ส่วนที่ 2:Acteoside ยับยั้ง Osteoclastogenesis ที่เป็นสื่อกลาง RANKL โดยการยับยั้งการเหนี่ยวนำ C-Fos และเส้นทาง NF- KB และลดการผลิต ROS

ติดต่อ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 อีเมล:audrey.hu@wecistanche.com

Seung-Youp Lee1,2., Keun-Soo Lee3.¤, Sea Hyun Yi2., Sung-Ho Kook, Jeong-Chae Lee22,3*

กรุณาคลิกที่นี่กลับไปที่ส่วนที่ 1

แอคทีโอไซด์ยังยับยั้งการสลายของกระดูกโดย Macrophages Acteoside ยังป้องกันการสลายของกระดูกที่อาศัย RANKL ในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา ตามที่วัดโดยระบบแบบจำลองในหลอดทดลอง (รูปที่ 3A) การสลายของกระดูกถูกยับยั้งอย่างมีนัยสำคัญเมื่อ BMM ถูกบ่มด้วยแอกทิโอไซด์ 1 มิลลิโมลาร์ (รูปที่ 3B) การบำบัดด้วยแอกทีโอไซด์ 10 มิลลิโมลาร์ทำให้การก่อตัวของหลุมที่เกิดจาก RANKL เกือบหมดฤทธิ์โดย BMM ในทำนองเดียวกัน แอกทิโอไซด์ลดการสลายของกระดูกในเซลล์ RAW264.7 ที่กระตุ้นด้วย RANKL (รูปที่ S2A และ B) ความสามารถของแอคทีโอไซด์ในการยับยั้งการสลายของกระดูกขึ้นอยู่กับระยะเวลาของการรักษาที่สัมพันธ์กับการกระตุ้น RANKL Acteoside (10 mM) เพิ่มขึ้น 4 วันหลังจากการกระตุ้น RANKL ไม่ได้ลดการก่อตัวของหลุมใน BMM ในขณะที่ยับยั้งจำนวน osteoclasts ที่เกิดขึ้น (รูปที่ 3C) ผลลัพธ์ที่แตกต่างกันนี้เป็นส่วนหนึ่งเนื่องจากพื้นที่หลุมได้ก่อตัวขึ้นแล้วหลังจาก 4 วันของการสร้างการกระตุ้น RANKL (รูปที่ 3D)

สารสกัดจาก CISTANCHE

แอคทีโอไซด์Down-Regulates เส้นทางการส่งสัญญาณ RANKL ในช่วงต้น

RANKL กระตุ้นการเปิดใช้งาน MAPK และ NF-kB ที่รู้จักกันดี 3 รายการในสารตั้งต้นของ osteoclast และการเปิดใช้งานนี้จำเป็นสำหรับการสร้างความแตกต่างของ osteoclast ในระยะแรก เพื่อทำความเข้าใจกลไกที่เป็นไปได้โดยที่แอคทีโอไซด์ยับยั้ง osteoclastogenesis เราตรวจสอบผลกระทบของแอคทีโอไซด์ในการเปิดใช้งาน MAPK และ NF-kB ในมาโครฟาจ BMM และเซลล์ RAW264.7 ถูกปรับสภาพด้วยแอกทีโอไซด์ 10 มิลลิโมลาร์เป็นเวลา 2 ชั่วโมงและจากนั้นถูกกระตุ้นด้วย 100 นาโนกรัม/มิลลิลิตร RANKL เป็นเวลา 30 นาที MAPK phosphorylation ถูกตรวจสอบโดย Western blotting และการวิเคราะห์อิมมูโนเมตริก RANKL เหนี่ยวนำให้เกิดฟอสโฟรีเลชั่นของ p38, ERK และ JNK ในเซลล์ BMM (รูปที่ 4A) และ RAW264.7 (รูปที่ 4B) Acteoside ป้องกันการเพิ่มขึ้นที่เกิดจาก RANKL ใน p-p38, p-ERK และ p-JNK ผลลัพธ์นี้ได้รับการสนับสนุนโดยการวิเคราะห์ทางอิมมูโนเมตริก ซึ่งการปรับสภาพด้วยแอคทีโอไซด์ 10 มิลลิโมลาร์นั้นยับยั้งระดับของ MAPK ที่มีฟอสโฟรีเลตอย่างมีนัยสำคัญในมาโครฟาจเหล่านี้ (รูปที่ 4C) การบำบัดด้วย RANKL เพิ่มการจับดีเอ็นเอของ NF-kB ในขณะที่แอกทิโอไซด์ยับยั้งการกระตุ้นที่เหนี่ยวนำโดย RANKL ของการจับ NF-kB-DNA (รูปที่ 5A) การยับยั้งนี้มีความโดดเด่นใน BMM มากกว่าในเซลล์ RAW264.7 นอกจากนี้ Acteoside ยังลด p65 และ IkBa ที่กระตุ้นด้วย RANKL ใน BMM และเซลล์ RAW264.7 (รูปที่ 5B และ C) การเพิ่มแอกทีโอไซด์ 10 มิลลิโมลาร์เข้าไปยับยั้งทั้งการเสื่อมสภาพและการกระตุ้นของ IkBa ใน BMM เกือบทั้งหมด (รูปที่ 5B) เพื่อยืนยันเพิ่มเติมว่าการเปิดใช้งาน NF- kB เกี่ยวข้องกับการกระทำของแอกทิโอไซด์ โครงสร้างโปรโมเตอร์-ลูซิเฟอเรส kB ถูกทรานส์เฟกชั่วคราวไปยังเซลล์ RAW264.7 เซลล์ที่ถูกบ่มด้วย RANKL 100 ng/ml มีกิจกรรมโปรโมเตอร์ kB ที่สูงกว่า 3- เท่า ซึ่งถูกทำให้อ่อนฤทธิ์อย่างมีนัยสำคัญโดย 10 mM แอกทิโอไซด์ (รูปที่ 5D)

