ส่วนที่ 1: โรคไตเรื้อรัง proteinuric มีความสัมพันธ์กับการเปลี่ยนแปลงอายุการใช้งานของเซลล์เม็ดเลือดแดง, ความผิดปกติและการเผาผลาญอาหาร

ติดต่อ: emily.li@wecistanche.com

Rosi Bissinger, et al

¹ภาควิชาต่อมไร้ท่อ, เบาหวานและโรคไต, ภาควิชาอายุรศาสตร์, โรงพยาบาลมหาวิทยาลัย Tübingen, Tübingen, เยอรมนี;²ภาควิชาชีวเคมีและอณูพันธุศาสตร์, มหาวิทยาลัยโคโลราโดวิทยาเขตการแพทย์ Anschutz, ออโรรา, โคโลราโด, สหรัฐอเมริกา;³ภาควิชาโลหิตวิทยา, มหาวิทยาลัยโคโลราโดเดนเวอร์, ออโรรา, โคโลราโด, สหรัฐอเมริกา;⁴สถาบันเวชศาสตร์การกีฬาโมเลกุลและเซลล์, เยอรมันกีฬามหาวิทยาลัยโคโลญ, Köln,⁵สถาบันวิจัยโรคเบาหวานและโรคเมตาบอลิซึม (IDM) ของศูนย์ Helmholtz มิวนิกที่มหาวิทยาลัย Tübingen, Tübingen, ประเทศเยอรมัน;⁶ศูนย์วิจัยโรคเบาหวานเยอรมัน (DZD) ที่มหาวิทยาลัย Tübingen, Tübingen, เยอรมนี;⁷ศูนย์การแพทย์การถ่ายเลือดทางคลินิก, โรงพยาบาลมหาวิทยาลัย Tübingen, Tübingen, เยอรมนี;⁸ภาควิชาพยาธิวิทยา, มหาวิทยาลัย Eberhard Karls Tübingen, Tübingen, เยอรมนี;⁹ภาควิชาโรคผิวหนัง, มหาวิทยาลัย Eberhard Karls Tübingen, Tübingen, เยอรมนี;¹⁰สถาบันชีววิทยาช่องปาก, คณะทันตแพทยศาสตร์, มหาวิทยาลัยออสโล, ออสโล, นอร์เวย์;¹¹ภาควิชาแพทยศาสตร์, ศูนย์การแพทย์มหาวิทยาลัยฮัมบูร์ก - Eppendorf, ฮัมบูร์ก, เยอรมนี; และ¹²คณะวิทยาศาสตร์สุขภาพ, มหาวิทยาลัยออนแทรีโอเทค, ออสฮาวา, ออนแทรีโอ, แคนาดา

โรคโลหิตจางเป็นภาวะแทรกซ้อนที่พบบ่อยของโรคไตเรื้อรังซึ่งส่งผลต่อคุณภาพชีวิตของผู้ป่วย ในบรรดาปัจจัยต่าง ๆ เช่นการขาดธาตุเหล็กและ erythropoietin อายุการใช้งานของเซลล์เม็ดเลือดแดงที่ลดลง (RBC) มีส่วนเกี่ยวข้องกับการเกิดโรคของโรคโลหิตจาง อย่างไรก็ตามข้อมูลกลไกเกี่ยวกับความผิดปกติของ RBC ในร่างกายในโรคไตขาด ในที่นี้เราอธิบายการพัฒนาของโรคโลหิตจางที่เกี่ยวข้องกับโรคไตเรื้อรังในหนูที่เป็นโรคไต proteinuric ที่เกิดจากการบริหารงานของ doxorubicin หรือการขาดโพโดซินที่เหนี่ยวนําให้เกิด ในแบบจําลองการทดลองทั้งสองแบบโรคโลหิตจางปรากฏในวันที่ 10 และคืบหน้าในวันที่ 30 แม้จะมีระดับเม็ดเลือดแดงหมุนเวียนเพิ่มขึ้นและเม็ดเลือดแดงในไขกระดูกและม้าม

