ส่วนที่ 1: สารสกัดจาก Cistanche Deserticola สามารถต่อต้านภูมิคุ้มกันและยืดอายุขัยในหนูเมาส์ Senescence-Accelerated Mouse Prone 8 (SAM-P8)

ติดต่อ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 อีเมล:audrey.hu@wecistanche.com

Ke Zhang, 1 Xu Ma, 1 Wenjun He, 1 Haixia Li, 1 Shuyan Han, 1 หยงเจียง, 1

Hounan Wu,2 Li Han,3 Tomohiro Ohno,3 Nobuo Uotsu,3 Kohji Yamaguchi,3 Zhizhong Ma,1,4 และ Pengfei Tu1

1 Department of Natural Medicines, School of Pharmaceutical Sciences, Peking University, No. 38 Xueyuan Road, Beijing 100191 ประเทศจีน

2 Medical and Healthy Analytical Center, Peking University, No. 38 Xueyuan Road, Beijing 100191, China

3 คณะวิจัยพื้นฐาน Fancl Research Institute, FANCL Corporation, 12-13 Kamishinano, Totsuka-ku, Yokohama, Kanagawa 244-0806, Japan

4 Department of Integration of Traditional Chinese and Western Medicine, School of Basic Medical Sciences, Peking University, No. 38 Xueyuan Road, Beijing 100191 ประเทศจีน

ควรส่งจดหมายโต้ตอบถึง Zhizhong Ma; zhma@bjmu.edu.cn และเผิงเฟยตู; pengfeitu@bjmu.edu.cn รับ 19 กรกฎาคม 2556; แก้ไข 23 ตุลาคม 2556; ยอมรับ 11 พฤศจิกายน 2013; เผยแพร่ 9 มกราคม 2014; บรรณาธิการวิชาการ: Adair Santos

1. บทนำ

Cistanche deserticolaยาสมุนไพร/ผลิตภัณฑ์เพื่อสุขภาพชนิดหนึ่งที่ได้รับความนิยมมากที่สุด ได้รับการอธิบายไว้ในตำรับยาสมุนไพรจีนโบราณจำนวนหนึ่งว่ามีคุณสมบัติในการต่อต้านวัย ดังนั้นจึงมีการใช้กันอย่างแพร่หลายในประเทศจีนสำหรับการรักษาโรคต่างๆ ที่เกี่ยวข้องกับอายุ เช่น ภาวะสมองเสื่อมในวัยชรา ความอ่อนแอ ภาวะมีบุตรยาก การติดเชื้อเรื้อรัง และความผิดปกติของเม็ดเลือดในผู้สูงอายุ [1] วิธีการทางเคมีสมัยใหม่ทำให้สารประกอบหลักสองชนิด คือ ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ และโอลิโกแซ็กคาไรด์ ถูกแยกออกได้ในฐานะส่วนผสมออกฤทธิ์หลักของ Cistanche deserticola [1] ในทศวรรษที่ผ่านมา Cistanche Deserticola และสารสกัดจากมันได้รับการศึกษาอย่างเข้มข้นและแสดงให้เห็นว่าสามารถปกป้องเซลล์ประสาทจากการบาดเจ็บที่เกิดจากพิษต่อระบบประสาท[2] ยับยั้งพิษต่อตับที่เกิดจากคาร์บอนเตตระคลอไรด์ [2] และส่งเสริมการฟื้นตัวของเซลล์ไขกระดูกจาก ความเสียหายที่เกิดจากรังสีร่วม [3]. นอกจากนี้ยังแสดงให้เห็นว่ามีฤทธิ์ต้านการอักเสบ ต้านอนุมูลอิสระ และต่อต้านริ้วรอย [4] อย่างไรก็ตาม ไม่ว่า Cistanche Deserticola จะสามารถเพิ่มอายุขัยได้หรือไม่ และกลไกระดับโมเลกุลที่อยู่ภายใต้ [3] เกี่ยวข้องกับมันหรือไม่ต่อต้านริ้วรอยคุณสมบัติยังไม่ได้รับการทดสอบอย่างเข้มงวด