แอคทีโอไซด์ยับยั้งการผลิตไซโตไคน์ที่ทำให้เกิดการอักเสบและการแสดงออกของ TNF-a, c-Fos และ NFATc1 ในมาโครฟาจที่กระตุ้นด้วย RANKL TNF-a, IL-1b และ IL-6 มีความสำคัญในการก่อตัวของเซลล์สร้างกระดูกและ ฟังก์ชัน ซึ่งเป็นสื่อกลางโดยการส่งสัญญาณ NF-kB ในมาโครฟาจที่กระตุ้นด้วย RANKL RANKL กระตุ้นการผลิตไซโตไคน์เหล่านี้ และการผลิตนี้ลดลงอย่างเห็นได้ชัดโดยการปรับสภาพแอคทีโอไซด์ 10 มิลลิโมลาร์ใน BMM (รูปที่ 6A) ในทำนองเดียวกัน แอกทีโอไซด์ลดการผลิตไซโตไคน์ที่เหนี่ยวนำโดย RANKL ยกเว้น IL-6 ในมาโครฟาจ RAW264.7 (รูปที่ S3) เพื่อให้เข้าใจกลไกระดับโมเลกุลของการกระทำของแอกทิโอไซด์ใน osteoclastogenesis เราจึงตรวจสอบผลกระทบของแอกทีโอไซด์ต่อการแสดงออกของ TNF-a, c-Fos และ NFATc1 เพิ่มเติม RANKL ควบคุมการแสดงออกของ mRNA ของปัจจัยเหล่านี้ใน BMM และเซลล์ RAW264.7 (รูปที่ 6B และ C) การปรับสภาพด้วยแอกทีโอไซด์ 10 มิลลิโมลาร์ช่วยยับยั้งการแสดงออกของปัจจัยเหล่านี้ที่เกิดจาก RANKL อย่างมีนัยสำคัญในทั้งสอง

BMM และเซลล์ RAW264.7 การปรับสภาพด้วย Acteoside ยังลดระดับโปรตีนของ c-Fos และ NFATc1 ใน BMM ที่กระตุ้นด้วย RANKL ลงอย่างมาก (รูปที่ 6D) ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าแอกทีโอไซด์ดาวน์ควบคุม RANKL ที่กระตุ้นผู้ไกล่เกลี่ยของการสร้าง osteoclast ที่ระดับยีนและโปรตีน