RBCs หมุนเวียนในเมาส์ทั้งสองรุ่นแสดงสัณฐานวิทยาที่เปลี่ยนแปลงและความผิดปกติที่ไวต่อออสโมติกที่ลดลงพร้อมกับการภายนอกของฟอสฟาติดิลเซอรีนที่เพิ่มขึ้นบนเยื่อหุ้มพลาสมาด้านนอกซึ่งเป็นจุดเด่นของการเสียชีวิตของ RBC การติดฉลากการเรืองแสงของ RBCs ในวันที่ 20 ของหนูที่มี doxorubicin ที่เกิดจากโรคไตเปิดเผยการกวาดล้างก่อนวัยอันควรจากการไหลเวียน การวิเคราะห์เมตาโบโลมิกของ RBCs จากเมาส์ทั้งสองรุ่นแสดงให้เห็นถึงการเปลี่ยนแปลงชั่วคราวในเส้นทางการรีไซเคิลรีดอกซ์และวัฏจักรของ Lands ซึ่งเป็นกระบวนการปรับปรุงไขมันเมมเบรน ผู้ป่วยโลหิตจางที่มีโปรตีนโรคไตมีสัดส่วนที่เพิ่มขึ้นของ RBCs ที่เป็นบวกของฟอสฟาติดิลเซอรีนที่หมุนเวียนอยู่

ดังนั้นการสังเกตของเราชี้ให้เห็นว่าอายุการใช้งาน RBC ที่ลดลงซึ่งเป็นสื่อกลางโดยการเผาผลาญ RBC ที่เปลี่ยนแปลงลดความผิดปกติของ RBC และการตายของเซลล์ที่เพิ่มขึ้นมีส่วนทําให้เกิดการพัฒนาของโรคโลหิตจางในโปรตีนโรคไต.

ไตนานาชาติ (2021) 100, 1227–1239; https://doi.org/10.1016/ j.kint.2021.08.024

คำ:ซิสตันเช่, สิทธิประโยชน์ของ Cistanche,โรคไต,ไตวาย,โรคไตเรื้อรัง, โรคโลหิตจาง, การตายของเซลล์; ความผิดปกติ, วงจรของ Lands; เมแทบอลิซึม; โปรตีน; เซลล์เม็ดเลือดแดง การรีไซเคิลรีดอกซ์

ลิขสิทธิ์ ª 2021, สมาคมโรคไตระหว่างประเทศ. เผยแพร่โดย Elsevier อิงค์ นี่เป็นบทความการเข้าถึงแบบเปิดภายใต้ใบอนุญาต CC BY-NC-ND

ประโยชน์ของ Cistanche การทํางานของไต.

คําแถลงการแปล

การศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าโปรตีนยูริกโรคไตในรูปแบบ murine นําไปสู่การกวาดล้างเซลล์เม็ดเลือดแดงก่อนวัยอันควร (RBC) ในที่สุดทําให้เกิดการพัฒนาของโรคโลหิตจาง การเสียชีวิตของ RBC ที่เพิ่มขึ้นยังเกิดขึ้นในผู้ป่วยที่มีโรคไตเรื้อรังและโรคโลหิตจาง ความผิดปกติของ RBC ใน milieu ท่อปัสสาวะเป็นกลไกสําคัญสําหรับการสูญเสีย RBC และการพัฒนาของโรคไตที่เกี่ยวข้องกับโรคโลหิตจางโดยไม่คํานึงถึงการหลั่ง erythropoietin ภายนอก

