลูซิเฟอเรส
เซลล์ HEK293T ถูกเพาะที่ความหนาแน่น 3×10 °เซลล์ / มล. เป็นแผ่น 24 หลุม เซลล์ HEK293T ถูกถ่ายโอนด้วยพลาสมิด 2 ไมโครกรัมที่มี AP-1-Luc หรือ NF-kB-Luc และ b-galactosidase โดยใช้โพลีเอทิลีน[91] หลังจากการบ่ม 24 ชั่วโมง เซลล์จะได้รับการรักษาด้วย Q-3-G(5-10 μM) หรือเรตินอล (10 ไมโครกรัม/มล.) ต่อไปอีก 24 ชั่วโมง การทดสอบลูซิเฟอเรสดําเนินการโดยเครื่องวัดความสว่างที่การดูดซับของตัวอย่างแต่ละตัวอย่างวัดที่ 475 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลท Spectramax 250 (อุปกรณ์โมเลกุล, ซานโฮเซ, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา) ตามที่รายงานก่อนหน้านี้ [92]
4.13. การถ่ายภาพสัณฐานวิทยาของเซลล์
เซลล์ HaCaT ถูกเพาะเป็นแผ่น 6 หลุมที่ความหนาแน่นของเซลล์ 1× 10° เซลล์/มล. เซลล์ HaCaT ได้รับการรักษาด้วย G-3-Q เป็นเวลา 30 นาทีจากนั้นการฉายรังสี UVB หลังจากถ่ายภาพวัตถุประสงค์กล้องจุลทรรศน์ 24 ชั่วโมง 4×, 10× และ 20× กล้องจุลทรรศน์ (โอลิมปัส โตเกียว ญี่ปุ่น)
4.14 การวิเคราะห์ทางสถิติ
ข้อมูลทั้งหมดจะถูกนําเสนอเป็นค่าเฉลี่ย±ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของการทดลองอิสระอย่างน้อยสามรายการ การทดสอบ Mann-Whitney และการทดสอบ t-test ของนักเรียนใช้เพื่อเปรียบเทียบความแตกต่างทางสถิติระหว่างกลุ่ม ค่า p<0.05 was="" regarded="" as="" statistically="" significant.="" all="" statistical="" tests="" were="" carried="" out="" using="" spss(ver.25,="" spss="" inc.,="" chicago,="" il,="">
5. ข้อสรุป
การวิจัยของเราแสดงให้เห็นว่ากิจกรรมต้านการอักเสบและสารต้านอนุมูลอิสระ Q-3-Gexhibited ป้องกันปัจจัยของความเครียดออกซิเดชันและการอักเสบภายใต้การฉายรังสี UVB และ HO การสัมผัส นอกจากนี้เรายังแสดงให้เห็นว่า Q-3-G มีความสามารถในการกระตุ้นมอยเจอร์ไรเซอร์ในเซลล์ HaCaT นอกเหนือจากผลการสร้างแอนไทม์ลาโนเจเนซิสของ Q-3-G แล้ว ยังแสดงให้เห็นว่าสามารถยับยั้งการหลั่งเมลานินใน B16F10 ที่เกิดจาก α-MSH ได้อีกด้วย ในที่สุดผลกระทบของ Q-3-G ก็ถูกไกล่เกลี่ยผ่านการเปิดใช้งานเส้นทางการส่งสัญญาณ AP-1 และ NF-kB กิจกรรมป้องกันผิวหนังของ Q-3-G ในเซลล์เคราติโนไซต์ของมนุษย์ HaCaT และเซลล์เมลาโนมา Murine B16F10 สรุปไว้ในรูปที่ 5 การศึกษานี้กําหนดว่า Q-3-G อาจมีประสิทธิภาพเนื่องจากคุณสมบัติต้านการอักเสบสารต้านอนุมูลอิสระความชุ่มชื้นและการสร้างแอนไทม์ลาโนเจเนซิสในเซลล์เคราติโนไซต์และเซลล์เมลาโนมาของมนุษย์ผ่านการกระตุ้นเส้นทาง NF-kB และ AP-1 โดยสรุปผลลัพธ์บ่งชี้อย่างชัดเจนว่าสารคอนจูเกตนี้มีศักยภาพในการปกป้องเซลล์ผิว จําเป็นต้องมีการตรวจสอบเพิ่มเติมเพื่อตรวจสอบผลของ Q-3-G ในรุ่นต่างๆ ในร่างกาย โดยเฉพาะอย่างยิ่งในส่วนที่เกี่ยวข้องกับรุ่นป้องกันผิวหนัง