สารสกัดจาก CISTANCHE: ACTEOSIDE

Acteoside ลดการสร้าง ROS ภายในเซลล์ใน BMM ในลักษณะที่ขึ้นกับปริมาณรังสี

เนื่องจากเป็นที่ทราบกันดีว่าการผลิต ROS ภายในเซลล์มีความสัมพันธ์กับการสร้างกระดูกพรุนที่กระตุ้นด้วย RANKL เราจึงตรวจสอบว่าแอกเตโอไซด์ยับยั้งการผลิต ROS ในระหว่างการสร้างความแตกต่างของออสติโอพลาสต์ที่อาศัย RANKL โดยใช้สีย้อมที่ไวต่อการเกิดออกซิเดชันและซึมผ่านเซลล์ DCFH-DA การวิเคราะห์โฟลว์ไซโตเมทรีแสดงให้เห็นว่าสัญญาณการเรืองแสงเฉลี่ยที่จำเพาะต่อ DCF ใน BMM เห็นได้ชัดว่ามีการเลื่อนไปทางขวาหลังจากการกระตุ้นด้วย RANKL เปรียบเทียบกับเซลล์ควบคุมที่ไม่ได้รับการรักษา (รูปที่ 7A) การเปลี่ยนแปลงนี้คล้ายกับกรณีที่สังเกตมาโครฟาจ RAW264.7 หลังจากการกระตุ้น RANKL (ไม่แสดงข้อมูล) การบำบัด BMM ด้วยแอกทีโอไซด์จะลดความเข้มของสัญญาณของ DCF ในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา การปรับสภาพด้วยแอกทีโอไซด์ 10 มิลลิโมลาร์นั้นเกือบจะลดระดับของ ROS ภายในเซลล์ที่เกิดขึ้นระหว่างการสร้างความแตกต่างของ osteoclast จนถึงระดับการควบคุมที่ไม่ผ่านการบำบัด (รูปที่ 7B)

การบริหารช่องปากด้วย Acteoside ยับยั้งการเปลี่ยนแปลงของตัวบ่งชี้ทางชีวเคมีเกี่ยวกับโรคกระดูกพรุนและการสูญเสียกระดูกในหนูที่ตัดรังไข่

เพื่อสำรวจผลของแอกทีโอไซด์ต่อการสูญเสียมวลกระดูก เราได้เตรียมแบบจำลองสัตว์ที่เป็นโรคกระดูกพรุนโดยการตัดรังไข่ ไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญในน้ำหนักตัวระหว่างหนูทดลอง OVX และหนูทดลอง (ไม่แสดงข้อมูล) กลุ่ม OVX มีระดับซีรัมของ IL-1b และ IL-6 ในซีรัมสูงกว่ากลุ่ม Sham (รูปที่ 8) อย่างมีนัยสำคัญ การเพิ่มขึ้นของไซโตไคน์ที่เกิดจากการอักเสบที่เกิดจากรังไข่ถูกทำให้อ่อนฤทธิ์โดยการบริหารช่องปากทางปาก (กลุ่ม AC) ระดับซีรัมของตัวบ่งชี้การหมุนเวียนของกระดูก เช่น ALP, แคลเซียม, TRAP5b และ OC เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในกลุ่ม OVX จากตัวบ่งชี้โรคกระดูกพรุนเหล่านี้ ระดับแคลเซียม, TRAP5b และ OC ที่เพิ่มขึ้นในหนู OVX ถูกยับยั้งอย่างเห็นได้ชัดโดยการรักษาด้วยแอกทีโอไซด์ ในขณะที่ระดับซีรั่มของ ALP ไม่ได้เปลี่ยนแปลงโดยการรักษา ภาระการแตกหักสูงสุดโดยเฉลี่ยจนถึงตรงกลางของกระดูกต้นขาด้านขวาในกลุ่ม OVX ต่ำกว่าในกลุ่ม Sham (รูปที่ 9A) อย่างมีนัยสำคัญ การรักษาด้วย Acteoside ช่วยเพิ่มการแตกหักสูงสุดกลับเป็นของกลุ่ม Sham เมื่อกระดูกคอร์เทกซ์ของกระดูกโคนขาถูกผ่าและสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์แก้วนำแสง ลักษณะของโรคกระดูกพรุนที่แสดงในกลุ่ม OVX ได้หายไปเกือบหมดในหนู AC (รูปที่ 9B) เพื่อตรวจสอบผลของแอกทิโอไซด์ต่อแบบจำลองโรคกระดูกพรุนที่เกิดจาก OVX, BMD และพารามิเตอร์ทางสัณฐานวิทยาของกระดูกในกระดูกทราเบคิวลาร์ของกระดูกโคนขาอ่อนถูกวิเคราะห์โดย micro-CT ดังแสดงในรูปที่ 9C พบการเปลี่ยนแปลงของโครงสร้างกระดูกต้นขาในหนู OVX ในขณะที่การเปลี่ยนแปลงนี้ลดลงโดยการรักษาด้วยแอกทิโอไซด์ ผลจากการวิเคราะห์ micro-CT เปิดเผยว่า BMD ซึ่งเป็นหน่วยวัดความแข็งแรงของกระดูกลดลงอย่างมากในหนูเมาส์ OVX (รูปที่ 9D) เมื่อเทียบกับกลุ่ม Sham หนู OVX ยังแสดงให้เห็นการเปลี่ยนแปลงที่สำคัญใน BV/TV, Tb Sp, และ Tb. N แต่ไม่ใช่ใน Tb.Th การรักษาด้วยแอคทีโอไซด์ในช่องปากของหนูเมาส์ OVX ช่วยป้องกันการเปลี่ยนแปลงใน BMD รวมทั้ง BV/TV และ Tb.N.