การพัฒนาของโรคโลหิตจางเป็นภาวะแทรกซ้อนทั่วไปของขั้นสูงโรคไตเรื้อรัง(CKD) และสัมพันธ์กับคุณภาพชีวิตที่บกพร่อง1 และเพิ่มความเสี่ยงต่อการเกิดโรคหัวใจและหลอดเลือด²และการรักษาตัวในโรงพยาบาล³ความรุนแรงของโรคโลหิตจางถูกมองว่าเป็นตัวทํานายการเสียชีวิตอย่างอิสระในผู้ป่วยโรคไตเรื้อรังทั้งที่ฟอกไตและไม่ฟอกไต⁵พยาธิสรีรวิทยาของโรคไตที่เกี่ยวข้องกับโรคโลหิตจางมีความซับซ้อนและเกี่ยวข้องกับการขาดธาตุเหล็กและเม็ดเลือดแดง (EPO) ในการตั้งค่าของการอักเสบเกรดต่ําซึ่งในทางกลับกันประนีประนอมเม็ดเลือดแดงปกติในผู้ป่วยโรคไต CKD 6 ใน CKD ขั้นสูงการตอบสนองของ EPO อยู่ในระดับต่ําไม่เพียงพอเมื่อเทียบกับระดับของโรคโลหิตจาง^7,8ความชุกสูงของการขาดธาตุเหล็กร่วมกันในโรคไตเรื้อรังเป็นผลมาจากสภาวะสมดุลของธาตุเหล็กที่ถูกรบกวน⁹กลไกที่ถูกทอดทิ้งของการสูญเสียธาตุเหล็กใน CKD คือ proteinuria ซึ่งอาจนําไปสู่การสูญเสียปัสสาวะของธาตุเหล็กที่ถูกผูกไว้ (สูงถึง 0.3 มก. / วัน) เมื่อโปรตีนยูเรียถึงช่วงไต¹⁰

อีกปัจจัยหนึ่งที่คิดว่าจะนําไปสู่โรคโลหิตจางในผู้ป่วยโรคไตเรื้อรังคืออายุการใช้งานที่สั้นลงของเซลล์เม็ดเลือดแดง (RBCs) ซึ่งอธิบายครั้งแรกเมื่อ >60 ปีก่อน^6,11,12การศึกษาล่าสุดโดยใช้การทดสอบลมหายใจคาร์บอนมอนอกไซด์แสดงให้เห็นว่าอายุการใช้งานของ RBC ลดลงอย่างต่อเนื่องจาก 120 วันในผู้ป่วยโรคไตเรื้อรังระยะที่ 1 เป็น 60 วันในผู้ป่วยโรคไตเรื้อรังระยะที่ 5¹³โดยเฉพาะอย่างยิ่งการถ่าย RBCs แบบ allogenic จากผู้บริจาคที่มีสุขภาพดีไปยังผู้ป่วยโรคไตเรื้อรังตามมาด้วยการกวาดล้าง RBCs ที่ถ่ายเลือดอย่างรวดเร็วโดยไม่มีหลักฐานการห้ามเลือด¹²กลไกที่เป็นไปได้สําหรับการสังเกตนี้อาจเป็นการกระตุ้นการตายของเซลล์ที่มีลักษณะคล้ายการตายของเซลล์ใน RBCs ของ anucleate ซึ่งแสดงถึงรูปแบบการบาดเจ็บที่ความสมบูรณ์ของเยื่อหุ้มเซลล์ไม่ถูกบุกรุกและเนื้อหาไซโตพลาสซึมยังคงไม่บุบสลาย¹⁴RBCs ที่อยู่ระหว่างการตายของเซลล์แสดงการเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาต่างๆ ที่เกิดจากความเสียหายของโครงกระดูกเช่นการก่อตัวของเกล็ดผิวการสูญเสียความยืดหยุ่นของเมมเบรนและ / หรือการคายน้ําของเซลล์¹⁵ในระดับโมเลกุลการตายของ RBC มีความสัมพันธ์กับการสะสม Ca2þ ภายในเซลล์สถานะพลังงานของเซลล์ที่เปลี่ยนแปลงและการสลายความไม่สมดุลของฟอสโฟลิปิดในที่สุดนําไปสู่การภายนอกของฟอสฟาติดิลเซอรีน (PS) บนเยื่อหุ้มพลาสมาด้านนอก^15,16เป็นผลให้แมคโครฟาจและเซลล์ dendritic เฉพาะรู้จัก RBCs ภายนอก PS อย่างรวดเร็วซึ่งนําไปสู่เม็ดเลือดแดงและ catabolism ของพวกเขาในม้ามและตับ¹⁷