สารสกัดจาก Cistanche Deserticola ต่อต้านริ้วรอย

ภูมิคุ้มกันบกพร่อง กล่าวคือ การเปลี่ยนแปลงของระบบภูมิคุ้มกันตามอายุทำให้เกิดภูมิหลังที่ไวต่อการติดเชื้อ มะเร็ง โรคทางระบบประสาท และโรคภูมิต้านตนเองในผู้สูงอายุเพิ่มมากขึ้น [5] การรักษา เช่น การจำกัดแคลอรี่ [6] และการเสริมวิตามินอี ได้รับรายงานว่ามีประสิทธิภาพในการชะลอการลุกลามของภูมิคุ้มกันบกพร่อง และด้วยเหตุนี้จึงช่วยลดความเจ็บป่วยของโรคที่เกี่ยวข้องกับอายุบางประเภท รวมทั้งการยืดอายุขัยของมนุษย์และสัตว์ฟันแทะ [7, 8]. อย่างไรก็ตาม การศึกษาในพื้นที่นี้มีความซับซ้อนโดยข้อเท็จจริงที่ว่าการสูงวัยนั้นสัมพันธ์กับความขัดแย้งของภูมิคุ้มกันบกพร่องพร้อมๆ กันและการอักเสบเรื้อรัง [9] ซึ่งหมายความว่าการกระตุ้นอย่างง่ายของการสร้างลิมโฟไซต์หรือต้านการอักเสบไม่ได้แสดงถึงการแทรกแซงการรักษาในอุดมคติในการจัดการกับอายุและสภาวะที่เกี่ยวข้องกับอายุ [10] ดังนั้นในการค้นหาวิธีการทางการแพทย์ที่สามารถป้องกันหรือบรรเทาสภาวะที่เกี่ยวข้องกับอายุ ได้แก่ การติดเชื้อ มะเร็ง โรคภูมิต้านตนเอง หลอดเลือดและโรคทางระบบประสาทซึ่งเป็นสาเหตุสำคัญของการตายและความทุพพลภาพ และการซ่อมแซมข้อบกพร่องของระบบภูมิคุ้มกันต้องมาพร้อมกับการยับยั้ง ปฏิกิริยาการอักเสบ

หนูเมาส์ที่เร่งการชราภาพ [11] เป็นหนูทดลองในสายเลือด ซึ่งได้มาจากสายพันธุ์ AKR/J ซึ่งใช้กันอย่างแพร่หลายในการศึกษาการชราภาพ สายย่อย P8 (SAM-P8) ของหนูเหล่านี้มีช่วงชีวิตที่สั้นลงอย่างเห็นได้ชัดเมื่อเปรียบเทียบกับสายย่อย R1 (SAM-R1) ซึ่งแสดงกระบวนการชราที่ช้าลงด้วย [12] ควบคู่ไปกับความแก่ก่อนวัยอันควร หนู SAM-P8 ยังแสดงอาการชราภาพทางระบบประสาท ภูมิคุ้มกันบกพร่อง และการขาดดุลเม็ดเลือดที่เกี่ยวข้องกับอายุมากขึ้น ซึ่งเลียนแบบลักษณะการชราภาพโดยทั่วไปของมนุษย์อย่างใกล้ชิด [13, 14] การวิเคราะห์กลไกพื้นฐานที่รับผิดชอบต่อกระบวนการชราภาพแบบเร่งและความผิดปกติที่เกี่ยวข้องกับอายุบ่งชี้ว่าความผิดปกติของไมโตคอนเดรีย [15] ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน และอัตราการกลายพันธุ์ของโซมาติกดีเอ็นเอที่เพิ่มขึ้นล้วนเกี่ยวข้อง [16, 17] ระบบเมาส์นี้ ซึ่งมีภูมิหลังทางพันธุกรรมที่เป็นเนื้อเดียวกัน จึงเป็นแบบจำลองการทดลองที่ยอดเยี่ยมสำหรับการศึกษาการบำบัดการชราภาพและการต่อต้านวัย [12] ที่ฝากไว้ในสมุนไพรของ School of Pharmaceutical Sciences มหาวิทยาลัยปักกิ่ง ประเทศจีน

cistanche สามารถต่อต้านริ้วรอย

2. วัสดุและวิธีการ

2.1. วัสดุ.