Acteoside ไม่มีผลต่อ Osteoblastogenesis ในเซลล์ไขกระดูก

บทบาทของแอกทีโอไซด์ต่อการสร้างความแตกต่างของกระดูกถูกตรวจสอบเพิ่มเติมโดยใช้เซลล์ไขกระดูก ดังที่แสดงในรูปที่ 10A การบำบัดด้วย DAG เพิ่มจำนวนของเซลล์ที่ย้อมด้วยสีแดงของ alizarin และสิ่งนี้ไม่ได้เปลี่ยนแปลงโดยการปรับสภาพด้วยแอกทีโอไซด์ 10 มิลลิโมลาร์ ปริมาณของสีย้อมที่มีอยู่บ่งชี้ว่าแอกทิโอไซด์ที่รวมกันและการบำบัดด้วย DAG ไม่เปลี่ยนการทำให้เป็นแร่ (รูปที่ 10B) ในทำนองเดียวกัน การเพิ่มขึ้นของปริมาณแคลเซียมภายในเซลล์ที่เกิดจาก DAG (รูปที่ 10C) และระดับ mRNA (รูปที่ 10D) ของตัวบ่งชี้เฉพาะกระดูก เช่น Runx2, osterix, BSP และ OC ไม่ได้รับผลกระทบจากการปรับสภาพด้วยแอคทีโอไซด์

ผลของ cistanche acteoside

การอภิปราย

การเปลี่ยนแปลงของกระดูกถูกควบคุมอย่างเข้มงวดโดยความสมดุลระหว่างการสร้างกระดูกโดยเซลล์สร้างกระดูกและการสลายของกระดูกโดยเซลล์สร้างกระดูก การสลายของกระดูกเป็นเวลานานและมากเกินไปทำให้เกิดความไม่สมดุลของการหมุนเวียนของโครงกระดูก ส่งผลให้เกิดโรคที่เกิดจากการดูดซึมของกระดูก ในการสำรวจผลกระทบของแอกทีโอไซด์ต่อการสร้างกระดูก เราใช้มาโครฟาจสองชนิด คือ BMM ที่เพาะเลี้ยงขั้นต้น และเซลล์ RAW264.7

เซลล์เหล่านี้ถูกกระตุ้นด้วย RANKL เพื่อแยกความแตกต่างออกเป็นเซลล์สร้างกระดูกทั้งที่มีและไม่มีแอกทีโอไซด์ เราแสดงให้เห็นเป็นครั้งแรกว่าแอคทีโอไซด์ยับยั้งการสร้างความแตกต่างและการก่อตัวของเซลล์กระดูก Acteoside เองที่ความเข้มข้นที่ตรวจสอบไม่ได้ทำให้การมีชีวิตของมาโครฟาจขั้นต้นที่เพาะเลี้ยงลดลงทั้งในสภาวะการเจริญเติบโตและความแตกต่าง