เนื่องจากพยาธิสรีรวิทยาที่สับสนของโรคไต - โรคโลหิตจางที่เกี่ยวข้องกับโรคไตในมนุษย์การศึกษาในสัตว์จึงได้รับการรับรองเพื่อระบุกลไกที่เอื้ออํานวย โรคไตที่เกิดจาก Doxorubicin (DIN) ในหนู 129S1/SvImJ18 และหนูที่ขาดโพโดซินเหนี่ยวนํา (Nphs2Dipod)¹⁹เป็น 2 รุ่นที่มีลักษณะโดยการเหนี่ยวนําโปรตีนช่วงไตภายในไม่กี่วันความก้าวหน้าไปสู่ไตวายหลังจาก 3 สัปดาห์และเสียชีวิตใน 6 ถึง 7 สัปดาห์^19–21เมาส์ทั้งสองรุ่นสามารถสรุป CKD ของมนุษย์ได้ทุกขั้นตอนได้อย่างมีประสิทธิภาพ ในการศึกษาปัจจุบันเราได้ทดสอบว่าก้าวหน้าหรือไม่ไตวายในหนูเหล่านี้ที่มีโปรตีนโรคไตส่งผลกระทบต่ออายุการใช้งานของ RBC และก่อให้เกิดโรคโลหิตจาง ในแบบคู่ขนานเราตรวจสอบฟีโนไทป์ RBC ในเลือดที่ดึงมาจากผู้ป่วยโรคไตวายเรื้อรังที่มีโปรตีนช่วงไต

Cistanche รักษาไตเรื้อรัง diease และปกป้องไต

วิธี

ข้อมูลโดยละเอียดเกี่ยวกับวัสดุและวิธีการมีให้ในวัสดุและวิธีการเสริม

การศึกษาเมาส์

การทดลองได้ดําเนินการกับหนูป่าชนิด 129S1/SvImJ อายุ 8 สัปดาห์ของทั้งสองเพศ (แม่น้ําชาร์ลส์) DIN เกิดจากการฉีด doxorubicin เพียงครั้งเดียว (น้ําหนักตัว 14.5 มก. / กรัม) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้^18,22เพื่อควบคุมผล myelotoxic ของ doxorubicin ที่ไม่เกี่ยวข้องกับการพัฒนาของโรคไตหนู C57BL / 6 ที่ดื้อต่อ doxorubicin ก็อยู่ภายใต้โปรโตคอลการรักษาเดียวกัน 23 นอกจากนี้ยังมีการทดลองที่คล้ายกันในหนูอายุ 8 สัปดาห์ที่มีการลบ podocin ที่เหนี่ยวนําได้ (B6-Nphs2tm3.1Antc *Tg [Nphs1-rtTA *3G]8Jhm*Tg[tetO-cre]1Jaw) หรือหนู Nphs2Dipod ซึ่งได้รับการรักษาด้วย doxycycline เป็นเวลา 14 วัน¹⁹การทดลองในสัตว์ทั้งหมดดําเนินการตามคู่มือสถาบันสุขภาพแห่งชาติสําหรับการดูแลและการใช้สัตว์ทดลองและกฎหมายเยอรมันเพื่อสวัสดิภาพสัตว์โดยได้รับการอนุมัติจากหน่วยงานท้องถิ่น (Regierungspräsidium Tübingen หมายเลขอนุมัติ M12/17 และ M17/19G)