สดCistanche Deserticola YC MAรวบรวมจากพื้นที่ต่างๆ ในภาคตะวันตกเฉียงเหนือของจีน รวมทั้งเขตปกครองตนเองซินเจียง เน่ยเหมิงกู และหนิงเซี่ย ตัวอย่างที่ใช้ในการเตรียมสารสกัดได้รับการรับรองโดยศาสตราจารย์ Pengfei Tu ผู้เชี่ยวชาญด้านเภสัชวิทยาที่ Department of Natural Medicines, School of Pharmaceutical Sciences, Peking University ตัวอย่างคูปองของ Cistanche deserticola (หมายเลข CD-2007-03-08) ที่ใช้มีศูนย์วิทยาศาสตร์ (ปักกิ่ง ประเทศจีน) การศึกษานี้ได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการวิจัยสัตว์มหาวิทยาลัยปักกิ่ง และดำเนินการตามแนวทางการดูแลและการใช้สัตว์ทดลองของมหาวิทยาลัยปักกิ่ง หมายเลขการรับรองของเมาส์เหล่านี้คือ SCXK2001-2008 หนูถูกเก็บไว้ในกรงเมตาบอลิซึมมาตรฐานในสิ่งแวดล้อม

C ความชื้น 45–60 เปอร์เซ็นต์ และวงจรแสง/ความมืด 12 ชั่วโมง) และอนุญาตให้เข้าถึงอาหารและน้ำได้ฟรี หลังจากปรับตัวให้ชินกับสภาพอากาศ 2 สัปดาห์ สัตว์ถูกแบ่งออกเป็นห้ากลุ่ม: กลุ่มบำบัด ECD 3 กลุ่ม กลุ่มควบคุม SAM-R1 และกลุ่มควบคุม SAM-P8 ที่ไม่มีการบำบัด อาหารของกลุ่มการรักษาทั้ง 3 กลุ่มได้รับการเสริมด้วยอาหารที่มีความเข้มข้นต่างกันของ ECD: ผลผลิตของ ECD เฉลี่ยต่ำ (50 มก./กก.) ปานกลาง (150 มก./กก.) ต่อวัน . SAM-R1 และ SAM-P8 ไม่มีกลุ่มควบคุมการบำบัดถูกเลี้ยงด้วยอาหารชนิดเดียวกันโดยไม่มี ECD การวัดปริมาณอาหารของสัตว์ทั้งหมดได้ดำเนินการทุกสามวันตลอดการทดลอง ความดันโลหิตและเดือนของหัวใจในช่วงเวลาของการทดลองเพื่อกำหนดสถานะสุขภาพของหนู ช่วงชีวิตของหนูแต่ละตัวคือเซลล์เม็ดเลือดขาวชนิด apoptotic และ necrotic ที่ตายถูกหาปริมาณโดยใช้ชุดเครื่องมือ Annexin V-FITC (Beijing Biosea Biotechnology Co., Ltd., Beijing, China) ลิมโฟไซต์ถูกนำไปย้อมสีสองครั้งด้วยแอนเนกซิน V ที่ติดฉลากด้วยฟลูออเรสซินไอโซไธโอไซยาเนตที่มีฉลากคอนจูเกต (Annexin V-FITC) และแขวนลอยด้วยโพรพิดใน 200 ของบัฟเฟอร์การจับ (10 มิลลิโมลาร์ HEPES/NaOH,

2.2 การเตรียมสารสกัดจาก Cistanche Deserticola (ECD) และการวิเคราะห์ HPLC

Cistanche deserticola แบบแห้งและหั่นบาง ๆ(2.0 กก.) ถูกทำให้เป็นผงและสกัดสองครั้งด้วยเอทานอล 70 เปอร์เซ็นต์เป็นเวลา 1 ชั่วโมง อัตราส่วนของพืช/เอทานอลที่ใช้คือ 1/6 (w/w) ในการสกัดครั้งแรกและ 1/4 (w/w) ในครั้งที่สอง สารสกัดทั้งสองถูกผสมและกรองก่อนที่จะถูกทำให้เข้มข้นจนถึงความหนาแน่นสัมพัทธ์ที่ 1.10–1.15 ภายใต้แรงดันที่ลดลงที่ 60 C จากนั้นสิ่งเข้มข้นนี้จะถูกทำให้แห้งด้วยสุญญากาศ และผงที่ได้คือสารสกัดของ Cistanche Deserticola (ECD) ที่ใช้ตลอดการศึกษานี้ .