การรักษาด้วย Acteoside ยังลดกิจกรรมการสลายของเซลล์สร้างกระดูกที่โตเต็มที่ ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าแอกทิโอไซด์ยับยั้งการสร้างกระดูกจากแมคโครฟาจและกิจกรรมการสลายของออสติโอพลาสต์ ผลลัพธ์จากระบบการเพาะเลี้ยงของเรา ซึ่งไม่รวมเซลล์สร้างกระดูกหรือเซลล์สโตรมอล ยังแนะนำว่าแอกทีโอไซด์ป้องกันการก่อตัวของเซลล์สร้างกระดูกโดยออกฤทธิ์โดยตรงกับสารตั้งต้นของกระดูก

RANKL เปิดใช้งาน MAPK รวมถึง p38, ERK และ JNK ไคเนสทั้งสามนี้เกี่ยวข้องกับการสร้างความแตกต่างของ osteoclastic ในระยะเริ่มต้น และด้วยเหตุนี้การยับยั้งของพวกมันทางเภสัชวิทยาหรือด้วยการถ่าย JNK ที่โดดเด่นและเชิงลบจะยับยั้งการสร้าง osteoclastogenesis ที่เกิดจาก RANKL [29] ผลลัพธ์ของเราเปิดเผยว่าการปรับสภาพด้วยแอกทีโอไซด์ยับยั้งไคเนสเหล่านี้ทั้งหมด ซึ่งบ่งชี้ถึงการปรับลด MAPK ที่ไม่จำเพาะเจาะจง ผลลัพธ์นี้แตกต่างไปจากรายงานก่อนหน้านี้ว่า EGCG ซึ่งเป็นสารต้านการอักเสบที่สำคัญในกรีนที ลดการเปิดใช้ JNK โดยเฉพาะโดยไม่ส่งผลต่อการเปิดใช้งาน ERK หรือ p38 ใน BMM ที่กระตุ้นด้วย RANKL [7] มีรายงานว่า Paeonol ซึ่งเป็นสารต้านการอักเสบที่ได้มาจากสมุนไพรจีนสามารถยับยั้ง ERK และ p38 ได้ แต่ไม่ใช่ JNK ซึ่งเป็นฟอสโฟรีเลชันในเซลล์ RAW264.7 ที่กระตุ้นด้วย RANKL [30] ในทางตรงกันข้าม silibinin ซึ่งเป็นสารยับยั้งใหม่ในกระดูก ลดการกระตุ้น p38, ERK และ JNK ที่เกิดจาก RANKL [31] การค้นพบนี้ชี้ให้เห็นว่าผลของสารต้านการดูดซับต่อการกระตุ้น MAPK โดย RANKL นั้นขึ้นอยู่กับสารประกอบนั้น แม้ว่า MAPK ทั้งสามส่วนจะเกี่ยวข้องกับการสร้างกระดูกช่วงต้นก็ตาม

พิจารณาจากการสังเกตที่แอกทีโอไซด์ลดทอน p-JNK

ระดับใน BMM ที่กระตุ้นด้วย RANKL แม้ที่ 1 มิลลิโมลาร์ การอุดตันของ JNK แทนที่จะเป็น p38 MAPK หรือ ERK ดูเหมือนจะเป็นเหตุการณ์ที่จำเพาะมากกว่าในการต่อต้านการสร้างกระดูกพรุนที่อาศัยแอกทิโอไซด์ในเซลล์ แม้ว่าแอกทิโอไซด์ที่ความเข้มข้นเท่ากันจะไม่ลดจำนวนเซลล์สร้างกระดูกใน BMM แต่การทรีทเมนต์ของแอกทิโอไซด์ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ นอกจากนี้เรายังพบว่าการปรับสภาพด้วย SP600125 ซึ่งเป็นตัวยับยั้งทางเภสัชวิทยาที่จำเพาะต่อ JNK ช่วยป้องกันการก่อตัวของเซลล์สร้างกระดูก (ไม่แสดงข้อมูล) อย่างมาก โดยรวมแล้ว การค้นพบนี้ชี้ให้เห็นว่าการส่งสัญญาณที่เป็นสื่อกลางของ JNK นั้นสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดกับการปราบปรามของแอคทีโอไซด์ที่เป็นสื่อกลางของการสร้างกระดูกซึ่งถูกกระตุ้นโดย RANKL