การออกแบบการทดลองของการศึกษาเมาส์มีการระบุไว้ในรูปเสริม S1

ผู้ ป่วย

การศึกษาผู้ป่วยได้ดําเนินการตามปฏิญญาเฮลซิงกิและได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการจริยธรรมท้องถิ่นของโรงพยาบาลมหาวิทยาลัย Tübingen (556/2018BO2) ตัวอย่างเลือดและปัสสาวะลิเธียมเฮปารินได้มาจากผู้ป่วยที่มีโปรตีนช่วงไตและอัตราการกรองของไตที่เก็บรักษาไว้ (GFR; ระยะที่ 1-2; n 10) และผู้ป่วยที่มี GFR ลดลง (CKD ระยะที่ 3-5; n 15) ที่โรงพยาบาลมหาวิทยาลัย Tübingen ในฐานะกลุ่มควบคุมเลือดจากอาสาสมัครที่มีสุขภาพดีที่มีอายุและเพศสัมพันธ์ (n 25) จัดทําโดยธนาคารเลือดของโรงพยาบาลมหาวิทยาลัย Tübingen ตัวอย่างมนุษย์ทั้งหมดถูกรวบรวมหลังจากได้รับความยินยอมจากผู้แจ้ง ลักษณะทางคลินิกของผู้ป่วยระบุไว้ในตารางที่ 1

การวิเคราะห์การไหลแบบไซโตเมทรี

พารามิเตอร์ต่าง ๆ ของการตายของเซลล์ RBC ถูกกําหนดโดยโฟลว์ไซโตเมทรี¹⁴ในการกําหนดอายุการใช้งาน RBC ในร่างกาย สีย้อม 25 มล. ของ 5,6-car- boxyfluorescein diacetate succinimidyl ester [5(6)-CFDA, SE] สีย้อมถูกฉีดที่ความเข้มข้น 9.96 mM (ละลายในไดเมทิลซัลโฟไซด์) ลงในช่องท้องย้อนยุคของหนูชนิดป่า 129S1/SvImJ และหนูที่ฉีด doxorubicin ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้²⁴ในช่วงเวลาที่ระบุเลือดถูกดึงออกมาจากช่องท้องย้อนยุควงโคจรของหนูและเปอร์เซ็นต์ของ 5 (6) - CFDA เซลล์ SEþ ถูกตรวจพบโดยการวิเคราะห์ไซโตเมทรีไหล ในที่สุดข้อมูลก็ถูกวิเคราะห์โดยใช้ซอฟต์แวร์ FlowJo (FlowJo LLC)

ความสามารถในการเสียรูปของ RBC และการไล่ระดับสีออสโมติก ektacytometry RBC ผิดรูปถูกวัดโดยใช้เครื่องวิเคราะห์เซลล์หมุนด้วยแสงช่วยด้วยเลเซอร์ (LORCA MaxSis; LORCA MaxSis) RR เมคคาทรอนิกส์) ซึ่งได้รับการอธิบายในรายละเอียดที่อื่น²⁵การวิเคราะห์ ektacytometry ไล่ระดับสีออสโมติก (osmoscan) ยังดําเนินการโดยใช้ LORCA MaxSis และวัดความสามารถในการเสียรูปภายใต้สภาวะออสโมติกต่างๆ²⁶