ส่วนประกอบของ ECD ถูกวิเคราะห์โดยใช้ HPLC ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [1] โดยย่อ, 100 มิลลิกรัมของผง ECD ถูกละลายใน 10.0 มิลลิลิตร H2O และหลังจากการกรองถูกฉีดเข้าไปใน HPLC การวิเคราะห์ HPLC ถูกดำเนินการบนระบบโครมาโตกราฟีของเหลว Agilent 1100 (Agilent Co., USA) เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยของผสมของเมทานอล (A) และกรดเมทาโนอิก (B) 0.10 เปอร์เซ็นต์ (B) ใช้โปรแกรมเกรเดียนท์โครมาโตกราฟี นี่คือ 26.5 เปอร์เซ็นต์ (A) และ 73.5 เปอร์เซ็นต์ (B) ใน 0-7 นาที, 26.5–29.5 เปอร์เซ็นต์ (A) และ 73.5–70.5 (B) ใน 8–10 นาที และ 29.5 เปอร์เซ็นต์ (A) และ 70.5 เปอร์เซ็นต์ (B) ) ใน 20–27 นาที อัตราการไหลคงที่ที่ 1.0 มล./นาที ปริมาตรการฉีดคือ 10 มล. และอุณหภูมิคอลัมน์ถูกคงไว้ที่ 25 องศาเซลเซียส เครื่องตรวจจับ UV ที่ตั้งค่าไว้ที่ 330 นาโนเมตรถูกใช้เพื่อตรวจติดตามการไหลออกของคอลัมน์และสร้างโครมาโตแกรม

Cistanche deserticola แห้งและหั่นบาง ๆ

ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ และโอลิโกแซ็กคาไรด์ของ cistancheถูกระบุจากเวลาการกักเก็บและสเปกตรัมการดูดกลืนแสง การหาปริมาณดำเนินการโดยกราฟสอบเทียบมาตรฐานภายนอก ผลผลิตของสารสกัดจาก Cistanche Deserticola(ECD) อยู่ที่ประมาณ 3.33 เปอร์เซ็นต์ และเนื้อหาของ phenylethanoids อยู่ที่ 17.94 เปอร์เซ็นต์ Acteoside และ echinacoside เป็นส่วนประกอบหลักสองส่วนในเศษส่วนนี้ โดยมีเนื้อหาเป็น 3.80 เปอร์เซ็นต์ และ 8.25 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ โอลิโกแซ็กคาไรด์คิดเป็น 82 เปอร์เซ็นต์ของ ECD ทั้งหมด ความเข้มข้นของส่วนประกอบออกฤทธิ์หลักของ ECD แสดงไว้ในตารางที่ 1

2.3 การวิเคราะห์ช่วงชีวิตสัตว์

การศึกษานี้เน้นศึกษาว่าสารสกัดจาก Cistanche Deserticolaสามารถยืดอายุขัยของหนู SAM-R1 ที่ซื้อมาจากห้องปฏิบัติการเพาะพันธุ์สัตว์และศูนย์วิจัยของ Peking University Health SAM-P8 หนูและย้อนกลับสถานะภูมิคุ้มกันของพวกมัน

2.4. การวิเคราะห์ทางสถิติ.