การส่งสัญญาณ NF-kB ควบคุมเหตุการณ์ของเซลล์ รวมถึงการตายของเซลล์ ความก้าวหน้าของวัฏจักรเซลล์ การยึดเกาะของเซลล์ การผลิตไซโตไคน์ และการอยู่รอดในมาโครฟาจ [32] การส่งสัญญาณ NF-kB ยังจำเป็นสำหรับการพัฒนา osteoclast ซึ่งแสดงให้เห็นโดยการปรากฏตัวของโรคกระดูกพรุนในหนู NF-kB-knockout [33,34] ดังนั้น การยับยั้ง NF-kB จึงเสนอให้เป็นเป้าหมายที่มีประสิทธิผลสำหรับสารต้านการดูดกลืนแสงเพื่อควบคุมการทำงานของเซลล์สร้างกระดูกและรักษาโรคกระดูกพรุน การดัดแปลงหลังการแปลของโปรตีนอนุวงศ์ NF-kB มีความสำคัญในการปรับกิจกรรม NF-kB โดยเฉพาะอย่างยิ่ง ฟอสโฟรีเลชันของหน่วยย่อย p65 และไคเนส IkB มีความสำคัญสำหรับ NF-kB เพื่อกระตุ้นการสร้างกระดูก [7] การค้นพบปัจจุบันของเราแสดงให้เห็นว่าการกระตุ้น RANKL เพิ่มกิจกรรมการจับดีเอ็นเอของ NF-kB และฟอสโฟรีเลชันของหน่วยย่อย p65 และ IkBa ทั้งในเซลล์ BMM และ RAW264.7 การปรับสภาพด้วยแอกทิโอไซด์ยับยั้งการเพิ่มขึ้นที่เกิดจาก RANKL เหล่านี้ ส่งผลให้กิจกรรม NF-kB ที่มีการควบคุมลดลง ดังนั้น ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า นอกเหนือจาก MAPK แล้ว การส่งสัญญาณ NF-kB เป็นเป้าหมายหลักของแอกทีโอไซด์ในการยับยั้งการสร้างความแตกต่างและการก่อตัวของ osteoclast จากมาโครฟาจที่กระตุ้นด้วย RANKL

นอกเหนือจากการส่งสัญญาณ NF-kB แล้ว เส้นทาง c-Fos/c-Jun/NFATc1 มีบทบาทสำคัญในการพัฒนาเซลล์สร้างกระดูก ดังนั้นการขาดโปรตีนเหล่านี้สามารถจับกุมการสร้างกระดูก [35,36] ในการศึกษานี้ เราพบว่าแอกทีโอไซด์ป้องกันการแสดงออกของ c- Fos และ NFATc1 ที่เกิดจาก RANKL ที่ระดับ mRNA และโปรตีน JNK เป็นไคเนสต้นน้ำของ c-Jun ซึ่งจำเป็นสำหรับการแสดงออกของ NFATc1 และการสร้างกระดูกเพื่อตอบสนองต่อ RANKL [29]

การปิดกั้นเส้นทาง JNK/c-Jun ด้วยตัวยับยั้งขยะทำให้การก่อรูปของกระดูกเสื่อมที่เกิดจาก RANKL และการแสดงออกของ c-Fos และ NFATc1 ลดลง [7] ผลลัพธ์และการค้นพบก่อนหน้านี้ของเราชี้ให้เห็นว่าการยับยั้งการส่งสัญญาณที่เป็นสื่อกลางของ JNK โดยแอคทีโอไซด์นั้นสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดกับการป้องกัน c-Fos และ NFATc1 ที่เป็นสื่อกลาง RANKLการแสดงออกซึ่งยับยั้งการสร้างความแตกต่างของ osteoclast ในมาโครฟาจ ความแตกต่างในผลกระทบของแอกทีโอไซด์ต่อ BMM และเซลล์ RAW264.7 อย่างน้อยก็ส่วนหนึ่งเนื่องมาจากความแตกต่างในความไวต่อการยับยั้ง JNK