การตรวจทางจุลกายวิภาค

สําหรับการย้อมสีฮีมาก็อกซีลินและอีโอซินม้ามและกระดูกโคนขาถูกย้อมด้วยฮีมาทอกซีลินและอีโอซิน สไลด์ทั้งหมดถูกย้อมด้วยแอนติบอดีหลัก Ter 119 (BD Pharmingen; เจือจาง 1:500) สําหรับการย้อมสีกรดเป็นระยะ- Schiff, ชิ้นหนา 2.5 มม. ของไตถูกย้อมด้วยกรดเป็นระยะ –Schiff รีเอเจนต์ (Carl Roth) และ hematoxylin (abcam). การย้อมสี May-Grünwald-Giemsa (วิธี Pappenheim) ดําเนินการเพื่อตรวจสอบการเปลี่ยนแปลงรูปร่างของ RBC ตามที่อธิบายไว้ล่วงหน้าอย่างเลวร้าย²⁷การแยก Glomeruli ทําได้โดยใช้วิธีการไบโอทินิเลชั่นและการเรียงลําดับเซลล์¹⁹สําหรับการตรวจหาโปรตีนของโพโดซินมีการใช้แอนติบอดีจากซิกม่า (P0372)¹⁹โรตีเมาท์ฟลูออร์แคร์ 40,6-ไดอามิดิโน-2-ฟีนิลินโดล (DAPI; DAPI) คาร์ล รอธ) ถูกใช้เพื่อย้อมสีนิวเคลียส

เมตาโบโลมิกส์โครมาโตกราฟี-แมสสเปกโตรเมตรีของเหลวประสิทธิภาพสูงพิเศษจาก RBCs ของเมาส์

การวิเคราะห์ได้ดําเนินการตามที่เผยแพร่ก่อนหน้านี้²⁸กล่าวโดยสังเขปแพลตฟอร์มการวิเคราะห์ใช้ระบบโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงพิเศษ Vanquish (Thermo Fisher Scientific) ควบคู่ไปกับออนไลน์กับสเปกโตรมิเตอร์มวล Q Exactive (Thermo Fisher Scientific)

การวิเคราะห์ทางสถิติ

ข้อมูลจะถูกจัดเตรียมเป็นเลขคณิตหมายถึง SEM หรือเป็นค่ามัธยฐานที่มีช่วง interquartile (เปอร์เซ็นไทล์ที่ 25-75) โดย n แสดงถึงจํานวนสัตว์ที่ใช้แล้วหรือรวมผู้ป่วยตามลําดับ ข้อมูลได้รับการทดสอบความปกติด้วยการทดสอบ Kolmogorov-Smirnov การทดสอบ D' Ag-ostino และการทดสอบ Shapiro-Wilk ความแปรปรวนถูกวิเคราะห์โดยการทดสอบ Bartlett เพื่อหาความแปรปรวนที่เท่ากัน Tukey หรือ Dunn หลายการเปรียบเทียบหลังการทดสอบ, การทดสอบ t นักเรียนที่ไม่ได้จับคู่, หรือการทดสอบ Mann-Whitney U ดําเนินการโดย GraphPad Prism 8 (ซอฟต์แวร์ GraphPad). P< 0.05="" with="" 2-tailed="" testing="" was="" considered="" statistically="" significant.="" additional="" graphs="" were="" plotted="" through="" graphpad="" prism="">