ข้อมูลแสดงเป็นค่าเฉลี่ย การเปรียบเทียบ SD ระหว่างกลุ่มต่างๆ ทำได้โดย ANOVA ทางเดียวกับการทดสอบภายหลังการวิเคราะห์ ในการศึกษาช่วงชีวิต ข้อมูลดังกล่าวได้รับการวิเคราะห์การอยู่รอดของ Kaplan-Meier ซึ่งรวมถึงการใช้ทั้งการทดสอบ Log-rank (Mantel-Cox) และ Gehan-Breslow- Wilcoxon การวิเคราะห์ทางสถิติดำเนินการโดยใช้ Statistical Package for Social Sciences for Windows (SPSS, phosphate-buffered saline (PBS, pH 7.4) ที่มีโซเดียมเอไซด์ 0.01 เปอร์เซ็นต์ และอยู่ภายใต้การวิเคราะห์ FCM วิเคราะห์ประชากรย่อยของลิมโฟไซต์โดยการไหล cytometry โดยใช้ FACS Calibur flow cytometer (BD Biosciences, San Diego, CA, USA) และซอฟต์แวร์การวิเคราะห์ BD CellQuest เมืองชิคาโก รัฐอิลลินอยส์) และ a ที่จะมีความสำคัญ

ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ และโอลิโกแซ็กคาไรด์ของ cistanche

3. ผลลัพธ์

ค่าที่น้อยกว่า 0.05 ถูกพิจารณาการประเมินความมีชีวิตของเซลล์ของ T Lymphocytes ต่อพ่วงโดย Annexin V-FITC และ PI Double Staining และการวิเคราะห์ FACS หลังจากการเสริมอาหารของหนู SAM-P8 ที่มี ECD 3 โด๊สเป็นเวลา 4 สัปดาห์ สัตว์เหล่านี้ถูกยึดเป็นเวลา 12 ชั่วโมงแล้วจึงให้ยาสลบ และรวบรวมและวิเคราะห์เลือด

3.1. การวิเคราะห์ส่วนประกอบที่มีศักยภาพในสารสกัด Cistanche deserticola (ECD) ตามที่แสดงในตารางที่ 1 ECD ประกอบด้วยสารประกอบสองประเภทเป็นส่วนใหญ่ ได้แก่ ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์และโอลิโกแซ็กคาไรด์ ใน phenylethanoid glycosides มีการระบุ echinacoside, acteoside และ 8-กรด epiloganic ในขณะที่ใน oligosaccharides มีเพียง galactitol เท่านั้นที่ถูกระบุ

3.2.ผลกระทบของCistanchedeserticolakbdO4ctsonช่วงชีวิตเฉลี่ยของหนู SAM-P8 สำหรับเรื่องนี้และการศึกษาต่อมา หนู SAM-P8 เพศผู้อายุแปดเดือนถูกแบ่งออกเป็น 4 กลุ่ม ในหมู่พวกเขา กลุ่มหนูกลุ่มหนึ่งได้รับอาหารปกติโดยไม่มี ECD และอีก 3 กลุ่มได้รับประทานอาหารที่มีสัดส่วนของ ECD ต่างกัน หนูจากสายย่อย SAM-R1 ซึ่งมีกระบวนการชราภาพและอายุขัยปกติ ถูกใช้เป็นกลุ่มควบคุมในการทดลองทั้งหมด

เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม SAM-R1 ช่วงชีวิตเฉลี่ยของหนูเมาส์ SAM-P8 สั้นลงอย่างมีนัยสำคัญ (รูปที่ 1(a);<0.001). although="" supplementation="" of="" diet="" with="" the="" low="" dose(50mg/kg)of="" ecd="" failed="" to="" produce="" a="" significant="" increase="" in="" life="" spanofsam-p8mice,="" at="" the="" medium="" (150="" mg/kg)and="" high(450="" mg/ml)="" supplementary="" doses="" there="" was="" a="" dose-dependent="" increase="" in="" life="" span="" (figures="" 1(a)and=""><0.05 0.0thatwasconfirmedby="" kaplan-meier="" survival="" analysis,="" which="" included="" use="" of="" both="" the="" log-rank="" (mantel-cox)="" and="" gehan-breslow-wilcoxon="">