TNF-a สามารถกระตุ้นการสร้าง osteoclastogenesis โดยไม่ขึ้นกับสัญญาณ RANKL- RANK [37] IL-1 เป็นตัวกลางที่มีศักยภาพในการทำลายกระดูกทางพยาธิวิทยาที่เกิดจากการขาดฮอร์โมนเอสโตรเจนหรือการอักเสบ [7] การรบกวนตัวรับ IL-1 แบบ I หรือการส่งสัญญาณ IL-1 สามารถย้อนกลับการสูญเสียกระดูกที่เกิดจากการตัดรังไข่ได้ [38] หรือโรคข้ออักเสบรูมาตอยด์ [39] การศึกษานี้แสดงให้เห็นความสามารถของแอกทีโอไซด์ในการลดการผลิตไซโตไคน์ที่มีการอักเสบ เช่น TNF-a, IL- 1b และ IL-6 ในมาโครฟาจ คาดว่า Acteoside จะยับยั้งการผลิตไซโตไคน์ที่มีการอักเสบโดยการยับยั้ง p38 kinase และการส่งสัญญาณ ERK เนื่องจากการกระตุ้น ERK1/2, p38 MAPK หรือทั้งสองอย่างจำเป็นสำหรับการผลิตไซโตไคน์ที่เกิดจากไลโปโพลีแซคคาไรด์ในมาโครฟาจ [40,41] Luteolin ซึ่งเป็นสารประกอบที่ทำให้เกิดการอักเสบได้รับรายงานเพื่อระงับการผลิตสารสื่อกลางในการอักเสบโดยการยับยั้งการกระตุ้น p38 MAPK [42] ในการศึกษานี้ เรายังพบว่าแอกทีโอไซด์ลดการสูญเสียมวลกระดูกในหนูที่ตัดรังไข่ โดยเห็นได้จากแรงแตกหักสูงสุดที่ได้รับการฟื้นฟูที่กึ่งกลางของกระดูกโคนขาขวาและการหายตัวไปของกระดูกคอร์เทกซ์ที่เป็นโรคกระดูกพรุน การบริหารช่องปากด้วยแอคทีโอไซด์ลดลงควบคุมรอยพับที่เกิดจากการตัดรังไข่ในระดับซีรั่ม IL-1b และ IL-6 แต่ไม่ใช่ ALP ระดับแคลเซียม TRAP และ OC ใน OVX ในซีรัมที่เพิ่มขึ้นยังถูกยับยั้งโดยการรักษาทางปากด้วยแอคทีโอไซด์ ซึ่งบ่งชี้ว่าแอกทีโอไซด์ช่วยลดการเปลี่ยนแปลงของไบโอมาร์คเกอร์ที่จำเพาะต่อการสร้างกระดูกและการสลายสลาย เนื่องจากโรคกระดูกพรุนมีลักษณะเฉพาะด้วยความหนาแน่นของมวลที่ลดลงและโครงสร้างไมโครของกระดูก trabecular ที่เสื่อมลง การสูญเสียกระดูก trabecular ที่เกิดจาก OVX และการเปลี่ยนแปลงพารามิเตอร์ทางสัณฐานวิทยาจึงถูกยับยั้งอย่างมีนัยสำคัญโดยการบริหารช่องปากด้วยแอคทีโอไซด์ การค้นพบนี้ชี้ให้เห็นว่าอาจใช้แอกทิโอไซด์เป็นสารต้านการฟื้นตัวในการรักษาโรคกระดูกพรุนโดยการย้อนกลับการกระตุ้นเซลล์สร้างกระดูกพรุนที่ไม่สมดุล อย่างไรก็ตาม เซลล์สร้างกระดูกเป็นปัจจัยหลักในการสร้างกระดูกใหม่ ดังนั้น จึงจำเป็นต้องมีสารที่สามารถเพิ่มจำนวนเซลล์สร้างกระดูกหรือความแตกต่างเพื่อเพิ่มการสร้างกระดูก [30] ในทางตรงกันข้าม เราพบว่าแอกทีโอไซด์ไม่ส่งผลต่อการสร้างความแตกต่างของออสติโอบลาสต์หรือการทำให้เป็นแร่ในเซลล์ไขกระดูกที่ได้รับการรักษาด้วย DAG เมื่อนำมารวมกัน ผลลัพธ์ของเราแนะนำว่าแอกทีโอไซด์มีฤทธิ์ต้านการสลายแต่ไม่ส่งผลโดยตรงต่อการสร้างกระดูก จำเป็นต้องมีการทดลองโดยละเอียดเพิ่มเติมเพื่อวิเคราะห์พารามิเตอร์เฉพาะของกระดูกในร่างกายและในหลอดทดลอง เพื่อชี้แจงว่าแอกทีโอไซด์มีประโยชน์ต่อการสร้างกระดูกพรุนหรือไม่