อ้าง อิง
1. คิม, อี.; ฮวัง, เค.; ลี, เจ.; ฮั่น, S.Y.; คิม, E.-M.; ปาร์ค, เจ.; Cho, JY. ผลการป้องกันผิวของ epigallocatechin gallate Int. J. Mol. วิทย์. 2018, 19, 173. [ครอสรีฟ]
2. เดรลอส, Z.D. การรักษาใหม่สําหรับการฟื้นฟูการซึมผ่านของเกราะป้องกันผิวหนังที่บกพร่อง: ครีมซ่อมแซมเกราะป้องกันผิวหนัง คลิน. ผิวหนัง. 2012, 30, 345–348. [ครอสรีฟ] [ผับเมด]
3. สโลมินสกี้, A.T.; Zmijewski, M.A.; Zbytek, B.; โทบิน, ดีเจ; ธีโอฮาไรด์, ที.ซี.; Rivier, J. บทบาทสําคัญของ CRF ในระบบตอบสนองต่อความเครียดของผิวหนัง เอนโดคร์. Rev. 2013, 34, 827–884. [ครอสรีฟ] [ผับเมด]
4. โดราซิโอ, เจ.; จาร์เร็ตต์, เอส.; อมาโร-ออร์ติซ, A.; Scott, T. รังสียูวีและผิวหนัง Int. J. Mol. วิทย์. 2013, 14, 12222–12248. [ครอสรีฟ]
5. ริตตี้, แอล.; ฟิชเชอร์, G.J. UV-สัญญาณที่เกิดจากแสงยูวีไหลลงมาและริ้วรอยของผิวหนัง Ageing Res. Rev. 2002, 1, 705–720. [ครอสรีฟ]
6. วิเดรา, I.F.; มูร่า, ดี.เอฟ.; Magina, S. กลไกที่ควบคุมการเกิดเมลาโนเจเนซิส พล.อ.ประยุทธ์ จันทร์โอชา ผิวหนัง. 2013, 88, 76–83. [ครอสรีฟ] [ผับเมด]
7. เช, ดี.เอ็น.; Xie, G.H.; โช, พ.ศ. 2558; ชิน, เจ.วาย.; คัง, เอช.เจ.; Jang, S.I. ผลการป้องกันของสารสกัดจากลําต้นองุ่นต่อความเสียหายที่เกิดจาก UVB ในผิวหนังของหนู C57BL เจ โฟโตเคม. โฟโตไบโอล. บี 2017, 173, 551–559. [ครอสรีฟ]
8. จอง, ดี.; ลี, เจ.; จอง, เอส.จี.; ฮง, Y.H.; ยู, เอส.; ฮั่น, S.Y.; คิม, เจ.เอช.; คิม, เอส.; คิม, เจ.เอส.; ชุง, วาย.เอส.; et al. สารสกัดจากเอทานอล Artemisia Asiatica จัดแสดงกิจกรรมต่อต้านการถ่ายภาพ เจ. 2018, 220, 57–66. [ครอสรีฟ]
9. แมคดาเนียล, ดี.; ฟาร์ริส, พี.; Valacchi, G. ผู้ส่งเสริมริ้วรอยผิวในบรรยากาศและสารยับยั้ง เจ. คอสเมท. ผิวหนัง. 2018, 17, 124–137. [ครอสรีฟ]
10. Rao, C.V.; เพื่อน, S.; โมฮัมเหม็ด, A.; ฟารูกี, M.; ดอเชอร์, M.P.; Asch, A.S.; ยามาดะ, H.Y. ผลกระทบทางชีวภาพและผลกระทบทางระบาดวิทยาของการสัมผัสสารหนู, และรีเอเจนต์ที่สามารถ ameliorate ความเสียหายสารหนูในร่างกาย. Oncotarget 2017, 8, 57605–57621.
11. สิงหา, K.; ดาส, เจ.; เพื่อน, พี.บี.; ความเครียดจากการเกิดออกซิเดชันของ Sil, P.C.: เส้นทางที่ขึ้นกับไมโตคอนเดรียและไมโตคอนเดรียที่เป็นอิสระจากการตายของเซลล์ อาร์ค. 2013, 87, 1157–1180. [ครอสรีฟ]