3.3. การกลับรายการของภูมิคุ้มกันในหนู SAM-P8 โดยสารสกัดจาก Cistanche deserticola (ECD) การลดลงของ T lymphocytes ที่ไร้เดียงสาส่วนปลายและการเพิ่มขึ้นของ T lymphocytes หน่วยความจำส่วนปลายเป็นลักษณะเด่นของ immunosenescence ซึ่งถือเป็นสาเหตุหลักของความผิดปกติทางภูมิคุ้มกันที่เกี่ยวข้องกับอายุ ภาวะภูมิคุ้มกันบกพร่องใน SAM-P8สัมพันธ์กับ SAM-R1

aniftalsv0เห็นได้ชัดเจนเมื่อการวิเคราะห์ FACS คือการแจกแจง (CD3 บวก CD44wCD4Bigh)ลิมโฟไซต์เป็นตัวบ่งชี้ของทีเซลล์ที่ไร้เดียงสาและ(CD3 บวก CD44gh CD45 BR ลิมโฟไซต์เป็นตัวบ่งชี้ san ของหน่วยความจำ T-cells ดังนั้น inbpth เลือดส่วนปลาย ( รูปที่ 2) และเซลล์ม้าม (รูปที่ 3) ประชากรลดระดับ Tcells ไร้เดียงสาและระดับหน่วยความจำ T ที่เพิ่มขึ้นพบในหนู SAM-P8 พบว่าการเสริมอาหารของ SAM-P8mice กับ ECD สามารถย้อนกลับตัวบ่งชี้ของภูมิคุ้มกันในขนาดยา - แบบพึ่งพาอาศัยกันทั้งในเลือดส่วนปลาย (รูปที่ 2) และเซลล์ม้าม (รูปที่ 3) ในฐานะที่เป็นตัวบ่งชี้เพิ่มเติมของการกลับรายการของภูมิคุ้มกันโดยการเสริม ECD ของอาหาร ระดับของนักฆ่าธรรมชาติ [18] เซลล์ เครื่องหมายเซลล์หลักของระบบภูมิคุ้มกันโดยกำเนิด วิเคราะห์แล้ว สิ่งนี้แสดงให้เห็นว่าการเสริมอาหารแบบ ECD ส่งผลให้เซลล์ NK (CD3 บวก CD49 บวก ) เพิ่มขึ้นตามขนาดยาในเลือดทั้งสองข้าง (รูปที่ 4) และเซลล์ม้าม (รูปที่ 5) ประชากรลิมโฟไซต์

3.4. สารสกัดจาก Cistanche deserticola เสริมความแข็งแกร่งของ Relatice Fluorescence Intensituy ของ Sca-1 Positive Cells ในหนูเมาส์ SAM-P8 แอนติเจนของสเต็มเซลล์-1(Sca-1)เป็นหนึ่งในตัวบ่งชี้ทางชีวภาพที่โดดเด่นที่สุดของเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือด (HSC) ในประชากรเซลล์ไขกระดูก สกา-1 เซลล์ที่เป็นบวกยังเป็นตัวแทนของเซลล์ต้นกำเนิดลิมโฟไซต์ที่มี ถูกส่งออกใหม่จากไขกระดูกไปยังเลือดส่วนปลายที่พวกเขาได้รับ

รูปที่ 2: FACS การวิเคราะห์ผลกระทบของการเสริมอาหารด้วย ECD onnaive และหน่วยความจำ Tlymphocytesin อุปกรณ์ต่อพ่วงเลือด SAM-P8 เพศผู้อายุแปดเดือนและหนูควบคุม SAM-RI ที่ถูกควบคุม แบ่งออกเป็น 5 กลุ่ม กลุ่มบำบัด 3 กลุ่มของสัตว์ SAM-P8 ถูกให้อาหารเป็นเวลาสี่สัปดาห์ด้วยอาหารที่เสริมด้วยปริมาณ ECD ต่ำ (100 มก./กก.) ปานกลาง (500 มก./กก.) และสูง (2500 มก./กก.) และสัตว์ควบคุมสองตัว