ผลลัพธ์

โรคไตโปรตีนทดลองทําให้เกิดโรคโลหิตจางในหนู

หลังจากการเหนี่ยวนําหนู 129S1 / SvImJ ที่มีหนู DIN และ Nphs2Dipod พัฒนาโปรตีนช่วงไต (รูปที่ 1a และรูปเสริม S2C) และก้าวหน้าไตวายโดดเด่นด้วยระดับยูเรียพลาสม่าสูงตั้งแต่วันที่ 20 เป็นต้นไป (รูปที่ 1b และรูปเสริม S2D) ในช่วง 10 วันแรกหนูจะได้รับน้ําหนักตัวเพิ่มขึ้นด้วยน้ําในช่องท้อง (รูปที่ 1c และรูปเสริม S2E) ซึ่งสะท้อนถึงการกักเก็บโซเดียมที่เกิดจากการขับถ่ายของซีรีนโปรตีเอสหรือโปรตีเอซูเรีย¹⁸หลังจากการกลับตัวของการเก็บโซเดียมโดยธรรมชาติหนูเหล่านี้ลดน้ําหนักอย่างต่อเนื่อง ในหนูที่มี DIN และในหนู Nphs2Dipod ภาพกล้องจุลทรรศน์แสงที่ถ่ายหลังจาก 10 วันเผยให้เห็นการเปลี่ยนแปลงทางจุลกายวิภาคทั่วไปที่สอดคล้องกับเส้นโลหิตตีบของไตแบบแบ่งส่วนโฟกัส (รูปที่ 1d และรูปเสริม S2B) สิ่งเหล่านี้ขาดหายไปในหนู C57BL/6 ที่ฉีด doxorubicin (รูปที่ 1d) การรักษา Doxorubicin ทําให้ฮีโมโกลบินจํานวน RBC และฮีมาโตคริตลดลงอย่างมาก (รูปที่ 1e–g) ตั้งแต่วันที่ 10 ในหนู 129S1/SvImJ และ C57BL/6 ซึ่งในตอนหลังถูกทําให้เป็นปกติในวันที่ 20 และ 30 ในทางตรงกันข้ามในวันที่ 20 และ 30 doxorubicin-injected 129S1/SvImJ และหนูที่ขาดโพโดซินได้พัฒนาโรคโลหิตจางแบบก้าวหน้าโดยมีปริมาณ corpuscular เฉลี่ยลดลง (รูปที่ 1 ชม.) และลดฮีโมโกลบิน (รูปที่ S2F เสริม) ซึ่งบ่งชี้ว่าโรคโลหิตจางมีความสัมพันธ์กับความก้าวหน้าไตวายและไม่ใช่ด้วยการรักษาด้วย doxorubicin ต่อ se

โรคโลหิตจางในโรคไตโปรตีนทดลองไม่ได้เกิดจากเม็ดเลือดแดงที่ถูกบุกรุก

เมาส์โลหิตจางทั้งสองรุ่นแสดงเปอร์เซ็นต์เรติคูโลไซต์หมุนเวียนเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสําคัญ (รูปที่ 2a และรูปเสริม S3C) ความเข้มข้นของพลาสมา EPO เพิ่มขึ้นอย่างมากในวันที่ 10 ใน 129S1/SvImJ ด้วย DIN และหนู C57BL/6 ที่มีสุขภาพดี แต่ถูกทําให้เป็นมาตรฐานอีกครั้งในวันที่ 20 และ 30 (รูปที่ 2b) ในหนูที่ขาดโพโดซินความเข้มข้นของ EPO ในพลาสมาพุ่งสูงขึ้นในวันที่ 10 และยังคงเพิ่มขึ้นในวันที่ 20 และ 30 (รูปเสริม S2H) ในการวิเคราะห์ทางจุลกายวิภาคจากไขกระดูกและม้ามจํานวนเซลล์สารตั้งต้นของเม็ดเลือดแดงเมื่อเทียบกับสารตั้งต้นของไมอีลอยด์เพิ่มขึ้นในวันที่ 30 (รูปที่ 2d-g) โดยชี้ไปที่เม็ดเลือดแดงกระตุ้นในหนู anemic 129S1 / SvImJ ที่มี DIN