การศึกษานี้เน้นย้ำถึงผลการยับยั้งของแอกทีโอไซด์ต่อการสร้างความแตกต่างของ osteoclast และการสลายของกระดูกโดยการกดทับ MAPK และปัจจัยการถอดรหัสหลายอย่าง เช่น NF-kB, c-Fos และ NFATc1 ข้อมูลแนะนำกลไกที่เป็นไปได้สองอย่างซึ่งแอกทีโอไซด์มีประโยชน์เหล่านี้

CISTANCHE ECHINACOSIDE และ ACTEOSIDE สามารถรักษาโรคกระดูกพรุนได้

อ้างอิง

1. RhoJ, Takami M, Choi Y (2004) Osteoimmunology: ปฏิสัมพันธ์ของระบบภูมิคุ้มกันและโครงกระดูก โมเลกุลและเซลล์ 17: 1–9.

2. Del Fattore A, Capannolo M, Rucci N (2010) ไขกระดูกและไขกระดูก: อวัยวะเดียวกัน จดหมายเหตุของชีวเคมี ชีวฟิสิกส์ 503: 28–34

3. Rachner TD, Khosla S, Hofbauer LC (2011) โรคกระดูกพรุน: ปัจจุบันและอนาคต มีดหมอ 377: 1276–1287

4. Sturge J, Caley MP, Waxman J (2011) การแพร่กระจายของกระดูกในมะเร็งต่อมลูกหมาก: กลยุทธ์การรักษาที่เกิดขึ้นใหม่ ธรรมชาติทบทวนมะเร็งวิทยาคลินิก 8: 357–368

5. Goltzman D (2002) การค้นพบ ยา และความผิดปกติของโครงกระดูก ธรรมชาติรีวิวการค้นพบยา 1: 784–796

6. Rodan GA, Martin TJ (2002) แนวทางการรักษาโรคกระดูก วิทยาศาสตร์ 289: 1508–1514

7. Lee JH, Jin H, Shim HE, Kim HN, Ha H และอื่น ๆ (2010) Epigallocatechin-3- gallate ยับยั้ง osteoclastogenesis โดยลดการแสดงออกของ c-Fos และระงับสัญญาณนิวเคลียร์แฟคเตอร์-kappaB เภสัชวิทยาระดับโมเลกุล 77: 17– 25.

8. Kim HN, Lee JH, Jin WJ, Ko S, Jung K, และคณะ (2012) MS-275 ซึ่งเป็นสารยับยั้งเบนซาไมด์ฮิสโตนดีอะซิติเลส ช่วยป้องกันการสร้างกระดูกพรุนโดยควบคุมการแสดงออกของ c-Fos ลงและยับยั้งการสูญเสียมวลกระดูกในหนูทดลอง วารสารเภสัชวิทยาแห่งยุโรป 691: 69–76

9. Kim T, Ha H, Shim KS, Cho WK, MaJY (2013) ฤทธิ์ต้านโรคกระดูกพรุนของ Yijung-tang ในแบบจำลองหนูที่ตัดรังไข่โดยอาศัยการยับยั้งการสร้างความแตกต่างของ osteoclast วารสารชาติพันธุ์วิทยา 146: 83–89.

10. Nakanishi A, Litsuka N, Tsukamoto J (2013) น้ำมันปลายับยั้งการสลายของกระดูกโดยการยับยั้ง osteoclastogenesis โดยการแสดงออกที่ลดลงของ M-CSF, PU.1, MITF และ RANK ในหนูที่ตัดรังไข่ รายงานการแพทย์ระดับโมเลกุล 7: พ.ศ. 2439-2446

11. Bar-Shavit Z (2007) The osteoclast: เซลล์สร้างกระดูกที่สร้างเม็ดเลือดหลายนิวเคลียส วารสารชีวเคมีของเซลล์ 102: 1130– 1139

12. Takahashi N, Maeda K, Ishihara A, Uehara S, Kobayashi Y (2011) กลไกการกำกับดูแลของ osteoclastogenesis โดยสัญญาณ RANKL และ Wnt พรมแดนในชีววิทยาศาสตร์ 16: 21–30