โดยเกทบน CD3 บวก Tcels บรรทัดแสดงไม่ใช่แต่ละพล็อตระบุเกณฑ์ที่ใช้ในการแยกแยะ CD44x*และ CD45 ที่ใช้การระบุตัวตนที่ไร้เดียงสาทั้งหมด (CD3 บวก Cp b"C4RB→)และหน่วยความจำ (CD3 บวก CD4hCD 4Bl)T-cells b) ฮิสโตแกรมที่แสดงกลุ่มถูกป้อน ในการควบคุมอาหารแบบเดียวกันโดยไม่ได้รับอาหารเสริม หลังจากการอดอาหารเป็นเวลา 12 ชั่วโมง เลือดส่วนปลายจะถูกเก็บจากสัตว์ในกลุ่ม RB Tcellsubset ที่ดมยาสลบ และทำการวิเคราะห์ด้วย FACS ทั้งหมดตามที่อธิบายไว้ในส่วนที่ 5 (a) FACSplot ที่เป็นตัวแทนของกลุ่ม miæ ต่างๆ ทำให้เกิดเปอร์เซ็นต์ของเซลล์ T ไร้เดียงสา ในเลือดส่วนปลายของกลุ่มสัตว์ต่างๆ (c) ฮิสโตแกรมแสดงเปอร์เซ็นต์ของหน่วยความจำ Tcells ในเลือดส่วนปลายของกลุ่มสัตว์ต่างๆ แถบแสดงค่ากลาง±SD (ในแต่ละกลุ่ม=10)<0.05sam-p8versus>

รูปที่ 3: การวิเคราะห์ FACS การวิเคราะห์ผลของการเสริมอาหารด้วย ECD onnaive และหน่วยความจำ Tlymphocytes inspleen เพศผู้ SAM-P8 และหนูกลุ่มควบคุม SAM-RI อายุแปดเดือนถูกแบ่งออกเป็น 5 กลุ่ม กลุ่มการรักษา 3 กลุ่มของสัตว์ SAM-P8 ได้รับอาหารเป็นเวลาสี่สัปดาห์ด้วยอาหารเสริม ด้วยขนาดยา ECD ต่ำ (100 มก./กก.) ขนาดกลาง (500 มก./กก.) และสูง (2500 มก./กก.) และกลุ่มสัตว์ควบคุมทั้งสองกลุ่มโดยเกทติงออน CD3 บวก Tcells เส้นที่แสดงในแต่ละพล็อตระบุว่าควรใช้เพื่อแยกแยะความแตกต่าง CD44zhand CD45 bw ใช้เพื่อระบุความไร้เดียงสา (CD3 บวก CD "CsRB动) และหน่วยความจำ (CD3 บวก CD42CD I'm) Tcels (b) ฮิสโตแกรมที่แสดงถูกป้อน อาหารชนิดเดียวกันโดยไม่ต้องเสริมอาหาร หลังจากการอดอาหารเป็นเวลา 12 ชั่วโมง เซลล์ลิมโฟไซต์ของม้ามถูกรวบรวมจากสัตว์ในกลุ่มย่อยของ RB T ที่ดมยาสลบ และอยู่ภายใต้การวิเคราะห์ FACS ทั้งหมดที่อธิบายไว้ในส่วนที่ 5 (a) FACSplot ที่เป็นตัวแทนของกลุ่มไมโครโฟนต่างๆ ที่สร้างขึ้น