อายุการใช้งาน RBC ที่ลดลงเป็นสาเหตุหลักของโรคโลหิตจางในโรคไตโปรตีนทดลอง

ภายนอกของ PS บนแผ่นพับด้านนอกของเยื่อหุ้มพลาสมา RBC เป็นตัวบ่งชี้การตายของเซลล์และโปรโมเตอร์ของเม็ดเลือดแดง 14 การตายของเซลล์ RBC ถูกวัดปริมาณโดยใช้การวิเคราะห์การเรียงลําดับเซลล์ที่เปิดใช้งานการเรืองแสงของสารตั้งต้นของสารตั้งต้นของ PS ที่ผูกด้วยฟลูออเรสเซนต์¹⁴ในเลือดที่ดึงใหม่เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ที่สัมผัสกับ PS >สูงขึ้น 4 เท่าในวันที่ 20 ในหนูที่มี DIN (4.16% T 0.86%) เมื่อเทียบกับหนูที่มีสุขภาพดี (1.00% 0.11%) (รูปที่ 3a) ในทํานองเดียวกันหนู Nphs2Dipod พบว่าการสัมผัส PS เพิ่มขึ้นประมาณ 2 เท่า (1.27% T 0.20%) เมื่อเทียบกับหนูที่มีสุขภาพดี (0.58% 0.05%) ในวันที่ 30 (รูปเสริม S3A) เป็นที่ทราบกันดีว่า RBCs จะถูกกําจัดออกจากการไหลเวียนโดยแมคโครฟาจที่อาศัยอยู่ในม้าม¹⁷ดังนั้นการสังเกตนี้อาจอธิบายอัตราส่วนน้ําหนักม้าม/น้ําหนักตัวที่สูงขึ้นของหนู Nphs2Dipod (รูปเสริม S2G) ซึ่ง RBCs จะลดลงเป็นสองเท่าเมื่อเทียบกับหนู C57BL/6 ที่มีสุขภาพดี

เมื่อโปรตีนในช่วงไตนําไปสู่ dysproteinemia²⁹เราตรวจสอบเพิ่มเติมว่าการตายของเซลล์ RBC ที่เพิ่มขึ้นอาจถูกกระตุ้นโดยส่วนประกอบในพลาสมาของหนูที่มี DIN หรือไม่ ดังที่แสดงในรูปที่ 3b การสัมผัส PS ในวันที่ 10 และ 20 นั้นสูงเป็นสองเท่าหลังจากการฟักตัว (30 นาทีที่ 37 ○C) ของ RBCs ที่มีสุขภาพดีในพลาสมาของหนู 129S1/ SvImJ ที่ฉีด doxorubicin เมื่อเทียบกับการฟักตัวในพลาสมาของหนูที่มีสุขภาพดี Ca2þ การไหลเข้าของ RBCs ซึ่งเป็นสื่อกลางโดยช่องไอออนบวกแบบไม่เลือกแรงดันไฟฟ้าและแรงดันไฟฟ้าที่ไม่ต้องเลือก 30,31 เป็นหนึ่งในหน่วยงานกํากับดูแลที่สําคัญของการตายของเซลล์ RBC ใน RBCs ที่เก็บรวบรวมในวันที่ 20 และ 30 จากหนู 129S1 /SvImJ ที่มี DIN ความเข้มข้นของ Ca2þ ภายในเซลล์เพิ่มขึ้น (รูปที่ 3c); นี้

ปรากฏการณ์นี้ถูกสรุปในหนู Nphs2Dipod ในวันที่ 20 (รูปเสริม S3B)

ในเมาส์ทั้งสองรุ่นมีความสัมพันธ์เชิงลบอย่างมีนัยสําคัญของเปอร์เซ็นต์ของ RBCs ที่เป็นบวก PS โดยมีความรุนแรงของโรคโลหิตจางที่สะท้อนจากระดับฮีโมโกลบิน (รูปที่ 3d และรูปเสริม S3D) นอกจากนี้ยังมีความสัมพันธ์แบบ sig- nificant กับความเสียหายของไตที่สะท้อนจากความเข้มข้นของยูเรียในพลาสมา (รูปที่ 3e และรูปเสริม S3E) และในระดับที่น้อยกว่าด้วย proteinuria (รูปที่ 3f และรูปเสริม S3F) เพื่อชดเชยการสูญเสีย RBC ในโรคโลหิตจางการก่อตัวของ RBCs ใหม่ถูกกระตุ้นในหนูทั้งสองตัวตามที่ระบุโดยเปอร์เซ็นต์ที่เพิ่มขึ้นของ reticulocytes หมุนเวียนและมีความสัมพันธ์อย่างมีนัยสําคัญกับขนาดของ PS- เปิดเผย RBCs (รูปที่ 3g และรูปเสริม S3G)

^{คลิกที่นี่สําหรับส่วนที่ 2}