รูปที่ 4: ผลกระทบของการเสริมอาหาร ECD ต่อเซลล์นักฆ่าธรรมชาติ (NKcells, CD3 บวก CD49 บวก Tcells) ในประชากรลิมโฟไซต์ในเลือดของหนู SAM-P8 SAM-P8 เพศผู้อายุแปดเดือนและหนูกลุ่มควบคุม SAM-RI ถูกแบ่งออกเป็น 5 กลุ่ม กลุ่มบำบัด 3 กลุ่มของสัตว์ SAM-P8 ได้รับอาหารเป็นเวลาสี่สัปดาห์ด้วยอาหารที่เสริมด้วย ECD ในปริมาณต่ำ (100 มก./กก.) ขนาดกลาง (500 มก./กก.) และสูง (2500 มก./กก.) และกลุ่มสัตว์ควบคุมทั้งสองกลุ่มมีไว้สำหรับ อาหารเดียวกันโดยไม่ต้องเสริม หลังจากการอดอาหารเป็นเวลา 12 ชั่วโมง เลือดส่วนปลายถูกเก็บจากสัตว์ที่ดมยาสลบและอยู่ภายใต้การวิเคราะห์ FACS ทั้งหมดตามที่บรรยายไว้ในส่วนที่ 5.(a)การพล็อต FACS ที่เป็นตัวแทนของกลุ่มต่างๆ ของหนูเมาส์ที่ถูกสร้างโดยเกตบน CD3 บวก CD49 บวกกับ Tcells (b) ฮิสโตแกรมแสดงเปอร์เซ็นต์ของสารฆ่าธรรมชาติ Tcellsin ที่ต่อพ่วงของดิฟเฟอเรนส์กรุ๊ป แท่งแสดงค่ากลาง±SD (ineach group,=10)=<0.01><0.01 each="" treatedgroup="" versussam-p8group="" (byone="" way="" anovawith="" post="" hoc="">

รูปที่ 5: ผลของการเสริมอาหาร ECD ต่อเซลล์นักฆ่าตามธรรมชาติ (NKcells, CD3 บวก CD49 บวก T-cells) ในเซลล์เม็ดเลือดขาวม้ามของหนู SAM-P8 SAM-P8 เพศผู้อายุแปดเดือนและหนูกลุ่มควบคุม SAM-RI ถูกแบ่งออกเป็น 5 กลุ่ม กลุ่มบำบัด 3 กลุ่มของสัตว์ SAM-P8 ถูกให้อาหารเป็นเวลาสี่สัปดาห์ด้วยอาหารที่เสริมด้วยปริมาณน้อย (100 มก./กก.), ขนาดกลาง (500 มก./กก.) และปริมาณ ECD สูง (2500 มก./กก.) และกลุ่มสัตว์ควบคุมสองกลุ่มคือ กินแบบเดียวกันโดยไม่ต้องเสริม หลังจากการอดอาหารเป็นเวลา 12 ชั่วโมง เซลล์ลิมโฟไซต์ในม้ามถูกเก็บจากสัตว์ที่ดมยาสลบและนำเข้าสู่การวิเคราะห์ด้วย FACS อัลลลาสที่อธิบายไว้ในส่วนที่ 5 (a) ตัวแทน FACSplot กับกลุ่มต่างๆ ของหนูเมาส์ที่สร้างขึ้นโดยเกตบนเซลล์ CD3 บวก CD494 ที (b) ฮิสโตแกรมที่แสดงเปอร์เซ็นต์ของ T เพชฌฆาตตามธรรมชาติ เซลล์ในเซลล์ลิมโฟไซต์ของม้ามของสัตว์กลุ่มต่างๆ แท่งแสดงถึงค่าเฉลี่ย SD (ในแต่ละกลุ่ม=10) # < 0.01="" sam-p8="" yersus=""><0.01 eachtreatedgroup="" versussam-p8group(by="" oneway="">

ความแตกต่างเพิ่มเติมในเซลล์ลิมโฟไซต์ที่โตเต็มที่ประเภทต่างๆ ด้วยเหตุนี้ เซลล์ที่เป็นบวกของ Sca-1 จึงเป็นแหล่งที่มาหลักของ T lymphocytes ที่ไร้เดียงสาในเลือดส่วนปลาย รูปที่ 6 แสดงให้เห็นว่าเมื่อเปรียบเทียบกับหนูเมาส์ควบคุม SAM-R1 ความเข้มของการเรืองแสงสัมพัทธ์ของเซลล์ที่เป็นบวกของ Sca-1 ในหนูเมาส์ SAM-P8 นั้นต่ำกว่าอย่างมาก การเสริมอาหารของหนู SAM-P8mice ที่มีขนาดยา ECD ต่างกันสามขนาดถูกแสดงเพื่อเพิ่มความเข้มของการเรืองแสงสัมพัทธ์ของเซลล์บวก Sca-1 อย่างมีนัยสำคัญ (รูปที่ 6)

ประโยชน์ของสมุนไพร cistanche: ต่อต้านวัย